HIV tanısında immün lekeleme. İmmunoblotlama (hastaların serumlarında belirli patojen antijenlere karşı antikorların saptanması) Nükleik asitlerin hibridizasyonu
Enzim immunoassay (ELISA)
Enzim immunoassay (ELISA) iki aşamada gerçekleştirilir: birincisi, antikorların antijen ile etkileşimidir, ikincisi, reaksiyon karışımının lekelenmesinin ortaya çıkması ve görsel olarak veya spektrofotometrik yöntemle lekelenmenin kaydedilmesi nedeniyle antijen-antikor kompleksinin enzimatik göstergesidir.
ELISA'nın iki çeşidi vardır: katı faz ve sıvı faz, immünokimyasal reaksiyonun bileşenlerinin ayrılma biçiminde farklılık gösterir. Antijenleri ve antikorları saptamak için daha önce açıklanan yöntemlerle karşılaştırıldığında, ELISA'nın önemli avantajları vardır:
0,05 ng / ml'ye kadar bir maddenin belirlenmesine izin veren yüksek hassasiyet;
minimum hacimde test materyali kullanma imkanı (1--2 µl);
reaksiyonun araçsal veya görsel muhasebesi olasılığı;
hız ve reaksiyonun tüm aşamalarını otomatikleştirme olasılığı.
ELISA şu anda pratikte bakteriyel, fungal etiyoloji, protozoal enfeksiyonlar ve helmintiyazların birçok bulaşıcı hastalığının, ancak özellikle viral enfeksiyonların, özellikle hepatit A, B, C, D, E, G, HIV enfeksiyonu, herpes virüsünün teşhisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. rotavirüs , adenovirüs, astrovirüs, parvovirüs ve diğer enfeksiyonlar.
bağışıklık lekesi
İmmün lekeleme yönteminin prensibi, patojenin tek tek antijenlerine karşı antikorları saptamaktır. Bu yöntem kullanılarak, HIV antijenlerine karşı antikorlar (virüs zarf glikoproteinleri, çekirdek proteinler ve virüs enzimleri) belirlenir. İmmün lekeleme sonuçları, saptanan antikorların niceliksel ve niteliksel setine bağlı olarak pozitif, sorgulanabilir ve negatif olarak değerlendirilir.
İmmün lekelemenin ELISA'ya duyarlılıkta daha düşük olduğuna dikkat edilmelidir; bazı durumlarda, bir hastada HIV enfeksiyonu varlığında negatif bir sonuç kaydedilebilir. Bununla birlikte, HIV enfeksiyonunda ELISA'da yanlış pozitif sonuçların kaydedilmesi olasılığı, immünolojik reaksiyonların (ELISA, immün lekeleme) sonuçlarına ek olarak epidemiyolojik ve klinik verileri dikkate alarak HIV enfeksiyonunun teşhisine entegre bir yaklaşım gerektirir.
Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR)
PCR yöntemi, 1983 yılında Amerikalı biyokimyacı Kary Mullis tarafından, kendisi tarafından keşfedilen termostabil DNA polimerazın (Tag polimeraz) kullanımına dayalı olarak geliştirilmiştir. Yöntemin prensibi, otomatik modda DNA polimeraz tarafından in vitro katalize edilen patojenin belirli bir DNA bölgesinin kopya sayısını 10 6 - 10 8 katına çıkarmaktır.
Yapay koşullar altında, belirli bir tür veya patojen cinsine özgü bir genom bölgesinin replikasyon işleminin çoğaltılması, nükleotid dizisinin bilinmesi koşuluyla mümkündür. Bu tür bölgelerin (amplikonlar) replikasyon ürünlerini tespit etmeye yönelik yöntemlerin kullanılması, test numunesinde bir patojenin varlığının tespit edilmesini mümkün kılar.
Yukarıda açıklanan tamamlayıcı zincir tamamlama, yalnızca kısa çift sarmallı bölümler olan belirli başlangıç bloklarında başlar. Bu tür bloklar, DNA'nın belirli bölgelerine eklendiğinde, yeni bir ipliğin sentezlenme işlemi, DNA zincirinin tüm uzunluğu boyunca değil, yalnızca seçilen bölgeye yöneliktir. Primer adı verilen iki oligonükleotid primeri, verilen DNA bölgelerinde başlangıç blokları oluşturmak için kullanılır. Primerler, belirli bir fragmanın sol ve sağ sınırlarındaki DNA dizilerini tamamlayıcı niteliktedir ve yeni bir DNA dizisinin tamamlanması yalnızca aralarında gerçekleşecek şekilde yönlendirilir.
İle PCR yönteminin avantajlarışunları içermelidir:
bir numunede 10-1000 hücrenin belirlenmesine izin veren yüksek hassasiyet;
test materyalinde bu patojene özgü bir DNA parçası tespit edildiğinden yüksek özgüllük;
bir biyoanalizden çeşitli patojenleri tespit etme prosedürünün evrenselliği;
Yüksek analiz hızı (4--4,5 saat);
Sadece akut değil, aynı zamanda gizli enfeksiyonları da teşhis etme imkanı.
PCR kullanımı, çok çeşitli bakteriyel ve viral enfeksiyonların teşhisinde etkilidir.
Son zamanlarda, örneğin hepatit B virüsünün, HIV C'nin replikatif aktivitesini değerlendirmek için materyaldeki patojen konsantrasyonunu (mikrobiyal veya viral yük) belirlemeyi mümkün kılan kantitatif PCR analizi yöntemleri oldukça başarılı bir şekilde uygulanmıştır. .
Bununla birlikte, PCR yönteminin, özellikle fırsatçı otofloranın neden olduğu enfeksiyonların teşhisinde de sınırlamaları olduğu unutulmamalıdır.
Nükleik asitlerin hibridizasyonu
nükleik asitlerin hibridizasyonu PCR gibi, önceden izolasyon olmadan numunedeki patojeni belirlemenizi sağlar. Analiz için, patojenin spesifik nükleotit sekanslarını tamamlayıcı olan tek sarmallı bir DNA veya RNA probu sentezlenir. Prob, bir radyonüklid, enzim veya başka bir kolayca tanınabilir etiketle etiketlenir. Test materyali, biyoanalizde bulunan mikroorganizmaların parçalanması, DNA'nın izolasyonu ve denatürasyonu amacıyla işlemeye tabi tutulur. Daha sonra, prob, test numunesi ile inkübe edilir ve test numunesindeki DNA ile hibridizasyona giren etiketli DNA miktarı ölçülür. Reaksiyon hem katı faz sorbentlerde hem de çözeltide meydana gelebilir, ancak zorunlu bir koşul, etiketli probun bağlanmamış miktarlarının yıkanmasıdır. Nükleik asit hibridizasyon yönteminin hassasiyeti PCR'ninkinden daha düşüktür ve numune başına 103 mikrobiyal hücredir.
Cinsel yolla bulaşan hastalıklar için test yaptırdığımda, HIV testi yaptırmaya karar verdim. Ertesi gün HIV dışında ifa için hazır testler aldım ve bunun sonucunda bana klamidya teşhisi kondu. Herpes ve mikroplazmoz. Ama Vich hiç gelmedi. 3 gün sonra beni arayıp tekrar kan almak için AIDS merkezine gelmeniz gerektiğini söylüyorlar. Klamidya Hastalıklarında Mycraplasmosis HPV Herpes'te İmunablot Yanlış Pozitif Olabilir mi?
Woman.ru uzmanları
Konunuz hakkında uzman görüşü alın
Anastasia Shesterikova
Rusina Irina Vladimirovna
Psikolog, Stres Giderici. b17.ru'dan uzman
Olga Yurievna Diganaeva
Psikolog. b17.ru'dan uzman
Olga Borisenko
Psikolog, Gestalt terapisti. b17.ru'dan uzman
Dmitry Valerievich Tishakov
Psikolog, Süpervizör, Sistemik aile terapisti. b17.ru'dan uzman
Shiyan Olga Vasilyevna
Psikolog, Psikolog-danışman. b17.ru'dan uzman
Oksana Lushankina
Psikolog, Aile içi ilişkiler. b17.ru'dan uzman
Anna Dashevskaya
Psikolog, Skype konsültasyonları. b17.ru'dan uzman
İrina Bukina
Psikolog. b17.ru'dan uzman
Aksyonova Anna Mihaylovna
Psikolog, Grup Analitiği Adayı. b17.ru'dan uzman
Sizi korkutmak istemem ama sizi AIDS merkezine çağırdıklarında hemen hemen her zaman pozitif çıkıyor, tekrar almayın, size iyi şanslar, asıl mesele terapi alıp uzun yaşamak
Bir arkadaşım 10 yıldır HIV ile yaşıyor, kendi başının çaresine bakıyor.
Üç yıl içinde muhtemelen bir çare bulacaklarını söylüyorlar.
Her durumda umutsuzluğa kapılma ve bulaştırma, tedavi ol
Hayır, IB yanlış pozitif olamaz ve hiçbir cinsel yolla bulaşan hastalık bu analizi etkilemez, eğer pozitifse, o zaman ne yazık ki HIV'iniz var, bağışıklık hücrelerinizi izlemeniz ve tedaviye zamanında başlamanız gerekir.
ne yazık ki hayır ((merkeze aradılarsa, o zaman kesinlikle HIV'dir)
Bildiğim kadarıyla, ilk ve hatta sonraki immünoblot sonuçları sorgulanabilir. yanlış pozitif değil, şüpheli. ve ardından yeniden analiz istenir. İşte siteden metin:
"Bağışıklık lekesi, çoğunlukla HIV enfeksiyonunun teşhisini doğrulamak için kullanılır. DSÖ, HIV zarf proteinlerinden herhangi ikisine karşı antikorlar immünoblotlama ile tespit edilirse serumları pozitif kabul eder. Bu önerilere göre, zarf proteinlerinden (gp160, gp120, gp41) sadece biri ile diğer proteinlerle kombinasyon halinde veya reaksiyon olmaksızın reaksiyon varsa, sonuç şüpheli kabul edilir ve bir kit kullanılarak ikinci bir çalışma önerilir. farklı seri veya başka bir şirketten. Bundan sonra sonuç şüpheli kalırsa, çalışmalara 3 ayda bir devam edilir.
Google'da yapabilirsiniz. eğer öyleyse, umarım HIV testi pozitif çıkmaz. ama doğrulanırsa bilin ki bugün bu teşhisle sağlıklı insanlar kadar yaşıyor ve yaşıyorlar ve çocuk doğuruyorlar. asıl şart tedavide disiplindir. sana sağlık!
Çevrimiçi antiretroviral tedavi
hesap makineleri
Site, tıp ve ilaç çalışanları için tasarlanmıştır 18+
Analizin deşifre edilmesi - immünoblot
Lütfen analizi çözmeme yardım et
ENV(GP160)+
ENV(GP110/120)+
ENV(GP41)+
GAG(P55)+
GAG(P40)+
GAG(P25)+
POL(P68)+
POL(P52)+
POL(P34)+
Merhaba! 2,5 yıl önce HIV testi yaptırdım, böyle bir immünoblot vardı:
Gp-160+, Gp-110/120+, Gp-41+, p17+, p25+, p31+, p34+, p52+, p55+, p68+. Ve işte 30/05/18 tarihli immünoblot: Gp-160+, Gp-41+, GAG 1 -, poll+, env2-. Roll +'nın ne anlama geldiği net değil mi? Orada olan tek kişi mi yoksa açıklanmadı mı? Ve proteinlerin geri kalanı nereye gitti?
Pol ve Env, protein gruplarını kodlayan genlerdir. Bunu sadece farklı bir kayıt olarak kabul edin. Soru farklı. Ve ne için bekliyoruz? Neden bir leke düşünüyoruz? Her şey oldukça açık. Bir şey yapılması gerekiyor.
HIV taşıdığım gerçeğine çoktan alıştım. Ve terapiye hazır.
Sadece fikrini duymak merak ediyorum. Bu yeni bir enfeksiyon mu yoksa bir şeyi mi kaçırıyorum? Veya bazen immünoblot yavaş yavaş çok açılır?
Bugün kişisel dosyamdaki analizlerime baktım (SC'de yapıldı):
İlk test sisteminde ELISA - pozitif
İkinci test sistemindeki ELISA negatif (nasıl?)
Daha fazla IB (in vitro ve SC'de bir ay önce yapıldı):
ilk test sisteminde immünoblot: gp 160+, gp 41+
başka bir test sisteminde immünoblot: gp41+, p24+, p17+
üçüncü test sisteminde immünoblot: gp160+, gp120+, gp41+, p24+
Tahminlerime göre, bir yıl önce (akut aşama bir yerlerde Nisan ayındaydı) veya 9 ay önce enfekte olmuş olabilirim, ancak genel olarak - xs ne zaman) her zaman koruma kullandım ve sonbaharda yalnızca bir kez prezervatifsiz seks yaptım. 2017.
Bugün bir kez daha VN ve IP'yi geçtim. Teru, sipariş geldiğinde bir ay içinde başlayacak.
Bahsedilen testlere konulan tarihler.
ELISA'dan önceki ilk leke? yenmiyor Burada, yeni bir enfeksiyonun yüksek olasılıkla veya tam tersi olduğunu söylememize izin verecek hiçbir an yok.
Yanlışlıkla kaynağı bulup karşılaştırmazsanız, bir sır olarak kalacaktır.
Açıklığa kavuşturmak için, o zaman
Invitro'da teslim edildi.
İlk IFA 11 Mayıs'ta.
Daha sonra aynı serum lekeye gitti ve iki proteinin tanımlandığı pozitif bir analiz geldi.
gp 160+, gp 41+
Sonra tekrar SC'ye teslim ettim.
29 Mayıs'ta kan bağışında bulundu.
Ve orada, ilkinin negatif, ikincisinin pozitif olduğu birkaç test sisteminden geçti. Olumsuz ELISA yine de komik.
Ardından aynı serum, verilerin geldiği lekeye gider:
İlk test sistemi: gp41+, p24+, p17+
İkinci test sistemi: gp160+, gp120+, gp41+, p24+
Ama önemli olan bu değil.
Yeni bir IP analizi geldi - 754. Bu memnun. VN henüz hazır değil. Gelir gelmez, muhtemelen teru'ya başlayacağım.
Enfeksiyonun bir yıl önce olduğundan %80 eminim. Ve lekenin yavaş yavaş açılması ve ELISA'nın negatif olması garip. Yoksa normal aralıkta mı?
Olumsuz ELISA yine de komik. Siyah bir deftere yazmak için sistemin adını da bilmek isterim. Bununla birlikte, bu an, teoriyi evlilikle almazsanız, erken enfeksiyon için güçlüdür.
Enfeksiyonun bir yıl önce olduğundan %80 eminim. O dönem için kötü leke. İmkansız değil ama olası değil.
Bir noktada HIV testlerinin sonuçlarından bile şüphe etmeye başladım - bu yüzden VN'yi bekliyorum.
İşte sorudaki son nokta zaten konulacak.
IP'nin bir ayda tera olmadan 200 kopya artması da normal aralık içinde kabul ediliyor mu? Şimdi safra kesesindeki bir polip için Ursosan alıyorum - ek, ilacın bağışıklığı iyileştirdiğini söylüyor.
Hem göreceli bir içerikle değerlendirmek hem de bir laboratuvarın verilerini tek bir hesaplama yöntemiyle dikkate almak gerekir. Çünkü - CD4'te neler olduğunu Tanrı bilir.
Genel olarak, CD4 sayısı 780 hücre/µl'dir. VN - 250 kopya / ml.
Bu terapi olmadan. Yani, 486'dan CD4 bir ayda 780'e sıçradı.
BH 550'den 250 kopyaya düştü.
Yine de bu garip değil veya bu tür sıçramalar normal aralıkta mı? Tera'ya başlamanın zamanı geldi mi?
Merhaba! İfa'yı üç kez geçtim, her seferinde +, SC'den bir immünoblot p24+ p18+ geldi. Potansiyel risk altı aydan daha önceydi. p24 hala HIV olduğunu gösteriyor mu?
Leke şüpheli, 6-8 hafta sonra tekrarlayın. Büyük ihtimalle yanlış alarm.
İyi günler!
Bir leke de dahil olmak üzere test sonuçları geri geldi:
Tehlikeli temas: 24/04/2018
HIV için ELISA testi 05/23/2018 (tehlikeli temastan 4 hafta veya 29 gün) sonucu "+"
HIV için ELISA testi 05/28/2018 (tehlikeli temastan 5 hafta veya 34 gün) "tekrar" sonucu
HIV için ELISA testi 06/01/2018 (tehlikeli temastan 5 hafta veya 38 gün) sonucu "+"
İlk analizden bir leke geldi (23/05/18):
GP160 sl.
P24 sl.
Yerel AIDS merkezinde 06.06.2018 ELISA ve PCR HIV RNA'da yeni testler geçti. Hala sonuçları bekliyoruz.
Leke Soruları:
1. P24 varsa mutlaka HIV antijeni midir yoksa başka hastalıklarda böyle bir protein saptanabilir mi?
2. Proteinin yanındaki "sl" kısaltması ne anlama geliyor? Genellikle açıklanan lekelerde + veya - bulunur.
3. Bir lekenin konuşlandırılmasını ne belirler? Terimden mi yoksa vücudun bireysel özelliklerinden mi?
4. 4. haftada tehlikeli bir temastan kaynaklanan böyle bir leke ile bunun HIV olmama şansı var mı?
İyi günler ve teşekkürler.
1. hayır, sadece farklı yapıda benzer bir protein olabilir. 2. zayıf. şunlar. şüpheli. 3. Son teslim tarihleri ve bireysel özellikleri gerçekleştirin, ancak ortalama olarak her şey çok yakındır. 4. soru yanlış, teşhis konulana kadar her zaman bir şans vardır.
Merhaba!
Lütfen analizlerin sonuçlarında gezinmeme ve tekrarlanan analizlerin doğru olması için nasıl doğru davranacağımı anlamama yardım edin.
05/25/2018 teslim edilen analizler
HIV IB
YENİ LAV BLOT 1 - tanımsız 29.05.2018 tarihinden itibaren
IB HIV belirteçleri
GP 160+
GP 120 —
GP 41 -
p55+
p40-
s 24+
s18-
sayfa 68 —
sayfa 52 —
sayfa 34 —
HIV ELISA
ADVIA Centaur HIV Ag-Ab Reaktivitesi ELISA 12.00 pozitif (28.05.2018)
Analizin 2 hafta sonra tekrarlanması önerilir.
Kasım 2017'de bir NPA'm vardı, ardından HIV Ag\Ab Combo Abbott Architect test sistemi üzerinde testler yaptım, ardından sonuç negatifti.
Aynı zamanda tam kan sayımı yaptırdım. Lenfositler biraz artar, eozinofiller tam olarak 0'dır (ancak daha önce eozinofiller için bu tür göstergelerim vardı.
Asıl soru şudur:
Bu iki hafta boyunca hangi ilaçlar alınabilir ve alınamaz? (Hiçbir şeyin "yanıp sönmesini" istemiyorum)
Ara sıra alerji ataklarım oluyor, genellikle tavegil içerim. terk edilmeli mi?
Testten önce antibiyotik alınabilir mi? (diğer enfeksiyon ve hastalıkların tedavisi için doktor tarafından reçete edilmişse)
HIV teşhisinde immünoblotlama
Bağışıklık lekesi (immunoblot, Western Blot, Western blot)- enzim immunoassay (ELISA) ile virüs antijenlerinin bir nitroselüloz şeridine (şeridi) ön elektroforetik transferini birleştirir.
Bu güzel bilimsel isimde, "leke" büyük olasılıkla "leke" olarak tercüme edilir ve "batı", "batı" olarak tercüme edilir, bu "leke" nin kağıt üzerindeki dağılım yönünü soldan sağa, yani coğrafi bir harita üzerinde yansıtır. batıdan doğuya olan yöne karşılık gelir." "İmmün leke" yönteminin özü, immünoenzimatik reaksiyonun bir antijen karışımı ile değil, daha önce immünoforez yoluyla bir nitroselüloz zarın yüzeyinde moleküler ağırlığa göre yerleştirilmiş fraksiyonlara dağıtılan HIV antijenleri ile gerçekleştirilmesidir. Sonuç olarak, antijenik determinantların taşıyıcıları olan HIV'in ana proteinleri, enzim immün testi sırasında ortaya çıkan ayrı bantlar şeklinde yüzey üzerinde dağılır.
İmmunoblot birkaç aşama içerir:
Şerit hazırlığı. Daha önce saflaştırılarak bileşenlerine ayrılan immün yetmezlik virüsü (HIV), elektroforeze tabi tutulurken, HIV'i oluşturan antijenler moleküler ağırlıklarına göre ayrıştırılıyor. Ardından, lekeleme yoluyla (bir "kurutma kağıdı" üzerine fazla mürekkebin sıkılmasına benzer), antijenler artık gözle görülemeyen HIV'e özgü antijenik bantların bir spektrumunu içeren bir nitroselüloz şeridine aktarılır.
Örnek çalışma. Test materyali (serum, hastanın kan plazması vb.) nitroselüloz şeride uygulanır ve numunede spesifik antikorlar varsa, bunlar tam olarak karşılık gelen (tamamlayıcı) antijenik bantlara bağlanır. Sonraki manipülasyonların bir sonucu olarak, bu etkileşimin sonucu görselleştirilir - görünür kılınır.
Sonucun yorumlanması. Nitroselüloz plakanın belirli alanlarında bantların varlığı, çalışılan serumda kesin olarak tanımlanmış HIV antijenlerine karşı antikorların varlığını doğrular.
Şu anda, test serumunda virüse özgü antikorların varlığını doğrulamak için ana yöntem immün lekelemedir (immunoblot). Bazı HIV enfeksiyonu vakalarında, serokonversiyondan önce spesifik antikorlar, ELISA'ya göre immünoblotlama ile daha etkili bir şekilde tespit edilir. Bir immün lekeleme çalışması, gp 41'e karşı antikorların en sık AIDS hastalarının serumlarında saptandığını ve profilaktik amaçlarla incelenen kişilerde p24'ün saptanmasının HIV enfeksiyonunun varlığı için ek çalışmalar gerektirdiğini ortaya koydu. Genetik olarak tasarlanmış rekombinant proteinlere dayalı immünoblot test sistemlerinin, saflaştırılmış virüs lizatına dayalı geleneksel sistemlerden daha spesifik olduğu kanıtlanmıştır. Bir rekombinant antijen kullanıldığında, diffüz değil, açıkça tanımlanmış, muhasebe ve değerlendirme için kolayca erişilebilen dar bir antijen bandı oluşur.
HIV-1 ile enfekte kişilerin serumu, aşağıdaki ana proteinlere ve glikoproteinlere karşı antikorları saptar - yapısal zarf proteinleri (env) - gp160, gp120, gp41; çekirdekler (gag) - p17, p24, p55 ve ayrıca virüs enzimleri (pol) - p31, p51, p66. HIV-2 için, env'ye karşı antikorlar tipiktir - gp140, gp105, gp36; tıkaç - p16, p25, p56; pol-p68.
Reaksiyonun özgüllüğünü belirlemek için gerekli laboratuvar yöntemleri arasında, HIV-1 zarf proteinlerine - gp41, gp120, gp160 ve HIV-2 - gp36, gp105, gp140'a karşı antikorların tespiti en büyük tanıma sahiptir.
DSÖ, herhangi iki HIV glikoproteinine karşı antikorlar immünoblotlama ile tespit edilirse serumları pozitif kabul eder. Bu önerilere göre, zarf proteinlerinden (rp 160, rp 120, rp 41) sadece biri ile kombinasyon halinde veya diğer proteinlerle reaksiyon olmadan reaksiyon varsa, sonuç şüpheli kabul edilir ve bir kit kullanılarak ikinci bir test yapılması önerilir. başka bir seriden veya başka bir şirketten. Bundan sonra sonuç şüpheli kalırsa, 6 ay gözlem önerilir (3 ay sonra araştırma).
p24 antijeni ile pozitif bir reaksiyonun varlığı, bazen önce bu proteine karşı antikorlar ortaya çıktığından, bir serokonversiyon dönemine işaret edebilir. Bu durumda klinik ve epidemiyolojik verilere bağlı olarak en az 2 hafta sonra alınan serum örneği ile çalışmanın tekrarlanması önerilir ve bu tam olarak HIV enfeksiyonunda eşli serumların gerekli olduğu durumlarda geçerlidir.
Env proteinleri ile reaksiyon olmaksızın gag ve pol proteinleri ile pozitif reaksiyonlar, erken serokonversiyon aşamasını yansıtabilir ve ayrıca HIV-2 enfeksiyonunu veya spesifik olmayan bir reaksiyonu gösterebilir. HIV-2 testi yapıldıktan sonra bu tür sonuçlara sahip kişiler 3 ay sonra (6 ay içinde) yeniden muayene edilir.
Soru: HIV için tekrarlanan analiz?
Cinsel yolla bulaşan enfeksiyonlar için test edildim (semptom yok, bir kadınla ilişkimde güven istiyordum). HIV testi pozitif çıktı. Ultrasonun ardından böbrekte bir tümör görüldü, çıkarıldı (kötü huylu olduğu ortaya çıktı).
Sazonova I.M.'nin kitabını okudum, kötü huylu bir tümörün HIV için pozitif bir test sonucu verebileceğini söylüyor.
Durum bu olabilir mi, yoksa umut edilecek bir şey yok mu?
HIV için bir kontrol testi yaptırmanız gerekir. İlk HIV testi ELISA ile belirlendiyse, sonuç yanlış pozitif olabilir. Güvenilirliği, kandaki virüsün DNA'sını belirleyen daha hassas bir teşhis yöntemi olan PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) ile kontrol edilebilir.
Yardım. 12/16/10 ELISA (+) IB (+), ardından 23/03/11'den 19/05/11'e kadar dokuz negatif ELISA (-) ve kantitatif PCR. belirlenmemiştir. 2002'de hamilelik sırasında ELISA sonra (+) sonra (-) ama IB her zaman (-). 2004'ten 2008'e kadar yılda 2 kez ELISA (-) aldım, ancak 30.04.08'de ifa (+) ve IB-undefined. sonra tekrar her 2 ayda bir IFA'yı devretti her zaman (-). ve Aralık 2010'dan beri yukarıda yazıyor, aynı zamanda hiç iğne yapmadım, kocamda hep ELISA (-) var. CD4 980 hücreleri. ve hatta 29.04'teki sifiliz için kan 3 +++ verdi ve ardından üç kez. 10 günde bir negatif. hepatit hepsi (-). Benzerini yaşayan var mı? Teşekkürler.
Lütfen RIBT (treponema pallidum immobilizasyon reaksiyonu) yaptırıp yaptırmadığınızı, olduysa bu çalışmanın sonuçlarının neler olduğunu belirtiniz.
hayır, kimse bana böyle bir analiz yapmamı teklif etmedi, bu ne gösterecek? Umarım HIV testlerinden bahsettiğimi anlamışsınızdır. Teşekkürler. Muayenehanenizde buna benzer vakalar oldu mu? bu arada 2008'de bilgi güvenliği konusunda bir belirsizlik vardı. p24/25 proteiniydi. 2010'da IB(+) proteinleri gp160.41.120 p24.17.31. ardından ifa tekrar 3 kez olunca (-) 4 Nisan'da IB'ye gönderildi. sonuç pozitif çıktı, ancak proteinler gp 120 ve 41. geri kalanı kırmızı macunla ve altta kırmızı IB REPEAT ile çizildi. ancak aynı numaradan PCR reddedilecektir. 4 Nisan'dan sonra zaten IFA'yı 4 kez inkar ettim. antijen ve antikor da dahil olmak üzere AIDS merkezindeki her şey. Şimdi ikinci bir IB ve yüksek kaliteli bir PCR bekliyorum. bu kadar. DÜŞÜNMEK VE BEKLEMEKTEN ÇOK YORULDU. En iyisini ummak. TEŞEKKÜRLER. Bir yanıt bekliyorum.
Herhangi bir soru sorarsanız, lütfen bir dahaki sefere teşhisi açıklayarak daha spesifik bir şekilde formüle etmeye çalışın. RIBT, sifiliz tanısını doğrulamak için kullanılır. HIV enfeksiyonunun doğru teşhisi için kandaki HIV antikorları ELISA ve immünoblot ile belirlenir. Tanı ancak bu sonuçların her ikisi de pozitifse doğrulanır.
soruyu kesin olmayan bir şekilde formüle ettiğim için özür dilerim. Aralık ayında HIV için IFA ve Imunoblot'un pozitif çıktığını yazmıştım. ancak Mart ayından beri HIV için ifa 9 kez negatif. AIDS merkezine kayıtlıysam, bu prensipte olur mu? HIV her zaman pozitif veya negatiftir. ve ELISA sonucu negatifse HIV'e nasıl bir imunoblot konulabilir? o zaman herkes immünoblot için kontrol edilmesi gerektiğini reddedecek, peki ne olacak? hız merkezimizde bana hiçbir şey cevaplayamıyorlar. İşte sana döndüğüm şey. Teşekkürler.
Ne yazık ki, hem ELISA hem de immünoblot yanlış pozitif sonuçlar verebilir. Bu nedenle HIV teşhisi, yalnızca HIV'in ELISA ve immünoblot yöntemi ile eşzamanlı tespiti ile kesin olarak kabul edilir.
Merhaba Bugün HIV için bir PCR testinin sonuçlarını aldım, kalitatif bir virüs tespit edilmedi ve HIV için tekrarlanan bir immünoblot, protein 41 nedeniyle sonuç belirsiz. Vücudumda yapı olarak HIV'e benzer bedenler var. ve 15 ve 16 Haziran'daki sorularımı (yukarıya bakın) göz önünde bulundurarak ne düşünüyorsunuz, HIV var mı yok mu? TEŞEKKÜRLER.
Bu durumda HIV enfeksiyonu tanısı şüphelidir.
Yalnızca IF ve immünoblot yardımıyla HIV'nin eşzamanlı tespiti ile HIV teşhisinin nihai kabul edildiğini yazıyorsunuz. Peki ya benim durumumda? sonuçta ptsr inkar edecek. ve leke ve ifa her zaman atlar. 9 yıl boyunca söyle bana, virüs benim kanımda olsaydı, o zaman RNA'sı ve DNA'sı yıllarca doğru bir şekilde belirlenebilirdi. ve kuluçka dönemi veya "pencere" bu kadar yıl sürebilir mi? Böyle bir süre verildiğinde HIV için yanlış negatif PCR sonuçları var mı? Evet, CPD'de yaptığım hızlı HIV testlerinin her zaman negatif olduğunu söylemeyi unuttum, yoksa onlara da güvenemez miyim? Teşekkürler.
Bu durumda, PCR teşhisi, sürecin dinamiklerini belirlemenin ana yöntemi değildir - serolojik yöntemler daha bilgilendiricidir. Bu durumda, yanlış negatif sonuç olasılığı yüksektir. hızlı HIV testleri yüksek duyarlılık eşiğine sahiptir, bu nedenle yanlış negatif sonuç da verebilirler.
Üzgünüm. Kesinlikle yanlış yere yazdım. Lütfen HIV veya HIV değil konusunda cevap veriniz. Teşekkürler.
Postanıza yanıt alındığına dair bir bildirim almadıysanız, sorunuzun yanıtını şu adreste görüntüleyebilirsiniz: http://tiensmed.ru/news/answers/vich-ili-ne-vich- .html
Merhaba! Lütfen söyle bana, LCD'ye kaydolmak için (şimdi 10 haftalık hamile), HIV testlerinden geçtim, birkaç gün önce bir doktor beni aradı ve HIV için ön testlerin pozitif olduğunu söyledi (ilki Kirovograd'da yapıldı, ancak Kiev'den hala resmi bir sonuç yok ), aynı gün şehir laboratuvarımızda Pharmasco şirketi CITO TEST HIV 1/2'nin iki ekspres testi yapıldı, her iki sonucun da negatif olduğunu, laboratuvar asistanı bu testlerin olduğunu söyledi. güvenilir ve endişelenmeme gerek yok, çünkü bu hamilelik sırasında oluyor ve bu analizler basitçe kafa karıştırabilir. Doktor tekrar kan bağışla dedi ve farklı hastanelerde analiz için kanımı iki kez daha bağışladım (hala üç sonuçtan hiçbiri yok). Çok endişeliyim, uyuşturucu bağımlısı değilim, şüpheli cinsel ilişkim olmadı, çok nadiren hastalanırsam, diğer testler normal. Hızlı testlere güvenilebilir mi? Bu gerçekten hamilelik sırasında oluyor mu? Doktor beni acı verecek kadar korkuttu. teşekkürler
Her şeyden önce sakinleşmeniz ve kötüyü düşünmemeniz gerekiyor. Bazen hamilelik sırasında yanlış pozitif sonuçlar olabilir. HIV için yeniden kan bağışlamak ve muayene sonuçlarını beklemek gerekir.
merhaba! Mesele şu ki, 2 ay önce kızla cinsel ilişkim oldu (şimdiye kadar tanışıyoruz). 1.5 hafta sonra sıcaklık 37.4'e yükseldi. yakında uyudum. 2 hafta sonra ve 1.5 ay sonra tekrar IF analizini geçtik. Her iki cevap da olumsuz. ama hala değişken bir iyileşme ile ateşim ve öksürüğüm var. Lütfen bir risk olup olmadığını söyler misiniz? ayrıca uzun süre izinsiz çalıştım ve bir hafta önce hastalık iznindeydim (orvi). Kan ve akciğer testleri iyi. Teşekkürler.
Bu sıcaklık, viral bir hastalık, vücudun henüz iyileşmemiş olması veya kronik aşırı çalışma ile ilişkili olabilir. Organik bir patolojinin dışlanması durumunda, genel bir kan ve idrar testi normal sınırlar içindedir ve ayrıca bir florografik çalışmanın verileri de normal sınırlar içindedir, o zaman cinsel yolla bulaşan hastalıkları dışlamak gerekir: klamidya, küçük pelvis ve üretra organlarının iltihaplanmasına ve sonuç olarak vücut ısısında artışa neden olabilen mikoplazmoz, üreaplasmoz. Bağlantıya tıklayarak vücut sıcaklığındaki artışın nedenleri hakkında daha fazla bilgi edinin: Yüksek sıcaklık.
Merhaba. Böyle bir şey var - Bir yıldan fazla bir süre önce yürüyen bir kızla korunmasız cinsel ilişki yaşandı. Bana hiçbir şeyden hasta olmadığına dair güvence verdi, ama ona yüzde 100 inanamıyorum. Ayrıca işe girmeden önce tıbbi muayeneden geçtiğini (satış elemanı olarak çalışıyordu) ve her şeyin yolunda olduğunu garanti etti. Temastan 7 ay sonra, şehir laboratuvarı laboratuvarında hala bir HIV testinden geçtim - sonuç negatifti. Ancak son zamanlarda sık sık hastalanmaya başladım - 3 haftadır kırmızı bir boğaz ağrım var ve onu iyileştiremiyorum. Yine korkmaya başladı, ama aniden onu yakaladı mı? Söylesene, bu mümkün mü ve citylab'ın analizine güvenmeye değer mi? Tekrar vazgeçmekten korkuyorum sinirlerim dayanamayacak ..
Sonucun olumsuz olması durumunda, büyük olasılıkla hasta değilsiniz ve HIV / AIDS ile enfekte değilsiniz. Ancak tanıyı netleştirmek için devlet kurumlarında uzmanlaşmış laboratuvarlarda yeniden analiz yapılması önerilir, bu inceleme anonim olarak yapılır. Kendi kendine tedavinin istenen sonucu getirmemesi durumunda, yeterli bir muayene yapmak ve uygun tedaviyi reçete etmek için bir kulak burun boğaz uzmanına danışmanız önerilir. Bağlantıya tıklayarak bir dizi makaleden HIV testi hakkında daha fazla bilgi edinin: HIV.
Söylesene, şehir laboratuvarı laboratuvarının herhangi bir tanımını yapabilir misin? Yine de, bir devlet kurumunda bir analizden geçmek her zaman mümkün değildir. Ve bir erkeğin korunmasız temas yoluyla enfekte olma olasılığı yüzde kaçtır?
Ne yazık ki, laboratuvarlar ve özel tıp kurumlarının karşılaştırmalı bir değerlendirmesini yapmıyoruz. Sonuçların güvenilirliğinden şüphe duymanız durumunda, başka bir merkezde muayene yapın ve önce bu tıbbi hizmetleri vermek için lisans isteyin, bu merkezin bu muayeneyi yapma hakkı olup olmadığını ve her şeyin kabul edilen standartlara uygun olup olmadığını. Korunmasız ilişki yoluyla bulaşma riski her iki cinsiyet için de aynıdır. Bağlantıya tıklayarak bir dizi makaleden HIV testi hakkında daha fazla bilgi edinin: HIV.
Tünaydın! 8 aylık bir çocuk ELISA ile HIV için test edildi, kanda gp160 + ve p25 + bulundu, geri kalanı eksi, IB'nin sonucu şüpheli. Bu analizlere bakılırsa çocuğun +? gp160 + gp110/120 - p68 - p55 - p52 - gp41 - p34 - p25 + p18 -
Ne yazık ki elde edilen verilere göre yanlış pozitif sonuç dışlanmadığı için yüzde 100 olasılıkla teşhis koymak mümkün değil. Doğru bir teşhis koymak için, bu analizi ELISA ile tekrarlamak ve PCR yöntemini kullanarak bir analizi geçmek de dahil olmak üzere bir dizi incelemeden geçmeniz gerekecektir. Bundan sonra, bulaşıcı hastalık uzmanının sonuçları bir kompleks içinde değerlendirebileceği özel bir tıp kurumuyla iletişime geçmelisiniz. Bağlantıya tıklayarak web sitemizin tematik bölümünde HIV enfeksiyonunun belirtileri hakkında daha fazla bilgi edinebilirsiniz: HIV
"ARI" veya daha akut bulaşıcı hastalıklarda yanlış pozitif sonuç gösterebilir mi? 58 veya daha yüksek hastalıkta, böbrekler vb.
Yanlış pozitif sonuç olasılığı vardır, bu nedenle şunları yapmanızı tavsiye ederim: ELISA ve PCR ile yeniden analiz yapın ve ardından bir bulaşıcı hastalık uzmanını yeniden ziyaret edin. Tematik bölümde HIV enfeksiyonunun teşhisi hakkında daha fazla bilgi edinebilirsiniz: HIV
Tünaydın! p25 proteini nedeniyle belirsiz immünoblot. HIV olasılığı nedir?
Bu durumda, bu verilere dayanarak bir varsayımda bulunmak mümkün olmadığından çalışma protokollerini diğer göstergelerle birlikte dikkatlice incelemek gerekir. Muhtemelen sonuç şüpheli kabul edilebilir ve 3 ay sonra tekrar muayene gerekir. Web sitemizin bölümünde daha fazlasını okuyun: HIV
Tünaydın.
HIV için ELISA hakkında yorum yapabilir misiniz?
1 serum +3,559 k=13,3
+2,121 k=4,9
p 24 neg
Serum 2 +3,696 k=13,9
+2,477 k=5,7
Bu durumda, ELISA yönteminin dolaylı olduğu göz önüne alındığında, yanlış bir pozitif sonuç göz ardı edilmez, bu nedenle farklı, daha hassas bir yöntem olan bağışıklık lekeleme kullanarak bir analiz yapmanızı öneririm. Bu konuyla ilgili daha detaylı bilgiye aşağıdaki linke tıklayarak sitemizin ilgili bölümünden ulaşabilirsiniz: HIV
İyi günler, bana neyi ayarlayacağımı söyle? Bir yıl önce, bir çocuk planlarken, kocam ve ben HIV dahil tüm testleri geçtik (bunu çok ciddiye aldılar ve doğru bir şekilde aldılar), Kiev'de Kr. Merkezdeki tahlilleri geçtikten sonra cevap bana da olumsuz geldi. Şimdi 14 haftalık pozisyondayım, yani. Kayıt oldum, tüm testleri geçtim ve yine cevap geldi, HIV testi belirsizdi, klinikte tekrar geçtim ve Dovir'de sakinleşmek için hızlı bir testten geçtim ama beni sakinleştirmediler , Ekspres test pozitif sonuç verdi (ikinci şerit daha az belirgindi), tüm bu işlemlerin hemen ardından vakit kaybetmeden AIDS Merkezine başvurdum ve tahlili de geçtim, sonucu bekliyorum. (Sakin olamıyorum) Lütfen ekspres testlere ne kadar güvenebileceğinizi ve neden ilk kez HIV testinin yanıtı olmadığını söyleyin? (kocam ve ben sağlıklı bir yaşam tarzı sürdürüyoruz ve birbirimizi seviyoruz). Teşekkürler.
Vaktinden önce panik yapmayın - hızlı teşhis, HIV teşhisi koymanın temeli değildir, daha derinlemesine bir çalışma gerektiren hasta gruplarını belirlemenizi sağlar. Bu gibi durumlarda, bağışıklık lekesi yapılması ve kişisel olarak bir bulaşıcı hastalık doktoruna danışmanız önerilir. Bu konuyla ilgili daha detaylı bilgiyi aşağıdaki linke tıklayarak web sitemizin tematik bölümünde bulabilirsiniz: HIV. Ayrıca web sitemizin aşağıdaki bölümünden ek bilgi alabilirsiniz: Laboratuvar teşhisleri
Merhaba ben bulaşıcı bir hastalığa yakalandım ancak bugün taburcu oldum çıkınca doktor aradı ifa pozitif olduğumu söyledi önce hastaneye gittiğimde negatifti sonra tekrar aldığımda pozitif çıktı , dağdaki doğancılara immünoblot çalışması gönderdiler haftaya hazır olacağını söylediler, boğaz ağrısı ve parainfluenza virüsleri ile hastanedeydim, şok durumuna geldim, hala nasıl yapacağımı anlamadım Bununla ilgili olarak, kliniğim için de bir ekstre hazırlandı, eğer bir immünoblot bulunursa ve daha düşükse, yarın kliniğinizden taburcu olursam, o zaman her şey bu ekstrede belirtilecektir, HIV olasılığı ne kadardır? Parainfluenza virüsünün boğaz ağrısı tedavisi görmem nedeniyle, ifa için olumlu sonuçlar göstermem mümkün mü?
Yanlış pozitif sonuç olasılığı çok yüksektir. Bir pozitif sonucun varlığı, HIV tanısı koymak için henüz bir zemin oluşturmaz, bu nedenle, immünoblotlama sonucunu beklemenizi ve ardından daha fazla inceleme ve gözlem için bir bulaşıcı hastalık uzmanına kişisel olarak danışmanızı öneririz. Anjin, parainfluenza ve diğer soğuk algınlığı, analiz sonuçlarını önemli ölçüde etkilemez.
Buna inanmak istiyorum ama Ağustos sonunda kendimi iyi hissetmedim, ateşim yükseldi, 37.5-38 Yaklaşık 4 gün gevşek dışkı yaptım, diskoların çok olduğu bir tatildeydim, birçokları gibi musluk suyu içtim. diğerleri, çok pahalı olduğu için, bir bardak su 300 rubleye mal oldu, gevşek dışkıları böyle bir sıcaklıkta suda yakalanan bir tür bağırsak enfeksiyonu ile ilişkilendirdim, tam olarak hatırlamıyorum ama ayrıca küçük bir kızarıklık vardı. üst vücut, eve geldiğimde ateşle doktoru aradım, rotavirüs enfeksiyonu yazdı, 5 günlük hastalıktan sonra, onu bırakıp işe gitmek için gönüllü oldum ve birkaç gün sonra sinüzitle hastalandım (bu sırada sokakta olmak zorunda kaldığım süre) Tatilden ve zehirlenmeden kaynaklanan büyük bir sıcaklık düşüşünün bağışıklığımı düşürdüğünü ve bu nedenle bir kez daha sinüzite yakalandığımı, toplamda yine hastalık izni olduğunu bağladım. Laura 10 gün klacid cf 500 içtim geçti geçti 3 hafta sonra işe geri döndüm iş gezisindeydim 3 gün boyunca kemer ülkesi. ulaşım ve oteldeki klimalar acımasızdı ve eve döndüğümde uçakta zaten 39.5 ateşim vardı, burada 40 ateşle evdeydim, doktoru eve çağırdı, orvi yazdı ve benim dedi boğaz çok kırmızıydı, kronik bademcik iltihabım vardı ve bunu Laura'ya söyledi, kendisi bir antibiyotik içmesi için yazdı Levolet r. ateşi olduğu ve hızı 40 olduğu ve düşmediği için ambulans çağırdı, hastaneye yatış teklif edilmedi, sonraki gün aynı hikaye - ambulans ateş düşürücü bir enjeksiyon yaptı ve gitti.Üçüncü kez hastaneye yatmak için ısrar ettiğimde, beni zorlukla bulaşıcı hastalıklar hastanesine götürdüler, burada karışık bir parainfluenza ve adenovirüs enfeksiyonu enfeksiyonu tespit edildi, ancak taburcu olduktan sonra doktor - daire başkanı ifa pozitif HIV olduğumu ve bunu iki kez yaptıklarını söyledi, şoktayım, ne yapacağımı bilmiyorum yiyip içemem. belirgin akut HIV enfeksiyonu ve doğrulama için bir immünoblot için kanımın bir analizini AIDS merkezine gönderdiler,
şimdi, son zamanlarda başıma gelen olayların yanı sıra arka arkaya 3 hastalık izninin bir benzetmesini yaparak, tüm semptomları denedim ve olabileceklerden dehşete düştüm, aynı gün taburcu olduktan sonra, ben in vitro bir hayvanda analiz yapmaya gitti ve ertesi gün ifa için sonuç aynıydı +
Bu kadar ayrıntılı bilgi için özür dilerim, ama süpürüldüm ve öldüm, güçlü sakinleştiriciler içiyorum ve iştahım yok ve neredeyse yemek yemiyorum, çok kilo verdim
Ayrıca öyle bir sorum var ki, hastaneden bir özü olan doktor, HIV'in sonucunu ifa ile belirtti ve immünoblotun çalıştığının altında, ancak kliniğimdeki bl'yi yerdeki kapatır kapatmaz her şey olacak oraya yazılacak ne yapmalıyım, artık gizli olmayacak. Doktordan, beni reddettiği alıntıda bu analizi yazmamasını, burada bilgilerin ifşa edilmeme haklarıma ne ölçüde saygı duyulduğunu sordum.
Ne yazık ki, hastanede yapılan çalışmaların sonuçları, ilgili bölge doktorunun sağlık durumunuz hakkında tam bilgiye sahip olması gerektiğinden, özete uymaktadır. Bu durumda, bilgilerin ifşa edilmesinden bahsetmiyoruz, çünkü yalnızca sizi gözlemlemeye devam edecek olan başka bir ilgili hekime aktarılıyor.
Merhaba! FMS sertifikasına ihtiyacım olduğu için HIV testi yaptırdım, birkaç hafta testleri vermediler, sonra beni başhekme davet ettiler ve olumlu sonuç verdiler, bir sürü makbuz alıp gönderdiler sertifikada yazdığı gibi, daha fazla inceleme için bölgesel AIDS merkezine götürün. Başka bir kliniğe geçmek ve ardından bölgesel olana gitmek istiyorum, yoksa tekrar almak mantıklı mı? Onları neden bu kadar uzun süre vermediklerini anlamıyorum ama doktor iddiaya göre bir tür analiz yaptıklarını ve onlara 4 bin ruble daha borçluyum çünkü yapsalardı muhtemelen detaylı vereceklerini söyledi. sertifikaya ek olarak hastalık hakkında bilgi?
Bu durumda, kişi önceden panik yapmamalıdır - bir pozitif sonuç elde etmek, kişinin olası bir enfeksiyon hakkında güvenilir bir şekilde karar vermesine henüz izin vermez, çünkü yanlış pozitif sonuçlar dışlanmaz. Testi tekrar yapmanızı öneririz ve pozitif bir sonuç varsa, başka bir muayeneden geçmeniz gerekecektir - immünoblotlama. Kural olarak laboratuvar, normal ve yaygın bir uygulama olan sonuçlar hakkında ayrıntılı bilgi vermez. Muayeneden sonra kişisel bir konsültasyonda ilgili doktor tarafından tüm sorularınız cevaplanabilir.
Haziran ayının başından Eylül ortasına kadar kendime bir anabolik steroid kürü yaptığımı eklemeyi unuttum, yani sustanon 250, testosteron ve stanozolol ile primabolan karışımıdır, kendimi yaza ve tatile hazırlamak istedim, yapabilirler mi? bağışıklığımı ve başıma gelen her şeyi yıkmak.
Bağışıklık bozuklukları ve otoimmün hastalıkların varlığı, bir HIV testinin yanlış pozitif sonuçlarını verebilir. Bu nedenle ELISA ile 2 pozitif sonuç alınması durumunda, enfeksiyon var mı yok mu sorusuna doğru cevap vermenizi sağlayacak immünoblotlama önerilir.
otoimmün hastalıkların varlığı ne anlama geliyor, bunlar nedir?
genel olarak, erken çocukluktan itibaren oldukça sık hastalandığımı söyleyebilirim ve hatta birkaç üç yıl önce, ilgili doktordan bağışıklığımla ilgilenmesini istedim çünkü sürekli yorgundum ve sık sık hastaydım, çoğunlukla kulak, boğaz, burun , ama her zaman HIV için olumsuz sonuçlar vardı, onları yeterince kolaylıkla, tereddüt etmeden teslim ettim.
Bir HIV testinin yanlış pozitif sonucu, yeni bir viral enfeksiyon, hepatit B aşılaması, tüberküloz, hepatit, uçuk ve ayrıca romatoid artrit, sistemik lupus eritematozus, dermatomiyozit, skleroderma gibi otoimmün hastalıkların arka planında olabilir. bağ dokusu hastalıkları vb.
Soruma eklemek istiyorum, immünoblotum geldi, negatifti, ancak doktor, bulaşıcı hastalıklar hastanesindeyken iki ifs + olduğu için, yine de analizi tekrar yaptırmam gerektiğini söyledi, ancak biraz sonra
Bu durumda, tıbbi taktikler haklı çıkar - 1,5-2 ay sonra tekrar bir immünoblot almanızı öneririz.
Olasılık nedir: 2 ifa + yaklaşık 2 günlük kan örnekleri arasındaki fark, immünoblot - ; adenovirüs enfeksiyonu ve parainfluenza ile bulaşıcı hastalıklar hastanesindeydi, kan alındı, immünoblot AIDS merkezine gönderildi
Tünaydın! LCD'ye kayıt oldum, tüm testleri geçtim, doktor kanımda uçuk olduğunu söylüyor, sonra AIDS merkezinden arayıp tekrar yaptırmam gerektiğini söylüyorlar, başvurdum ve bana uçuk olduğumu söylüyorlar. HIV pozitif, panik içinde kocamla bir saniye kurmaya gittik, ben de ifa ve immünoblot + kocama tahlil yaptırdım, bir ay sonra tekrar verdim. + kocam var - şimdi 23 haftalık hamileyim!
Bu durumda ne yazık ki HIV bulaşma olasılığı vardır, ancak hamileliğin durumu göz önüne alındığında pozitif bir immünoblot ile bile kesin tanı konulamaz. Bu durumda yanlış pozitif sonuçların hariç tutulması gerekir, bu nedenle testi tekrar yapmanızı ve kişisel olarak bir enfeksiyon hastalıkları uzmanına danışmanızı öneririz.
immünoblot HIV için pozitif bir sonuç gösterdiyse ve tarama negatifse, hangi sonuca güvenilmelidir?
İmmunoblot daha doğru bir çalışmadır, bu nedenle bu çalışmada pozitif sonuç alınırsa çalışmaya devam edilmesi ve bir enfeksiyon hastalıkları uzmanına bizzat gidilmesi gerekmektedir.
Bu nedir - immünoblot? Bu, insan viral enfeksiyonlarının laboratuvar teşhisi için yaygın bir yöntemdir. HIV varlığını tespit etmenin en doğru ve güvenilir yollarından biri olarak kabul edilir. Güvenilirliği açısından, immünoblotun sonuçları bile reddedilemez ve nihai olarak kabul edilir.
Genel bilgi
İmmunoblot - nedir bu? Bir kişide HIV enfeksiyonunu tanımak için, antikorların varlığı için bir laboratuvar kan serumu testinden geçmek gerekir. Western blot tekniğine Western blot da denir. Ek bir uzman yöntem olarak insan viral enfeksiyonlarını tespit etmek için kullanılır. Kandaki HIV antikorlarının varlığını belirlemenizi sağlayan bir laboratuvar testi olan ELISA'yı doğrulamak gerekir. Pozitif bir ELISA analizi, immünoblotlama ile yeniden kontrol edilir. En hassas, karmaşık ve pahalı olarak kabul edilir.
amaç
Bu nedir - immünoblot? Bu, virüse karşı antikorların varlığı için kan serumunun laboratuvar testi için bir tekniktir. Çalışma sırasında uzman, jeldeki virüs proteinlerini önceden ayırır ve nitroselüloz bir zara aktarır. İmmunoblotlama prosedürünün amacı HIV'i farklı aşamalarda belirlemektir. İlk aşamada kendisini oluşturan parçalardan arındırılan virüs elektroforeze tabi tutulur ve bileşimini oluşturan antijenler moleküler ağırlıklarına göre ayrılır.
Genetik bilgisini içine yerleştirerek canlı bir hücrede çoğalır. Bu aşamada, kişi enfekte olmuşsa HIV virüsünün taşıyıcısı olur. Hastalığın özgüllüğü, uzun süre kendini göstermemesidir. Virüs lenfositleri yok eder, böylece insan bağışıklığı azalır ve vücut enfeksiyonlara karşı koyamaz hale gelir. HIV yetkin bir şekilde ve zamanında tedavi edilirse, hasta olgun bir yaşa kadar yaşayacaktır. Terapi eksikliği kaçınılmaz olarak ölüme yol açar. Enfeksiyon anından itibaren, ancak tedavi olmaksızın maksimum yaşam süresi on yıldan fazla değildir.
özellikler
İmmünoblot analizi, birinci ve ikinci tip HIV antijenlerine karşı antikorların varlığını belirlemenizi sağlayan güvenilir bir yöntemdir. Bir kişi enfekte olursa, antikorlar iki hafta içinde ortaya çıkar ve bu çok daha sonra tespit edilebilir. HIV'in özelliği, antikor sayısının hızla artması ve hastanın kanında kalmasıdır. Bulunsalar bile hastalık iki yıl veya daha uzun süre kendini göstermeyebilir. ELISA yöntemi, hastalığın varlığını her zaman doğru bir şekilde belirlemez, bu nedenle, enzim immün testi pozitifse, sonuçların immünoblotlama ve PCR kullanılarak doğrulanması gerekir.
Randevu endikasyonları
Bu "immünoblot" nedir zaten bulundu, ancak bu çalışma kime reçete edildi? İmmünoblotlama yöntemi için test yaptırmanın nedeni, pozitif bir ELISA sonucunun olmasıdır. Ameliyat olacak hastalara enzim immunoassay yaptırmak gerekir. Ayrıca gebelik planlayan kadınlar ve cinsel ilişki yaşayan herkes için de analiz yapılmalıdır. ELISA sonuçları şüpheliyse, HIV'li hastalara immünoblotlama atayın. Aşağıdaki endişe verici belirtiler doktora gitme sebebi olabilir:
- keskin kilo kaybı;
- zayıflık, çalışma kapasitesi kaybı;
- üç hafta süren bağırsak bozukluğu (ishal);
- vücudun dehidrasyonu;
- ateş;
- vücutta şişmiş lenf düğümleri;
- kandidiyazis, tüberküloz, pnömoni, toksoplazmoz, herpes alevlenmesi gelişimi.
Hastanın venöz kan vermeden önce hazırlık yapmasına gerek yoktur. Çalışmadan 8-10 saat önce yemek yiyemezsiniz. Kan bağışından bir gün önce alkollü ve kahveli içeceklerin içilmesi, ağır fiziksel egzersizler yapılması, heyecan yaşanması önerilmez.
Analiz nerede yapılır?
HIV testi nerede yaptırabilirim? ELISA, immünoblot çalışmaları şehirdeki özel kliniklerde yapılıyor, sonuçlar bir gün içinde veriliyor. Anında teşhis de mümkündür. Devlet sağlık kurumlarında, Rusya Federasyonu mevzuatına uygun olarak ELISA testleri ve immünoblotlama ücretsiz olarak yapılmaktadır. Hamile kadınların yanı sıra hastaneye yatırılacak veya ameliyat olacak hastaların bulaşıcı hastalık testi yaptırması gerekmektedir.
Araştırma nasıl yapılır?
ELISA nasıl yapılır? Immunoblot pozitif/negatif, enzim immunoassay sonuçlarını doğrular veya reddeder. Araştırma prosedürü oldukça basittir. Uzman, beş dakikadan fazla sürmeyen bir venöz kan örneklemesi yapar. Örneklemeden sonra, enjeksiyon bölgesi dezenfekte edilmeli ve bir sıva ile kapatılmalıdır. Örnekleme aç karnına yapılır, bu nedenle işlemden sonra bir parça bitter çikolata yemekten veya tatlı bir sıcak içecek içmekten zarar gelmez.
Bir devlet tıp kurumunda ücretsiz tahlil yaptırmak üzere havale almak için bir pratisyen hekime gitmeniz gerekir. Genel olarak immünoblot, numune alma yöntemi açısından diğer kan testlerinden farklı değildir. Araştırma metodolojisi basittir. Bir kişinin kanında bir virüs varsa, vücut onu yok etmek için antikor üretmeye başlar. Her virüsün kendi antijen proteinleri seti vardır. Bu antikorların saptanması, Western blot tekniğinin temelidir.
Fiyat
Analizin maliyeti nedir? HIV için immünoblot, ucuz araştırma için geçerli değildir. Ortalama olarak, enzim immunoassay ile bir tarama incelemesinin maliyeti 500 ila 900 ruble arasındadır. İmmunoblotlama, maliyeti üç ila beş bin ruble arasında olan bir doğrulama çalışmasıdır. Daha karmaşık yöntemler çok daha pahalıdır. Örneğin, bunun için yaklaşık 12.000 ruble ödemeniz gerekecek.
sonucun yorumlanması
HIV enfeksiyonunu teşhis etmek için en yaygın yöntemler enzim immunoassay ve immunoblot'tur. İmmün yetmezlik virüsüne karşı serum antikorlarını belirlemek için kullanılırlar. Enfeksiyonun varlığı genellikle iki testle doğrulanır: tarama ve doğrulama. Çalışma sonuçlarının yorumlanması bir doktor tarafından yapılmalı, ayrıca teşhis koymalı ve tedaviyi reçete etmelidir. İmmunoblot pozitifse, bu, insan vücudunda bir virüs olduğu anlamına gelir.
Olumlu bir sonuç, kendi kendine tedavi için bir neden olmamalıdır, çünkü her hasta kendi hastalık resmine sahip olabilir. Kalitatif analiz tarama ve doğrulamayı içerir. Hastada virüs yoksa sonuç “negatif” olarak belirtilir. Tarama yöntemi ile tespit edildiğinde ek doğrulama çalışması yapılır. Bir immünoblot, bir taramayı onaylayan veya reddeden bir analizdir. Test şeridinde belirli alanlarda (protein lokalizasyon bölgeleri) kararma görülürse, HIV teşhisi konur. Sonuçlarda şüphe varsa, testler üç ay içinde gerçekleştirilir.
Belirli kurallara uyarsanız bağışıklık yetmezliği virüsü bulaşmasını önleyebilirsiniz: rastgele seks yapmaktan kaçının, temas sırasında prezervatif kullanın, uyuşturucu almayın. Hamile bir kadında hastalık tespit edilirse, ilgili hekimin tavsiyelerine kesinlikle uymak önemlidir, virüs varlığı için muayene olmayı unutmayın.
İMMÜNOBLOTU(Western blot) - HIV'e karşı antikorların varlığı için kan serumunun laboratuvar testi yöntemi; ELISA'dan daha doğru bir testtir ve ELISA sonuçlarını doğrulamak için kullanılır. ELISA - enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) - kanda HIV antikorlarının varlığını belirlemenizi sağlayan bir laboratuvar testi; HIV antikor testi.
DSÖ tavsiyesine göre, ELISA sonuçlarını doğrulaması gereken ek bir uzman yöntemi olarak HIV enfeksiyonunun teşhisinde immünoblotlama (Western blot) kullanılmaktadır. Bu yöntem, daha karmaşık ve pahalı olmasına rağmen daha hassas ve spesifik olarak kabul edildiğinden, genellikle pozitif bir ELISA sonucunu iki kez kontrol etmek için kullanılır.
Immunoblotlama, enzim immunoassay (ELISA) ile virüs proteinlerinin bir jelde ön elektroforetik ayrımı ve bunların bir nitroselüloz membrana transferini birleştirir. İmmunoblot prosedürü birkaç aşamadan oluşur (). İlk olarak, önceden saflaştırılan ve bileşenlerine kadar yok edilen HIV, elektroforeze tabi tutulurken, virüsü oluşturan tüm antijenler moleküler ağırlıklarına göre ayrılır. Daha sonra, lekeleme yoluyla, antijenler jelden bir nitroselüloz şeridine veya artık gözle görülemeyen HIV'in karakteristiği olan bir protein spektrumu içeren bir naylon filtreye aktarılır. Daha sonra, test materyali (serum, hastanın plazması vb.) Şeride uygulanır ve numunede spesifik antikorlar varsa, bunlar, kendilerine tam olarak karşılık gelen antijen proteinlerinin şeritlerine bağlanır. Sonraki manipülasyonların bir sonucu olarak (ELISA gibi), bu etkileşimin sonucu görselleştirilir - görünür hale getirilir. Şeridin belirli alanlarında şeritlerin varlığı, çalışılan serumda kesin olarak tanımlanmış HIV antijenlerine karşı antikorların varlığını doğrular.
İmmunoblotlama, HIV enfeksiyonu tanısını doğrulamak için en yaygın şekilde kullanılır. DSÖ, HIV zarf proteinlerinden herhangi ikisine karşı antikorlar immünoblotlama ile tespit edilirse serumları pozitif kabul eder. Bu önerilere göre, zarf proteinlerinden (gp160, gp120, gp41) sadece biri ile diğer proteinlerle kombinasyon halinde veya reaksiyon olmaksızın reaksiyon varsa, sonuç şüpheli kabul edilir ve bir kit kullanılarak ikinci bir çalışma önerilir. farklı seri veya başka bir şirketten. Bundan sonra sonuç şüpheli kalırsa, çalışmalar 3 ayda bir devam eder.
İmmunoblotlama için ilk aşamada kan serumunda bulunan proteinler bir elektrik alanı kullanılarak (jel elektroforez yöntemi) moleküler ağırlıklarına ve yüklerine göre jel içerisinde ayrılır. Daha sonra jele bir nitroselüloz veya naylon zar uygulanır ve "ıslatılır" (bu lekelemedir). Bu, malzemenin jelden zara tamamen aktarılmasını sağlayan özel bir bölmede gerçekleştirilir. Sonuç olarak, jel üzerindeki protein düzenleme modeli, daha sonra kolayca manipüle edilebilen zar (leke) üzerinde yeniden üretilir. İlk olarak, zar, istenen antijene karşı antikorlarla muamele edilir ve bağlanmamış materyal yıkandıktan sonra, antikorlara spesifik olarak bağlanan (ELISA'da olduğu gibi) radyoaktif olarak işaretlenmiş bir konjugat eklenir. Ortaya çıkan antijen-antikor etiketli eşlenik kompleksinin konumu, x-ışını filmi kullanılarak otoradyografi ile belirlenir. Tezahür ettikten sonra, kanda antijen olup olmadığı her şey netleşir.
immünoblotlama -(İngilizce "leke" - nokta) - bilinen serumları (veya antijenleri) kullanarak antijenleri (veya antikorları) tanımlama yöntemi. ELISA ile jel elektroforezinin bir kombinasyonudur. Başlangıçta bakteri hücreleri veya virionlar ultrason kullanılarak yok edilir ve ardından virüs veya bakteri hücrelerinin tüm antijenleri elektroforez ile ayrılır ve özel bir nitroselüloz film üzerinde ticari bir reaktif elde edilir. İmmün lekeleme kurulurken, hastanın test serumu, bilinen antijenlerle filme uygulanır. Bağlanmamış antikorların inkübasyonundan ve yıkanmasından sonra, filme bir enzimle işaretlenmiş insan immünoglobulinlerine karşı bir antiserum ve enzimle etkileşime girdiğinde renk değiştiren bir kromojenik substrat olan ELISA'ya geçerler. Antijen-antikor-antiserum-immünoglobulin-enzim komplekslerinin varlığında, taşıyıcı üzerinde renkli noktalar görülür. İmmunoblotlama yöntemi, patojenin çeşitli antijenlerine karşı antikorları ayrı ayrı tespit etmenizi sağlar (örneğin, HIV enfeksiyonunda, immünoblotlama, gp120, gp24 ve virüsün diğer antijenlerine karşı antikorları tespit eder).
Radyoimmünoassay (RIA)
Yöntem, bir radyonüklid ile bir antijen veya antikor etiketi kullanan antijen-antikor reaksiyonuna dayanır. 125I, 14C, 3H, 51Cr ve diğer radyonüklidler etiket olarak kullanılmaktadır. Ortaya çıkan bağışıklık kompleksleri sistemden izole edilir ve radyoaktiviteleri sayaçlar (β-radyasyon) üzerinde belirlenir. Radyasyon yoğunluğu, bağlı antijen ve antikor moleküllerinin sayısı ile doğru orantılıdır.
Polistiren panellerin oyuklarında adsorbe edilmiş etiketli antikorlar veya antijenler kullanan RIA'nın katı faz versiyonu yaygın olarak kullanılmaktadır.
RIA, mikropların, virüslerin, çeşitli hormonların, enzimlerin, tıbbi maddelerin, immünoglobulinlerin antijenlerinin yanı sıra 10–12–10–15 g/l'lik küçük konsantrasyonlarda test materyalinde bulunan diğer maddeleri tespit etmek için kullanılır.
test soruları
Bağışıklık bakteriyoliz reaksiyonu: ne tür bir reaksiyondur; antijen nedir, antikor nedir, reaksiyon mekanizması, hazırlama yöntemleri, pratik uygulama. Bağışıklık hemoliz reaksiyonu: gerekli bileşenler, sertleştirme yöntemi; kontroller, pratik uygulama. Jelde lokal hemoliz reaksiyonu (Yerne reaksiyonu): reaksiyon prensibi, formülasyon yöntemi, pratik uygulama. Tamamlayıcı sabitleme reaksiyonu: reaksiyon prensibi; bağışıklık serumu belirli bir antijenle etkileşime girdiğinde ne oluşur; Bu etkileşimde varsa tamamlayıcıya ne olur? Antijen ve antikorlar arasında spesifik bir afinite yoksa komplemanın kaderi nedir? Tamamlayıcıya ne olduğunu belirlemek için hangi reaksiyon kullanılabilir; bu reaksiyon neden kullanılır; RSK'nın görünür olumlu sonucu nedir? Neden? Niye? CSC'nin ilk aşamasında tamamlayıcının hangi özelliği kullanılır? İkinci aşamada mı? RSK'nin nihai sonucu hemoliz ise, bu pozitif veya negatif bir sonuç anlamına mı gelir? Sonuçları açıklayın: RSK+ + + +, RSK+ + +, RSK+ +, RSK+. Birinci RSK sisteminin bileşenlerini ve ikinci RSK sisteminin bileşenlerini adlandırın. Test serumunun neden inaktive edilmesi gerekiyor? Kompleman nasıl titre edilir? Hemolitik serum: Ne içerir, nasıl elde edilir, titre nedir ve nasıl belirlenir? RSC bileşenlerini elde etmek için hangi hayvanlar kullanılır? RSC'yi soğukta ayarlama tekniği. Aşağıdaki reaksiyonlardan hangisinin evrelendirilmesinde bir tamamlayıcının katılımı gereklidir: çökeltme, flokülasyon, aglütinasyon, eksik antikorların tespiti, immün bakteriyoliz, immün hemoliz, Jerne, CSC? İmmünofloresan reaksiyonu (RIF) - doğrudan Coons reaksiyonundaki olayların sırasını gösterir; gerekli bileşenler. Antijen nedir, antikor nedir, antikorlar nasıl etiketlenir, reaksiyon sonucu nasıl dikkate alınır, pozitif sonuç nasıl olur? Pratik uygulama - bu reaksiyon kullanılarak ne belirlenebilir? Dolaylı immünofloresan reaksiyonu - bu reaksiyondaki olayların sırasını, gerekli bileşenleri, antijenin ne olduğunu, hangi immün serumların kullanıldığını belirtin; pratik kullanım; dolaylı RIF'in doğrudan reaksiyona göre avantajı. Enzim immunoassay (ELISA) - reaksiyon prensibi; gerekli bileşenler; test materyalinde bir antijeni saptamak için bir reaksiyon oluştururken olayların sırasını belirtir; gerekli bileşenler; olumlu bir sonuçla ne olur, neye benziyor? Test serumundaki antikorları saptamak için ELISA sırasındaki eylemlerin sırasını belirtin; gerekli bileşenler; Olumlu bir sonuçla ne olur? İmmunoblotlama - reaksiyon prensibi; ana adımlar; gerekli bileşenler; Sonuç nasıl dikkate alınır? reaksiyon faydaları. Radioimmunoassay (RIA) - reaksiyonun ana aşamaları nelerdir; Antikor veya antijenler ne ile işaretlenir, sonuç nasıl dikkate alınır? İmmünoelektron mikroskobu - yöntemin prensibi; ana adımlar; gerekli bileşenler; Antikorlar ne ile etiketlenir? reaksiyonun sonucu nasıl dikkate alınır. Hareketsizleştirme reaksiyonları - yöntemin ilkesi, ayar tekniği, bileşenler, sonuçların muhasebesi.
Kendi kendine eğitim sürecinde gerçekleştirilecek görevler.
Bu konuda ele alınan reaksiyonlar için Bağışıklık Reaksiyonları tablosunu doldurun.
Bağışıklık reaksiyonları
Uygulamalı bir derste öğrencinin çalışması
RSC'nin 1. aşamasının formülasyonu ile hemen çalışmaya başlayın, ancak bunu daha sonra bir not defterine yazın (aşağıya bakın).
1. İmmün hemoliz reaksiyonu. İmmün hemolizin bir gösteri reaksiyonunu görüntüleyin, bir diyagram olarak çizin, deney ve kontrol tüplerindeki sonucu açıklayın.
2. Tamamlayıcı bağlanma reaksiyonu
a) RSC'yi tabloya göre sökün;
b) bir deftere RSC'yi tablo şeklinde ayarlamak için bir şema çizin;
c) RSK'nın ikinci aşamasını koyun (ilk aşama dersin başına konur);
d) RSK için gerekli teşhis hazırlıklarını sökün;
e) sonucu dikkate almak. Test serumunda spesifik antikorların varlığı hakkında bir sonuç formüle edin.
3. İmmünofloresan reaksiyonu. Tabloyu inceleyin, not defterinizdeki reaksiyonu ayarlamak için bir şema çizin; teşhis serumlarına bakınız; serumun neler içerdiğini, nasıl hazırlandığını, hangi reaksiyon için (direkt veya indirekt RIF) kullanıldığını belirleyin. RIF'in bir flüoresan mikroskobundaki gösteri sonucuna bakın.
4. Enzim immün testi (ELISA). Defterinizde, iki versiyonda bir reaksiyon şeması çizin: test materyalinde bir antijenin tespiti için ve serumda antikorların tespiti için. HIV ve Hepatit B Teşhis Malzeme Kitini gözden geçirin Her bir bileşenin ne içerdiğini ve ne için kullanıldığını belirleyin.
5. İmmün lekeleme. Defterinizde reaksiyonun bir diyagramını yapın; demoya bakın - reaksiyonun sonucu.
6. Radyoimmunoassay (RIA). Reaksiyon şemasını defterinize çizin.
7. Bağışıklık elektron mikroskobu (IEM). Gösterimi izleyin - reaksiyonun sonucu, not defterinizde bir reaksiyon şeması çizin, antijeni (virüs) ve etiketli antikorları oklarla belirtin.
İmmunoblotlama, elektroforez ve ELISA veya RIA'nın bir kombinasyonuna dayanan oldukça hassas bir protein saptama yöntemidir. İmmunoblotlama, HIV enfeksiyonu vb. için bir teşhis yöntemi olarak kullanılır.
Genel anlamda, immünoblotlama, kovalent bağlarla bağlandıkları katı bir destek zarına aktarılan bir protein karışımının analizi ve ardından immün saptama olarak anlaşılır.
Doğrudan bir substrat üzerinde biriken proteinlerin bir karışımını (nokta leke analizi) veya elektrofokuslama, disk elektroforezi veya iki boyutlu elektroforez (Western blotlama) ile ön fraksiyonasyonundan sonra analiz etmek mümkündür.
Patojen antijenler, poliakrilamid jel elektroforezi ile ayrılır, daha sonra jelden aktifleştirilmiş kağıt veya nitroselüloz membrana aktarılır ve ELISA ile geliştirilir.
Firmalar bu tür şeritleri antijen "lekeleri" ile üretirler. Bu şeritlere hastanın serumu uygulanır. . Daha sonra inkübasyondan sonra hasta, hastanın bağlanmamış antikorlarından yıkanır ve enzimle işaretlenmiş insan immünoglobulinlerine karşı serum uygulanır. . Şerit üzerinde oluşan kompleks (antijen + hastanın antikoru + insan Ig'ye karşı antikor), enzimin etkisi altında renk değiştiren bir kromojenik substrat eklenerek tespit edilir.
Bu metodoloji aynı zamanda hedef klonlanmış genlerin ürünlerini ifade eden bakteri, faj veya virüs klonlarının seçimine de uygulanır.
Proteinlerin zara transferi pasif olarak veya elektrotransfer aparatları kullanılarak gerçekleştirilir. Zara protein transferinin etkinliği, proteinlerin moleküler ağırlığı, jelin gözenekliliği, transfer süresi ve kullanılan tampon çözeltinin (trans tampon) bileşimi gibi birçok faktörden etkilenir.
Deneyin görevlerine ve koşullarına bağlı olarak, en iyi sonuçları sağlayan transfer koşulları seçilir. Yaygın olarak kullanılan substratlar, nitroselüloz, poliviniliden diflorür (PVDF) veya pozitif yüklü naylon membranlardır. Nitroselüloz 1 cm2 başına 80-100 mikrograma kadar protein bağlayabilir.
Düşük molekül ağırlıklı proteinler (molekül ağırlığı 20 kDa'dan az olan) yıkamalar sonucunda kaybolabilir, bu da belirli genetik lokusların polimorfizminin karşılık gelen kısıtlama DNA fragmanlarının uzunlukları ile önceden incelenmesini mümkün kılar.
Ek olarak, Southern hibridizasyonunu kullanarak, hedef genin iç kısmında belirli bir kısıtlama enzimi tarafından bir hidroliz bölgesine sahip olup olmadığını bulmak kolaydır; bu, incelenen genom bölgesini klonlamak için en uygun stratejiyi seçmenize olanak tanır.
Benzer bir şemaya göre, RNA molekülleri agaroz jelden bir nitroselüloz filtreye de aktarılabilir. Southern soyadı İngilizce'de "güney" anlamına geldiğinden, bu yöntem Southern blotlamanın aksine Northern blot olarak adlandırılmıştır.
Protein jelinden filtrelere transfer buna göre Western blot olarak adlandırıldı. Trans tamponda etanol varsa, sodyum dodesil sülfat (SDS) çözeltisinde denatüre edilmiş büyük proteinler (100 kDa'dan büyük) zara zayıf bir şekilde aktarılabilir. Alkol, proteinlerin SDS-poliakrilamid jelden transferini önemli ölçüde iyileştirir, ancak jeldeki gözenekleri daraltarak büyük proteinlerin tutulmasına yol açar.
PVDF membranı, immün saptama için optimize edilmiştir ve çok düşük bir spesifik olmayan bağlanma seviyesi ile 160 µg/cm2'ye kadar spesifik olarak bağlı proteinleri tutabilir.
immünoblotlama
Bu zarın önemli bir özelliği, tekrar tekrar kullanım olasılığıdır. Zeta-Probe naylon membranları, alkol yokluğunda SDS proteinlerini etkili bir şekilde bağlar ve bu bağlanma sonraki işlemlere dirençlidir. Düşük moleküler ağırlıklı proteinler de etkili bir şekilde tutulur. 1 cm2 başına yaklaşık 480 μg protein gibi yüksek bağlama kapasitesine sahip Zeta-Probe membranları, tahlil karışımlarında eser miktarda proteinin saptanmasına olanak tanır.
Antijen zar üzerinde immobilize edildikten sonra, kalan bağlanma bölgeleri jelatin veya sığır serum albümini veya yağsız süt solüsyonları ile bloke edilir.
Daha sonra membran, test edilen antijene yönelik poliklonal veya monoklonal antikorların bir solüsyonunda inkübe edilir. Bağlanmamış antikorların yıkanmasından sonra, membran, alkalin fosfataz enzimlerinin (alkali fosfataz, AP) veya yaban turpu peroksidazının (HRP) anti-tür antikorları (tavşan, fare veya keçiye karşı keçi antikorları) ile eşleniği olan ikincil antikorların bir solüsyonunda inkübe edilir. insan immünoglobulinleri) veya immünoglobülinlerin Fc bölgesi için yüksek bir afiniteye sahip proteinler A (Staphylococcus aureus proteini) veya G (Streptococcus sp. proteini).
Oluşan bağışıklık komplekslerinin tespiti, kimyasal veya kemilüminesan yöntemle gerçekleştirilir. Alkalin fosfataz konjugatları kullanılırken kimyasal reaksiyon için substratlar 5-bromo-4-kloro-3-indolilfosfat (BCIP) veya tetrazolyum mavisidir (NBT) ve yaban turpu peroksidaz konjugatları - 4-kloro-1-naftol ve hidrojen peroksit kullanılır.
Enzimatik reaksiyonlar sonucunda, antijen-antikor kompleksinin lokalizasyon bölgesinde zar üzerinde renkli bir bant veya nokta oluşur.
Bu yöntemin hassasiyeti AP konjugatları kullanıldığında 100 pg protein, HRP konjugatları kullanıldığında ise 100-500 pg proteindir. Bağışıklık komplekslerinin kemilüminesan tespiti, 5 pg'den daha az antijeni tespit edebilir. Bu yöntemin prensibi, HRP'nin hidrojen peroksit ve siklik diasilhidrazineluminol ile reaksiyona girdiğinde, ışığa duyarlı bir film üzerine kaydedilebilen 428 nm dalga boyunda ışık yaymasıdır.
İmmün lekeleme reaksiyonu (RI), ELISA temelinde geliştirilmiştir. İmmünokimyasal analizlerin en spesifik ve hassas yöntemidir. İmmunoblotlama (İngiliz lekesinden - ıslanmak, lekelenmek) ELISA'yı elektroforez ile birleştirir. HIV'e karşı karmaşık antikorları değil, bireysel yapısal proteinlerine (proteinler-p24, glikoproteinler-gp120, gp 41, vb.) Karşı antikorları tespit etmek için kullanılır. HIV enfeksiyonunun teşhisi için uzman (doğrulayıcı) reaksiyonlarına bakın.
Reaksiyon birkaç aşamada gerçekleştirilir:
Virüs, bir poliakrilamid jelde elektroforeze tabi tutulan, yani antijenlerin moleküler ağırlığa göre fraksiyonlara ayrılması olan bileşenler - antijenler (p24, gp120, gp 41, vb.) halinde yok edilir.
2. Jel, bir nitroselüloz zar ile kaplanır ve antijen fraksiyonları, elektroforez yoluyla ona aktarılır. Nitroselüloz kurutma kağıdı gibi davranır. Membran şeritler (şeritler) halinde kesilir. Firmalar bu tür şeritleri antijen "lekeleri" ile üretirler.
İmmunoblotlama - ek bir dolaylı yöntem
Üzerine HIV antijenleri uygulanmış şeritler deneğin serumuna daldırılır ve daha sonra bağlanmamış malzemeden yıkanır.
4. Stripler, peroksidaz etiketli antiglobulin serum ile inkübe edilir ve yıkanır.
Bir substrat eklenir ve AG-AT kompleksinin lokalizasyon bölgesine karşılık gelen renkli fraksiyonların (noktalar) sayısı not edilir.
Şeridin belirli alanlarında şeritlerin varlığı, çalışılan serumda kesin olarak tanımlanmış HIV antijenlerine karşı antikorların varlığını doğrular. Üç HIV antijeninden (p24, gp41 ve gp 120) herhangi ikisine karşılık gelen bantlar zar üzerinde görünürse, immünoblotlamanın sonucu pozitif kabul edilir (Şekil 37).
ÇİZİMLER
KULLANILAN LİTERATÜR LİSTESİ
Ana literatür
Tıbbi mikrobiyoloji, viroloji ve immünoloji: tıp öğrencileri için bir ders kitabı. üniversiteler 2. baskı, düzeltildi. ve ek — 702 s. Ed. A.A. Vorobyov. M. : MIA, 2012.
2. Mikrobiyoloji, viroloji ve immünoloji: laboratuvar çalışmaları için bir rehber: çalışma rehberi / (V.B. Sboychakov ve ark.); ed. V.B.Sboychakova, M.M.Karapats. – M.: GEOTAR-Media, 2014.- 320 pp.: hasta.
3. Tıbbi mikrobiyoloji, immünoloji ve viroloji [Elektronik kaynak]: bal için bir ders kitabı.
üniversiteler - 760 s. — Erişim modu: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html Korotyaev A.I., Babichev S.A. Petersburg: Spetslit, 2010.
4. Tıbbi mikrobiyoloji, viroloji ve immünoloji [Elektronik kaynak]: ders kitabı: 2 cilt / V. 1. - 448 s. — Erişim modu: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html Zverev V.V., Boychenko M.N.
M. : Geotar Medya, 2010. .
5. Tıbbi mikrobiyoloji, viroloji ve immünoloji [Elektronik kaynak]: ders kitabı: 2 cilt Cilt 2 - 480 s. Erişim modu: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html Zverev V.V., Boychenko M.N. M. : Geotar Medya, 2010.
ek literatür
1. İmmünodiagnostik reaksiyonlar: ders kitabı / derleyen: G.K. Davletshina, Z.G. Gabidullin, A.A. Akhtarieva, M.M.
Khusnarizanova, Yu.Z. Gabidullin, M.M. Alsynbaev - Ufa: Rusya Sağlık Bakanlığı GBOU VPO BSMU Yayınevi, 2016. - 86s.
2. Enterobacter, Сitrobacter, Serratia, E. coli, Proteus bakterilerinin birlikte yetiştirilen varyasyonlarının patojenik potansiyelini belirleyen bazı özelliklerin özellikleri: bilimsel yayın / Yu. Z. Gabidullin, R. S. Sufiyarov, I. I. Dolgushin - Ufa, 2015. - 250 saniye
ana » İmmunoblot - nedir bu? Bulaşıcı hastalıkların tanısında immünoblot
İmmunoblot - nedir bu? Bulaşıcı hastalıkların tanısında immünoblot
immünoblot nedir? Bu, insan viral enfeksiyonlarının laboratuvar teşhisi için yaygın bir yöntemdir. HIV varlığını tespit etmenin en doğru ve güvenilir yollarından biridir.
Güvenilirlik açısından enzim eşli immünosorbent (elisa) testinden bile daha büyüktür. İmmunoblot sonuçları kesin ve kati kabul edilir.Genel Bilgiler
İmmunoblot - nedir bu? Bir kişiyi HIV pozitif olarak tanımak için, kan serumunda antikor varlığını test etmek için bir laboratuvar testinden geçmelisiniz.
Western blot bölümlerinin yöntemine Western blot (Western blot) da denir. Ek bir uzman yöntemi olarak insan viral enfeksiyonlarını tespit etmek için kullanılır. Bu, kanda HIV'e karşı antikorların varlığını belirlemenizi sağlayan bir laboratuvar testi olan ELISA'yı doğrulamak için gereklidir. İmmunoblot yeniden kontrol pozitif ELISA.
En hassas, karmaşık ve pahalı olarak kabul edilir.
Hedef
immünoblot nedir? Bu, virüse karşı antikorların varlığı için kan serumunun laboratuvar testi yöntemidir.
Jeldeki ve nitroselüloz zarlardaki toplam viral proteinlerin özel çalışmaları sırasında.
İmmunoblotlama (hastaların serumlarında belirli patojen antijenlere karşı antikorların tespiti)
Western blot bölümü prosedürünün amacı, HIV enfeksiyonunu farklı aşamalarda belirlemektir. İlk adımda, kendisini oluşturan parçalardan saflaştırılan virüs elektroforeze tabi tutulur ve içerdiği antijenler moleküler ağırlığa bölünür.
İnsan immün yetmezlik virüsü, genetik bilgisine gömülü canlı hücrelerde çoğalır. Bu aşamada, eğer enfekte olduysanız, kişi HIV virüsünün taşıyıcısı olur.
Bu hastalığın özelliği, uzun süre kendini göstermemesidir. Virüs lenfositleri yok eder, böylece kişinin bağışıklığı azalır ve vücut enfeksiyonlarla savaşamaz hale gelir.
HIV doğru ve zamanında tedavi edilirse, hasta olgun bir yaşa kadar yaşayacaktır. Tedavi eksikliği kaçınılmaz olarak ölüme yol açar. Enfeksiyon anından itibaren, ancak tedavi olmaksızın maksimum süre on yılı geçmez.
özellikler
İmmünoblot analizi, birinci ve ikinci tip HIV antijenlerine karşı antikorların varlığını belirlemenizi sağlayan güvenilir bir yöntemdir.
Bir kişi enfekte olursa, çok sonra tespit edilebilen antikorlar iki hafta sonra. HIV'in bir özelliği, antikor miktarının hızla artması ve hastanın kanında kalmasıdır. Bulunsalar bile hastalık iki yıl veya daha uzun süre kendini göstermeyebilir. ELISA yöntemi, hastalığın varlığını her zaman doğru bir şekilde göstermez ve enzim immün testinin pozitif bir sonuç göstermesi durumunda, PCR ve Western blot bölümlerinden sonuçların doğrulanmasını gerektirir.
için endikasyonlar
Halihazırda ne tür bir "immünoblot" bulundu, ancak çalışmada hangisi tanıtılıyor?
İnsan immün yetmezlik virüsü (HIV) immünoblotunun test edilmesinin nedeni, pozitif bir ELISA sonucu olacaktır. Ameliyat olacak hastalarda enzime bağlı immünosorbent testinden geçmek gerekir. Ek olarak, hamilelik planlayan kadınların yanı sıra rastgele olanların da bir analizini yapmalısınız. Elisa sonuçları şüpheliyse, HIV enfeksiyonu olan hastalara Western blot kesitleri verilir.
Aşağıdaki endişe verici semptomlar doktora gitme sebebi olabilir: hızlı kilo kaybı; halsizlik, fonksiyon kaybı; üç hafta süren bağırsak bozuklukları (ishal); dehidrasyon; ateş; vücutta şişmiş lenf düğümleri; kandidiyazis gelişimi, tüberküloz, pnömoni, toksoplazmoz, herpes alevlenmesi.
Hastanın venöz kan vermeden önce hazırlık yapmasına gerek yoktur.
Testten 8-10 saat önce yemek yemeyin. Kan bağışından bir gün önce alkollü ve kahveli içeceklerin içilmesi, ağır fiziksel egzersizlerin yapılması, heyecan yaşanması önerilmez.
Analiz nerede yapılır?
HIV testi nerede yaptırabilirim?
Kentsel özel kliniklerde yapılan immünoblot analizi ELISA, bir gün içinde sonuç veriyor. Anında teşhis de mümkündür. Kamu kurumlarında, Rusya Federasyonu mevzuatına göre elisa tıbbi testleri ve Western blot bölümleri ücretsizdir.
Gebelerde enfeksiyon hastalıkları, hastanede yatış veya ameliyat gerektiren hastalarda zorunlu tarama var mı Bu çalışma nasıl yapılıyor?
ELISA nasıl yapılır? Immunoblot pozitif/negatif, elisa sonuçlarını doğrular veya reddeder. İşlem oldukça basit. Uzman venöz kan alır, zamanında beş dakikadan az sürer.
Örneklemeden sonra, enjeksiyon bölgesi dezenfekte edilmeli ve bir sıva ile kapatılmalıdır. Örnekleme aç karnına yapılır, bu nedenle işlemden sonra bir parça bitter çikolata veya tatlı bir sıcak içecek yemekten zarar gelmez.
Bir kamu sağlık kurumunda ücretsiz analiz için havale almak için bir terapisti ziyaret etmelisiniz.
Genel olarak, immünoblot, örnekleme yoluyla diğer kan testlerinden farklı değildir. Araştırma metodolojisi basittir. Bir kişinin kanında bir virüs varsa, vücut onu yok etmek için antikor üretmeye başlar. Her virüs için birçok protein antijeni vardır. Bu antikorların saptanması, Western blot kesit alma yönteminin temelidir. Fiyat
Ne kadar analiz? Immunoblot HIV, ucuz araştırmayı ifade eder.
Ortalama olarak, tarama immünoassay yöntemleri 500 ila 900 ruble arasında değişmektedir. Western blot bölümleri, maliyeti üç ila beş bin ruble arasında değişen bir çalışma kontrolüdür. Daha karmaşık yöntemler çok daha pahalıdır. Örneğin, polimeraz zincir reaksiyonunun (PCR) analizi için yaklaşık 12.000 ruble ödemeniz gerekecek.
Sonuçların yorumlanması
HIV enfeksiyonunu teşhis etmek için en yaygın yöntemler enzim immunoassay ve immunoblot'tur.
İnsan immün yetmezlik virüsüne karşı serum antikorlarının belirlenmesi içindir. Enfeksiyon genellikle iki testle doğrulanır: tarama ve doğrulama. Sonuçların yorumlanması bir doktor tarafından yapılmalı, tedaviyi teşhis eder ve reçete eder. İmmunoblot pozitif ise, insan vücudunda bir virüs olduğu anlamına gelir.
Olumlu bir sonuç, kendi kendine tedavi için bir neden olmamalıdır, çünkü her hasta kendi hastalık resmine sahip olabilir.
Kalitatif analiz, tarama ve belgelendirmeyi içerir. Hastada virüs yoksa sonuç “negatif”. Bu sertifika bulunduğunda ek tarama testleri yapılır. Taramayı onaylayan veya reddeden immünoblot analizi. Test şeritlerinde belirli bölgelerin koyulaşması (protein yerleşimi) görülüyorsa tanı “HIV”dir.
Sonuçlar şüpheli ise, testler üç ay içinde gerçekleştirilir.
İnsan immün yetmezlik virüsü ile enfeksiyonu önlemek için, belirli kurallara uymanız mümkündür: gündelik cinsel temastan kaçının, temas sırasında prezervatif kullanın, uyuşturucu kullanmayın.
Hamile bir kadında hastalık tespit edilirse, doktorun tavsiyelerine uymak önemlidir, virüs varlığına yönelik testleri unutmayınız.
Western Blot nedir?
Çeşitli dokuların kompleks karışımlarında veya ekstraktlarında protein tanımlaması sıklıkla karşılaşılan sorunlardan biridir. Spesifik antikorlar gibi bir aracı kullanarak, incelenen proteini minimum zaman ve finansal maliyetle belirlemek mümkündür.
Western blot yönteminde, ilk aşamada, bir protein karışımı, sodyum dodesil sülfat (SDS) varlığında elektroforez ile ayrılır, ardından elektroblotlama ile bir nitroselüloz membrana aktarılır.
Bu yöntemin özü, elektroforezden sonra jelin, filtre kağıdı katmanları arasında bir nitroselüloz zar üzerine yerleştirilmesi gerçeğinde yatmaktadır. Bu şekilde bir araya getirilen "sandviç", protein-SDS komplekslerinin jel plakası boyunca hareket etmesi ve nitroselüloz zarın yüzeyi üzerinde (spesifik olmayan soğurmanın bir sonucu olarak) sabitlenmesi için bir elektrik alanına yerleştirilir.
Protein-SDS kompleksinin nitroselüloz membrana bağlanmasında esas olarak elektriksel kuvvetler yer alır ve bu etkileşim çok noktalıdır ve proteinlerin membran yüzeyinde "yayılmasına" yol açar. Böylece, elektrotransferden sonra, poliakrilamid jeldeki ile aynı şekilde düzenlenmiş proteinlerle nitroselüloz üzerindeki jelin bir kopyasını elde ederiz.
SDS'den sonra - elektroforez, elektrotransfer ve proteinlerin jelden bir nitroselüloz zara emilmesi, proteinin üçüncül yapısı büyük ölçüde değişir, eğer bu kadar sert bir işlemden sonra protein için üçüncül bir yapının varlığından bahsetmek genel olarak doğruysa . Bu nedenle, çalışılan proteinin immünokimyasal tespiti için, genellikle protein molekülünün lineer bölgelerine özgü mono- veya poliklonal antikorlar kullanılır.
51. Enzim imünolojik tahlili, imünoblotlama. Mekanizma, bileşenler, uygulama.
Konformasyonel epitoplara (veya alt birimler arası temasları içeren bölgelere) özgü antikorlar, genellikle Western blot yönteminde kullanım için uygun değildir.
Protein transferinden sonra, zar sırayla incelenen proteine özgü antikorlarla ve daha sonra bir enzim (veya başka bir) etiketiyle konjuge edilmiş birincil antikorların Fc fragmanlarına özgü ikincil antikorlarla inkübe edilir (Şekil 1).
1 A). Çalışılan antijene özgü birincil antikorların doğrudan etiketle konjuge edilmesi durumunda, ikincil antikorlara gerek yoktur (Şekil 1 B). Çalışılan protein lokalizasyonunun yerinde oluşan bağışıklık kompleksleri, kromojenik bir substratın yardımıyla (etiket tipine bağlı olarak) "tezahür eder".
Yöntemin duyarlılığı ve özgüllüğü büyük ölçüde çalışmada hangi antikorların kullanıldığına bağlıdır.
Kullanılan antikorlar, yalnızca çalışılan proteine özgü benzersiz bir amino asit dizisine özgü olmalıdır. Aksi takdirde, antikorların birkaç protein molekülü ile etkileşimi (özellikle kaba protein ekstraktları durumunda) mümkündür ve bu da zar üzerinde birkaç renkli bandın görünmesine yol açacaktır.
Bu durumda incelenmekte olan proteinin tanımlanması genellikle zordur ve hatta imkansızdır.
Antikorları seçerken akılda tutulması gereken ikinci önemli faktör afinitedir. Kullanılan antikorların afinitesi ne kadar yüksek, protein bantları ne kadar parlak ve net lekeleniyorsa, yöntemin hassasiyeti o kadar yüksektir. Yüksek afiniteli antikorlar kullanıldığında 1 ng ve hatta daha yüksek hassasiyet elde edilebilir.
Membrana bağlı antijen ve antikorların etkileşiminin sonucunu görselleştirmek için, belirli koşullar altında belirli bir sinyal verebilen ajanlarla konjuge sekonder antikorlar kullanılır.
Genellikle, bu tür bir ajan olarak, reaksiyon ürünü bir renge sahip olan ve çözünmeyen bir çökelti şeklinde zar üzerinde çökelen bir enzim (peroksidaz veya fosfataz) kullanılır.
Bu yöntemde floresan etiketler kullanmak da mümkündür.
Pirinç. 1. Çalışılan proteinin immünokimyasal boyama şeması: A - bir enzim etiketi ile konjüge edilmiş ikincil antikorlar kullanılarak; B - birincil antikor doğrudan bir enzim etiketi ile konjuge edilir.
Protokol:
I. Jel ve membran hazırlama ve protein elektrotransferi
Elektroforezden sonra poliakrilamid jel, kurutma tamponu (25 mM Tris, pH 8.3, 192 mM glisin, %10 etanol) içeren bir banyoya yerleştirildi.
Blot kaseti şeklinde kesilmiş ve blotting tamponu ile nemlendirilmiş iki yaprak filtre kağıdı, kasetin anoda bakan kısmına yerleştirilir. Daha sonra aynı tamponla önceden nemlendirilmiş nitroselüloz membran filtre kağıdının üzerine yerleştirilir ve membran ile kağıt arasında hava kabarcığı kalmadığından emin olunur.
Bundan sonra, yine jel ile zar arasında hava kabarcığı olmamasına özellikle dikkat edilerek, jel dikkatli bir şekilde zar üzerine yerleştirilmelidir. Sandviç, jelin yüzeyine yerleştirilmiş iki kat ıslatılmış filtre kağıdı ile tamamlanır (Şekil 2). Ortaya çıkan sandviç kasete sıkıştırılır ve membran anoda bakacak şekilde elektrotların arasına yerleştirilir.
Pirinç. 2. Proteinlerin zara elektrotransfer şeması.
II. elektrotransfer
Proteinlerin bir nitroselüloz membrana elektrotransferi, 25 mM Tris, pH 8.3, 192 mM glisin, %10 etanol içeren bir tampon içinde 30-50 dakika boyunca 100 V sabit voltajda gerçekleştirilir.
Elektrotransfer süresi, transfer edilen proteinlerin boyutuna bağlıdır, protein ne kadar büyükse, elektrotransfer o kadar uzun sürer. Elektrotransportun kalitesi ve protein bantlarının düzenlenmesi, nitroselüloz membranın %1 asetik asit içinde %0.3 Ponceau S ile boyanmasıyla değerlendirildi. İmmün boyamadan önce, proteine bağlı boyayı uzaklaştırmak için membran hafif alkali sulu Tris solüsyonu ile birkaç kez yıkanmalıdır.
III. Bir nitroselüloz zar üzerinde immobilize edilmiş proteinlerin immünokimyasal boyanması
Spesifik olmayan antikor bağlanma bölgelerini bloke etmek için, membran oda sıcaklığında 30 dakika boyunca sürekli karıştırılarak PBST içinde inkübe edilir (daha iyi bloke etmek için %10 yağsız süt tozu içeren bir PBST solüsyonu kullanılabilir).
Bloklamadan sonra zar, 1-10 ug/ml spesifik antikorlar içeren PBST içinde sürekli karıştırılarak oda sıcaklığında bir saat süreyle inkübe edilir.
Optimal antikor konsantrasyonu ampirik olarak seçilir ve antikorların antijen ile etkileşiminin afinitesine bağlıdır.
İnkübasyonun sonunda zar, 5 kez PBST ile yıkandı ve yaban turpu peroksidaz ile konjüge edilmiş ikincil antikorların bir çözeltisine aktarıldı. Konjugatın seyreltilmesi genellikle üretici tarafından ambalaj üzerinde belirtilir veya araştırmacı tarafından ampirik olarak seçilir. Membranı, sürekli karıştırarak 1 saat boyunca bir ikincil antikor çözeltisi içinde inkübe edin.
İyice yıkandıktan sonra (en az 5-6 tampon değişikliği), PBST membranı, 10 ml 0,1 M Tris-HCl, pH 7,6 içinde 3 mg diaminobenzidin (DAB) ve 10 ul %30 hidrojen peroksit içeren kromojenik bir substrat çözeltisine aktarılır. .
İnkübasyon 5 ila 10 dakika karıştırılarak gerçekleştirilir. Substrat ile inkübasyonun sona ermesinden sonra, membran PBST ile yıkanmalı, filtre kağıdı ile lekelenerek kurutulmalı ve hemen renkli tarama ile elektronik bir kopya yapılmalıdır. Zar tamamen kurursa, boyalı protein şeritleri solar ve görüntü daha az parlak ve kontrastlı olur.
Not: DAB toksiktir ve potansiyel bir kanserojendir. Sadece lastik eldivenlerle çalışın!