Brug af combibest-testen til HIV-diagnose. Moderne metoder til diagnosticering af HIV-infektion Video: uddannelsesfilm fra Moskvas statsuniversitet opkaldt efter

Ejere af patent RU 2283497:

Opfindelsen angår området bioteknologi og medicin. Det enzymforbundne immunosorbent-testsystem til identifikation af spektret af antistoffer mod human immundefektvirus (HIV) af den første og anden type, den første type af gruppe O og identifikation af antigenet mod den humane immundefektvirus af den første type p24 omfatter en immunosorbent baseret på humane immundefektvirusantigener, der repræsenterer gp41 (env HIV-1 og HIV-2 gruppe O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), antistoffer mod HIV-antigen 1 p24, og detektionsreagenser, de ovennævnte HIV-antigener og HIV-antistoffer sorberet i forskellige brønde af plader til enzym-linked immunosorbent assay, og 96-brønds polystyren sammenklappelige eller ikke-adskillelige plader anvendes til sorption. Opfindelsen tilvejebringer øget følsomhed, forenkling og eliminering af subjektivitet ved evaluering af resultater. 1 løn filer, 10 borde, 1 ill.

Opfindelsen angår området bioteknologi og medicin. Anvendelse: differentieret påvisning af alle klasser af specifikke antistoffer mod humant immundefektvirusprotein 1 og 2, HIV 1 gruppe O og HIV 1 p24 antigen.

Essens: opnåelse af et enzymbundet immunosorbent-testsystem til at identificere spektret af antistoffer af alle klasser mod individuelle proteiner og HIV 1 og 2, HIV 1 gruppe O og HIV 1 p24 antigen i blodserum (plasma), immunglobuliner og humane blodprodukter i for at identificere spektret af antistoffer mod HIV 1 og 2, HIV 1 gruppe O, påvisning af HIV 1 p24 antigen og bekræftelse af positive eller tvivlsomme screeningsresultater for antistoffer mod HIV 1 og 2, HIV 1 gruppe O og HIV 1 p24 antigen.

BESKRIVELSE AF OPFINDELSEN

Laboratoriediagnose af HIV-infektion er baseret på tre områder: a) indikation af HIV og dets komponenter; b) påvisning af antistoffer mod HIV; c) bestemmelse af ændringer i immunsystemet. Blandt de eksisterende laboratoriediagnostiske metoder er de mest almindelige serologiske - påvisning af antistoffer mod virusantigener.

For at påvise antistoffer ved HIV-infektion anvendes hovedsagelig enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) og immunoblotting (IB). ELISA er baseret på immobilisering af virale antigener på plader, som patientens antistoffer binder til, og antigen-antistofkomplekset påvises ved hjælp af peberrodsperoxidase-konjugerede muse monoklonale antistoffer mod humane immunoglobuliner G og M. Metoden er ret specifik og følsom og muliggør påvisning af virusspecifikke antistoffer hos 95 % af patienterne. De resterende 5 % af tilfældene opstår i de tidlige stadier af infektion, hvor der stadig er få antistoffer i blodserumet, eller i de terminale faser af sygdommen, hvor kroppen ikke længere er i stand til at syntetisere antistoffer på grund af en kraftig udtømning af immunsystemet. Falsk-positive ELISA-resultater er også mulige, hovedsageligt hos patienter med autoimmune og onkologiske sygdomme, såvel som i tilfælde af infektion forårsaget af Eshptain-Barr-virus. I dette tilfælde en krydsreaktion af antistoffer mod rheumatoid faktor, Epstein-Barr-virus eller til antigene determinanter svarende til proteiner af det store histokompatibilitetskompleks klasse 1 og 2 (HLA-4 og DQW3) og med evnen til at binde til HIV-antigener opstår. Falsk-positive resultater er almindelige hos gravide kvinder og ældre. Hæmolyse, lipæmi og bakteriel kontaminering af serum kan også forårsage upålidelige resultater.

I denne henseende er en række metoder blevet foreslået og brugt til at teste specificiteten af ​​antistofpåvisningsresultater. Af disse metoder er den mest almindeligt anvendte reaktion "immun blotting" i modifikationen "Western Blot". Essensen af ​​metoden er som følger: i det første trin adskilles HIV-proteiner efter molekylvægt ved hjælp af polyacrylamidgelelektroforese. Elektroforetisk overførsel udføres derefter fra polyacrylamidgelen til overfladen af ​​nitrocellulosemembranen. Antigener, der overføres på denne måde, detekteres på membranen ved hjælp af indirekte analyse: membranen inkuberes med testmaterialet; de indeholdte antistoffer binder til HIV-antigener overført til en nitrocellulosemembran, derefter inkuberes membranstrimlerne med konjugatet; Når et antigen-antistof-kompleks dannes, binder konjugatet sig til det efter vask fra konjugatet og inkubation med substratet, forekommer farvning i de områder af nitrocellulose, hvor dannelsen af ​​antigen-antistof-konjugat-komplekset fandt sted. Tegningen viser eksempler på positive, svagt positive og negative immunblotresultater.

Antistoffer mod følgende proteiner (p) og glykoproteiner (gp) påvises i serum fra personer inficeret med HIV-1 og HIV-2: Tabel A.

Tabel B viser kriterierne for vurdering af resultaterne af immunblotting anbefalet af WHO og det russiske center for forebyggelse og kontrol af AIDS.

Baseret på WHO-kriterier betragtes sera, hvor antistoffer mod to vilkårlige HIV-1-kappeproteiner påvises ved IB-metoden, som positive. Hvis der er en reaktion med kun et af kappeproteinerne (gp160, gp120, gp41) i kombination med eller uden en reaktion med andre proteiner, anses resultatet for tvivlsomt. Ifølge det føderale videnskabelige og metodologiske center under Den Russiske Føderations sundhedsministerium til forebyggelse og kontrol af AIDS er det muligt at fortolke sera som positive selv i nærvær af antistoffer mod kun ét membranprotein.

Påvisningen af ​​antistoffer mod p24-antigenet kan indikere perioden for indtræden af ​​serokonvertering, da antistoffer mod dette protein vises først. Positive reaktioner med gag- og pol-proteiner uden tilstedeværelsen af ​​en reaktion med env-proteiner kan afspejle stadiet af tidlig serokonversion og også indikere tilstedeværelsen af ​​HIV-2-infektion eller en uspecifik reaktion.

Brugen af ​​immunblotting-reaktion som en ekspertmetode til diagnosticering af HIV har en række væsentlige ulemper:

1. Umuligheden af ​​at bekræfte påvisningen af ​​HIV p24-antigen 1 i tilfælde af brug af tests, der samtidig påviser antigen og antistoffer mod HIV, hvilket gør det uhensigtsmæssigt (meningsløst) at anvende screeningstest til samtidig påvisning af antigen og antistoffer mod HIV ( Bekendtgørelse fra Den Russiske Føderations sundhedsministerium nr. 292 af 30. juli 2001: "for at undersøge donorer på blodtransfusionsstationer er det nødvendigt at bruge testsystemer, der samtidigt påviser antigen og antistoffer mod HIV").

2. Kun påvisning af antistoffer af IgG-klassen. Det er umuligt fuldt ud at bekræfte de positive resultater opnået ved brug af 3. og 4. generationstest (påvisning af IgG- og IgM-antistoffer).

3. Subjektivitet i fortolkningen af ​​testvurderingen, især i tilfælde af "tvivlsomme" og "usikre" resultater og i de indledende stadier af serokonvertering (de påviste bånd på nitrocellulosemembraner i disse tilfælde er uklare, knap synlige for det blotte øje, og der er ofte uenighed, når de vurderes af forskellige personer).

4. Umulighed for automatiseret kvantitativ vurdering af analyseresultater.

5. Lavere følsomhed sammenlignet med ELISA.

6. Kort holdbarhed (under opbevaring falmer strimler af nitrocellulosemembran og kan ikke være en objektiv bekræftelse af påvisning eller ikke-påvisning af HIV i kontroversielle tilfælde).

7. Besvær med at sætte reaktionen op og opbevare (nitrocellulosemembranstrimler er meget skrøbelige og går ofte i stykker).

8. Høje omkostninger til informationssikkerhedssæt.

Et kendt reagens er et kit til samtidig bestemmelse af antigener og antistoffer mod det samme patogen, herunder HIV (DE 4236189 F1, 04/28/1994). Et testsystem, der gør det muligt at diagnosticere HIV-infektion på forskellige stadier, er dog ikke afsløret.

Formålet med den foreliggende opfindelse er at opnå et testsystem, med hvilket det er muligt at bekræfte positive eller tvivlsomme resultater af screeningstests for antistoffer mod HIV 1 og 2, HIV 1 gruppe O og HIV 1 p24 antigen ved anvendelse af tests til samtidig påvisning af antigener og antistoffer.

Den foreslåede tekniske løsning opnås ved hjælp af et enzymbundet immunosorbent-testsystem til identifikation af spektret af antistoffer mod det humane immundefektvirus (HIV) af den første og anden type, den første type gruppe O og identifikation af p24-antigenet til den humane immundefekt virus af den første type p24, kendetegnet ved, at den indbefatter en immunosorbent baseret på antigener human immundefektvirus, der repræsenterer gp41 (env HIV-1 og HIV-2 gruppe O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol) , gp36 (env HIV-2), antistoffer mod HIV 1-antigen p24 og detektionsreagenser, mens de ovennævnte HIV-antigener og HIV-antistoffer adsorberes i forskellige brønde i enzymforbundne immunosorberende assayplader.

Derudover anvendes 96-brønds polystyren sammenklappelige eller ikke-aftagelige plader til enzymimmunoassay til sorption.

Det tekniske resultat opnået med den foreliggende opfindelse er muligheden for at bekræfte positive resultater for antistoffer mod HIV 1 og 2, HIV 1 gruppe O og HIV 1 p24 antigen, høj følsomhed, muligheden for automatiseret fortolkning af resultater, hvilket eliminerer subjektiviteten af vurdering, let at udføre testen, mindre end med eksisterendessæt.

Denne tekniske løsning adskiller sig fra de kendte:

1. Brug af en plade til immunologiske reaktioner som en fastfase-bærer.

2. Samtidig brug af antistoffer mod HIV p 24 og et sæt HIV-antigener som sorbent.

Opfindelsen er illustreret ved det følgende eksempel.

De aktive principper i det udviklede testsystem "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1" er:

Immunosorbent - rekombinante antigener svarende til de strukturelle proteiner i HIV-1: gp41 (env HIV-1 og HIV 1 gruppe O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) og monoklonale museantistoffer mod HIV 1(p24)-antigen, adsorberet separat på strimler af en polystyren-sammenfoldelig plade.

For at forberede immunosorbent brug:

1. HIV-1 gp41 er et protein produceret af E. Coli stamme nr. AHIV 103.

2. HIV-1 gp120 er et protein produceret af E. Coli stamme nr. AHIV 109.

3. HIV-1 p24 er et protein produceret af E. Coli stamme nr. AHIV 105.

4. HIV-1 p31 er et protein produceret af E. Coli stamme nr. AHIV 108.

5. HIV-2 p36 er et protein produceret af E. Coli stamme nr. AHIV 106.

Konjugat 1, lyofiliseret eller flydende, er et muse monoklonalt antistof mod HIV1 p24-antigenet konjugeret med biotin.

1. Konjugat 2, lyofiliseret eller flydende, er en blanding af rekombinante antigener svarende til de strukturelle proteiner i HIV-1: gp41 (env HIV-1 og HIV 1 gruppe O), gp120 (env), p24 (gag), p31( po1); HIV-2: gp36 (env), konjugeret til biotin;

2. Konjugater 3, 4 - lyofiliseret eller flydende - streptavidin, mærket med peberrodsperoxidase;

Under forundersøgelser blev designet af testsystemet valgt, teknologien til fremstilling af dets komponenter blev udviklet, og betingelserne for at udføre enzymimmunoassay-reaktionen blev optimeret.

Ved udførelse af ELISA i testsystemet "DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1", tilsættes 25 μl konjugat-1 til pladens brønde med sorberede antistoffer mod p24, og 25 μl konjugat-1 tilsættes til brøndene med sorberede antigener 25 µl konjugat-2. Reaktionsskemaet er vist nedenfor. Derefter tilsættes 25 μl af testprøven til hver brønd. Samtidig skifter farven i brøndene med antigener fra orange til pink, og i brønden med antistoffer - fra grøn til grå. Blandingen inkuberes i 45 minutter ved 37°C på en rystemaskine (eller 1 time ved 37°C i en termostat). Derefter, uden at vaske, tilsættes 50 μl konjugat-3 i brøndene på pladen for at bestemme p24-antigenet og 50 μl konjugat-4 i brøndene til bestemmelse af antistoffer. Efter inkubation i 20 minutter ved 37°C på en rystemaskine (eller 30 minutter ved 37°C i en termostat), vaskes pladen og fremkaldes med en substratblanding. Samlet reaktionstid 1 time 25 minutter (eller 1 time 50 minutter). Det p24-antigen, der er til stede i testprøven, binder til monoklonale antistoffer mod p24, og specifikke antistoffer danner et kompleks med rekombinante antigener på pladen. Det resulterende immunkompleks af anti-p24 med p24 påvises med anti-p24-biotin-konjugater, derefter med streptavidin-peroxidase, og Ag-HIV-immunkomplekserne med At-HIV påvises med et Ag-biotin-konjugat, derefter med streptavidin- peroxidase.

Skema til opsætning af reaktionen.

Resultaterne tages i betragtning spektrofotometrisk ved to bølgelængder: 450/620-680 nm med enheden konfigureret "med luft". Lad os tage resultaterne i betragtning ved en bølgelængde på 450 nm.

Resultaterne af analysen tages i betragtning, hvis gennemsnitsværdierne for optisk densitet (OD) i brønde med K- ikke er mere end 0,2, i brønde med K+ - ikke mindre end 1,0. OP krit. beregnet med formlen:

OP krit. gp41 = gns. betyder OP K-(gp41)+0,15

OP krit. gp120 = gns. betyder OP K-(gp120)+0,15

OP krit. p24 = gns. betyder OP K-(р24)+0,15

OP krit. p31 = gns. betyder OP K-(р31)+0,15

OP krit. gp36 = gns. betyder OP K-(gp36)+0,15

OP krit. Ag p24 = gns. betyder OP k- (Ag p24)+0,04

hvor 0,15 og 0,04 er koefficienter fastsat ved statistisk behandling hos producenten. Under udviklingen af ​​testsystemet blev følgende brugt:

1. Blodserumprøver fra raske donorer (n=610).

2. Blodserumprøver fra patienter med forskellige infektionssygdomme, der ikke er relateret til HIV (akutte luftvejsinfektioner, lungebetændelse, tonsillitis, herpetic- og cytomegalovirusinfektioner, syfilis, klamydia, viral hepatitis A, B og C (n=224)).

3. Blodserumprøver fra patienter med forskellige ikke-infektionssygdomme - traumer, sygdomme i det kardiovaskulære system, onkologi (n=35).

4. Blodserumprøver fra gravide kvinder (n=40).

5. Blodserumprøver seropositive i ELISA og bekræftet i immunoblot (n=428).

6. Serumprøver med et positivt resultat opnået i enzymimmunoassay-testsystemer til samtidig bestemmelse af HIV 1.2-antistoffer og p24-antigen og et ubestemmeligt resultat ved immunoblot (n=123).

7. Internt panel af sera, der indeholder og ikke indeholder antistoffer mod HIV 1,2, testet på enzymimmunoassay-testsystemer og immunoblot registreret af Sundhedsministeriet i Den Russiske Føderation (n=21).

8. Standard "HIV 1 ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", Frankrig, kat. nr. 72217, som er et antigen opnået fra viralt lysat.

9. Virksomhedens interne standard. En prøve indeholdende p 24-antigen i en koncentration på 200 pg/ml, opnået fra det virale lysat og titreret i henhold til "HIV 1 ANTIGEN STANDARD"-firmaet "BIO RAD", Frankrig, kat. nr. 72217.

10. Standardpanel af sera indeholdende antistoffer mod human immundefektvirus type 1 (HIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P, "Medical and Biological Union", Novosibirsk.

11. Standardpanel af sera indeholdende antistoffer mod human immundefektvirus type 2 (HIV 2) - OSO-42-28-216-02P, "Medical and Biological Union", Novosibirsk.

12. Standardpanel af sera, der ikke indeholder antistoffer mod human immundefektvirus type 1 og 2 (HIV 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, "Medical and Biological Union", Novosibirsk.

Følsomheden af ​​testsystemet til påvisning af p24-antigenet blev vurderet ved hjælp af "HIV I ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD" og virksomhedens interne standard. Ved anvendelse af den interne standard blev 4 serielle 2-folds fortyndinger fra 40 pg/ml til 5 pg/ml fremstillet med normalt donorplasma, fri for HIV-antistoffer 1, 2, som fortyndingsmiddel. Den mindste mængde af påviselig antigen blev taget som følsomhedskriteriet. De opnåede data er vist i tabel 1.

For at vurdere testsystemets følsomhed til påvisning af specifikke antistoffer blev der anvendt standardpaneler af prøver indeholdende antistoffer mod human immundefektvirus (HIV 1, 2) (OSO 42-28-212-93-02P s.012, OSO 42- 28-216- 02P (HIV 2) s.003).

De opnåede data er vist i tabel 3, 4.

Den diagnostiske effektivitet af testsystemet "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" blev sammenlignet med testsystemerne "Jenskrin-HIV-Ag/At" (Bio-Rad), "DIA-HIV 1/2" (Diaprof-Med), "Vironostika HIV Uni-form II Ag/At" (Biomerioux), "Rekombinant-HIV1,2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1,2 K" (Amercard ), "HIV-1, HIV-2-ELISA-Avicenna" (Avicenna). Til dette formål blev serumprøver fra det interne panel testet i alle specificerede test. Resultaterne vist i tabel 5 indikerer den høje diagnostiske effektivitet af "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1".

Sensitivitetsundersøgelser af testsystemet "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" blev også udført med blodsera fra patienter bekræftet ved immunblotting som HIV-positive. I alt 428 prøver af sådanne sera blev testet. Der er opnået flere muligheder for at påvise antistoffer mod forskellige HIV-proteiner og p24-antigenet. Resultaterne er vist i tabel 6.

Ved testning af HIV 1 positive prøver viste 3 % af sera positivitet for gp36 (HIV 2 env). OP/OPcrit. i disse prøver ikke oversteg 2,0. Vores data om krydsreaktiviteten af ​​de ydre skalproteiner af HIV 1 (gp41) og HIV 2 (gp36) falder sammen med litteraturdataene.

Fortolkning af resultater

Analyse af test af HIV-positive sera og prøver fra standard- og interne paneler i "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" gjorde det muligt for os at udvikle kriterier til fortolkning af resultaterne af denne test. Anbefalede kriterier er angivet i tabel 7.

Baseret på disse kriterier blev alle prøver af HIV-positive sera (n=428) bestemt til at være positive i "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1". Af de 16 prøver af standardpanelet, der indeholdt antistoffer mod HIV 1, blev 14 bestemt til at være positive, og 2 blev bestemt til at være ubestemmelige. Alle 8 prøver fra standardpanelet indeholdende antistoffer mod HIV 2 blev bestemt til at være positive. Af de 10 prøver af det indre panel, der indeholdt antistoffer mod HIV 1, blev 7 bestemt til at være positive, og 3 blev bestemt til at være ubestemte.

Sensitivitetsundersøgelser af testsystemet "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" blev også udført med blodsera fra patienter, som havde et positivt resultat i enzymbundne immunosorbent-testsystemer, der samtidig påviser antistoffer og p24-antigen og ubestemt i immunblot. I alt 123 sådanne prøver blev testet. Dataene er vist i tabel 8.

Ved testning af sera med et ubestemt immunoblotresultat (n=123) i "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1", viste 72 prøver (58,5%) et positivt resultat. Af disse var 26 sera (21,1%) kun positive for p24, 20 (16,3%) - kun for antistoffer, 16 (13%) - for p24 med antistoffer mod et af proteinerne, 10 (8,1%) - på p24 med antistoffer mod to eller flere af proteinerne. Således vil testning kun for antistoffer (uden at detektere p24) identificere 30 prøver (24,4%) som positive. Påvisningen af ​​p24-antigen i testen gjorde det muligt at identificere yderligere 42 prøver (34,1%) som positive.

For at vurdere specificiteten af ​​testsystemet blev der anvendt et standardpanel af sera, der ikke indeholdt antistoffer mod HIV 1, 2 (n=20); blodserumprøver fra raske donorer (n=610), blodserumprøver fra patienter med forskellige infektionssygdomme (n=224), der ikke er relateret til HIV; blodserumprøver fra patienter med forskellige ikke-infektionssygdomme - traumer, sygdomme i det kardiovaskulære system, onkologi (n=35); blodserumprøver fra gravide kvinder (n=40). I alt 929 prøver blev testet. En prøve fra blodsera fra raske donorer viste et falsk positivt resultat - antistoffer mod gp41 og p24 blev påvist. 7 prøver af blodsera fra raske donorer og 2 prøver af blodsera fra patienter med infektionssygdomme, der ikke er relateret til HIV, viste et falsk positivt resultat for p24.

For at vurdere testsystemets specificitet blev der brugt et standardpanel af negative prøver (OSO 42-28-214-94-02p, s. 009). Specificiteten var 100%.

Studierne har således vist, at specificiteten af ​​testsystemet “DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1” er 99 %, når man undersøger blodserumprøver fra normale donorer og patienter med forskellige infektions- og somatiske sygdomme .

De opnåede data viser den høje diagnostiske effektivitet af det udviklede testsystem "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1". Testsystemet kan bruges til at detektere antistoffer mod individuelle proteiner af HIV type 1 og 2 og HIV1 p24 antigenet for at bekræfte et positivt screeningsresultat med testsystemer, der påviser antistoffer, eller testsystemer, der samtidigt påviser antistoffer og HIV1 p24 antigen. Testsystemet kan bruges som et alternativ til immunoblottest for at bekræfte positive resultater, samt til at studere dynamikken af ​​HIV-antistoffer og p24-antigen på forskellige stadier af infektion.

FORDELE VED TESTEN

1. Bekræftende enzymimmunoassay-test i tabletformat

2. Bekræftende test, der kombinerer bestemmelse af HIV 1, 2 antistofspektret og HIV 1 p24 antigen

3. Påvisning af antistoffer af alle Ig-klasser

4. Følsomhed for påvisning af p24 er mindst 5 pg/ml

5. Reducerer ubestemte resultater sammenlignet med immunblotting

6. Analysetid - 1 time 25 minutter (immunblot - fra 3 til 20 timer)

7. Visuel vurdering af tilsætningen af ​​alle komponenter og prøver.

1. Et enzymbundet immunosorbenttestsystem til identifikation af spektret af antistoffer mod det humane immundefektvirus (HIV) af den første og anden type, den første type gruppe O og identifikation af p24-antigenet mod det humane immundefektvirus af den første type p24, kendetegnet ved, at den indbefatter en immunosorbent baseret på humane immundefektvirusantigener, der repræsenterer gp41 (env HIV-1 og HIV-2 gruppe O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV -2), antistoffer mod HIV 1-antigen p24 og påvisningsreagenser, mens de ovennævnte HIV-antigener og HIV-antistoffer sorberes i forskellige brønde på plader til enzymbundet immunosorbent-assay.

2. Enzymimmunoassay-testsystem ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 96-brønds polystyren-sammenklappelige eller ikke-adskillelige plader til enzymimmunoassay anvendes til sorption.

Rettidig diagnosticering af HIV-infektion bliver en yderst vigtig foranstaltning, da tidlig behandlingsstart i vid udstrækning kan bestemme den videre udvikling af sygdommen og forlænge patientens liv. I de senere år har der været betydelige fremskridt med at identificere denne forfærdelige sygdom: Ældre testsystemer bliver erstattet af mere avancerede, undersøgelsesmetoder bliver mere tilgængelige, og deres nøjagtighed øges markant.

I denne artikel vil vi tale om moderne metoder til diagnosticering af HIV-infektion, hvor viden er nyttig til rettidig behandling af dette problem og opretholdelse af en normal livskvalitet for patienten.

HIV diagnostiske metoder

I Rusland udføres en standardprocedure for at diagnosticere HIV-infektion, som omfatter to niveauer:

• ELISA-testsystem (screeningsanalyse);
• immunblotting (IB).

Andre metoder kan også bruges til diagnose:

• hurtige tests.

ELISA testsystemer

I første fase af diagnosen bruges en screeningstest (ELISA) til at påvise HIV-infektion, som er baseret på HIV-proteiner skabt i laboratorier, der fanger specifikke antistoffer produceret i kroppen som reaktion på infektion. Efter deres interaktion med testsystemets reagenser (enzymer), ændres farven på indikatoren. Dernæst behandles disse farveændringer ved hjælp af specialudstyr, som bestemmer resultatet af den udførte analyse.

Sådanne ELISA-tests kan vise resultater inden for et par uger efter introduktionen af ​​HIV-infektion. Denne test bestemmer ikke tilstedeværelsen af ​​virussen, men detekterer produktionen af ​​antistoffer mod den. Nogle gange begynder produktionen af ​​antistoffer mod HIV i den menneskelige krop efter 2 uger efter infektion, men hos de fleste mennesker produceres de på et senere tidspunkt, efter 3-6 uger.

Der er fire generationer af ELISA-tests med varierende følsomhed. I de senere år er generation III og IV testsystemer blevet brugt i stigende grad, som er baseret på syntetiske peptider eller rekombinante proteiner og har større specificitet og nøjagtighed. De kan bruges til at diagnosticere HIV-infektion, overvåge HIV-prævalens og sikre sikkerhed ved testning af doneret blod. Nøjagtigheden af ​​generation III og IV ELISA testsystemer er 93-99% (test produceret i Vesteuropa er mere følsomme - 99%).

For at udføre en ELISA-test tages 5 ml blod fra patientens vene. Der skal gå mindst 8 timer mellem det sidste måltid og analysen (normalt udføres det om morgenen på tom mave). Det anbefales at tage en sådan test tidligst 3 uger efter den formodede infektion (for eksempel efter ubeskyttet samleje med en ny seksuel partner).

ELISA-testresultater opnås efter 2-10 dage:

• negativt resultat: indikerer fravær af HIV-infektion og kræver ikke kontakt til en specialist;
• falsk negativt resultat: kan observeres i de tidlige stadier af infektion (op til 3 uger), i de senere stadier af AIDS med alvorlig undertrykkelse af immunsystemet og med ukorrekt blodforberedelse;
• falsk positivt resultat: kan observeres i nogle sygdomme og i tilfælde af forkert blodforberedelse;
• positivt resultat: indikerer HIV-infektion, kræver udførelse af en IB og patienten kontakter en specialist på AIDS-centret.

Hvorfor kan en ELISA-test give falsk positive resultater?

Falsk-positive HIV ELISA-testresultater kan forekomme på grund af forkert blodbehandling eller hos patienter med følgende tilstande og sygdomme:

• myelomatose;
• infektionssygdomme forårsaget af Epstein-Barr virus;
• stat efter ;
• autoimmune sygdomme;
• på baggrund af graviditet;
• tilstand efter vaccination.

Af de ovenfor beskrevne årsager kan der være uspecifikke krydsreagerende antistoffer til stede i blodet, hvis produktion ikke blev fremkaldt af HIV-infektion.

I de senere år er hyppigheden af ​​falsk-positive resultater faldet betydeligt på grund af brugen af ​​generation III og IV testsystemer, som indeholder mere følsomme peptider og rekombinante proteiner (de syntetiseres ved hjælp af genteknologi in vitro). Efter introduktionen af ​​sådanne ELISA-tests faldt frekvensen af ​​falske positive resultater signifikant og er omkring 0,02-0,5 %.

Et falsk positivt resultat betyder ikke, at personen er smittet med hiv. I sådanne tilfælde anbefaler WHO at udføre endnu en ELISA-test (nødvendigvis IV-generation).

Patientens blod sendes til et reference- eller voldgiftslaboratorium med mærket "gentag" og testes ved hjælp af et IV-generations ELISA-testsystem. Hvis resultatet af den nye analyse er negativt, anses det første resultat for at være fejlagtigt (falsk positiv), og IS udføres ikke. Hvis resultatet er positivt eller tvivlsomt under den anden test, skal patienten gennemgå IB efter 4-6 uger for at bekræfte eller afkræfte HIV-infektion.

Immunblotting

En endelig diagnose af HIV-infektion kan kun stilles efter et positivt immunblotting (IB) resultat er opnået. For at udføre det bruges en nitrocellulosestrimmel, hvorpå virale proteiner påføres.

Blodprøvetagning for IB udføres fra en vene. Derefter gennemgår det en speciel behandling, og proteinerne i dets serum adskilles i en speciel gel i henhold til deres ladning og molekylvægt (manipulation udføres ved hjælp af specialudstyr under påvirkning af et elektrisk felt). En nitrocellulosestrimmel påføres blodserumgelen, og blotting ("blotting") udføres i et specielt kammer. Strimlen behandles, og hvis de anvendte materialer indeholder antistoffer mod HIV, binder de sig til de antigene bånd på IB og fremstår som linjer.

IB betragtes som positiv, hvis:

• ifølge amerikanske CDC-kriterier - der er to eller tre linjer gp41, p24, gp120/gp160 på strimlen;
• i henhold til de amerikanske FDA-kriterier har strimlen to linjer p24, p31 og en linje gp41 eller gp120/gp160.

I 99,9% af tilfældene indikerer et positivt IB-resultat HIV-infektion.

Hvis der ikke er nogen linjer, er IB negativ.

Ved identifikation af linjer med gr160, gr120 og gr41 er IB tvivlsom. Dette resultat kan forekomme, når:

• onkologiske sygdomme;
• graviditet;
• hyppige blodtransfusioner.

I sådanne tilfælde anbefales det at gentage testen med et kit fra et andet firma. Hvis resultatet efter yderligere IB forbliver tvivlsomt, er observation nødvendig i seks måneder (IB udføres hver 3. måned).

Polymerase kædereaktion

En PCR-test kan påvise virussens RNA. Dens følsomhed er ret høj, og den gør det muligt at påvise HIV-infektion inden for 10 dage efter infektion. I nogle tilfælde kan PCR give falsk-positive resultater, da dens høje følsomhed også kan reagere på antistoffer mod andre infektioner.

Denne diagnostiske teknik er dyr og kræver særligt udstyr og højt kvalificerede specialister. Disse grunde gør det ikke muligt at udføre massetest af befolkningen.

PCR anvendes i følgende tilfælde:

• at påvise HIV hos nyfødte født fra HIV-inficerede mødre;
• at påvise HIV i "vindueperioden" eller i tilfælde af tvivlsom IB;
• at kontrollere koncentrationen af ​​HIV i blodet;
• til undersøgelse af donorblod.

PCR-testen alene stiller ikke en diagnose af HIV, men udføres som en yderligere diagnostisk metode til at løse kontroversielle situationer.

Ekspres metoder

En af nyskabelserne inden for HIV-diagnostik er hurtige tests, hvis resultater kan vurderes inden for 10-15 minutter. De mest effektive og nøjagtige resultater opnås ved hjælp af immunokromatografiske test baseret på princippet om kapillærstrømning. Det er specielle strimler, hvorpå der påføres blod eller andre prøvevæsker (spyt, urin). Hvis der er antistoffer mod HIV, vises der efter 10-15 minutter en farvet og kontrolstrimmel på testen - et positivt resultat. Hvis resultatet er negativt, vises kun kontrolstrimlen.

Som med ELISA-tests skal resultaterne af hurtige test bekræftes ved IB-analyse. Først herefter kan der stilles en diagnose af HIV-infektion.

Der er hurtige hjemmetestsæt til rådighed. OraSure Technologies1-testen (USA) er FDA-godkendt, tilgængelig i håndkøb og kan bruges til at påvise HIV. Efter testen, hvis resultatet er positivt, anbefales patienten at gennemgå undersøgelse på et specialiseret center for at bekræfte diagnosen.

Andre tests til hjemmebrug er endnu ikke blevet godkendt af FDA, og deres resultater kan være meget tvivlsomme.

På trods af det faktum, at hurtige tests er ringere med hensyn til nøjagtighed i forhold til IV-generations ELISA-tests, bruges de i vid udstrækning til yderligere test af befolkningen.

Du kan tage test for at opdage HIV-infektion på enhver klinik, centralt distriktshospital eller specialiserede AIDS-centre. På Ruslands territorium udføres de absolut fortroligt eller anonymt. Hver patient kan forvente at modtage medicinsk eller psykologisk konsultation før eller efter testen. Du skal kun betale for hiv-tests i kommercielle medicinske institutioner, mens de på offentlige klinikker og hospitaler udføres gratis.

Læs om måder, hvorpå du kan blive smittet med hiv, og hvilke myter der eksisterer om mulighederne for at blive smittet.

Beskrivelse

Forberedelse

Indikationer

Fortolkning af resultater

Beskrivelse

Bestemmelsesmetode Enzym-linked immunosorbent assay (ELISA).

Materiale under undersøgelse Blodserum

Mulighed for hjemmebesøg

Kombineret påvisning af antistoffer mod HIV type 1 og 2 og HIV p24 antigen, kvalitativ test.

Opmærksomhed. Ved positive og tvivlsomme reaktioner kan fristen for afgivelse af resultater forlænges til 10 arbejdsdage. HIV (humant immundefektvirus), som forårsager AIDS (erhvervet immundefektsyndrom), tilhører familien af ​​retrovira. Det overføres fra person til person ved brug af kontaminerede nåle og sprøjter til intravenøs lægemiddeladministration eller terapeutiske procedurer under seksuel kontakt, både heteroseksuel og homoseksuel. Overførsel af virussen kan ske gennem transfusion af inficeret blod og dets produkter, donation af organer eller sædvæske og blandt medicinske medarbejdere - gennem skader fra forurenede nåle eller instrumenter. HIV-infektion er mulig gennem overførsel fra en inficeret mor til et barn (vertikal vej), selvom moderne metoder til forebyggelse ved hjælp af antiretroviral terapi, hvis alle anbefalinger følges, kan reducere denne risiko til et minimum.

Processen med interaktion mellem en virus og en celle omfatter en række faser: binding af virus til cellen, frigivelse af den fra kappen, indtrængning i cytoplasmaet, syntese af DNA ved hjælp af viralt RNA, integration af viralt DNA i genomet af værtscellen. Herefter begynder det latente stadium af infektion. I denne tilstand kan proviralt DNA eksistere i nogen tid uden at vise aktivitet og uden at påvirke værtscellens liv. Selvom der ikke er nogen ekspression af virale proteiner, er der ingen immunreaktion på virussen. Antistoffer mod HIV, som karakteriserer kroppens immunrespons, opstår efter aktivering af viralt DNA og begyndelsen af ​​aktiv reproduktion af virussen. Varigheden af ​​den latente periode afhænger af en række faktorer, herunder organismens individuelle genetiske karakteristika.

Antistoffer mod HIV kan forekomme fra den anden uge efter infektion; deres indhold stiger inden for 2-4 uger og forbliver i mange år. Hos 90-95% af de smittede optræder de i de første tre måneder efter infektion, hos 5-9% - i perioden fra tre til seks måneder, hos 0,5-1% - på et senere tidspunkt.

I de første uger af infektion, selv før fremkomsten af ​​antistoffer mod virussen (dvs. før serokonversion), kan tilstedeværelsen af ​​HIV-antigener, herunder dets p24-capsidprotein, påvises i serum- eller plasmaprøver. Senere, efter serokonversion, bliver den normalt uopdagelig.

4. generations kombinerede testsystemer, som inkluderer HIV Ag/Ab Combo-testen (Architect, Abbott), detekterer både antistoffer mod HIV type 1 og 2 og HIV p24-antigen, hvilket giver mulighed for tidlig påvisning af infektion. De særlige karakteristika ved screeningstesten, der anvendes i INVITRO-laboratoriet til at påvise HIV-infektion, omfatter undersøgelsens høje specificitet (> 99,5%); Assayet er 100 % følsomt over for antistoffer, der er karakteristiske for perioden med serokonversion, og testens følsomhed over for p24-antigenet er ca. 18 pg/ml.

Proceduren for at udføre en laboratorieundersøgelse for HIV er strengt reguleret af ordrer fra Sundhedsministeriet i Den Russiske Føderation og inkluderer stadiet af en screening (udvælgelse) undersøgelse af tilstedeværelsen af ​​antistoffer mod HIV ved hjælp af enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) metoder godkendt til brug, og stadiet af en verifikation (bekræftelse) mere detaljeret undersøgelse i laboratoriet i byens AIDS-center. Det skal bemærkes, at selv de bedste screenings-ELISA-systemer ikke garanterer 100 % specificitet, det vil sige, at der er en vis sandsynlighed for at opnå uspecifikke, falsk-positive resultater forbundet med egenskaberne ved patientens blodserum. Derfor kan et positivt resultat af en screening ELISA-undersøgelse muligvis ikke bekræftes i bekræftende tests, hvorefter patienten vil få et negativt eller ubestemt resultat. Hvis resultatet af den bekræftende undersøgelse er usikker, bør testen gentages over tid efter 2-3 uger.

Laboratoriediagnose af HIV-infektion hos børn født af HIV-inficerede mødre har sine egne karakteristika. Moderens antistoffer mod HIV (IgG-klasse) kan cirkulere i deres blod i op til 18 måneder fra fødslen. Fraværet af antistoffer mod HIV hos nyfødte betyder ikke, at virussen ikke er trængt ind i placentabarrieren. Børn af HIV-smittede mødre er underlagt laboratoriediagnostisk undersøgelse inden for 36 måneder efter fødslen.

Forberedelse

Der kræves ingen særlig forberedelse. Det anbefales at tage blod tidligst 4 timer efter det sidste måltid. Generelle anbefalinger til forberedelse til forskning kan findes. Det er tilrådeligt at udføre en test for at påvise antigen og antistoffer mod HIV tidligst to uger efter mulig infektion, med en gentagelsestest efter tre og seks uger i tilfælde af et negativt resultat. Ansøgninger om forskning hos INVITRO LLC udfyldes ved hjælp af et pas eller et dokument, der erstatter det (migrationskort, midlertidig registrering på bopælsstedet, militært personel-ID, certifikat fra paskontoret i tilfælde af tab af et pas, registreringskort fra en Hotel). Det præsenterede dokument skal nødvendigvis indeholde oplysninger om midlertidig eller permanent registrering i Den Russiske Føderation og et fotografi. I mangel af et pas (et dokument, der erstatter det), har patienten ret til at udfylde en anonym ansøgning om donation af biomateriale. Ved en anonym undersøgelse, en ansøgning og en prøve af biomateriale modtaget fra klienten tildeles et nummer, som kun er kendt af patienten og det medicinske personale, der har afgivet bestillingen. ! Resultaterne af undersøgelser udført anonymt kan ikke indsendes til hospitalsindlæggelse, faglige undersøgelser og er ikke underlagt registrering i ORUIB.

Indikationer for brug

• Forstørrede lymfeknuder i mere end to områder.
• Leukopeni med lymfopeni.
• Nattesved.
• Pludselig vægttab af ukendt årsag.
• Diarré i mere end tre uger af ukendt årsag.
• Feber af ukendt årsag.
• Planlægning af graviditet.
• Præoperativ forberedelse, indlæggelse.
• Påvisning af følgende infektioner eller kombinationer heraf: tuberkulose, manifest toxoplasmose, ofte tilbagevendende herpesvirusinfektion, candidiasis af indre organer, gentagen herpes zoster neuralgi, lungebetændelse forårsaget af mycoplasmas, pneumocystis eller legionella.
• Kaposis sarkom i en ung alder.
• Tilfældige seksuelle kontakter.

Fortolkning af resultater

Fortolkning af forskningsresultater indeholder information til den behandlende læge og er ikke en diagnose. Oplysningerne i dette afsnit bør ikke bruges til selvdiagnose eller selvbehandling. Lægen stiller en nøjagtig diagnose ved hjælp af både resultaterne af denne undersøgelse og de nødvendige oplysninger fra andre kilder: sygehistorie, resultater af andre undersøgelser osv.

Måleenheder i det uafhængige laboratorium INVITRO: kvalitativ test. Form for præsentation af resultater: i fravær af antistoffer mod HIV 1 og 2 og p24 antigen er svaret "negativt". Hvis der påvises antistoffer mod HIV eller et antigen i en screeningsenzym-bundet immunosorbenttest, sendes en serumprøve til bekræftelse ved immunblotting til byens AIDS-center, som verificerer positive og ubestemte resultater.

Positivt resultat:

1. HIV-infektion;
2. falsk positivt resultat, der kræver gentagne eller yderligere undersøgelser *);
3. undersøgelsen er ikke informativ hos børn under 18 måneder født af HIV-smittede mødre.

*Specificiteten af ​​screeningstestsystemet Antistoffer mod HIV 1 og 2 og HIV-antigen 1 og 2 (HIV Ag/Ab Combo, Abbott), ifølge estimater leveret af reagensproducenten, er omkring 99,6 % i både den generelle befolkning og gruppepatienter med potentielle interferenser (infektioner HBV, HCV, røde hunde, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. coli, Chl. trach. osv., autoimmune patologier (herunder reumatoid arthritis, tilstedeværelsen af ​​antinukleære antistoffer) , graviditet, forhøjede niveauer af IgG, IgM, monoklonale gammopatier, hæmodialyse, flere blodtransfusioner).

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) trådte ind i praktisk medicins liv et sted i 60'erne af forrige århundrede. Dens oprindelige opgave var histologisk forskning til videnskabelige formål, som gik ud på at søge og identificere den antigene struktur af celler i en levende organisme.

ELISA-metoden er baseret på interaktionen af ​​specifikke (AT) og beslægtede antigener (AG) med dannelsen af ​​et "antigen-antistof"-kompleks, som påvises ved hjælp af et enzym. Dette faktum fik forskerne til at tro, at metoden kan bruges til diagnostiske formål til at identificere specifikke immunglobuliner af forskellige klasser, der er involveret i immunresponset på en bestemt infektion. Og det var et gennembrud inden for klinisk laboratoriediagnostik!

Metoden begyndte først at blive brugt aktivt i begyndelsen af ​​80'erne, og derefter hovedsageligt i specialiserede institutioner. De første immunoenzymanalysatorer var udstyret med blodtransfusionscentre og -stationer, infektionssygdomme og venerologiske hospitaler, siden den formidable AIDS, født på det afrikanske kontinent, dukkede op i vores horisont og straks sluttede sig til de "gamle" infektioner, krævede øjeblikkelige diagnostiske foranstaltninger og eftersøgningen for terapeutiske lægemidler, der påvirker ham.

Anvendelsesområde for ELISA-metoden

Mulighederne for enzymimmunoassay er virkelig omfattende. Nu er det svært at forestille sig, hvordan man kan undvære en sådan forskning, som bruges i bogstaveligt talt alle grene af medicin. Det ser ud til, hvad kan ELISA gøre i onkologi? Det viser sig, at det kan. Og meget. Analysens evne til at finde markører, der er karakteristiske for visse typer af ondartede neoplasmer, ligger til grund for tidlig påvisning af en tumor, når den endnu ikke er påvist på anden måde på grund af dens lille størrelse.

Moderne klinisk laboratoriediagnostik (CDL) har udover tumormarkører et betydeligt arsenal af ELISA-paneler og bruger dem til at diagnosticere forskellige patologiske tilstande (infektionsprocesser, hormonforstyrrelser) og overvåge farmaceutiske lægemidler for at identificere deres effekt på patientens krop og i øvrigt ikke kun menneskeligt. I øjeblikket er enzymimmunoassay meget brugt i veterinærtjenester, fordi "vores små brødre" også er modtagelige for mange sygdomme, som de nogle gange lider meget af.

Dermed, ELISA kan på grund af sin følsomhed og specificitet bestemme ud fra en blodprøve taget fra en vene:

• Hormonal status (skjoldbruskkirtel- og binyrehormoner, kønshormoner);
• Tilstedeværelsen af ​​virale og bakterielle infektioner (HIV, B og C, klamydia, syfilis og, og, såvel som mange andre sygdomme forårsaget af patogene mikroorganismer);
• Spor af den vitale aktivitet af mikroorganismer, der startede den infektiøse proces, som med succes sluttede og flyttede ind i stadiet med at danne et immunrespons på dette patogen. Sådanne spor, det vil sige antistoffer, forbliver i mange tilfælde cirkulerende i blodet for livet og beskytter derved en person mod geninfektion.

Hvad er essensen af ​​ELISA?

Enzymimmunoassay-metoden gør det muligt at bestemme ikke kun tilstedeværelsen af ​​selve patogenet (kvalitativ analyse), men også dets kvantitative indhold i patientens blodserum.

Den virale eller bakterielle dosis har væsentlig indflydelse på forløbet af den infektiøse proces og dens udfald, derfor spiller kvantitativ analyse en vigtig rolle i diagnosticering og behandling af sygdomme i forskellige former og stadier.

Men da vi kender enzymimmunoassay-undersøgelser som ELISA-metoden, tænker vi ikke engang på, hvordan den formår at dække en så bred vifte af mikroorganismer, der bebor vores planet, hvoraf mange udgør en direkte trussel mod menneskers og dyrs sundhed og liv. Men faktum er, at ELISA har mange muligheder (ikke-konkurrencedygtige og konkurrencedygtige - direkte og indirekte), som hver løser sit eget problem og dermed giver mulighed for en målrettet søgning.

For at identificere immunglobuliner af en eller anden klasse anvendes et traditionelt 96-brønds polystyrenpanel (plade), i hvis brønde sorberede rekombinante proteiner er koncentreret i den faste fase. Antistoffer eller antigener, der kommer ind i brønden med blodserum, finder et "kendt" objekt og danner et kompleks med det (AG - AT), som, fikseret af et enzymkonjugat, vil vise sig ved en ændring i brøndens farve, når læse resultaterne.

Enzymimmunoassay udføres ved hjælp af testsystemer af en vis specificitet, fremstillet i specielle laboratorier og udstyret med alle de nødvendige reagerende komponenter. Forskning kan udføres ved hjælp af vaskemaskiner ("vaskere") og aflæsning af spektrofotometre, som for det meste involverer manuelt arbejde. På fuldautomatiske maskiner, som frigør laboratorieassistenten fra monoton inddrypning, vask og andre rutineopgaver, er det selvfølgelig hurtigere og mere bekvemt at arbejde, men ikke alle laboratorier har råd til sådan luksus og fortsætter med at arbejde på gammeldags måde - på halvautomatiske maskiner.

Fortolkningen af ​​ELISA-resultater ligger inden for laboratoriediagnostisk læges kompetence, og næsten alle immunkemiske reaktioners iboende egenskab til at give falsk-positive eller falsk-negative svar skal også tages i betragtning.

Video: moderne enzymimmunoassay

ELISA-resultater ved hjælp af eksemplet med syfilis

Enzym immunoassay er velegnet til at påvise alle former, og bruges desuden i screeningsundersøgelser. Til at udføre analysen bruges patientens venøse blod taget på tom mave. Arbejdet bruger tabletter med en vis specificitet (AB-klasse A, M, G) eller totale antistoffer.

I betragtning af, at antistoffer i syfilis produceres i en bestemt sekvens, kan ELISA nemt besvare spørgsmålet om, hvornår infektionen opstod, og på hvilket stadium processen er, og fortolkningen af ​​de opnåede resultater kan præsenteres i følgende form:

• IgM angiver varigheden af ​​den infektiøse proces (kan forekomme under forværring af kroniske inflammatoriske sygdomme);
• IgA oplyser, at infektionen opstod for mere end en måned siden;
• IgG indikerer, at infektionen er i fuld gang, eller at der for nylig er foretaget behandling, hvilket let kan fastslås ved at tage en anamnese.

Ved test for syfilis vil negative brønde (og den negative kontrol) forblive farveløse, mens positive brønde (og den positive kontrol) vil vise en lys gul farve på grund af farveændringen af ​​det kromogen, der er tilsat under testen. Farveintensiteten falder dog ikke altid sammen med kontrollen, det vil sige, den kan være lidt blegere eller lidt gullig. Dette er tvivlsomme resultater, som som regel er genstand for genundersøgelse med obligatorisk overvejelse af de kvantitative indikatorer opnået på spektrofotometeret, men generelt er farven direkte proportional med antallet af immunkomplekser (associerede Ags og AT'er) .

Den mest spændende af enzymimmunoassays er HIV ELISA

Analyse på er måske mere interessant end andre for en bred vifte af befolkningen, fordi det stadig er umuligt at sige med tillid til, at mange sociale problemer er forsvundet (prostitution, stofmisbrug osv.). Desværre påvirker HIV ikke kun disse lag af det menneskelige samfund, du kan blive smittet under forskellige omstændigheder, der ikke er relateret til seksuel umoral eller stofbrug. Men hvis der er behov for en hiv-test, skal du ikke være bange for, at alle omkring dig vil vide om dit besøg på sådan et laboratorium. Nu er hiv-smittede beskyttet ved lov, og de, der er i tvivl, kan henvende sig til anonyme kontorer, hvor de kan løse problemet uden frygt for omtale og fordømmelse.

Enzymimmunanalysemetoden, der bruges til at diagnosticere HIV-infektion, er en af ​​de vigtigste standardundersøgelser, som dog kræver særlige forhold, da emnet er meget ømtåleligt.

Det giver mening at udføre HIV ELISA efter seksuel kontakt, blodtransfusion, andre medicinske procedurer, der tyder på infektion og ved slutningen af ​​inkubationsperioden ("seronegativt vindue"), men det skal huskes, at denne periode ikke er konstant. Det kan ende på 14-30 dage, eller det kan vare op til seks måneder, så gennemsnitsværdien anses for at være et interval fra 45 til 90 dage. Blod doneres til hiv på samme måde som ved andre infektioner - fra en vene på tom mave. Resultaterne vil være klar afhængigt af ophobningen af ​​materiale i laboratoriet og dets arbejdsbyrde (fra 2 til 10 dage), selvom laboratorier oftest giver svar samme dag eller den næste.

Hvad kan du forvente af dine hiv-resultater?

ELISA for HIV-infektion påviser antistoffer mod to typer af virussen: HIV-1 (mere almindelig i Rusland og andre lande i Europa og Asien) og HIV-2 (mere almindelig i Vestafrika).

HIV ELISA'ens opgave er at søge efter klasse G-antistoffer, som påvises på alle testsystemer, men i en senere periode, og klasse A- og M-antistoffer påvist på ny generation af rekombinante testkit, som gør det muligt at finde antistoffer. på de tidligste stadier (inkubationsperiode - "seronegativt vindue"). Du kan forvente følgende svar fra ELISA:

1. Primært positivt resultat: Blodet skal testes igen med et testsystem af samme type, men om muligt af en anden serie og af en anden person (laboratorieassistent);
2. Gentaget (+) involverer en ny blodprøve fra patienten med dens undersøgelse svarende til den primære analyse;
3. Et andet positivt resultat er genstand for referenceanalyse, som bruger meget specifikke testsæt (2-3 stk.);
4. Et positivt resultat i begge (eller tre) systemer sendes til immunblotting (samme ELISA, men udført individuelt ved brug af testsæt med særlig høj specificitet).

Konklusionen om HIV-infektion er kun lavet på basis af immunblotting. En samtale føres med den smittede person i fuld fortrolighed. Afsløring af medicinske hemmeligheder i Rusland såvel som i andre lande er underlagt strafferetlig straf.

Test for klamydia og cytomegalovirus ved hjælp af enzymimmunoassay-metoden har også vundet særlig popularitet på grund af det faktum, at de gør det muligt at bestemme infektionstidspunktet, sygdomsstadiet og effektiviteten af ​​behandlingsforanstaltninger.

Under implementeringen kan man også observere udseendet af antistoffer af forskellige klasser. i forskellige faser af den patologiske tilstand forårsaget af et smitsomt middel:

• IgM kan påvises så tidligt som syv dage efter infektion;
• IgA indikerer, at infektionen har levet i kroppen i mere end en måned;
• IgG bekræfter diagnosen klamydia og hjælper med at overvåge behandlingen og bestemme dens effektivitet. Det skal bemærkes, at klasse G-antistoffer forbliver og cirkulerer i kroppen uanset sygdommens varighed, derfor skal du for at fortolke analysen korrekt tage hensyn til referenceværdierne (normer), som i øvrigt , er forskellige for hver CDL: under hensyntagen til testsystemets mærke og specificiteten af ​​de reagenser, der er inkluderet i sættet. De normale værdier indtastes i formularen ved siden af ​​ELISA-resultatet.

Hvad angår , er det lidt anderledes her: klasse M antistoffer vises efter omkring en måned til halvanden måned, det vil sige, at det positive resultat (IgM+) bliver i fasen med primær infektion eller under reaktivering af en latent infektion og forbliver det fra 4 måneder til seks måneder.

Tilstedeværelsen af ​​klasse G-antistoffer er karakteristisk for begyndelsen af ​​en primær akut infektion eller geninfektion. Analysen fastslår, at virussen er til stede, men giver ikke oplysninger om, hvilket stadium den smitsomme proces er på. I mellemtiden forårsager bestemmelse af den normale IgG-titer også vanskeligheder, da den helt afhænger af en bestemt persons immunstatus, hvilket dog er etableret ved at identificere klasse G-immunoglobuliner I betragtning af denne adfærd af antistoffer er der et behov ved diagnosticering af CMV at vurdere klasse G antistoffers evne til at interagere med CMV, for senere at "neutralisere" det (AT aviditet). I den indledende fase af sygdommen binder IgG meget dårligt til virale antigener (lav aviditet) og begynder først derefter at vise aktivitet, derfor kan vi tale om en stigning i aviditeten af ​​antistoffer.

Vi kan tale meget om fordelene ved enzymimmunoassay, fordi denne metode har formået at løse mange diagnostiske problemer ved kun at bruge venøst ​​blod. Der er ikke behov for lange ventetider, bekymringer og problemer med at indsamle materiale til forskning. Derudover bliver testsystemer til ELISA fortsat forbedret, og dagen er ikke langt ude, hvor testen vil give et 100% pålideligt resultat.

Video: uddannelsesfilm fra Moscow State Medical University opkaldt efter. Sechenov om det grundlæggende i ELISA