PCR-analyse hos katte. Analyse for opisthorchiasis: generelt, ifa, afføring, hvor og hvordan man tager, afkodning af resultaterne

Coronavirus-infektioner hos katte og hunde er forårsaget af repræsentanter for slægten Coronavirus (familien Coronaviridae). Den vigtigste manifestation af coronavirusinfektion hos hunde er diarré. Hos katte forårsager coronavirus enteritis og infektiøs peritonitis, som er udbredt blandt vilde og tamkatte.

Det forårsagende middel til coronavirusinfektion hos hunde er Canine coronavirus, som forårsager akut coronavirus enteritis. Sygdommen overføres ved direkte kontakt med bæreren af ​​virussen (gennem spyt og afføring). Hunde i alle aldre er modtagelige for denne infektion, men hvalpe og svækkede dyr, der allerede har lidt en anden sygdom, såsom parvovirusinfektion, er oftest ramt.

De vigtigste symptomer på sygdommen er opkastning og diarré, nogle gange med en blanding af blod, dehydrering, vægttab, apati. 3-4 uger efter bedring kan der udvikles et tilbagefald af sygdommen. Ved diagnosticering af coronavirus enteritis hos hunde er det nødvendigt at skelne det fra parvovirus enteritis, adenovirusinfektion af tarmtypen og hundesyge.

Coronaviruss, der påvirker katte, er repræsenteret af to biotyper: FECV eller felin enteritis coronavirus og FIPV, felin infektiøs peritonitisvirus (2, 3). FECV-bærere er 16-50 % af huskatte, hvor virus er lokaliseret i tyndtarmen, uden at forårsage sygdom eller forårsage mild diarré. Samtidig kan der hos 5-12 % af bærerne observeres en mutation af den opportunistiske tarmform af FECV til patogen (FIPV), hvilket fører til udviklingen af ​​sygdommen (2).

Infektiøs peritonitis (IP, FIP) hos katte, der slutter, som regel, er dødelig, forekommer i to former - våd og tør. Den våde (ekssudative) form af PV er karakteriseret ved beskadigelse af blodkarrene i bug- eller thoraxhulerne, ledsaget af plasmasved ind i disse hulrum (fig. 1). Hos syge dyr udvikles ascites (fig. 2), og ved væskeophobning er åndedrætsfunktionen nedsat. Fibrinøse overlejringer dannes på de serøse integumenter af abdominale organer (fig. 3), senere adhæsioner kan dannes. På grund af nedsat leverfunktion observeres ekteri af sclera og hud.

Den tørre (ikke-ekssudative) form for IP fortsætter uden ophobning af væske i mave- og brysthulerne. I dette tilfælde lider de indre organer - hjernen (fig. 4), lever, nyrer, bugspytkirtel, i 25% af tilfældene observeres øjenlæsioner (fig. 5) (5).

Da et effektivt behandlingsregime for PV endnu ikke er udviklet, er forebyggende foranstaltninger rettet mod tidlig påvisning af virusbærere af afgørende betydning (1, 3).

Diagnosen af ​​infektiøs peritonitis hos katte er også en stor udfordring. Traditionelle metoder til påvisning af et patogen baseret på påvisning af antistoffer mod coronavirus (RNGA og ELISA) giver op til 60 % falske positive resultater. Dette skyldes tilstedeværelsen af ​​opportunistiske patogenstammer i tarmene hos katte (2, 3). I en række udenlandske laboratorier anvendes en kompleks metode til diagnosticering af PV, herunder definitionen af:
- titer af antistoffer mod coronavirus;
- albumin/globulin-forhold i transudat eller blodplasma;
- niveau af a-1 surt glycoprotein (AGP);
- cytologiske og hæmatologiske parametre (4).

Materialer og metoder
Fortyndinger af Bagheera-coronavirus-stammen (5 1og TCID50/ml), 8 feline coronavirus (FCoV) isolater, 2 canine coronavirus (CCV) isolater og suspensioner af feline panleukopenia virus og feline calicivirus blev brugt i undersøgelsen.
Ved testning af PCR-testsystemet brugte vi biologisk materiale fra raske katte, dyr med kliniske tegn på PV og katte med uspecifikke symptomer. Blandt de undersøgte dyr var både dem, der blev holdt i gartnerier og dem, der blev holdt individuelt.
Biologisk materiale blev samtidigt undersøgt ved PCR- og RIGA-metoder. Afføring, blodplasma, transudat i specifik ascites blev undersøgt ved hjælp af PCR-systemet, og blodserum og transudat blev undersøgt ved hjælp af RIGA-metoden.

Serologiske test blev udført ved hjælp af et kit til påvisning af antistoffer mod kødædende coronavirus i RIGA (TU 9388-025-00494189-01). Det biologiske materiale fra hunde blev undersøgt ved PCR.

Denne undersøgelse kræver dog en betydelig investering af tid og penge. I denne henseende kan polymerasekædereaktion (PCR) tjene som en effektiv metode til diagnosticering af PV, som gør det muligt ikke kun at detektere katte-coronavirus, men også at differentiere opportunistiske og patogene stammer baseret på deres forskellige lokalisering i kroppen. I dette tilfælde indikerer påvisningen af ​​virus i afføringen fra katte transport af opportunistiske stammer (FECV) og i blodplasmaet eller ascitesvæsken - cirkulationen af ​​patogene stammer (FIPV) i dyrets krop og derfor , sygdommen.

Formålet med denne undersøgelse er at teste et testsystem til diagnosticering af coronavirusinfektion hos katte og hunde baseret på PCR.

RNA-isolering blev udført ved hjælp af RNA-sorb-kittet (TsNIIE), som er baseret på metoden til dets sorption på silicagel. PCR blev udført på en TERTSIK-forstærker ("DNA-teknologi") i henhold til standardmetoden. De opnåede PCR-produkter blev visualiseret ved elektroforese i 1,5% agarosegel indeholdende ethidiumbromid.

Resultater og diskussion
I løbet af undersøgelsen blev der foretaget en analyse af information om nukleotidsekvenserne for repræsentanter for Coronaviridae-familien, især forskellige isolater af katte- og hunde-coronavirus offentliggjort i Entrez-, GeneBank-, EMBL- og DDBJ-databaserne. Derudover blev litteraturen, der karakteriserer strukturen af ​​FCoV- og CCV-genomerne og deres genetiske forhold til andre medlemmer af familien, undersøgt.

To konserverede sekvenser i nukleocapsidproteingenet blev valgt som mål for specifikke primere. Specificiteten af ​​de foreslåede primere blev undersøgt under anvendelse af FASTA- og BLASTA-computerprogrammerne. Som et resultat af arbejdet blev homologien af ​​de udvalgte oligonukleotider kun med FCoV- og CCV-nukleocapsidproteingenerne afsløret, og deres signifikante homologi med nukleotidsekvenserne af andre arter af Coronaviridae-familien såvel som andre vira, bakterier, eller eukaryoter, blev ikke fundet. Således bør de foreslåede primere, baseret på teoretiske beregninger, have 100% specificitet.

På næste fase af undersøgelsen blev betingelserne for isolering af virus-RNA'et og udførelse af revers transkriptionsreaktion og PCR optimeret, og specificiteten og sensitiviteten af ​​PCR-analysen blev bestemt. Størrelsen af ​​PCR-produktet var 350 basepar. Metoden viste 100 % specificitet og høj sensitivitet. Påvisningen af ​​coronavirus i afføringen fra katte indikerede transporten af ​​dens opportunistiske stammer i tarmene, påvisningen af ​​FECV i transudat og blodplasma indikerede udviklingen af ​​sygdommen.

I undersøgelsen ved RNGA-metoden var et positivt resultat påvisningen af ​​en antistoftiter > 1:128 i et dyr. Dette kunne dog indikere både virusbæreren og den manifesterede form af infektionen. Derudover kan en positiv titer skyldes tidligere kontakt med coronavirus. Afføring blev undersøgt som materiale fra hunde, og påvisningen af ​​coronavirus RNA i dem indikerede en sygdom forårsaget af CCV.

Under forsøget blev biologisk materiale taget fra 193 katte undersøgt (tabel). Et positivt resultat blev registreret ved RNGA-metoden i 131 dyr (antistoftitre > 1:128). Ved testning af "seropositive" katte ved PCR, blev der påvist coronavirus-RNA i plasma og ascitesvæske hos 12 dyr (9%), kun i fæces - hos 68 (52%) og hos 51 (39%) - slet ikke fundet. Således var 52 % af kattene med et seropositivt resultat bærere af opportunistiske stammer af coronavirus, og 39 % var raske. Det er klart, at undersøgelsen med RNGA-metoden gav 63% af falske positive resultater (i form af det samlede antal undersøgte dyr).

Konklusion
De opnåede resultater indikerer, at diagnosen af ​​coronavirusinfektion hos katte ved den traditionelle serologiske metode (RNGA) giver mere end 60 % af falske positive resultater, da det ikke tillader at differentiere bærertilstanden fra den sande sygdom. Derudover blev dyr, der havde tidligere kontakt med coronavirus, betragtet som "seropositive".

Brugen af ​​PCR-metoden gjorde det muligt at differentiere opportunistiske og patogene stammer på grund af deres forskellige lokalisering i kroppen og at skelne transporttilstanden fra sygdommen. Data fra undersøgelsen indikerer således, at det er tilrådeligt at bruge PCR-metoden til at påvise coronavirus hos katte og hunde og stille en endelig diagnose.

I overensstemmelse med bekendtgørelse nr. 45 fra Institut for Veterinærmedicin i Den Russiske Føderations Landbrugsministerium, i perioden fra 08/03/2004 til 08/06/2004 kommissionsprøver af testsystemet til diagnosticering af infektiøs peritonitis af katte ved PCR blev udført. Testsystemet har bestået kommissionstest, viser 100 % specificitet og høj sensitivitet inden for det foreslåede panel. I øjeblikket anvendes Coronavir-testsystemet til påvisning og identifikation af coronavirus hos katte og hunde, baseret på PCR, med succes i veterinærpraksis (TU 9388-142-00494189-05; RU nr. Р077-1-3.5-0813 registreret i den russiske føderation for nr. PVR-1-3.5/01556 dateret 30. juni 2006 i en periode på 5 år).

LITTERATUR
1, Addie, D, D' Jarrett, 0. Anvendelse af en revers-transkriptase-polymerase-kædereaktion til overvågning af udskillelsen af ​​felin coronavirus af raske katte, dyrlæge. Rec, 2001, 26. maj; 148(21): 649-53,
2, Vennema, H, atal. Feline Infectious Peritonitis Viruses opstår ved mutation fra endemiske Feline Enteric Coronaviruses, Virology, 1998:150-157.
3, Herrewegh, A.A., Mahler, M „Hedrich, H.J., Haagmans, B.L. Egberink, H.F., Horzinek, M.C., Rottier, P.J., de Groot, R,J, Persistence and evolution of feline coronavirus in a closed cat-breeding colony Virology 1997, 4. august; 234(2): 349-363,
4, sammenligning af forskellige tests til diagnosticering af infektiøs peritonitis hos katte; Katrin Hartmann et al 2003.
5, infektiøs peritonitis hos katte; Stacy E, Andrew, Veterinærklinikker i Nordamerika: lille dyr; vol. 30, nummer 5, september 2000

E.A. YARALOVA, I.L. Obukhov, MM Rakhmanin, E.I. Elizbarashvili, V.I. Ulasov,
All-russisk statscenter for kvalitet og standardisering af lægemidler til dyr og foder, Moskva

PCR er en polymerasekædereaktion baseret på princippet om at kopiere en specifik sektion af en DNA-streng. På grund af den gentagne stigning i volumen af ​​DNA-materialet bliver det muligt at påvise de ønskede bakterier i mikroskopet. Fordelen ved PCR er:

• høj følsomhed;
• høj specificitet;
• påvisning af akutte og latente infektioner;
• evnen til at identificere enhver af de aktuelt kendte patogener.

PCR i veterinærmedicin

I øjeblikket har PCR-diagnosemetoden fundet bred anvendelse i veterinærmedicin. Denne undersøgelsesmetode giver dig mulighed for at få et pålideligt svar på kort tid. Derudover kræver det en meget lille mængde biologisk materiale i modsætning til for eksempel en generel blodprøve, hvilket i høj grad forenkler dyrlægernes arbejde. Både hos mennesker og hos dyr kan materialet til PCR være:

• blod og dets komponenter;
• urin;
• mavebiopsi;
• spyt;
• afskrabninger af epitelceller.

PCR-diagnostik til katte

Under undersøgelsen af ​​en kat af en dyrlæge, for at bekræfte eller afkræfte den påståede diagnose, kan det være nødvendigt at lave en PCR-test på katten. Årsagen til udnævnelsen af ​​en sådan undersøgelse kan være den mest almindelige og samtidig svære at diagnosticere sygdomme, såsom peritonitis, rhinotracheitis, coronavirus, toxoplasmose osv.

En særlig alvorlig sygdom, hvor PCR-metoden er påkrævet, er viral immundefekt hos katte. Denne virus påvirker ikke kun immunsystemet, men også dyrets nervesystem. Kattens krop bliver svækket og forsvarsløs mod bakterier og vira, hvorved dyret dør af sekundære infektioner. Og for at udelukke tilstedeværelsen af ​​denne virus anbefaler dyrlægen at udføre en polymerasekædereaktion på katten.

Denne metode har ud over de mange forskellige fordele en række ulemper. Alle apparater til PCR-diagnostik er meget følsomme, og derfor kan den mindste forurening give et falsk positivt svar. De høje omkostninger til udstyr og reagenser anses heller ikke for at være ligegyldige, så ikke alle veterinærklinikker i Moskva kan købe det. Imidlertid bliver diagnosen af ​​sygdomme uden denne metode mere og mere vanskelig, derfor kan PCR-analyse hos katte i Moskva udføres i vores klinik ved at kontakte kontaktnumrene eller ved at efterlade en anmodning på hjemmesiden.

Veterinærterapeut, ITC MBA

I den moderne verden foretrækker så mange mennesker katte for deres større uafhængighed af mennesker, i modsætning til hunde, som skal have tid; tilpasning til en ensom livsstil, ynde og evnen til at varme sin ejer på kolde vinterdage. En kærlig og omsorgsfuld ejer forsøger at beskytte sit kæledyr mod problemer i form af forskellige sygdomme, som katte lider af.

Denne pleje er manifesteret i ernæring af høj kvalitet og rettidig forebyggelse af virussygdomme. Desværre er der en række arter af uhelbredelige virusinfektioner, som katte er modtagelige for. I mangel af symptomer på sygdommen og specifik diagnose er det muligt at leve med et dyr i lang tid uden at have mistanke om tilstedeværelsen af ​​en kronisk virusinfektion (i det følgende benævnt CVI) hos et kæledyr. I denne artikel vil jeg gerne afsløre i detaljer faren ved HVI, prøv at undgå dette problem, når du anskaffer den ønskede killing.

Så hvad er kroniske virusinfektioner, og hvilken fare medfører de for vores kæledyr. CVI er en virussygdom med en lang inkubationstid, der kan vare fra flere uger til flere år. Infektion kan ske både in utero og ved kontakt af raske katte med syge dyr, såvel som bærere.

Coronavirusser - det er RNA - indeholdende vira . Disse vira fik dette navn på grund af ligheden mellem de kølleformede processer med corona spinarum. Årsagen til infektionen er en virus af Coronaviride-familien. Der er 2 patogene stammer - de nærmeste slægtninge til den samme mikroorganisme. Den ene forårsager bughindebetændelse, den anden enteritis.

Coronavirus er opdelt i 3 former:

Asymptomatisk form - dyret kan være bærer af virus og er i stand til at inficere andre katte, mens livet ikke er i fare.

En mild form, det er ikke farligt og kan forårsage ganske milde lidelser - enteritis (feline intestinale coronavirus - FECV).

Den højpatogene form er Feline Infectious Peritonitis Virus (FIPV). I kroppen sker der destruktive ændringer i alle systemer og organer, som fører til døden.

Coronavirus enteritis (FECV) er relativt sikker og forekommer hos dyr i en ung alder, symptomerne er baseret på løs afføring, som sjældent fører til døden; Men felin viral peritonitis er ekstremt farlig, fordi den har en høj dødelighed. FIPV og FECV er ret indbyrdes forbundne, disse mikroorganismer anses for at være en enkelt population af vira, men med varierende grader af patogene ændringer. Undersøgelser har vist, at coronavirus enteritis i processen med mutation bliver til viral peritonitis.

Overførsel af infektion er oronasal, dvs. infektion sker gennem luftvejene af luftbårne dråber, gennem afføring, fodring af killinger, under parring. Hos katte, der lever alene, er denne sygdom mindre almindelig, en større procentdel af denne sygdom forekommer hos udstillingskatte, såvel som hos katte, der lever i store grupper.

Symptomer

Der er 2 former for VIPK:

1. Exsudativ (med "effusion")

"Våd" peritonitis er ledsaget af et tydeligt tegn på tilstedeværelsen af ​​væske i brystet eller bughulen. Væsken har hovedsageligt en lys gul nuance, der er en vis duktilitet.

Med ophobning af biologisk væske i brysthulen oplever dyret åndedrætssvigt som følge af effusion, mens katten indtager en forceret stilling. Vejrtrækningen er oftere af bryst-mave-typen.

Med ophobning af væske i bughulen er ejerne ofte opmærksomme på kæledyrets forstørrede mave.

Du kan også opleve:

• feber (ikke altid);
• vægttab;
• generel svaghed, undertrykkelse;
• forstørrede lymfeknuder;
• nedsat eller tab af appetit.

2. Ikke-ekssudativ ("tør")

I denne form er symptomerne ofte milde. Denne form er svær at diagnosticere. Dens karakteristiske tegn er vægttab og manglende appetit.

Diagnostik. Det sker på en kompleks måde. Til at begynde med tages kliniske og biokemiske blodprøver fra dyret; udføre en ultralyd af bughulen; serologiske forskningsmetoder (ELISA - bestemmelse af mængden af ​​antistoffer mod en given sygdom; eller IHA - eksprestest), undersøger også effusionsvæsken.

Vejrudsigt. Ugunstig. Nogle gange, med den ekssudative form af VIP, efter fjernelse af væsken og symptomatisk behandling, udvikler en "tør" form af sygdommen. Katte med "tør" FIP kan leve op til et år.

Behandling. Desværre er der ingen behandling for denne sygdom, kun symptomatisk terapi udføres, rettet mod at forbedre kæledyrets livskvalitet.

Forebyggelse. Sigter på at reducere antallet af katte i ét rum (maksimalt 6-10 katte). Renlighed og rettidig desinfektion af brugte bakker og deres tilstrækkelige mængde, hyppig udskiftning af fyldstof.

Dette er en kronisk virussygdom karakteriseret ved en svækkelse af immunsystemet, udvikling af anæmi, lymfosarkom. Unge dyr er meget modtagelige for denne infektion. FLC er diagnosticeret i alle lande i verden, sygdommen rammer katte i forskellige aldersgrupper og racer.

måder smitte. Fækal-oral (spyt, afføring, udflåd fra næsehulen), gennem mælken fra inficerede katte, bid, i kontakt med et sygt dyr fra kat til kat, loppeoverførsel er mulig, såvel som hvis aseptiske og antiseptiske regler ikke er fulgt under injektioner, blodprøvetagning.

Patogenese. VLC skyldes genetisk disposition såvel som immunologisk mangel hos dyr. Hos syge katte med en antistoftiter på 1:32 er der muligvis ikke et klinisk billede af sygdommen, men sådanne dyr klassificeres som virusbærere. Antistoffer kan muligvis ikke påvises hos klinisk syge katte. VLK hæmmer aktiviteten af ​​den røde knoglemarv, hvilket fører til anæmi, reducerer immuniteten og bidrager til udviklingen af ​​andre sygdomme.

Klinisk billede Der er tre former for sygdommen:

1. Stabil eller vedvarende. Et sådant dyrs immunitet er stærkt svækket, sygdommen skrider ret hurtigt frem, og behandlingen er oftest ineffektiv.
2. Skjult eller latent. Dyret har en kredsløbsforstyrrelse. Virussen trænger ind i lymfesystemet og rød knoglemarv. Dyret begynder at blive syg oftere, tumorer vises.
3. overgangs- eller forbigående. Takket være stærk immunitet kommer dyret sig 3 måneder efter infektion.

Oftest har sådanne dyr alvorlig anæmi, immunsuppression (disposition for andre infektioner eller dets tilstedeværelse), lymfosarkom - flere eller atypiske. Inkubationsperioden er 60-80 dage, nogle gange fra 2 til 6 år. VLC fortsætter i en latent form uden manifestation af kliniske symptomer på infektion og manifesterer sig muligvis ikke i lang tid. Under påvirkning af negative faktorer (ændrede fodringsforhold, hypotermi, stress) aktiveres virussen, og sygdommen udvikler sig. Allerede i begyndelsen kan ændringer i blodet noteres (leukocytose, lymfocytose, udseendet af atypiske blodceller); bleghed / ikterus i slimhinder, hævede lymfeknuder, vægttab, appetitløshed, fordøjelsesbesvær.

Diagnostik

Opstår på baggrund af kliniske, hæmatologiske, serologiske og virologiske undersøgelser. De vigtigste diagnostiske metoder omfatter:

• Enzymimmunoassay (ELISA), immunokromatografisk analyse (IHA). Ofte er der falske negative resultater.
• Klinisk blodprøve.
• Biokemi af blod.
• Abdominal ultralyd.
• Biopsi og histologi.

Behandling. Der er ingen kur. Det er rettet mod at give symptomatisk terapi og forbedre dyrets livskvalitet. For eksempel ved svær anæmi ordineres en blodtransfusion samt brug af lægemidler, der stimulerer produktionen af ​​røde blodlegemer i den røde knoglemarv. Lægemidler, der stimulerer immunsystemet, ordineres. Hvis der påvises lymfomer, ordineres kemoterapi.

Forebyggelse. Virussen er meget ustabil i det ydre miljø; uden for en levende organisme dør den efter to dage. For at ødelægge denne virus er det nok at desinficere rum og dyreplejeartikler, skåle osv. godt. At holde et kæledyr rent, nærende foder og begrænse kontakten med hjemløse dyr er nøglen til et kæledyrs sundhed.

Denne sygdom er kun farlig for katte, for mennesker og andre dyrearter, den udgør ingen risiko.

Den vigtigste metode til at forhindre denne sygdom er vaccination. Til sådanne formål anvendes Purevax FeLV-vaccinen og Leukocel. Vaccination udføres fra ni ugers alderen. Immunisering udføres to gange med et interval på 21 dage. Desuden bør katte vaccineres en gang om året.

Viral immundefekt (VIV, FIV)

En infektionssygdom hos katte, karakteriseret ved et kronisk forløb, ledsaget af skader på immunsystemet, høj dødelighed.

Denne sygdom er blevet endemisk hos katte over hele verden.

Virussen forbliver ved stuetemperatur i omkring 4 dage. Ved opvarmning til 60 grader dør virussen inden for en halv time, mens den koger dør den. Ved behandling med alkoholholdige præparater inaktiveres virussen efter 5-10 minutter. VIC er tilstrækkelig modstandsdygtig over for ultraviolet stråling.

VIC er mere almindelig hos herreløse katte, dyrenes omtrentlige alder er 5-10 år.

måder smitte. Den vigtigste måde er bid af syge dyr, ikke-afstammede katte er mere tilbøjelige til at blive smittet; smitten er også almindelig blandt dyr, der har fri adgang til gaden. Infektion er mulig ved gensidig slikning. Virussen findes i spyt, blod og andre væsker.

klinisk billede. Kliniske tegn er ret uspecifikke og ret forskellige. De afspejler samtidige infektioner, der udvikler sig på baggrund af et fald i immunsystemet. Dyr har:

• Svaghed;
• Mistet appetiten;
• Gingivitis;
• kronisk diarré;
• vægttab osv.

På grund af, at dyrets immunsystem svigter, kan forskellige infektioner slutte sig til FIV: calcivirose, klamydia, viral leukæmi osv., som forværrer almentilstanden.

Katte med FIV har øget risiko for at udvikle lymfom, og kliniske tegn kan ligne dem ved FLC.

Diagnostik. Der anvendes kliniske laboratorietests: blod OKA (neutropeni, lymfopeni, anæmi, monocytose kan observeres). En biokemisk blodprøve afslører en stor mængde protein, øget aktivitet af leverenzymer, azotæmi, hyperglykæmi.

Der er flere specifikke undersøgelser af denne sygdom:

Metode til enzymimmunoassay (ELISA); IHA.

Virusset kan påvises ved PCR, hvis serologiske test er negative.

Behandling. Der er i øjeblikket ingen specifik behandling.

Zidovudinbehandling har vist sig at forbedre klinisk og immunfunktion hos mange katte. Disse lægemidler er dyre og kan forårsage betydelige bivirkninger såsom anæmi. Der anvendes også immunmodulatorer, som har en gavnlig effekt på kroppen.

Klinisk usunde og immunkompromitterede katte bør ikke vaccineres.

Forebyggelse. Der er ingen vacciner. Minimer kontakt med katte uden for hjemmet. Overholdelse af kosten, holde dyrene rene, desinfektion af plejeartikler og rettidig udskiftning af fyldstoffet i bakkerne. Med udseendet af nye dyr - obligatorisk karantæne og lægeundersøgelse af et nyt kæledyr.

Elsk dine kæledyr!

Bibliografi:

• Gaskell, Bennett: Håndbog om infektionssygdomme hos hunde og katte, akvarietryk, 2015
• Forskellige kilder fra internettet

Til at begynde med vil jeg gerne tage stilling til, hvad meningen med polymerasekædereaktionsmetoden (PCR) er fra et praktisk synspunkt, set fra en dyrlæges synspunkt. Hvad præcist skal en læge, der ordinerer en analyse ved PCR, forstå?Jeg vil ikke komme ind på nogen rent faglige detaljer om de molekylære mekanismer, der er involveret i PCR. Jeg vil blot have dyrlægen til klart at forstå, at PCR-metoden er direkte, og når man udfører en sådan undersøgelse, antages det, at det er muligt at isolere nukleinsyren (DNA eller RNA) af det påståede patogen fra det kliniske materiale, der sendes til laboratorium. Dette er hovedpostulatet. Men på trods af dette postulat støder jeg meget ofte på en mening, som jeg vil kalde Myte 1 , at ethvert patogen af ​​enhver sygdom kan påvises ved PCR i blodet. Strengt taget optræder blod i dette tilfælde som en slags kollektivt billede af et universelt forskningsmateriale. Ofte vil de have os til at arbejde "med alt og for alt." Dette er ikke muligt, desværre. Hvordan bestemmes hvilket patogen der kan findes ved hjælp af PCR, og hvilket patogen der ikke kan? Når lægen skal udvælge materiale til PCR-forskning, skal lægen først og fremmest forestille sig patogenesen af ​​den eller de sygdomme, hvis patogener han ønsker at opdage. Hvis intravital prøvetagning af det nødvendige materiale fra dyret er umuligt, bør du ikke ordinere en sådan diagnose. I øjeblikket er der mange tilgængelige diagnostiske metoder i arsenalet af laboratorier, for eksempel enzymimmunoassay-metoden. Denne metode giver dig mulighed for at bestemme tilstedeværelsen af ​​antistoffer mod patogenet, deres antal og i henhold til visse kriterier med høj grad af sikkerhed - sygdommens status. For større klarhed kan specifikke eksempler overvejes. Endnu en gang, lad os fokusere på den feline coronavirus og specifikt på infektiøs peritonitis. I det øjeblik, hvor viruset muteres i tarmene på en kat, erhverver det en affinitet til monocytter. Ved at inficere en monocyt kommer virussen ind i kattens blodbane, det er en indiskutabel kendsgerning, men monocytten er i blodbanen i meget kort tid, normalt omkring 3 dage, og derefter skal den undergå sin endelige differentiering til en vævsmakrofag. Derfor forlader monocytten sammen med coronavirus blodbanen gennem karvæggene ind i vævene, hvor den bliver til en makrofag. Der er tegn på, at coronavirus også stimulerer accelereret monocytdifferentiering. Det følger heraf, at coronavirus utvivlsomt er i dyrets perifere blod i meget kort tid, og det kan selvfølgelig påvises der, men det er et meget sjældent fund, og den diagnostiske betydning af en blodprøve for tilstedeværelsen af ​​coronavirus ved PCR er nul, da et negativt resultat af en sådan undersøgelse desværre ikke udelukker tilstedeværelsen af ​​en coronavirusinfektion. Også nogle gange har lægen et ønske om at finde parvovirus fra hunde og katte i blodet ved PCR. Jeg kan antage, at et sådant ønske er baseret på leukopeni, observeret i panleukopeni eller parvovirus enteritis. Sandsynligvis tror nogen, at denne leukopeni er resultatet af ødelæggelsen af ​​leukocytter af virussen direkte i blodbanen. Lad os tænke logisk: parvovirus er en DNA-holdig virus, og for vellykket reproduktion og spredning skal en DNA-holdig virus integreres i værtens genom, desuden i aktivt delende celler, ellers hvordan vil virussen formere sig? Alle ved, at leukocytter normalt ikke deler sig i blodet. Og deres forgængere er delt i knoglemarven. Parvovirus inficerer knoglemarven, og leukopeni skyldes ødelæggelsen af ​​stamceller i knoglemarven. Også aktivt delende celler er tarmvillusceller, hvor parvovirus med succes replikerer, og det bedste materiale til forskning i parvovirusinfektion er dyreekskrementer, hvorigennem virussen spredes i det ydre miljø. Generelt bruger coronavirus og parvovirus kun blodet som relativt set et transportmedium for at nå den endelige lokalisering og forlade blodbanen ret hurtigt. Der er vira, der slet ikke kommer ind i blodbanen. Eksempler inkluderer calicivirus og felin herpesvirus. Replikation af disse vira er oftest begrænset til det lymfoide væv i oropharynx og nasopharynx. Calicivirusinfektion kan forekomme systemisk, men disse er ret sjældne og alvorlige tilfælde.

Da vi taler om virusinfektioner, vil jeg gerne bemærke, at PCR-metoden er meget nøjagtig og meget specifik, men denne specificitet og labilitet af genomet af vira, især RNA-holdige, kan i virkeligheden føre til, at en specifikt testsystem til forskning ved hjælp af PCR kan kun påvise en bestemt stamme eller flere stammer af en bestemt virus. Som et eksempel kan du igen overveje katte-calicivirus, som har et stort antal meget forskellige stammer, såvel som nye isolater, der konstant opdages. Derfor giver PCR-diagnostik af calicivirus desværre mange falske negative resultater.

Myte 2

Den prioriterede betydning af kvantitativ PCR sammenlignet med ikke-kvantitativ

Myte 3

Betydningen af ​​resultatet opnået i det "menneskelige" laboratorium

Myte 4

Kommercielle laboratorier arbejder ikke med RNA

Myte 5

PCR kan og bør være billig

Myte 6

Laboratoriet skal stille en diagnose

Myte 7

Hvis ingen af ​​differentialdiagnoserne blev bekræftet ved PCR, så er laboratoriet dårligt

Afslutningsvis vil jeg gerne skrive, at jeg desværre ofte får indtryk af en form for konfrontation mellem læger og laboratorier, i hvert fald i Rusland. Læger stoler ikke på laboratorier, laboratorier mener, at læger er inkompetente, og så videre. Det forekommer mig, at der ikke bør være en sådan konfrontation: Laboratoriet skal altid hjælpe lægen, og for dette bør lægen dele fuldstændig information med sine ansatte. Jeg kan med sikkerhed sige, at vores laboratorium forsøger at hjælpe med at løse ethvert problem, der er opstået, og vi er altid klar til at diskutere eventuelle uklare punkter og misforståelser, der er opstået.

Polymerasekædereaktion (PCR) er en metode til molekylær diagnostik, der er blevet "guldstandarden" for mange infektioner, tidstestet og grundigt testet klinisk. Metodens høje sensitivitet og specificitet gør det muligt pålideligt at påvise enkelte patogener i biologisk materiale baseret på deres genetiske information. Den analytiske følsomhed af PCR for de fleste vira og bakterier er 1000 mikroorganismer pr. 1 ml prøve. Specificiteten af ​​PCR for virale, klamydiale, mycoplasmale og de fleste andre bakterielle infektioner når 100%.

PCR-metoden er udviklet relativt nylig, men har nu formået at indtage en førende position inden for både medicinsk og veterinær laboratoriediagnostik af infektions- og parasitsygdomme. De grundlæggende principper for PCR blev opdaget i 1983 af den amerikanske kemiker Cary B. Mullis, som han blev tildelt Nobelprisen for.

PCR-analyse består af flere faser. Det første trin - prøveforberedelse - består i behandlingen af ​​testmaterialet (fremstilling af en suspension, centrifugering). På andet trin isoleres arvematerialet - DNA eller RNA - fra cellerne. I dette tilfælde, efter cellelyse og ødelæggelsen af ​​DNA-proteinkomplekset, aflejres DNA eller RNA på sorbenten, efterfulgt af deres overførsel til elueringsbufferen. På det tredje trin udføres amplifikation, det vil sige multiplikationen af ​​antallet af specifikke DNA-sektioner. Til dette bruges testsystemer, som omfatter primere - oligonukleotider, som er specifikke for hvert patogen. Prøver og kontroller tilsættes til PCR-blandingen hældt i mikrorør, som placeres i en forstærker eller termisk cykler - en programmerbar termostat med høj hastighed og nøjagtighed af den indstillede temperatur. Amplifikationsprocessen omfatter tre trin: denaturering, annealing og forlængelse. Når RNA-vira påvises i kliniske prøver, indledes amplifikationen af ​​et revers transkriptionstrin, hvor RNA omdannes til DNA ved hjælp af enzymet revers transkriptase eller reversetase. Den fjerde fase af PCR-diagnostik er den elektroforetiske påvisning af PCR-produkter - amplikoner. I dette tilfælde placeres PCR-produkterne i brøndene i en agarosegel og udsættes for en konstant elektrisk strøm, som et resultat af hvilket et negativt ladet DNA-molekyle bevæger sig til den positive elektrode. Gelen indeholder ethidiumbromid, som ved at danne et stabilt kompleks med DNA gør disse bånd tydeligt synlige, når de ses under ultraviolet bestråling (fig. 1).

Ris. 1. PCR-trin

Det skal bemærkes, at for at opnå et pålideligt resultat af PCR-analyse er en nødvendig betingelse overholdelse af reglerne for udvælgelse, opbevaring og transport af klinisk materiale. Selvom PCR er en meget følsom metode, er det ønskeligt at have en vis mængde af patogenet i prøven.

Indhentning af materiale til PCR-forskning bør udføres i engangshandsker uden talkum (da talkum hæmmer PCR). Når du tager afskrabninger og vasker, skal der anvendes sterile engangsprober med øget adsorption (med en børste for enden), da de vælger den optimale mængde materiale.

Afskrabninger og skylninger fra slimhinderne i næsen, mundhulen, skeden, bindehinden tages de i engangsplastikmikrorør - eppendorfs - med et volumen på 1,5 ml, hvori 0,5 ml sterilt saltvand hældes. Det frarådes at bruge prober med bomuldsspidser. Det bør også undgås at afbryde spidsen af ​​sonden ind i saltvandsrøret, da dette gør yderligere behandling vanskelig og øger risikoen for prøvekrydskontaminering. For at opnå den nødvendige mængde materiale er det nok at rotere sonden i reagensglasset i 1-2 minutter for at undgå sprøjt af væsken. Prøven skal være uklar af udseende, og når den står, skal den danne et lille bundfald.

Blodprøvetagning udføres med en engangsnål i en engangssprøjte eller i et glasrør uden antikoagulant. Når det tages i en sprøjte, overføres blodet fra den forsigtigt (uden at skumme) til et engangsglasrør. Det er muligt at anvende vakuumsystemer ("Vacuette") til blodprøvetagning. Blodserum kan leveres til forskning: reagensglas med blod efterlades ved stuetemperatur i 30 minutter, indtil et koagel er fuldstændigt dannet, centrifugeres derefter ved 3 tusinde rpm i 10 minutter og overføres i en mængde på mindst 1 ml til sterile eppendorfer med et volumen på 1,5 ml.

sperm opsamlet i sterile engangsreagensglas eller hætteglas.

Urin. Den første portion morgenurin tages i en mængde på mindst 20-40 ml i et sterilt tørt hætteglas eller reagensglas.

Afføring. Prøver, der vejer 1-3 gram, tages fra en præ-desinficeret og vasket bakke, overføres med engangsspatel til et sterilt hætteglas.

Stykker af berørte organer fra døde dyr tages i sterile engangsbeholdere eller i rene glas- eller plastbeholdere.

Temperaturregimerne for opbevaring og transport af det valgte materiale skal overholdes nøje. Transporten udføres i en termisk beholder med køleelementer eller i en termokande med is. Ved opbevaring af materialet i mere end et døgn skal det fryses ved T minus 20°C.

De mest almindelige sygdomme hos katte og hunde er conjunctivitis, rhinotracheitis og enteritis. For at finde ud af sygdommens ætiologi er det nødvendigt at udføre laboratoriediagnostik af høj kvalitet.

Konjunktivitis eller øvre luftvejsinfektioner hos katte kan være forårsaget af infektion med følgende mikroorganismer: herpesvirus type 1 (FHV1), felin calicivirus, Chlamediapcittaci. Mycoplasma felis, Bordetella bronchiseptica, Feline reovirus, Staphylococcu aureus, Brohæmolytisk streptokokker og Salmonella tephimurium.

De mest almindelige årsager, ifølge forskellige forfattere og forskningsmetoder, er herpesvirus type FHY1 (fra 10% til 34%) og feline calicivirus (fra 20% til 53%). Chlamydia pcittaci (10% til 35%).

Herpes virus infektion forbundet med abort, høj neonatal dødelighed (infektion i næsten 60% af tilfældene) med tegn på interstitiel pneumoni.
Calicivirus - alvorlig hos killinger, på samme tid bliver 25-80% af syge voksne dyr bærere og er en kilde til infektion, der overfører virussen gennem spyt.

Panleukopeni- en smitsom virussygdom hos katte, karakteriseret ved et kraftigt fald i niveauet af leukocytter, gastroenteritis, rhinitis med conjunctivitis, høj dødelighed (30-90% af syge killinger).

Den virkelige plage for vuggestuer er katte infektiøs peritonitis- en alvorlig sygdom, hvis årsag er en RNA-holdig højpatogen virus. Virusset replikerer i mandlerne og enterocytterne i tyndtarmen og spredes i hele kroppen gennem makrofager og monocytter. Coronaviruss med lav virulens forårsager moderat enteritis, oftest hos killinger efter fravænning. Meget virulent coronavirus kan føre til udvikling af tør eller effusion peritonitis. Peritonitis er ofte ledsaget af nyresvigt, lever- og neurologiske symptomer.

Når man er smittet adenovira både typer og virus kødædende pest hunde viser et almindeligt sæt symptomer: feber, conjunctivitis og rhinotracheitis, mave-tarmbesvær og skader på nervesystemet.

På kødædende plage kliniske tegn kan omfatte seromukosalt udflåd fra næse og konjunktiv, hoste, dyspnø, lungebetændelse, opkastning og diarré samt feber og hyperkeratose.

Kødædende adenovirus. Det forårsagende middel er et DNA-holdigt kødædende adenovirus af den første type (forårsager infektiøs hepatitis hos kødædere) og den anden type (forårsager adenovirus hos hunde). Feber, apati, anoreksi, tørst, opkastning og diarré, ømhed i mavevæggen ved palpation observeres. Nogle gange udvikler konjunktivitis, keratitis, fotofobi. Der kan være skarpe blødninger på slimhinden og huden. Neurologiske lidelser observeres sjældent.

Alle disse sygdomme har et højt smitsomhedsindeks og er forbundet med høj dødelighed blandt hvalpe, 10-50% af syge hvalpe dør af parvovirus enteritis, når uvaccinerede hvalpe er inficeret med hundesygevirus, når dødeligheden 100%.

Toxoplasmose. Det forårsagende middel er protozoen Toxoplasma gondii. Reproduktion af patogenet forekommer hos katte på væggene i tarmen. Med afføring udskiller de oocyster i det ydre miljø.

Vævscyster kan forårsage anoreksi, depression, keratitis, gulsot, opkastning, diarré og neurologiske symptomer afhængigt af de berørte organer. Hos hunde afhænger kliniske symptomer af de berørte organer: neurologiske lidelser (tremor, ataksi, lammelse) eller toxoplasmatisk myositis (gangforstyrrelse, muskelatrofi, stivhed) kan observeres, såvel som myokarditis og hepatitis.

Klamydia og ornitose. Patogener hos katte - Chlamydophila filt, hos hunde - Chlamydophila abortus, Ch. pecorum, i begge tilfælde kan sygdommen være forårsaget af Ch. psittaci. Hos fugle - Ch. psittaci.
Hos katte viser sygdommen sig hovedsageligt i form af purulent og ikke-purulent conjunctivitis og keratitis, rhinitis, lungebetændelse, vaginitis, aborter og infertilitet kan også observeres. Neonatal klamydial konjunktivitis forekommer hos killinger. Hos hunde er symptomerne varierede og kommer til udtryk ved betændelsessygdomme i bindehinden, kønsorganer, gastritis, gigt, abort og infertilitet. Der er tegn på en rolle for klamydia i patogenesen af ​​åreforkalkning hos hunde.

Mycoplasmose. De forårsagende stoffer er mikroorganismer af slægten Mycoplasma. Det fortsætter med tegn på bronkopneumoni, keratoconjunctivitis og keratitis.

Viru søvnig immundefekt hos katte. Katteimmundefekt er en alvorlig sygdom forårsaget af en virus fra Retrovoridae-familien, slægten Lentivirus. Virussen angriber immun- og nervesystemet. Det har en tropisme for T-lymfocytter. Som følge af immunsuppression bliver kroppen forsvarsløs mod bakterier, svampe, vira og dør af en sekundær infektion.
Kliniske tegn udvikler sig langsomt, og sygdommen er mere almindelig hos katte i alderen 6-10 år.

Der er også sådanne sygdomme hos kæledyr som: leptospirose af hunde, listeriose af katte og hunde, yersiniosis af hvalpe, brucellose, rotovirus enteritis, rabies.

Rigtigheden af ​​PCR-analysen og den kvalitative isolering af infektionen afhænger først og fremmest af rigtigheden af ​​at tage materialet og for det andet af overholdelse af temperaturregimet for opbevaring og transport af prøver. Prøven modtaget af laboratoriet er registreret, gennemgår alle stadier af PCR, gennemgår elektroforetisk påvisning med den efterfølgende udstedelse af det endelige resultat.

PCR-metodens høje sensitivitet og specificitet gør det således muligt pålideligt at påvise enkelte patogener i biologisk materiale på kort tid, hvilket gør det muligt at stille en præcis diagnose, ordinere passende behandling og udvikle forebyggende foranstaltninger.

DEM. Donnik, korresponderende medlem af det russiske akademi for landbrugsvidenskaber, doktor i biologiske videnskaber, professor, N.A. Pelevin, juniorforsker, O.G. Bodrova, juniorforsker,
Statens videnskabelige institution Ural State Veterinary Research Institute af det russiske akademi for landbrugsvidenskaber