Over staatsnormen voor het bepalen van antibiotica in melk. Sneltesten voor het vaststellen van antibiotica Het testen van melk op de aanwezigheid van antibiotica

57. Identificatie van verschillende groepen antibiotica in zuivelgrondstoffen.

Deze norm stelt een instrumentele uitdrukkelijke methode vast voor het bepalen van de aanwezigheid van antibiotica: penicilline, tetracyclinegroep, chlooramfenicol (chlooramfenicol), streptomycine, sulfonamiden in rauwe en warmtebehandelde melk. Minimale detectielimieten voor antibiotica in melk met deze methode:

De methode is gebaseerd op het binden van resterende hoeveelheden antibiotica die in het testmelkmonster worden aangetroffen met antilichamen die een kleurbare immunochromatische reactie veroorzaken, gevolgd door bepaling van de kleurintensiteit van de biochemische reactieproducten door middel van een visuele methode of instrumentele meting met behulp van een uitleesapparaat. , waarmee de mate van kleurintensiteit kan worden bepaald met behulp van de optische reflectiemethode ten opzichte van die in een teststrip met een controlehoeveelheid antibioticum (minimale detectielimiet), en identificatiegegevens worden weergegeven over het type antibioticum dat wordt bepaald en de aanwezigheid ervan of afwezigheid binnen 2-8 minuten waarbij de identificatiegegevens worden opgeslagen door de microprocessor van het apparaat en op de bijgevoegde flashkaart.

De meetresultaten worden eerst visueel verwerkt en vervolgens instrumenteel om het resultaat te bevestigen, d.w.z. met behulp van een leesapparaat of apparatuur die de functies van een couveuse en een leesapparaat combineert.

58. Bepaling van de totale bacteriële besmetting van melk.

Bacteriële besmetting van melk wordt bepaald met behulp van een reductase- of resazurin-test.

De reductasetest wordt gebruikt om de mate van microflora-besmetting van melk te bepalen. De essentie ervan is gebaseerd op het vaststellen van de biochemische activiteit van microben die het enzym reductase produceren, dat sommige verven, met name methyleenblauw, kan verkleuren. Dit vermogen wordt ook bezeten door leukocyten, ascorbinezuur en enkele andere stoffen in melk. De methode is gebaseerd op het bepalen van de tijd die nodig is om methyleenblauw te bleken. Het voordeel van de reductasetest ten opzichte van de directe bacteriologische methode is de snelheid van het verkrijgen van resultaten (in ongeveer 5,5 uur). Niet alle micro-organismen hebben echter een reducerende activiteit. Melkzuurstreptokokken, E. coli, boterzuur en bederfelijke bacteriën hebben deze eigenschap in grotere mate, salmonella's en stafylokokken hebben iets minder, en de veroorzakers van mastitis met streptokokkenetiologie zijn van dit vermogen beroofd. Daarom kan melk een groot aantal streptokokken bevatten die mastitis veroorzaken, en volgens de reductasetest zal het als eerste klasse worden geclassificeerd. Bovendien geeft deze test in de zomer overdreven resultaten en is deze in de winter vrijwel nutteloos. Met andere woorden, melk van klasse II en III geeft na twee dagen afkoelen bij 4-5 C volgens de reductasetest klasse I-indicatoren. Bijgevolg geeft de reductasetest met methyleenblauw een zeer onnauwkeurig beeld van de mate van bacteriële besmetting van melk en de hygiënische kwaliteit ervan. Daarom moeten de indicatoren van de reductasetest in combinatie met andere onderzoeksresultaten in aanmerking worden genomen.

Om een ​​reductasetest uit te voeren, voegt u 1 ml methyleenblauw-werkoplossing toe aan een reageerbuisje van 20 ml melk en sluit u het goed af met een stop. Na het mengen wordt de reageerbuis in een waterbad bij een temperatuur van 37-40 C geplaatst, waarbij de tijd van methyleenblauwverkleuring na 20 minuten, 2 en 5,5 uur wordt geobserveerd. Neem voor het bereiden van de werkoplossing 5 ml verzadigde alcohol oplossing van methyleenblauw en voeg 195 ml gedestilleerd water toe.

Melk wordt geclassificeerd als klasse I als de verkleuring van methyleenblauw na 5,5 uur optreedt. Bij klasse II-melk treedt de verkleuring op in 2-5,5 uur. Klasse III-melk verkleurt in de periode van 20 minuten tot 2 uur. Het tijdstip waarop de verkleuring begint de inhoud van de reageerbuis wordt aangegeven op basis van het geschatte aantal micro-organismen in de geteste melk die het enzym reductase produceren.

Resazurin-test. Het voordeel van resazurin is dat het een hoger redoxpotentieel heeft, wat het onderzoek versnelt. De melktemperatuur heeft geen merkbaar effect op de parameters van de resazurin-test. Het is erg belangrijk dat deze test de melk detecteert van koeien die lijden aan subklinische mastitis met verschillende etiologieën. Een belangrijk nadeel van de resazurin-test is de lichtgevoeligheid van de resazurin-indicator. Om deze tekortkoming te elimineren I.S. Zagaevsky (1971) stelde voor een oplossing van resazurin in combinatie met formaldehyde te bereiden. In dit geval wordt 0,05 g resazurine opgelost in 100 ml gedestilleerd water en wordt 0,5 ml formaldehyde toegevoegd. Voor onderzoek wordt met behulp van een automatische snavel 1 ml indicator aan 10 ml melk toegevoegd en na roeren een uur in een waterbad bij een temperatuur van 44 C geplaatst. Er wordt rekening gehouden met de reactie vanaf het moment dat de temperatuur in het controlebuisje bereikt 43 C. Ter controle wordt een test gedaan met gekookte melk. De reactie wordt na een uur geregistreerd. Als binnen een uur de oorspronkelijke grijsblauwe kleur van het mengsel niet is veranderd, wordt de melk ingedeeld in klasse I; paarse kleur komt overeen met klasse II en roze met klasse III.

Het voordeel van de resazurin-test bij deze aanpassing is dat deze de analysetijd bijna vijf keer versnelt, gevoeliger is voor het identificeren van onzuiverheden in de mastitismelk in vergelijking met de reductasetest, geen periodieke monitoring vereist en demonstratiever is als er rekening mee wordt gehouden het resultaat van de analyse.

Er bestaat geen discussie over de gevaren van antibiotica in melk. Het onderwerp is, zoals ze zeggen, meer dan relevant. Ten eerste is het gevaarlijk voor de consument, wat betekent dat de staat verplicht is er controle op uit te oefenen. Ten tweede hebben antibiotica een negatieve invloed op het technologische proces: als ze aanwezig zijn, is het onmogelijk om producten te verkrijgen die aan de kwaliteitsnormen voldoen. Laten we de schandalen die gepaard gaan met de ontdekking van deze ongewenste gasten in zuivelproducten niet vergeten: financiële verliezen en reputatieverlies - de gevolgen zijn, zoals u ziet, meer dan ernstig. Daarom analyseren we de testmethoden, evalueren we de voor- en nadelen, kiezen we de beste en controleren deze!

Hoe ze in producten terechtkomen

Antibiotica worden veel gebruikt in de diergeneeskunde: ze behandelen of voorkomen in de regel mastitis, luchtweginfecties en infectieziekten bij rundvee. Antibiotica worden ook in subtherapeutische hoeveelheden gebruikt als voeradditieven om de groei van dieren te stimuleren. En hun resten kunnen vervolgens in voedselproducten van dierlijke oorsprong terechtkomen.

Wat zijn de gevaren voor de consument?

De aanwezigheid van antibiotica in melk kan allergische reacties veroorzaken. En het gevaarlijkste is dat regelmatige consumptie van dergelijke producten resistentie (resistentie) van het menselijk lichaam tegen antibiotica ontwikkelt.

Hoe schaden ze de productie?

Antibiotica remmen de groei van de starter en maken het onmogelijk om hoogwaardige melkzuurproducten en kazen te verkrijgen: uw yoghurt zal niet de gewenste consistentie kunnen bereiken, wat zal leiden tot afwijkingen van de productkwaliteitsnormen. Tegelijkertijd ontwikkelt pathogene microflora zich actiever in producten.

Wetgevende regelgeving

Er bestaat een wettelijk goedgekeurde lijst van gecontroleerde antibiotica en hun minimaal toegestane concentraties. Staatsvereisten op dit gebied kunnen in verschillende landen aanzienlijk verschillen.

In Europa is het toegestane niveau (EU MRL - ​​maximale restlimiet) van antibiotica uit de tetracyclinegroep bijvoorbeeld 100 μg/kg (ppb). En in Rusland – slechts 10 mcg/kg. Het overschrijden van deze niveaus is illegaal.

Detectiemethoden

Er zijn veel manieren om antibiotica in melk op te sporen. Onder hen:

• snelle tests;
• microbiologische methoden;
• enzym-immunoassay-testsystemen;
• analytische analysemethoden (HPLC, enz.).

Elk van deze methoden heeft zijn eigen voor- en nadelen. Bij het vergelijken worden meestal de volgende indicatoren gebruikt:

• analysetijd;
• de behoefte aan extra apparatuur;
• complexiteit van monstervoorbereiding;
• spectrum van detecteerbare antibiotica;
• prijs.

De meest gebruikte tests op boerderijen, melkverzamelpunten en melkverwerkingsfabrieken zijn sneltests en remmende microbiologische tests. De belangrijkste reden is dat ze relatieve eenvoud, acceptabele analysetijd en lage kosten combineren.

Hieronder zullen we dit soort tests bekijken, hun positieve en negatieve aspecten bepalen en nagaan of ze elkaar kunnen vervangen.

Express-testen

Bij sneltesten worden specifieke antilichamen gebruikt om een ​​antigeen (antibioticum) te binden. Dit resulteert in een kleurverandering op de strip, wat een positief of negatief resultaat aangeeft.

Het bijzondere van deze tests is dat ze slechts één of meerdere groepen antibiotica tegelijkertijd kunnen detecteren. De meest gebruikte tests in Oekraïne zijn:

• aan chlooramfenicol;
• B-lactamen en tetracyclines;
• tests voor de gelijktijdige bepaling van 4 groepen antibiotica: β-lactams, tetracyclines, streptomycine en chlooramfenicol.

Voordelen van sneltesten

Het belangrijkste voordeel van sneltesten is de hoge analysesnelheid: de tijd die nodig is om de test uit te voeren varieert van 2 tot 10 minuten.

Bovendien zijn tests zonder incubatie (waarvoor geen extra apparatuur nodig is) de laatste tijd steeds populairder geworden, waardoor ze gemakkelijk buiten het laboratorium kunnen worden gebruikt.

Nadelen van sneltesten

Voor de gelijktijdige analyse van één melkmonster op alle belangrijke groepen antibiotica – zoals bètalactams, tetracyclines, macroliden, sulfonamiden, aminoglycosiden, enz. – zijn echter meerdere sneltesten nodig. Dit betekent dat de analysekosten aanzienlijk stijgen.

Microbiologische remmende tests

Het werkingsprincipe van deze tests is vrij eenvoudig. De melk wordt in vooraf bereide testflesjes gedaan en gedurende een bepaalde tijd bij een optimale temperatuur van 64⁰C geïncubeerd (meestal 3 uur, daarom worden deze tests soms tests van drie uur genoemd).

De testflesjes bevatten een voedingsmedium met een gevoelige bacteriestam (sporen van Bacillus strearothermophius calidolactis) en een zuurgraadindicator die de kleur van het medium verandert als de pH verandert. Het is door de kleurverandering dat de aanwezigheid (of afwezigheid) van antibiotica in melk wordt bepaald:

• Als de melk geen antibiotica of andere remmende stoffen bevat, beginnen bacteriën zich actief te ontwikkelen wanneer melk aan de flesjes wordt toegevoegd en de temperatuur stijgt. Als gevolg hiervan verandert de zuurgraad van het medium en verandert ook de kleur.
• Als er antibiotica in melk aanwezig zijn, remmen (onderdrukken) deze de groei van bacteriën en wordt er geen kleurverandering waargenomen.

Voordelen van remmertests

In tegenstelling tot sneltesten, die slechts één of enkele groepen antibiotica kunnen detecteren met één proef kunnen microbiologische tests een breed scala aan antibiotica detecteren - bètalactams, tetracyclines, sulfonamiden, macroliden, azaliden, aminoglycosiden, quinolen, amfenicolen - evenals andere remmende stoffen. Daarom worden deze tests vaak gebruikt als referentietests in zuivelverwerkingsfabrieken.

Nadelen van remmertests

Het enige nadeel van deze tests is de lange testtijd. Tegelijkertijd zijn de kosten van één remmertest lager in vergelijking met sneltesten, wat uiteraard geen nadeel kan worden genoemd.

Key testindicatoren: vergelijk en kies zelf

Zoals we kunnen zien, vervangen sneltests en microbiologische (remmer)tests voor het opsporen van resterende hoeveelheden antibiotica in melk elkaar niet, maar vullen ze elkaar alleen aan en zorgen ze voor maximale veiligheid van zuivelproducten voor consumenten en vertrouwen voor producenten.

In toekomstige artikelen zullen we meer in detail praten over manieren om melk te testen op de aanwezigheid van antibiotica. Volg de blog voor updates.

Taras Netesa,

toonaangevende specialist voedseltechnologiegroepen

LLC "HIMLABORREACTIV"

De gewetenloze benadering van sommige boeren bij het voeren van vee leidt tot besmetting van voedsel met resten van verschillende medicijnen, waaronder antibiotica. Deze laatste worden vaak niet alleen gebruikt om dieren te behandelen, maar ook om voer te conserveren, de kwaliteit ervan te verbeteren en de groei van dieren te versnellen.

Omdat medicijnen lange tijd in dierlijke producten kunnen blijven, komen ze in het menselijk lichaam terecht. Een grote ophoping van antibiotica veroorzaakt het optreden van allergische reacties met ernstige gevolgen in de vorm van angio-oedeem, remt de activiteit van nuttige enzymen, verandert de microflora van het maagdarmkanaal en bevordert de vorming en reproductie van een stabiel type microflora. Wat veroorzaakt het verhoogde gehalte aan chemicaliën in voedingsproducten?

De aanwezigheid van medicijnen in melk brengt een verhoogd productierisico met zich mee

Geneesmiddelen van synthetische oorsprong worden toegevoegd aan aanvullende voedingsmiddelen voor vee om biochemische reacties in het lichaam van dieren te stimuleren, de productiviteit te verhogen, de groei te versnellen en de algemene toestand te verbeteren.

Het is duidelijk dat antibiotica een negatieve invloed hebben op microbiologische processen bij de productie van gefermenteerde melkproducten. Als gevolg hiervan komen producten die zijn gemaakt met behulp van technologie die schadelijk is voor de gezondheid in de schappen terecht.

Door de dynamiek van de fermentatie van producten op melkbasis, bijvoorbeeld kefir of zure room, te bestuderen, kunnen we de afwezigheid of vertraging van de rijping in monsters vaststellen en een conclusie trekken over de hoeveelheid resterende chemicaliën die erin zitten. Stel je voor: een zuivelproduct van één koe die met antibiotica is behandeld, maakt een ton melk ongeschikt voor verdere verwerking!

Om de bevolking te beschermen tegen gevaarlijke gefermenteerde melkproducten heeft de staat basisdocumentatie goedgekeurd die de standaard van veiligheidsindicatoren voor voedselgrondstoffen en voedselproducten reguleert. Methoden voor het monitoren van remmende componenten zijn ook zorgvuldig ontwikkeld, waardoor vervalsing van producten die in de verkoop gaan, tijdig kan worden opgespoord en voorkomen.

Microbiologische methode

GOST R 51600-2000 stelt normen vast voor microbiologische tests om de aanwezigheid en concentratie van antibiotica te bepalen. Om een ​​effectief resultaat te verkrijgen, worden ook sneltesten gebruikt, die gebaseerd zijn op de studie van specifieke receptoren uit de groep van tetracyclines en bètalactams.

Om één bepaling te voltooien, hoeft u niet meer dan 5 minuten te besteden. Afhankelijk van het type chemische stof varieert de gevoeligheid van de test van 2 tot 80 μg/kg.

Volgens GOST wordt de aanwezigheid van een antibioticum in een zuivelproduct bepaald door de diameter van de remmingsplaats. De methode is gebaseerd op het testen van het vermogen van synthetische componenten om in een omgeving te combineren met sporen van testmicroben en de ontwikkeling ervan te voorkomen.

Voor analyse worden melkmonsters genomen en maximaal één dag bij een ingestelde temperatuur (5±1) °C in koelapparatuur bewaard. Sporen worden verkregen uit een voedingsbodem op basis van gedestilleerd water, glucose en gistextract.

De minimale concentratie die tijdens de analyse wordt bepaald, bedraagt ​​0,05 μg/ml. Het enige nadeel van deze methode is de duur van het ensceneren van monsters en de arbeidsintensiteit van laboratoriumonderzoek.

Immuno-enzymmethode

GOST 32219-2013 regelt de procedure voor het bepalen van de concentratie van streptomycine en chlooramfenicol in gesteriliseerde, gepasteuriseerde en rauwe koemelk. De methode is gebaseerd op een immuun-enzymreactie, waarbij chemische stoffen worden opgevangen door een specifieke eiwitreceptor. Als gevolg hiervan wordt een sterk complex gevormd dat het vermogen van de technische indicator blokkeert om de kleur van het product van het bestudeerde proces te veranderen.

De aanwezigheid van antibiotica in gefermenteerde melkproducten wordt visueel bepaald. In dit geval vergelijkt het laboratorium de kleurintensiteit van het gebied in aanwezigheid van synthetische verbindingen met de tint van het controlegebied.

Hoge prestatie vloeistofchromatografie

GOST 33526-2015 is van kracht sinds 2016 en stelt u in staat het gehalte aan antibiotica in melkverwerkingsproducten nauwkeurig te bepalen. Volgens de regelgeving bedraagt ​​het analysebereik van de massafractie van chemische componenten voor de groep van tetracycline en penicilline maximaal 1,0 ppm (mg/kg).

De methode is gebaseerd op het extraheren (extractie) van antibiotica uit melkmonsters. Monsters ondergaan een extractzuiveringsfase, waarna met behulp van spectrofotometrische detectietechnologie de exacte massa aan synthetische stoffen wordt bepaald. Alle laboratoriumprocessen vinden plaats op een chromatograaf met een hoog meetbereik.

Instrumentele methode

GOST 32254-2013 is ontwikkeld voor bedrijven in de zuivelindustrie en regelt technisch de procedure voor certificering en standaardisatie van producten met het testen van de inhoud ervan op de aanwezigheid van antibiotica.

Met deze methode kunnen tests worden uitgevoerd met een nauwkeurigheid van minimaal 95%. Ze zijn gebaseerd op de binding van synthetische stoffen aan antilichamen, die een immunochromatische kleurreactie veroorzaken. Rekening houdend met de intensiteit van de kleur, trekt de laboratoriumtechnicus een conclusie over de controlehoeveelheid antibioticum.

Veranderingen in GOST's in 2017-2018

Er zijn aanpassingen doorgevoerd in een aantal technische regelgevingsregels. Zo werd het woord ‘penicilline’ vervangen door ‘penicillines’ en werd het gedeelte over de procedure voor toediening en methoden voor het selecteren van monsters voor onderzoek toegevoegd. Ook de lijst met te analyseren producten is uitgebreid: smeltkaasproducten, boter op melkbasis, kazen en smeersels.

Express-tests van het bedrijf ATL

Om de chemische samenstelling van gefermenteerde melkproducten te controleren, is het raadzaam om ze te gebruiken, die de aanwezigheid en massa van antibiotica nauwkeurig zullen bepalen. Strips met meetlijnen zijn eenvoudig en gemakkelijk te gebruiken, voldoen aan de GOST-vereisten en maken analyse buiten laboratoriumomstandigheden mogelijk. De resultaten van het onderzoek worden lange tijd bewaard en kunnen in de toekomst worden gebruikt voor vergelijkende beoordelingen.

‘Antibiotica in melk’ is geen nieuw onderwerp in de melkveehouderij, maar wel pijnlijk voor producenten. Naast de behandeling van koeien moet de boerderij aanzienlijke verliezen lijden tijdens het zogenaamde ‘melken’ van koeien, wanneer het dier niet in het algemene systeem wordt gemolken vanwege de aanwezigheid van een antibioticum van de ene of de andere groep. in de melk.

De diergeneeskunde staat niet stil en er komen voortdurend nieuwe generatie medicijnen op de markt, die volgens de fabrikant geen sporen achterlaten in de melk. Maar al deze garanties vallen in duigen als antibiotica in melk worden bepaald met behulp van speciale testsystemen.

Tests voor antibiotica in melk

Ik herinner me dat er drie jaar geleden tests in gebruik waren “ Bèta-sterrencombo", die werkte aan de ontdekking van tetracycline-antibiotica en bèta-lactams (penicilline).

Er ging heel weinig tijd voorbij en er kwamen bijvoorbeeld gevoeligere testsystemen uit: “ 4SENSOR", die nog twee groepen antibiotica kunnen detecteren; chlooramfenicol en streptomycine.

Testsysteem 4SENSOR

Ik moet er rekening mee houden dat iedereen met behulp van deze tests antibiotica in melk kan leren identificeren.

Tijdens visuele decodering wordt de intensiteit van twee lijnen (test en controle) vergeleken. Als de teststreep beter zichtbaar is dan de controlestreep, dan kunnen we concluderen dat er geen antibiotica zijn. Als de testlijn iets zwakker is dan de controlelijn, kunnen we spreken van de aanwezigheid van antibiotica.

Visuele interpretatie van testsystemen

“... Melk mag niet eerder dan 96 uur na de laatste toediening van Mastiet Forte voor voedingsdoeleinden worden gebruikt...”

“...Het gebruik van melk voor voedingsdoeleinden is toegestaan ​​96 uur na de laatste toediening van Multibay IMM aan koeien...”

Het lijkt erop dat we na vier dagen en dat is alles, onze koe weer in het gemeenschappelijke systeem kunnen melken. Maar het was er niet. Vaak identificeren we na het testen van melk op antibiotica de aanwezigheid van een of andere groep.

Voordat u een koe in het algemene systeem gaat melken, moet u er daarom voor zorgen dat er geen antibiotica in de melk zitten. Als u twijfelt aan het resultaat (zichtbaarheid van de strepen) van het testsysteem: doe de test opnieuw of wacht nog een paar dagen.

Als u een of andere groep antibiotica in melk aantreft, moet een reguliere dierenarts u in principe altijd vertellen of bepaalde medicijnen bij de behandeling worden gebruikt.

Er zijn bijvoorbeeld bèta-lactams ontdekt; dit is hoogstwaarschijnlijk penicilline. Het zit bijvoorbeeld in het medicijn "Mamifort", tetracycline zit in "Mastitis Forte", streptomycine zit in "Multiject" enzovoort...

Waarom zijn antibiotica in melk gevaarlijk?

Dit is de meest interessante vraag. Ik heb hierover mijn eigen mening, maar het zou leuk zijn om aanvullende informatie te bestuderen. Tot mijn verbazing heb ik geen duidelijke redenen gevonden waarom melk met antibiotica niet mag worden verwerkt. Het komt allemaal neer op het feit dat antibiotica menselijke botten vernietigen en bepaalde organen beschadigen.

Ja, ik beweer niet dat bij het consumeren van antibiotica (laten we de gebruikelijke behandeling van iemand met griep volgen) alle nuttige microflora in de darmen ongetwijfeld afsterven. Daarom wordt het vaak aanbevolen om bio-yoghurt of biologische producten, zoals Linex, parallel te nemen.

Maar nergens heb ik gelezen over het gevaar van iemands allergie voor een antibioticum. En de manifestatie van allergiesymptomen is verdeeld in algemeen en lokaal. Veel voorkomende zijn onder meer:

anafylactische shock– een plotselinge daling van de bloeddruk, zwelling van het strottenhoofd, ademhalingsproblemen, huiduitslag, jeuk en roodheid van de huid;

serumachtig syndroom– Allergie ontstaat na enkele weken. Gekenmerkt door gewrichtspijn, huidirritatie en koorts.

Er zijn ook syndromen: drugskoorts en epidermale necrolyse. Dat wil zeggen, de dood is heel goed mogelijk als er niet tijdig hulp wordt verleend.

En misschien wel de belangrijkste factor: antibiotica verstoren de werking van starterculturen in melk.

Zoals we ons herinneren, doden ze tenslotte alle microflora. Daarom is het problematisch om bijvoorbeeld kwark te verkrijgen uit melk die een antibioticum bevat. Op zijn minst zal de opbrengst van dezelfde wrongelproducten afnemen. Zuivelverwerkers nemen dergelijke melk uiteraard niet in productie.

Wees daarom bij het kiezen van melk waakzaam en kies een vertrouwde fabrikant.

Drink kwaliteitsmelk en blijf bij ons!. Dit is interessant.

gerelateerde berichten

:O");" src="http://milkfermer.ru/wp-content/plugins/qipsmiles/smiles/strong.gif" alt=">:o" title=">: o">.gif" alt="]:->" title="]:->">!}