Om statlige standarder for å bestemme antibiotika i melk. Hurtigtester for å bestemme antibiotika Teste melk for tilstedeværelse av antibiotika

57. Identifikasjon av ulike grupper antibiotika i meieriråvarer.

Denne standarden etablerer en instrumentell ekspressmetode for å bestemme tilstedeværelsen av antibiotika: penicillin, tetracyklingruppe, kloramfenikol (kloramfenikol), streptomycin, sulfonamider i rå og varmebehandlet melk. Minimum deteksjonsgrenser for antibiotika i melk ved bruk av denne metoden:

Metoden er basert på binding av restmengder av antibiotika funnet i testmelkprøven med antistoffer som forårsaker en fargebar immunokromatisk reaksjon, etterfulgt av bestemmelse av fargeintensiteten til de biokjemiske reaksjonsproduktene ved en visuell metode eller instrumentell måling ved bruk av en leseanordning , som gjør det mulig å bestemme graden av fargeintensitet ved bruk av den optiske refleksjonsmetoden i forhold til den som er inkludert i en teststrimmel med en kontrollmengde antibiotika (minimum deteksjonsgrense), og viser identifikasjonsdata om typen antibiotika som bestemmes og dets tilstedeværelse eller fravær innen 2-8 minutter med identifikasjonsdata lagret av mikroprosessoren til enheten og på det vedlagte flash-kortet.

Måleresultatene behandles først visuelt, og deretter instrumentelt for å bekrefte resultatet, d.v.s. ved hjelp av et leseapparat eller utstyr som kombinerer funksjonene til en inkubator og en leseanordning.

58. Bestemmelse av total bakteriell forurensning av melk.

Bakteriell forurensning av melk bestemmes ved hjelp av en reduktase- eller resazurin-test.

Reduktasetesten brukes til å bestemme graden av mikrofloraforurensning av melk. Dens essens er basert på å etablere den biokjemiske aktiviteten til mikrober som produserer enzymet reduktase, som kan misfarge enkelte malinger, spesielt metylenblått. Denne evnen er også besatt av leukocytter, askorbinsyre og noen andre stoffer som finnes i melk. Metoden er basert på å bestemme tiden det tar for metylenblått å bleke. Fordelen med reduktasetesten sammenlignet med den direkte bakteriologiske metoden er hastigheten for å oppnå resultater (på ca. 5,5 timer). Imidlertid har ikke alle mikroorganismer reduserende aktivitet. Melkesyrestreptokokker, E. coli, smørsyre og forråtningsbakterier har denne egenskapen i større grad, salmonella og stafylokokker har noe mindre, og årsakene til mastitt av streptokokketiologi er fratatt denne evnen. Derfor kan melk inneholde et stort antall streptokokker som forårsaker mastitt, og den vil ifølge reduktasetesten bli klassifisert som førsteklasses. I tillegg gir denne testen oppblåste resultater om sommeren og er nesten ubrukelig om vinteren. Med andre ord gir melk i klasse II og III etter to dagers nedkjøling ved 4-5 C i henhold til reduktasetesten klasse I-indikatorer. Følgelig gir reduktasetesten med metylenblått en svært unøyaktig idé om graden av bakteriell forurensning av melk og dens sanitære kvalitet. Derfor må indikatorene for reduktasetesten tas i betraktning sammen med andre forskningsresultater.

For å utføre en reduktasetest, tilsett 1 ml metylenblått arbeidsløsning til et 20 ml melkeprøverør og tett lokk med en propp. Etter blanding settes reagensrøret i et vannbad ved en temperatur på 37-40 C, og observerer tiden for metylenblått misfarging etter 20 minutter, 2 og 5,5 timer. For å forberede arbeidsløsningen, ta 5 ml mettet alkohol oppløsning av metylenblått og tilsett 195 ml destillert vann.

Melk klassifiseres som klasse I dersom misfarging av metylenblått oppstår etter 5,5 timer I klasse II melk oppstår misfarging i løpet av 2-5,5 timer Klasse III melk misfarges i perioden fra 20 minutter til 2 timer Tidspunktet for debut av misfarging av innholdet i reagensglasset er angitt på det omtrentlige antallet mikroorganismer i melken som testes som produserer enzymet reduktase.

Resazurin test. Fordelen med resazurin er at det har et høyere redokspotensial, noe som setter fart på forskningen. Melketemperaturen har ingen merkbar effekt på parametrene til resazurin-testen. Det er veldig viktig at denne testen oppdager melken til kyr som lider av subklinisk mastitt av forskjellige etiologier. En betydelig ulempe med resazurin-testen er fotosensitiviteten til resazurin-indikatoren. For å eliminere denne mangelen I.S. Zagaevsky (1971) foreslo å lage en løsning av resazurin i kombinasjon med formaldehyd. I dette tilfellet løses 0,05 g resazurin i 100 ml destillert vann og 0,5 ml formaldehyd tilsettes. For forskning tilsettes 1 ml indikator til 10 ml melk ved hjelp av et automatisk nebb og, etter omrøring, plasseres i en time i vannbad ved en temperatur på 44 C. Reaksjonen tas med i betraktning fra det øyeblikket temperaturen i kontrollrøret når 43 C. For kontroll gjøres det en test med kokt melk . Reaksjonen registreres etter en time. Hvis den første grå-blå fargen på blandingen ikke har endret seg innen en time, klassifiseres melken som klasse I; lilla farge tilsvarer klasse II og rosa til klasse III.

Fordelen med resazurin-testen i denne modifikasjonen er at den fremskynder analysetiden med nesten 5 ganger, er mer følsom for å identifisere urenheter i mastittmelk sammenlignet med reduktasetesten, krever ikke periodisk overvåking og er mer demonstrativ når det tas i betraktning resultatet av analysen.

Det er ingen debatt om farene ved antibiotika i melk. Temaet er, som de sier, mer enn relevant. For det første er det farlig for forbrukeren - noe som betyr at staten er forpliktet til å kontrollere det. For det andre påvirker antibiotika negativt den teknologiske prosessen: hvis de er til stede, er det umulig å få produkter som oppfyller kvalitetsstandardene. La oss ikke glemme skandalene knyttet til oppdagelsen av disse uønskede gjestene i meieriprodukter: økonomiske tap og tap av omdømme - konsekvensene, ser du, er mer enn alvorlige. Derfor analyserer vi testmetodene, vurderer fordeler og ulemper, velger det beste og kontrollerer det!

Hvordan de kommer inn i produkter

Antibiotika er mye brukt i veterinærmedisin: som regel behandler eller forebygger de mastitt, luftveisinfeksjoner og infeksjonssykdommer hos storfe. Antibiotika brukes også i subterapeutiske mengder som fôrtilsetninger for å stimulere dyrevekst. Og restene deres kan senere ende opp i matvarer av animalsk opprinnelse.

Hva er farene for forbrukeren?

Tilstedeværelsen av antibiotika i melk kan forårsake allergiske reaksjoner. Og det farligste er at regelmessig inntak av slike produkter utvikler motstand (motstand) i menneskekroppen mot antibiotika.

Hvordan skader de produksjonen?

Antibiotika hemmer veksten av starteren og gjør det umulig å skaffe kvalitetsmelkesyreprodukter og oster: yoghurten din vil ikke kunne oppnå ønsket konsistens, noe som vil føre til avvik fra produktkvalitetsstandarder. Samtidig utvikler patogen mikroflora seg mer aktivt i produkter.

Lovforskrift

Det er en lovlig godkjent liste over kontrollerte antibiotika og deres minste tillatte konsentrasjoner. Statens krav i denne saken kan variere betydelig i forskjellige land.

For eksempel, i Europa er det tillatte nivået (EU MRL - ​​maksimal restgrense) for antibiotika fra tetracyklingruppen 100 μg/kg (ppb). Og i Russland - bare 10 mcg/kg. Det er ulovlig å overskride disse nivåene.

Deteksjonsmetoder

Det er mange måter å oppdage antibiotika i melk. Blant dem:

• raske tester;
• mikrobiologiske metoder;
• enzymimmunoassay testsystemer;
• analytiske analysemetoder (HPLC, etc.).

Hver av disse metodene har sine egne fordeler og ulemper. Når du sammenligner dem, brukes vanligvis følgende indikatorer:

• analyse tid;
• behovet for ekstra utstyr;
• kompleksiteten av prøveforberedelsen;
• spekter av påvisbare antibiotika;
• pris.

De mest brukte testene på gårder, melkeoppsamlingssteder og melkeforedlingsanlegg er hurtigtester og hemmende mikrobiologiske tester. Hovedårsaken er at de kombinerer relativ enkelhet, akseptabel analysetid og lave kostnader.

Nedenfor vil vi vurdere disse typene tester, bestemme deres positive og negative aspekter og finne ut om de kan erstatte hverandre.

Ekspresstester

Hurtigtester bruker spesifikke antistoffer for å binde et antigen (antibiotikum). Dette resulterer i en fargeendring på stripen, noe som indikerer et positivt eller negativt resultat.

Det særegne med disse testene er at de er i stand til å oppdage bare én eller flere grupper antibiotika samtidig. De mest brukte testene i Ukraina er:

• til kloramfenikol;
• B-laktamer og tetracykliner;
• tester for samtidig bestemmelse av 4 grupper antibiotika: β-laktamer, tetracykliner, streptomycin og kloramfenikol.

Fordeler med hurtigtester

Den største fordelen med raske tester er den høye analysehastigheten: tiden som kreves for å utføre testen varierer fra 2 til 10 minutter.

I tillegg har tester uten behov for inkubasjon (krever ikke tilleggsutstyr) nylig blitt stadig mer populære, noe som gjør dem enkle å bruke utenfor laboratoriet.

Ulemper med hurtigtester

Samtidig analyse av én melkeprøve for alle hovedgrupper av antibiotika - som betalaktamer, tetracykliner, makrolider, sulfonamider, aminoglykosider osv. - krever imidlertid bruk av flere hurtigtester. Dette betyr at kostnadene ved analyse øker betydelig.

Mikrobiologiske hemmende tester

Driftsprinsippet for disse testene er ganske enkelt. Melken legges i ferdige testampuller og inkuberes ved en optimal temperatur på 64⁰C i en viss tid (oftest 3 timer, og det er derfor disse testene noen ganger kalles tre-timers tester).

Testampullene inneholder et næringsmedium med en sensitiv bakteriestamme (sporer av Bacillus strearothermophius calidolactis) og en surhetsindikator som endrer fargen på mediet når pH endres. Det er ved endringen i farge at tilstedeværelsen (eller fraværet) av antibiotika i melk bestemmes:

• Hvis melken ikke inneholder antibiotika eller andre hemmende stoffer, når melk tilsettes hetteglassene og temperaturen øker, begynner bakterier aktivt å utvikle seg. Som et resultat endres surheten til mediet, og fargen endres også.
• Hvis antibiotika er tilstede i melk, hemmer (undertrykker) veksten av bakterier og ingen fargeendring observeres.

Fordeler med inhibitortester

I motsetning til hurtigtester, som bare kan oppdage en eller noen få grupper antibiotika med en test, kan mikrobiologiske tester oppdage et bredt spekter av antibiotika - beta-laktamer, tetracykliner, sulfonamider, makrolider, azalider, aminoglykosider, kinoler, amfenikoler - samt andre hemmende stoffer. Derfor brukes disse testene ofte som referansetester i meieriforedlingsanlegg.

Ulemper med inhibitortester

Den eneste ulempen med disse testene er den lange testtiden. Samtidig er kostnaden for én inhibitortest lavere sammenlignet med hurtige tester, som selvfølgelig ikke kan kalles en ulempe.

Nøkkeltestindikatorer: sammenlign og velg selv

Som vi kan se, erstatter ikke hurtigtester og mikrobiologiske (hemmer)tester for å påvise restmengder av antibiotika i melk, men bare utfyller hverandre og gir maksimal sikkerhet for meieriprodukter for forbrukerne og tillit for produsentene.

I fremtidige artikler vil vi snakke mer detaljert om måter å teste melk for tilstedeværelse av antibiotika. Følg bloggen for oppdateringer.

Taras Netesa,

ledende spesialist matteknologigrupper

LLC "HIMLABORREACTIV"

Noen bønders skruppelløse tilnærming til å fôre husdyr fører til forurensning av mat med rester av ulike medisiner, inkludert antibiotika. Sistnevnte brukes ofte ikke bare til å behandle dyr, men også for å bevare fôr, forbedre kvaliteten og akselerere veksten av dyr.

På grunn av det faktum at medisinske stoffer kan forbli i animalske produkter i lang tid, kommer de inn i menneskekroppen. En stor akkumulering av antibiotika provoserer forekomsten av allergiske reaksjoner med alvorlige konsekvenser i form av angioødem, hemmer aktiviteten til fordelaktige enzymer, endrer mikrofloraen i mage-tarmkanalen og fremmer dannelsen og reproduksjonen av en stabil type mikroflora. Hva forårsaker økt innhold av kjemikalier i matvarer?

Tilstedeværelsen av legemidler i melk er en økt risiko for produksjon

Legemidler av syntetisk opprinnelse legges til husdyrkomplementær mat for å stimulere biokjemiske reaksjoner i dyrekroppen, øke produktiviteten, akselerere veksten og forbedre allmenntilstanden.

Det er åpenbart at antibiotika har en negativ innvirkning på mikrobiologiske prosesser i produksjonen av fermenterte melkeprodukter. Som et resultat kommer produkter laget med teknologi som er helsefarlig på hyllene.

Å studere dynamikken til gjæring av melkebaserte produkter, for eksempel kefir eller rømme, lar oss bestemme fraværet eller nedgangen av modning i prøver og trekke en konklusjon om massen av gjenværende kjemikalier som finnes. Tenk deg: et meieriprodukt fra en ku som ble behandlet med antibiotika vil gjøre tonnevis med melk uegnet for videre bearbeiding!

For å beskytte befolkningen mot farlige fermenterte melkeprodukter har staten godkjent basisdokumentasjon som regulerer standarden på sikkerhetsindikatorer for matråvarer og matvarer. Metoder for overvåking av hemmende komponenter er også nøye utviklet, noe som muliggjør rettidig oppdagelse og forebygging av forfalskning av produkter som selges.

Mikrobiologisk metode

GOST R 51600-2000 etablerer standarder for mikrobiologiske tester for å bestemme tilstedeværelsen og konsentrasjonen av antibiotika. For å oppnå et effektivt resultat brukes også hurtige tester, som er basert på studiet av spesifikke reseptorer fra gruppen av tetracykliner og betalaktamer.

For å fullføre én avgjørelse, trenger du ikke bruke mer enn 5 minutter. Avhengig av kjemikalietype varierer sensitiviteten til testen fra 2 til 80 μg/kg.

I samsvar med GOST bestemmes tilstedeværelsen av et antibiotikum i et meieriprodukt av diameteren på inhiberingsstedet. Metoden er basert på å teste syntetiske komponenters evne til å kombinere i et miljø med sporer av testmikrober og forhindre utviklingen av dem.

For analyse tas melkeprøver og lagres i kjøleutstyr i ikke mer enn ett døgn ved en innstilt temperatur (5±1) °C. Sporer er hentet fra et næringsmedium basert på destillert vann, glukose og gjærekstrakt.

Minimumskonsentrasjonen bestemt under analyse når 0,05 μg/ml. Den eneste ulempen med denne metoden er varigheten av prøveoppsettingen og arbeidsintensiteten til laboratorieforskning.

Immunoenzym metode

GOST 32219-2013 regulerer prosedyren for å bestemme konsentrasjonen av streptomycin og kloramfenikol i sterilisert, pasteurisert og rå kumelk. Metoden er basert på en immunoenzymreaksjon, som et resultat av at kjemiske stoffer fanges opp av en spesifikk proteinreseptor. Som et resultat dannes et sterkt kompleks som blokkerer evnen til den tekniske indikatoren til å endre fargen på produktet av prosessen som studeres.

Tilstedeværelsen av antibiotika i fermenterte melkeprodukter bestemmes visuelt. I dette tilfellet sammenligner laboratoriet fargeintensiteten til området i nærvær av syntetiske forbindelser med skyggen av kontrollområdet.

Høy ytelse væskekromatografi

GOST 33526-2015 har vært i kraft siden 2016 og lar deg nøyaktig bestemme innholdet av antibiotika i melkeprodukter. I henhold til forskriften er analyseområdet for massefraksjonen av kjemiske komponenter for gruppen tetracyklin og penicillin opptil 1,0 ppm (mg/kg).

Metoden er basert på ekstraksjon (ekstraksjon) av antibiotika fra melkeprøver. Prøver gjennomgår et ekstraktrensetrinn, hvoretter den nøyaktige massen av syntetiske stoffer bestemmes ved hjelp av spektrofotometrisk deteksjonsteknologi. Alle laboratorieprosesser foregår på en kromatograf med høyt måleområde.

Instrumentell metode

GOST 32254-2013 ble utviklet for melkeindustribedrifter og regulerer teknisk prosedyren for sertifisering og standardisering av produkter med testing av innholdet for tilstedeværelse av antibiotika.

Ved hjelp av denne metoden kan tester utføres med en nøyaktighet på minst 95 %. De er basert på binding av syntetiske stoffer til antistoffer, som forårsaker en immunokromatisk fargereaksjon. Med tanke på intensiteten av fargen, gjør laboratorieteknikeren en konklusjon om kontrollmengden av antibiotika.

Endringer i GOST-er i 2017-2018

Det er innført justeringer av noen tekniske forskrifter. Dermed ble ordet «penicillin» erstattet med «penicilliner», og avsnittet om prosedyre for administrering og metoder for å velge prøver for forskning ble lagt til. Listen over analyserbare produkter er også utvidet: bearbeidede osteprodukter, melkebasert smør, oster og pålegg.

Ekspresstester fra ATL-selskapet

For å kontrollere den kjemiske sammensetningen av fermenterte melkeprodukter, er det tilrådelig å bruke dem, som nøyaktig vil bestemme tilstedeværelsen og massen av antibiotika. Strimler med målelinjer er enkle og enkle å bruke, overholder GOST-kravene og tillater analyser utenfor laboratorieforhold. Resultatene av studien lagres i lang tid og kan brukes i fremtiden for komparativ vurdering.

«Antibiotika i melk» er ikke et nytt tema innen melkeproduksjon, men det er smertefullt for produsentene. Faktisk, i tillegg til behandling av kyr, må gården pådra seg betydelige tap under såkalt "melking" av kyr, når dyret ikke melkes inn i det generelle systemet på grunn av tilstedeværelsen av et antibiotikum fra en eller annen gruppe i melken.

Veterinærmedisinen står ikke stille og det kommer stadig nye generasjons legemidler på markedet, som ifølge produsenten ikke setter spor i melk. Men alle disse forsikringene kollapser når antibiotika bestemmes i melk ved hjelp av spesielle testsystemer.

Tester for antibiotika i melk

Jeg husker for tre år siden, tester var i bruk " Beta Star Combo", som jobbet med oppdagelsen av tetracyklinantibiotika og betalaktamer (penicillin).

Det gikk veldig kort tid og mer sensitive testsystemer kom ut, for eksempel " 4SENSOR", som er i stand til å oppdage ytterligere to grupper antibiotika; kloramfenikol og streptomycin.

Testsystem 4SENSOR

Jeg bør merke meg at alle kan lære å identifisere antibiotika i melk ved å bruke disse testene.

Under visuell dekoding sammenlignes intensiteten til to linjer (test og kontroll). Hvis testlinjen er bedre synlig enn kontrolllinjen, kan vi konkludere med at det ikke finnes antibiotika. Hvis testlinjen er litt svakere enn kontrolllinjen, kan vi snakke om tilstedeværelsen av antibiotika.

Visuell tolkning av testsystemer

"... Melk kan brukes til matformål tidligst 96 timer etter siste administrering av Mastiet Forte..."

"... Bruk av melk til matformål er tillatt 96 timer etter siste administrering av Multibay IMM til kyr..."

Det ser ut til at 4 dager og det er det, kan vi igjen melke kua vår inn i det vanlige systemet. Men det var ikke der. Ofte, etter å ha testet melk for antibiotika, identifiserer vi tilstedeværelsen av en eller annen gruppe.

Derfor, før du begynner å melke en ku inn i det generelle systemet, må du sørge for at det ikke er antibiotika i melken. Hvis du tviler på resultatet (synligheten av stripene) til testsystemet: gjør testen på nytt eller vent et par dager til.

I prinsippet, dersom du finner en eller annen gruppe antibiotika i melk, skal en vanlig veterinær alltid fortelle deg om enkelte legemidler brukes i behandling.

For eksempel ble beta-laktamer oppdaget; dette er mest sannsynlig penicillin. For eksempel er det inneholdt i stoffet "Mamifort", tetracyklin er inneholdt i "Mastitis Forte", streptomycin er inneholdt i "Multiject" og så videre...

Hvorfor er antibiotika i melk farlig?

Dette er det mest interessante spørsmålet. Jeg har min egen mening om dette, men det ville vært fint å studere ytterligere informasjon. Til min overraskelse fant jeg ingen åpenbare grunner til at melk med antibiotika ikke er tillatt å behandle. Det hele kommer ned til det faktum at antibiotika ødelegger menneskelige bein og skader visse organer.

Ja, jeg argumenterer ikke for at når du bruker antibiotika (la oss ta det vanlige kurset med å behandle en person med influensa), dør utvilsomt all den gunstige mikrofloraen i tarmene. Derfor anbefales det veldig ofte å ta bioyoghurt eller biologiske produkter, som for eksempel Linex, parallelt.

Men ingen steder har jeg lest om faren for en persons allergi mot et antibiotika. Og manifestasjonen av allergisymptomer er delt inn i generelle og lokale. Vanlige inkluderer:

anafylaktisk sjokk– plutselig blodtrykksfall, hevelse i strupehodet, pusteproblemer, hudutslett, kløe og rødhet i huden;

serumlignende syndrom– Allergi utvikler seg etter noen uker. Karakterisert av leddsmerter, hudirritasjon og feber.

Det er også syndromer: medikamentfeber og epidermal nekrolyse. Det vil si at døden er fullt mulig hvis bistand ikke gis i tide.

Og kanskje hovedfaktoren: antibiotika forstyrrer funksjonen til startkulturer i melk.

Tross alt, som vi husker, dreper de all mikroflora. Derfor er det problematisk å få tak i for eksempel cottage cheese fra melk som inneholder et antibiotikum. Som et minimum vil utbyttet av de samme ostemasseproduktene avta. Naturligvis tar ikke meieribehandlere slik melk i produksjon.

Derfor, når du velger melk, vær på vakt og velg en pålitelig produsent.

Drikk kvalitetsmelk og bli hos oss!. Dette er interessant.

Relaterte innlegg

:o");" src="http://milkfermer.ru/wp-content/plugins/qipsmiles/smiles/strong.gif" alt=">:o" title=">:o">.gif" alt="]:->" title="]:->">!}