Imunitný blotting v diagnostike HIV. Imunoblotting (detekcia protilátok v sére pacientov proti určitým antigénom patogénov) Hybridizácia nukleových kyselín
Enzýmová imunoanalýza (ELISA)
Enzýmová imunoanalýza (ELISA) sa uskutočňuje v dvoch etapách: prvou je interakcia protilátok s antigénom, druhou je enzymatická indikácia komplexu antigén-protilátka v dôsledku objavenia sa zafarbenia reakčnej zmesi a registrácie zafarbenia vizuálne alebo spektrofotometrickou metódou.
Existujú dva varianty ELISA: tuhá fáza a kvapalná fáza, ktoré sa líšia spôsobom separácie zložiek imunochemickej reakcie. V porovnaní s vyššie opísanými metódami na detekciu antigénov a protilátok má ELISA významné výhody:
vysoká citlivosť, ktorá umožňuje určiť až 0,05 ng / ml látky;
možnosť použitia minimálnych objemov testovaného materiálu (1--2 µl);
možnosť inštrumentálneho alebo vizuálneho účtovania reakcie;
rýchlosť a možnosť automatizácie všetkých fáz reakcie.
ELISA je v súčasnosti v praxi široko využívaná na diagnostiku mnohých infekčných ochorení bakteriálnej, mykotickej etiológie, protozoálnych infekcií a helmintiáz, ale najmä vírusových infekcií, najmä hepatitídy A, B, C, D, E, G, HIV infekcie, herpesvírusu, rotavírus, adenovírus, astrovírus, parvovírus a iné infekcie.
imunitný blotting
Princípom metódy immunoblotting je detekcia protilátok proti jednotlivým antigénom patogénu. Pomocou tejto metódy sa stanovujú protilátky proti antigénom HIV (vírusové obalové glykoproteíny, jadrové proteíny a vírusové enzýmy). Výsledky imunologického prenosu sa hodnotia ako pozitívne, pochybné a negatívne v závislosti od kvantitatívneho a kvalitatívneho súboru zistených protilátok.
Je potrebné poznamenať, že imunitné blotovanie má nižšiu citlivosť na ELISA, v niektorých prípadoch môže byť zaznamenaný negatívny výsledok v prítomnosti infekcie HIV u pacienta. Možnosť registrácie falošne pozitívnych výsledkov v ELISA pri infekcii HIV si však vyžaduje integrovaný prístup k diagnostike infekcie HIV, berúc do úvahy okrem výsledkov imunologických reakcií (ELISA, immunoblotting) aj epidemiologické a klinické údaje.
Polymerázová reťazová reakcia (PCR)
Metódu PCR vyvinul americký biochemik Kary Mullis v roku 1983 na základe použitia ním objavenej termostabilnej DNA polymerázy (Tag polymeráza). Princípom metódy je zvýšenie 10 6 -10 8-násobku počtu kópií špecifickej oblasti DNA patogénu katalyzovanej in vitro DNA polymerázou v automatickom režime.
V umelých podmienkach je možná reprodukcia procesu replikácie oblasti genómu špecifickej pre určitý druh alebo rod patogénov za predpokladu, že je známa jej nukleotidová sekvencia. Použitie metód na detekciu replikačných produktov takýchto oblastí (amplikónov) umožňuje konštatovať prítomnosť patogénu v testovanej vzorke.
Vyššie opísaná komplementárna reťazová kompletizácia začína len v určitých štartovacích blokoch, ktorými sú krátke dvojvláknové úseky. Keď sú takéto bloky pripojené k špecifickým oblastiam DNA, proces syntézy nového vlákna je nasmerovaný len do vybranej oblasti a nie po celej dĺžke vlákna DNA. Na vytvorenie štartovacích blokov v daných oblastiach DNA sa používajú dva oligonukleotidové priméry, ktoré sa nazývajú priméry. Priméry sú komplementárne k sekvenciám DNA na ľavom a pravom okraji špecifického fragmentu a sú orientované tak, že k dokončeniu nového reťazca DNA dochádza iba medzi nimi.
Komu výhody metódy PCR by mala obsahovať:
vysoká citlivosť, umožňujúca určiť 10-1000 buniek vo vzorke;
vysoká špecifickosť, pretože v testovacom materiáli sa deteguje jedinečný fragment DNA pre tento patogén;
univerzálnosť postupu na detekciu rôznych patogénov z jedného biologického testu;
Vysoká rýchlosť analýzy (4--4,5 h);
Možnosť diagnostiky nielen akútnych, ale aj latentných infekcií.
Použitie PCR je účinné na diagnostiku širokého spektra bakteriálnych a vírusových infekcií.
Nedávno sa pomerne úspešne implementovali kvantitatívne metódy analýzy PCR, ktoré umožňujú určiť koncentráciu patogénu v materiáli (mikrobiálna alebo vírusová záťaž), napríklad posúdiť replikačnú aktivitu vírusu hepatitídy B, HIV C. .
Treba však mať na pamäti, že aj metóda PCR má svoje obmedzenia, najmä pri diagnostike infekcií spôsobených oportúnnou autoflórou.
Hybridizácia nukleových kyselín
hybridizácia nukleových kyselín podobne ako PCR vám umožňuje identifikovať patogén vo vzorke bez predchádzajúcej izolácie. Na analýzu sa syntetizuje jednovláknová DNA alebo RNA sonda, ktorá je komplementárna k špecifickým nukleotidovým sekvenciám patogénu. Sonda je označená rádionuklidom, enzýmom alebo inou ľahko rozpoznateľnou značkou. Testovaný materiál sa podrobí spracovaniu za účelom lýzy mikroorganizmov prítomných v bioteste, izolácii a denaturácii DNA. Potom sa sonda inkubuje s testovanou vzorkou a meria sa množstvo značenej DNA, ktorá vstúpila do hybridizácie s DNA v testovanej vzorke. Reakcia môže prebiehať na sorbentoch v tuhej fáze aj v roztoku, avšak nevyhnutnou podmienkou je vymytie nenaviazaného množstva značenej sondy. Citlivosť metódy hybridizácie nukleových kyselín je nižšia ako pri PCR a predstavuje 103 mikrobiálnych buniek na vzorku.
Keď som sa nechal otestovať na pohlavne prenosné choroby, rozhodol som sa dať sa otestovať na HIV. Na druhy den mi prisli hotove testy na ifa okrem HIV.Nasledkom toho mi zistili chlamydie. Herpes a mikroplazmóza. Ale vich nikdy neprišiel. Zavolajú mi o 3 dni a hovoria, že musíte prísť do centra AIDS, aby ste znova odobrali krv. Môže byť Imunablot falošne pozitívny pri chlamýdiových ochoreniach Mykraplazmóza HPV Herpes
Experti Woman.ru
Získajte odborný názor na vašu tému
Anastasia Šesteriková
Rusina Irina Vladimirovna
Psychológ, Úľava od stresu. Špecialista z b17.ru
Oľga Yurievna Diganaeva
Psychologička. Špecialista z b17.ru
Oľga Borisenko
Psychológ, Gestalt terapeut. Špecialista z b17.ru
Dmitrij Valerijevič Tišakov
Psychológ, supervízor, systemický rodinný terapeut. Špecialista z b17.ru
Shiyan Olga Vasilievna
Psychológ, psychológ-poradca. Špecialista z b17.ru
Oksana Lushankina
Psychológ, Vzťahy v rodine. Špecialista z b17.ru
Anna Daševská
Psychológ, Skype konzultácie. Špecialista z b17.ru
Irina Bukina
Psychologička. Špecialista z b17.ru
Aksyonova Anna Mikhailovna
Psychológ, kandidát na skupinovú analytiku. Špecialista z b17.ru
Nechcem ťa strašiť, ale keď ťa zavolajú do AIDS centra, je to takmer vždy pozitívne, nepreberaj to, nech sa ti darí, hlavná vec je brať terapiu a dlho žiť
Jeden kamarát žije s HIV už desať rokov a stará sa o seba.
Hovoria, že do troch rokov zrejme nájdu liek.
V každom prípade nezúfajte a nešírte to, dajte sa liečiť
Nie, IB nemôže byť falošne pozitívna a žiadne pohlavne prenosné choroby neovplyvňujú túto analýzu, ak je pozitívna, potom bohužiaľ, máte HIV, musíte sledovať svoje imunitné bunky a začať liečbu včas.
bohužiaľ, nie ((ak zavolali do centra, potom je to určite HIV
Pokiaľ viem, prvé a dokonca aj následné výsledky imunoblotu môžu byť otázne. nie falošne pozitívne, ale pochybné. a potom je nariadená opätovná analýza. Tu je text z webovej stránky:
„Imunitný blotting sa najčastejšie používa na potvrdenie diagnózy infekcie HIV. WHO považuje séra za pozitívne, ak sa imunoblotingom detegujú protilátky proti ktorýmkoľvek dvom obalovým proteínom HIV. Podľa týchto odporúčaní, ak dôjde k reakcii iba s jedným z obalových proteínov (gp160, gp120, gp41) v kombinácii alebo bez reakcie s inými proteínmi, výsledok sa považuje za pochybný a odporúča sa druhá štúdia s použitím súpravy z iného série alebo od inej spoločnosti. Ak potom výsledok zostane pochybný, štúdie pokračujú každé 3 mesiace.
môžeš googliť. ak áno, dúfam, že nebudeš mať pozitívny test na HIV. ale ak sa to potvrdí, vedzte, že dnes s touto diagnózou žijú a žijú rovnako dlho ako zdraví ľudia a rodia deti. hlavnou podmienkou je disciplína v liečbe. zdravie vám!
Antiretrovírusová terapia online
Kalkulačky
Stránka je určená pre zdravotníckych a farmaceutických pracovníkov vo veku 18+
Dešifrovanie analýzy - imunoblot
Prosím, pomôžte mi rozlúštiť analýzu
ENV(GP160)+
ENV(GP110/120)+
ENV(GP41)+
GAG(P55)+
GAG(P40)+
GAG(P25)+
POL(P68)+
POL(P52)+
POL(P34)+
Ahoj! Pred 2,5 rokmi som si urobil test na HIV, bol tam taký imunoblot:
Gp-160+, Gp-110/120+, Gp-41+, p17+, p25+, p31+, p34+, p52+, p55+, p68+. A tu je imunoblot z 30.5.2018: Gp-160+, Gp-41+, GAG 1 -, poll+, env2-. Nie je jasné, čo znamená roll +? Je tam jediný alebo nebol odhalený? A kam sa podel zvyšok bielkovín?
Pol a Env sú gény, ktoré kódujú skupiny proteínov. Považujte to len za iný záznam. Otázka je iná. A na čo čakáme? Prečo uvažujeme o škvrne? Všetko je celkom jasné. Je potrebné niečo urobiť.
Už som si zvykol na to, že mám HIV. A pripravený na terapiu.
Len som zvedavý na tvoj názor. Je to čerstvá infekcia alebo mi niečo chýba? Alebo sa niekedy stane, že sa imunoblot pomaly veľmi otvára?
Dnes som si pozrel svoje analýzy v mojom osobnom spise (vyhotovené v SC):
ELISA na prvom testovacom systéme - pozitívny
ELISA na druhom testovacom systéme je negatívna (ako to je?)
Ďalší IB (vykonaný v invitro a SC pred mesiacom):
imunoblot na prvom testovacom systéme: gp 160+, gp 41+
imunoblot na inom testovacom systéme: gp41+, p24+, p17+
imunoblot na treťom testovacom systéme: gp160+, gp120+, gp41+, p24+
Podľa mojich prognóz som sa mohol nakaziť už pred rokom (akútne štádium bolo niekde v apríli), alebo pred 9 mesiacmi, ale vo všeobecnosti - xs kedy) vždy som používal ochranu a sex bez kondómov som mal len raz na jeseň r. 2017.
Dnes som ešte raz odovzdal VN a IP. Teru začne o mesiac, keď príde objednávka.
Termíny uvedených testov.
Prvý blot pred testom ELISA? Nebije. Nie je tu moment, ktorý by nám umožnil povedať, že čerstvá infekcia je vysoko pravdepodobná alebo naopak.
Záhadou zostane, ak náhodou nenájdete zdroj a neporovnáte.
Aby som to teda objasnil
Odovzdané v Invitro.
Prvý IFA je 11. mája.
Potom to isté sérum išlo na blot a prišla pozitívna analýza, kde boli identifikované dva proteíny.
gp 160+, gp 41+
Potom som už znova odovzdal do SC.
Darovali krv 29. mája.
A tam ho prešli niekoľkými testovacími systémami, kde prvý ukázal negatívny, druhý pozitívny. Negatívna ELISA je však zábavná.
Potom to isté sérum ide na škvrnu, odkiaľ pochádzajú údaje:
Prvý testovací systém: gp41+, p24+, p17+
Druhý testovací systém: gp160+, gp120+, gp41+, p24+
Ale nie pointa.
Prišla nová analýza IP - 754. To poteší. VN ešte nie je pripravený. Hneď ako to príde, pravdepodobne začnem teru.
Som si na 80% istý, že infekcia bola pred rokom. A to, že sa blot pomaly otvára a ELISA je negatívny, je zvláštne. Alebo je to v normálnom rozmedzí?
Negatívna ELISA je však zábavná. Tiež by som chcel vedieť názov systému, aby som si ho zapísal do čierneho zošita. Aj keď tento moment, ak neberiete teóriu s manželstvom, je silne na skorú infekciu.
Som si na 80% istý, že infekcia bola pred rokom. Slabá škvrna na to obdobie. Nie nemožné, ale nepravdepodobné.
V istom momente som dokonca zacal pochybovat o vysledkoch HIV testov - tak cakam na VN.
Tu už bude uvedený posledný bod v otázke.
Považuje sa aj za normálne, že IP narástla za mesiac o 200 kópií bez tera? Teraz beriem Ursosan na polyp v žlčníku - vložka hovorí, že liek zlepšuje imunitu.
Je potrebné hodnotiť obe s relatívnym obsahom a brať do úvahy údaje jedného laboratória jednou výpočtovou metódou. Pretože - Boh vie, čo sa deje s CD4.
Vo všeobecnosti je počet CD4 780 buniek/ul. VN - 250 kópií / ml.
Toto je bez terapie. To znamená, že CD4 zo 486 vyskočilo na 780 za mesiac.
BH klesol z 550 na 250 kusov.
Napriek tomu to nie je zvláštne, alebo sú takéto skoky v normálnom rozsahu? Je čas začať Tera?
Ahoj! Trikrát som absolvoval ifa, zakaždým +, z SC prišiel imunoblot p24+ p18+. Potenciálne riziko bolo pred viac ako šiestimi mesiacmi. p24 naznačuje, že je to stále HIV?
Blot pochybný, opakujte po 6-8 týždňoch. S najväčšou pravdepodobnosťou ide o falošný poplach.
Dobrý deň!
Výsledky testu sa vrátili, vrátane blotu:
Nebezpečný kontakt: 24.04.2018
ELISA test na HIV 23.05.2018 (4 týždne od nebezpečného kontaktu alebo 29 dní) výsledok "+"
ELISA test na HIV 28.05.2018 (5 týždňov od nebezpečného kontaktu alebo 34 dní) výsledok „opätovného odberu“
ELISA test na HIV 06.01.2018 (5 týždňov od nebezpečného kontaktu alebo 38 dní) výsledok "+"
Z prvej analýzy (23.05.2018) prišla škvrna:
GP160 sl.
P24 sl.
Nové testy odovzdané 06.06.2018 ELISA a PCR HIV RNA v miestnom AIDS centre. Na výsledky ešte čakáme.
Blot otázky:
1. Ak je prítomný P24, je to nevyhnutne antigén HIV alebo je možné takýto proteín zistiť aj pri iných ochoreniach?
2. Čo znamená skratka „sl“ pri bielkovine? Zvyčajne v opísaných blotoch je + alebo -
3. Čo určuje nasadenie blotu? Z termínu alebo z jednotlivých charakteristík tela?
4. Pri takejto škvrne v 4. týždni z nebezpečného kontaktu je šanca, že to nie je HIV?
Prajem pekný deň a ďakujem.
1. nie, môže ísť len o podobný proteín iného charakteru. 2. slabý. tie. pochybný. 3. Termíny a realizovanie jednotlivých čŕt, no v priemere je všetko veľmi blízko. 4. otázka je zlá, vždy je šanca, kým sa nestanoví diagnóza.
Ahoj!
Prosím, pomôžte mi orientovať sa vo výsledkoch analýz a pochopiť, ako sa správne správať, aby opakované analýzy boli správne.
Rozbory odovzdané 25.05.2018
HIV IB
NEW LAV BLOT 1 – nedefinované zo dňa 29.05.2018
IB HIV markery
gp 160+
gp 120 —
gp 41 -
p55+
p40-
p 24+
p18-
str. 68 —
str. 52 —
s. 34 —
HIV ELISA
ADVIA Centaur HIV Ag-Ab reaktivita ELISA 12,00 pozitívny (28.05.2018)
Po 2 týždňoch sa odporúča analýzu zopakovať.
V novembri 2017 som mala NPA, po ktorej som si urobila testy na testovacom systéme HIV Ag\Ab Combo Abbott Architect, potom bol výsledok negatívny.
Zároveň som mala kompletný krvný obraz. Lymfocyty sú mierne zvýšené, eozinofily sú presne 0 (ale predtým som mal také ukazovatele pre eozinofily.
Hlavná otázka znie:
Aké lieky sa môžu a nemôžu užívať počas týchto dvoch týždňov? (Nechcem, aby nič „blikalo“)
Mávam občasné alergické záchvaty, zvyčajne pijem tavegil. Malo by sa to opustiť?
Môžu sa pred testovaním užívať antibiotiká? (ak to predpísal lekár na liečbu iných infekcií a chorôb)
Imunoblotting v diagnostike HIV
Imunitný blot (imunoblot, Western blot, Western blot)- kombinuje enzýmovú imunoanalýzu (ELISA) s predbežným elektroforetickým prenosom na nitrocelulózový prúžok (prúžok) vírusových antigénov.
V tomto krásnom vedeckom názve sa „blot“ s najväčšou pravdepodobnosťou prekladá ako „škvrna“ a „západný“ ako „západný“ odráža smer distribúcie tejto „škvrny“ na papieri zľava doprava, to znamená na geografickej mape. zodpovedá smeru zo západu na východ." Podstata metódy "imunitného blotu" spočíva v tom, že enzýmová imunosorbentová reakcia sa neuskutočňuje so zmesou antigénov, ale s antigénmi HIV, ktoré sa predtým rozdelili imunoforézou do frakcií umiestnených podľa molekulovej hmotnosti na povrchu nitrocelulózovej membrány. . V dôsledku toho sú hlavné proteíny HIV, nosiče antigénnych determinantov, distribuované po povrchu vo forme oddelených pásov, ktoré sa objavujú počas enzýmového imunotestu.
Imunoblot zahŕňa niekoľko fáz:
Príprava pásu. Vírus imunodeficiencie (HIV), ktorý bol predtým purifikovaný a zničený na jeho zložky, sa podrobí elektroforéze, zatiaľ čo antigény, ktoré tvoria HIV, sa oddelia podľa molekulovej hmotnosti. Potom sa blotovaním (podobne ako vytlačením prebytočného atramentu na „blotteri“) antigény prenesú na prúžok nitrocelulózy, ktorý teraz obsahuje spektrum antigénnych pásov charakteristických pre HIV, ktoré je okom neviditeľné.
Ukážková štúdia. Testovaný materiál (sérum, krvná plazma pacienta a pod.) sa nanesie na prúžok nitrocelulózy a ak sú vo vzorke špecifické protilátky, naviažu sa na presne zodpovedajúce (komplementárne) antigénne pásy. V dôsledku následných manipulácií sa výsledok tejto interakcie vizualizuje – zviditeľní.
Interpretácia výsledku. Prítomnosť pásov v určitých oblastiach nitrocelulózovej platne potvrdzuje prítomnosť protilátok proti presne definovaným HIV antigénom v študovanom sére.
V súčasnosti je hlavnou metódou na potvrdenie prítomnosti vírusovo špecifických protilátok v testovacom sére imunoblotovanie (imunoblot). V niektorých prípadoch infekcie HIV sú špecifické protilátky pred sérokonverziou účinnejšie detegované imunoblotovaním ako testom ELISA. Štúdia imunitného prenosu odhalila, že protilátky proti gp 41 sa najčastejšie detegujú v sére pacientov s AIDS a detekcia p24 u osôb vyšetrených na profylaktické účely si vyžaduje ďalšie štúdie na prítomnosť infekcie HIV. Ukázalo sa, že imunoblotové testovacie systémy založené na geneticky upravených rekombinantných proteínoch sú špecifickejšie ako bežné systémy založené na purifikovanom vírusovom lyzáte. Pri použití rekombinantného antigénu sa nevytvorí difúzny, ale jasne definovaný úzky pás antigénu, ktorý je ľahko dostupný pre evidenciu a vyhodnotenie.
Sérum osôb infikovaných HIV-1, deteguje protilátky proti nasledujúcim hlavným proteínom a glykoproteínom - štruktúrne obalové proteíny (env) - gp160, gp120, gp41; jadrá (gag) - p17, p24, p55, ako aj vírusové enzýmy (pol) - p31, p51, p66. Pre HIV-2 sú typické protilátky proti env - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol-p68.
Spomedzi laboratórnych metód potrebných na stanovenie špecifickosti reakcie má najväčšie uznanie detekcia protilátok proti obalovým proteínom HIV-1 - gp41, gp120, gp160 a HIV-2 - gp36, gp105, gp140.
WHO považuje séra za pozitívne, ak sa imunoblotingom detegujú protilátky proti ktorýmkoľvek dvom HIV glykoproteínom. Podľa týchto odporúčaní, ak dôjde k reakcii len s jedným z obalových proteínov (rp 160, rp 120, rp 41) v kombinácii alebo bez reakcie s inými proteínmi, výsledok sa považuje za pochybný a odporúča sa druhý test pomocou súpravy z inej série alebo od inej spoločnosti. Ak potom zostane výsledok pochybný, odporúča sa pozorovanie počas 6 mesiacov (výskum po 3 mesiacoch).
Prítomnosť pozitívnej reakcie s antigénom p24 môže naznačovať obdobie sérokonverzie, pretože protilátky proti tomuto proteínu sa niekedy objavia ako prvé. V tomto prípade sa odporúča v závislosti od klinických a epidemiologických údajov zopakovať štúdiu so vzorkou séra odobratou najmenej o 2 týždne neskôr, a to je presne ten prípad, keď sú pri infekcii HIV nevyhnutné párové séra.
Pozitívne reakcie s proteínmi gag a pol bez prítomnosti reakcie s proteínmi env môžu odrážať štádium skorej sérokonverzie a môžu tiež naznačovať infekciu HIV-2 alebo nešpecifickú reakciu. Jedinci s takýmito výsledkami po testovaní na HIV-2 sú opätovne vyšetrení po 3 mesiacoch (do 6 mesiacov).
Otázka: Opakovaná analýza na HIV?
Bol som testovaný na sexuálne prenosné infekcie (bez príznakov, chcel som mať dôveru vo vzťah so ženou). HIV test bol pozitívny. Po ultrazvuku sa ukázal nádor na obličke, odstránený (ukázalo sa, že je malígny).
Čítal som knihu od Sazonovej I.M., píše sa v nej, že zhubný nádor môže dať pozitívny výsledok testu na HIV.
Môže to tak byť, alebo niet v čo dúfať?
Musíte mať kontrolný test na HIV. Ak bol prvý test HIV určený pomocou ELISA, potom môže byť výsledok falošne pozitívny. Jeho spoľahlivosť možno skontrolovať citlivejšou diagnostickou metódou – PCR (polymerázová reťazová reakcia), ktorá určuje DNA vírusu v krvi.
Pomoc. 12/16/10 ELISA (+) IB (+), potom od 23. 3. 11 do 19. 5. 2011 deväť negatívnych ELISA (-) a kvantitatívna PCR. nie sú určené. v roku 2002 počas tehotenstva ELISA potom (+) potom (-) ale IB je vždy (-). od 2004 do 2008 som brala ELISA (-) 2x do roka, ale 30.04.08 ifa (+) a IB-nedefinovane. potom znova každé 2 mesiace odovzdať IFA vždy (-). a od decembra 2010 sa to pise vyssie.Zaroven som si nikdy nepichala, manzel ma vzdy na ELISA (-). CD4 980 bunky. a aj krv na syfilis od 29.04 dala 3 +++.a potom trikrat. negatívne každých 10 dní. hepatitída všetky (-). Mal niekto podobný. Vďaka.
Uveďte, či ste podstúpili RIBT (reakcia imobilizácie treponema pallidum), ak áno, aké sú výsledky tejto štúdie.
nie, nikto mi neponúkol urobiť taký rozbor.čo ukáže? Dúfam, že chápete, že som hovoril o testoch na HIV. Vďaka. Mali ste vo svojej praxi podobné prípady? mimochodom, informačná bezpečnosť v roku 2008 bola neistá. bol proteín p24/25. v roku 2010 IB(+) proteíny gp160.41.120 p24.17.31. potom ked bola ifa opat 3x (-) poslana do IB 4.4. vysledok vysiel pozitivny, ale bielkoviny gp 120 a 41. ostatne su preskrtane cervenou pastou a dole cervenou IB REPEAT. ale PCR z rovnakého čísla bude zamietnuté. po 4. aprili som odovzdal IFA uz 4x deny. všetko v AIDS centre, vrátane antigénu a protilátky. Teraz ma čaká druhý ZS a kvalitná PCR. to je všetko. VEĽMI UNAVENÝ PREMÝŠĽAŤ A ČAKAŤ. Dúfajúc v to najlepšie. VĎAKA. Teším sa na odpoveď.
Ak máte nejakú otázku, skúste ju nabudúce sformulovať konkrétnejšie, s upresnením diagnózy. RIBT sa používa na potvrdenie diagnózy syfilisu. Na presnú diagnózu infekcie HIV sa protilátky proti HIV v krvi stanovujú pomocou ELISA a imunoblotu. Diagnóza je potvrdená iba vtedy, ak sú oba tieto výsledky pozitívne.
ospravedlnujem sa za nepresne formulovanie otazky. Napísal som, že v decembri boli IFA a Imunoblot na HIV pozitívne. ale od marca je ifa pre HIV negatívny 9 krát. ak som bol zaregistrovaný v AIDS centre, tak sa to v zásade deje. HIV je buď vždy pozitívny alebo negatívny. a ako sa dá urobiť imunoblot na HIV, ak je výsledok ELISA negatívny? potom každý bude popierať, či je potrebné skontrolovať imunoblot, tak čo sa stane? v našom rýchlostnom centre mi nevedia nič odpovedať. Tu je to, čo som sa na vás obrátil. Vďaka.
Bohužiaľ, ELISA aj imunoblot môžu poskytnúť falošne pozitívne výsledky. Preto sa diagnostika HIV považuje za konečnú, iba pri súčasnej detekcii HIV pomocou ELISA a imunoblotovej metódy.
Dobry den, dnes mi prisli vysledky PCR testu na HIV, kvalitativny virus nezistil a opakovany imunoblot na HIV, vysledok je neisty kvoli proteinu 41. AIDS CENTRUM povedali, ze s najväčšou pravdepodobnosťou tam nie je HIV, ale v r. v mojom tele sú telá podobné štruktúre ako HIV. a čo si myslíte, vzhľadom na moje otázky z 15. a 16. júna (pozri vyššie), je tam HIV alebo nie. VĎAKA.
V tomto prípade je diagnóza infekcie HIV pochybná.
Píšete, že až pri súčasnej detekcii HIV pomocou IF a imunoblotu sa diagnóza HIV považuje za konečnú. Ale čo v mojom prípade? veď všetko ptsr popiera. a blot a ifa skok po celú dobu. na 9 rokov. povedzte mi, ak by bol vírus v mojej krvi, jeho RNA a DNA by sa dali presne určiť na toľko rokov. a tolko rokov moze trvat inkubacna doba alebo "okno"? Existujú falošne negatívne výsledky PCR na HIV po takom časovom období? Áno, zabudol som povedať, že rýchle testy na HIV, ktoré absolvujem na CPD, sú vždy negatívne.Alebo sa ani na ne nemôžem spoľahnúť? Vďaka.
V tomto prípade nie je diagnostika PCR hlavnou metódou na identifikáciu dynamiky procesu - sérologické metódy sú informatívnejšie. V tomto prípade je pravdepodobnosť falošne negatívnych výsledkov vysoká. rýchle HIV testy majú vysoký prah citlivosti, preto môžu poskytnúť aj falošne negatívny výsledok.
Prepáč. Určite som napísal na nesprávnom mieste. prosím odpovedzte v predmete HIV alebo nie HIV. Vďaka.
V prípade, že ste nedostali oznámenie o prijatí odpovede na vašu poštu, odpoveď na vašu otázku si môžete pozrieť na tejto adrese http://tiensmed.ru/news/answers/vich-ili-ne-vich- .html
Ahoj! Povedzte mi, prosím, aby som sa zaregistroval na LCD (teraz v 10. týždni tehotenstva), absolvoval som testy na HIV, pred pár dňami mi zavolal lekár a povedal, že predbežné testy na HIV sú pozitívne (prvý bol vykonaný v Kirovograde, no stále nie je oficiálny výsledok z Kyjeva ), v ten istý deň boli v našom mestskom laboratóriu vykonané dva expresné testy firmy Pharmasco CITO TEST HIV 1/2, oba výsledky sú negatívne, laborantka povedala, že tieto testy sú spoľahlivá a nemusím sa báť, keďže sa to stáva počas tehotenstva, a tie analýzy by mohli jednoducho zmiasť. Lekár povedal, že znova darujem krv a ja som krv daroval ešte dvakrát na analýzu v rôznych nemocniciach (stále nemám ani jeden z troch výsledkov). Veľmi sa bojím, nie som narkoman, neboli tam žiadne pochybné sexuálne vzťahy, ak ochoriem veľmi zriedka, ostatné testy sú všetky v norme. Dá sa rýchlym testom dôverovať? Naozaj sa to deje počas tehotenstva? Doktor ma bolestne vystrašil. Vďaka
V prvom rade sa treba upokojiť a nemyslieť na to zlé. Niekedy počas tehotenstva existujú falošne pozitívne výsledky. Na HIV je potrebné znovu darovať krv a počkať na výsledky vyšetrení.
Ahoj! Ide o to, že pred 2 mesiacmi u mňa došlo k sexuálnemu kontaktu s dievčaťom (doteraz sa stretávame). po 1,5 týždni teplota stúpla na 37,4. čoskoro zaspal. pre istotu sme absolvovali rozbor IF po 2 tyzdnoch a znova po 1,5 mesiaci. Obe odpovede sú negatívne. ale stale mam teplotu a kasel s premenlivym zlepsenim. Môžete mi prosím povedať, či existuje riziko? okrem toho som dlho pracovala bez volna a pred tyzdnom som bola na nemocenskej (orvi). krvné a pľúcne testy sú v poriadku. Vďaka.
Táto teplota môže súvisieť s vírusovým ochorením, telo sa ešte nespamätalo alebo chronickou prepracovanosťou. V prípade, že je vylúčená organická patológia, všeobecný krvný a močový test je v normálnom rozmedzí, ako aj údaje fluorografickej štúdie sú tiež v normálnom rozmedzí, potom je potrebné vylúčiť sexuálne prenosné choroby: chlamýdie, mykoplazmóza, ureaplazmóza, ktorá môže spôsobiť zápal orgánov malej panvy a močovej trubice a v dôsledku toho zvýšenie telesnej teploty. Prečítajte si viac o dôvodoch zvýšenia telesnej teploty kliknutím na odkaz: Vysoká teplota.
Ahoj. Existuje taká vec - Pred viac ako rokom došlo k nechránenému sexuálnemu kontaktu s chodiacim dievčaťom. Uistila ma, že jej nič nie je choré, ale nemôžem jej na 100 percent uveriť. Tiež ubezpečila, že pred zamestnaním sa podrobila lekárskej prehliadke (pracovala ako predavačka) a všetko je v poriadku. 7 mesiacov po kontakte som ešte absolvoval test na HIV v laboratóriu citylab - výsledok bol negatívny. Ale nedávno som často začal byť chorý - už 3 týždne mám červené boľavé hrdlo a neviem to vyliečiť. Znova sa začal báť, ale zrazu to vtedy chytil? Povedzte mi, je to možné a oplatí sa dôverovať analýze od citylab? Bojím sa to zase vzdať, moje nervy to nevydržia..
V prípade, že je výsledok negatívny, s najväčšou pravdepodobnosťou nie ste chorý a nie ste infikovaný HIV / AIDS. Na objasnenie diagnózy sa však odporúča opätovná analýza v špecializovaných laboratóriách štátnych inštitúcií, toto vyšetrenie sa vykonáva anonymne. V prípade, že samoliečba neprinesie požadovaný výsledok, odporúča sa konzultovať s otolaryngológom, aby vykonal primerané vyšetrenie a predpísal vhodnú liečbu. Prečítajte si viac o testovaní na HIV v sérii článkov kliknutím na odkaz: HIV.
Povedz mi, môžeš opísať laboratórium v mestskom laboratóriu? Nie vždy je však možné absolvovať analýzu v štátnej inštitúcii. A aká je percentuálna šanca, že sa muž nakazí nechráneným kontaktom?
Žiaľ, neposkytujeme porovnávacie hodnotenie laboratórií a súkromných zdravotníckych zariadení. V prípade, že máte pochybnosti o spoľahlivosti výsledkov, vykonajte vyšetrenie v inom centre a požiadajte najskôr o licenciu na poskytovanie týchto zdravotných služieb, či má toto centrum právo vykonávať toto vyšetrenie a či všetko zodpovedá uznávaným štandardom. Riziko nákazy pri nechránenom styku je u oboch pohlaví rovnaké. Prečítajte si viac o testovaní na HIV v sérii článkov kliknutím na odkaz: HIV.
Dobrý deň! 8-mesačné dieťa bolo testované na HIV testom ELISA, v krvi boli nájdené gp160 + a p25 +, zvyšok je všetko mínus, záver IB je pochybný. Súdiac podľa týchto analýz sa ukazuje, že dieťa je +? gp160 + gp110/120 - p68 - p55 - p52 - gp41 - p34 - p25 + p18 -
Bohužiaľ, na základe získaných údajov nie je možné stanoviť diagnózu so 100-percentnou pravdepodobnosťou, pretože nie je vylúčený falošne pozitívny výsledok. Na stanovenie presnej diagnózy budete musieť podstúpiť sériu vyšetrení vrátane opakovania tejto analýzy pomocou ELISA, ako aj vykonania analýzy pomocou metódy PCR. Potom by ste sa mali obrátiť na špecializovanú lekársku inštitúciu, kde bude odborník na infekčné choroby schopný vyhodnotiť výsledky v komplexe. Viac o prejavoch infekcie HIV sa dozviete v tematickej časti našej webovej stránky po kliknutí na odkaz: HIV
Môže ukázať falošne pozitívny výsledok pri "ARI" alebo akútnejších infekčných ochoreniach? Niekde som cital, ze pri 58 chorobach alebo aj vyssich moze ukazat "+" vratane ockovania proti hepatitide B, ak trpia oblicky a pod.?
Existuje možnosť falošne pozitívneho výsledku, preto vám odporúčam urobiť nasledovné: znovu analyzovať – pomocou ELISA a PCR a potom znova navštíviť odborníka na infekčné choroby. Viac o diagnostike HIV infekcie sa dozviete v tematickej sekcii: HIV
Dobrý deň! Imunoblot neurčitý v dôsledku proteínu p25. Aká je pravdepodobnosť HIV?
V tejto situácii je potrebné starostlivo preštudovať protokoly štúdie v kombinácii s inými ukazovateľmi, pretože na základe týchto údajov nie je možné urobiť predpoklad. Výsledok možno považovať za pochybný a po 3 mesiacoch je potrebné opätovné vyšetrenie. Prečítajte si viac v sekcii našej webovej stránky: HIV
Dobrý deň.
Môžete sa vyjadriť k testu ELISA na HIV
1 sérum +3,559 k=13,3
+2,121 k=4,9
p 24 neg
Sérum 2 +3,696 k=13,9
+2,477 k=5,7
V tomto prípade nie je vylúčený falošne pozitívny výsledok, vzhľadom na to, že metóda ELISA je nepriama, preto vám odporúčam urobiť analýzu inou, citlivejšou metódou – immunoblotting. Podrobnejšie informácie o tejto problematike sa dozviete v príslušnej sekcii našej webovej stránky po kliknutí na nasledujúci odkaz: HIV
Dobré popoludnie, povedzte mi, čo si mám naladiť? Pred rokom pri planovani dietatka sme s manzelom presli vsetky testy, aj na HIV (brali to velmi vazne a spravne), bola som na vysetreni v Kr.Rogu, manzel v Kyjeve, mal negativnu odpoved. , povedali mi, že nejaký druh činidla nefungoval, musím si ho znova vziať v Centre AIDS v Kyjeve. Po absolvovaní analýzy v Centre mi aj odpoveď prišla negatívna. Teraz som na pozícii v 14 týždni, t.j. Zaregistrujem sa, prejdem vsetkymi testami a opat sa mi vratila odpoved, test HIV bol nekonecny, znova som ho absolvoval na klinike a absolvoval expresny test na ukludnenie u Dovira, ale neupokojili ma. , expresný test ukázal pozitívny výsledok (druhý prúžok bol menej výrazný), ihneď po celom tomto postupe, bez straty času, som podal žiadosť do AIDS centra a tiež som prešiel analýzou, čakám na výsledok. (Neviem sa upokojiť) Povedzte mi, do akej miery môžete dôverovať expresným testom a prečo prvýkrát neexistuje žiadna odpoveď na test HIV? (s manželom vedieme zdravý životný štýl a máme sa radi). Ďakujem.
Neprepadajte panike vopred - expresná diagnostika nie je základom pre stanovenie diagnózy HIV, umožňuje vám identifikovať skupiny pacientov, ktorí vyžadujú hlbšiu štúdiu. V takýchto situáciách sa odporúča vykonať imunitný blotting a osobne sa poradiť s lekárom infekčnej choroby. Podrobnejšie informácie o tejto problematike sa dozviete v tematickej časti našej webovej stránky po kliknutí na odkaz: HIV. Ďalšie informácie môžete získať aj v nasledujúcej časti našej webovej stránky: Laboratórna diagnostika
Dobry den, bola som na infekcnom, len dnes ma prepustili pri odchode, lekar mi zavolal a vysvetlil, ze mam pozitivnu ifa, najprv ked som isla do nemocnice bola negativna, potom pri preberani pozitivna. , poslali imunoblotovú štúdiu sokoliarom na horu povedali, že to bude hotové budúci týždeň, ležal som v nemocnici s angínou a vírusmi parachrípky, prichádzam v šoku, stále nechápem ako vzhľadom na to bol vypracovaný aj výpis pre moju kliniku, ktorý naznačuje, že ak bol nájdený a nižší, že imunoblot funguje, ak ma zajtra prepustia na mojej klinike, potom bude všetko uvedené v tomto výpise, aká je pravdepodobnosť, že je prítomný HIV Môže sa stať, že vzhľadom na to, že som sa liečil na bolesť hrdla vírusom parainfluenzy, vykazoval som pozitívne výsledky na ifa?
Pravdepodobnosť falošne pozitívneho výsledku je veľmi vysoká. Prítomnosť jedného pozitívneho výsledku ešte nie je dôvodom na stanovenie diagnózy HIV, preto odporúčame počkať na výsledok imunoblottingu a následne sa o ďalšom vyšetrení a pozorovaní osobne poradiť s odborníkom na infekčné choroby. Angína, parainfluenza a iné prechladnutia významne neovplyvňujú výsledky analýzy.
Chcem tomu veriť, ale koncom augusta som mala malátnosť, teplota mi stúpla, 37,5-38 asi 4 dni som mala riedku stolicu, bolo to na dovolenke, kde bolo veľa diskoték, pila som vodu z vodovodu ako napr. vela inych, lebo na to, ze to bolo velmi drahe, pohar vody stal 300 rubľov, riedku stolicu s takouto teplotou som si spojila s nejakou crevnou infekciou zachytenou vo vode, uz si presne nepamatam, ale bola tam aj mala vyrazka v hornej časti tela, keď som prišla domov s teplotou, zavolala som doktorke, napísala mi rotavírusovú infekciu, po 5 dňoch choroby som sa dobrovoľne prihlásila, že ho opustím a pôjdem do práce, kde som o pár dní ochorela na zápal dutín (počas to obdobie som musel byť kvôli práci na ulici) spojil som si to, že veľký pokles teploty z dovolenky a otravy mi znížili imunitu a preto som opäť raz prechladol so zápalom dutín, celkovo je to opäť nemocenská, smer Laura som pil klacid cf 500 10 dni, preslo to, po 3 tyzdnoch som sa vratil do prace bol som na sluzobnej ceste do arch country na 3 dni. klimatizacie v odvoze a hoteli boli nemilosrdne a po navrate domov, v lietadle som mala teplotu uz 39,5.tu som bola doma s teplotou 40, zavolala lekarku domov, napisala orvi a povedala svoje hrdlo bolo veľmi červené, mal som chronický zápal mandlí a povedal som to Laure, ona sama napísala, že má vypiť antibiotikum Levolet r., zavolala sanitku, pretože mala horúčku a tempo bolo 40 a neklesalo, hospitalizácia nebola ponúknutá, ďalšia deň ten istý príbeh - záchranka dala injekciu proti horúčke a odišla. Tretí krát som trval na hospitalizácii, ledva ma odviezli na infekčné, kde mi zistili zmiešanú infekciu parainfluenzy a adenovírusu, ale pri prepustení doktorka - primarka oddelenia povedala ze mam pozitivne HIV ifa a ze mi to robili 2x som v soku neviem co mam robit nemozem jest a pit .povedala ze mam vyslov. akútnu infekciu HIV a na overenie mi poslali rozbor krvi na imunoblot do AIDS centra,
teraz, keď som si nakreslil analógiu udalostí, ktoré sa mi stali v poslednej dobe, ako aj 3 nemocenské za sebou, vyskúšal som všetky príznaky a som zhrozený, čo by to mohlo byť, po prepustení v ten istý deň som šiel vykonať analýzu in vitro anonymne a nasledujúci deň bol výsledok pre ifa rovnaký +
Ospravedlňujem sa za také podrobné informácie, ale som zmetená a zabitá, pijem silné sedatíva a nemám chuť do jedla a prakticky nejem, výrazne som schudla
mam este taku otazku ze lekarka s vypisom z nemocnice ukazala vysledok HIV by sa zistilo ifa a pod tym je imunoblot v praci, ale akonahle zavriem bl v mojej ambulancii na mieste, vsetko bude byť tam napísané. čo mám robiť, už to nebude dôverné. Požiadal som pani doktorku, aby tento rozbor nezapisovala do výpisu, čo mi odmietla, do akej miery sú tu rešpektované moje práva na nesprístupnenie informácií.
Bohužiaľ, výsledky štúdií vykonaných v nemocnici sa zmestia do výpisu, pretože ošetrujúci obvodný lekár musí mať úplné informácie o vašom zdravotnom stave. V tejto situácii nehovoríme o sprístupnení informácií, pretože sa len prenášajú na iného ošetrujúceho lekára, ktorý vás bude naďalej pozorovať.
Ahoj! Spravil som si testy na HIV, lebo som potreboval certifikat na FMS, tie testy nedali par tyzdnov, potom ma pozvali na prednostu a dali mi pozitivny vysledok, zobrali kopu dokladov a poslali ich do regionálneho AIDS centra na ďalšie vyšetrenie, ako je napísané na osvedčení. Chcem prejsť v inej ambulancii a potom ísť na regionálnu, alebo má zmysel ju absolvovať znova? Len nechapem preco ich nedali tak dlho prec, ale lekar povedal, ze vraj urobili nejaky rozbor a dlhujem im dalsich 4 tisic rublov, lebo keby to urobili, dali by asi podrobne informácie o chorobe okrem potvrdenia?
V tejto situácii by ste nemali panikáriť vopred - získanie jedného pozitívneho výsledku ešte neumožňuje spoľahlivo posúdiť možnú infekciu, pretože nie sú vylúčené falošne pozitívne výsledky. Odporúčame test zopakovať a v prípade pozitívneho výsledku bude potrebné absolvovať ďalšie vyšetrenie – imunoblotting. Laboratórium spravidla neposkytuje podrobné informácie o výsledkoch, čo je bežná a bežná prax. Všetky prípadné otázky Vám zodpovie ošetrujúci lekár po vyšetrení na osobnej konzultácii.
Zabudol som dodať, že od začiatku júna do polovice septembra som si robil kúru anabolických steroidov, konkrétne sustanon 250 je zmes testosterónov a stanozololu s primabolanom, chcel som sa pripraviť na leto a dovolenku, či by mi mohli priniesť dole moja imunita a vsetko co sa mi stalo.
Poruchy imunity, ako aj prítomnosť autoimunitných ochorení môžu poskytnúť falošne pozitívne výsledky testu HIV. Preto sa v prípade získania 2 pozitívnych výsledkov pomocou ELISA odporúča imunoblotting, ktorý vám umožní presne odpovedať na otázku, či ide o infekciu alebo nie.
čo znamená prítomnosť autoimunitných ochorení, čo to je?
vo vseobecnosti mozem povedat, ze som od ranneho detstva ochorela pomerne casto a este pred par troma rokmi som prosila osetrujuceho lekara, aby sa staral o moju imunitu, pretoze som bol neustale unaveny a casto chory, najviac ucho, hrdlo, nos , ale po celý čas boli negatívne výsledky na HIV, odovzdal som ich s dostatočnou ľahkosťou, bez váhania.
Falošne pozitívny výsledok testu HIV môže byť po nedávnej vírusovej infekcii, očkovaní proti hepatitíde B, tuberkulóze, hepatitíde, herpese, ako aj na pozadí autoimunitných ochorení, ako sú: reumatoidná artritída, systémový lupus erythematosus, dermatomyozitída, sklerodermia, ochorenia spojivového tkaniva atď.
Chcem sa doplniť k mojej otázke, prišiel mi imunoblot, bol negatívny, ale doktor povedal, že keďže boli dve ak +, keď som bola na infekčnom, musím ešte urobiť rozbor, ale o niečo neskôr
V tomto prípade je lekárska taktika oprávnená - odporúčame vám znova vykonať imunoblot za 1,5-2 mesiace.
Aká je pravdepodobnosť: 2 ifa + rozdiel medzi odbermi krvi cca 2 dni, imunoblot - ; bol v nemocnici pre infekčné choroby s adenovírusovou infekciou a parainfluenzou, kde bola odobratá krv, imunoblot bol odoslaný do centra AIDS
Dobrý deň! Zaregistroval som sa na LCD, prešiel som všetkými testami, lekár povedal, že mám herpes v krvi, potom mi volajú z AIDS centra a hovoria, že musím znova podať žiadosť, podal som žiadosť a povedali mi, že mám HIV pozitivny, v panike sme si isli s manzelom zopakovat mala som aj ifa a imunoblot + manzel mal rozbor, dala som to o mesiac. Mám + manžel - teraz som v 23 týždni tehotenstva!
V tejto situácii, žiaľ, existuje možnosť infekcie HIV, ale konečnú diagnózu nemožno stanoviť ani pri pozitívnom imunoblote, vzhľadom na stav tehotenstva. V tejto situácii je potrebné vylúčenie falošne pozitívnych výsledkov, preto odporúčame test zopakovať a osobne sa poradiť s odborníkom na infekčné choroby.
ak imunoblot ukázal pozitívny výsledok na HIV a skríning je negatívny, ktorému výsledku by sa malo dôverovať?
Imunoblot je presnejšia štúdia, preto v tejto štúdii, ak sa dosiahne pozitívny výsledok, je potrebné pokračovať v štúdii a osobne navštíviť odborníka na infekčné choroby.
Čo je to - imunoblot? Toto je bežná metóda laboratórnej diagnostiky ľudských vírusových infekcií. Považuje sa za jeden z najpresnejších a najspoľahlivejších spôsobov na zistenie prítomnosti HIV. Vo svojej spoľahlivosti predčí aj výsledky imunoblotu sú považované za nevyvrátiteľné a konečné.
všeobecné informácie
Imunoblot - čo to je? Aby sa u človeka rozpoznala infekcia HIV, je potrebné podrobiť sa laboratórnemu vyšetreniu krvného séra na prítomnosť protilátok. Technika Western blot sa tiež nazýva Western blot. Používa sa na detekciu ľudských vírusových infekcií ako doplnková expertná metóda. Je potrebné potvrdiť ELISA - laboratórny test, ktorý umožňuje určiť prítomnosť HIV protilátok v krvi. Pozitívna analýza ELISA sa znova skontroluje imunoblotovaním. Považuje sa za najcitlivejšie, komplexné a drahé.
účel
Čo je to - imunoblot? Ide o techniku laboratórneho testovania krvného séra na prítomnosť protilátok proti vírusu. Počas štúdie špecialista predbežne oddeľuje proteíny vírusu v géli a prenáša ich na nitrocelulózovú membránu. Postup imunoblotovania je určený na stanovenie HIV v rôznych štádiách. V prvej fáze sa purifikovaný vírus z jeho zložiek podrobí elektroforéze a antigény, ktoré tvoria jeho zloženie, sa oddelia podľa molekulovej hmotnosti.
Rozmnožuje sa v živej bunke a vkladá do nej svoju genetickú informáciu. V tomto štádiu sa človek stáva nosičom vírusu HIV, ak bol infikovaný. Špecifikom choroby je, že sa nemusí prejaviť dlho. Vírus ničí lymfocyty, takže ľudská imunita je znížená a telo sa stáva neschopným odolávať infekciám. Ak sa HIV lieči kompetentne a včas, pacient sa dožije vysokého veku. Nedostatok terapie nevyhnutne vedie k smrti. Od okamihu infekcie, ale bez liečby, maximálna dĺžka života nie je dlhšia ako desať rokov.
Zvláštnosti
Imunoblotová analýza je spoľahlivá metóda, ktorá vám umožňuje určiť prítomnosť protilátok proti HIV antigénom prvého a druhého typu. Ak je človek infikovaný, do dvoch týždňov sa objavia protilátky, ktoré sa dajú zistiť oveľa neskôr. Zvláštnosťou HIV je, že počet protilátok sa rýchlo zvyšuje a zostáva v krvi pacienta. Aj keď sú prítomné, ochorenie sa nemusí prejaviť skôr ako dva a viac rokov. Metóda ELISA nie vždy presne určí prítomnosť ochorenia, preto je potrebné potvrdenie výsledkov pomocou imunoblottingu a PCR, ak je enzýmový imunotest pozitívny.
Indikácie na vymenovanie
Čo je to "imunoblot" už bolo zistené, ale komu je táto štúdia predpísaná? Dôvodom na vykonanie testov na metódu imunoblotovania je pozitívny výsledok ELISA. U pacientov, ktorí budú operovaní, je potrebné absolvovať enzýmový imunotest. Okrem toho by sa mala urobiť analýza pre ženy plánujúce tehotenstvo, ako aj pre všetkých, ktorí sú sexuálne promiskuitní. Priraďte imunoblotting pacientom s HIV, ak sú výsledky testu ELISA pochybné. Nasledujúce alarmujúce príznaky môžu byť dôvodom návštevy lekára:
- prudký úbytok hmotnosti;
- slabosť, strata pracovnej kapacity;
- porucha čriev (hnačka), ktorá trvá tri týždne;
- dehydratácia tela;
- horúčka;
- opuchnuté lymfatické uzliny v tele;
- rozvoj kandidózy, tuberkulózy, pneumónie, toxoplazmózy, exacerbácie herpesu.
Pacient sa pred darovaním venóznej krvi nemusí pripravovať. 8-10 hodín pred štúdiom nemôžete jesť. Deň pred darovaním krvi sa neodporúča piť alkoholické a kávové nápoje, vykonávať ťažké fyzické cvičenia, zažívať vzrušenie.
Kde urobiť analýzu?
Kde sa môžem otestovať na HIV? ELISA, imunoblotové štúdie sa vykonávajú na mestských súkromných klinikách, výsledky sa vydávajú do jedného dňa. Okamžitá diagnóza je tiež možná. V štátnych zdravotníckych zariadeniach sa testy ELISA a imunoblotting vykonávajú bezplatne v súlade s právnymi predpismi Ruskej federácie. Tehotné ženy, ako aj pacienti, ktorí majú byť hospitalizovaní alebo majú podstúpiť operáciu, sú povinní testovať na infekčné ochorenia.
Ako prebieha výskum?
Ako sa vykonáva ELISA? Imunoblot pozitívny/negatívny potvrdzuje alebo vyvracia výsledky enzýmového imunotestu. Postup výskumu je pomerne jednoduchý. Špecialista vykonáva odber vzoriek žilovej krvi, ktorý trvá maximálne päť minút. Po odbere vzoriek treba miesto vpichu dezinfikovať a prelepiť náplasťou. Odber vzoriek sa vykonáva nalačno, takže po zákroku nezaškodí zjesť tabuľku tmavej čokolády alebo vypiť sladký horúci nápoj.
Ak chcete získať odporúčanie na bezplatnú analýzu vo verejnom zdravotníckom zariadení, musíte navštíviť praktického lekára. Vo všeobecnosti sa imunoblot nelíši od iných krvných testov, pokiaľ ide o spôsob odberu vzoriek. Metodológia výskumu je jednoduchá. Ak je vírus prítomný v krvi človeka, telo začne produkovať protilátky na jeho zničenie. Každý vírus má svoju vlastnú sadu antigénnych proteínov. Detekcia týchto protilátok je základom techniky Western blotting.
cena
Koľko stojí analýza? Imunoblot pre HIV sa nevzťahuje na lacný výskum. V priemere stojí skríningové vyšetrenie enzýmovým imunotestom od 500 do 900 rubľov. Imunoblotting je overovacia štúdia, ktorej náklady sú od troch do piatich tisíc rubľov. Zložitejšie metódy sú oveľa drahšie. Napríklad za to budete musieť zaplatiť asi 12 000 rubľov.
Interpretácia výsledku
Najbežnejšími metódami diagnostiky infekcie HIV sú enzýmová imunoanalýza a imunoblot. Používajú sa na stanovenie sérových protilátok proti vírusu imunodeficiencie. Prítomnosť infekcie je zvyčajne potvrdená dvoma testami: skríningovým a potvrdzujúcim. Interpretáciu výsledkov štúdie by mal vykonávať lekár, tiež diagnostikuje a predpisuje liečbu. Ak je imunoblot pozitívny, znamená to, že v ľudskom tele je prítomný vírus.
Pozitívny výsledok by nemal byť dôvodom na samoliečbu, pretože každý pacient môže mať svoj vlastný obraz choroby. Kvalitatívna analýza zahŕňa skríning a verifikáciu. Ak pacient nemá vírus, výsledok je označený ako „negatívny“. Keď sa zistí skríningovou metódou, vykoná sa dodatočná overovacia štúdia. Imunoblot je analýza, ktorá potvrdzuje alebo vyvracia skríning. Ak sa na testovacom prúžku v určitých oblastiach (miestach lokalizácie proteínov) objaví stmavnutie, vykoná sa diagnóza HIV. Ak sú výsledky pochybné, testy sa vykonajú do troch mesiacov.
Infekcii vírusom imunodeficiencie môžete zabrániť, ak budete dodržiavať určité pravidlá: vyhýbajte sa príležitostnému sexu, počas kontaktov používajte kondóm, neužívajte drogy. Ak sa ochorenie zistí u tehotnej ženy, je dôležité prísne dodržiavať odporúčania ošetrujúceho lekára, nezabudnite podstúpiť vyšetrenia na prítomnosť vírusu.
IMUNOBLOT(western blot) - metóda laboratórneho testovania krvného séra na prítomnosť protilátok proti HIV; je to presnejší test ako ELISA a používa sa na potvrdenie výsledkov ELISA. ELISA - enzýmová imunoanalýza (ELISA) - laboratórny test, ktorý vám umožňuje určiť prítomnosť protilátok proti HIV v krvi; test na protilátky proti HIV.
Podľa odporúčania WHO sa imunoblotting (western blot) používa v diagnostike HIV infekcie ako doplnková expertná metóda, ktorá by mala potvrdiť výsledky ELISA. Táto metóda sa zvyčajne používa na dvojitú kontrolu pozitívneho výsledku ELISA, pretože sa považuje za citlivejšiu a špecifickejšiu, hoci je zložitejšia a drahšia.
Imunoblotting kombinuje enzýmovú imunoanalýzu (ELISA) s predbežnou elektroforetickou separáciou vírusových proteínov v géli a ich prenosom na nitrocelulózovú membránu. Postup imunoblotu pozostáva z niekoľkých etáp (). Po prvé, predčistený a zničený na jednotlivé zložky sa HIV podrobí elektroforéze, pričom všetky antigény, ktoré tvoria vírus, sa oddelia podľa molekulovej hmotnosti. Potom sa blotovaním antigény prenesú z gélu na prúžok nitrocelulózy alebo nylonového filtra, ktoré teraz obsahujú spektrum proteínov, ktoré sú charakteristické pre HIV, okom neviditeľné. Ďalej sa na prúžok nanesie testovaný materiál (sérum, krvná plazma pacienta atď.) a ak sú vo vzorke špecifické protilátky, naviažu sa na prúžky antigénnych proteínov, ktoré im striktne zodpovedajú. V dôsledku následných manipulácií (ako ELISA) sa výsledok tejto interakcie vizualizuje – zviditeľní. Prítomnosť prúžkov v určitých oblastiach prúžku potvrdzuje prítomnosť protilátok proti presne definovaným antigénom HIV v skúmanom sére.
Imunoblotting sa najčastejšie používa na potvrdenie diagnózy infekcie HIV. WHO považuje séra za pozitívne, ak sa imunoblotingom detegujú protilátky proti ktorýmkoľvek dvom obalovým proteínom HIV. Podľa týchto odporúčaní, ak dôjde k reakcii iba s jedným z obalových proteínov (gp160, gp120, gp41) v kombinácii alebo bez reakcie s inými proteínmi, výsledok sa považuje za pochybný a odporúča sa druhá štúdia s použitím súpravy z iného série alebo od inej spoločnosti. Ak potom výsledok zostane pochybný, štúdie pokračujú každé 3 mesiace.
Pri imunoblotovaní sa v prvej fáze proteíny obsiahnuté v krvnom sére separujú v géli podľa ich molekulovej hmotnosti a náboja pomocou elektrického poľa (metóda gélovej elektroforézy). Potom sa na gél nanesie nitrocelulózová alebo nylonová membrána a „navlhčí“ (to je blotovanie). Toto sa vykonáva v špeciálnej komore, ktorá umožňuje úplný prenos materiálu z gélu na membránu. Výsledkom je, že vzor usporiadania proteínov, ktorý bol na géli, sa reprodukuje na membráne (blot), s ktorou možno ľahko manipulovať. Najprv sa membrána ošetrí protilátkami proti požadovanému antigénu a po zmytí nenaviazaného materiálu sa pridá rádioaktívne značený konjugát, ktorý sa špecificky viaže na protilátky (ako pri ELISA). Umiestnenie výsledného komplexu konjugátu značeného antigén-protilátka sa určí autorádiografiou s použitím rôntgenového filmu. Po jeho prejave sa všetko vyjasní, či sú v krvi antigény alebo nie.
Imunoblotting -(z anglického "blot" - spot) - metóda identifikácie antigénov (alebo protilátok) pomocou známych sér (alebo antigénov). Ide o kombináciu gélovej elektroforézy s ELISA. Najprv sa bakteriálne bunky alebo virióny zničia pomocou ultrazvuku a potom sa všetky antigény vírusu alebo bakteriálnych buniek oddelia elektroforézou a na špeciálnom nitrocelulózovom filme sa získa komerčné činidlo. Pri nastavení imunoblotingu sa testovacie sérum pacienta nanesie na film so známymi antigénmi. Po inkubácii a vymytí nenaviazaných protilátok pristúpia k ELISA - antisérum proti ľudským imunoglobulínom značeným enzýmom a na film sa nanesie chromogénny substrát, ktorý pri interakcii s enzýmom mení farbu. V prítomnosti komplexov antigén-protilátka-antisérum až imunoglobulín-enzým sa na nosiči objavujú farebné škvrny. Metóda imunoblotovania vám umožňuje samostatne detegovať protilátky proti rôznym antigénom patogénu (napríklad pri infekcii HIV imunoblotting deteguje protilátky proti gp120, gp24 a iným antigénom vírusu).
Rádioimunoanalýza (RIA)
Metóda je založená na reakcii antigén-protilátka s použitím antigénu alebo protilátkovej značky s rádionuklidom. Ako značka sa používajú 125I, 14C, 3H, 51Cr a ďalšie rádionuklidy. Vzniknuté imunitné komplexy sa izolujú zo systému a ich rádioaktivita sa stanoví na počítadlách (β-žiarenie). Intenzita žiarenia je priamo úmerná počtu naviazaných molekúl antigénu a protilátky.
Široko sa používa verzia RIA na pevnej fáze využívajúca značené protilátky alebo antigény adsorbované v jamkách polystyrénových panelov.
RIA sa používa na detekciu antigénov mikróbov, vírusov, rôznych hormónov, enzýmov, liečivých látok, imunoglobulínov, ako aj iných látok obsiahnutých v testovanom materiáli v malých koncentráciách 10–12–10–15 g/l.
testovacie otázky
Reakcia imunitnej bakteriolýzy: aký druh reakcie je; čo je to antigén, čo je to protilátka, mechanizmus reakcie, spôsoby nastavenia, praktická aplikácia. Imunitná hemolytická reakcia: potrebné zložky, spôsob nastavenia; ovládanie, praktická aplikácia. Reakcia lokálnej hemolýzy v géli (Yernova reakcia): princíp reakcie, spôsob formulácie, praktická aplikácia. Reakcia fixácie komplementu: princíp reakcie; čo sa tvorí, keď imunitné sérum interaguje so špecifickým antigénom; čo sa stane s doplnkom, ak je prítomný v tejto interakcii? Aký je osud komplementu, ak medzi antigénom a protilátkami neexistuje špecifická afinita? Akú reakciu možno použiť na určenie toho, čo sa stalo s doplnkom; prečo sa táto reakcia používa; aký je viditeľný pozitívny výsledok RSK? prečo? Aká vlastnosť komplementu sa využíva v prvej fáze CSC? V druhej fáze? Ak je konečným výsledkom RSK hemolýza, znamená to pozitívny alebo negatívny výsledok? Vysvetlite výsledky: RSK+ + + +, RSK+ + +, RSK+ +, RSK+. Vymenujte zložky prvého systému RSK a zložky druhého systému RSK. Prečo je potrebné testovacie sérum inaktivovať? Ako sa titruje komplement? Hemolytické sérum: čo obsahuje, ako sa získava, čo je titer a ako sa určuje? Aké zvieratá sa používajú na získanie komponentov RSC? Technika nastavenia RSC v chlade. Pri stanovení ktorej z nasledujúcich reakcií je potrebná účasť komplementu: zrážanie, flokulácia, aglutinácia, detekcia neúplných protilátok, imunitná bakteriolýza, imunitná hemolýza, Yerne, CSC? Imunofluorescenčná reakcia (RIF) - označujú postupnosť dejov v priamej Coonsovej reakcii; potrebné ingrediencie. Čo je antigén, čo je protilátka, ako sa protilátky označujú, ako sa zohľadňuje výsledok reakcie, ako vyzerá pozitívny výsledok? Praktická aplikácia - čo možno pomocou tejto reakcie určiť? Nepriama imunofluorescenčná reakcia - uveďte postupnosť udalostí v tejto reakcii, potrebné zložky, aký je antigén, aké imunitné séra sa používajú; praktické využitie; výhoda nepriameho RIF oproti priamej reakcii. Enzýmová imunoanalýza (ELISA) - princíp reakcie; potrebné zložky; indikujú postupnosť udalostí pri nastavovaní reakcie na detekciu antigénu v testovanom materiáli; potrebné zložky; čo sa stane s pozitívnym výsledkom, ako to vyzerá? Špecifikujte postupnosť akcií počas testu ELISA na zistenie protilátok v testovacom sére; potrebné zložky; čo sa stane s pozitívnym výsledkom? Imunoblotting - princíp reakcie; hlavné kroky; potrebné zložky; Ako sa berie do úvahy výsledok? reakčné výhody. Rádioimunoanalýza (RIA) - aké sú hlavné štádiá reakcie; čím sú označené protilátky alebo antigény, ako sa berie do úvahy výsledok? Imunoelektrónová mikroskopia - princíp metódy; hlavné kroky; potrebné zložky; Čím sú protilátky označené? ako sa berie do úvahy výsledok reakcie. Imobilizačné reakcie - princíp metódy, technika nastavenia, komponenty, účtovanie výsledkov.
Úlohy, ktoré treba vykonať v procese samotréningu.
Vyplňte tabuľku Reakcie imunity pre reakcie zahrnuté v tejto téme.
Imunitné reakcie
Práca študenta na praktickej hodine
Okamžite začnite pracovať s formuláciou 1. fázy RSC, ale zapíšte si ju do zošita neskôr (pozri nižšie).
1. Reakcia imunitnej hemolýzy. Zobrazte demonštračnú reakciu imunitnej hemolýzy, nakreslite ju ako diagram, vysvetlite výsledok v experimentálnej a kontrolnej skúmavke.
2. Reakcia väzby komplementu
a) rozoberte RSC podľa tabuľky;
b) nakreslite do zošita schému nastavenia RSC vo forme tabuľky;
c) dať druhú fázu RSK (prvá fáza je umiestnená na začiatku hodiny);
d) demontovať diagnostické prípravky potrebné pre RSK;
e) vziať do úvahy výsledok. Formulujte záver o prítomnosti špecifických protilátok v testovacom sére.
3. Imunofluorescenčná reakcia. Preštudujte si tabuľku, vytvorte schému nastavenia reakcie v notebooku; pozri diagnostické séra; určiť, čo sérum obsahuje, ako sa pripravuje, na akú reakciu (priama alebo nepriama RIF) sa používa. Pozrite sa na demonštračný výsledok RIF vo fluorescenčnom mikroskope.
4. Enzýmová imunoanalýza (ELISA). Vo svojom notebooku si vytvorte reakčnú schému v dvoch verziách: na detekciu antigénu v testovacom materiáli a na detekciu protilátok v sére. Prezrite si súpravu zložiek na diagnostiku HIV a hepatitídy B. Zistite, čo každá zložka obsahuje a na čo sa používa.
5. Imunoblotting. Urobte si diagram reakcie v notebooku; pozri demo - vysledok reakcie.
6. Rádioimunoanalýza (RIA). Nakreslite schému reakcie do zošita.
7. Imunitná elektrónová mikroskopia (IEM). Pozrite si ukážku - výsledok reakcie, vytvorte si schému reakcie do zošita, označte antigén (vírus) a označené protilátky šípkami.
Imunoblotting je vysoko citlivá metóda detekcie proteínov založená na kombinácii elektroforézy a ELISA alebo RIA. Imunoblotting sa používa ako diagnostická metóda pre infekciu HIV atď.
Vo všeobecnom zmysle sa imunoblotting chápe ako analýza zmesi proteínov prenesených na pevnú nosnú membránu, s ktorou sa viažu kovalentnými väzbami, po ktorej nasleduje imunodetekcia.
Je možné analyzovať zmes proteínov priamo deponovaných na substráte (dot blot analýza) alebo po jej predbežnej frakcionácii elektrofokusáciou, diskovou elektroforézou alebo dvojrozmernou elektroforézou (Western blot).
Patogénne antigény sa oddelia elektroforézou na polyakrylamidovom géli, potom sa prenesú z gélu na aktivovaný papier alebo nitrocelulózovú membránu a vyvinú sa pomocou ELISA.
Firmy vyrábajú takéto prúžky s "škvrnami" antigénov. Na tieto prúžky sa aplikuje pacientovo sérum. . Potom, po inkubácii, sa pacient umyje od nenaviazaných protilátok pacienta a aplikuje sa sérum proti ľudským imunoglobulínom značeným enzýmom. . Komplex vytvorený na prúžku (antigén + protilátka pacienta + protilátka proti ľudskému Ig) sa deteguje pridaním chromogénneho substrátu, ktorý pôsobením enzýmu mení farbu.
Táto metodológia sa tiež aplikuje na selekciu klonov baktérií, fágov alebo vírusov exprimujúcich produkty cieľových klonovaných génov.
Prenos proteínov na membránu sa uskutočňuje buď pasívne alebo pomocou elektrotransferového zariadenia. Účinnosť prenosu proteínov na membránu je ovplyvnená mnohými faktormi, ako je molekulová hmotnosť proteínov, pórovitosť gélu, čas prenosu a zloženie použitého tlmivého roztoku (trans tlmivého roztoku).
V závislosti od úloh a podmienok experimentu sa vyberajú podmienky prenosu, ktoré poskytujú najlepšie výsledky. Bežne používané substráty sú nitrocelulóza, polyvinylidéndifluorid (PVDF) alebo kladne nabité nylonové membrány. Nitrocelulóza dokáže viazať až 80-100 mikrogramov bielkovín na 1 cm2.
Proteíny s nízkou molekulovou hmotnosťou (s molekulovou hmotnosťou menšou ako 20 kDa) sa môžu stratiť v dôsledku premývania, čo umožňuje predbežne študovať polymorfizmus určitých genetických lokusov podľa dĺžok zodpovedajúcich restrikčných fragmentov DNA.
Pomocou Southern hybridizácie je navyše ľahké zistiť, či cieľový gén má vo svojej vnútornej časti miesto hydrolýzy určitým reštrikčným enzýmom, čo umožňuje zvoliť optimálnu stratégiu klonovania skúmanej oblasti genómu.
Podľa podobnej schémy môžu byť molekuly RNA tiež prenesené z agarózového gélu na nitrocelulózový filter. Táto metóda sa nazýva Northern blotting na rozdiel od Southern blotting, keďže priezvisko Southern znamená v angličtine „južný“.
Prenos z proteínového gélu na filtre sa preto nazýval Western blotting. Veľké proteíny (väčšie ako 100 kDa) denaturované v roztoku dodecylsulfátu sodného (SDS) sa môžu zle preniesť na membránu, ak je v trans tlmivom roztoku prítomný etanol. Alkohol výrazne zlepšuje prenos bielkovín z SDS-polyakrylamidového gélu, ale zužuje póry v géli, čo vedie k zadržiavaniu veľkých bielkovín.
PVDF membrána je optimalizovaná na imunodetekciu a je schopná zadržať špecificky viazané proteíny až do 160 µg/cm2 s veľmi nízkou úrovňou nešpecifickej väzby.
Imunoblotting
Dôležitou vlastnosťou tejto membrány je možnosť jej opakovaného použitia. Nylonové membrány Zeta-Probe účinne viažu proteíny SDS v neprítomnosti alkoholu a táto väzba je odolná voči následným úpravám. Proteíny s nízkou molekulovou hmotnosťou sú tiež účinne zadržané. S vysokou väzbovou kapacitou približne 480 µg proteínu na 1 cm2 môžu membrány Zeta-Probe detegovať stopové množstvá proteínu v testovacích zmesiach.
Po imobilizácii antigénu na membráne sú zostávajúce väzbové miesta blokované roztokmi želatíny alebo hovädzieho sérového albumínu alebo odstredeného mlieka.
Potom sa membrána inkubuje v roztoku polyklonálnych alebo monoklonálnych protilátok proti testovanému antigénu. Po vymytí nenaviazaných protilátok sa membrána inkubuje v roztoku sekundárnych protilátok, ktoré sú konjugátom enzýmov alkalickej fosfatázy (alkalická fosfatáza, AP) alebo chrenovej peroxidázy (HRP) s protidruhovými protilátkami (kozie protilátky proti králičiemu, myšaciemu resp. ľudské imunoglobulíny) alebo proteíny A (proteín Staphylococcus aureus) alebo G (proteín Streptococcus sp.), ktoré majú vysokú afinitu k Fc oblasti imunoglobulínov.
Detekcia vytvorených imunitných komplexov sa uskutočňuje chemickou alebo chemiluminiscenčnou metódou. Substrátmi pre chemickú reakciu pri použití konjugátov alkalickej fosfatázy sú 5-bróm-4-chlór-3-indolylfosfát (BCIP) alebo tetrazóliová modrá (NBT) a pri použití konjugátov chrenovej peroxidázy - 4-chlór-1-naftol a peroxid vodíka.
V dôsledku enzymatických reakcií sa na membráne v mieste lokalizácie komplexu antigén-protilátka vytvorí farebný pás alebo škvrna.
Citlivosť tejto metódy je 100 pg proteínu pri použití AP konjugátov a 100-500 pg pri použití HRP konjugátov. Chemiluminiscenčná detekcia imunitných komplexov môže detegovať menej ako 5 pg antigénu. Princíp tejto metódy spočíva v tom, že pri reakcii HRP s peroxidom vodíka a cyklickým diacylhydrazínluminolom sa vyžaruje svetlo s vlnovou dĺžkou 428 nm, ktoré je možné zaznamenať na fotocitlivý film.
Imunoblotovacia reakcia (RI) bola vyvinutá na základe ELISA. Je to najšpecifickejšia a najcitlivejšia metóda imunochemickej analýzy. Imunoblotting (z anglického blot – namočiť, spot) kombinuje ELISA s elektroforézou. Používa sa na detekciu nie komplexných protilátok proti HIV, ale protilátok proti jeho jednotlivým štruktúrnym proteínom (proteíny-p24, glykoproteíny-gp120, gp 41 atď.). Na diagnostiku infekcie HIV sa obráťte na odborné (potvrdzujúce) reakcie.
Reakcia sa uskutočňuje v niekoľkých fázach:
Vírus sa deštruuje na zložky - antigény (p24, gp120, gp 41 atď.), ktoré sa podrobia elektroforéze v polyakrylamidovom géli, to znamená separácii antigénov do frakcií podľa molekulovej hmotnosti.
2. Gél sa prekryje nitrocelulózovou membránou a pomocou elektroforézy sa naň prenesú antigénové frakcie. Nitrocelulóza sa správa ako pijavý papier. Membrána sa rozreže na pásiky (pásiky). Firmy vyrábajú takéto prúžky s "škvrnami" antigénov.
Imunoblotting - dodatočná nepriama metóda
Prúžky s nanesenými antigénmi HIV sa ponoria do séra subjektu a potom sa premyjú z nenaviazaného materiálu.
4. Prúžky sa inkubujú s antiglobulínovým sérom značeným peroxidázou a premyjú sa.
Pridá sa substrát a zaznamená sa počet farebných frakcií (škvŕn), ktoré zodpovedajú lokalizačnej zóne komplexu AG-AT.
Prítomnosť prúžkov v určitých oblastiach prúžku potvrdzuje prítomnosť protilátok proti presne definovaným antigénom HIV v skúmanom sére. Výsledok imunoblottingu sa považuje za pozitívny, ak sú na membráne viditeľné pásy zodpovedajúce ktorýmkoľvek dvom z troch HIV antigénov - p24, gp41 a gp 120 (obr. 37).
VÝKRESY
ZOZNAM POUŽITEJ LITERATÚRY
Hlavná literatúra
Lekárska mikrobiológia, virológia a imunológia: učebnica pre študentov medicíny. univerzity 2. vyd., opravené. a dodatočné — 702 s. Ed. A.A. Vorobjov. M.: MIA, 2012.
2. Mikrobiológia, virológia a imunológia: príručka laboratórnych štúdií: príručka štúdie / (V.B. Sboychakov et al.); vyd. V.B.Sboychakova, M.M.Karapats. – M.: GEOTAR-Media, 2014.- 320 s.: ill.
3. Lekárska mikrobiológia, imunológia a virológia [Elektronický zdroj]: učebnica pre med.
univerzity - 760 s. — Režim prístupu: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html Korotyaev A.I., Babichev S.A. Petrohrad: Spetslit, 2010.
4. Lekárska mikrobiológia, virológia a imunológia [Elektronický zdroj]: učebnica: v 2 zväzkoch / V. 1. - 448 s. — Režim prístupu: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html Zverev V.V., Boychenko M.N.
M.: Geotar Media, 2010. .
5. Lekárska mikrobiológia, virológia a imunológia [Elektronický zdroj]: učebnica: v 2 zväzkoch zväzok 2. - 480 s. Režim prístupu: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html Zverev V.V., Boychenko M.N. M.: Geotar Media, 2010.
doplnková literatúra
1. Imunodiagnostické reakcie: učebnica / zostavili: G. K. Davletshina, Z. G. Gabidullin, A. A. Akhtarieva, M. M. .
Khusnarizanova, Yu.Z. Gabidullin, M.M. Alsynbaev - Ufa: Vydavateľstvo GBOU VPO BSMU Ministerstva zdravotníctva Ruska, 2016. - 86s.
2. Vlastnosti niektorých vlastností, ktoré určujú patogénny potenciál kokultivovaných variácií baktérií Enterobacter, Сitrobacter, Serratia, E. coli, Proteus: vedecká publikácia / Yu. Z. Gabidullin, R. S. Sufiyarov, I. I. Dolgushin - Ufa, 2015. - 250 s.
Domov » Immunoblot - čo to je? Imunoblot v diagnostike infekčných chorôb
Imunoblot - čo to je? Imunoblot v diagnostike infekčných chorôb
Čo je imunoblot? Toto je bežná metóda laboratórnej diagnostiky ľudských vírusových infekcií. Je to jeden z najpresnejších a najspoľahlivejších spôsobov, ako zistiť prítomnosť HIV.
Z dôvodu spoľahlivosti je dokonca väčšia ako skúška s enzýmom spojeným imunosorbentom (elisa). Výsledky imunoblotu sa považujú za presvedčivé a presvedčivé. Všeobecné informácie
Imunoblot - čo to je? Aby ste rozpoznali osobu ako HIV pozitívnu, musíte podstúpiť laboratórny test na zistenie prítomnosti protilátok v krvnom sére.
Metóda Western blot sekcií sa tiež nazýva Western blot (western blot). Používa sa na detekciu vírusových infekcií u ľudí ako doplnková expertná metóda. To je potrebné na potvrdenie ELISA - laboratórneho testu, ktorý umožňuje určiť prítomnosť protilátok proti HIV v krvi. Imunoblot znova skontrolujte pozitívny test ELISA.
Považuje sa za najcitlivejšie, komplexné a drahé.
Cieľ
Čo je imunoblot? Táto metóda laboratórneho testovania krvného séra na prítomnosť protilátok proti vírusu.
Počas špeciálnych štúdií celkových vírusových proteínov v géli a na nitrocelulózových membránach.
Imunoblotting (detekcia protilátok v sére pacientov proti určitým antigénom patogénov)
Postup sekcie Western blot je určený na určenie infekcie HIV v rôznych štádiách. V prvom kroku sa purifikovaný vírus z jeho zložiek podrobí elektroforéze a antigény v ňom obsiahnuté, delené molekulovou hmotnosťou.
Vírus ľudskej imunodeficiencie sa replikuje v živých bunkách uložených v jeho genetickej informácii. V tomto štádiu sa osoba stáva nosičom vírusu HIV, ak ste boli infikovaní.
Špecifikom tejto choroby je, že sa dlho neprejavuje. Vírus ničí lymfocyty, čím sa znižuje imunita človeka a telo sa stáva neschopným bojovať s infekciami.
Ak sa HIV lieči správne a včas, pacient sa dožije vysokého veku. Nedostatok liečby nevyhnutne vedie k smrti. Od okamihu infekcie, ale bez liečby, maximálne obdobie nie je dlhšie ako desať rokov.
Zvláštnosti
Imunoblotová analýza je spoľahlivá metóda, ktorá vám umožňuje určiť prítomnosť protilátok proti HIV antigénom prvého a druhého typu.
Ak je človek infikovaný, po dvoch týždňoch protilátok, ktoré sa dajú zistiť oveľa neskôr. Charakteristickým znakom HIV je, že množstvo protilátok sa rýchlo zvyšuje a zostáva v krvi pacienta. Aj keď sú prítomné, ochorenie sa nemusí prejaviť skôr ako dva a viac rokov. Metóda ELISA nie vždy presne indikuje prítomnosť ochorenia a vyžaduje potvrdenie výsledkov z PCR a Western blot rezov, ak enzýmový imunotest ukázal pozitívny výsledok.
Indikácie pre
Aký druh „imunoblotu“ už bol zistený, ale ktorý sa v štúdii zavádza?
Dôvodom testovania na imunoblot vírusu ľudskej imunodeficiencie (HIV) bude pozitívny výsledok testu ELISA. U pacientov, ktorí sa chystajú podstúpiť operáciu, je potrebné prejsť enzýmovou imunoanalýzou. Okrem toho by ste mali urobiť analýzu žien plánujúcich tehotenstvo, ako aj tých, ktoré sú promiskuitné. Rezy Western blot sa podávajú pacientom s infekciou HIV, ak sú výsledky elisa sporné.
Dôvodom návštevy lekára môžu byť nasledujúce alarmujúce príznaky: rýchly úbytok hmotnosti, slabosť, strata funkcie, črevné poruchy (hnačka), ktoré trvajú tri týždne, dehydratácia, horúčka, zdurenie lymfatických uzlín v tele, rozvoj kandidózy, tuberkulóza, pneumónia, toxoplazmóza, exacerbácia herpesu.
Pacient sa pred darovaním venóznej krvi nemusí pripravovať.
8-10 hodín pred testom nejedzte. Deň pred darovaním krvi sa neodporúča piť alkohol a kávové nápoje, ťažké fyzické cvičenia, prežívať vzrušenie.
Kde urobiť analýzu?
Kde sa môžem otestovať na HIV?
ELISA, imunoblotová analýza vykonávaná na mestských súkromných klinikách, poskytuje výsledky do jedného dňa. Okamžitá diagnóza je tiež možná. Vo verejných inštitúciách sú lekárske testy elisa a sekcie Western blot bezplatné v súlade s legislatívou Ruskej federácie.
Povinný skríning infekčných chorôb tehotných žien a pacientov vyžadujúcich hospitalizáciu alebo operáciu Ako prebieha táto štúdia?
Ako vykonať ELISA? Imunoblot pozitívny/negatívny potvrdzuje alebo vyvracia výsledky elisa. Postup je celkom jednoduchý. Špecialista odoberie žilovú krv, časovo to trvá menej ako päť minút.
Po odbere vzoriek treba miesto vpichu dezinfikovať a prelepiť náplasťou. Odber vzoriek sa vykonáva nalačno, takže po zákroku nezaškodí zjesť tabuľku horkej čokolády alebo sladký horúci nápoj.
Ak chcete získať odporúčanie na bezplatnú analýzu vo verejnej zdravotníckej inštitúcii, musíte navštíviť terapeuta.
Vo všeobecnosti sa imunoblot nelíši od iných krvných testov odberom vzoriek. Metodológia výskumu je jednoduchá. Ak je vírus prítomný v krvi človeka, telo začne produkovať protilátky na jeho zničenie. Pre každý vírus existuje veľa proteínových antigénov. Detekcia týchto protilátok je základom metódy delenia Western blot. cena
Koľko analýzy? Immunoblot HIV označuje lacný výskum.
V priemere sa skríningové metódy imunoanalýzy pohybujú od 500 do 900 rubľov. Sekcie Western blot je kontrola štúdie, ktorej náklady sa pohybujú od troch do piatich tisíc rubľov. Zložitejšie metódy sú oveľa drahšie. Napríklad za analýzu polymerázovej reťazovej reakcie (PCR) budete musieť zaplatiť asi 12 000 rubľov.
Interpretácia výsledkov
Najbežnejšími metódami diagnostiky infekcie HIV sú enzýmová imunoanalýza a imunoblot.
Sú na stanovenie sérových protilátok proti vírusu ľudskej imunodeficiencie. Infekcia je zvyčajne potvrdená dvoma testami: skríningovým a potvrdzujúcim. Interpretáciu výsledkov by mal vykonať lekár, diagnostikuje a predpíše liečbu. Ak je imunoblot pozitívny, znamená to, že ľudské telo má vírus.
Pozitívny výsledok by nemal byť dôvodom na samoliečbu, pretože každý pacient môže mať svoj vlastný obraz choroby.
Kvalitatívna analýza zahŕňa skríning a certifikáciu. Ak pacient nemá vírus, výsledok je „negatívny“. Po nájdení tohto certifikátu sa vykonajú dodatočné skríningové testy. Imunoblotová analýza, ktorá potvrdí alebo vyvráti skríning. Ak sa testovacie prúžky objavia v stmavnutí určitých oblastí (lokalizácia bielkovín), diagnóza je "HIV".
Ak sú výsledky pochybné, testy sa vykonajú do troch mesiacov.
Aby ste predišli infekcii vírusom ľudskej imunodeficiencie, je to možné, ak budete dodržiavať určité pravidlá: vyhýbajte sa náhodnému sexuálnemu kontaktu, počas kontaktu používajte kondómy, nepoužívajte drogy.
Ak sa ochorenie zistí u tehotnej ženy, je dôležité dodržiavať odporúčania ošetrujúceho lekára, nezabudnite na testy na prítomnosť vírusu.
Čo je Western blotting?
Identifikácia proteínov v komplexných zmesiach alebo extraktoch rôznych tkanív je jedným z často sa vyskytujúcich problémov. Pomocou takého nástroja, ako sú špecifické protilátky, je možné určiť študovaný proteín s minimálnymi časovými a finančnými nákladmi.
Pri metóde Western blotting sa v prvom stupni zmes proteínov oddelí elektroforézou v prítomnosti dodecylsulfátu sodného (SDS), potom sa prenesie na nitrocelulózovú membránu elektroblotovaním.
Podstata tejto metódy spočíva v tom, že gél sa po elektroforéze umiestni na nitrocelulózovú membránu medzi vrstvy filtračného papiera. Takto zostavený "sendvič" sa umiestni do elektrického poľa, takže komplexy proteín-SDS sa pohybujú cez gélovú platňu a sú imobilizované (v dôsledku nešpecifickej sorpcie) na povrchu nitrocelulózovej membrány.
Na väzbe komplexu proteín-SDS na nitrocelulózovú membránu sa podieľajú najmä elektrické sily, pričom táto interakcia je viacbodová a vedie k „šíreniu“ proteínov na povrchu membrány. Po elektrotransfere tak získame repliku gélu na nitrocelulóze s proteínmi usporiadanými rovnako ako v polyakrylamidovom géli.
Po vykonaní SDS - elektroforézy, elektrotransferu a sorpcie proteínov z gélu na nitrocelulózovú membránu sa terciárna konformácia proteínu výrazne zmení, ak je vo všeobecnosti správne hovoriť o existencii terciárnej štruktúry proteínu po takomto tvrdé zaobchádzanie. Preto sa na imunochemickú detekciu študovaného proteínu zvyčajne používajú iba mono- alebo polyklonálne protilátky špecifické pre lineárne oblasti molekuly proteínu.
51. Enzýmová imunoanalýza, imunoblotovanie. Mechanizmus, komponenty, aplikácia.
Protilátky špecifické pre konformačné epitopy (alebo miesta zahŕňajúce medzipodjednotkové kontakty) nie sú vo všeobecnosti vhodné na použitie v metóde Western blot.
Po prenose proteínu sa membrána postupne inkubuje s protilátkami špecifickými pre študovaný proteín a potom so sekundárnymi protilátkami špecifickými pre Fc fragmenty primárnych protilátok, konjugované s enzýmovou (alebo inou) značkou (obr.
1A). V prípade, že primárne protilátky špecifické pre študovaný antigén sú priamo konjugované so značkou, sekundárne protilátky nie sú potrebné (obr. 1 B). Imunitné komplexy vytvorené v mieste študovanej lokalizácie proteínu sa „prejavujú“ pomocou chromogénneho substrátu (v závislosti od typu značky).
Senzitivita a špecificita metódy veľmi závisí od toho, ktoré protilátky sa v štúdii používajú.
Použité protilátky musia byť špecifické pre jedinečnú aminokyselinovú sekvenciu špecifickú len pre skúmaný proteín. V opačnom prípade je možná interakcia (najmä v prípade hrubých proteínových extraktov) protilátok s niekoľkými proteínovými molekulami, čo následne povedie k výskytu niekoľkých farebných pásov na membráne.
Identifikácia skúmaného proteínu je v tomto prípade často ťažká alebo dokonca nemožná.
Druhým dôležitým faktorom, ktorý treba mať na pamäti pri výbere protilátok, je afinita. Čím vyššia je afinita použitých protilátok, tým jasnejšie a jasnejšie sa zafarbia proteínové pásy, tým vyššia je citlivosť metódy. Pri použití protilátok s vysokou afinitou možno dosiahnuť citlivosť 1 ng a ešte vyššiu.
Na vizualizáciu výsledku interakcie membránovo viazaného antigénu a protilátok sa používajú sekundárne protilátky konjugované s činidlami schopnými poskytnúť určitý signál za určitých podmienok.
Zvyčajne sa ako také činidlo používa enzým (peroxidáza alebo fosfatáza), ktorého reakčný produkt má farbu a vyzráža sa na membráne vo forme nerozpustnej zrazeniny.
V tejto metóde je tiež možné použiť fluorescenčné značky.
Ryža. 1. Schéma imunochemického farbenia študovaného proteínu: A - pomocou sekundárnych protilátok konjugovaných s enzýmovou značkou; B - primárna protilátka je priamo konjugovaná s enzýmovou značkou.
Protokol:
I. Príprava gélu a membrány a elektrotransfer proteínov
Polyakrylamidový gél sa po elektroforéze umiestnil do kúpeľa s blotovacím pufrom (25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM glycín, 10 % etanol).
Dva listy filtračného papiera, narezané do tvaru sacej kazety a navlhčené savým pufrom, sa umiestnia na časť kazety, ktorá bude obrátená k anóde. Potom sa na filtračný papier umiestni nitrocelulózová membrána vopred navlhčená rovnakým pufrom, aby sa zabezpečilo, že medzi membránou a papierom nie sú žiadne vzduchové bubliny.
Potom je potrebné gél opatrne umiestniť na membránu, pričom je potrebné opäť venovať osobitnú pozornosť absencii vzduchových bublín medzi gélom a membránou. Sendvič dopĺňajú dve vrstvy navlhčeného filtračného papiera, ktoré sú umiestnené na povrchu gélu (obr. 2). Výsledný sendvič je upnutý v kazete a umiestnený medzi elektródy tak, aby membrána smerovala k anóde.
Ryža. 2. Schéma elektroprenosu proteínov na membránu.
II. elektroprenos
Elektrotransfer proteínov na nitrocelulózovú membránu sa uskutočňuje v tlmivom roztoku obsahujúcom 25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM glycín, 10 % etanol počas 30–50 minút pri konštantnom napätí 100 V.
Čas elektroprenosu závisí od veľkosti prenášaných proteínov, čím väčší proteín, tým dlhšie trvá elektrotransfer. Kvalita elektrotransportu a usporiadanie proteínových pásov sa hodnotili farbením nitrocelulózovej membrány 0,3 % Ponceau S v 1 % kyseline octovej. Pred imunofarbením by sa membrána mala niekoľkokrát premyť mierne alkalickým vodným roztokom Tris, aby sa odstránilo farbivo naviazané na proteín.
III. Imunochemické farbenie proteínov imobilizovaných na nitrocelulózovej membráne
Na blokovanie väzbových miest pre nešpecifické protilátky sa membrána inkubuje za stáleho miešania pri teplote miestnosti počas 30 minút v PBST (na lepšie blokovanie sa môže použiť roztok PBST obsahujúci 10 % sušeného odstredeného mlieka).
Po zablokovaní sa membrána inkubuje jednu hodinu pri teplote miestnosti za stáleho miešania v PBST obsahujúcom 1-10 ug/ml špecifických protilátok.
Optimálna koncentrácia protilátok sa vyberie empiricky a závisí od afinity interakcie protilátok s antigénom.
Na konci inkubácie sa membrána 5-krát premyla PBST a preniesla do roztoku sekundárnych protilátok konjugovaných s chrenovou peroxidázou. Riedenie konjugátu je zvyčajne uvedené výrobcom na obale alebo je empiricky vybrané výskumníkom. Membránu inkubujte v roztoku sekundárnych protilátok 1 hodinu za stáleho miešania.
Po dôkladnom premytí (najmenej 5-6 výmen tlmivého roztoku) sa membrána PBST prenesie do chromogénneho substrátového roztoku obsahujúceho 3 mg diaminobenzidínu (DAB) a 10 ul 30% peroxidu vodíka v 10 ml 0,1 M Tris-HCl, pH 7,6. .
Inkubácia sa uskutočňuje za miešania počas 5 až 10 minút. Po skončení inkubácie so substrátom by sa membrána mala premyť PBST, vysušiť blotovaním filtračným papierom a okamžite vytvoriť elektronickú kópiu farebným skenovaním. Ak membrána úplne vyschne, zafarbené proteínové prúžky vyblednú a obraz je menej jasný a kontrastný.
Poznámka: DAB je toxický a potenciálny karcinogén. Pracujte len s gumenými rukavicami!