Pemeriksaan penderma. Ujian makmal imunohematologi Antigen (Ag) eritrosit

Jumlah protein darah 60-80 g/l. Terdapat beberapa pecahan protein yang melaksanakan fungsi tertentu.

1. Albumin (40-60 g/l) mempunyai aktiviti koloid-osmotik yang tinggi.

2. Globulin a, b, g (20-40 g/l) mencipta imuniti humoral, membentuk pelbagai antibodi yang dipanggil immunoglobulin (IgM, IgG).

3. Fibrinogen (2-4 g/l) adalah faktor utama dalam mekanisme pembekuan darah.

ANTIGEN(Greek ànti - melawan, genos - mencipta) - bahan yang mempunyai keupayaan untuk menyebabkan pembentukan antibodi dalam badan dan bertindak balas dengannya. Sebilangan polisakarida khusus - kompleks asid amino dengan sifat antigenik - dibina ke dalam membran eritrosit. Kompleks ini dipanggil aglutinogen.

Sehingga kini, lebih daripada 400 antigen yang dilokalkan dalam membran eritrosit telah ditemui dalam eritrosit manusia, 140 daripadanya digabungkan menjadi 20 sistem yang dikawal secara genetik. Antigen yang tinggal adalah biasa atau individu. Untuk amalan klinikal yang paling penting ialah sistem ABO dan sistem Rh (sistem Rh). Kumpulan Kell-Celano, Kidd, Lutheran, Duffy, Diego, dsb. juga dibezakan. Yang terakhir ini penting hanya dengan pemindahan darah yang kerap atau semasa kehamilan tidak serasi untuk salah satu daripada aglutinogen ini. Oleh itu, pemindahan darah berulang daripada penderma yang sama tidak digalakkan.

Antigen sel darah merah muncul pada bulan kedua perkembangan embrio, bagaimanapun, pada masa kanak-kanak itu dilahirkan, aktiviti aglutinasi mereka adalah rendah dan berjumlah 1/5 daripada aktiviti orang dewasa.

ANTIBODI- bahan yang bertindak balas dengan antigen. Antibodi semulajadi sentiasa ada dalam plasma darah dan tergolong dalam pecahan gamma globulin. Ini termasuk antibodi sistem ABO - agglutinin a dan b, yang muncul pada manusia pada bulan pertama selepas kelahiran dan mencapai kuantiti maksimum pada usia 5-10 tahun.

TINDAK BALAS PENGGULATAN- pelekatan dan pemendapan sel darah merah di bawah pengaruh antibodi tertentu - aglutinin. Adalah dipercayai bahawa molekul antibodi dengan dua pusat pengikatan membentuk jambatan antara dua sel darah merah. Setiap sel darah merah ini seterusnya berkomunikasi dengan sel darah merah yang lain dan akibatnya ia melekat bersama. Apabila transfusi darah yang tidak serasi aglutinasi membawa kepada hemolisis sel darah merah dan pembebasan faktor pembekuan. Gumpalan yang terhasil menyumbat saluran kecil dan dengan itu mengganggu peredaran kapilari.

Aglutinasi berlaku apabila aglutinogen dengan nama yang sama daripada penderma dan aglutinin daripada penerima bertemu.

Ujian untuk keserasian darah yang ditransfusikan

Doktor yang memindahkan darah bertanggungjawab untuk mencegah kemungkinan ketidakserasian dengan darah pesakit dengan menjalankan kajian kawalan, termasuk ujian keserasian untuk kumpulan darah ABO dan faktor Rh.

Ujian keserasian dilakukan sejurus sebelum pemindahan. Untuk melakukan ini, gunakan serum darah pesakit dan darah penderma dari vial yang disediakan untuk pemindahan.

“Sistem kumpulan darah manusia dan
komplikasi pemindahan darah", M.A. Umnova

Kumpulan darah ditentukan menggunakan tindak balas aglutinasi pada suhu bilik pada porselin atau plat putih lain dengan permukaan basah. Terdapat dua cara untuk menentukan kumpulan darah: menggunakan sera standard, yang memungkinkan untuk menentukan kumpulan aglutinogen (A atau B) yang berada dalam sel darah merah darah yang diuji; serentak menggunakan sera piawai dan eritrosit piawai (kaedah silang). Di mana…

2 titis serum pesakit, 1 titis darah penderma dan 1 titis larutan polyglucin 33%, yang disediakan khas untuk tujuan makmal, diletakkan di dalam tabung uji. Tabung uji digoncang untuk mencampurkan kandungan, kemudian dicondongkan hampir ke kedudukan mendatar supaya kandungan tumpah ke dindingnya, dan perlahan-lahan berputar selama 5 minit paksi menegak, bersentuhan dengan campuran serum pesakit...

Tindak balas hemagglutinasi dalam setiap titisan boleh positif atau negatif. Jika tindak balas adalah positif, biasanya dalam 10 - 30 s pertama dari permulaan pencampuran, butiran merah kecil (agglutinat) yang terdiri daripada sel darah merah terpaku, boleh dilihat dengan mata kasar, muncul dalam campuran. Aglutinat kecil secara beransur-ansur bergabung menjadi lebih besar, dan kadangkala menjadi kepingan bentuk tidak teratur. Pada masa yang sama, serum sepenuhnya...

Darah penderma mesti dibasuh dua kali dalam tabung uji dengan jumlah 8 - 10 kali ganda larutan isotonik natrium klorida melalui sentrifugasi, kemudian keluarkannya dan gunakan sedimen eritrosit yang telah dibasuh untuk penyelidikan. Satu titis kecil (0.01 ml) sel darah merah yang telah dibasuh dipindahkan ke tabung uji yang lain, 3 titis serum pesakit ditambah kepadanya, dicampur dengan sel darah merah penderma dan tabung uji diletakkan di...

I. Di bawah penetapan pra-dibuat, satu titisan besar (0.1 ml) sera piawai kumpulan 0αβ(I), Aβ(II) dan Bα(III) digunakan pada plat. Oleh kerana sera standard daripada dua siri berbeza bagi setiap kumpulan digunakan, sejumlah 6 titis diperoleh, yang membentuk dua baris 3 titis dalam susunan berikut dari kiri ke kanan: 0αβ(I), Aβ(II) dan Bα(III ). II. Di bahagian bawah rekod...

Tafsiran keputusan dijalankan dengan menilai dan membandingkan keputusan yang diperoleh menggunakan sera piawai (dua baris atas) dan menggunakan eritrosit piawai (baris bawah). Keputusan tindak balas yang diperoleh menggunakan sera standard II eritrosit standard mesti sepadan, iaitu, menunjukkan kandungan aglutinogen dan aglutinin yang sepadan dengan kumpulan darah yang sama. Keputusan ini boleh dinyatakan...

Untuk menentukan status Rh, iaitu, untuk mengesan kehadiran atau ketiadaan antigen sistem Rh dalam darah manusia, sera (reagen) anti-Rh standard digunakan, berbeza dalam kekhususan, iaitu, mengandungi antibodi kepada pelbagai antigen sistem ini. Untuk menentukan antigen Rh0(D), serum anti-Rhesus paling kerap digunakan dengan penambahan larutan gelatin 10%, atau reagen anti-Rhesus standard yang disediakan terlebih dahulu digunakan...

I. Satu titis (0.05 ml) sel darah merah yang sedang diuji dan 2 titis larutan gelatin 10%, dipanaskan untuk mencairkan air suam(46 - 48 °C). II. Dalam salah satu tabung uji ini, tambahkan 2 titis serum anti-Rh kepada campuran sel darah merah dan gelatin. Serum ini tidak ditambah ke dalam tabung uji lain; ia berfungsi sebagai kawalan...

Tiub diperiksa dengan mata kasar atau melalui kaca pembesar dengan pembesaran 2x. Hasilnya ditafsirkan bergantung pada kehadiran atau ketiadaan aglutinasi sel darah merah. Jika hasilnya positif, aglutinat mudah dibezakan dalam bentuk butiran merah atau kepingan pada latar belakang cecair yang telus dan hampir berubah warna. Jika keputusannya negatif, tabung uji menunjukkan warna yang seragam warna merah jambu, cecair sedikit opalescent. Sampel...

I. Satu titis (0.05 ml) darah ujian atau eritrosit dimasukkan ke dalam tabung uji (anda tidak perlu membasuhnya daripada bahan pengawet), tambah 1 - 2 titis reagen anti-Rhesus universal standard dan campurkan eritrosit dengan reagen dengan menggoncang tiub. II. Tabung uji dicondongkan hampir ke kedudukan mendatar supaya kandungan merebak ke dindingnya, dan kemudian perlahan-lahan diputar dalam kedudukan ini...

Pemilihan penderma dijalankan mengikut kriteria perubatan seragam, yang memastikan tidak berbahaya, aktiviti tinggi dan keberkesanan darah dan komponennya.

Sebelum menderma darah, setiap penderma menjalani pemeriksaan: anamnesis diambil, pemeriksaan perubatan menyeluruh dijalankan dan peperiksaan khas untuk mengenal pasti kontraindikasi untuk menderma darah dan mengecualikan kemungkinan menghantar patogen penyakit berjangkit dengan darah. Menjalankan pemeriksaan serologi, virologi dan bakteriologi darah penderma.

Kemajuan dalam transfusiologi klinikal mengurangkan risiko penghantaran patogen penyakit berjangkit (jangkitan HIV, hepatitis B dan C, sifilis, jangkitan sitomegalovirus, dll.) dengan darah dan komponennya.

Sistem darah antigen utama

Telah ditetapkan bahawa struktur antigen darah manusia adalah kompleks; semua unsur terbentuk darah dan protein plasma orang yang berbeza berbeza dalam antigen. Kira-kira 500 antigen darah sudah diketahui, membentuk lebih daripada 40 sistem antigen yang berbeza.

Sistem antigen difahamkan sebagai satu set antigen darah yang diwarisi (dikawal) oleh gen alel.

Semua antigen darah dibahagikan kepada selular dan plasma. Antigen selular adalah kepentingan utama dalam transfusiologi.

Antigen selular

Antigen selular ialah kompleks karbohidrat-protein (glikopeptida), komponen struktur membran sel darah. Daripada komponen lain membran sel mereka dibezakan oleh imunogenik dan aktiviti serologi mereka.

Imunogenisiti - keupayaan antigen untuk mendorong sintesis antibodi jika ia memasuki organisma yang tidak mempunyai antigen ini.

Aktiviti serologi - keupayaan antigen untuk bergabung dengan antibodi dengan nama yang sama.

Molekul antigen selular terdiri daripada dua komponen:

Schlepper (bahagian protein antigen yang terletak di lapisan dalam membran), yang menentukan imunogenik;

Hapten (bahagian polisakarida antigen yang terletak di lapisan permukaan membran sel), yang menentukan aktiviti serologi.

Di permukaan hapten terdapat penentu antigen (epitope) - molekul karbohidrat yang melekat pada antibodi. Antigen darah yang diketahui berbeza antara satu sama lain dalam epitop.

Sebagai contoh, hapten antigen sistem AB0 mempunyai set karbohidrat berikut: epitop antigen 0 ialah fukosa, epitop antigen A ialah N-acetylgalactosamine, dan epitop antigen B ialah galaktosa. Antibodi kumpulan mengikat mereka.

Terdapat tiga jenis antigen selular:

Eritrosit;

Leukosit;

Platelet.

Antigen sel darah merah

Lebih daripada 250 antigen eritrosit diketahui, membentuk lebih 20 sistem antigen. 11 sistem mempunyai kepentingan klinikal: AB0, Rhesus (Rh-Hr), MNSs, Kell, Lutheran, Kidd, Diego, Duffy, Dombrock, kumpulan enzim eritrosit .

Pada manusia, antigen beberapa sistem antigen hadir serentak dalam sel darah merah.

Sistem antigen AB0 dan Rhesus diiktiraf sebagai yang utama dalam transfusiologi. Sistem antigen eritrosit lain pada masa ini tidak begitu penting dalam transfusiologi klinikal.

Sistem antigen AB0

Sistem AB0 adalah sistem serologi utama yang menentukan keserasian atau ketidakserasian darah yang ditransfusikan. Ia terdiri daripada dua aglutinogen yang ditentukan secara genetik (antigen A dan B) dan dua aglutinin (antibodi α dan β).

Aglutinogen A dan B terdapat dalam stroma eritrosit, dan aglutinin α dan β ditemui dalam serum darah. Aglutinin α ialah antibodi terhadap agglutinogen A, dan agglutinin β terhadap aglutinogen B. Tidak boleh ada aglutinogen dan aglutinin dengan nama yang sama dalam sel darah merah dan serum darah seseorang. Apabila antigen dan antibodi dengan nama yang sama bertemu, tindak balas isohemagglutinasi berlaku. Tindak balas inilah yang menyebabkan ketidakserasian darah semasa pemindahan darah.

Bergantung pada gabungan antigen A dan B dalam eritrosit (dan, oleh itu, antibodi α dan β dalam serum), semua orang dibahagikan kepada empat kumpulan.

Sistem antigen Rhesus

Faktor Rh (faktor Rh), dinamakan demikian kerana ia pertama kali ditemui dalam monyet rhesus, terdapat dalam 85% orang dan tidak hadir dalam 15%.

Pada masa ini diketahui bahawa sistem Rhesus agak kompleks dan diwakili oleh lima antigen. Peranan faktor Rh semasa pemindahan darah, serta semasa kehamilan, adalah sangat penting. Ralat yang membawa kepada perkembangan punca konflik Rh komplikasi teruk, dan kadangkala kematian pesakit.

Sistem antigenik kecil

Sistem kumpulan eritrosit kecil diwakili oleh sejumlah besar antigen. Pengetahuan tentang pelbagai sistem ini penting untuk menyelesaikan isu-isu tertentu dalam antropologi, penyelidikan forensik, serta untuk mencegah perkembangan komplikasi selepas pemindahan dan penyakit tertentu pada bayi baru lahir.

sistem MNS termasuk faktor M, N, S, s. Kehadiran dua lokus gen yang berkait rapat, MN dan Ss, telah terbukti. Selepas itu, pelbagai variasi antigen sistem MNS yang lain telah dikenalpasti. Mengikut struktur kimia, MNS adalah glikoprotein.

Sistem R. Sistem antigen P mempunyai kepentingan klinikal tertentu. Terdapat kes keguguran awal dan lewat yang disebabkan oleh isoantibodi anti-R. Beberapa kes komplikasi pasca transfusi yang berkaitan dengan ketidakserasian penderma dan penerima mengikut sistem antigen P telah diterangkan.

sistem Kell diwakili oleh tiga pasang antigen. Antigen Kell (K) dan Cellano (k) mempunyai aktiviti imunogenik yang paling hebat. Antigen sistem Kell boleh menyebabkan pemekaan badan semasa mengandung dan semasa pemindahan darah, menyebabkan komplikasi pemindahan darah dan perkembangan penyakit hemolitik bayi yang baru lahir.

sistem Lutheran. Salah seorang penderma, bernama Lutheran, mempunyai beberapa antigen yang tidak diketahui sebelum ini dalam sel darah merahnya, yang membawa kepada imunisasi penerima. Antigen telah ditetapkan oleh huruf Lu a. Beberapa tahun kemudian, antigen kedua sistem ini, Lu b, ditemui. Kekerapan mereka: Lu a - 0.1%, Lu b - 99.9%. Antibodi Anti-Lu b adalah isoimun, yang disahkan oleh laporan tentang kepentingan antibodi ini dalam asal penyakit hemolitik bayi baru lahir. Kepentingan klinikal antigen sistem Lutheran adalah kecil.

Sistem kanak-kanak. Antigen dan antibodi sistem Kidd mempunyai yang tertentu kepentingan praktikal. Mereka boleh menyebabkan perkembangan penyakit hemolitik bayi baru lahir dan komplikasi selepas pemindahan darah dengan pelbagai pemindahan darah yang tidak serasi dengan antigen sistem ini. Kekerapan antigen adalah kira-kira 75%.

sistem Diego. Pada tahun 1953, di Venezuela, seorang kanak-kanak dilahirkan dalam keluarga Diego dengan tanda-tanda penyakit hemolitik. Apabila menentukan punca penyakit ini, antigen yang tidak diketahui sebelum ini, yang ditetapkan faktor Diego (Di), ditemui pada kanak-kanak itu. Pada tahun 1955, penyelidikan mendedahkan bahawa antigen Diego adalah ciri-ciri perkauman bagi orang-orang bangsa Mongoloid.

Sistem Duffy terdiri daripada dua antigen utama - Fy a dan Fy b. Antibodi Anti-Fy a ialah antibodi yang tidak lengkap; ia menunjukkan kesannya hanya dalam ujian Coombs antiglobulin tidak langsung. Kemudian, antigen Fy x, Fy 3, Fy 4, Fy 5 ditemui. Kekerapan bergantung kepada bangsa orang itu, yang mempunyai sangat penting untuk ahli antropologi. Dalam populasi Negroid, kekerapan faktor Fy a ialah 25%, di kalangan penduduk Cina, Eskimo dan orang asli Australia - hampir 100%, di kalangan orang Kaukasia - 60-82%.

Sistem Dombrok. Pada tahun 1973, antigen Do a dan Do b telah dikenalpasti. Faktor Do a didapati dalam 55-60% kes, dan faktor Do b - dalam 85-90%. Kekerapan ini meletakkan sistem darah serologi ini di tempat kelima dari segi kandungan maklumat dalam aspek penentuan forensik paterniti (sistem Rhesus, MNSs, AB0 dan Duffy).

Kumpulan enzim eritrosit. Sejak tahun 1963, sejumlah besar sistem enzim polimorfik genetik eritrosit manusia telah diketahui. Penemuan ini memainkan peranan penting dalam pembangunan serologi umum kumpulan darah manusia, serta dalam aspek pemeriksaan forensik paterniti yang dipertikaikan. Sistem enzim eritrosit termasuk glukomutase fosfat, adenosin deaminase, transaminase glutamat-piruvat, esterase-D, dsb.

Pada peringkat sekarang, adalah mungkin untuk membuktikannya penyakit hemolitik janin dan bayi baru lahir adalah sejenis sitopenia alloimun yang disebabkan oleh imunisasi ibu dengan sel darah janin membawa antigen pada membran mereka yang tiada pada wanita hamil. Proses ini boleh disebabkan oleh pelbagai antigen yang terletak pada membran eritrosit dan sel darah lain (platelet, neutrofil) janin, yang masuk secara transplacental ke dalam aliran darah ibu dan menyebabkan pembentukan antibodi dalam dirinya. Erythropenia alloimun yang paling biasa diperhatikan adalah disebabkan oleh ketidakserasian darah janin dan ibu berkenaan dengan antigen sistem ABO dan Rhesus.

Sifat anemia yang berkembang pada janin (hemolitik, aplastik) bergantung kepada antigen atau antigen yang menyebabkannya. Lebih-lebih lagi, pada janin dengan erythropenia dari pelbagai asal usul, serupa manifestasi klinikal penyakit yang boleh diakses oleh kaedah pengesahan bukan invasif dan invasif.

Erythropenia alloimun, termasuk penyakit hemolitik janin / bayi baru lahir (HDFN) adalah penyakit yang dicirikan oleh hemolisis eritrosit dan/atau perencatan hematopoiesis di bawah pengaruh antibodi yang terbentuk pada ibu terhadap antigen eritrosit janin, yang saling menembusi halangan plasenta, yang ditunjukkan. pada janin/baru lahir akibat anemia , peningkatan dalam bentuk letupan sel darah merah dan, selalunya, bilirubin dalam darah.

Oleh kerana perbezaan dalam darah ibu dan janin dalam antigen eritrosit adalah kepentingan utama dalam patogenesis penyakit, adalah perlu untuk mempertimbangkan ciri imunohematologi mereka.

Pada peringkat perkembangan imunohematologi sekarang, lebih daripada 250 antigen eritrosit diketahui, yang biasanya diedarkan kepada 29 secara genetik. sistem bebas. Setiap sistem dikodkan oleh satu atau lebih gen. Antigen sel darah merah ialah protein (contohnya, sistem Rhesus), glikoprotein atau glikolipid (sistem ABO).

Dari tahun 1980 hingga hari ini, Persatuan Transfusi Darah Antarabangsa (ISBT) terus mengusahakan klasifikasi yang diketahui Sains Perubatan antigen eritrosit. Menurut tatanama yang digunakan pada masa ini, semua antigen eritrosit dibahagikan kepada sistem, koleksi dan siri.

Jadual 1 membentangkan senarai 29 sistem antigen eritrosit yang diketahui, bersatu di dalamnya mengikut prinsip kehadiran gen biasa yang mengekod produk mereka. Sistem antigen biasanya ditetapkan mengikut urutan penemuannya dengan nombor tiga digit dalam susunan menaik, bermula dengan 001. Dalam sistem, setiap antigen juga mempunyai nombor tiga digit. Oleh itu, setiap antigen biasanya ditetapkan dengan nombor enam digit.

Koleksi menggabungkan antigen yang berkaitan secara biokimia dan serologi pada tahap fenotip, tetapi tidak mempunyai gen biasa yang mengekod produk mereka, dan oleh itu tidak memenuhi keperluan untuk sistem antigen.

Antigen yang mana gen yang mengekodnya belum dikaji digabungkan siri daripada dua kumpulan – dengan rendah dan berfrekuensi tinggi kejadian.

Alloantigen sel darah merah konvensional dibahagikan kepada antigen biasa antigen kekerapan purata kejadian Dan jarang antigen. Antigen yang biasa ditemui ditemui pada hampir semua orang, jadi antibodi terhadap antigen tersebut jarang terbentuk. Walau bagaimanapun, jika perlu melakukan pemindahan darah pada pesakit dengan antibodi terhadap antigen yang biasa ditemui, sebagai peraturan, kesukaran timbul dalam memilih penderma. Jika antigen adalah biasa dengan kekerapan kurang daripada 1%, maka ia dikelaskan sebagai antigen yang jarang berlaku.

Jadual 1

Sistem antigen sel darah merah

Pada pesakit dengan isoimunisasi kepada antigen yang jarang berlaku, dalam kebanyakan kes, kesukaran timbul semasa menjalankan pemeriksaan imunohematologi untuk mengesahkan antibodi, kerana proses ini memerlukan kajian yang panjang dan mahal menggunakan sejumlah besar sampel dan sistem ujian.

Kerana secara klinikal bentuk yang bermakna penyakit hemolitik terutamanya disebabkan oleh antibodi yang terbentuk kepada antigen sistem Rhesus, kita harus memberi tumpuan kepada klasifikasi yang dicadangkan untuk antigen sistem ini. Terdapat beberapa klasifikasi sedemikian. Salah satunya ialah Klasifikasi Wiener antigen Rh. Ia berdasarkan andaian bahawa hanya terdapat satu tempat pada kromosom Rh yang boleh diduduki oleh satu daripada lapan gen allelomorphic. Setiap gen mengekodkan penghasilan aglutinogen, yang merupakan kompleks antigen. Penamaan antigen Wiener adalah kompleks dan pada masa ini tidak digunakan secara meluas dalam imunohematologi. Walau bagaimanapun, adalah kebiasaan untuk menetapkan kekhususan antibodi dalam imunoglobulin anti-Rhesus - "Rho (D)".

Disyorkan untuk digunakan oleh Jawatankuasa Pakar WHO mengenai Piawaian Biologi Klasifikasi antigen Rh Fischer-Reiss. Ia berdasarkan andaian bahawa terdapat tiga tapak untuk tiga gen pada kromosom Rh. Selain itu, setiap kompleks gen terdiri daripada tiga penentu antigen: D atau ketiadaannya - d, C atau c, E atau e dalam pelbagai kombinasi.

Dalam penyelidikan beberapa tahun kebelakangan ini Telah ditunjukkan bahawa hanya terdapat dua gen (RHD Dan RHCE), bertanggungjawab untuk pengeluaran antigen eritrosit sistem Rh. Oleh itu, penghasilan antigen D dikawal oleh gen R.H.D. manakala antigen C, c, E, e – genom RHCE. Di mana sejumlah besar antigen yang membentuk sistem Rhesus (48 antigen) dijelaskan oleh mutasi dalam kedua-dua gen ini. Tiada data tentang kehadiran antigen d, kerana tiada gen yang bertanggungjawab untuk sintesis antigen ini.

Penyakit hemolitik janin dan bayi baru lahir boleh disebabkan oleh antigen sistem Rhesus selain D, serta antigen lain yang dipanggil "tidak teratur" sistem lain atau gabungan beberapa antigen satu sistem. Dalam kes ini, istilah "aloimunisasi erythrocyte" paling kerap digunakan dalam kesusasteraan untuk mencirikan proses alloimun.

Ia adalah alloimunisasi antigen eritrosit yang merupakan punca utama perkembangan sindrom anemia pada janin. Oleh itu, menurut Pusat Kawalan dan Pencegahan Penyakit AS (tahun), walaupun program imunoprofilaksis dilaksanakan, pemekaan Rh berlaku dalam 6.7 kes setiap 1000 kelahiran hidup. Jika kita menambah kepada kes-kes ini perkembangan alloimunisasi di bawah pengaruh antigen eritrosit kumpulan lain (Kell, Kidd, Duffy), maka lebih daripada 30,000 janin didaftarkan setiap tahun di Amerika Syarikat berisiko mengalami anemia alloimun. Malangnya, perangkaan berskala penuh seperti itu pada Persekutuan Russia masih belum tersedia kerana pelaksanaan ujian imunohematologi terperinci pesakit yang berisiko tidak mencukupi.

Oleh itu, untuk menilai dengan secukupnya kehadiran isoimunisasi, adalah perlu, pertama sekali, untuk mencari dan mengenal pasti antibodi eritrosit yang beredar dalam darah wanita hamil.

Peranan antigen eritrosit dalam kejadian penyakit hemolitik janin dan bayi baru lahir adalah berbeza dan ditentukan oleh keupayaan alloantibodies yang terbentuk kepada kelas antigen tertentu untuk memusnahkan eritrosit atau mengganggu proses pembentukannya dalam janin. Proses pembentukan antibodi imun terhadap antigen sel darah merah janin bergantung kepada kehadiran antigen yang tiada pada ibu, imunogenisitasnya, serta bilangan sel darah merah janin yang memasuki aliran darah wanita hamil.

Antibodi kepada antigen eritrosit (alloantibodi) adalah semula jadi (biasa) dan imun (tidak teratur). Oleh itu, dalam serum darah orang (kecuali individu dengan kumpulan darah AB), antibodi semula jadi semula jadi kepada antigen A dan/atau B sistem ABO, yang terdiri daripada empat antigen, sentiasa ada.

Penyakit pada janin dan, seterusnya, pada bayi baru lahir disebabkan oleh ketidakserasian sel darah merah ibu dan janin mengikut sistem antigen ABO dalam 10-20% daripada semua kes. Lebih-lebih lagi, penyakit hemolitik janin/baru lahir berkembang 40 kali lebih kerap pada wanita dengan kumpulan darah 0 (I) dan pasangan dengan kumpulan darah yang berbeza. Walau bagaimanapun, apabila jenis isoimunisasi ini berlaku bentuk yang teruk Penyakit pada janin dan bayi baru lahir hanya diperhatikan dalam kes terpencil - 1:3000 kelahiran.

Kaedah aglutinasi gel untuk penentuan antigen eritrosit dan antibodi anti-eritrosit

pengenalan

Teknologi gel dalam microtubes (GTM) telah dicadangkan oleh Y. Lapierre pada tahun 1989. Kaedah ini adalah berdasarkan penggumpalan sel darah merah dalam gel agar Sephadex yang diletakkan di dalam microtubes. Lazimnya, sistem ini terdiri daripada kad plastik yang mengandungi tiub mikro yang diisi dengan gel (paten DiaMed AG, Switzerland). Kajian imunohematologi berdasarkan tindak balas hemagglutinasi biasanya dijalankan dalam sistem fasa cecair.

Salah satu yang paling syarat penting Mendapatkan data yang betul untuk tindak balas aglutinasi adalah untuk menilai hasilnya. Respons yang lemah mungkin disalahtafsirkan, terutamanya oleh kakitangan yang tidak berpengalaman. Keputusan lemah atau negatif palsu bagi ujian antiglobulin tidak langsung boleh berlaku disebabkan peneutralan reagen antiglobulin oleh kesan serum akibat pencucian sel darah merah yang tidak mencukupi. Pencampuran sel darah merah yang tidak mencukupi dan elusi antibodi terfiksasi lemah semasa proses pencucian boleh menyebabkan ralat semasa melakukan ujian antiglobulin tidak langsung.

Teknik aglutinasi gel telah dibangunkan untuk menyeragamkan tindak balas hemagglutinasi dan mendapatkan keputusan yang boleh dipercayai. Teknologi gel melibatkan pengasingan sel darah merah dengan sentrifugasi, dengan sel darah merah tidak beraglutinasi melalui gel dan mendap di bahagian bawah tiub ( hasil negatif), manakala yang beraglutinasi kekal di permukaan atau dalam ketebalan gel ( hasil positif). Sentrifugasi gel boleh menjadi fasa akhir mana-mana ujian serologi berdasarkan tindak balas hemagglutinasi, kecuali kaedah yang memerlukan penyebaran untuk menilai hasilnya.

Pelbagai ujian yang dilakukan termasuk penentuan fenotip sel darah merah (termasuk varian antigen lemah), ujian antiglobulin, pemeriksaan dan pengenalpastian antibodi, ujian keserasian dan beberapa lagi.

Prinsip ujian gel

Gel dekstran penimbal Sephadex TM G 100 superline boleh sama ada neutral atau mengandungi antisera khusus atau reagen antiglobulin pada matriks gel. Sel darah merah atau campuran sel darah merah dan serum digunakan pada gel. Sel-sel sentiasa ditambah sebelum sera - tidak seperti teknik serologi standard - supaya sera ujian tidak bersentuhan dengan gel, yang sangat penting apabila melakukan ujian antiglobulin. Selepas pengeraman, sentrifugasi mengikut mod yang ditetapkan dengan ketat. Jika syarat sentrifugasi tidak dipenuhi (emparan tidak cukup lama atau terlalu lembut), keputusan positif palsu mungkin berlaku. Keputusan negatif palsu juga boleh berlaku jika keadaan sentrifugasi dilanggar (terpaksa). Menggunakan emparan ID automatik (DiaMed) menghapuskan masalah ini. Tiga jenis gel biasanya digunakan untuk ujian:

1. neutral, tidak mengandungi antibodi khusus (digunakan untuk mencari dan mengenal pasti antibodi menggunakan kaedah garam dan enzim, ujian peringkat sejuk untuk keserasian darah penderma dan penerima);
2. spesifik, mengandungi antibodi (monoklonal atau poliklonal) kepada antigen eritrosit manusia (digunakan untuk menaip antigen eritrosit sistem ABO, Rhesus, Kell, dll.)
3. antiglobulin, yang mengandungi antibodi (polispesifik atau monospesifik) kepada imunoglobulin manusia dan komponen sistem pelengkap (digunakan untuk ujian antiglobulin langsung dan tidak langsung (ujian Coombs) dalam mencari dan mengenal pasti antibodi auto dan alloimun, ujian untuk keserasian darah penderma dan penerima).

Darah yang akan diuji ditambah bahagian atas mikrotiub kad diagnostik, dan semasa sentrifugasi, eritrosit beraglutinasi dan tidak beragglutinasi diasingkan seperti berikut: eritrosit tidak beragglutinasi mempunyai saiz yang setanding dengan saiz zarah gel dan bebas melaluinya di bawah pengaruh daya emparan, membentuk merah padat sedimen di bahagian bawah tiub mikro - hasil negatif; kerana saiznya yang besar, sel darah merah terkumpul dikekalkan pada permukaan gel atau dalam ketebalannya - hasil yang positif.

Aglutinasi tetap dalam gel memudahkan untuk menilai hasil tindak balas, dan kehadiran mikrotiub kawalan dalam kad diagnostik mengesahkan kebolehpercayaan data yang diperoleh.

Bergantung kepada kekuatan tindak balas aglutinasi dalam medium gel, penilaian berikut terhadap keputusan yang diperolehi diterima:

• sangat positif (++++) - aglutinat eritrosit yang terbentuk berlarutan pada permukaan gel;
• positif (+++) - aglutinat terletak di bahagian atas sepertiga lajur gel;
• lemah positif (++) - aglutinat ditetapkan dalam dua pertiga atas gel;
• sangat lemah positif (+) - aglutinat terletak di sepertiga bawah gel;
• negatif (-) - sel darah merah membentuk sedimen padat di bahagian bawah tiub mikro.

Peralatan dan reagen

• Kad ID untuk menentukan antigen eritrosit dan antibodi anti-eritrosit;
• Empar ID untuk kad sentrifugasi;
• termostat pada +37°C;
• rak untuk tabung uji dan kad;
• tabung uji dengan kapasiti 5 dan 10 ml;
• pipet saluran tunggal separa automatik (10, 25, 50 µl);
• sarung tangan pembedahan getah;
• larutan pencairan 1 (larutan bromelain);
• larutan pencairan 2 (larutan kekuatan ionik rendah - LISS, RNIS);
• 0.9% larutan natrium klorida;
• sel darah merah manusia ditaip standard untuk pengesanan antibodi dan tindak balas silang.

Ciri-ciri kad pengenalan

Kad pengenalan (kad pengenalan) Dia-Med ialah kad plastik dengan enam tiub mikro terbina di dalamnya. Lima tiub mengandungi campuran gel dan antisera. Setiap kad mempunyai tiub kawalan keenam yang mengandungi gel neutral tanpa antibodi (ctl). Pelabelan tiub dalam kad ID dijalankan mengikut antigen yang boleh dikesan, contohnya: A-B-AB-D-CDE-ctl atau C-c-E-e-K-ctl. Kad pengenalan untuk mengesan antibodi kepada antigen eritrosit mempunyai beberapa perbezaan, contohnya, kad "Coombs / Enzyme Test": tiga tiub yang terletak di sebelah kiri mengandungi gel yang mengandungi antibodi kepada globulin manusia (anti-IgD monospesifik atau polyspecific - kepada imunoglobulin pelbagai kelas ) - Tindak balas Coombs. Tiga tiub seterusnya hanya mengandungi gel neutral yang direka untuk mengesan antibodi kepada antigen sel darah merah dalam persekitaran salin.

Peraturan am untuk menggunakan kad pengenalan

1. Kad pengenalan hendaklah disimpan di tempat yang kering, terlindung daripada cahaya, pada suhu 18-25°C. Tarikh tamat tempoh ditunjukkan dalam bahagian pasport setiap kad dan pada kotak pembungkusan.
2. Penyelesaian untuk menyediakan penggantungan sel darah merah, serta sera standard dan sel darah merah ID standard yang digunakan dalam kajian individu, hendaklah disimpan di tempat yang kering, terlindung daripada cahaya, pada suhu 2-8°C. Tarikh luput ditunjukkan pada label setiap botol dan kotak pembungkusan.
3. Untuk mengelak daripada menerima keputusan palsu penyelidikan, adalah dilarang untuk menggunakan mana-mana reagen dan kad yang telah tamat tempoh, serta yang telah kering, mengandungi gelembung gas, atau telah rosak cengkerang.
4. Pengumpulan darah dijalankan menggunakan teknik phlebotomy moden, dan darah arteri, kapilari dan tali pusat (tanpa mencuci) juga sesuai. Kedua-dua sampel darah keseluruhan (diambil dalam tiub yang bersih dan kering) dan sampel darah yang diambil dengan bahan pengawet dan penstabil adalah sesuai untuk penyelidikan.

Menaip antigen eritrosit

Kad ID DiaMed bertujuan untuk penentuan serentak kumpulan darah mengikut sistem ABO dan gabungan Rh eritrosit penderma dan penerima (termasuk varian antigen mereka yang lemah), serta untuk menaip antigen eritrosit lain. Kad ID DiaMed boleh digunakan sebagai ganti atau selari dengan sera isohemagglutinating, anti-D, reagen anti-DCE, anti-A, anti-B, anti-D dan anti-D Super coliclones.

• [tunjukkan] .

  Peringkat awal dilakukan secara berbeza, bergantung pada jenis kad ID yang digunakan, mengandungi antibodi poliklonal (lihat titik 1a di bawah) atau antibodi monoklonal (lihat titik 16):

  1a) Sediakan penggantungan ujian sel darah merah dalam larutan untuk mencairkan kad ICID yang mengandungi antibodi poliklonal) yang mana:

  • simpan Larutan Pencairan 1 sehingga mencapai suhu bilik;
  • sediakan penggantungan 5% sel darah merah ujian dalam Larutan Pencairan 1 dengan meletakkan 0.5 ml Larutan Pencairan 1 dan 50 μl darah keseluruhan ujian atau 25 μl sel darah merah ke dalam tabung uji;
  • campurkan perlahan-lahan dan eramkan selama 10 minit pada suhu bilik;
  • Gunakan tidak lewat daripada 15 minit selepas pengeraman.

  16) Sediakan penggantungan ujian sel darah merah dalam Penyelesaian Pencairan 2 (kad ID yang mengandungi antibodi monoklonal) yang mana:

  • simpan Larutan Pencairan 2 sehingga mencapai suhu bilik;
  • labelkan tabung uji bersih;
  • sediakan 5% penggantungan sel darah merah ujian dalam Larutan Pencairan 2 dengan meletakkan 0.5 ml Larutan Pencairan 1 dan 50 μl darah keseluruhan ujian atau 25 μl sel darah merah ke dalam tabung uji.
• Tindakan selanjutnya [tunjukkan] .
  1. Labelkan kad pengenalan (N sampel serum yang sedang diuji atau nama penuh pesakit).
  2. Keluarkan kerajang pelindung daripada tiub kad ID.
  3. Tambah 10 μl sel darah merah ujian, disediakan mengikut klausa 1a, atau 50 μl sel darah merah ujian, disediakan mengikut klausa 16, ke dalam setiap tiub kad ID.
  4. Pasang kad ID ke dalam pemutar emparan ID (dengan pengimbangan wajib dengan kad ID lain, mungkin yang tidak digunakan).
  5. Kad ID emparan (masa dan kelajuan sentrifugasi adalah malar dan ditetapkan secara automatik).
  6. Nilaikan hasil kajian: Keputusan dalam tiub mikro kawalan - "ctl" - hendaklah sentiasa negatif. Reaksi positif dalam "kawalan" mungkin disebabkan oleh kehadiran autoantibodi dan protein plasma tidak spesifik. Jika "kawalan" positif, penentuan tidak boleh dipercayai; ia mesti diulang selepas mencuci sampel sel darah merah sekali dengan larutan natrium klorida 0.9% atau Larutan Pencairan 2.
  7. Masukkan keputusan penentuan setiap antigen dalam lajur yang sesuai pada kad ID (dalam medan putih di bawah setiap antigen).
  8. Kenal pasti keputusan mengikut skema berikut (Jadual 18.7-18.9)

  Jadual 18.7. Keputusan kajian antigen kumpulan darah ABO dan Rh dalam kad ID ABO/Rh
  Antigen yang boleh dikesan					Kesimpulan
  A	DALAM	AB	D	CDE
  +	+	+	+	+	AB Rh+
  +	+	+	-	-	AB Rh-
  +	-	+	+	+	A Rh+
  +	-	+	-	-	A Rh-
  -	+	+	+	+	B Rh+
  -	+	+	-	-	Dalam Rh-
  -	-	-	+	+	0 Rh+
  -	-	-	-	-	0 Rh-
  Nota: Kekhususan ujian disahkan oleh keputusan negatif dalam tabung uji dengan kawalan kad ID.

  Jadual 18.8 Penentuan antigen eritrosit sistem ABO
  Jenis darah
  	anti-A	anti-B	anti-AV
  0(1)	-	-	-
  A1(II)	++++	-	++++
  A2(II)	++++	-	++++
  A3(II)	++/+++	-	++/++++
  A x (II)*	-/++	-	+/++
  B(II)	-	++++	++++
  B3(III)	-	+/+++	+/+++
  B x (III)*	-	-/++	-/++
  A1B(IV)	++++	++++	++++
  A2B(IV)	+++/++++	++++	++++
  Catatan: * - penentuan varian antigen A dan B yang sangat lemah memerlukan penyelidikan lanjut.

  Jadual 18.9 Penentuan status Rh (D, CDE)
  Gabungan Rhesus	Hasil kajian dengan serum
  	Anti-D	Anti-CDE
  D-positif	++++	++++
  D-negatif	-	-
  D-negatif, C	E-positif*	-
  Lemah positif (D u)	dari ± hingga +++	daripada +++ hingga ++++
  Catatan: * - Tindak balas positif dengan serum anti-CDE di reaksi negatif dengan serum anti-D menunjukkan kehadiran antigen C, E dan memerlukan penaipan lanjut menggunakan kad ID: C-c-E-e-K-stl atau C-C w -c-E-e-K

kad pengenalan digunakan

Apabila menentukan kumpulan darah dan gabungan Rhesus, kumpulan poliklonal digunakan (Jadual 18.10 [tunjukkan] ) dan monoklonal (Jadual 18.11 [tunjukkan] ) reagen. Penggunaan yang paling biasa dalam amalan kerana kebolehlaksanaan ekonomi cari sera monoklonal.

Oleh klasifikasi moden Individu yang mempunyai varian antigen D yang lemah yang mampu menghasilkan antibodi anti-D terbahagi kepada tujuh kategori. Kekerapan tertinggi kejadian dan kepentingan praktikal ialah kategori VI, eritrosit yang hanya membawa epitop Z antigen D. Orang kategori VI (penerima Rh-negatif, tetapi penderma Rh-positif!) boleh menghasilkan antibodi kepada D yang tidak berubah dan separa. D daripada semua kategori lain. Untuk mengesahkan kumpulan darah, pelbagai kad pengenalan digunakan: D(IV -) - untuk penerima, D(IV +) - untuk penderma.

Penentuan kumpulan darah ABO dan gabungan Rh dijalankan dengan mengenal pasti antigen dan antibodi tertentu (tindak balas berganda atau silang) (Jadual 18.12 [tunjukkan] ).

Untuk pemeriksaan mendalam, peta lain digunakan (Jadual 18.13-18.14 [tunjukkan] ).

Pengesanan antibodi anti-eritrosit

Prinsip kaedah

Ujian sera dan sel darah merah standard untuk pengesanan antibodi ditambah ke bahagian atas tiub mikro. Selepas pengeraman dan sentrifugasi, sel darah merah terkumpul kekal di bahagian atas tiub, kerana ia tidak melalui gel kerana saiz besar aglutinat (hasil positif). Dengan ketiadaan antibodi untuk menguji antigen eritrosit, aglutinat tidak terbentuk. Sel darah merah yang tidak beraglutinasi mudah melalui gel dan mendap di bahagian bawah tiub (hasil negatif). Sifat aglutinasi apabila mengesan antibodi kepada eritrosit bergantung pada titer antibodi, aktiviti mereka dan dinilai dari ++++ hingga +.

• Algoritma penyelidikan [tunjukkan] .

  Sebelum ujian, sel darah merah yang ditaip mesti terlebih dahulu dibasuh dua kali daripada bahan pengawet dengan larutan natrium klorida 0.9%, dan kemudian melakukan langkah berikut:

  • simpan Larutan Pencairan 2 sehingga suhu bilik dicapai;
  • labelkan tiub;
  • sediakan penggantungan 0.8% eritrosit bertaip dalam Larutan untuk pencairan 2, letakkan 1.0 ml Larutan untuk pencairan 2 dan 10 μl darah dalam tabung uji;
  • keluarkan kerajang pelindung daripada kad pengenalan;
  • tandakan kad pengenalan (nombor sampel serum yang sedang dikaji atau nama penuh pesakit);
  • tambah 50 μl sel darah merah standard ke dalam tiub mikro;
  • tambahkan 25 μl serum atau plasma sampel ujian kepada setiap tiub mikro;
  • mengeram selama 15 minit pada suhu +37"C;
  • kad ID centrifuge dalam emparan ID (masa dan kelajuan sentrifugasi adalah malar dan ditetapkan secara automatik).

  Nota: sel darah merah standard panel ID-DiaCell I-II-III dan ID-DiaCell I-Ii-III P daripada DiaMed sedia untuk digunakan tanpa basuh dan rawatan terlebih dahulu dengan Penyelesaian Pencairan 2.

• Tafsiran keputusan [tunjukkan] .

  Reaksi positif bermakna kehadiran antibodi imun dalam sampel ujian.

  Jika ada reaksi positif Dengan semua sel darah merah panel ID-DiaCell, adalah disyorkan untuk melakukan autokawalan untuk mengecualikan autoantibodi dalam sampel ujian.

  Jika tindak balas kekal negatif dengan satu atau lebih jenis sel darah merah pada panel ID-DiaCell, kekhususan antibodi boleh ditentukan menggunakan helaian yang disertakan - jadual profil antigen yang disertakan dengan semua pakej ID-DiaCell. Dalam kes ini, anda mesti memastikan bahawa nombor panel ID-DiaCell1 dan helaian yang disertakan sepadan.

  Jika panel ini tidak mewujudkan kekhususan antibodi, adalah disyorkan untuk meneruskan pengecaman menggunakan panel sel darah merah ID-DiaPanel dan/atau ID-DiaPanel P yang dipertingkatkan (bergantung pada teknik yang digunakan pada mulanya).

Pemeriksaan dan pengenalpastian antibodi

Pemeriksaan antibodi dilakukan dalam kedua-dua gel neutral dan dalam gel yang mengandungi reagen antiglobulin (Jadual 18.15-18.16 [tunjukkan] ). Dalam kes pertama, eritrosit yang dirawat enzim digunakan untuk penyelidikan; dalam kes kedua, penggantungan eritrosit dalam larutan kekuatan ionik rendah digunakan. Pemeriksaan dan pengecaman antibodi dilakukan menggunakan panel sel darah merah standard. Apabila menilai keberkesanan ujian gel untuk pemeriksaan dan pengenalpastian antibodi, sensitiviti yang lebih tinggi telah ditubuhkan berbanding kaedah tradisional.

Kaedah untuk mengkaji antibodi terhadap antigen eritrosit

• Ujian antiglobulin (ujian Coombs tidak langsung) [tunjukkan] .

  Ujian antiglobulin tidak langsung (IAT) digunakan untuk mengesan antibodi anti-eritrosit. Biasanya NAT dilakukan dalam dua peringkat:

  1. pengeraman eritrosit dan serum (penetapan antibodi) diikuti dengan pencucian untuk mengeluarkan globulin yang tidak terikat; melakukan ujian antiglobulin tidak langsung dalam ujian gel tidak memerlukan pencucian sel darah merah!
  2. pengeraman eritrosit yang telah dibasuh dengan globulin anti-manusia (ACG). Aglutinasi menunjukkan kehadiran dalam serum antibodi yang telah terikat kepada antigen eritrosit secara in vitro.

  NAT digunakan untuk:

  1. penentuan antibodi kepada eritrosit penderma dalam serum penerima - apabila melakukan ujian keserasian;
  2. apabila pemeriksaan untuk antibodi anti-eritrosit "tidak dijangka";
  3. apabila mengkaji antibodi anti-erythrocyte pada wanita hamil;
  4. apabila mengkaji antibodi dalam serum pesakit dengan anemia hemolitik autoimun.

  Kemajuan penentuan:

  • tambahkan 50 μl penggantungan eritrosit yang ditaip ke dalam tiga tiub kad ID yang terletak di sebelah kiri;
  • tambah 25 μl serum ujian ke dalam tabung uji;
  • kad ID centrifuge selama 10 minit;
  • menilai hasil kajian. Masukkan keputusan ke dalam kad pengenalan anda.

  Keputusan penentuan:

  • keputusan positif menunjukkan kehadiran antibodi imun (allo) dalam serum atau plasma ujian (untuk menentukan kekhususan antibodi, gunakan jadual yang dilampirkan pada sel darah merah standard);
  • keputusan negatif menunjukkan ketiadaan antibodi imun dalam serum atau plasma ujian.
• Kaedah enzim [tunjukkan] .

  Rawatan dengan enzim proteolitik meningkatkan kebolehagglutinan eritrosit.

  Kemajuan penentuan:

  • tambah 50 μl penggantungan eritrosit ditaip standard ke dalam tiga tiub kad ID yang terletak di sebelah kanan;
  • tambah 25 μl Larutan Pencairan 1 ke dalam tabung uji;
  • tambah 25 μl serum ujian ke dalam tabung uji.

  Nota: Larutan pencairan 1 tidak ditambah jika sel darah merah taip standard yang telah dirawat dengan enzim proteolitik digunakan untuk kajian (contohnya, ID-DiaCell I-II-III P daripada DiaMed).

  • mengeram selama 15 minit pada +37°C;
  • kad ID centrifuge dalam Sh-centrifuge selama 10 minit (parameter ditetapkan secara automatik);
  • masukkan keputusan ke dalam kad pengenalan.

  Hasil penyelidikan:

  • keputusan positif menunjukkan kehadiran alloantibodies dalam serum atau plasma ujian (untuk menentukan kekhususan antibodi, gunakan jadual yang dilampirkan pada sel darah merah standard);
  • keputusan negatif menunjukkan ketiadaan alloantibodies dalam serum atau plasma ujian.
• Kaedah aglutinasi sejuk [tunjukkan] .

  Kemajuan penentuan:

  • inkubasi Larutan Pencairan 2, sel darah merah yang ditaip dan kad ID selama 30 minit pada suhu 2-8°C;
  • merawat sel darah merah yang ditaip dengan Penyelesaian Pencairan 2, yang mana:
    • labelkan tabung uji;
    • sediakan penggantungan 0.8% eritrosit bertaip dalam Larutan Pencairan 2 dengan meletakkan 1.0 ml Larutan Pencairan 2 dan 10 µl darah dalam tabung uji.

  Nota: ID-DiaCell standard sel darah merah (daripada DiaMed) sedia untuk digunakan dan tidak memerlukan pencairan;

  • tambahkan 50 μl penggantungan eritrosit bertaip yang dirawat dengan Larutan Pencairan 2 ke dalam tiga tiub kad ID yang terletak di sebelah kanan;
  • tambah 25 μl serum ujian ke tiub ini;
  • mengeram selama 30 minit pada suhu 2-8 C;
  • kad ID centrifuge dalam centrifuge ID selama 10 minit (parameter ditetapkan secara automatik);
  • menilai hasil kajian;
  • masukkan keputusan ke dalam kad pengenalan. Hasil penyelidikan:
  • keputusan positif menunjukkan kehadiran antibodi sejuk dalam serum atau plasma ujian (untuk menentukan kekhususan antibodi, gunakan jadual yang dilampirkan pada sel darah merah standard);
  • keputusan negatif menunjukkan ketiadaan antibodi sejuk dalam serum atau plasma ujian.

  Jika autoantibodi sejuk atau hangat terdapat dalam serum ujian, positif palsu. Untuk mengecualikan mereka, perlu memasang kawalan automatik:

  • sediakan penggantungan 0.8% sel darah merah darah ujian dalam Larutan Pencairan 2, menambah 10 μl darah keseluruhan kepada 1.0 ml Larutan Pencairan 2;
  • tambahkan 50 μl penggantungan eritrosit yang disediakan ke dalam tiub kad ID yang terletak di sebelah kiri (untuk tindak balas Coombs) atau ke dalam tiub kad ID yang terletak di sebelah kanan (untuk kaedah enzimatik dan aglutinasi sejuk);
  • tambah 25 μl serum ujian ke dalam tiub kad ID (untuk kaedah enzim, anda perlu menambah 25 μl lagi Penyelesaian Pencairan 1 ke dalam tiub ujian);
  • inkubasi kad selama 15 minit pada suhu +37°C (untuk tindak balas Coombs dan kaedah enzimatik) atau pada suhu 2-8°C (untuk menyediakan kawalan auto penggumpalan sejuk).

  Keputusan positif dalam autokawalan menunjukkan kehadiran autoantibodi dalam serum ujian.

Menentukan keserasian darah penderma dan penerima

Tujuan ujian adalah untuk keserasian individu adalah untuk mengelakkan pemindahan hemokomponen yang tidak serasi dengan antigen eritrosit. Menguji serum penerima dengan sel darah merah penderma yang dimaksudkan adalah yang paling banyak cara yang boleh dipercayai mengenal pasti antibodi yang boleh menyebabkan kerosakan pada sel darah merah yang ditransfusikan, tindak balas selepas pemindahan dan komplikasi hemolitik. Menjalankan ujian sedemikian membolehkan anda:

1. mengesahkan keserasian ABO penderma dan penerima;
2. mengenal pasti antibodi dalam serum penerima yang ditujukan kepada antigen eritrosit penderma.

Ujian untuk keserasian individu darah penderma dan penerima menggunakan antigen eritrosit (Jadual 18.17 [tunjukkan] ) tidak menggantikan kajian imunohematologi mandatori (menaip antigen eritrosit sistem ABO, Rhesus, Kell, pengesanan antibodi anti-eritrosit, pencarian dan pengenalpastian antibodi allo-anti-erythrocyte), tetapi hanya melengkapkannya.

Disebabkan fakta bahawa pemekaan boleh berlaku walaupun selepas pemindahan hemokomponen yang dipilih secara individu, untuk ujian keserasian adalah perlu untuk menggunakan setiap kali serum pesakit segar diperoleh selepas pemindahan terakhir hemokomponen.

Ujian keserasian mesti dilakukan untuk setiap sampel darah penderma!

• Kemajuan keazaman [tunjukkan]
  • simpan Larutan Pencairan 2 sehingga suhu bilik dicapai (20-24°C);
  • labelkan kad ID dan tabung uji (nama penuh penderma dan penerima);
  • sediakan penggantungan 0.8% eritrosit penderma dan penerima dalam Larutan Pencairan 2, yang mana tambahkan 1 ml Larutan Pencairan 2 ke dalam dua tabung uji berlabel, tambah 10 μl darah penderma dan penerima, masing-masing;
  • campurkan;
  • keluarkan kerajang pelindung daripada kad ID yang sepadan;
  • tambah 50 μl penggantungan eritrosit penderma yang disediakan ke dalam mikrotiub kad ID 1, 2, 3, 4, 5;
  • tambah 50 μl penggantungan yang disediakan bagi eritrosit penerima ke dalam mikrotiub kad ID 4, 5, 6;
  • tambah 25 μl serum penerima atau plasma ke dalam mikrotiub kad ID 1, 2, 3, 6;
  • tambah 25 µl Larutan Pencairan 1 kepada mikrotiub kad ID 4 (ujian enzim);
  • mengeram selama 15 minit pada +37°C;
  • emparan (masa dan kelajuan sentrifugasi adalah malar dan ditetapkan secara automatik);
  • menilai hasil kajian. Keserasian untuk antigen A, B, D (1, 2, 3 mikrotiub):
  • keputusan positif atau negatif yang jelas menunjukkan korespondensi antigen A, B, O sel darah merah penderma dan penerima;
  • jika populasi berganda sel darah merah diperhatikan (dalam satu tiub mikro terdapat hasil positif dan negatif), antigen A, B, D penderma dan penerima adalah tidak sama!
  • penentuan keserasian oleh antigen A, B, D hanya sah dengan tindak balas negatif dalam mikrotube ke-6 (autokawalan).
• Keputusan ujian keserasian (4, 5 mikrotiub) [tunjukkan]
  • hasil positif dalam mikrotube kad ID 4, 5 dengan kawalan negatif (mikrotube 6) menunjukkan ketidakserasian darah penderma dan penerima dari segi antigen eritrosit;
  • keputusan negatif dalam mikrotube kad ID 4, 5, 6 menunjukkan keserasian darah penderma dan penerima berkenaan dengan antigen eritrosit;
  • tindak balas positif dalam kad ID mikrotube 6 (autocontrol) memerlukan penentuan lebih lanjut auto- dan alloantibodies dalam serum penerima (plasma).
• Sekatan [tunjukkan]
  • pasti ubat-ubatan boleh menyebabkan tindak balas positif palsu Coombs;
  • dengan sedikit keadaan patologi pesakit mungkin mengalami reaksi Coombs yang positif;
  • pencemaran bakteria atau lain-lain bahan yang digunakan boleh menyebabkan hasil positif palsu atau negatif palsu;
  • sisa-sisa fibrin dalam sampel ujian boleh mengikat sel-sel yang tidak beragglutinasi dan, selepas sentrifugasi, membentuk garis merah jambu nipis pada permukaan gel, manakala sebahagian besar sel akan disetempat di bahagian bawah tiub mikro;
  • penggantungan sel darah merah yang terlalu pekat boleh menyebabkan tindak balas positif palsu.
• Keadaan penyimpanan dan operasi [tunjukkan]

  Kad ID DiaMed hendaklah disimpan pada suhu bilik (+18-25°C) di tempat yang kering sepanjang tarikh luput.

  Tarikh tamat tempoh kad ialah 18 bulan. Jangka hayat reagen ialah 2 tahun.

  Hasil penyelidikan pada peta disimpan tidak berubah:

  • 48 jam pada suhu bilik;
  • tiga minggu di dalam peti sejuk (pada +2-8°C) dengan bahagian atas kad ID dimeterai dengan pita pelekat.

  Medan bawah kad pengenalan boleh dikupas atau dipotong dan digunakan sebagai dokumen dalam sejarah perubatan atau kabinet pemfailan.

  Kad ID dengan tanda-tanda pengeringan gel, gelembung dalam ketebalannya atau kerosakan pada kerajang pelindung tidak boleh digunakan.

  Sampel dan reagen mesti dibawa ke suhu bilik sebelum digunakan.

Kesimpulan

Ujian gel adalah kaedah mudah, boleh dihasilkan semula, pantas dan sangat sensitif yang membolehkan pengesanan segera varian lemah antigen sel darah merah. Ujian ini dinilai hanya secara makroskopik. Selepas latihan pendek kakitangan yang diperlukan untuk perlaksanaan yang betul ujian, kos masa bekerja dan ralat yang dihadapi apabila menggunakan kaedah tradisional diminimumkan.

Ujian gel membolehkan anda menyeragamkan teknik makmal dan memberikan penilaian objektif hasil tindak balas hemagglutinasi. Kestabilan keputusan ujian membolehkan anda menyemak semula data yang diperoleh, yang diperlukan untuk kawalan. Keputusan ujian boleh difotostat untuk tujuan arkib atau untuk tujuan pendidikan dalam kes yang sukar didiagnosis. Ujian ini menggunakan sejumlah kecil serum atau sel darah merah, yang sangat penting untuk klinik kanak-kanak.

Penggunaan sistem gel mengurangkan risiko pencemaran kakitangan walaupun semasa bekerja dengan sampel yang berpotensi dijangkiti. Ujian gel boleh digunakan untuk melakukan ujian keserasian untuk antigen sel darah merah sebelum pemindahan darah. Untuk tujuan ini, ujian antiglobulin tidak langsung dan kaedah enzim satu langkah digunakan.

Ujian gel dilakukan dan dinilai mengikut peraturan di atas. Ketiadaan peringkat mencuci sel darah merah apabila melakukan ujian antiglobulin tidak langsung membolehkan penggunaan yang lebih berkesan masa kerja, dan juga, terima kasih kepada kestabilan keputusan ujian, mengawal semua keputusan yang diperolehi.

Sumber: Perubatan diagnostik makmal, atur cara dan algoritma. Ed. prof. Karpishchenko A.I., St. Petersburg, Intermedica, 2001