Immunblotting ved diagnosticering af HIV. Immunblotting (påvisning af antistoffer i patienters sera mod visse patogene antigener) Hybridisering af nukleinsyrer

Enzym immunoassay (ELISA)

Enzym immunoassay (ELISA) udføres i to trin: den første er interaktionen af ​​antistoffer med antigenet, den anden er den enzymatiske indikation af antigen-antistof-komplekset på grund af udseendet af farvning af reaktionsblandingen og registreringen af ​​farvning visuelt eller ved spektrofotometrisk metode.

Der er to varianter af ELISA: fast fase og flydende fase, der adskiller sig i måden, hvorpå komponenterne i den immunkemiske reaktion er adskilt. Sammenlignet med de tidligere beskrevne metoder til påvisning af antigener og antistoffer har ELISA betydelige fordele:

høj følsomhed, der gør det muligt at bestemme op til 0,05 ng / ml af et stof;

muligheden for at bruge minimale volumener af testmaterialet (1--2 µl);

muligheden for instrumentel eller visuel opgørelse af reaktionen;

hurtighed og mulighed for at automatisere alle trin i reaktionen.

ELISA er i dag meget udbredt i praksis til diagnosticering af mange infektionssygdomme af bakteriel, svampeætiologi, protozoinfektioner og helminthiaser, men især virusinfektioner, især hepatitis A, B, C, D, E, G, HIV-infektion, herpesvirus, rotavirus, adenovirus, astrovirus, parvovirus og andre infektioner.

immunblotting

Princippet for immunblotting-metoden er at påvise antistoffer mod individuelle antigener af patogenet. Ved hjælp af denne metode bestemmes antistoffer mod HIV-antigener (viruskappe-glycoproteiner, kerneproteiner og virusenzymer). Resultaterne af immunblotting vurderes som positive, tvivlsomme og negative, afhængigt af det detekterede kvantitative og kvalitative sæt af antistoffer.

Det skal bemærkes, at immunblotting er ringere i følsomhed over for ELISA; i nogle tilfælde kan et negativt resultat registreres ved tilstedeværelse af HIV-infektion hos en patient. Muligheden for at registrere falsk positive resultater i ELISA ved HIV-infektion kræver dog en integreret tilgang til diagnosticering af HIV-infektion, idet der udover resultaterne af immunologiske reaktioner (ELISA, immunblotting) tages hensyn til epidemiologiske og kliniske data.

Polymerasekædereaktion (PCR)

PCR-metoden blev udviklet af den amerikanske biokemiker Kary Mullis i 1983 baseret på brugen af ​​den termostabile DNA-polymerase (Tag polymerase) opdaget af ham. Princippet i metoden er at øge antallet af kopier af en specifik DNA-region af patogenet med 10 6 -10 8 gange katalyseret in vitro af DNA-polymerase i automatisk tilstand.

Under kunstige betingelser er reproduktionen af ​​replikationsprocessen af ​​en genomregion, der er specifik for en bestemt art eller slægt af patogener, mulig, forudsat at dens nukleotidsekvens er kendt. Anvendelsen af ​​metoder til påvisning af replikationsprodukter af sådanne regioner (amplikoner) gør det muligt at konstatere tilstedeværelsen af ​​et patogen i testprøven.

Den komplementære kædeafslutning beskrevet ovenfor begynder kun i visse startblokke, som er korte dobbeltstrengede sektioner. Når sådanne blokke er knyttet til specifikke områder af DNA, er processen med syntese af en ny streng kun rettet mod den valgte region og ikke langs hele længden af ​​DNA-strengen. To oligonukleotidprimere, som kaldes primere, bruges til at skabe startblokke i givne DNA-områder. Primerne er komplementære til DNA-sekvenserne på venstre og højre grænser af et specifikt fragment og er orienteret således, at færdiggørelsen af ​​en ny DNA-streng kun sker mellem dem.

Til fordele ved PCR-metoden skal indeholde:

høj følsomhed, der gør det muligt at bestemme 10-1000 celler i en prøve;

høj specificitet, da et DNA-fragment, der er unikt for dette patogen, påvises i testmaterialet;

universalitet af proceduren til påvisning af forskellige patogener fra en bioassay;

Høj analysehastighed (4--4,5 timer);

Muligheden for at diagnosticere ikke kun akutte, men også latente infektioner.

Brugen af ​​PCR er effektiv til at diagnosticere en bred vifte af bakterielle og virale infektioner.

For nylig er kvantitative metoder til PCR-analyse blevet implementeret ganske vellykket, som gør det muligt at bestemme koncentrationen af ​​patogenet i materialet (mikrobiel eller viral belastning), for eksempel for at vurdere den replikative aktivitet af hepatitis B-virus, HIV C. .

Man skal dog huske på, at PCR-metoden også har sine begrænsninger, især for diagnosticering af infektioner forårsaget af opportunistisk autoflora.

Hybridisering af nukleinsyrer

hybridisering af nukleinsyrer ligesom PCR, giver dig mulighed for at identificere patogenet i prøven uden forudgående isolering. Til analyse syntetiseres en enkeltstrenget DNA- eller RNA-probe, som er komplementær til patogenets specifikke nukleotidsekvenser. Proben er mærket med et radionuklid, enzym eller andet let genkendeligt mærke. Testmaterialet underkastes behandling med det formål at lysere mikroorganismer til stede i bioassayet, isolering og denaturering af DNA. Derefter inkuberes proben med testprøven, og mængden af ​​mærket DNA, der er gået i hybridisering med DNA'et i testprøven, måles. Reaktionen kan forekomme både på fastfase-sorbenter og i opløsning; dog en obligatorisk betingelse er udvaskning af ubundne mængder af den mærkede probe. Følsomheden af ​​er ringere end PCR og er 103 mikrobielle celler pr. prøve.

Da jeg blev testet for kønssygdomme, besluttede jeg at blive testet for HIV. Dagen efter modtog jeg færdige tests for ifa, bortset fra hiv, og som følge heraf fik jeg diagnosen klamydia. Herpes og mikroplasmose. Men vich kom aldrig. De ringer til mig om 3 dage og siger, at du skal komme til AIDS-centret for at tage blodet igen. Kan Imunablot være falsk positiv ved klamydiasygdomme Mycraplasmosis HPV Herpes

Woman.ru eksperter

Få en ekspertudtalelse om dit emne

Anastasia Shesterikova

Rusina Irina Vladimirovna

Psykolog, Stresslindring. Specialist fra b17.ru

Olga Yurievna Diganaeva

Psykolog. Specialist fra b17.ru

Olga Borisenko

Psykolog, gestaltterapeut. Specialist fra b17.ru

Dmitry Valerievich Tishakov

Psykolog, Supervisor, Systemisk familieterapeut. Specialist fra b17.ru

Shiyan Olga Vasilievna

Psykolog, Psykolog-konsulent. Specialist fra b17.ru

Oksana Lushankina

Psykolog, Relationer i familien. Specialist fra b17.ru

Anna Dashevskaya

Psykolog, Skype-konsultationer. Specialist fra b17.ru

Irina Bukina

Psykolog. Specialist fra b17.ru

Aksyonova Anna Mikhailovna

Psykolog, kandidat i gruppeanalyse. Specialist fra b17.ru

Jeg vil ikke skræmme dig, men når de ringer dig til AIDS-centret, er det næsten altid positivt, tag det ikke igen, held og lykke til dig, det vigtigste er at tage terapi og leve længe

En ven har levet med hiv i ti år og taget sig af sig selv.
De siger, at om tre år skal de nok finde en kur.
Under alle omstændigheder, fortvivl ikke og spred det ikke, bliv behandlet

Nej, IB kan ikke være falsk positiv, og ingen kønssygdomme påvirker denne analyse, hvis den er positiv, så desværre, du har HIV, du skal overvåge dine immunceller og starte behandlingen til tiden.

ak, nej ((hvis de ringede til centeret, så er det bestemt HIV

Så vidt jeg ved, kan de første og endda efterfølgende immunoblot-resultater være tvivlsomme. ikke falske positive, men tvivlsomme. og derefter bestilles en reanalyse. Her er teksten fra hjemmesiden:
”Immunblotting bruges oftest til at bekræfte diagnosen hiv-infektion. WHO betragter sera som positive, hvis antistoffer mod to af HIV-kappeproteinerne påvises ved immunblotting. Ifølge disse anbefalinger anses resultatet for tvivlsomt, hvis der er en reaktion med kun et af kappeproteinerne (gp160, gp120, gp41) i kombination med eller uden reaktion med andre proteiner, og en anden undersøgelse anbefales ved brug af et kit fra en anden serie eller fra et andet firma. Hvis resultatet herefter forbliver tvivlsomt, fortsættes undersøgelserne hver 3. måned.
du kan google. hvis ja, håber jeg ikke, at du tester positiv for hiv. men hvis det bekræftes, så ved, at de i dag med denne diagnose lever og lever lige så længe som raske mennesker og føder børn. hovedbetingelsen er disciplin i behandlingen. sundhed til dig!

Antiretroviral terapi online

Regnemaskiner

Siden er beregnet til medicinske og farmaceutiske arbejdere over 18 år

Dechifrering af analysen - immunoblot

Hjælp mig med at tyde analysen
ENV(GP160)+
ENV(GP110/120)+
ENV(GP41)+
GAG(P55)+
GAG(P40)+
GAG(P25)+
POL(P68)+
POL(P52)+
POL(P34)+

Hej! For 2,5 år siden tog jeg en HIV-test, der var sådan en immunblot:
Gp-160+, Gp-110/120+, Gp-41+, p17+, p25+, p31+, p34+, p52+, p55+, p68+. Og her er immunblotten fra 30/05/18: Gp-160+, Gp-41+, GAG 1 -, poll+, env2-. Det er ikke klart, hvad rul + betyder? Er han den eneste der eller er han ikke blevet afsløret? Og hvor blev resten af ​​proteinerne af?

Pol og Env er gener, der koder for grupper af proteiner. Betragt det bare som en anden rekord. Spørgsmålet er anderledes. Og hvad venter vi på? Hvorfor overvejer vi en skamplet? Alt er ret klart. Der skal gøres noget.

Har allerede vænnet mig til, at jeg har hiv. Og klar til terapi.
Er bare nysgerrig efter at høre din mening. Er det en ny infektion eller mangler jeg noget? Eller nogle gange sker det, at immunblotten langsomt åbner sig meget?

I dag så jeg på mine analyser i min personlige fil (udført i SC):
ELISA på det første testsystem - positiv
ELISA på det andet testsystem er negativ (hvordan er det?)

Yderligere IB (udført invitro og SC for en måned siden):
immunoblot på det første testsystem: gp 160+, gp 41+
immunoblot på et andet testsystem: gp41+, p24+, p17+
immunoblot på det tredje testsystem: gp160+, gp120+, gp41+, p24+

Ifølge mine prognoser kunne jeg være blevet smittet for et år siden (det akutte stadie var i april et sted), eller 9 måneder siden, men generelt - xs hvornår) brugte jeg altid beskyttelse og havde kun sex uden kondom én gang i efteråret d. 2017.

I dag har jeg igen givet VN og IP videre. Teru starter om en måned, når ordren ankommer.

Datoer sat til de nævnte prøver.

Første blot før ELISA? Slår ikke. Der er intet øjeblik her, der ville tillade os at sige, at en ny infektion er højst sandsynlig, eller omvendt.
Det vil forblive et mysterium, hvis du ikke ved et uheld finder kilden og sammenligner.

For at præcisere, så

Afleveret i Invitro.
Den første IFA er den 11. maj.
Derefter gik det samme serum til blottet og en positiv analyse kom ind, hvor to proteiner blev identificeret.
gp 160+, gp 41+

Så overgav jeg allerede til SC igen.
Donerede blod den 29. maj.
Og der blev han kørt igennem flere testsystemer, hvor den første viste negativ, den anden positiv. Negativ ELISA er dog sjov.
Derefter går det samme serum til det blot, hvor dataene kom fra:

Første testsystem: gp41+, p24+, p17+
Andet testsystem: gp160+, gp120+, gp41+, p24+

Men ikke pointen.
En ny analyse af IP er kommet - 754. Det glæder. VN er ikke klar endnu. Så snart den ankommer, starter jeg nok teru.

Jeg er 80% sikker på, at infektionen var et år siden. Og det faktum, at skamplet langsomt åbner sig, og ELISA er negativ, er mærkeligt. Eller er det inden for normalområdet?

Negativ ELISA er dog sjov. Jeg vil også gerne vide navnet på systemet for at kunne skrive det ned i en sort notesbog. Selvom dette øjeblik, hvis du ikke tager teorien med ægteskab, er stærkt for tidlig infektion.
Jeg er 80% sikker på, at infektionen var et år siden. Dårlig klat for den periode. Ikke umuligt, men usandsynligt.

På et tidspunkt begyndte jeg endda at tvivle på resultaterne af HIV-tests – så jeg venter på VN.
Her vil det sidste punkt i spørgsmålet allerede blive sat.

Anses det også inden for normalområdet, at IP er vokset med 200 eksemplarer uden tera på en måned? Jeg tager Ursosan nu for en polyp i galdeblæren - indlægget siger, at lægemidlet forbedrer immuniteten.

Det er nødvendigt at vurdere begge med et relativt indhold og tage hensyn til data fra et laboratorium med en beregningsmetode. Fordi - Gud ved, hvad der sker med CD4.

Generelt er CD4-tallet 780 celler/µl. VN - 250 kopier / ml.
Dette er uden terapi. Det vil sige, at CD4 ud af 486 sprang til 780 på en måned.
BH faldt fra 550 til 250 eksemplarer.

Alligevel er det ikke mærkeligt, eller er sådanne spring inden for normalområdet? Er det tid til at starte Tera?

Hej! Jeg bestod ifaen tre gange, hver gang + kom der en immunoblot p24+ p18+ fra SC. Den potentielle risiko var for mere end seks måneder siden. p24 indikerer, at det stadig er HIV?

Blot tvivlsomt, gentag efter 6-8 uger. Mest sandsynligt en falsk alarm.

God dag!
Testresultaterne kom tilbage, inklusive en klat:

Farlig kontakt: 24/04/2018
ELISA-test for HIV 23/05/2018 (4 uger fra farlig kontakt eller 29 dage) resultat "+"
ELISA test for HIV 28/05/2018 (5 uger fra farlig kontakt eller 34 dage) "gentag" resultat
ELISA-test for HIV 06/01/2018 (5 uger fra farlig kontakt eller 38 dage) resultat "+"

En klat kom fra den første analyse (23/05/18):
GP160 sl.
P24 sl.

Nye test bestået 06.06.2018 ELISA og PCR HIV RNA på det lokale AIDS center. Vi venter stadig på resultaterne.

Blot spørgsmål:
1. Hvis P24 er til stede, er det så nødvendigvis et HIV-antigen, eller kan et sådant protein påvises i andre sygdomme?
2. Hvad betyder forkortelsen "sl" ved siden af ​​proteinet? Normalt i de beskrevne blots er der + eller -
3. Hvad bestemmer anvendelsen af ​​en skamplet? Fra udtrykket eller fra kroppens individuelle karakteristika?
4. Med sådan en skamplet i 4. uge fra en farlig kontakt, er der en chance for, at dette ikke er HIV?

Hav en god dag og tak.

1. nej, det kan bare være et lignende protein af en anden karakter. 2. svag. de der. tvivlsom. 3. Deadlines og realisere individuelle funktioner, men i gennemsnit er alt meget tæt på. 4. spørgsmålet er forkert, der er altid en chance, indtil diagnosen er etableret.

Hej!
Hjælp mig venligst med at navigere i resultaterne af analyserne og forstå, hvordan man opfører sig korrekt, så de gentagne analyser er korrekte.

Analyser afleveret 25/05/2018
HIV IB
NY LAV BLOT 1 - udefineret fra 29.05.2018
IB HIV markører
gp 160+
gp 120 —
gp 41 -
p55+
p40-
p 24+
p18-
s 68 —
s 52 —
s 34 —
HIV ELISA
ADVIA Centaur HIV Ag-Ab Reaktivitet ELISA 12.00 positiv (28.05.2018)
Det anbefales at gentage analysen efter 2 uger.

I november 2017 havde jeg en NPA, hvorefter jeg tog test på HIV Ag\Ab Combo Abbott Architect testsystemet, så var resultatet negativt.

Samtidig havde jeg en komplet blodtælling. Lymfocytter er let øget, eosinofiler er nøjagtigt 0 (men jeg havde sådanne indikatorer for eosinofiler før.

Hovedspørgsmålet er:
Hvilken medicin kan og må ikke tages i løbet af disse to uger? (Jeg vil have, at intet "blinker")
Jeg har lejlighedsvis allergianfald, normalt drikker jeg tavegil. Skal det opgives?
Kan antibiotika tages før test? (hvis det er ordineret af en læge til behandling af andre infektioner og sygdomme)

Immunblotting i HIV-diagnostik

Immunblot (immunblot, Western Blot, Western blot)- kombinerer enzymimmunoassay (ELISA) med foreløbig elektroforetisk overførsel til en nitrocellulosestrimmel (strimmel) af virusantigener.

I dette smukke videnskabelige navn oversættes "blot" højst sandsynligt som "blot", og "vestlig" som "vestlig" afspejler distributionsretningen af ​​denne "klat" på papir fra venstre mod højre, det vil sige på et geografisk kort svarer til retningen fra vest til øst." Essensen af ​​"immun-blot"-metoden er, at den immunoenzymatiske reaktion ikke udføres med en blanding af antigener, men med HIV-antigener, som tidligere er fordelt ved immunophorese i fraktioner placeret i henhold til molekylvægten på overfladen af ​​en nitrocellulosemembran. Som et resultat fordeles hovedproteinerne af HIV, bærere af antigene determinanter, over overfladen i form af separate bånd, som vises under enzymimmunoassayet.

Immunoblot omfatter flere faser:

Forberedelse af strimler. Immundefektvirus (HIV), som tidligere er blevet renset og ødelagt til dets bestanddele, udsættes for elektroforese, mens antigenerne, der udgør HIV, adskilles efter molekylvægt. Derefter, ved blotting (analogt med at presse overskydende blæk på en "blotter"), overføres antigenerne til en strimmel nitrocellulose, som nu indeholder et spektrum af antigene bånd, der er karakteristiske for HIV, som er usynlige for øjet.

Prøveundersøgelse. Testmaterialet (serum, patientens blodplasma osv.) påføres nitrocellulosestrimlen, og hvis der er specifikke antistoffer i prøven, binder de sig til de strengt tilsvarende (komplementære) antigene bånd. Som et resultat af efterfølgende manipulationer visualiseres resultatet af denne interaktion - synliggøres.

Fortolkning af resultatet. Tilstedeværelsen af ​​bånd i visse områder af nitrocellulosepladen bekræfter tilstedeværelsen i det undersøgte serum af antistoffer mod strengt definerede HIV-antigener.

I øjeblikket er immunblotting (immunoblot) den vigtigste metode til at bekræfte tilstedeværelsen af ​​virusspecifikke antistoffer i testserumet. I nogle tilfælde af HIV-infektion, før serokonversion, påvises specifikke antistoffer mere effektivt ved immunblotting end ved ELISA. En immunblotting-undersøgelse afslørede, at antistoffer mod gp 41 oftest påvises i sera fra AIDS-patienter, og påvisning af p24 hos personer, der er undersøgt til profylaktiske formål, kræver yderligere undersøgelser for tilstedeværelsen af ​​HIV-infektion. Immunoblot-testsystemer baseret på gensplejsede rekombinante proteiner viste sig at være mere specifikke end konventionelle systemer baseret på oprenset viruslysat. Ved anvendelse af et rekombinant antigen dannes der ikke et diffust, men et klart defineret snævert antigenbånd, som er let tilgængeligt til regnskab og evaluering.

Serum fra personer inficeret med HIV-1, påviser antistoffer mod følgende hovedproteiner og glycoproteiner - strukturelle kappeproteiner (env) - gp160, gp120, gp41; kerner (gag) - p17, p24, p55, samt virusenzymer (pol) - p31, p51, p66. For HIV-2 er antistoffer mod env typiske - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol-p68.

Blandt de laboratoriemetoder, der er nødvendige for at fastslå specificiteten af ​​reaktionen, har påvisningen af ​​antistoffer mod HIV-1-kappeproteiner - gp41, gp120, gp160 og HIV-2 - gp36, gp105, gp140 den største anerkendelse.

WHO betragter sera som positive, hvis antistoffer mod to vilkårlige HIV-glykoproteiner påvises ved immunblotting. Ifølge disse anbefalinger, hvis der er en reaktion med kun et af kappeproteinerne (rp 160, rp 120, rp 41) i kombination eller uden reaktion med andre proteiner, anses resultatet for tvivlsomt, og en anden test anbefales ved at bruge et kit fra en anden serie eller fra en anden virksomhed. Hvis resultatet herefter forbliver tvivlsomt, anbefales observation i 6 måneder (forskning efter 3 måneder).

Tilstedeværelsen af ​​en positiv reaktion med p24-antigenet kan indikere en periode med serokonvertering, da antistoffer mod dette protein nogle gange vises først. I dette tilfælde anbefales det, afhængigt af de kliniske og epidemiologiske data, at gentage undersøgelsen med en serumprøve taget mindst 2 uger senere, og dette er præcis tilfældet, når parrede sera er nødvendige ved HIV-infektion.

Positive reaktioner med gag- og pol-proteiner uden tilstedeværelse af en reaktion med env-proteiner kan afspejle stadiet af tidlig serokonvertering og kan også indikere HIV-2-infektion eller en ikke-specifik reaktion. Personer med sådanne resultater efter test for HIV-2 genundersøges efter 3 måneder (inden for 6 måneder).

Spørgsmål: Gentagen analyse for HIV?

Jeg blev testet for seksuelt overførte infektioner (ingen symptomer, jeg ville have tillid til et forhold med en kvinde). HIV-testen var positiv. Efter ultralyd viste en tumor på nyren, fjernet (det viste sig at være ondartet).
Jeg læste bogen af ​​Sazonova I.M., den siger, at en ondartet tumor kan give et positivt testresultat for HIV.
Kan det være tilfældet, eller er der intet at håbe på?

Du skal have en kontroltest for hiv. Hvis den første HIV-test blev bestemt ved ELISA, kan resultatet være falsk positivt. Dens pålidelighed kan kontrolleres ved en mere følsom diagnostisk metode - PCR (polymerasekædereaktion), som bestemmer virusets DNA i blodet.

Hjælp. 12/16/10 ELISA (+) IB (+) derefter fra 23/03/11 til 05/19/11 ni negative ELISA (-) og kvantitativ PCR. er ikke bestemt. i 2002 under graviditet ELISA derefter (+) derefter (-), men IB er altid (-). fra 2004 til 2008 tog jeg ELISA (-) 2 gange om året, men d. 30.04.08 ifa (+) og IB-undefined. derefter igen hver 2. måned afleveret IFA altid (-). og siden december 2010 har det været skrevet ovenfor.. Samtidig har jeg aldrig sprøjtet, min mand har altid en ELISA (-). CD4 980 celler. og selv blod for syfilis fra 29.04 gav 3 +++ og derefter tre gange. negativ hver 10. dag. hepatitis alle (-). Er der nogen der har haft en lignende. Tak.

Angiv venligst, om du har gennemgået RIBT (treponema pallidum immobiliseringsreaktion), hvis ja, hvad er resultaterne af denne undersøgelse.

nej, ingen tilbød mig at lave sådan en analyse, hvad vil den vise? Jeg håber, du forstår, at jeg talte om hiv-tests. Tak. Har du haft lignende tilfælde i din praksis? i øvrigt var informationssikkerheden i 2008 usikker. var p24/25-protein. i 2010 IB(+) proteiner gp160.41.120 p24.17.31. så da ifa igen 3 gange (-) blev sendt til IB den 4. april. resultatet blev positivt, men proteinerne gp 120 og 41. resten er overstreget med rød pasta og nederst med rød IB REPEAT. men PCR fra samme nummer vil blive nægtet. efter 4. april afleverede jeg IFA allerede 4 gange benægte. alt i AIDS-centret, inklusive antigen og antistof. Nu venter jeg på en anden IB og en højkvalitets PCR. det er det. MEGET TRÆT AT TÆNKE OG VENTE. Håber på det bedste. TAK. Jeg ser frem til et svar.

Hvis du stiller spørgsmål, så prøv næste gang at formulere det mere specifikt med en afklaring af diagnosen. RIBT bruges til at bekræfte diagnosen syfilis. For nøjagtig diagnose af HIV-infektion bestemmes antistoffer mod HIV i blodet ved ELISA og immunoblot. Diagnosen bekræftes kun, hvis begge disse resultater er positive.

undskyld for upræcist formuleret spørgsmålet. Jeg skrev, at IFA og Imunoblot for HIV blev positive i december. men siden marts er ifa for HIV negativ 9 gange. hvis jeg var registreret i AIDS-centret, sker det så i princippet. HIV er enten altid positivt eller negativt. og hvordan kan en immunoblot sættes på HIV, hvis resultatet af ELISA er negativt? så vil alle afvise, hvis der skal tjekkes for immunblot, så hvad sker der? i vores fartcenter kan de ikke svare mig noget. Her er hvad jeg henvendte mig til dig. Tak.

Desværre kan både ELISA og immunoblot give falske positive resultater. Derfor betragtes diagnosen HIV som endelig, kun med samtidig påvisning af HIV ved ELISA og immunoblotmetoden.

Hej I dag modtog jeg resultaterne af en PCR-test for HIV, en kvalitativ virus blev ikke påvist og en gentagen immunoblot for HIV, resultatet er usikkert pga. protein 41. AIDS CENTER sagde, at der højst sandsynligt ikke er nogen HIV, men i min krop er der kroppe, der ligner hiv i struktur. og hvad tror du, givet mine spørgsmål fra 15. og 16. juni (se ovenfor), er der hiv eller ej. TAK.

I dette tilfælde er diagnosen HIV-infektion tvivlsom.

Du skriver, at kun ved samtidig påvisning af hiv ved hjælp af IF og immunoblot, anses hiv-diagnosen for endelig. Men hvad med i mit tilfælde? trods alt vil alle ptsr benægte. og blot og ifa hoppe hele tiden. i 9 år. fortæl mig, hvis virussen var i mit blod, så kunne dens RNA og DNA bestemmes nøjagtigt i så mange år. og kan inkubationsperioden eller "vinduet" vare så mange år? Er der falsk negative resultater af PCR for HIV givet en sådan periode? Ja, jeg glemte at sige, at de hurtige hiv-tests, jeg tager på CPD, altid er negative, eller kan jeg heller ikke stole på dem? Tak.

I dette tilfælde er PCR-diagnostik ikke hovedmetoden til at identificere dynamikken i processen - serologiske metoder er mere informative. I dette tilfælde er sandsynligheden for falsk negative resultater høj. hurtige hiv-tests har en høj følsomhedstærskel, derfor kan de også give et falsk negativt resultat.

undskyld. Jeg har bestemt skrevet det forkerte sted. svar venligst i emnet hiv eller ej hiv. Tak.

I tilfælde af at du ikke har modtaget en meddelelse om modtagelse af et svar på din mail, kan du se svaret på dit spørgsmål på denne adresse http://tiensmed.ru/news/answers/vich-ili-ne-vich- .html

Hej! Fortæl mig venligst, at jeg for at registrere mig på LCD-skærmen (nu 10. uge gravid) bestod testen for HIV, en læge ringede til mig for et par dage siden og sagde, at de foreløbige test for HIV var positive (den første blev udført i Kirovograd, men der er stadig intet officielt resultat fra Kiev ), samme dag i vores bylaboratorium blev der udført to eksprestest af Pharmasco-virksomheden CITO TEST HIV 1/2, begge resultater er negative, laboratorieassistenten sagde, at disse tests er pålidelige, og jeg behøver ikke bekymre mig, da dette sker under graviditeten, og disse analyser kan simpelthen forvirre. Lægen sagde, at jeg skulle donere blod igen, og jeg donerede mit blod to gange mere til analyse på forskellige hospitaler (jeg har stadig ingen af ​​de tre resultater). Jeg er meget bekymret, jeg er ikke stofmisbruger, der var ingen tvivlsomme seksuelle forhold, hvis jeg bliver syg meget sjældent, er andre tests alle normale. Kan man stole på hurtige tests? Sker det virkelig under graviditeten? Smertefuldt stærkt lægen har skræmt mig. Tak

Først og fremmest skal du falde til ro og ikke tænke på det dårlige. Nogle gange under graviditeten er der falske positive resultater. Det er nødvendigt at gendonere blod for HIV og vente på resultaterne af undersøgelsen.

Hej! Sagen er, at der hos mig for 2 måneder siden var en seksuel kontakt med pigen (indtil nu mødes vi). efter 1,5 uge steg temperaturen til 37,4. sov snart. for at være sikker bestod vi IF-analysen efter 2 uger og igen efter 1,5 måned. Begge svar er negative. men jeg har stadig feber og hoste med varierende bedring. Kan du fortælle mig, om der er en risiko? desuden arbejdede jeg længe uden fridage og for en uge siden var jeg sygemeldt (orvi). blod- og lungeprøver er fine. Tak.

Denne temperatur kan være forbundet med en virussygdom, kroppen er ikke kommet sig endnu, eller kronisk overanstrengelse. I tilfælde af at en organisk patologi er udelukket, er en generel blod- og urinprøve inden for det normale område, ligesom dataene fra en fluorografisk undersøgelse også er inden for det normale område, så er det nødvendigt at udelukke seksuelt overførte sygdomme: klamydia, mycoplasmosis, ureaplasmosis, som kan forårsage betændelse i organerne i det lille bækken og urinrøret og som følge heraf en stigning i kropstemperaturen. Læs mere om årsagerne til stigningen i kropstemperaturen ved at klikke på linket: Høj temperatur.

Hej. Der er sådan noget - For mere end et år siden var der ubeskyttet seksuel kontakt med en gående pige. Hun forsikrede mig om, at hun ikke var syg med noget, men jeg kan ikke tro hende 100 procent. Hun forsikrede også, at hun havde gennemgået en lægeundersøgelse, før hun fik et job (hun arbejdede som sælger), og alt var fint. 7 måneder efter kontakt bestod jeg stadig en HIV-test i citylab-laboratoriet - resultatet var negativt. Men for nylig begyndte jeg ofte at blive syg - i 3 uger nu har jeg rødt ondt i halsen, og jeg kan ikke helbrede det. Igen begyndte han at blive bange, men pludselig fangede han det så? Fortæl mig, er dette muligt, og er det værd at stole på analysen fra citylab? Jeg er bange for at give op igen, mine nerver tåler det ikke..

I tilfælde af at resultatet er negativt, så er du højst sandsynligt ikke syg og ikke smittet med HIV/AIDS. For at afklare diagnosen anbefales det dog at genanalysere i specialiserede laboratorier på statsinstitutioner; denne undersøgelse udføres anonymt. I tilfælde af at selvbehandling ikke giver det ønskede resultat, anbefales det at konsultere en otolaryngolog for at udføre en passende undersøgelse og ordinere passende behandling. Læs mere om HIV-testning i en række artikler ved at klikke på linket: HIV.

Fortæl mig, kan du give en beskrivelse af citylab-laboratoriet? Alligevel er det ikke altid muligt at bestå en analyse på en statsinstitution. Og hvad er den procentvise chance for en mand for at blive smittet gennem ubeskyttet kontakt?

Desværre giver vi ikke en sammenlignende vurdering af laboratorier og private lægeinstitutioner. I tilfælde af at du tvivler på pålideligheden af ​​resultaterne, skal du foretage en undersøgelse i et andet center og først bede om en licens til at levere disse medicinske tjenester, om dette center har ret til at udføre denne undersøgelse, og om alt overholder accepterede standarder. Risikoen for infektion er den samme for begge køn ved ubeskyttet samleje. Læs mere om HIV-testning i en række artikler ved at klikke på linket: HIV.

God eftermiddag! Et 8 måneder gammelt barn blev testet for HIV ved ELISA, gp160+ og p25+ blev fundet i blodet, resten er minus, konklusionen på IB er tvivlsom. At dømme efter disse analyser viser det sig, at barnet er +? gp160 + gp110/120 - p68 - p55 - p52 - gp41 - p34 - p25 + p18 -

Desværre, baseret på de opnåede data, er det umuligt at stille en diagnose med en 100 procent sandsynlighed, da et falsk positivt resultat ikke er udelukket. For at stille en nøjagtig diagnose skal du gennemgå en række undersøgelser, herunder gentagelse af denne analyse med ELISA, samt bestå en analyse ved hjælp af PCR-metoden. Derefter skal du kontakte en specialiseret medicinsk institution, hvor infektionsspecialisten vil være i stand til at evaluere resultaterne i et kompleks. Du kan lære mere om manifestationerne af HIV-infektion i den tematiske sektion af vores hjemmeside ved at klikke på linket: HIV

Kan det vise et falsk-positivt resultat i "ARI" eller mere akutte infektionssygdomme? Et eller andet sted har jeg læst, at det med 58 sygdomme eller endnu højere kan vise “+”, inklusive vaccination mod hepatitis B, hvis nyrerne osv. lider?

Der er mulighed for et falsk positivt resultat, så jeg anbefaler, at du gør følgende: genanalysere - ved ELISA og PCR, og derefter genbesøge en infektionsspecialist. Du kan lære mere om diagnosticering af HIV-infektion i det tematiske afsnit: HIV

God eftermiddag! Immunoblot ubestemt på grund af p25-protein. Hvad er sandsynligheden for HIV?

I denne situation er det nødvendigt omhyggeligt at studere undersøgelsesprotokollerne i kombination med andre indikatorer, da det ikke er muligt at foretage en antagelse baseret på disse data. Formentlig kan resultatet anses for tvivlsomt, og der kræves en reeksamen efter 3 måneder. Læs mere i afsnittet på vores hjemmeside: HIV

God eftermiddag.
Kan du kommentere på ELISA for HIV
1 serum +3,559 k=13,3
+2,121 k=4,9
s 24 neg
Serum 2 +3,696 k=13,9
+2,477 k=5,7

I dette tilfælde er et falsk positivt resultat ikke udelukket, da ELISA-metoden er indirekte, så jeg anbefaler, at du tager en analyse med en anden, mere følsom metode - immunblotting. Du kan finde ud af mere detaljerede oplysninger om dette emne i den relevante sektion af vores hjemmeside ved at klikke på følgende link: HIV

God eftermiddag, fortæl mig, hvad jeg skal stille ind? For et år siden, da jeg planlagde et barn, gennemgik min mand og jeg alle testene, også for HIV (de tog det meget seriøst og korrekt), blev jeg undersøgt i Kr. AIDS i Kiev. Efter at have bestået analysen på centret kom svaret også negativt for mig. Nu er jeg i stilling på 14 uger, dvs. Jeg bliver registreret, jeg gennemgår alle testene og igen kom svaret tilbage, HIV-testen var ubestemt, jeg bestod den igen på klinikken og bestod en eksprestest for at falde til ro på Dovir, men de beroligede mig ikke. , eksprestesten viste et positivt resultat (den anden strimmel var mindre udtalt), umiddelbart efter al denne procedure, uden at spilde tid, søgte jeg til AIDS-centret og bestod også en analyse, jeg venter på resultatet. (Jeg kan ikke falde til ro) Fortæl mig venligst, hvor meget du kan stole på eksprestestene, og hvorfor første gang der ikke er noget svar på HIV-testen? (min mand og jeg fører en sund livsstil og elsker hinanden). Tak skal du have.

Gå ikke i panik i forvejen - ekspresdiagnostik er ikke grundlaget for at stille en HIV-diagnose, det giver dig mulighed for at identificere grupper af patienter, der kræver en mere dybdegående undersøgelse. I sådanne situationer anbefales det at udføre immunblotting og personligt rådføre sig med en infektionssygdomslæge. Du kan finde ud af mere detaljeret information om dette emne i den tematiske sektion af vores hjemmeside ved at klikke på følgende link: HIV. Du kan også få yderligere information i følgende afsnit på vores hjemmeside: Laboratoriediagnostik

Hej, jeg var i en infektionssygdom, først i dag blev jeg udskrevet da jeg gik, lægen ringede til mig og forklarede at jeg havde en positiv ifa, først da jeg gik på hospitalet var den negativ, så da jeg tog igen blev den positiv , de sendte en immunoblot undersøgelse til falkonererne på bjerget, de sagde, at den ville være klar i næste uge, jeg var på hospitalet med ondt i halsen og parainfluenzavirus, jeg ankommer i en tilstand af chok, jeg forstår stadig ikke, hvordan jeg skal se det, der blev også udarbejdet et ekstrakt til min klinik, der indikerer, at hvis der blev fundet og lavere, at immunblotten var i arbejde, hvis jeg i morgen blev udskrevet på din klinik, så vil alt blive angivet i dette ekstrakt, hvor sandsynligt er HIV? det muligt, at på grund af det faktum, at jeg blev behandlet for ondt i halsen af ​​parainfluenza-virus, viser positive resultater for ifa?

Sandsynligheden for et falsk positivt resultat er meget høj. Tilstedeværelsen af ​​ét positivt resultat giver endnu ikke grundlag for at stille en hiv-diagnose, så vi anbefaler, at du afventer resultatet af immunblotting og derefter personligt rådfører dig med en infektionsspecialist vedrørende yderligere undersøgelse og observation. Angina, parainfluenza og andre forkølelser påvirker ikke analysens resultater væsentligt.

Jeg vil tro det, men i slutningen af ​​august havde jeg det dårligt, min temperatur steg, 37,5-38 Jeg havde løs afføring i ca 4 dage, det var på ferie hvor der var mange diskoteker, jeg drak postevand som mange andre, fordi at det var meget dyrt et glas vand kostede 300 rubler, jeg forbandt løs afføring med sådan en temperatur med en form for tarminfektion fanget i vandet, jeg husker det ikke præcist, men der var også et lille udslæt i overkroppen, da jeg kom hjem med feber ringede jeg til lægen, hun skrev en rotavirusinfektion, efter 5 dages sygdom meldte jeg mig frivilligt til at forlade ham og gå på arbejde, hvor jeg blev syg et par dage senere med bihulebetændelse (i den tid periode jeg skulle være på gaden) jeg koblede det til at et stort temperaturfald fra ferie og forgiftning sænkede min immunitet og derfor blev jeg forkølet igen med bihulebetændelse, i alt er det igen en sygemelding, i retning af Laura jeg drak klacid cf 500 i 10 dage, det gik, jeg gik tilbage på arbejde efter 3 uger jeg var på forretningsrejse til ærkeland i 3 dage. klimaanlæggene i transporten og hotellet var nådesløse og ved hjemkomsten havde jeg i flyet en temperatur allerede på 39,5 her var jeg hjemme med en temperatur på 40, ringede til lægen til huset, skrev orvi og sagde min halsen var meget rød, jeg havde kronisk halsbetændelse og sagde dette til Laura, hun skrev selv for at drikke et antibiotikum Levolet r. ringede til en ambulance, fordi hun havde feber og tempoet var 40 og faldt ikke, indlæggelse blev ikke tilbudt, den næste dag samme historie - ambulancen gav en febernedsættende indsprøjtning og gik. Tredje gang jeg insisterede på hospitalsindlæggelse, kørte de mig knap nok til infektionshospitalet, hvor der blev opdaget en blandet infektion med parainfluenza og adenovirusinfektion, men ved udskrivelsen fik de læge - afdelingslederen sagde at jeg havde en positiv HIV ifa og at de gjorde det to gange, jeg er i chok, jeg ved ikke hvad jeg skal gøre jeg kan ikke spise og drikke .hun sagde at jeg har en udtalt akut HIV-infektion og til verifikation sendte de en analyse af mit blod til en immunoblot til AIDS-centret,
nu, ved at tegne en analogi af de begivenheder, der er sket for mig på det seneste, samt 3 sygemeldinger i træk, prøvede jeg alle symptomerne, og jeg er forfærdet over, hvad der kunne være, efter at være blevet udskrevet samme dag, jeg gik til at tage en analyse in vitro ananimally og næste dag resultatet for ifa var det samme +
Jeg er ked af så detaljerede oplysninger, men jeg er fejet væk og dræbt, jeg drikker stærke beroligende midler, og jeg har ingen appetit, og jeg spiser praktisk talt ikke, jeg har tabt mig meget
Jeg har også sådan et spørgsmål, at lægen med et udtræk fra hospitalet indikerede resultatet af hiv ved at ifa blev fundet og derunder er immunblotten i arbejde, men så snart jeg lukker bl i min klinik på stedet, vil alt skrives der. hvad skal jeg gøre? det vil ikke længere være fortroligt. Jeg bad lægen om ikke at skrive denne analyse i uddraget, som hun nægtede mig til, i hvilket omfang mine rettigheder til ikke at videregive oplysninger respekteres her.

Desværre passer resultaterne af de undersøgelser, der er udført på hospitalet, ind i uddraget, da den behandlende distriktslæge skal have fuld information om din helbredstilstand. I denne situation taler vi ikke om videregivelse af oplysninger, da de kun overføres til en anden behandlende læge, som fortsat vil observere dig.

Hej! Jeg tog prøver for HIV, fordi jeg havde brug for et certifikat til FMS, de gav ikke testene i et par uger, så inviterede de mig til hovedet, og de gav mig et positivt resultat, de tog en masse kvitteringer og sendte dem til det regionale AIDS-center for nærmere undersøgelse, som der står på certifikatet. Jeg vil forbi en anden klinik og derefter gå til den regionale, eller giver det mening at tage den igen? Jeg forstår bare ikke, hvorfor de ikke gav dem væk så længe, ​​men lægen sagde, at de angiveligt lavede en form for analyse, og jeg skylder dem yderligere 4 tusind rubler, for hvis de gjorde det, ville de sandsynligvis give detaljerede oplysninger oplysninger om sygdommen ud over attesten?

I denne situation bør man ikke gå i panik i forvejen - opnåelse af et positivt resultat giver endnu ikke mulighed for at bedømme pålideligt om en mulig infektion, da falske positive resultater ikke er udelukket. Vi anbefaler, at du tager testen igen, og hvis der er et positivt resultat, skal du gennemgå endnu en undersøgelse - immunblotting. Laboratoriet giver som udgangspunkt ikke detaljerede oplysninger om resultaterne, hvilket er normal og almindelig praksis. Alle spørgsmål, du måtte have, kan besvares af den behandlende læge efter undersøgelsen ved en personlig konsultation.

Jeg glemte at tilføje, at jeg fra begyndelsen af ​​juni og frem til midten af ​​september lavede mig et kursus med anabolske steroider, nemlig sustanon 250 er en blanding af testosteroner og stanozolol med primabolan, jeg ville forberede mig på sommeren og ferien, kunne de sænke min immunitet og alt hvad der skete med mig.

Immunforstyrrelser, såvel som tilstedeværelsen af ​​autoimmune sygdomme, kan give falske positive resultater af en HIV-test. Derfor anbefales immunblotting i tilfælde af opnåelse af 2 positive resultater ved ELISA, hvilket giver dig mulighed for præcist at svare på spørgsmålet om, hvorvidt der er infektion eller ej.

hvad betyder tilstedeværelsen af ​​autoimmune sygdomme, hvad er de?
generelt kan jeg sige, at jeg blev syg ret ofte fra den tidlige barndom, og selv for et par tre år siden bad jeg den behandlende læge om at tage sig af min immunitet, fordi jeg var konstant træt og ofte syg, mest øre, hals, næse , men hele tiden, der var negative resultater for HIV, jeg afleverede dem med tilstrækkelig lethed uden tøven.

Et falsk-positivt resultat af en HIV-test kan være efter en nylig virusinfektion, hepatitis B-vaccination, tuberkulose, hepatitis, herpes, såvel som på baggrund af autoimmune sygdomme som: reumatoid arthritis, systemisk lupus erythematosus, dermatomyositis, sklerodermi, bindevævssygdomme mv.

Jeg vil gerne tilføje mit spørgsmål, min immunoblot kom, den var negativ, men lægen sagde, at da der var to hvis + da jeg var på infektionshospitalet, skal jeg stadig tage analysen igen, men lidt senere

I dette tilfælde er medicinsk taktik berettiget - vi anbefaler, at du tager en immunoblot igen om 1,5-2 måneder.

Hvad er sandsynligheden: 2 ifa + forskel mellem blodprøver på ca. 2 dage, immunoblot - ; var på infektionshospitalet med adenovirusinfektion og parainfluenza, hvor blodet blev taget, blev immunblotten sendt til AIDS-centeret

God eftermiddag! Jeg blev registreret på LCD-skærmen, gennemgik alle prøverne, lægen siger, at jeg har herpes i blodet, så ringer de fra AIDS-centret og siger, at jeg skal tage det igen, jeg søgte og de fortæller mig, at jeg har HIV-positiv, i panik gik jeg sammen med min mand for at oprette en anden. Jeg havde også en ifa og en immunblot + min mand havde en analyse, jeg gav den igen en måned senere. Jeg har + min mand - nu er jeg gravid i 23. uge!

I denne situation er der desværre en mulighed for HIV-infektion, men den endelige diagnose kan ikke stilles selv med en positiv immunblot, givet graviditetstilstanden. I denne situation er udelukkelse af falske positive resultater påkrævet, derfor anbefaler vi, at du tager testen igen og personligt konsulterer en infektionssygdomsspecialist.

hvis immunblotten viste et positivt resultat for HIV, og screeningen er negativ, hvilket resultat skal man så stole på?

Immunoblot er en mere nøjagtig undersøgelse, derfor er det i denne undersøgelse, hvis et positivt resultat opnås, påkrævet at fortsætte undersøgelsen og personligt besøge en infektionssygdomsspecialist.

Hvad er det - immunblot? Dette er en almindelig metode til laboratoriediagnose af humane virusinfektioner. Det anses for at være en af ​​de mest nøjagtige og pålidelige måder at opdage tilstedeværelsen af ​​HIV på. I sin pålidelighed overgår det selv resultaterne af immunblotten betragtes som uigendrivelige og endelige.

generel information

Immunoblot - hvad er det? For at genkende en HIV-infektion hos en person er det nødvendigt at gennemgå en laboratorietest af blodserum for tilstedeværelsen af ​​antistoffer. Western blot-teknikken kaldes også Western blot. Det bruges til at påvise humane virusinfektioner som en ekstra ekspertmetode. Det er nødvendigt at bekræfte ELISA - en laboratorietest, der giver dig mulighed for at bestemme tilstedeværelsen af ​​HIV-antistoffer i blodet. En positiv ELISA-analyse kontrolleres igen ved immunblotting. Det anses for at være det mest følsomme, komplekse og dyreste.

formål

Hvad er det - immunblot? Dette er en teknik til laboratorietestning af blodserum for tilstedeværelsen af ​​antistoffer mod virussen. Under undersøgelsen forseparerer specialisten virusets proteiner i gelen og overfører dem til en nitrocellulosemembran. Immunoblotting-proceduren er beregnet til at bestemme HIV på forskellige stadier. I det første trin udsættes det rensede virus fra dets bestanddele for elektroforese, og antigenerne, der udgør dets sammensætning, adskilles efter molekylvægt.

Den formerer sig i en levende celle og indlejrer dens genetiske information i den. På dette stadium bliver en person bærer af HIV-virus, hvis han er smittet. Sygdommens specificitet er, at den måske ikke manifesterer sig i lang tid. Virussen ødelægger lymfocytter, så den menneskelige immunitet reduceres, og kroppen bliver ude af stand til at modstå infektioner. Hvis HIV behandles kompetent og til tiden, vil patienten leve til en moden alder. Mangel på terapi fører uundgåeligt til døden. Fra infektionsøjeblikket, men uden behandling, er den maksimale levetid ikke mere end ti år.

Ejendommeligheder

Immunoblotanalyse er en pålidelig metode, der giver dig mulighed for at bestemme tilstedeværelsen af ​​antistoffer mod HIV-antigener af den første og anden type. Hvis en person er smittet, opstår der antistoffer inden for to uger, som kan opdages meget senere. Det særlige ved HIV er, at antallet af antistoffer stiger hurtigt og forbliver i patientens blod. Selvom de er til stede, kan sygdommen ikke manifestere sig i to eller flere år. ELISA-metoden bestemmer ikke altid nøjagtigt tilstedeværelsen af ​​sygdommen, derfor er bekræftelse af resultaterne ved hjælp af immunblotting og PCR påkrævet, hvis enzymimmunoassayet er positivt.

Indikationer for udnævnelse

Hvad er denne "immunoblot" er allerede blevet fundet ud af, men hvem er denne undersøgelse ordineret til? Grunden til at tage test for metoden til immunoblotting er et positivt ELISA-resultat. Det er nødvendigt at gennemgå enzymimmunoassay for patienter, der skal opereres. Derudover bør der laves en analyse for kvinder, der planlægger en graviditet, samt for alle, der er seksuelt promiskuøse. Tildel immunblotting til patienter med HIV, hvis resultaterne af ELISA er i tvivl. Følgende alarmerende symptomer kan være årsagen til at gå til lægen:

• skarpt vægttab;
• svaghed, tab af arbejdsevne;
• tarmsygdom (diarré), der varer i tre uger;
• dehydrering af kroppen;
• feber;
• hævede lymfeknuder i kroppen;
• udvikling af candidiasis, tuberkulose, lungebetændelse, toxoplasmose, forværring af herpes.

Patienten behøver ikke at forberede sig før donation af venøst ​​blod. 8-10 timer før undersøgelsen, kan du ikke spise. Det anbefales ikke at drikke alkoholiske drikke og kaffedrikke, at deltage i tunge fysiske øvelser, at opleve spænding en dag før bloddonation.

Hvor skal man lave analysen?

Hvor kan jeg blive testet for HIV? ELISA, immunoblotundersøgelser udføres i private private klinikker i byerne, resultaterne udstedes inden for en dag. Umiddelbar diagnose er også mulig. I statslige medicinske institutioner udføres ELISA-test og immunblotting gratis i overensstemmelse med lovgivningen i Den Russiske Føderation. Gravide kvinder samt patienter, der skal indlægges eller opereres, skal testes for infektionssygdomme.

Hvordan foregår forskningen?

Hvordan udføres ELISA? Immunoblot positiv/negativ bekræfter eller afkræfter resultaterne af enzymimmunoassay. Forskningsproceduren er ret enkel. Specialisten udfører en venøs blodprøve, med tiden tager det ikke mere end fem minutter. Efter prøveudtagning skal injektionsstedet desinficeres og forsegles med et plaster. Prøveudtagningen udføres på tom mave, så efter proceduren gør det ikke ondt at spise en bar mørk chokolade eller drikke en sød varm drik.

For at få en henvisning til en gratis analyse på en offentlig lægeinstitution skal du besøge en praktiserende læge. Generelt adskiller immunblotten sig ikke fra andre blodprøver med hensyn til prøveudtagningsmetoden. Forskningsmetoden er enkel. Hvis en virus er til stede i en persons blod, begynder kroppen at producere antistoffer for at ødelægge den. Hver virus har sit eget sæt antigenproteiner. Påvisningen af ​​disse antistoffer er grundlaget for Western blotting-teknikken.

Pris

Hvor meget koster analysen? Immunoblot for HIV gælder ikke for billig forskning. I gennemsnit koster en screeningsundersøgelse med enzymimmunoassay fra 500 til 900 rubler. Immunoblotting er en verifikationsundersøgelse, hvis omkostninger er fra tre til fem tusind rubler. Mere komplekse metoder er meget dyrere. For eksempel skal du betale omkring 12.000 rubler for det.

Fortolkning af resultatet

De mest almindelige metoder til diagnosticering af HIV-infektion er enzymimmunoassay og immunblot. De bruges til at bestemme serumantistofferne mod immundefektvirus. Tilstedeværelsen af ​​infektion bekræftes normalt af to tests: screening og bekræftende. Fortolkningen af ​​resultaterne af undersøgelsen skal udføres af en læge, han stiller også en diagnose og ordinerer behandling. Hvis immunblotten er positiv, betyder det, at en virus er til stede i menneskekroppen.

Et positivt resultat bør ikke være en grund til selvbehandling, da hver patient kan have sit eget billede af sygdommen. Kvalitativ analyse omfatter screening og verifikation. Hvis patienten ikke har en virus, er resultatet angivet som "negativt". Når det påvises med screeningsmetoden, udføres en yderligere verifikationsundersøgelse. En immunoblot er en analyse, der bekræfter eller afkræfter en screening. Hvis der ses mørkfarvning på teststrimlen i visse områder (steder med proteinlokalisering), stilles der en HIV-diagnose. Hvis resultaterne er i tvivl, udføres testene inden for tre måneder.

Du kan forhindre infektion med immundefektvirus, hvis du følger visse regler: undgå tilfældig sex, brug kondom under kontakter, tag ikke stoffer. Hvis sygdommen opdages hos en gravid kvinde, er det vigtigt nøje at følge anbefalingerne fra den behandlende læge, glem ikke at gennemgå undersøgelser for tilstedeværelsen af ​​virussen.

IMMUNOBLOT(western blot) - en metode til laboratorietestning af blodserum for tilstedeværelsen af ​​antistoffer mod HIV; det er en mere nøjagtig test end ELISA og bruges til at bekræfte ELISA-resultater. ELISA - enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) - en laboratorietest, der giver dig mulighed for at bestemme tilstedeværelsen af ​​HIV-antistoffer i blodet; HIV antistof test.

Ifølge WHO-anbefalingen anvendes immunoblotting (western blot) ved diagnosticering af HIV-infektion som en yderligere ekspertmetode, der skal bekræfte resultaterne af ELISA. Denne metode bruges normalt til at dobbelttjekke et positivt ELISA-resultat, da det anses for at være mere følsomt og specifikt, selvom det er mere komplekst og dyrt.

Immunoblotting kombinerer enzymimmunoassay (ELISA) med foreløbig elektroforetisk adskillelse af virusproteiner i en gel og deres overførsel til en nitrocellulosemembran. Immunoblotproceduren består af flere stadier (). For det første, foroprenset og ødelagt til dets bestanddele, udsættes HIV for elektroforese, mens alle antigener, der udgør virussen, adskilles efter molekylvægt. Derefter overføres antigenerne ved blotting fra gelen til en strimmel nitrocellulose eller et nylonfilter, som nu indeholder et spektrum af proteiner, der er karakteristisk for HIV, usynligt for øjet. Dernæst påføres testmaterialet (serum, plasma fra patienten osv.) på strimlen, og hvis der er specifikke antistoffer i prøven, binder de sig til de strimler af antigenproteiner, som strengt svarer til dem. Som et resultat af efterfølgende manipulationer (som ELISA) bliver resultatet af denne interaktion visualiseret - synliggjort. Tilstedeværelsen af ​​striber i visse områder af strimlen bekræfter tilstedeværelsen i det undersøgte serum af antistoffer mod strengt definerede HIV-antigener.

Immunblotting er mest almindeligt anvendt til at bekræfte diagnosen HIV-infektion. WHO betragter sera som positive, hvis antistoffer mod to af HIV-kappeproteinerne påvises ved immunblotting. Ifølge disse anbefalinger anses resultatet for tvivlsomt, hvis der er en reaktion med kun et af kappeproteinerne (gp160, gp120, gp41) i kombination med eller uden reaktion med andre proteiner, og en anden undersøgelse anbefales ved brug af et kit fra en anden serie eller fra et andet firma. Hvis resultatet derefter forbliver tvivlsomt, fortsætter undersøgelserne hver 3. måned.

Til immunblotting adskilles proteinerne i blodserumet i det første trin i gelen i henhold til deres molekylvægt og ladning ved hjælp af et elektrisk felt (gelelektroforesemetode). Derefter påføres en nitrocellulose- eller nylonmembran på gelen og "vædes" (dette er blotting). Dette udføres i et specielt kammer, som tillader fuldstændig overførsel af materialet fra gelen til membranen. Som et resultat bliver mønsteret af proteinarrangementet, der var på gelen, reproduceret på membranen (blot), som derefter let kan manipuleres. Indledningsvis behandles membranen med antistoffer mod det ønskede antigen, og efter afvaskning af det ubundne materiale tilsættes et radioaktivt mærket konjugat, der specifikt binder til antistoffer (som ved ELISA). Placeringen af ​​det resulterende antigen-antistof-mærkede konjugatkompleks bestemmes ved autoradiografi under anvendelse af røntgenfilm. Efter dets manifestation bliver alt klart, om der er antigener i blodet eller ej.

Immunblotting -(fra engelsk "blot" - plet) - en metode til at identificere antigener (eller antistoffer) ved hjælp af kendte sera (eller antigener). Det er en kombination af gelelektroforese med ELISA. I første omgang ødelægges bakterieceller eller virioner ved hjælp af ultralyd, og derefter adskilles alle antigener fra virus eller bakterieceller ved elektroforese, og et kommercielt reagens opnås på en speciel nitrocellulosefilm. Ved opsætning af immunblotting påføres patientens testserum på filmen med kendte antigener. Efter inkubation og vask af ubundne antistoffer går de videre til ELISA - et antiserum mod humane immunglobuliner mærket med et enzym og et kromogent substrat, der skifter farve, når det interagerer med enzymet, påføres filmen. I nærvær af antigen-antistof-antiserum mod immunoglobulin-enzymkomplekser vises farvede pletter på bæreren. Metoden til immunblotting giver dig mulighed for separat at detektere antistoffer mod forskellige antigener af patogenet (for eksempel i HIV-infektion detekterer immunoblotting antistoffer mod gp120, gp24 og andre antigener af virussen).

Radioimmunoassay (RIA)

Metoden er baseret på antigen-antistof-reaktionen ved hjælp af et antigen eller antistofmærke med et radionuklid. 125I, 14C, 3H, 51Cr og andre radionuklider anvendes som mærkning. De resulterende immunkomplekser isoleres fra systemet, og deres radioaktivitet bestemmes på tællere (β-stråling). Strålingsintensiteten er direkte proportional med antallet af bundne antigen- og antistofmolekyler.

Fastfaseversionen af ​​RIA, der anvender mærkede antistoffer eller antigener adsorberet i brøndene på polystyrenpaneler, er meget udbredt.

RIA bruges til at påvise antigener fra mikrober, vira, forskellige hormoner, enzymer, medicinske stoffer, immunoglobuliner samt andre stoffer indeholdt i testmaterialet i mindre koncentrationer på 10-12-10-15 g/l.

test spørgsmål

Immunbakteriolysereaktion: hvilken slags reaktion er det; hvad er et antigen, hvad er et antistof, reaktionsmekanisme, afbindingsmetoder, praktisk anvendelse. Immunhæmolysereaktion: nødvendige ingredienser, indstillingsmetode; kontroller, praktisk anvendelse. Reaktion af lokal hæmolyse i gel (Yerne-reaktion): reaktionsprincip, formuleringsmetode, praktisk anvendelse. Komplementfikseringsreaktion: reaktionsprincip; hvad der dannes, når immunserumet interagerer med et specifikt antigen; hvad sker der for at komplementere, hvis det er til stede i denne interaktion? Hvad er skæbnen for komplement, hvis der ikke er nogen specifik affinitet mellem antigen og antistoffer? Hvilken reaktion kan bruges til at bestemme, hvad der skete med komplementet; hvorfor denne reaktion bruges; hvad er det synlige positive resultat af RSK? Hvorfor? Hvilken komplementegenskab bruges i den første fase af CSC? I anden fase? Hvis slutresultatet af RSK er hæmolyse, betyder det så et positivt eller negativt resultat? Forklar resultaterne: RSK+ + + +, RSK+ + +, RSK+ +, RSK+. Navngiv ingredienserne i det første RSK-system og ingredienserne i det andet RSK-system. Hvorfor skal testserumet inaktiveres? Hvordan titreres komplement? Hæmolytisk serum: hvad indeholder det, hvordan opnås det, hvad er en titer, og hvordan bestemmes det? Hvilke dyr bruges til at opnå RSC-komponenter? Teknikken til at indstille RSC i kulden. Ved iscenesættelse af hvilke af følgende reaktioner er deltagelse af et komplement nødvendig: udfældning, flokkulering, agglutination, påvisning af ufuldstændige antistoffer, immunbakteriolyse, immunhæmolyse, Jerne, CSC? Immunfluorescensreaktion (RIF) - angiver rækkefølgen af ​​begivenheder i den direkte Coons-reaktion; de nødvendige ingredienser. Hvad er et antigen, hvad er et antistof, hvordan mærkes antistoffer, hvordan tages der hensyn til resultatet af reaktionen, hvordan ser et positivt resultat ud? Praktisk anvendelse - hvad kan bestemmes ved hjælp af denne reaktion? Indirekte immunfluorescensreaktion - angiv rækkefølgen af ​​begivenheder i denne reaktion, de nødvendige ingredienser, hvad er antigenet, hvilke immunsera der anvendes; praktisk brug; fordel ved indirekte RIF frem for direkte reaktion. Enzymimmunoassay (ELISA) - reaktionens princip; nødvendige ingredienser; angive rækkefølgen af ​​hændelser ved opsætning af en reaktion for at påvise et antigen i testmaterialet; nødvendige ingredienser; hvad sker der med et positivt resultat, hvordan ser det ud? Angiv rækkefølgen af ​​handlinger under ELISA for at påvise antistoffer i testserumet; nødvendige ingredienser; hvad sker der med et positivt resultat? Immunoblotting - reaktionens princip; vigtigste trin; nødvendige ingredienser; Hvordan tages der hensyn til resultatet? reaktionsfordele. Radioimmunoassay (RIA) - hvad er de vigtigste stadier af reaktionen; hvad er antistoffer eller antigener mærket med, hvordan tages der hensyn til resultatet? Immunelektronmikroskopi - metodens princip; vigtigste trin; nødvendige ingredienser; Hvad er antistoffer mærket med? hvordan resultatet af reaktionen tages i betragtning. Immobiliseringsreaktioner - princippet om metoden, teknikken til indstilling, komponenter, der tager højde for resultater.

Opgaver, der skal udføres i processen med selvtræning.

Udfyld immunitetsreaktionstabellen for de reaktioner, der er dækket i dette emne.

Immunreaktioner

Elevens arbejde i en praktisk lektion

Start straks arbejdet med formuleringen af ​​1. fase af RSC, men skriv det ned i en notesbog senere (se nedenfor).

1. Reaktionen af ​​immunhæmolyse. Se en demonstrationsreaktion af immunhæmolyse, tegn den som et diagram, forklar resultatet i forsøgs- og kontrolrørene.

2. Komplementbindingsreaktion

a) adskille RSC i henhold til tabellen;

b) tegne i en notesbog et skema til indstilling af RSC i form af en tabel;

c) læg den anden fase af RSK (den første fase sættes i begyndelsen af ​​lektionen);

d) adskille de diagnostiske præparater, der er nødvendige for RSK;

e) tage hensyn til resultatet. Formuler en konklusion om tilstedeværelsen af ​​specifikke antistoffer i testserumet.

3. Immunfluorescensreaktion. Studer tabellen, lav et skema til opsætning af reaktionen i din notesbog; se diagnostiske sera; bestemme, hvad serummet indeholder, hvordan det fremstilles, til hvilken reaktion (direkte eller indirekte RIF) det anvendes. Se på demonstrationsresultatet af RIF i et fluorescerende mikroskop.

4. Enzymimmunoassay (ELISA). I din notesbog skal du lave et reaktionsskema i to versioner: til påvisning af et antigen i testmaterialet og til påvisning af antistoffer i serum. Gennemgå ingredienssættet til diagnose af hiv og hepatitis B. Bestem, hvad hver ingrediens indeholder, og hvad den bruges til.

5. Immunblotting. Lav et diagram over reaktionen i din notesbog; se demoen - resultatet af reaktionen.

6. Radioimmunoassay (RIA). Tegn reaktionsskemaet i din notesbog.

7. Immunelektronmikroskopi (IEM). Se demonstrationen - resultatet af reaktionen, lav et reaktionsskema i din notesbog, angiv antigenet (virussen) og mærkede antistoffer med pile.

Immunblotting er en meget følsom proteinpåvisningsmetode baseret på en kombination af elektroforese og ELISA eller RIA. Immunblotting bruges som diagnostisk metode for HIV-infektion mv.

I en generel forstand forstås immunblotting som analysen af ​​en blanding af proteiner overført til en fast støttemembran, som de binder til ved kovalente bindinger, efterfulgt af immundetektion.

Det er muligt at analysere en blanding af proteiner, der er afsat direkte på et substrat (dot blot-analyse) eller efter dets foreløbige fraktionering ved elektrofokusering, diskelektroforese eller todimensionel elektroforese (Western blotting).

Patogene antigener adskilles ved polyacrylamidgelelektroforese, overføres derefter fra gelen til aktiveret papir eller nitrocellulosemembran og udvikles ved ELISA.

Virksomheder producerer sådanne strimler med "klatter" af antigener. Patientens serum påføres disse strimler. . Derefter, efter inkubation, vaskes patienten fra ubundne antistoffer fra patienten, og serum mod humane immunglobuliner mærket med enzymet påføres. . Komplekset dannet på strimlen (antigen + antistof fra patienten + antistof mod humant Ig) påvises ved tilsætning af et kromogent substrat, der skifter farve under enzymets påvirkning.

Denne metodologi anvendes også til udvælgelsen af ​​kloner af bakterier, fager eller vira, der udtrykker produkterne af de klonede målgener.

Overførsel af proteiner til membranen udføres enten passivt eller ved hjælp af elektrooverførselsapparater. Effektiviteten af ​​proteinoverførsel til membranen påvirkes af mange faktorer, såsom proteinernes molekylvægt, gelens porøsitet, overførselstiden og sammensætningen af ​​den anvendte bufferopløsning (trans-buffer).

Afhængig af forsøgets opgaver og betingelser vælges overførselsbetingelser, der giver de bedste resultater. De almindeligt anvendte substrater er nitrocellulose, polyvinylidendifluorid (PVDF) eller positivt ladede nylonmembraner. Nitrocellulose kan binde op til 80-100 mikrogram protein per 1 cm2.

Lavmolekylære proteiner (med en molekylvægt på mindre end 20 kDa) kan gå tabt som følge af vaskninger, hvilket gør det muligt foreløbigt at studere polymorfien af ​​visse genetiske loci ved længden af ​​de tilsvarende restriktions-DNA-fragmenter.

Derudover er det ved hjælp af Southern-hybridisering let at finde ud af, om målgenet har et sted for hydrolyse af et bestemt restriktionsenzym i sin indre del, hvilket giver dig mulighed for at vælge den optimale strategi til kloning af regionen af ​​det undersøgte genom.

Ifølge et lignende skema kan RNA-molekyler også overføres fra agarosegel til et nitrocellulosefilter. Denne metode er blevet kaldt Northern blotting i modsætning til Southern blotting, da efternavnet Southern betyder "southern" på engelsk.

Overførslen til filtre fra proteingelen blev derfor kaldt Western blotting. Store proteiner (større end 100 kDa) denatureret i natriumdodecylsulfat (SDS) opløsning kan blive dårligt overført til membranen, hvis ethanol er til stede i trans-bufferen. Alkohol forbedrer markant overførslen af ​​proteiner fra SDS-polyacrylamidgelen, men indsnævrer porerne i gelen, hvilket fører til tilbageholdelse af store proteiner.

PVDF-membranen er optimeret til immundetektion og er i stand til at tilbageholde specifikt bundne proteiner op til 160 µg/cm2 med et meget lavt niveau af ikke-specifik binding.

Immunblotting

En vigtig egenskab ved denne membran er muligheden for dens gentagne brug. Zeta-Probe nylonmembraner binder effektivt SDS-proteiner i fravær af alkohol, og denne binding er modstandsdygtig overfor efterfølgende behandlinger. Lavmolekylære proteiner bibeholdes også effektivt. Med en høj bindingskapacitet på cirka 480 μg protein pr. 1 cm2 tillader Zeta-Probe-membraner påvisning af spormængder af protein i assayblandinger.

Efter at antigenet er immobiliseret på membranen, blokeres de resterende bindingssteder med opløsninger af gelatine eller bovint serumalbumin eller skummetmælk.

Derefter inkuberes membranen i en opløsning af polyklonale eller monoklonale antistoffer mod det testede antigen. Efter afvaskning af ubundne antistoffer inkuberes membranen i en opløsning af sekundære antistoffer, som er et konjugat af alkaliske fosfatase-enzymer (alkalisk fosfatase, AP) eller peberrodsperoxidase (HRP) med anti-art-antistoffer (gedeantistoffer mod kanin, mus eller kanin). humane immunoglobuliner) eller proteiner A (Staphylococcus aureus-protein) eller G (Streptococcus sp.-protein) med høj affinitet til Fc-regionen af ​​immunoglobuliner.

Påvisning af de dannede immunkomplekser udføres ved kemisk eller kemiluminescerende metode. Substrater til kemisk reaktion ved brug af alkaliske fosfatasekonjugater er 5-brom-4-chlor-3-indolylphosphat (BCIP) eller tetrazoliumblåt (NBT), og ved brug af peberrodsperoxidase-konjugater - 4-chlor-1-naphthol og hydrogenperoxid.

Som et resultat af enzymatiske reaktioner dannes et farvet bånd eller plet på membranen på stedet for lokaliseringen af ​​antigen-antistofkomplekset.

Følsomheden af ​​denne metode er 100 pg protein ved brug af AP-konjugater og 100-500 pg ved brug af HRP-konjugater. Kemiluminescerende påvisning af immunkomplekser kan påvise mindre end 5 pg antigen. Princippet i denne metode er, at når HRP reagerer med hydrogenperoxid og cyklisk diacylhydrazinluminol, udsendes lys ved en bølgelængde på 428 nm, som kan optages på en lysfølsom film.

Immunoblotting-reaktionen (RI) blev udviklet på basis af ELISA. Det er den mest specifikke og følsomme metode til immunkemisk analyse. Immunoblotting (fra det engelske blot - at blive våd, plet) kombinerer ELISA med elektroforese. Det bruges til at påvise ikke komplekse antistoffer mod HIV, men antistoffer mod dets individuelle strukturelle proteiner (proteiner-p24, glycoproteiner-gp120, gp 41 osv.). Se ekspert (bekræftende) reaktioner for diagnosticering af HIV-infektion.

Reaktionen udføres i flere trin:

Virusset ødelægges i komponenter - antigener (p24, gp120, gp 41 osv.), som udsættes for elektroforese i en polyacrylamidgel, det vil sige adskillelse af antigener i fraktioner efter molekylvægt.

2. Gelen dækkes med en nitrocellulosemembran og antigenfraktioner overføres til den ved hjælp af elektroforese. Nitrocellulose opfører sig som duppepapir. Membranen skæres i strimler (strimler). Virksomheder producerer sådanne strimler med "klatter" af antigener.

Immunblotting - en yderligere indirekte metode

Strimler med HIV-antigener påført det nedsænkes i individets serum og vaskes derefter fra ubundet materiale.

4. Strimlerne inkuberes med peroxidase-mærket antiglobulinserum og vaskes.

Et substrat tilsættes og antallet af farvede fraktioner (pletter) noteres, som svarer til lokaliseringszonen for AG-AT-komplekset.

Tilstedeværelsen af ​​striber i visse områder af strimlen bekræfter tilstedeværelsen i det undersøgte serum af antistoffer mod strengt definerede HIV-antigener. Resultatet af immunblotting anses for positivt, hvis bånd svarende til to af de tre HIV-antigener - p24, gp41 og gp 120 er synlige på membranen (fig. 37).

TEGNINGER

LISTE OVER BRUGT LITTERATUR

Hovedlitteratur

Medicinsk mikrobiologi, virologi og immunologi: en lærebog for medicinstuderende. universiteter 2. udg., rettet. og yderligere — 702 s. Ed. A.A. Vorobyov. M.: MIA, 2012.

2. Mikrobiologi, virologi og immunologi: en guide til laboratorieundersøgelser: studievejledning / (V.B. Sboychakov et al.); udg. V.B.Sboychakova, M.M.Karapats. – M.: GEOTAR-Media, 2014.- 320 s.: ill.

3. Medicinsk mikrobiologi, immunologi og virologi [Elektronisk ressource]: en lærebog for honning.

universiteter - 760 s. — Adgangstilstand: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html Korotyaev A.I., Babichev S.A. St. Petersborg: Spetslit, 2010.

4. Medicinsk mikrobiologi, virologi og immunologi [Elektronisk ressource]: lærebog: i 2 bind / V. 1. - 448 s. — Adgangstilstand: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html Zverev V.V., Boychenko M.N.

M. : Geotar Media, 2010. .

5. Medicinsk mikrobiologi, virologi og immunologi [Elektronisk ressource]: lærebog: i 2 bind, bind 2. - 480 s. Adgangstilstand: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html Zverev V.V., Boychenko M.N. M. : Geotar Media, 2010.

yderligere litteratur

1. Immundiagnostiske reaktioner: lærebog / udarbejdet af: G.K. Davletshina, Z.G. Gabidullin, A.A. Akhtarieva, M.M.

Khusnarizanova, Yu.Z. Gabidullin, M.M. Alsynbaev - Ufa: Publishing House of GBOU VPO BSMU under sundhedsministeriet i Rusland, 2016. - 86s.

2. Funktioner af nogle egenskaber, der bestemmer det patogene potentiale af co-kultiverede variationer af Enterobacter, Сitrobacter, Serratia, E. coli, Proteus bakterier: videnskabelig publikation / Yu. Z. Gabidullin, R. S. Sufiyarov, I. I. Dolgushin - Ufa, - 2015. 250 sek.

Hjem » Immunoblot - hvad er det? Immunoblot i diagnosticering af infektionssygdomme

Immunoblot - hvad er det? Immunoblot i diagnosticering af infektionssygdomme

Hvad er et immunblot? Dette er en almindelig metode til laboratoriediagnose af humane virusinfektioner. Det er en af ​​de mest nøjagtige og pålidelige måder at opdage tilstedeværelsen af ​​HIV på.

For pålidelighedens skyld er den endnu større end den enzymkoblede immunosorbent (elisa) assay. Immunoblot-resultater betragtes som afgørende og afgørende. Generel information

Immunoblot - hvad er det? For at anerkende en person som HIV-positiv skal du gennemgå en laboratorietest for at teste for tilstedeværelsen af ​​antistoffer i blodserumet.

Metoden til Western blot sektioner kaldes også Western blot (western blot). Det bruges til at opdage humane virusinfektioner, som en ekstra ekspertmetode. Dette er nødvendigt for at bekræfte ELISA - en laboratorietest, der giver dig mulighed for at bestemme tilstedeværelsen af ​​antistoffer mod HIV i blodet. Immunoblot gentjek positiv ELISA.

Det anses for at være det mest følsomme, komplekse og dyreste.

Mål

Hvad er et immunblot? Denne metode til laboratorietest af blodserum for tilstedeværelsen af ​​antistoffer mod virussen.

Under specielle undersøgelser af de totale virale proteiner i gelen og på nitrocellulosemembraner.

Immunblotting (påvisning af antistoffer i patienters sera mod visse patogene antigener)

Western blot-sektionsproceduren er beregnet til at bestemme HIV-infektion på forskellige stadier. I det første trin udsættes det rensede virus fra dets bestanddele for elektroforese og antigenerne, der er inkluderet i det, divideret med molekylvægten.

Den humane immundefektvirus replikerer i levende celler, der er indlejret i dens genetiske information. På dette stadium bliver personen bærer af HIV-virus, hvis du er blevet smittet.

Specificiteten af ​​denne sygdom er, at den ikke manifesterer sig i lang tid. Virussen ødelægger lymfocytter, således falder en persons immunitet, og kroppen bliver ude af stand til at bekæmpe infektioner.

Hvis HIV behandles korrekt og rettidigt, vil patienten leve til en moden alder. Manglende behandling fører uundgåeligt til døden. Fra infektionsøjeblikket, men uden behandling, er den maksimale periode ikke mere end ti år.

Ejendommeligheder

Immunoblotanalyse er en pålidelig metode, der giver dig mulighed for at bestemme tilstedeværelsen af ​​antistoffer mod HIV-antigener af den første og anden type.

Hvis en person er smittet, efter to ugers antistoffer, som kan påvises meget senere. Et træk ved HIV er, at mængden af ​​antistoffer stiger hurtigt og forbliver i patientens blod. Selvom de er til stede, kan sygdommen ikke manifestere sig i to eller flere år. ELISA-metoden indikerer ikke altid tilstedeværelsen af ​​sygdommen nøjagtigt, hvilket kræver bekræftelse af resultaterne fra PCR- og Western blot-sektioner, hvis enzymimmunoassayet viste et positivt resultat.

Indikationer for

Hvilken slags "immunoblot" er allerede blevet fundet ud af, men hvilken bliver introduceret i undersøgelsen?

Årsagen til at teste for human immundefekt virus (HIV) immunoblot vil være et positivt ELISA-resultat. Det er nødvendigt at gennemgå et enzymbundet immunosorbent-assay hos patienter, der skal opereres. Derudover bør du lave en analyse af kvinder, der planlægger graviditet, samt dem, der er promiskuøse. Western blot-sektioner gives til patienter med HIV-infektion, hvis elisa-resultaterne er tvivlsomme.

Følgende alarmerende symptomer kan være årsagen til at gå til lægen: hurtigt vægttab; svaghed, funktionstab; tarmlidelser (diarré), som varer tre uger; dehydrering; feber; hævede lymfeknuder i kroppen; udvikling af candidiasis, tuberkulose, lungebetændelse, toxoplasmose, forværring af herpes.

Patienten behøver ikke at forberede sig før donation af venøst ​​blod.

Spis ikke i 8-10 timer før testen. Det anbefales ikke at drikke alkohol og kaffedrikke, tunge fysiske øvelser, for at opleve spænding dagen før bloddonation.

Hvor skal man lave analysen?

Hvor kan jeg blive testet for HIV?

ELISA, en immunoblot-analyse udført på private klinikker i byer, giver resultater inden for en dag. Umiddelbar diagnose er også mulig. I offentlige institutioner er elisa medicinske test og Western blot-sektioner gratis i overensstemmelse med lovgivningen i Den Russiske Føderation.

Obligatorisk screening for infektionssygdomme hos gravide kvinder og patienter med behov for indlæggelse eller operation Hvordan udføres denne undersøgelse?

Hvordan udfører man en ELISA? Immunoblot positiv/negativ bekræfter eller afkræfter elisa resultater. Fremgangsmåden er ret enkel. Specialisten tager venøst ​​blod, med tiden tager det mindre end fem minutter.

Efter prøveudtagning skal injektionsstedet desinficeres og forsegles med et plaster. Prøvetagningen udføres på tom mave, så efter proceduren gør det ikke ondt at spise en bar mørk chokolade eller en sød varm drik.

For at få en henvisning til en gratis analyse på en offentlig lægeinstitution skal du besøge en behandler.

Generelt adskiller immunoblot sig ikke fra andre blodprøver ved prøveudtagning. Forskningsmetoden er enkel. Hvis en virus er til stede i en persons blod, begynder kroppen at producere antistoffer for at ødelægge den. Der er mange proteinantigener for hver virus. Påvisningen af ​​disse antistoffer er grundlaget for Western blot-sektioneringsmetoden. Pris

Hvor meget analyse? Immunoblot HIV henviser til billig forskning.

I gennemsnit varierer screening immunoassay metoder fra 500 til 900 rubler. Western blot-sektioner er en undersøgelseskontrol, hvis omkostninger varierer fra tre til fem tusinde rubler. Mere komplekse metoder er meget dyrere. For eksempel skal du betale omkring 12.000 rubler til analysen af ​​polymerasekædereaktionen (PCR).

Fortolkning af resultater

De mest almindelige metoder til diagnosticering af HIV-infektion er enzymimmunoassay og immunblot.

De er til bestemmelse af serumantistoffer mod det humane immundefektvirus. Infektion bekræftes normalt af to tests: screening og bekræftende. Fortolkningen af ​​resultaterne skal foretages af en læge, han diagnosticerer og ordinerer behandling. Hvis immunblotten er positiv, betyder det, at den menneskelige krop har en virus.

Et positivt resultat bør ikke være en grund til selvbehandling, da hver patient kan have sit eget billede af sygdommen.

Kvalitativ analyse omfatter screening og certificering. Hvis patienten ikke har virussen, er resultatet "negativt". Når dette certifikat er fundet, udføres yderligere screeningstest. Immunoblotanalyse, der bekræfter eller afkræfter screening. Hvis teststrimlerne vises i mørke områder (proteinlokalisering), er diagnosen "HIV".

Hvis resultaterne er tvivlsomme, udføres testene inden for tre måneder.

For at forhindre infektion med den humane immundefektvirus er det muligt, hvis du følger visse regler: undgå tilfældig seksuel kontakt, brug kondomer under kontakt, brug ikke stoffer.

Hvis sygdommen opdages hos en gravid kvinde, er det vigtigt at følge anbefalingerne fra den behandlende læge, glem ikke tests for tilstedeværelsen af ​​virussen.

Hvad er Western Blotting?

Proteinidentifikation i komplekse blandinger eller ekstrakter af forskellige væv er et af de hyppigt forekommende problemer. Ved at bruge et sådant værktøj som specifikke antistoffer er det muligt at bestemme proteinet under undersøgelse med et minimum af tid og økonomiske omkostninger.

Ved Western blotting-metoden adskilles en blanding af proteiner i det første trin ved elektroforese i nærværelse af natriumdodecylsulfat (SDS) og overføres derefter til en nitrocellulosemembran ved elektroblotting.

Essensen af ​​denne metode ligger i det faktum, at gelen efter elektroforese placeres på en nitrocellulosemembran mellem lag af filterpapir. "Sandwichen", der er samlet på denne måde, placeres i et elektrisk felt, så protein-SDS-komplekserne bevæger sig hen over gelpladen og immobiliseres (som følge af uspecifik sorption) på overfladen af ​​nitrocellulosemembranen.

I bindingen af ​​protein-SDS-komplekset til nitrocellulosemembranen er hovedsageligt elektriske kræfter involveret, og denne interaktion er multipunkt og fører til "spredning" af proteiner på membranoverfladen. Efter elektrooverførsel opnår vi således en replika af gelen på nitrocellulose med proteiner arrangeret på samme måde som i polyacrylamidgelen.

Efter SDS - elektroforese, elektrooverførsel og sorption af proteiner fra gelen til en nitrocellulosemembran, ændres proteinets tertiære konformation meget, hvis det generelt er korrekt at tale om eksistensen af ​​en tertiær struktur for proteinet efter en så hårdhændet behandling . Til den immunkemiske påvisning af det undersøgte protein anvendes derfor sædvanligvis kun mono- eller polyklonale antistoffer, der er specifikke for de lineære områder af proteinmolekylet.

51. Enzymimmunoassay, immunblotting. Mekanisme, komponenter, anvendelse.

Antistoffer, der er specifikke for konformationelle epitoper (eller steder, der involverer intersubunit-kontakter) er generelt ikke egnede til anvendelse i Western blot-metoden.

Efter proteinoverførsel inkuberes membranen sekventielt med antistoffer, der er specifikke for det undersøgte protein, og derefter med sekundære antistoffer, der er specifikke for Fc-fragmenterne af de primære antistoffer, konjugeret med et enzym (eller et andet) mærke (fig.

1A). I det tilfælde, hvor primære antistoffer, der er specifikke for det undersøgte antigen, er direkte konjugeret med mærket, er sekundære antistoffer ikke nødvendige (fig. 1 B). Immunkomplekserne dannet på stedet for den undersøgte proteinlokalisering "manifesteres" ved hjælp af et kromogent substrat (afhængigt af mærketypen).

Metodens sensitivitet og specificitet er meget afhængig af, hvilke antistoffer der anvendes i undersøgelsen.

De anvendte antistoffer skal være specifikke for en unik aminosyresekvens, der kun er specifik for det undersøgte protein. Ellers er interaktion (især i tilfælde af grove proteinekstrakter) af antistoffer med flere proteinmolekyler mulig, hvilket igen vil føre til fremkomsten af ​​flere farvede bånd på membranen.

Identifikationen af ​​det undersøgte protein i dette tilfælde er ofte vanskelig eller endda umulig.

Den anden vigtige faktor at huske på, når du vælger antistoffer, er affinitet. Jo højere affinitet af de anvendte antistoffer, jo lysere og klarere farves proteinbåndene, jo højere er metodens følsomhed. Ved anvendelse af antistoffer med høj affinitet kan der opnås en følsomhed på 1 ng og endnu højere.

For at visualisere resultatet af interaktionen mellem det membranbundne antigen og antistoffer, anvendes sekundære antistoffer konjugeret med midler, der er i stand til at give et bestemt signal under visse betingelser.

Sædvanligvis anvendes et enzym (peroxidase eller phosphatase) som et sådant middel, hvis reaktionsprodukt har en farve og præcipiterer på membranen i form af et uopløseligt præcipitat.

Det er også muligt at bruge fluorescerende mærker i denne metode.

Ris. 1. Skema for immunokemisk farvning af det undersøgte protein: A - under anvendelse af sekundære antistoffer konjugeret med et enzymmærke; B - det primære antistof er direkte konjugeret med et enzymmærke.

Protokol:

I. Gel- og membranpræparation og proteinelektrotransfer

Polyacrylamidgelen blev efter elektroforese anbragt i et bad med blotting-buffer (25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM glycin, 10% ethanol).

To ark filterpapir, skåret i form af blotting-kassetten og fugtet med blotting-buffer, anbringes på den del af kassetten, der vender mod anoden. Derefter anbringes en nitrocellulosemembran, der er forfugtet med den samme buffer, på filterpapiret, og det sikres, at der ikke er luftbobler mellem membranen og papiret.

Derefter skal gelen forsigtigt placeres på membranen, igen med særlig opmærksomhed på fraværet af luftbobler mellem gelen og membranen. Sandwichen fuldendes af to lag fugtet filterpapir, som lægges på overfladen af ​​gelen (fig. 2). Den resulterende sandwich klemmes i kassetten og placeres mellem elektroderne, så membranen vender mod anoden.

Ris. 2. Skema for elektrooverførsel af proteiner til membranen.

II. elektrooverførsel

Elektrooverførsel af proteiner til en nitrocellulosemembran udføres i en buffer indeholdende 25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM glycin, 10% ethanol i 30-50 minutter ved en konstant spænding på 100 V.

Elektrotransfertiden afhænger af størrelsen af ​​de overførte proteiner, jo større protein, jo længere tid tager elektrotransferen. Kvaliteten af ​​elektrotransport og arrangementet af proteinbånd blev vurderet ved at farve nitrocellulosemembranen med 0,3 % Ponceau S i 1 % eddikesyre. Før immunfarvning skal membranen vaskes flere gange med en mildt alkalisk vandig Tris-opløsning for at fjerne proteinbundet farvestof.

III. Immunokemisk farvning af proteiner immobiliseret på en nitrocellulosemembran

For at blokere ikke-specifikke antistofbindingssteder inkuberes membranen under konstant omrøring ved stuetemperatur i 30 minutter i PBST (for bedre blokering kan en PBST-opløsning indeholdende 10% skummetmælkspulver anvendes).

Efter blokering inkuberes membranen i en time ved stuetemperatur under konstant omrøring i PBST indeholdende 1-10 μg/ml specifikke antistoffer.

Den optimale koncentration af antistoffer vælges empirisk og afhænger af affiniteten af ​​interaktionen mellem antistoffer og antigenet.

Ved afslutningen af ​​inkubationen blev membranen vasket 5 gange med PBST og overført til en opløsning af sekundære antistoffer konjugeret med peberrodsperoxidase. Fortyndingen af ​​konjugatet angives sædvanligvis af producenten på emballagen eller vælges empirisk af forskeren. Inkuber membranen i en opløsning af sekundære antistoffer i 1 time under konstant omrøring.

Efter grundig vask (mindst 5-6 bufferskift) overføres PBST-membranen til en kromogen substratopløsning indeholdende 3 mg diaminobenzidin (DAB) og 10 µl 30% hydrogenperoxid i 10 ml 0,1 M Tris-HCl, pH 7,6 .

Inkubation udføres under omrøring i 5 til 10 minutter. Efter afslutningen af ​​inkubationen med substratet skal membranen vaskes med PBST, tørres ved blotting med filterpapir og straks laves en elektronisk kopi ved scanning i farve. Hvis membranen tørrer helt ud, falmer de farvede proteinstriber, og billedet er mindre lyst og kontrastfuldt.

Bemærk: DAB er giftigt og potentielt kræftfremkaldende. Arbejd kun med gummihandsker!