PCR analüüs kassidel. Opisthorchiaasi analüüs: üldine, ifa, väljaheited, kus ja kuidas seda võtta, tulemuste tõlgendamine

Kasside ja koerte koroonaviirusnakkusi põhjustavad perekonna Coronavirus (sugukond Coronaviridae) esindajad. Koronaviirusnakkuse peamine ilming koertel on kõhulahtisus. V kasside koroonaviirused põhjustavad enteriiti ja nakkuslikku peritoniiti, mis on metsikute ja kodukasside seas laialt levinud.

Koerte koroonaviirusnakkuse põhjustajaks on koerte koroonaviirus, mis põhjustab ägedat koroonaviiruse enteriiti. Haigus edastatakse otsesel kokkupuutel viiruse kandjaga (sülje ja väljaheidete kaudu). Igas vanuses koerad on selle nakkuse suhtes vastuvõtlikud, kuid kõige sagedamini haigestuvad kutsikad ja nõrgestatud loomad, kes on juba põdenud mõnda muud haigust, näiteks parvoviirusnakkust.

Haiguse peamised sümptomid on oksendamine ja kõhulahtisus, mõnikord segatuna verega, dehüdratsioon, kehakaalu langus ja apaatia. 3-4 nädalat pärast paranemist võib tekkida haiguse kordumine. Diagnoosimisel tuleb koertel koronaviiruse enteriiti eristada parvoviiruse enteriidist, soole adenoviirusinfektsioonist ja koerte katkust.

Kasse mõjutavaid koroonaviirusi on kahte biotüüpi: FECV ehk kasside enteriidi koronaviirus ja FIPV, kasside infektsioosse peritoniidi viirus (2, 3). FECV-d kannab 16–50% kodukassidest, kelle puhul viirus lokaliseerub peensooles, põhjustamata haigusi või kerget kõhulahtisust. Samal ajal võib 5–12% kandjatest kogeda mutatsiooni FECV oportunistlikust soolevormist patogeenseks (FIPV), mis viib haiguse arenguni (2).

Kasside nakkav peritoniit (IP, FIP), mis tavaliselt lõpeb surmaga, esineb kahes vormis - märg ja kuiv. IP märga (eksudatiivset) vormi iseloomustab kõhu- või rindkereõõne veresoonte kahjustus, millega kaasneb plasma lekkimine nendesse õõnsustesse (joonis 1). Haigetel loomadel tekib astsiit (joon. 2), vedeliku kogunemise korral hingamishäired. Kõhuõõne organite seroossetele katetele moodustuvad fibriinsed ladestused (joonis 3) ja seejärel võivad tekkida adhesioonid. Maksafunktsiooni kahjustuse tõttu täheldatakse sklera ja naha ekterilisust.

IP kuiv (mitteeksudatiivne) vorm esineb ilma vedeliku kogunemiseta kõhu- ja rindkereõõnde. Sel juhul on kahjustatud siseorganid - aju (joon. 4), maks, neerud, kõhunääre ja 25% juhtudest täheldatakse silmakahjustusi (joonis 5) (5).

Kuna PV tõhusat raviskeemi ei ole veel välja töötatud, on viiruse edasikandumise varajasele avastamisele suunatud ennetusmeetmed ülimalt olulised (1, 3).

Kasside nakkusliku peritoniidi diagnoosimine on samuti tõsine probleem. Traditsioonilised patogeeni tuvastamise meetodid, mis põhinevad koronaviiruste antikehade tuvastamisel (RNGA ja ELISA), annavad kuni 60% valepositiivsetest tulemustest. See on tingitud oportunistlike patogeeni tüvede olemasolust kasside soolestikus (2, 3). Paljud välismaised laborid kasutavad IP diagnoosimiseks terviklikku metoodikat, sealhulgas:
- koronaviiruse antikehade tiiter;
- albumiini/globuliini suhe transudaadis või vereplasmas;
- a-1 happelise glükoproteiini (AGP) tase;
- tsütoloogilised ja hematoloogilised parameetrid (4).

materjalid ja meetodid
Uuringus kasutati Bagheera koroonaviiruse tüve (5 µg TCD50/ml) lahjendustes, 8 kasside koronaviiruse (FCoV) isolaati, 2 koerte koronaviiruse (CCV) isolaati ning kasside panleukopeenia viiruse ja kasside kalitsiviiruse suspensioone.
PCR-testisüsteemi testimisel kasutati tervete kasside, IP kliiniliste tunnustega loomade ja mittespetsiifiliste sümptomitega kasside bioloogilist materjali. Uuritud loomade hulgas oli nii puukoolides peetavaid kui ka individuaalselt peetavaid loomi.
Paralleelselt uuriti bioloogilist materjali, kasutades PCR ja RIGA meetodeid. PCR süsteemi kasutati väljaheidete, vereplasma ja transudaadi uurimiseks spetsiifilise astsiidi korral ning RIGA meetodit vereseerumi ja transudaadi uurimiseks.

Seroloogilised testid viidi läbi, kasutades komplekti lihasööjate koronaviiruste antikehade tuvastamiseks RIGA-s (TU 9388-025-00494189-01). Koerte bioloogilist materjali uuriti PCR-ga.

See uuring nõuab aga märkimisväärset aja- ja rahainvesteeringut. Sellega seoses võib IP diagnoosimise tõhusaks meetodiks olla polümeraasi ahelreaktsioon (PCR), mis võimaldab mitte ainult tuvastada kasside koronaviirusi, vaid ka eristada oportunistlikke ja patogeenseid tüvesid nende erineva lokaliseerimise alusel kehas. Samal ajal näitab viiruse tuvastamine kassi väljaheites oportunistlike tüvede (FECV) kandumist ning vereplasmas või astsiidivedelikus patogeensete tüvede (FIPV) ringlust looma kehas ja seega ka haigust.

Selle uuringu eesmärk on testida PCR-i põhjal kasside ja koerte koroonaviiruse infektsiooni diagnoosimise testisüsteemi.

RNA eraldamine viidi läbi RNA-sorbeerimiskomplekti (TsNIIE) abil, mis põhineb selle silikageelil sorptsiooni meetodil. PCR viidi läbi TERCIK võimendiga ("DNA-tehnoloogia") vastavalt standardmeetoditele. Saadud PCR produktid visualiseeriti elektroforeesiga 1,5% agaroosgeelis, mis sisaldas etiidiumbromiidi.

Tulemused ja arutlus
Uuringu käigus analüüsisime teavet Coronaviridae perekonna esindajate nukleotiidjärjestuste kohta, eelkõige andmebaasides Entrez, GeneBank, EMBL ja DDBJ avaldatud erinevate kasside ja koerte koroonaviiruste isolaadid. Lisaks uuriti kirjandust, mis iseloomustas FCoV, CCV genoomide struktuuri ja nende geneetilist seost teiste pereliikmetega.

Spetsiifiliste praimerite sihtmärkideks valiti kaks konserveerunud järjestust nukleokapsiidi valgu geenis. Kavandatud praimerite spetsiifilisust uuriti arvutiprogrammide FASTA ja BLASTA abil. Töö tulemusena selgus valitud oligonukleotiidide homoloogia ainult FCoV ja CCV nukleokapsiidvalgu geenidega ning olulist homoloogiat ei leitud teiste Coronaviridae perekonna liikide, aga ka teiste viiruste, bakterite nukleotiidjärjestustega. või eukarüootid. Seega peaks teoreetiliste arvutuste põhjal pakutud praimerid olema 100% spetsiifilisusega.

Uuringu järgmises etapis optimeeriti viiruse RNA eraldamise ning pöördtranskriptsiooni ja PCR reaktsioonide läbiviimise tingimused ning määrati PCR analüüsi spetsiifilisus ja tundlikkus. PCR produkti suurus oli 350 aluspaari. Meetod näitas 100% spetsiifilisust ja kõrget tundlikkust. Koroonaviiruse tuvastamine kassi väljaheites viitas selle oportunistlike tüvede kandmisele soolestikus ning FECV tuvastamine transudaadis ja vereplasmas viitas haiguse arengule.

RNGA-meetodil testimisel loeti positiivseks tulemuseks antikehade tiitri > 1:128 tuvastamine loomal. See võib aga viidata nii viiruse kandmisele kui ka nakkuse ilmselgele vormile. Lisaks võib positiivne tiiter olla tingitud varasemast kokkupuutest koroonaviirusega. Testiti koerte väljaheiteid ja nendes koronaviiruse RNA tuvastamine viitas CCV põhjustatud haigusele.

Katse käigus uuriti 193 kassilt võetud bioloogilist materjali (tabel). RNGA meetodit kasutades registreeriti positiivne tulemus 131 loomal (antikehade tiitrid > 1:128). Seropositiivsete kasside testimisel PCR-ga tuvastati koronaviiruse RNA plasmas ja astsiidivedelikus 12 loomal (9%), ainult väljaheites - 68-l (52%) ja 51-l (39%) ei tuvastatud üldse. Seega oli 52% seropositiivse tulemusega kassidest koroonaviiruse oportunistlike tüvede kandjad ja 39% terved. On ilmne, et RNGA meetodil tehtud uuring andis 63% valepositiivsetest tulemustest (uuritud loomade koguarvust).

Järeldus
Saadud tulemused näitavad, et kasside koroonaviiruse nakkuse diagnoosimine traditsioonilise seroloogilise meetodi (TSM) abil annab enam kui 60% valepositiivseid tulemusi, kuna see ei võimalda eristada kandjat tegelikust haigusest. Lisaks peeti seropositiivseteks loomi, kes olid varem koronaviirusega kokku puutunud.

PCR meetodi kasutamine võimaldas eristada oportunistlikke ja patogeenseid tüvesid nende erineva lokaliseerimise tõttu organismis ning eristada kandeseisundit haigusest. Seega näitavad uuringu andmed, et kasside ja koerte koroonaviiruste tuvastamiseks ja lõpliku diagnoosi tegemiseks on soovitatav kasutada PCR meetodit.

Vastavalt Vene Föderatsiooni Põllumajandusministeeriumi veterinaarosakonna korraldusele nr 45 tellida ajavahemikul 08.03.2004 kuni 08.06.2004 kasside nakkusliku peritoniidi diagnoosimise testsüsteemi testid, kasutades viidi läbi PCR meetod. Testimissüsteem läbis edukalt komisjoni testimise, näidates pakutud paneelis 100% spetsiifilisust ja kõrget tundlikkust. Praegu on veterinaarpraktikas edukalt kasutusel kasside ja koerte koroonaviiruste tuvastamise ja tuvastamise PCR-põhine Coronavirus testisüsteem (TU 9388-142-00494189-05; RE nr R077-1-3.5-0813 registreeritud aastal Vene Föderatsiooni 30. juunil 2006 nr PVR-1-3.5/01556 5 aastaks).

KIRJANDUS
1, Addie, D, D„ Jarrett, 0. Pöördtranskriptaasi polümeraasi ahelreaktsiooni kasutamine kasside koroonaviiruse leviku jälgimiseks tervete kasside poolt, Vet. Rec, 2001, 26. mai; 148 (21): 649-53,
2, Vennema, H, atal. Kasside infektsioosse peritoniidi viirused tekivad endeemiliste kasside enterokoronaviiruste mutatsiooni teel, Virology, 1998:150-157.
3, Herrewegh, A. A., Mahler, M. Hedrich, H. J., Haagmans, B. L. Egberink, H. F., Horzinek, M. C., Rottier, P. J., de Groot, R. J., Kasside koronaviiruse püsivus ja areng suletud kassikoloonia viroloogias19. 4. august; 234 (2): 349-363,
4, erinevate testide võrdlus kasside nakkusliku peritoniidi diagnoosimiseks; Katrin Hartmann at al„ 2003.
5, kasside nakkuslik peritoniit; Stacy E, Andrew, Põhja-Ameerika veterinaarkliinikud: väike loom; vol. 30, number 5, september 2000

E.A. YARALOVA, I.L. OBUKHOV, MM RAKHMANINA, E.I. ELIZBARAŠVILI, V.I.ULASOV,
Ülevenemaaline loomaravimite ja -söötade kvaliteedi ja standardimise riiklik keskus, Moskva

PCR on polümeraasi ahelreaktsioon, mis põhineb DNA ahela konkreetse lõigu kopeerimise põhimõttel. DNA materjali mahu mitmekordse suurenemise tõttu on võimalik soovitud baktereid mikroskoobis tuvastada. PCR-i eelised on järgmised:

• kõrge tundlikkus;
• kõrge spetsiifilisus;
• ägedate ja varjatud infektsioonide avastamine;
• võime tuvastada mis tahes praegu teadaolevaid patogeene.

PCR veterinaarmeditsiinis

Praegu on PCR-i diagnostikameetod leidnud laialdast rakendust veterinaarmeditsiinis. See uurimismeetod võimaldab saada lühikese aja jooksul usaldusväärse vastuse. Lisaks nõuab see väga väikeses koguses bioloogilist materjali, erinevalt näiteks üldisest vereanalüüsist, mis lihtsustab oluliselt loomaarstide tööd. Nii inimestel kui loomadel võib PCR-i materjal olla:

• veri ja selle komponendid;
• uriin;
• mao biopsia;
• sülg;
• epiteelirakkude kraapimine.

PCR diagnostika läbiviimine kassidele

Loomaarsti poolt kassi läbivaatuse ajal võib kahtlustatava diagnoosi kinnitamiseks või ümberlükkamiseks osutuda vajalikuks kassi PCR testimine. Sellise uuringu määramise põhjuseks võivad olla kõige levinumad ja samas raskesti diagnoositavad haigused nagu peritoniit, rinotrahheiit, koroonaviirus, toksoplasmoos jne.

Eriti tõsine haigus, mis nõuab PCR-meetodit, on kasside viiruslik immuunpuudulikkus. See viirus mõjutab mitte ainult immuunsüsteemi, vaid ka looma närvisüsteemi. Kassi organism muutub nõrgemaks ja kaitsetuks bakterite ja viiruste vastu, mille tagajärjel loom sekundaarsetesse infektsioonidesse sureb. Ja selle viiruse esinemise välistamiseks soovitab loomaarst teha kassile polümeraasi ahelreaktsiooni.

Sellel meetodil on lisaks paljudele eelistele ka mitmeid puudusi. Kõik PCR-i diagnostikaseadmed on väga tundlikud ja seetõttu võib väikseimgi saastumine anda valepositiivse vastuse. Oluliseks peetakse ka seadmete ja reaktiivide kõrget hinda, nii et mitte iga Moskva veterinaarkliinik ei saa seda osta. Kuid haiguste diagnoosimine ilma selle meetodita muutub üha keerulisemaks, nii et Moskvas saab kassidel PCR-testi teha meie kliinikus, helistades meie kontaktnumbritele või jättes taotluse veebisaidile.

Veterinaarterapeut, IVC MBA

Kaasaegses maailmas eelistavad paljud inimesed kasse inimestest suurema sõltumatuse tõttu, erinevalt koertest, kellele tuleb aega anda; kohanemisvõime üksildase eluviisiga, arm ja võime soojendada oma omanikku külmadel talvepäevadel. Armastav ja hooliv omanik püüab kaitsta oma lemmiklooma mitmesuguste haiguste eest, mida kassid põevad.

See mure väljendub kvaliteetses toitumises ja viirushaiguste õigeaegses ennetamises. Kahjuks on terve rida ravimatuid viirusnakkusi, millele kassid on vastuvõtlikud. Haigussümptomite ja spetsiifilise diagnostika puudumisel saate loomaga koos elada pikka aega, kahtlustamata oma lemmikloomal kroonilise viirusnakkuse (edaspidi CVI) esinemist. Selles artiklis tahaksin üksikasjalikult paljastada CVI ohu ja proovida seda probleemi soovitud kassipoja ostmisel vältida.

Niisiis, mis on kroonilised viirusinfektsioonid ja millist ohtu need meie lemmikloomadele kujutavad? CVI on pika peiteperioodiga viirushaigus, mis võib kesta mitu nädalat ja kesta kuni mitu aastat. Nakatumine võib toimuda nii emakas kui ka tervete kasside kokkupuutel haigete loomadega, aga ka kandjatega.

Koroonaviirused - see on RNA - sisaldavad viiruseid . Need viirused said selle nime tänu nukikujuliste protsesside sarnasusele corona spinarum'iga. Nakkuse põhjustajaks on koroonaviiruste perekonda kuuluv viirus. On 2 patogeenset tüve - sama mikroorganismi lähimad sugulased. Üks põhjustab peritoniiti, teine ​​enteriiti.

Koronaviirused jagunevad kolmeks vormiks:

Asümptomaatiline vorm - loom võib olla viirusekandja ja võib nakatada ka teisi kasse, kuid miski ei ohusta elu.

Kerge vorm ei ole ohtlik ja võib põhjustada üsna kergeid haigusi – enteriiti (kasside soolestiku koronaviirused – FECV).

Väga patogeenne vorm on kasside infektsioosne peritoniidi viirus (FIPV). Kehas toimuvad hävitavad muutused kõigis süsteemides ja elundites, mis põhjustavad surma.

Koronaviiruse enteriit (FECV) on suhteliselt kahjutu ja esineb loomadel noores eas, sümptomite aluseks on lahtine väljaheide, mis harva viib surmani; Kuid kasside viiruslik peritoniit on äärmiselt ohtlik, kuna sellel on kõrge suremus. FIPV ja FECV on omavahel üsna seotud, neid peetakse üheks viiruspopulatsiooniks, kuid neil on erinevad patogeensed muutused. Uuringud on näidanud, et koronaviiruse enteriit muutub mutatsiooni käigus viiruslikuks peritoniidiks.

Nakkuse edasikandumine on oronasaalne, s.o. nakatumine toimub hingamisteede kaudu õhus lendlevate tilkade, väljaheidete, kassipoegade toitmise ja paaritumise ajal. Üksi elavatel kassidel esineb seda haigust harvemini näitusekassidel, aga ka suurtes rühmades elavatel kassidel.

Sümptomid

HIPC-l on 2 vormi:

1. Eksudatiivne (koos efusiooniga)

"Märg" peritoniidiga kaasneb selge märk vedeliku olemasolust rinnus või kõhuõõnes. Vedelik on peamiselt helekollase varjundiga ja veidi viskoosne.

Kui bioloogiline vedelik koguneb rinnaõõnde, tekivad loomal efusiooni tagajärjel hingamisraskused ja kass võtab sundasendi. Hingamine on sageli rindkere-kõhu tüüpi.

Kui vedelik koguneb kõhuõõnde, pööravad omanikud sageli tähelepanu oma lemmiklooma suurenenud kõhule.

Samuti võite kogeda:

• kõrgendatud temperatuur (mitte alati);
• kaalukaotus;
• üldine nõrkus, depressioon;
• suurenenud lümfisõlmed;
• söögiisu vähenemine või kaotus.

2. Mitteeksudatiivne ("kuiv")

Selle vormi puhul on sümptomid sageli kerged. Seda vormi on raske diagnoosida. Selle iseloomulikud sümptomid on kehakaalu langus ja isutus.

Diagnostika. See toimub keerulisel viisil. Alustuseks võetakse loomalt kliinilised ja biokeemilised vereanalüüsid; teha kõhuõõne ultraheli; seroloogilised uurimismeetodid (ELISA - antud haiguse antikehade hulga määramine; või ICA - kiirtest), uuritakse ka efusioonivedelikku.

Prognoos. Kahjulik. Mõnikord tekib VIP eksudatiivse vormi korral pärast vedeliku eemaldamist ja sümptomaatilist ravi haiguse "kuiv" vorm. Kuiva FIP-ga kassid võivad elada kuni aasta.

Ravi. Kahjuks ei saa seda haigust ravida, vaid sümptomaatilist ravi, mille eesmärk on parandada lemmiklooma elukvaliteeti.

Ärahoidmine. Mõeldud ühes ruumis peetavate kasside arvu vähendamisele (maksimaalselt 6-10 kassi). Kasutatud kandikute ja piisava hulga puhtus ja õigeaegne desinfitseerimine, sage täiteaine vahetus.

See on krooniline viirushaigus, mida iseloomustab immuunsüsteemi nõrgenemine, aneemia teke ja lümfosarkoom. Noored loomad on selle nakkuse suhtes väga vastuvõtlikud. FLV-d diagnoositakse kõigis maailma riikides, haigus mõjutab erineva vanuserühma ja tõugu kasse.

Rajad ülekanded. Fekaal-suukaudne (sülg, väljaheited, eritis ninaõõnest), nakatunud kasside piima kaudu, hammustused, haige loomaga kokkupuutel kassilt kassile, on võimalik kirpude kaudu edasikandumine, samuti kui järgitakse aseptika ja aseptika reegleid. süstimise ja verevõtu ajal antisepsist ei täheldata.

Patogenees. VLK-d põhjustab geneetiline eelsoodumus, samuti loomade immunoloogiline puudulikkus. Haigetel kassidel, kelle antikehade tiiter on 1:32, ei pruugi olla haiguse kliinilist pilti, kuid selliseid loomi peetakse viirusekandjateks. Kliiniliselt haigetel kassidel ei pruugita antikehi tuvastada. VLK pärsib punase luuüdi aktiivsust, mis põhjustab aneemiat, vähendab immuunsust ja aitab kaasa teiste haiguste tekkele.

Kliiniline pilt Haigusel on kolm vormi:

1. Püsiv või püsiv. Sellise looma immuunsus on tugevalt nõrgenenud, haigus areneb üsna kiiresti ja ravi on enamasti ebaefektiivne.
2. Varjatud või varjatud. Loomal on vereringehäire. Viirus tungib läbi lümfisüsteemi ja punase luuüdi. Loom hakkab sagedamini haigestuma ja tekivad kasvajad.
3. Üleminek või mööduv. Tänu tugevale immuunsusele taastub loom 3 kuud pärast nakatumist.

Enamasti on sellistel loomadel raske aneemia, immuunsupressioon (vastuvõtlikkus muudele infektsioonidele või selle esinemine) ja lümfosarkoom - mitmekordne või ebatüüpiline. Inkubatsiooniperiood on 60–80 päeva, mõnikord 2–6 aastat. VLK esineb varjatud kujul ilma infektsiooni kliiniliste sümptomite ilmnemiseta ja ei pruugi pikka aega avalduda. Negatiivsete tegurite (söötmistingimuste muutused, hüpotermia, stress) mõjul viirus aktiveerub ja haigus areneb. Alguses võib täheldada muutusi veres (leukotsütoos, lümfotsütoos, ebatüüpiliste vererakkude ilmumine); limaskestade kahvatus/koldus, lümfisõlmede suurenemine, kehakaalu langus, söögiisu vähenemine, seedehäired.

Diagnostika

Esineb kliiniliste, hematoloogiliste, seroloogiliste ja viroloogiliste uuringute põhjal. Kõige olulisemad diagnostilised meetodid on järgmised:

• Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA), immunokromatograafiline test (ICA). Valenegatiivsed tulemused on tavalised.
• Kliiniline vereanalüüs.
• Vere biokeemia.
• Kõhuõõne ultraheli.
• Biopsia ja histoloogia.

Ravi. Ravi ei ole. Selle eesmärk on pakkuda sümptomaatilist ravi ja parandada looma elukvaliteeti. Näiteks raske aneemia korral on ette nähtud vereülekanne, samuti punaste vereliblede tootmist stimuleerivate ravimite kasutamine punases luuüdis. Määratakse ravimid, mis stimuleerivad immuunsüsteemi. Lümfoomide tuvastamisel määratakse keemiaravi.

Ärahoidmine. Viirus on väljaspool elusorganismi väliskeskkonnas väga ebastabiilne, sureb kahe päeva jooksul. Selle viiruse hävitamiseks piisab ruumide ja loomahooldusvahendite, kausside jms põhjalikust desinfitseerimisest. Lemmiklooma puhta, toitva toidu hoidmine ja hulkuvate loomadega kokkupuute piiramine on teie lemmiklooma tervise võti.

See haigus on ohtlik ainult kassidele, see ei kujuta endast ohtu inimestele ega teistele loomaliikidele.

Peamine viis selle haiguse ennetamiseks on vaktsineerimine. Sel eesmärgil kasutatakse Purevax FeLV ja Leukocel vaktsiine. Vaktsineerimine toimub alates üheksa nädala vanusest. Vaktsineerimine viiakse läbi kaks korda 21-päevase intervalliga. Siis tuleks kasse kord aastas vaktsineerida.

Viiruslik immuunpuudulikkus (FIV, FIV)

Kasside nakkushaigus, mida iseloomustab krooniline kulg, millega kaasnevad immuunsüsteemi kahjustused ja kõrge suremus.

See haigus on muutunud endeemiliseks kasside seas kogu maailmas.

Viirus püsib toatemperatuuril umbes 4 päeva. Kuumenemisel 60 kraadini sureb viirus keetes poole tunni jooksul; Alkoholi sisaldavate preparaatidega töötlemisel inaktiveeritakse viirus 5-10 minuti jooksul. VIC on ultraviolettkiirgusele üsna vastupidav.

FIV on levinum hulkuvatel kassidel, loomade ligikaudne vanus on 5-10 aastat.

Rajad ülekanded. Peamine viis on haigete loomade hammustused. Nakkus on levinud ka loomade seas, kellel on vaba juurdepääs õue. Nakatumine on võimalik vastastikuse lakkumise teel. Viirust leidub süljes, veres ja muudes vedelikes.

Kliiniline pilt. Kliinilised nähud on üsna mittespetsiifilised ja üsna mitmekesised. Need peegeldavad kaasuvaid infektsioone, mis arenevad nõrgenenud immuunsüsteemi taustal. Loomad ilmuvad:

• Nõrkus;
• Söögiisu kaotus;
• igemepõletik;
• Krooniline kõhulahtisus;
• Kaalulangus jne.

Looma immuunsüsteemi talitlushäirete tõttu võivad FIV-ga liituda mitmesugused infektsioonid: kaltsiviroos, klamüüdia, viirusleukeemia jne, mis üldist seisundit halvendavad.

FIV-ga kassidel on suurem risk lümfoomi tekkeks ja kliinilised nähud võivad olla sarnased FLV-ga.

Diagnostika. Kasutatakse kliinilisi laboratoorseid analüüse: vereanalüüs (võib täheldada neutropeeniat, lümfopeeniat, aneemiat, monotsütoosi). Biokeemiline vereanalüüs näitab suures koguses valku, maksaensüümide aktiivsuse suurenemist, asoteemiat ja hüperglükeemiat.

Selle haiguse kohta on mitmeid spetsiifilisi uuringuid:

Ensüüm-immunoanalüüsi meetod (ELISA); IHA.

Viirust saab määrata PCR-iga, kui seroloogilised testid annavad negatiivse tulemuse.

Ravi. Praegu puudub spetsiifiline ravi.

On täheldatud, et Zidovudine Accord’iga ravimisel paraneb paljudel kassidel kliiniline seisund ja immuunsüsteemi talitlus. Need ravimid on kallid ja võivad põhjustada olulisi kõrvaltoimeid, nagu aneemia. Kasutatakse ka immunomodulaatoreid, millel on kehale kasulik mõju.

Kliiniliselt ebaterveid ja nõrgenenud immuunsüsteemiga kasse ei tohi vaktsineerida.

Ärahoidmine. Vaktsiine pole. Vähendage kontakti kassidega väljaspool kodu. Dieedi järgimine, loomade puhtana hoidmine, hooldusvahendite desinfitseerimine ja pesakonna õigeaegne väljavahetamine kandikutel. Uute loomade ilmumisel on nõutav kohustuslik karantiini ja uue lemmiklooma arstlik läbivaatus.

Armasta oma lemmikloomi!

Bibliograafia:

• Gaskell, Bennett: Koerte ja kasside nakkushaiguste käsiraamat, Aquarium Print, 2015.
• Erinevad allikad Internetist

Alustuseks tahaksin teha kindlaks, mis on polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) meetodi tähendus praktilisest vaatenurgast, veterinaararsti seisukohalt. Mida täpselt peaks arst PCR-testi määrama, aru saama... Ma ei lasku PCR-iga seotud molekulaarsete mehhanismide puhtprofessionaalsetesse üksikasjadesse. Tahan lihtsalt, et loomaarst mõistaks selgelt: PCR-meetod on otsene ja sellise uuringu läbiviimisel eeldatakse, et kahtlustatava patogeeni nukleiinhapet (DNA või RNA) on võimalik eraldada kliinilisest materjalist, mis saadetakse laboris. See on peamine postulaat. Kuid vaatamata sellele postulaadile puutun väga sageli kokku arvamusega, millele ma helistan 1. müüt , et PCR abil saab verest tuvastada mis tahes haiguse patogeeni. Rangelt võttes ilmneb sel juhul veri universaalse uurimismaterjali kollektiivse kujutluspildina. Sageli tahavad nad, et me töötaksime kõigega ja kõige eest. See on kahjuks võimatu. Kuidas teha kindlaks, millist patogeeni saab PCR abil leida ja millist mitte? PCR-meetodil uurimiseks materjali valides peab arst ennekõike mõistma selle haiguse või haiguste patogeneesi, mille tekitajaid ta soovib avastada. Kui loomalt vajaliku materjali intravitaalne kogumine on võimatu, ei tohiks sellist diagnostikat määrata. Praegu on laborites saadaval palju diagnostilisi meetodeid, näiteks ensüümi immuunanalüüsi meetod. See meetod võimaldab teil määrata patogeeni vastaste antikehade olemasolu, nende kogust ja vastavalt teatud kriteeriumidele suure usaldusväärsusega haiguse seisundit. Suurema selguse huvides võime vaadata konkreetseid näiteid. Veel kord keskendume kasside koroonaviirusele ja eriti nakkuslikule peritoniidile. Kui viirus kassi soolestikus muteerub, omandab see afiinsuse monotsüütide suhtes. Monotsüütide nakatamisel siseneb viirus kassi vereringesse, see on vaieldamatu tõsiasi, kuid monotsüüt püsib vereringes vaid lühikest aega, tavaliselt umbes 3 päeva, ja seejärel peab ta läbima lõpliku diferentseerumise koe makrofaagiks. Seetõttu lahkub monotsüüt koos koroonaviirusega vereringest läbi veresoonte seinte koesse, kus see muutub makrofaagiks. On tõendeid selle kohta, et koroonaviirus stimuleerib ka monotsüütide kiirenenud diferentseerumist. Siit järeldub, et koroonaviirus elab looma perifeerses veres kahtlemata väga lühikest aega ja loomulikult on seda võimalik seal tuvastada, kuid see on väga haruldane leid ja vereanalüüsi diagnostiline väärtus PCR-meetodit kasutav koroonaviirus on null, kuna sellise uuringu negatiivne tulemus ei välista kahjuks koroonaviirusnakkuse esinemist. Samuti soovib arst mõnikord PCR abil leida verest koerte ja kasside parvoviirust. Võin eeldada, et sellise soovi aluseks on leukopeenia, mida täheldatakse panleukopeenia või parvoviiruse enteriidi korral. Tõenäoliselt usub keegi, et see leukopeenia on leukotsüütide hävitamise tagajärg viiruse poolt otse vereringesse. Mõelgem loogiliselt: parvoviirus on DNA-d sisaldav viirus ning edukaks paljunemiseks ja levikuks peab DNA-d sisaldav viirus integreeruma peremeesorganismi genoomi ja aktiivselt jagunevatesse rakkudesse, muidu kuidas viirus paljuneb? Kõik teavad, et leukotsüüdid tavaliselt veres ei jagune. Ja nende eelkäijad jagunevad luuüdis. Parvoviirus ründab luuüdi ja leukopeenia tuleneb luuüdi eellasrakkude hävimisest. Aktiivselt jagunevad rakud ka soolevilli rakud, kus parvoviirus edukalt paljuneb ning parim materjal parvoviirusnakkuse testimiseks on loomade väljaheited, mille kaudu viirus väliskeskkonnas levib. Üldjuhul kasutavad koroonaviirus ja parvoviirus verd ainult suhteliselt suhteliselt transpordivahendina, et saavutada lõplik lokaliseerimine ja väljuda vereringest üsna kiiresti. On viirusi, mis ei satu üldse vereringesse. Näited hõlmavad kalitsiviirust ja kasside herpesviirust. Nende viiruste replikatsioon piirdub kõige sagedamini orofarünksi ja ninaneelu lümfoidkoega. Kalitsiviirusnakkus võib tekkida süsteemselt, kuid need on üsna harvad ja rasked juhtumid.

Kuna me räägime viirusinfektsioonidest, siis tahaksin märkida, et PCR meetod on väga täpne ja väga spetsiifiline, kuid see viiruste, eriti RNA-d sisaldavate genoomi spetsiifilisus ja labiilsus võib tegelikkuses viia selleni, et PCR-meetodit kasutava uurimistöö spetsiifiline katsesüsteem suudab tuvastada ainult konkreetse viiruse konkreetse tüve või mitut tüve. Näitena vaatleme taas kasside kalitsiviirust, millel on tohutul hulgal väga erinevaid tüvesid, aga ka pidevalt avastatakse uusi isolaate. Seetõttu annab kalitsiviiruse PCR-diagnostika kahjuks palju valenegatiivseid tulemusi.

2. müüt

Kvantitatiivse PCR prioriteetne tähtsus võrreldes mittekvantitatiivsega

Müüt 3

“Inimeste” laboris saadud tulemuse tähtsus

Müüt 4

Kaubanduslaborid RNA-ga ei tööta

Müüt 5

PCR võib ja peaks olema odav

Müüt 6

Labor peab diagnoosi panema

Müüt 7

Kui PCR meetod ei kinnita ühtegi diferentsiaaldiagnoosi, siis on labor halb

Kokkuvõtteks kirjutan, et kahjuks jääb mulle sageli mulje mingist vastasseisust arstide ja labori vahel, vähemalt Venemaal. Arstid ei usalda laboreid, laborid peavad arste ebakompetentseks jne. Mulle tundub, et sellist vastasseisu ei tohiks olla: labor peaks alati arsti aitama ja selleks peab arst jagama oma töötajatele täielikku infot. Võin kindlalt öelda, et meie labor püüab aidata lahendada kõiki tekkivaid probleeme ning oleme alati valmis arutama kõik tekkinud ebaselged punktid ja arusaamatused.

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on molekulaardiagnostika meetod, millest on saanud paljude infektsioonide “kuldstandard”, mis on aja-testitud ja põhjalikult kliiniliselt testitud. Meetodi kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus võimaldavad usaldusväärselt tuvastada üksikuid patogeene bioloogilises materjalis nende geneetilise teabe põhjal. PCR-i analüütiline tundlikkus enamiku viiruste ja bakterite puhul on 1000 mikroorganismi 1 ml proovi kohta. PCR-i spetsiifilisus viirus-, klamüüdia-, mükoplasma- ja enamiku teiste bakteriaalsete infektsioonide suhtes ulatub 100% -ni.

PCR-meetod töötati välja suhteliselt hiljuti, kuid on nüüdseks võtnud juhtiva positsiooni nii nakkus- kui ka invasiivsete haiguste meditsiinilises ja veterinaarses laboratoorses diagnostikas. PCR põhiprintsiibid avastas 1983. aastal Ameerika keemik Carey B. Mullis, mille eest ta pälvis Nobeli preemia.

PCR-analüüs koosneb mitmest etapist. Esimene etapp – proovi ettevalmistamine – seisneb uuritava materjali töötlemises (suspensiooni valmistamine, tsentrifuugimine). Teises etapis eraldatakse rakkudest pärilik materjal - DNA või RNA. Sel juhul ladestatakse DNA või RNA pärast rakulüüsi ja DNA-valgu kompleksi hävitamist sorbendile ja kantakse seejärel elueerimispuhvrisse. Kolmandas etapis viiakse läbi amplifikatsioon, see tähendab, et spetsiifiliste DNA lõikude arv korrutatakse. Sel eesmärgil kasutatakse testsüsteeme, mis sisaldavad iga patogeeni jaoks spetsiifilisi praimereid - oligonukleotiide. Proovid ja kontrollid lisatakse mikrotuubidesse valatud PCR-i segule, mis asetatakse termotsüklerisse või termotsüklerisse - programmeeritavasse termostaati, millel on suur kiirus ja seatud temperatuuri täpsus. Amplifikatsiooniprotsess koosneb kolmest etapist: denatureerimine, lõõmutamine ja pikenemine. Kui kliinilistes proovides tuvastatakse RNA viirused, eelneb amplifikatsioonile pöördtranskriptsiooni etapp, mille käigus RNA muundatakse DNA-ks, kasutades ensüümi pöördtranskriptaasi ehk reversetaasi. PCR-i diagnostika neljas etapp koosneb PCR-produktide - amplikonide - elektroforeetilisest tuvastamisest. Sel juhul asetatakse PCR-produktid agaroosgeeli süvenditesse ja allutatakse pidevale elektrivoolule, mille tulemusena liigub negatiivselt laetud DNA molekul positiivse elektroodi poole. Geel sisaldab etiidiumbromiidi, mis, moodustades DNA-ga stabiilse kompleksi, muudab need ribad ultraviolettkiirguse all vaadatuna selgelt nähtavaks (joonis 1).

Riis. 1. PCR etapid

Tuleb märkida, et PCR-analüüsi usaldusväärse tulemuse saamiseks on vajalik tingimus kliinilise materjali valiku, säilitamise ja transportimise reeglite järgimine. Hoolimata asjaolust, et PCR on väga tundlik meetod, on soovitav, et proovis oleks teatud kogus patogeeni.

Materjali võtmine PCR-uuringute jaoks tuleb läbi viia ühekordselt kasutatavate mittetalgikinnastega (kuna talk inhibeerib PCR-i). Kraapide ja pesude võtmisel peaksite kasutama ühekordselt kasutatavaid steriilseid suurenenud adsorptsiooniga sonde (mille otsas on pintsel), kuna need valivad optimaalse materjali koguse.

Kraabid ja pesud nina, suuõõne, tupe, sidekesta limaskestadelt kogutakse need ühekordselt kasutatavatesse plastikust mikrotorudesse - Eppendorfi tuubidesse - mahuga 1,5 ml, millesse valatakse 0,5 ml steriilset soolalahust. Soovitatav on mitte kasutada puuvillase otsaga sonde. Samuti peaksite vältima sondi otsa murdmist soolalahuse torusse, kuna see raskendab edasist töötlemist ja suurendab proovide ristsaastumise ohtu. Vajaliku koguse materjali saamiseks piisab, kui prooviklaasis 1-2 minutit sondi pöörata, vältides vedeliku pritsimist. Proov peaks olema hägune ja settimisel peaks sellesse moodustuma väike sade.

Vere kogumine viiakse ühekordselt kasutatava nõelaga ühekordselt kasutatavasse süstlasse või klaasist katseklaasi ilma antikoagulandita. Süstlasse tõmmatud veri kantakse ettevaatlikult (ilma vahutamata) ühekordselt kasutatavasse klaastorusse. Vereproovide võtmiseks on võimalik kasutada vaakumsüsteeme (“Vacuette”). Uuringu jaoks võite anda vereseerumi: verega katsutid jäetakse 30 minutiks toatemperatuurile, kuni tromb on täielikult moodustunud, seejärel tsentrifuugitakse 10 minutit kiirusel 3000 p / min ja kantakse vähemalt 1 ml steriilsetesse Eppendorfi tuubidesse. 1,5 ml.

sperma kogutakse steriilsetesse ühekordselt kasutatavatesse tuubidesse või viaalidesse.

Uriin. Võtke esimene portsjon hommikust uriini koguses vähemalt 20-40 ml steriilsesse kuiva pudelisse või katseklaasi.

Väljaheited. 1-3 grammi kaaluvad proovid võetakse eelnevalt desinfitseeritud ja pestud aluselt ning kantakse ühekordselt kasutatavate spaatlitega steriilsesse pudelisse.

Mõjutatud elundite tükid surnud loomadelt kogutakse steriilsetesse ühekordsetesse anumatesse või puhtasse klaas- või plastanumatesse.

Valitud materjali ladustamiseks ja transportimiseks tuleb rangelt järgida temperatuuritingimusi. Transport toimub jahutuselementidega termokonteineris või jääga termoses. Kui materjali hoitakse üle päeva, tuleb see külmutada temperatuuril T miinus 20°C.

Kasside ja koerte levinumad haigused on konjunktiviit, rinotrahheiit ja enteriit. Haiguse etioloogia väljaselgitamiseks on vaja läbi viia kvaliteetne laboridiagnostika.

Kasside konjunktiviit või ülemiste hingamisteede infektsioonid võivad olla põhjustatud järgmiste mikroorganismidega nakatumisest: 1. tüüpi herpesviirus (FHV1), kasside kalitsiviirus, Chlamediapcittaci. Mycoplasma felis, Bordetella bronchiseptica, kasside reoviirus, Staphylococcus aureus, brohemolüütiline streptokokk ja Salmonella tephimurium.

Kõige levinum põhjus on erinevate autorite ja uurimismeetodite järgi FHY1 tüüpi herpesviirus (10% kuni 34%) ja kasside kalitsiviirus (20% kuni 53%). Chlamydia pcittaci (10% kuni 35%).

Herpesviiruse infektsioon, on seotud abortidega, vastsündinute kõrge suremusega (nakkus peaaegu 60% juhtudest) interstitsiaalse kopsupõletiku nähtudega.
Kalitsiviirus on kassipoegadel tõsine, samas kui 25–80% tervenenud täiskasvanud loomadest saavad selle kandjateks ja on nakkuse allikad, kandes viirust edasi sülje kaudu.

Panleukopeenia- kasside nakkav viirushaigus, mida iseloomustab leukotsüütide taseme järsk langus, gastroenteriit, riniit koos konjunktiviidiga, kõrge suremus (30–90% haigetest kassipoegadest).

Tõeline nuhtlus lasteaedadele on kasside nakkav peritoniit- raske haigus, mida põhjustab kõrge patogeensusega RNA viirus. Viirus replitseerub peensoole mandlites ja enterotsüütides, hajudes makrofaagide ja monotsüütide kaudu kogu kehas. Madala virulentsusega koroonaviirused põhjustavad mõõdukat enteriiti, kõige sagedamini kassipoegadel pärast võõrutamist. Väga virulentne koroonaviirus võib põhjustada kuiva või efusioonperitoniidi teket. Peritoniidiga kaasnevad sageli neerupuudulikkus, maksa- ja neuroloogilised sümptomid.

Kui nakatunud adenoviirused nii tüübid kui viirused koerte katk koertel on üldine sümptomite kompleks: palavik, konjunktiviit ja rinotrahheiit, seedetrakti häired ja närvisüsteemi kahjustused.

Kell lihasööjate katk Kliinilised nähud võivad hõlmata seromukoosset eritist ninast ja sidekestast, köha, hingeldust, kopsupõletikku, oksendamist ja kõhulahtisust, samuti palavikku ja hüperkeratoosi.

Lihasööja adenoviirus. Haigustekitajaks on DNA-d sisaldav 1. tüüpi (põhjustab lihasööjate nakkuslikku hepatiiti) ja 2. tüüpi (põhjustab koerte adenoviirust) lihasööja adenoviirus. Täheldatakse palavikku, apaatsust, isutust, janu, oksendamist ja kõhulahtisust ning kõhuseina hellust palpeerimisel. Mõnikord arenevad konjunktiviit, keratiit ja fotofoobia. Limaskestal ja nahal võib esineda täpseid hemorraagiaid. Harva täheldatakse neuroloogilisi häireid.

Kõik need haigused on kõrge nakkavuse indeksiga ja on seotud kõrge suremusega kutsikate seas, kui vaktsineerimata kutsikad on nakatunud koerte katku viirusesse, sureb 10-50% haigetest kutsikatest;

Toksoplasmoos. Haigusetekitajaks on algloom Toxoplasma gondii. Patogeen paljuneb kassidel soolestiku seintel. Nad vabastavad ootsüstid koos väljaheitega väliskeskkonda.

Kudede tsüstid võivad sõltuvalt kahjustatud organitest põhjustada anoreksiat, depressiooni, keratiiti, kollatõbe, oksendamist, kõhulahtisust ja neuroloogilisi sümptomeid. Koerte kliinilised sümptomid sõltuvad kahjustatud organitest: võib täheldada neuroloogilisi häireid (treemor, ataksia, halvatus) või toksoplasmoosi müosiiti (kõnnakuhäired, lihaste atroofia, jäikus), samuti müokardiiti ja hepatiiti.

Klamüüdia ja psittakoos. Patogeenid kassidel - Chlamydophila vilt, koertel - Chlamydophila abortus, Ch. pecorum, mõlemal juhul võib haigust põhjustada Ch. psittaci. Lindudel - Ch. psittaci.
Kassidel avaldub haigus peamiselt mädase ja mittemädase konjunktiviidi ja keratiidina, võib täheldada ka kopsupõletikku, tupepõletikku, aborti ja viljatust. Vastsündinute klamüüdia konjunktiviit esineb kassipoegadel. Koertel on sümptomid erinevad ja hõlmavad sidekesta, suguelundite põletikulisi haigusi, gastriiti, artriiti, aborti ja viljatust. On tõendeid klamüüdia rolli kohta koerte ateroskleroosi patogeneesis.

Mükoplasmoos. Patogeenid on perekonna Mycoplasma mikroorganismid. See esineb bronhopneumoonia, keratokonjunkteviidi ja keratiidi nähtudega.

Viru unine immuunpuudulikkus kassidel. Kasside immuunpuudulikkus on tõsine haigus, mille põhjustab viirus perekonnast Retrovoridae, perekonda Lentivirus. Viirus ründab immuun- ja närvisüsteemi. Omab tropismi T-lümfotsüütide suhtes. Immuunsupressiooni tulemusena muutub keha kaitsetuks bakterite, seente, viiruste vastu ja sureb sekundaarse infektsiooni tagajärjel.
Kliinilised nähud arenevad aeglaselt ja haigusest teatatakse kõige sagedamini 6–10-aastastel kassidel.

Koduloomadel leitakse ka selliseid haigusi nagu koerte leptospiroos, listerioos kassidel ja koertel, jersinioos kutsikal, brutselloos, rotaviiruslik enteriit ja marutaudi.

PCR analüüsi õigsus ja nakkuse kvaliteetne isoleerimine sõltub esiteks materjali õigest kogumisest ja teiseks proovide säilitamise ja transportimise temperatuuritingimustest kinnipidamisest. Laborisse saadud proov registreeritakse, läbib kõik PCR-i etapid, määratakse elektroforeetiliselt ja seejärel saadakse lõpptulemus.

Seega võimaldab PCR-meetodi kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus lühikese aja jooksul usaldusväärselt tuvastada bioloogilises materjalis üksikuid patogeene, mis võimaldab teha täpset diagnoosi, määrata adekvaatset ravi ja töötada välja ennetusmeetmed.

NEED. Donnik, Venemaa Põllumajandusteaduste Akadeemia korrespondentliige, bioloogiateaduste doktor, professor, N.A. Pelevina, nooremteadur, O.G. Bodrova, nooremteadur,
Venemaa Põllumajandusteaduste Akadeemia riiklik teadusasutus Uurali Riiklik Veterinaarinstituut