Paglalarawan ng STD diagnostics: enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Enzyme immunoassay blood test Interpretasyon ng pagsusuri gamit ang IFA method

Ang listahan ng mga magagamit na pamamaraan ng diagnostic ay mabilis na lumalawak sa mga nakaraang dekada ay sinusubukan na pagsamahin ang mga pakinabang ng lahat ng mga nakaraang pagsubok sa mga bagong pamamaraan, na inaalis ang lahat ng kanilang mga nakaraang disadvantages.

Kamakailan, ang listahan ng mga diagnostic procedure ay lalong nagsasama ng enzyme immunoassay - isang moderno at medyo bagong pagsubok, na hindi gaanong kilala sa karaniwang tao na hindi kasangkot sa medisina. Gayunpaman, ang pamamaraan na ito ay mabilis na nakakakuha ng mga ranggo ng mga tagasunod nito sa mga kwalipikadong medikal na tauhan. Maaari mong subukang malaman kung ano ito at sa anong mga kaso dapat itong gamitin sa pamamagitan ng pamilyar sa iyong sarili sa mga tampok at pangunahing katangian nito.

Ang enzyme immunoassay ay isang instrumental na pamamaraan ng laboratoryo batay sa molekular na "antigen-antibody" na reaksyon, na nagpapahintulot sa pagtuklas ng mga partikular na protina sa mga biological na materyales (mga sample para sa pananaliksik). Ang ganitong mga protina ay maaaring mga enzyme, iba't ibang microorganism (mga virus, bakterya, fungi), protozoa, atbp.

Matapos matuklasan ang pamamaraan, binigyan ito ng pangalang ELISA test, na walang kinalaman sa pangalan ng mga natuklasan, ngunit ito ay isang pagdadaglat ng buong pangalan sa Ingles - enzyme-linked immunosorbent assay. Ginagamit ng mga doktor sa buong mundo ang pangalang ito; ang ilang mga doktor sa mga bansang nagsasalita ng Ruso ay tinatawag din sa ganitong paraan.

Ang pangunahing prinsipyo ng pamamaraan ay ang molekular na "antigen-antibody" na reaksyon.

Ang antigen ay anumang dayuhang molekula na pumapasok sa katawan ng tao bilang bahagi ng mikrobyo na nagdudulot ng sakit. Ang mga antigen ay karaniwang mga molekula ng protina. Bilang karagdagan sa mga microorganism, ang naturang "stranger" ay maaaring mga dayuhang selula ng dugo na hindi tumutugma sa grupo o Rh factor.

Bilang tugon sa pagpasok ng naturang antigen sa katawan, inilunsad ang isang immune reaction, na naglalayong protektahan laban sa anumang mga dayuhang molekula. Nangyayari ito dahil sa synthesis ng mga espesyal na ahente ng immune system - mga antibodies (immunoglobulins). Ang bawat antibody ay angkop lamang para sa isang tiyak na antigen at neutralisahin ang pathogenic na "stranger" sa pamamagitan ng pagbubuklod dito sa isang solong complex. Ito ay ang proseso ng naturang pagbubuklod na tinatawag na "antigen-antibody" na reaksyon.

Mga uri ng antibodies

Ang lahat ng antibodies (immunoglobulins) ay nahahati sa 5 uri depende sa kung anong yugto ng immune response ang lalabas ng mga ito:

Para sa mga diagnostic ng ELISA, ang mga antas ng immunoglobulin na IgG, IgM at IgA ay pinakamadalas na mahalaga. Sa pamamagitan ng kanilang mga titer, malalaman mo kung ang isang tao ay nagkaroon ng sakit bago o nahawahan kamakailan, kung siya ay nakabuo ng kaligtasan sa sakit o kung ang kanyang katawan ay walang pagtatanggol laban sa patolohiya.

Mga kalamangan at kawalan ng enzyme immunoassay

Sa ngayon, ang ELISA ay isa sa mga pinakatumpak at sensitibong pamamaraan. Ito ay pinagtibay ng mga espesyalista sa iba't ibang larangan ng medisina at patuloy na pinapalawak ang saklaw ng aplikasyon nito.

Mga kalamangan ng pamamaraan

  • Mataas na katumpakan ng nakuhang data.
  • Sensitivity (nagbibigay-daan sa iyo na makita ang kinakailangang sangkap kahit na may kaunting presensya ng pathogen sa sample).
  • Posibilidad ng diagnosis sa mga unang araw ng sakit o sa panahon ng pagpapapisa ng itlog.
  • Bilis ng pagkuha ng data kumpara sa iba pang mga pamamaraan ng katulad na katumpakan.
  • Mataas na automation ng proseso at minimal na partisipasyon ng tao, na binabawasan ang error ng tagapalabas.
  • Pagkuha ng data sa yugto ng proseso ng pathological at ang pagiging epektibo ng napiling therapy.
  • Walang sakit at minimally invasive kapag nangongolekta ng materyal.

Mga disadvantages ng pamamaraan

  • Sa karamihan ng mga kaso, pinapayagan ka nitong matukoy ang tugon ng katawan sa isang pathogenic agent, at hindi ang pathogen mismo.
  • Bago ang pagsusuri, ang pinaghihinalaang sakit ay dapat malaman nang eksakto, dahil ang pagsusulit ay lubos na tiyak.
  • Ang posibilidad ng mga maling tagapagpahiwatig na sanhi ng mga teknikal na isyu, pag-inom ng mga gamot, ang sabay-sabay na pagkakaroon ng ilang mga malalang sakit o metabolic disorder sa katawan ng pasyente.
  • Ang interpretasyon ng mga resulta ay dapat lamang gawin ng isang mataas na kwalipikadong espesyalista, dahil upang bigyang-kahulugan ang data na nakuha ito ay kinakailangan na magkaroon ng espesyal na pagsasanay at isang malaking supply ng medikal na kaalaman sa isang tiyak na lugar.
  • Ang ELISA ay isang medyo bihirang pagsubok, kaya hindi ito ginagawa sa lahat ng diagnostic laboratories.
  • Ang pamamaraan ay medyo mahal, dahil bilang karagdagan sa mga reagents, ang laboratoryo ay dapat magkaroon ng maraming mamahaling kagamitan at mga sample ng antigens na ginawa sa mga espesyal na institusyon.

Sa anong mga kaso ginagamit ang enzyme immunoassay?

Napakalawak ng buong listahan ng mga indikasyon para sa enzyme immunoassay;

Kadalasan, ang ELISA ay ginagamit para sa mga sumusunod na layunin:

  • pagtuklas ng mga nakakahawang sakit;
  • diagnosis ng mga sakit na nakukuha sa pakikipagtalik;
  • pagpapasiya ng immune status o mga indibidwal na autoimmune na sakit;
  • pagkakakilanlan ng mga marker ng tumor;
  • pagpapasiya ng mga hormone.

Sa kaso ng mga nakakahawang sakit at viral, ang pamamaraan ay nagpapahintulot sa amin na makilala ang mga sumusunod na pathologies:

Bilang karagdagan, pinapayagan ka ng ELISA na mabilis at epektibong matukoy ang estado ng infarction, masuri ang potensyal ng reproduktibo ng katawan, kilalanin ang mga alerdyi, ang kanilang pinagmulan, atbp.

Ang immunoenzyme technique ay ginagamit upang magsagawa ng mga klinikal na pag-aaral sa panahon ng pagbuo ng mga bagong gamot at sa pagtatasa ng kanilang epekto sa katawan ng tao.

Mga uri ng mga sample at pamamaraan ng kanilang pagpili para sa pananaliksik

Kadalasan, ang test material para sa enzyme immunoassay ay dugo, na kinuha mula sa antecubital vein ng pasyente. Ang koleksyon ng sample ay isinasagawa sa isang walang laman na tiyan, pangunahin sa umaga. Pagkatapos ng sampling, ang mga nabuong cell na nakakasagabal sa pananaliksik ay pinaghihiwalay at inalis sa dugo, na nag-iiwan lamang ng serum.

Kapag nag-diagnose ng mga impeksyon sa genitourinary, ang materyal ay madalas na nagiging smears mula sa mauhog na tisyu ng mga genital organ, mucus mula sa urethra o cervix, mga sample mula sa tumbong, mga scrapings mula sa mga erosions o ulcers sa lugar ng singit at mula sa iba pang bahagi ng katawan. Maaaring kunin ang mga swab mula sa oral cavity, gayundin mula sa nasopharynx.

Minsan ginagamit ang enzyme immunoassay sa obstetric at gynecological practice sa panahon ng pagbubuntis upang matukoy ang estado ng amniotic fluid. Sa kasong ito, ang amniotic fluid ay nagiging sample. Upang gawin ito, ang isang maliit na halaga ng likido ay kinuha sa pamamagitan ng pagbubutas sa amniotic sac na may mahabang karayom. Ang lahat ng mga manipulasyon ay isinasagawa gamit ang mga sterile na instrumento upang mabawasan ang mga posibleng panganib.

Kadalasan ang materyal ay nagiging cerebrospinal o serous fluid. Nangyayari ito sa lokal na kawalan ng pakiramdam, na ibinibigay sa pamamagitan ng iniksyon.

Dapat linawin ng espesyalistang nagpapadala para sa pag-aaral kung anong uri ng mga materyales ang kailangan para sa enzyme immunoassay. Kadalasan ang mga sample ng ilang uri o mula sa iba't ibang lugar ay kinukuha nang sabay-sabay. Ang doktor na nag-isyu ng referral para sa ganitong uri ng pagsusuri ay dapat ding sabihin sa pasyente ang tungkol sa mga paghahanda para sa pagbibigay ng biomaterial.

Paghahanda para sa enzyme immunoassay

Upang madagdagan ang katumpakan ng data na nakuha pagkatapos ng immunoassay ng enzyme, ang paghahanda para sa pagpili ng materyal ay dapat na ang mga sumusunod:

  • 10 araw bago ang pag-aaral, ibukod ang mga antibiotic, antiviral at antimycotic na gamot;
  • para sa isang araw kinakailangan na ibukod ang alkohol, paninigarilyo at pagkuha ng mga narkotikong sangkap;
  • sa parehong panahon, kinakailangan upang maiwasan ang pisikal na labis na pagsisikap;
  • Babalaan ang nagrereseta tungkol sa lahat ng mga gamot na iniinom ng pasyente;
  • Ipaalam sa iyong doktor kung ikaw ay buntis o pinaghihinalaan na ikaw ay buntis.

Pinakamainam kung ang mga materyales sa pagsubok ay kinokolekta sa umaga nang walang laman ang tiyan.

Kung ang diagnosis ay naglalayong matukoy ang estado ng mga antas ng hormonal, kung gayon ito ay mahalaga upang matiyak na ikaw ay nasa isang kalmado na estado sa araw bago at maiwasan ang pag-igting ng nerbiyos. Para sa mga kababaihan, ang pagbibigay ng dugo para sa mga hormone ay malinaw na tinutukoy ng panahon ng buwanang cycle, na sasabihin ng doktor sa oras ng appointment.

2-3 araw bago ang pag-sample, kailangan mong ibukod ang mga pritong at mataba na pagkain mula sa menu, at bago ang pagsubok para sa hepatitis, huwag kumain ng mga citrus na prutas o anumang iba pang orange o dilaw na prutas at gulay.

Interpretasyon ng mga resulta ng enzyme immunoassay

Ang resulta ng isang kwalitatibong pag-aaral ay karaniwang ipinahihiwatig ng mga palatandaang “+” (natukoy) o “-” (hindi nahanap).

Batay sa pagkakaroon o kawalan ng ilang mga grupo ng mga immunoglobulin, ang mga sumusunod na konklusyon ay maaaring iguguhit:

  • JgM (-), JgG (-), JgA (-) - ang kaligtasan sa sakit ay ganap na wala (ang katawan ay hindi pa nakatagpo ng ganitong uri ng antigen);
  • JgM (-), JgG (+), JgA (-) - nagkaroon ng nakaraang banggaan sa antigen na ito o sa bakuna;
  • JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - talamak na proseso ng pathological (malamang na pangunahin);
  • JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - talamak na proseso;
  • JgM (+), JgG (+), JgA (+) - relapse;
  • JgM (-) - yugto ng pagbawi.

Ang dami ng mga halaga ay nagdadala ng malaking pag-load ng impormasyon, ngunit ang dumadating na manggagamot lamang ang makakapagbigay-kahulugan sa kanila, batay sa mga nakaraang indikasyon, edad ng pasyente, at mga pamantayan para sa bawat partikular na sakit. Ito ay para sa kadahilanang ito na hindi mo maaaring suriin ang mga resulta sa iyong sarili.

Gaano katagal kailangan mong maghintay para sa mga resulta?

Ang pamamaraan na ito ay may maraming mga varieties, depende sa kung saan ang panahon para sa pagkuha ng data sa kamay ay tinutukoy. Ang average na tagal ng mga diagnostic ng ELISA ay 4-6 na oras, na nagpapahintulot sa iyo na magbigay ng mga resulta sa mismong susunod na araw.

Ang pinakamahabang pamamaraan ay tumatagal ng hanggang 10 araw, halimbawa, sa kaso ng impeksyon sa HIV.

Sa kaso ng kagyat na pangangailangan, posible na gumamit ng mga express na pamamaraan, kung saan ang sagot ay nakuha sa loob ng 1-2 oras.

Saan ako makakakuha ng pagsusuri sa ELISA?

Dahil ang mga kagamitan para sa ganitong uri ng mga diagnostic ay medyo mahal, hindi lahat ng mga laboratoryo ay maaaring bumili nito. Bilang karagdagan, ang mga pagsubok na naglalaman ng mga partikular na antigen ay may limitadong buhay ng istante (karaniwan ay mga 1 taon) at samakatuwid ay nangangailangan ng patuloy na pag-update.

Para sa mga kadahilanang ito, ang mga pampublikong institusyong medikal ay hindi palaging may mga laboratoryo ng ELISA. Kadalasan kinakailangan na makipag-ugnayan sa malalaking pribadong medikal o malalaking diagnostic center.

Upang magsagawa ng pagsusulit sa ELISA, ang laboratoryo ay dapat magkaroon ng isang espesyal na lisensya, at ang mga kawani at mga katulong sa laboratoryo ay dapat sumailalim sa espesyal na pagsasanay.

Kadalasan, ang isang tiyak na diagnostic center o laboratoryo ay inirerekomenda ng doktor na nagre-refer sa pasyente para sa pagsusuri.

Halaga ng enzyme immunoassay

Ang presyo para sa pag-aaral na ito ay depende sa rehiyon ng bansa at sa antas ng klinika na nagbibigay ng serbisyo. Sa Moscow, ang pinakamababang presyo para sa pagtukoy ng isang antigen ay nagsisimula sa 700 rubles. Kung kinakailangan upang matukoy ang ilang mga immunoglobulin nang sabay-sabay, ang presyo ay idaragdag.

Sa kaso ng kagyat na pagsusuri, ang gastos ay tumataas ng 150-200 rubles. para sa bawat antigen.

Sa kabila ng medyo mataas na gastos, ginagawang posible ng enzyme immunoassay na gawin ang pagsusuri sa pasyente bilang nagbibigay-kaalaman at mabilis hangga't maaari, na binabawasan ang oras bago magsimula ang paggamot at nagbibigay-daan para sa mas mabilis na pag-stabilize ng kondisyon ng tao.

Ang video na ito ay nagpapakita ng pelikulang "Mga Pangunahing Kaalaman ng enzyme immunoassay".

Salamat sa pag-unlad ng modernong gamot, kapag gumagawa ng diagnosis, ang isang doktor ay hindi na kailangang tumuon sa mga hindi direktang pagpapakita ng mga sakit o magsagawa ng mga multi-stage na pagsubok sa laboratoryo. Ito ay sapat na upang magsagawa ng isang pagsusuri na kumpirmahin o pabulaanan ang sinasabing paunang pagsusuri.

Ang pamamaraang ito ay enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) - pinapayagan ka ng pag-aaral na ito na makita ang mga tiyak na antibodies at antigens na katangian ng iba't ibang mga pathologies, na lubos na nagpapabilis sa pagsusuri.

Ang pagsusuri sa ELISA ay isang pagsubok sa laboratoryo (paraan) na tumutulong na matukoy ang presensya o kawalan ng ilang antibodies sa katawan upang labanan ang virus at ang dami ng mga ito.

Ang batayan ng pag-aaral ay ang natural na reaksyon ng antigen (isang bagay na nakakapinsala sa katawan) - antibody (isang protina na sumisira sa mga nakakapinsalang bagay), na nagpapahintulot sa amin na makita ang pagkakaroon ng iba't ibang mga virus at bakterya.

Ang ELISA ay isang natural na immune response ng katawan - ang interaksyon ng isang antibody na may kaukulang antigen.

Kaya, sa panahon ng ELISA, ang mga antigen o antibodies ay idinagdag nang paisa-isa sa test tube na may materyal, pagkatapos nito ay natutukoy ang konsentrasyon ng mga nagresultang antigen-antibody complex.

Kung ang mga tugma ay nabuo, pagkatapos ay lumitaw ang mga immune complex, kung gayon ang isang enzymatic na reaksyon ng pangulay na may pinagsamang molekula ay nangyayari. Ito ay salamat sa pagbabago ng kulay sa panahon ng enzymatic na indikasyon na ang sakit ay nakilala pagkatapos suriin ang antas ng tinutukoy na tambalan.

Ang mga immunoglobulin ng tao ay naiba sa ilang mga klase na naiiba sa bawat isa sa mga katangian, istraktura at antigenic na katangian ng mabibigat na kadena (H chain). Ang lahat ng mga mammal, kabilang ang mga tao, ay may limang H-chain, na tumutukoy sa pag-aari ng mga immunoglobulin sa kaukulang klase: G, M, A, D, E.

Ang bawat klase ay naiiba sa bawat isa sa mga biological na katangian, at ang kakayahang magbigkis ng mga antigen, at ang bilis at lakas ng koneksyon sa molekula.

Ang mga function ng bawat immunoglobulin (Ig) ay magkakaiba:

Ang dami sa katawan Mga pag-andar Half-life (araw) Ibig sabihin
G70% Bumuo ng passive immunity sa bagong panganak;

kinakailangan para sa immune response

mapabuti ang phagocytosis,

21-24 magbigay ng pangmatagalang humoral immunity laban sa mga nakakahawang sakit
M5-10% kinakailangan upang maisaaktibo ang phagocytosis,

may kakayahang magbigkis ng 5 molekula ng antigen,

5 Nagbibigay ng pangunahing tugon sa immune
A10-15 Neutralize ng mga lason at mga virus

kinakailangan para sa pagbuo ng maagang kaligtasan sa sakit

Ang paglitaw ng mga immunoglobulin ay nangyayari kasama ang isang kakaibang "kadena" - lgM lgG, ganito ang reaksyon ng katawan sa hitsura ng isang antigen sa katawan. Sa panahon ng mga diagnostic sa laboratoryo, ang konsentrasyon ng tatlong pangunahing immunoglobulin ay nasuri - G, M, A.

Mga indikasyon para sa pagsusuri sa immunoglobulin

Ang pagsusuri sa ELISA ay nagiging mas at mas popular bawat taon.

Ang ganitong pag-aaral ay nagpapabilis sa pagsusuri, at ito ay napakahalaga para sa paggamot ng mga pathologies tulad ng:

  • viral hepatitis;
  • impeksyon sa HIV;
  • cytomegalovirus,
  • Epstein-Barr virus,
  • herpes virus,
  • rubella,
  • tuberkulosis,
  • salmonellosis,
  • dysentery,
  • tick-borne encephalitis,
  • Helicobacter bacteria,
  • borreliosis,
  • tetano,
  • syphilis,
  • dipterya,
  • leptospirosis,
  • chlamydia,
  • ureaplasmosis,
  • mycoplasmosis,
  • whooping ubo.
  • mga flatworm
  • mga bulate
  • histolic amoebae,
  • panginginig sa atay,
  • Giardia,
  • toxoplasma,
  • trichinella,
  • walang kabuluhan,
  • cestodoses.

Ang ELISA ay isang natatanging marker ng mga autoimmune pathologies at malignant neoplasms.

Paghahanda para sa pagsusulit

Kapag naghahanda para sa pag-aaral, dapat mong sundin ang mga sumusunod na alituntunin:

Inirerekomenda din ng mga doktor na sumunod sa isang espesyal na diyeta - hindi kasama ang mga mataba at pritong pagkain, at kung ang pagsusuri ay isinasagawa para sa hepatitis, pagkatapos ay kinakailangan na huwag kumain ng anumang mga orange na gulay at lalo na ang mga bunga ng sitrus. Dapat kang mag-donate ng dugo sa umaga nang walang laman ang tiyan.

Ang maling-positibong pagsusuri ay nangyayari dahil sa hindi natutupad na mga rekomendasyon, lalo na ang pagkonsumo ng mataba na pagkain, na humahantong sa masyadong mataas na konsentrasyon ng triglycerides sa plasma, kaya naman bumababa ang conductivity ng ELISA.

Sample na pamamaraan ng pagkolekta

Maaaring gamitin ang whole blood, serum o venous blood plasma bilang test material. Ang materyal ay nakolekta, kadalasan mula sa ulnar vein, gamit ang isang disposable needle at isang vacuum tube ay kinakailangan;

Upang matiyak ang katumpakan ng resulta, mahalaga na sumunod sa tamang pamamaraan ng sampling - ang pagbutas ng sisidlan mismo at ang mga nakapaligid na tisyu ay dapat isagawa sa isang pagmamanipula, samakatuwid ang isang maikling karayom ​​na may malaking diameter ay ginagamit, upang ang ang tapat ng dingding ng ugat ay hindi napinsala at ang mga pulang selula ng dugo ay hindi napinsala.

Gayundin, upang mapanatili ang integridad ng mga pulang selula ng dugo, kinakailangan para sa dugo na dumaloy pababa sa mga dingding ng test tube.

Sa panahon ng pag-iimbak ng materyal, ang posibleng ionization ay dapat na iwasan; bilang karagdagan, ang materyal ay hindi dapat makipag-ugnay sa mga natitirang disinfectant, samakatuwid ang isang disposable plastic tube lamang ang ginagamit, na minarkahan ng pangalan ng pasyente, petsa at oras ng paghahatid ng materyal.

Kung kinakailangan ang panandaliang pag-iimbak ng materyal sa pagsubok, kung gayon ang isang silid ng pagpapalamig na may temperatura na 2-4 o C ay ginagamit, kung kinakailangan ang mas mahabang imbakan, kung gayon ang materyal ay nagyelo sa temperatura na -20 o C.

Paano ginagawa ang pagsusuri

Matapos ihanda ang materyal na pinag-aaralan, sinisimulan ng katulong sa laboratoryo ang mga kinakailangang manipulasyon. Para sa layuning ito, ang isang bilang ng mga espesyal na hanay ng mga antigens ay ginagamit, na may kakayahang pukawin ang tugon ng katawan sa isang nagpapawalang-bisa, ito ay iba't ibang mga impeksiyon, mga hormone, at mga allergens.

Ang inaasahang reaksyon ng antigen-antibody ay ganito ang hitsura:

  • Ang pangunahing reaksyon ay isang nakitang Ig (Ab) at isang purified pathogen antigen (Ag).
  • Upang makita ang mga nagresultang immune complex, isang bagong immunological reaction ang sumusunod, kung saan ang antigen ay isang bound specific Ig, at ang antibody para dito ay isang conjugate Ig (Ab).
  • Ang huling yugto ay isang reaksyong enzymatic, kasama ang isang molekula ng katalista ng conjugate. Ang substrate ay isang chromogen (hindi kulay), na nagiging kulay sa panahon ng reaksyon, at ang intensity ng kulay ay tinutukoy ng quantitative indicator ng immunoglobulin sa sample.

Sa ngayon, maraming iba't ibang mga opsyon sa ELISA ang nabuo, ngunit walang malinaw na pag-uuri ng mga ito.

Ang mga modernong klinikal na diagnostic na laboratoryo ay karaniwang gumagamit ng heterogenous (solid-phase) na ELISA, kung saan ang solid phase ay nangangahulugan ng pagsipsip ng mga antigens o antibodies sa solid na ibabaw ng mga espesyal na balon na matatagpuan sa isang polystyrene microplate ang pamamaraan ay nahahati sa direkta at hindi direktang ELISA.

Sa pamamagitan ng direktang ELISA, ang ipinakilala na antigen ay naayos sa panahon ng proseso ng pagpapapisa ng itlog sa ibabaw ng mga walang laman na balon para dito, ang materyal na pagsubok ay inilalagay sa malinis na mga balon sa loob ng 20-25 minuto, ito ay kinakailangan para sa antigen na ilakip sa kanilang ibabaw; Pagkatapos nito, idinagdag ang kinakailangang antibody. Susunod, ang materyal ay nananatili para sa isang tiyak na oras upang bumuo ng mga bono.

Ang mga antibodies ay palaging idinagdag nang labis, kaya kahit na naroroon ang mga ito, ang mga hindi nakatali na antigen ay nananatili sa sample, at kung walang mga antigen, kung gayon ay walang mga koneksyon. Upang alisin ang mga "dagdag" na antibodies, ang decantation ay isinasagawa, pagkatapos ay ang mga antibodies lamang na lumikha ng isang bono sa antigen ay nananatili.

Sinusundan ito ng isang reaksyon ng enzymatic - pagdaragdag ng isang solusyon na may isang enzyme sa mga balon, pagkatapos kung saan ang mga nagresultang mga bono ay may kulay.

Sa hindi direktang pamamaraan ng ELISA, ginagamit ang mga antibodies na paunang pinagsama sa substrate ng reaksyong enzymatic; sa kasong ito, ang koneksyon ng mga antibodies sa antigen ay nangyayari sa panahon ng proseso ng pagpapapisa ng itlog, pagkatapos kung saan ang pagpapakilos ng mga bono sa ibabaw ng mga balon ay nangyayari, at ang conjugate at substrate-chromogenic reagent ay idinagdag pagkatapos ay kulayan ang reaksyon.

Kaya, ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng hindi direkta at direktang mga pamamaraan ay hindi ang pagdirikit ng materyal sa ibabaw ng malinis na mga balon, ngunit ang pagbubuklod sa antigen na hindi kumikilos sa plato.

Ang reaksyon ay huminto gamit ang mga dalubhasang aparato, pagkatapos ang bawat balon ay sumasailalim sa isang proseso ng photometric, na sinusundan ng isang paghahambing na paglalarawan ng resulta na nakuha sa mga dati nang isinagawa na mga sample ng kontrol.

Kung ang isang pagtaas sa optical density ay napansin sa sample, kung gayon ang konsentrasyon ng mga tiyak na antibodies sa resulta ng pagsubok ay na-overestimated din.

Kailan magiging handa ang pagsusuri?

Ang pag-aaral ay hindi tumatagal ng maraming oras; mula sa pag-sample ng dugo hanggang sa pagtanggap ng resulta, ito ay tumatagal mula 1 hanggang 10 araw, depende sa mga hakbang sa diagnostic.

Mga resulta ng pagsusulit at ang kanilang interpretasyon

Ang form ng resulta ng diagnostic na natanggap ng pasyente ay nagpapahiwatig ng negatibo o positibong resulta para sa ilang mga klase ng immunoglobulins, at ipinapahiwatig din ang isang quantitative indicator ng iba't ibang klase ng antibodies.

Posible ang iba't ibang interpretasyon ng mga resulta:

  1. IgM (+) (IgA, IgG ay hindi natukoy) - proseso ng pagpapagaling;
  2. IgM (-);IgG (+), IgA (+) - talamak na nakakahawang patolohiya;
  3. IgM, IgG, IgA (lahat ay may - kahulugan) - kakulangan ng mga mekanismo ng proteksyon sa mga impeksyon;
  4. IgG (+/-) at IgA (+/-), IgM (+) – matinding proseso;
  5. IgM (-), IgA (-), IgG (+) – post-infectious immunity;
  6. IgM, IgG, IgA (+) - talamak na patolohiya sa talamak na yugto.

Kaya, halimbawa, kung ang IgG at IgM ay nakita, kung gayon ang pasyente ay maaaring magkaroon ng isa sa mga sumusunod na sakit:

  • viral hepatitis;
  • cytomegalovirus;
  • buni;
  • bulutong;
  • chlamydia;
  • impeksyon ng staphylococcal o streptococcal.

Ang enzyme immunoassay ay madalas na inireseta para sa mga pag-aaral sa hormonal ang mga pamantayan ay ipinapakita sa talahanayan:

Pangalan ng hormone Sahig Norm
1 thyroglobulinm/fHanggang sa 70 IU/ml
2 thyroxinem/f64-146 nmol/l
3 triiodothyroninem/f1.8-2.8 nmol/l
4 Libreng thyroxinem/f11-25 pmol/l
5 Libreng triiodritoninm/f4.49-9.3 pmol/l
6 Testosterone, dehydrotestosteroneAT0.5-10 mU/l

Ang pagsusuri sa ELISA ay isang diagnostic test na nagbibigay-daan sa iyo upang masuri ang posibilidad ng pagbuo ng mga oncological pathologies. Gayunpaman, ang interpretasyon ng mga resulta ay isinasagawa lamang ng dumadating na manggagamot.

Kahulugan ng mga resulta ng pagsubok

Ang ELISA ay angkop para sa pag-detect ng iba't ibang anyo ng mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik, kabilang ang syphilis, at kadalasang ginagamit para sa pagsusuri sa mga buntis na kababaihan.

Salamat sa pag-aaral na ito, maaari mong malaman kung gaano katagal naganap ang impeksyon at ang yugto ng sakit sa oras ng pag-aaral:

  • Ang immunoglobulins M ay nagpapahiwatig ng tagal ng sakit;
  • IgA - ang pasyente ay nahawaan ng higit sa 30 araw na nakalipas;
  • Nakikita ang IgG sa "tugatog" ng mga sakit, o sa sandaling natapos ang therapy.

Sa panahon ng pag-aaral, ang mga balon sa plato na may negatibong tagapagpahiwatig ay nananatiling walang kulay, at ang mga positibo ay nagiging maliwanag na dilaw. Kung ang kulay ng mga positibong balon ay hindi tumutugma sa kulay ng kontrol, kung gayon ang resulta ay maituturing na kaduda-dudang at kailangan ang isang paulit-ulit na pagsubok.

Ang enzyme immunoassay ay ang unang hakbang sa pag-diagnose ng HIV. Ang pagsusuri ay hindi maaaring isagawa kaagad pagkatapos ng pinaghihinalaang impeksyon, kinakailangan na maghintay hanggang sa katapusan ng panahon ng pagpapapisa ng itlog (mula 14 na araw hanggang 6 na buwan).

Sa panahon ng pagsusuri, tinutukoy ang mga antibodies sa HIV-1 at HIV-2, hinahanap ang mga antibodies ng klase G, na kadalasang lumilitaw sa mas huling yugto, at hinahanap ang mga antibodies ng klase A at M sa mga unang yugto (sa panahon ng pagpapapisa ng itlog) .

  • kung ang unang pagsusuri ay nagbibigay ng isang positibong resulta, ang dugo ay muling susuriin ng isa pang laboratoryo technician;
  • ang paulit-ulit na positibong resulta ay nagpapahiwatig ng muling pagkuha ng materyal,
  • Kung ang resulta ay paulit-ulit, ang pasyente ay inireseta ng immunoblotting.

Ang huling konklusyon tungkol sa pagkakaroon ng impeksyon sa HIV ay ibinibigay lamang pagkatapos ng resulta ng immunoblotting.

Ang ELISA ay ginagamit din bilang isang diagnostic test para sa tuberculosis, ngunit kahit na ang pasyente ay may mga antibodies sa patolohiya na ito, hindi ito palaging kumpirmahin ang pagkakaroon ng tuberculosis, kaya ang ELISA ay kadalasang ginagamit bilang isang pamamaraan ng paglilinaw, o upang masuri ang isang nakatagong extrapulmonary form.

IgG - talamak na yugto ng pagsalakay

IgA – naganap ang impeksyon mahigit 30 araw na ang nakalipas
IgG - ang pagsalakay ay nasa talamak na yugto
IgG – kinukumpirma ang diagnosis at ipinapakita ang pagiging epektibo ng therapy

Mga kalamangan at kahinaan ng pagsusuri

Ang ELISA ay may maraming mga pakinabang, na nagpapaliwanag ng katanyagan nito sa mga doktor at pasyente, ito ay:

  • mataas na katumpakan ng mga resulta,
  • abot-kayang presyo,
  • mabilis na resulta,
  • pagkilala sa yugto ng sakit,
  • pagkontrol ng sakit sa paglipas ng panahon.

Gayunpaman, kasama ang mga pakinabang, mayroon ding kawalan - sa mga bihirang kaso, ang pagsusuri ay maaaring maling positibo o maling negatibo.

Bakit maaaring hindi mapagkakatiwalaan ang resulta

Ang mga error bilang resulta ay maaaring mangyari dahil sa mga teknikal na paglabag;

Ang huling resulta ay naiimpluwensyahan din ng paggamit ng pasyente ng mga gamot at metabolic disorder. Para sa mga kadahilanang ito, ang isang positibong resulta para sa HIV at oncopathology ay nangangailangan ng mga paulit-ulit na sample.

Gastos ng pag-aaral

Ang presyo ng ELISA ay nag-iiba depende sa direksyon ng diagnosis (RUB):

  • hepatitis 250 -900;
  • mga virus – 250 -1000;
  • HIV – 250-350;
  • helminthic infestations – 280 – 900;
  • syphilis -150-250;
  • impeksyon sa fungal 400-500.

Format ng artikulo: Lozinsky Oleg

Video tungkol sa pagsusuri sa ELISA

Paano isinasagawa ang pagsusuri sa ELISA:

Enzyme immunoassay(o ELISA para sa maikli) ay isang pagsubok sa laboratoryo na tumutulong sa paggawa ng tumpak na pagsusuri, pagtukoy ng mga nakatagong sakit, pagtukoy ng predisposisyon sa ilang mga sakit, at pagsubaybay din sa bisa ng iniresetang therapy. Sa panahon ng pag-aaral, ang mga antigen na katangian ng mga tiyak na pathogen at antibodies sa kanila ay nakita sa serum ng dugo ng pasyente.

Ano ang punto

Upang maunawaan ang prinsipyo ng ELISA, kailangang tandaan kung paano gumagana ang immune system ng katawan, kung ano ang "antigen" at "antibodies", at kung anong mga function ang ginagawa nila.

Ang antigen ay isang molekula na nagdadala ng ilang impormasyon tungkol sa isang cell. Kung ang isang dayuhang antigen ay pumasok sa katawan, ang mga antibodies (o immunoglobulins (Ig)) bilang tugon sa hitsura ng isang dayuhang mikroorganismo sa katawan, ay nagbubuklod dito at kilalanin kung ito ay sarili o isang dayuhan Kapag tumatanggap ng isang "banyaga". signal, ang mga antibodies ay nagsisimulang sirain ang potensyal na mapanganib na bagay na ito ay tinatawag na "antigen" na pakikipag-ugnayan -antibody immune complex. Ang pamamaraan ng ELISA ay nakabatay dito.

Mga indikasyon

Ang pagsusuri ay malawakang ginagamit upang masuri ang iba't ibang uri ng sakit. At kung ano ang lalong mahalaga ay ang pag-aaral na ito ay lubos na tumpak na nag-diagnose ng mga sakit na nangyayari sa katawan nang tago, nang walang mga sintomas.

Sa tulong nito matutukoy mo:

  • mga nakakahawang sakit na nakukuha sa pakikipagtalik (chlamydia, ureaplasmosis, mycoplasmosis, syphilis, herpes, HIV, atbp.);
  • toxoplasmosis, tuberculosis, hepatitis, tigdas, atbp.;
  • mga problema sa autoimmune;
  • oncology;
  • mga sex hormone;
  • mga thyroid hormone;
  • allergy.

Ang ELISA ay maaaring makakita ng mga marker ng sakit sa puso. Bilang karagdagan, inireseta upang suriin ang pagiging epektibo ng kurso ng paggamot, pati na rin bago ang ilang mga uri ng mga interbensyon sa kirurhiko.

Paghahanda

Ang dugo para sa pananaliksik ay kinuha mula sa isang ugat sa isang walang laman na tiyan, mas mabuti sa umaga.

Ang araw bago mo dapat pigilin ang sarili mula sa alak, matamis na inumin, kape at isang malaking hapunan. Bilang karagdagan, ang mga resulta ng mga tagapagpahiwatig ay maaaring maapektuhan ng paggamit ng ilang mga gamot, kaya ang konsultasyon sa iyong doktor ay kinakailangan.

Ang paninigarilyo ay dapat na iwasan 4 na oras bago ang pamamaraan.

Enzyme immunoassay blood test sa ON CLINIC

Ang internasyonal na sentro ng medikal na ON CLINIC ay nilagyan ng sarili nitong laboratoryo, na mayroong internasyonal na sertipiko ng kontrol sa kalidad. Dito, ang mga may karanasan at kwalipikadong mga espesyalista ay nagsasagawa ng iba't ibang uri ng pagsusuri (higit sa 1000 mga item).

Kabilang sa mga pakinabang ng pamamaraang ito, maaaring i-highlight ng isa ang katotohanan na nakita na ito sa pinakamaagang yugto ng pag-unlad ng sakit. Ang sensitivity ng pagsubok ay 90%. Ang pag-aaral ay tumpak na nagpapakita ng dynamics ng nakakahawang proseso, na nagpapahintulot sa espesyalista na subaybayan ang pagiging epektibo ng therapy. Ang buong proseso ay ganap na awtomatiko, na nag-aalis ng impluwensya ng tinatawag na "human factor".

Bilang karagdagan, ang high-precision na kagamitan ay nagbibigay-daan sa iyo na makakuha ng maaasahang mga resulta ng pananaliksik sa isang minimally maikling panahon.

Maaari mong tukuyin ang mga resulta sa parehong araw sa iyong doktor. Batay sa kanila, pipili ang doktor ng taktika sa paggamot na tama para sa iyo.

SA KLINIK: Sa mahigit 25 taon ng trabaho, milyon-milyong tao ang pumili sa amin. Samahan mo kami!

Mga doktor

Makikipag-ugnayan sa iyo ang administrator upang kumpirmahin ang iyong appointment. Ginagarantiyahan ng IMC "ON CLINIC" ang kumpletong pagiging kumpidensyal ng iyong kahilingan.

Gumagamit ang hemostasis laboratory ng MLC ng bago, napakasensitibong paraan ng ELISA - ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), isang heterogenous solid-phase immunoassay. Sa panahon ng pag-aaral, natutukoy ang pagkakaroon ng mga antibodies sa dugo ng pasyente sa mga pathogen ng iba't ibang sakit.

Halaga ng pagsusuri sa ELISA*


Bakit ka kumukuha ng enzyme immunoassay?

Ang ELISA ay ginagamit sa maraming larangan ng medisina. Sa mga taong may coronary heart disease, atherosclerosis at hypertension, ang mga antibodies ay napansin sa mga protina ng hemostatic system - thrombin, a2 macroglobulin at antithrombin 3, pati na rin sa peptide bioregulators ng coagulation system - angeotensin 2 at bradykinin.

Napatunayan ng ELISA ang pagiging epektibo nito sa prenatal diagnosis at sa pagtukoy ng fertility - ito ang AFP test (diagnosis ng spina bifida, trisomy sa fetus), mga pagsusuri para sa steroid hormones estadiol, estriol, progesterone.

Maramihang mga komplikasyon ng pagbubuntis, kawalan ng katabaan at thrombophlebitis ay pinukaw ng isang malubhang sakit na autoimmune - antiphospholipid syndrome. Ang diagnosis ng APS sa Medical Women's Center ay isinasagawa din gamit ang enzyme immunoassay: ang mga antibodies sa cardiolipin, b2-glycoprotein, prothrombin at annexin 5 ay tinutukoy.