Имунолошки blotting во дијагнозата на ХИВ. Имуноблотинг (откривање на антитела во серумот на пациентите на одредени патогени антигени) Хибридизација на нуклеинска киселина

Ензимско-поврзана имуносорбентна анализа (ELISA)

Ензимско-поврзана имуносорбентна анализа (ELISA) се изведува во две фази: првата е интеракцијата на антителата со антигенот, втората е ензимската индикација на комплексот антиген-антитела поради појавата на боја во реакционата смеса и регистрирањето на бојата визуелно или со спектрофотометриски метод. .

Постојат две опции за ELISA: цврста фаза и течна фаза, кои се разликуваат во методот на одвојување на компонентите на имунохемиската реакција. Во споредба со претходно опишаните методи за откривање на антигени и антитела, ELISA има значителни предности:

висока чувствителност, овозможувајќи откривање до 0,05 ng/ml супстанција;

способност да се користат минимални количини на материјал за тестирање (1--2 µl);

можноста за инструментално или визуелно снимање на реакцијата;

експресност и способност за автоматизирање на сите фази на реакцијата.

ELISA во моментов широко се користи во пракса за дијагноза на многу заразни болести од бактериска, габична етиологија, протозоални инфекции и хелминтијази, но особено вирусни инфекции, особено хепатитис А, Б, Ц, Д, Е, Г, ХИВ инфекција, херпес вирус, ротавирус, аденовирус, астровирус, парвовирус и други инфекции.

Имунолошки размачкување

Принципот на методот на имуноблотирање е откривање на антитела на поединечни антигени на патогенот. Користејќи го овој метод, се одредуваат антитела на антигените на ХИВ (вирусни обвивни гликопротеини, основни протеини и вирусни ензими). Резултатите од имуноблотирањето се оценуваат како позитивни, сомнителни и негативни во зависност од квантитативниот и квалитативниот сет на откриени антитела.

Треба да се забележи дека имуното размачкање е инфериорно во однос на чувствителноста на ELISA; во некои случаи, може да се забележи негативен резултат ако пациентот има ХИВ инфекција. Сепак, можноста за регистрирање лажно-позитивни резултати во ELISA за ХИВ инфекција бара интегриран пристап кон дијагнозата на ХИВ инфекцијата, земајќи ги предвид, покрај резултатите од имунолошките реакции (ELISA, имуноблотинг), епидемиолошките и клиничките податоци.

Полимеразна верижна реакција (PCR)

Методот на PCR беше развиен од американскиот биохемичар Кари Мулис во 1983 година врз основа на употребата на термостабилната ДНК полимераза (Таг полимераза) што тој ја откри. Принципот на методот е да се зголеми за 106-108 пати од бројот на копии на специфичен ДНК-регион на патогенот, катализиран ин витро од ДНК полимераза во автоматски режим.

Под вештачки услови, репродукцијата на процесот на репликација на геномскиот регион специфичен за одреден вид или род на патогени е можно под услов да е позната неговата нуклеотидна секвенца. Употребата на методи за откривање на производи за репликација на таквите региони (ампликони) ни овозможува да го одредиме присуството на патоген во примерокот за тестирање.

Комплементарното завршување на синџирите опишано погоре започнува само во одредени појдовни блокови, кои се кратки пресеци со двојно жица. Кога таквите блокови се прикачени на одредени делови од ДНК, процесот на синтеза на нов синџир е насочен само во избраниот дел, а не по целата должина на синџирот на ДНК. За да се создадат почетни блокови во дадени делови од ДНК, се користат два олигонуклеотидни прајмери, наречени прајмери. Прајмерите се комплементарни со секвенците на ДНК на левата и десната граница на специфичен фрагмент и се ориентирани така што завршувањето на нова ДНК влакно се случува само меѓу нив.

ДО предности на методот PCRтреба да вклучува:

висока чувствителност, овозможувајќи определување на 10-1000 клетки во примерокот;

висока специфичност, бидејќи материјалот за тестирање открива фрагмент на ДНК единствен за даден патоген;

универзалност на постапката за откривање на различни патогени од еден биопримерок;

Голема брзина на анализа (4--4,5 часа);

Можност за дијагностицирање не само акутни, туку и латентни инфекции.

Употребата на PCR е ефикасна за дијагностицирање на широк опсег на бактериски и вирусни инфекции.

Неодамна, квантитативните методи на PCR анализа се доста успешно имплементирани, што овозможува да се одреди концентрацијата на патогенот во материјалот (микробиолошки или вирусни оптоварувања), на пример, да се процени репликативната активност на вирусот на хепатитис Б, вирусот ХИВ Ц. .

Сепак, треба да се има на ум дека методот на PCR, исто така, има свои ограничувања, особено за дијагностицирање на инфекции предизвикани од опортунистичка автофлора.

Хибридизација на нуклеинска киселина

Хибридизација на нуклеински киселини, како PCR, ви овозможува да го идентификувате патогенот во примерокот без претходна изолација. За да се спроведе анализата, се синтетизира едноверижна ДНК или РНК сонда, комплементарна на специфичните нуклеотидни секвенци на патогенот. Сондата е означена со радионуклид, ензим или друга лесно препознатлива ознака. Материјалот што се проучува е подложен на обработка со цел лиза на микроорганизми присутни во биоанализата, изолација и денатурација на ДНК. Следно, сондата се инкубира со примерокот за тестирање и се мери количината на означена ДНК што влегла во хибридизација со ДНК во примерокот за тестирање. Реакцијата може да се случи и на цврстофазни сорбенти и во раствор, но предуслов е да се мијат неврзаните количини на означената сонда. Чувствителноста на методот на хибридизација на нуклеинска киселина е инфериорна во однос на PCR и изнесува 103 микробни клетки во примерокот.

Кога бев тестиран за СПБ, решив да се тестирам за ХИВ. Следниот ден добив готови тестови за ифа освен за ХИВ и на крајот ми беше дијагностицирана кламидија. Херпес и микроплазмоза. Но, ХИВ никогаш не дојде. Ми се јавуваат после 3 дена и ми кажуваат дека треба да дојдеш во центарот за сида да ти пренесат крв, го зедов имуноблотот и имуноблотот покажа позитивен. Дали имунаблот може да биде лажно позитивен за болести кламидија микраплазмоза ХПВ херпес

Експерти на Woman.ru

Дознајте го мислењето на експерт за вашата тема

Анастасија Шестерикова

Русина Ирина Владимировна

Психолог, ослободување од стрес. Специјалист од страницата b17.ru

Олга Јуриевна Диганаева

Психолог. Специјалист од страницата b17.ru

Олга Борисенко

Психолог, Гешталт терапевт. Специјалист од страницата b17.ru

Дмитриј Валериевич Тишаков

Психолог, супервизор, системски семеен терапевт. Специјалист од страницата b17.ru

Шијан Олга Василиевна

Психолог, психолог-консултант. Специјалист од страницата b17.ru

Оксана Лушанкина

Психолог, Семејни односи. Специјалист од страницата b17.ru

Ана Дашевскаја

Психолог, консултации со Skype. Специјалист од страницата b17.ru

Ирина Букина

Психолог. Специјалист од страницата b17.ru

Аксенова Ана Михајловна

Психолог, кандидат за групна аналитика. Специјалист од страницата b17.ru

Не сакам да те плашам, но кога ќе те викнат во центарот за СИДА, скоро секогаш е позитивно, не земај повторно, со среќа, главната работа е да земеш терапија и да живееш долго

Еден пријател живее со ХИВ веќе десет години и се грижи за себе.
Велат дека за три години можеби ќе најдат лек.
Во секој случај, не очајувајте и не го ширете ова, лекувајте се

Не, IB не може да биде лажно позитивен и никакви СПБ не влијаат на овој тест; ако е позитивен, тогаш за жал, имате ХИВ, треба да ги следите вашите имунолошки клетки и да започнете со терапија на време.

за жал, не ((ако ве повикале во центарот, тогаш дефинитивно е ХИВ

Колку што знам, првите, па дури и последователните резултати од имуноблот може да бидат сомнителни. не е лажно позитивно, туку сомнително. а потоа се пропишува повторена анализа. Го цитирам текстот од страницата:
„Имунолотирањето најчесто се користи за да се потврди дијагнозата на ХИВ инфекцијата. СЗО смета дека се позитивни серуми во кои антителата на било кои два пликови на ХИВ протеини се детектираат со имуноблотирање. Според овие препораки, доколку има реакција само со еден од протеините на обвивката (gp160, gp120, gp41) во комбинација или без реакција со други протеини, резултатот се смета за сомнителен и се препорачува повторно тестирање, користејќи комплет од различна серија или од друга компанија. Ако и после ова резултатот остане сомнителен, студиите се продолжуваат на секои 3 месеци.
можеш да го прогуглаш. Ако е така, се надевам дека не сте потврдени дека сте ХИВ позитивни. но ако се потврди, знајте дека денес луѓето живеат со оваа дијагноза и живеат колку здрави луѓе и раѓаат деца. Главен услов е дисциплина во лекувањето. здравје за тебе!

Антиретровирусна терапија онлајн

Калкулатори

Сајтот е наменет за медицински и фармацевтски работници 18+

Објаснување на анализата - имуноблот

Ве молам помогни ми да ја дешифрирам анализата
ENV(GP160)+
ENV(GP110/120)+
ENV(GP41)+
GAG(P55)+
GAG(P40)+
GAG(P25)+
POL(P68)+
POL(P52)+
POL(P34)+

Здраво! Пред 2,5 години направив тест за ХИВ, и го имаше овој имуноблот:
Gp-160+, Gp-110/120+, Gp-41+, p17+, p25+, p31+, p34+, p52+, p55+, p68+. И еве го имуноблотот од 30.05.18: Gp-160+, Gp-41+, GAG 1 -, poll+, env2-. Не е јасно што значи roll+? Дали е само тој таму или не се откри? А каде отидоа останатите верверички?

Pol и Env се гени кои кодираат групи на протеини. Сметајте дека е само поинаква снимка. Прашањето е различно. Што чекаме? Зошто размислуваме за дамка? Сè е прилично јасно. Треба да се направи нешто.

Веќе се навикнав на фактот дека имам ХИВ. И спремна за терапија.
Само заинтересирани да го слушнам вашето мислење. Дали е ова неодамнешна инфекција или нешто ми недостасува? Или понекогаш се случува имуноблотот да се отвори многу бавно?

Денеска ги погледнав моите тестови во моето лично досие (направено во Кометал):
ELISA на првиот тест систем - позитивен
ELISA на вториот тест систем - негативен (како е тоа?)

Следно е IB (направено ин витро и SC пред еден месец):
имуноблот на првиот тест систем: gp 160+, gp 41+
имуноблот на друг тест систем: gp41+, p24+, p17+
имуноблот на третиот тест систем: gp160+, gp120+, gp41+, p24+

Според моите прогнози, можев да се заразам пред една година (акутната фаза беше во април некаде), или пред 9 месеци, но генерално, не знам кога) секогаш користев заштита и имав секс без кондоми само еднаш. во есента 2017 година.

Денеска повторно ги поминав тестовите VN и IS. Ќе почнам со тера за еден месец, кога ќе пристигне нарачката.

Додадете датуми на споменатите тестови.

Прва дамка пред ELISA? Не тепа. Нема смисла овде што би ни овозможило да кажеме дека нова инфекција, или спротивното, е многу веројатна.
Ќе остане мистерија освен ако случајно не го пронајдете изворот и не го споредите.

Да појаснам, тогаш

Го однесов во Инвитро.
Првата ELISA е на 11 мај.
Потоа истиот серум беше избришан и се врати позитивен тест, каде што беа откриени два протеини.
gp 160+, gp 41+

Потоа повторно го однесов во Кометал.
Дарив крв на 29 мај.
И таму го поминаа низ неколку тест системи, каде првиот покажа негативен, вториот позитивен. Негативната ELISA е сè уште смешна.
Следно, истиот серум оди на blot, од каде што потекнуваат податоците:

Прв систем за тестирање: gp41+, p24+, p17+
Втор тест систем: gp160+, gp120+, gp41+, p24+

Но, тоа не е поентата.
Пристигна нова анализа на ИП - 754. Ова е охрабрувачки. VN сè уште не е подготвен. Штом ќе пристигне, веројатно веќе ќе почнам да го тријам.

80% сум сигурен дека инфекцијата се случила пред една година. Но, чуден е фактот дека дамката полека се отвора и ELISA е негативна. Или ова е во нормални граници?

Негативната ELISA е сè уште смешна. Би сакал да го знам името на системот за да можам да го запишам во црна тетратка. Иако, овој момент, ако не ја земете теоријата со бракот, силно фаворизира рана инфекција.
80% сум сигурен дека инфекцијата се случила пред една година. Блокот е прилично лош за тој период. Не е невозможно, но малку веројатно.

Во одреден момент, дури почнав да се сомневам во резултатите од тестовите за ХИВ - па чекам VN.
Тука се поставува последната точка во прашањето.

Дали во нормален опсег се смета и фактот дека IP порасна за 200 примероци за еден месец без тера? Сега земам Урсосан за полип во мојот жолчен меур - во пакетот пишува дека лекот го подобрува имунитетот.

Неопходно е да се евалуираат и со релативна содржина и да се земат предвид податоците од една лабораторија користејќи еден метод на пресметка. Затоа што Бог знае што се случува со ЦД4.

Генерално, ЦД4 е 780 клетки/μl. VN - 250 примероци/мл.
Ова е без терапија. Односно, ЦД4 од 486 скокна на 780 за еден месец.
VN падна од 550 на 250 примероци.

Сепак, не е ли ова чудно или таквите скокови се во нормален опсег? Дали е време Теру да започне?)

Здраво! Земав IFA три пати, секој пат +, имуноблот p24+ p18+ дојде од SC. Потенцијалниот ризик беше пред повеќе од шест месеци. p24 покажува дека ова е сепак ХИВ?

Размачканата е сомнителна, повторете за 6-8 недели. Најверојатно лажна тревога.

Добар ден!
Пристигнаа резултатите од тестот, вклучително и дамката:

Опасен контакт: 24.04.2018
ХИВ ЕЛИСА тест 23.05.2018 (4 недели од опасен контакт или 29 дена) резултат „+“
ХИВ ЕЛИСА тест 28.05.2018 (5 недели од опасен контакт или 34 дена) резултат „повторно“
ХИВ ЕЛИСА тест 01.06.2018 (5 недели од опасен контакт или 38 дена) резултат „+“

Блокот стигна од првата анализа (23.05.18):
GP160 sl.
P24 сек.

Новите тестови беа направени на 06.06.2018 ELISA и ХИВ РНК ПЦР во локалниот центар за СИДА. Сè уште ги чекаме резултатите.

Прашања за дамката:
1. Ако е присутен P24, дали е нужно ХИВ антиген или може да се открие таков протеин кај други болести?
2. Што значи кратенката „сл“ покрај протеинот? Обично опишаните дамки содржат + или -
3. Што го одредува распоредувањето на blot? Дали тоа зависи од периодот или од индивидуалните карактеристики на телото?
4. Со ваква дамка во 4та недела од опасен контакт има ли шанси да не е ХИВ?

Имајте убав ден и ви благодарам.

1. не, тоа може да биде само сличен протеин од различна природа. 2. слаб. тие. сомнително. 3. термини и имплементира индивидуални карактеристики, но во просек сè е многу блиску. 4. Прашањето е погрешно, секогаш има шанса додека не се постави дијагноза.

Здраво!
Ве молам, помогни ми да навигирам низ резултатите од тестот и да разберам како да се однесувам правилно за да се точни повторените тестови.

Тестовите се направени на 25 мај 2018 година
ИБ ХИВ
НОВА ЛАВ БЛОТ 1 - недефинирано. од 29.05.2018 година
IB ХИВ маркери
gp 160+
gp 120 -
gp 41 -
p55+
p40 -
стр24+
стр 18 -
стр 68 -
стр 52 -
стр 34 -
ЕЛИСА за ХИВ
ADVIA Centaur HIV Ag-Ab ELISA реактивност 12.00 позитивни. (28.05.2018)
Се препорачува да се повтори анализата по 2 недели.

Во ноември 2017 година, имаше законска регистрација, по што направив тестови користејќи го системот за тестирање HIV Ag\Ab Combo Abbott Architect, а потоа резултатот беше негативен.

Во исто време направив општ тест на крвта. Лимфоцитите се малку покачени, еозинофилите се точно 0 (но јас имав слични нивоа на еозинофили претходно.

Главното прашање е:
Кои лекови може и не може да се земаат во текот на овие две недели? (Не сакам ништо да „фаулира“)
Периодично имам напади на алергија, обично земам Тавегил. Дали треба да се напушти?
Може ли да земам антибиотици пред тестот? (доколку е пропишано од лекар за третман на други инфекции и болести)

Имунолошки blotting во дијагнозата на ХИВ

Имуноблотирање (имуноблот, вестерн блот, вестерн блот)- комбинира ензимски имуносорбентен тест (ELISA) со прелиминарен електрофоретски трансфер на вирусни антигени на лента (лента) на нитроцелулоза.

Во ова прекрасно научно име, „blot“ најверојатно е преведен како „blot“, а „western“ како „западен“ ја одразува насоката на дистрибуција на оваа „blot“ на хартијата од лево кон десно, односно на географски мапата ова одговара на насоката од запад кон исток“. Суштината на методот „имуно размачкана“ е дека имуноензимската реакција не се изведува со мешавина на антигени, туку со антигени на ХИВ, претходно дистрибуирани со имунофореза во фракции лоцирани според молекуларната тежина на површината на нитроцелулозната мембрана. Како резултат на тоа, главните ХИВ протеини, носители на антигенски детерминанти, се дистрибуираат по површината во форма на посебни ленти, кои се појавуваат за време на ензимска имуносорбентна реакција.

Имуноблот вклучува неколку фази:

Подготовка на ленти.Вирусот на имунодефициенција (ХИВ), претходно прочистен и уништен во неговите составни компоненти, е подложен на електрофореза, а антигените што го сочинуваат ХИВ се одделени по молекуларна тежина. Потоа, со користење на методот на blotting (аналогно на истиснување на вишокот мастило на подлога за бришење), антигените се пренесуваат во лента од нитроцелулоза, која сега содржи спектар на антигенски ленти карактеристични за ХИВ, кои сè уште се невидливи за окото.

Испитување на примерок.Материјалот за тестирање (серум, крвна плазма на пациентот итн.) се нанесува на лентата од нитроцелулоза, а доколку има специфични антитела во примерокот, тие се врзуваат за строго соодветните (комплементарни) антигенски ленти. Како резултат на последователните манипулации, резултатот од оваа интеракција се визуелизира - станува видлив.

Толкување на резултатот.Присуството на ленти во одредени области на нитроцелулозната плоча го потврдува присуството во тестираниот серум на антитела на строго дефинираните ХИВ антигени.

Во моментов, имуноблотирањето (имуноблот) е главниот метод за потврдување на присуството на вирусно специфични антитела во тест серумот. Во некои случаи на ХИВ инфекција, пред да се случи сероконверзија, специфичните антитела поефикасно се откриваат со имуноблотирање отколку со ELISA. При проучувањето со користење на методот на имуноблотинг, беше откриено дека најчесто антителата на gp 41 се откриваат во серумот на пациенти со СИДА, а откривањето на p24 кај лица испитани за превентивни цели бара дополнително истражување за да се утврди дали имаат ХИВ инфекција. Тест системите за имуноблотирање базирани на генетски инженерски рекомбинантни протеини се покажаа како поспецифични од конвенционалните системи базирани на прочистен вирусен лизат. При користење на рекомбинантен антиген, не се формира дифузна, туку јасно дефинирана тесна антигенска лента, која е лесно достапна за снимање и евалуација.

Серумите на индивидуи инфицирани со ХИВ-1 откриваат антитела на следните главни протеини и гликопротеини - структурни обвивни протеини (env) - gp160, gp120, gp41; јадро (gag) - p17, p24, p55, како и вирусни ензими (pol) - p31, p51, p66. Антителата кон env се типични за ХИВ-2 - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; пол - стр68.

Меѓу лабораториските методи неопходни за утврдување на специфичноста на реакцијата, најпознато е откривањето на антитела на протеините на обвивката ХИВ-1 - gp41, gp120, gp160 и ХИВ-2 - gp36, gp105, gp140.

СЗО смета дека се позитивни серуми во кои антителата на кои било два ХИВ гликопротеини се детектираат со имуноблотирање. Според овие препораки, ако има реакција само со еден од протеините на обвивката (gp 160, gp 120, gp 41) во комбинација или без реакција со други протеини, резултатот се смета за сомнителен и се препорачува повторно тестирање со користење на комплет од друга серија или од друга компанија. Ако и после ова резултатот остане сомнителен, се препорачува набљудување 6 месеци (истражување по 3 месеци).

Присуството на позитивна реакција со антигенот p24 може да укаже на период на сероконверзија, бидејќи антителата на овој протеин понекогаш се појавуваат прво. Во овој случај, се препорачува, во зависност од клиничките и епидемиолошките податоци, студијата да се повтори со серумски примерок земен најмалку 2 недели подоцна, а токму тоа е случај кога е неопходно тестирање на спарени серуми при ХИВ инфекција.

Позитивните реакции со gag и pol протеини без реакција со env протеини може да одразуваат рана сероконверзија и исто така може да укажуваат на инфекција со ХИВ-2 или неспецифична реакција. Поединците со овие резултати по тестирањето за ХИВ-2 се повторно тестирани по 3 месеци (во рок од 6 месеци).

Прашање: Повторен ХИВ тест?

Бев прегледан за сексуално преносливи инфекции (без симптоми - сакав доверба во мојот однос со жена). ХИВ тестот бил позитивен. Следно, ултразвук покажа тумор на бубрегот, кој беше отстранет (се покажа дека е малиген).
Ја прочитав книгата на И.М.Сазонова, пишува дека малигнен тумор може да даде позитивен резултат на тестот за ХИВ.
Дали е тоа точно случај или нема на што да се надеваме?

Треба да направите контролен тест за ХИВ. Ако првиот тест за ХИВ бил утврден со ELISA, тогаш резултатот може да биде лажно позитивен. Неговата веродостојност може да се потврди со почувствителна дијагностичка метода - PCR (полимеразна верижна реакција), која ја детектира ДНК на вирусот во крвта.

Помош. 16.12.10 ELISA (+) IB (+) потоа од 23.03.11 до 19.05.11 девет негативни ELISA (-) и квантитативна PCR. нема да се утврди. во 2002 година, за време на бременоста, ELISA е или (+) или (-), но IB е секогаш (-). од 2004 до 2008 земав ELISA (-) 2 пати годишно, но на 30.04.08 IFA (+) и IB беа неодредени. потоа повторно на секои 2 месеци правев ELISA тест секогаш (-). а од декември 2010 година пишува погоре.Истовремено јас никогаш не сум инјектирал, маж ми секогаш има ЕЛИСА (-). ЦД4 980 клетки. а крвта за сифилис на 29 април даде 3+++.И после три пати. негативен на секои 10 дена. хепатитис сите (-). дали некој имал нешто слично? Ви благодарам.

Ве молиме појаснете дали сте подлегнале на RIBT (реакција на имобилизација на трепонема бледа), и ако е така, кои се резултатите од оваа студија.

не, никој не ми предложи да направам таква анализа.Што ќе покаже? Се надевам дека разбирате дека зборував за ХИВ тестови. Ви благодарам. Дали имало слични случаи во вашата пракса? Инаку, информациската безбедност беше нејасна во 2008 година бидејќи ... имаше p24/25 протеин. во 2010 година IB(+) протеини gp160.41.120 p24.17.31. тогаш кога ИФА беше повторно 3 пати (-) ме испратија во ИБ на 4 април. резултатот беше позитивен, но протеините gp 120 и 41. останатите се прецртани со црвена паста и подолу со црвено IB REPEAT. но PCR ќе го негира истиот број. После 4 април направив ELISA тест и веќе 4 пати беше одбиен. сè е во центарот за брзина, вклучително и тестирање на антигени и антитела. Сега чекам повторен IB и висококвалитетен PCR. тоа е тоа. МНОГУ СУМ Уморен ОД РАЗМИСЛУВАЊЕ И ЧЕКАЊЕ. Надевајќи се на најдоброто. ВИ БЛАГОДАРАМ. Навистина го очекувам вашиот одговор.

Ако поставите какво било прашање, обидете се следниот пат да го формулирате поконкретно, разјаснувајќи ја дијагнозата. RIBT се користи за да се потврди дијагнозата на сифилис. За прецизно дијагностицирање на ХИВ инфекцијата, антителата на ХИВ во крвта се одредуваат со ELISA и имуноблот. Дијагнозата се потврдува само ако двата од овие резултати се позитивни.

Извинете што неточно го формулирав прашањето. Напишав дека во декември ELISA и Imunoblot тестовите за ХИВ се покажаа позитивни. но од март ИФА била негативна за ХИВ 9 пати. Ако бев регистриран во центарот за брзина, тогаш дали ова навистина се случува? ХИВ е секогаш позитивен или негативен. и како, ако резултатот од ЕЛИСА за ХИВ е негативен, може да се користи имуноблот? тогаш сите ќе го негираат ако, треба да провериш за имуноблот, па што се случува? Нашиот центар за брзина не може да ми одговори ништо. Затоа се свртев кон тебе. Ви благодарам.

За жал, и ELISA и имуноблот може да дадат лажно-позитивни резултати. Затоа дијагнозата на ХИВ се смета за конечна само со истовремено откривање на ХИВ со помош на ELISA и методот на имуноблот.

Здраво.Денес ги добив резултатите од висококвалитетниот ПЦР тест за ХИВ - вирусот не е откриен и повторениот имуноблот за ХИВ резултираше со неодреден поради протеин 41. Од ЦЕНТАРОТ ЗА СИДА рекоа дека најверојатно нема ХИВ, но во моето тело има тела слични по структура на ХИВ. Но, што мислите, земајќи ги предвид моите прашања од 15 и 16 јуни (види погоре), дали има ХИВ или не? ВИ БЛАГОДАРАМ.

Во овој случај, дијагнозата на ХИВ инфекција е сомнителна.

Пишуваш дека само со истовремено откривање на ХИВ со помош на ИФА и имуноблот, дијагнозата на ХИВ се смета за конечна. Но, што тогаш во мојот случај? на крајот на краиштата, секој ќе го негира PCR. и blot и ifa цело време скокаат наоколу. за 9 години. Кажи ми, ако вирусот ми беше во крвта, тогаш неговата РНК и ДНК би можеле точно да се утврдат после толку години. и дали периодот на инкубација или „прозорецот“ може да трае толку многу години? Дали има некакви лажно негативни резултати од PCR за ХИВ во таков временски период? Да, заборавив да кажам дека експресните тестови за ХИВ што ги правам на CVD се секогаш негативни или не можете да се потпрете ниту на нив? Ви благодарам.

Во овој случај, PCR дијагностиката не е главниот метод за идентификување на динамиката на процесот - серолошките методи се поинформативни. Во овој случај, веројатноста за лажно негативни резултати е висока. Експресните тестови за ХИВ имаат висок праг на чувствителност, така што можат да дадат и лажно негативен резултат.

Извинете. Дефинитивно го напишав на погрешно место. ве молам одговорете во темата ХИВ или не ХИВ. Ви благодарам.

Во случај вашата е-пошта да не добие известување дека сте добиле одговор, можете да го видите одговорот на вашето прашање на оваа адреса http://tiensmed.ru/news/answers/vich-ili-ne-vich-. html

Здраво! Ве молам кажи ми како да се регистрирам со ЛЦД (моментално сум бремена 10 недела), направив тестови за ХИВ, пред некој ден ми се јави докторот и ми рече дека прелиминарните тестови за ХИВ се позитивни (првиот е направен во Кировоград, но сè уште нема официјален резултат од Киев), истиот ден во нашата градска лабораторија направивме два брзи теста од фармако компанијата ЦИТО ТЕСТ ХИВ 1/2, двата резултати беа негативни, лаборантот рече дека овие тестови се сигурни и не морам да се грижам, бидејќи ова се случува за време на бременоста, а тие тестови едноставно може да се измешаат. Докторот ми рече повторно да дарувам крв и уште двапати ја тестирав крвта во различни болници (сè уште немам ниту еден од трите резултати). Многу сум загрижен, не сум зависник од дрога, не сум имал сомнителни сексуални односи, па дури и да се разболам, се разболувам многу ретко, сите други тестови се нормални. Може ли да им се верува на брзите тестови? Дали ова навистина се случува за време на бременоста? Докторот премногу ме исплаши. Ви благодарам

Пред сè, треба да се смирите и да не размислувате за лошото. Понекогаш за време на бременоста има лажни позитивни резултати. Неопходно е повторно да се тестира крвта за ХИВ и да се чекаат резултатите од испитувањето.

Здраво! Факт е дека пред 2 месеци имав сексуален контакт со девојка (уште се забавуваме). по 1,5 недела температурата се искачи на 37,4. Наскоро таа заспа. За да бидеме сигурни, направивме IFA тест по 2 недели и повторно по 1,5 месец. Двата одговори се негативни. Но, сè уште имам треска и кашлица, со променливо подобрување. Кажи ми, те молам, дали постои ризик? Покрај тоа, работев долго време без слободни денови и пред една недела бев на боледување (со САРС). Тестовите на крвта и белите дробови се нормални. Ви благодарам.

Оваа температура може да биде поврзана со вирусна болест, телото сè уште не се опоравило или хроничен замор. Во случај кога е исклучена органска патологија, општ тест на крвта и урината е во нормални граници, како и податоците од флуорографскиот преглед се исто така во нормални граници, тогаш потребно е да се исклучат сексуално преносливи болести: кламидија, микоплазмоза, уреаплазмоза, што може предизвикуваат воспаление на малите органи карлицата и уретрата и, како последица на тоа, зголемување на телесната температура. Прочитајте повеќе за причините за зголемена телесна температура со кликнување на врската: Висока температура.

Здраво. Еве ја работата: пред повеќе од една година имав незаштитен сексуален контакт со девојка која се шеташе наоколу. Таа инсистираше на тоа дека не е болна, но не можев да и верувам 100 проценти. Таа, исто така, уверуваше дека била подложена на лекарски преглед пред да аплицира за работа (работила како продавач) и се е во ред. 7 месеци по контактот, сè уште направив ХИВ тест во лабораторијата на градот, резултатот беше негативен. Но, во последно време често се разболувам; имам црвено, болно грло веќе 3 недели и не можам да го излечам. Почнав повторно да се плашам, што ако го фатам тогаш? Кажи ми дали е ова возможно и дали треба да и веруваме на анализата од CityLab? Се плашам повторно да направам тест, нема да ми издржат нервите...

Ако резултатот е негативен, тогаш најверојатно не сте болни или заразени со ХИВ/СИДА. Сепак, за да се разјасни дијагнозата, се препорачува да се направи втор тест во специјализирани лаборатории во владините институции; овој преглед се врши анонимно. Ако само-лекувањето не го донесе посакуваниот резултат, се препорачува да се консултирате со отоларинголог за да се спроведе соодветен преглед и да се препише соодветен третман. Прочитајте повеќе за ХИВ тестирањето во серија написи со кликнување на врската: ХИВ.

Кажи ми, можеш ли да дадеш некои карактеристики на лабораторијата Citylab? Сепак, не е секогаш можно да се тестирате во владина агенција. И колкава е процентуалната шанса мажот да се зарази преку незаштитен контакт?

За жал, не даваме споредбени проценки на лабораториите и приватните медицински установи. Ако се сомневате во веродостојноста на резултатите, направете преглед во друг центар и прво побарајте лиценца за давање на овие медицински услуги, дали овој центар има право да го спроведе овој преглед и дали сè е во согласност со прифатените стандарди. Ризикот од инфекција е ист за двата пола преку незаштитен сексуален однос. Прочитајте повеќе за ХИВ тестирањето во серија написи со кликнување на врската: ХИВ.

Добар ден Детето има 8 месеци, тестирано е за ХИВ со ELISA, во крвта се најдени gp160 + и p25 +, останатото е негативно, заклучокот е сомнителен. Судејќи според овие тестови, излегува дека детето е +? gp160 + gp110/120 - p68 - p55 - p52 - gp41 - p34 - p25 + p18 -

За жал, врз основа на добиените податоци, невозможно е да се постави дијагноза со 100 проценти веројатност, бидејќи не може да се исклучи лажно позитивен резултат. За да поставите точна дијагноза, ќе треба да подлежите на голем број испитувања, вклучително и повторување на оваа анализа со помош на методот ELISA, како и правење тест со методот на PCR. По ова, треба да контактирате со специјализирана медицинска установа, каде специјалист за заразни болести ќе може сеопфатно да ги процени добиените резултати. Можете да дознаете повеќе за манифестациите на ХИВ инфекција во тематскиот дел на нашата веб-страница со кликнување на врската: ХИВ

Дали може да покаже лажно позитивен резултат за акутни респираторни инфекции или поакутни заразни болести? Некаде прочитав дека за 58 болести или уште повеќе може да се прикаже „+“, вклучително и вакцинација против хепатитис Б, ако се зафатени бубрезите итн.?

Постои можност за лажно позитивен резултат, затоа ви препорачувам да го направите следново: повторно да го направите тестот - со методот ELISA и методот PCR, а потоа повторно да го посетите инфектичарот. Можете да дознаете повеќе за дијагностицирање на ХИВ инфекција од тематскиот дел: ХИВ

Добар ден Имуноблотот е неодреден поради протеинот p25. Која е веројатноста за ХИВ?

Во оваа ситуација, неопходно е внимателно да се проучат протоколите на студијата во комбинација со други индикатори, бидејќи не е можно да се направи претпоставка врз основа на овие податоци. Веројатно резултатот може да се смета за сомнителен и потребна е повторна студија по 3 месеци. Прочитајте повеќе во делот на нашата веб-страница: ХИВ

Добар ден.
Можете ли да коментирате за ХИВ ЕЛИСА?
1 серум +3,559 k=13,3
+2,121 k=4,9
стр 24 нег
2 серум +3,696 k=13,9
+2,477 k=5,7

Во овој случај, лажно позитивен резултат не може да се исклучи, со оглед на тоа што методот ELISA е индиректен, затоа препорачувам да се тестирате со друг, почувствителен метод - имуноблотинг. Подетални информации за ова прашање можете да дознаете во соодветниот дел на нашата веб-страница со кликнување на следнава врска: ХИВ

Добро попладне, кажи ми на што да се прилагодам? Пред една година, кога планирав дете, јас и мојот сопруг ги направивме сите тестови, вклучително и ХИВ (тие ги сфатија многу сериозно и правилно), бев прегледан во Кр Рог, мојот сопруг во Киев, неговиот одговор беше негативен, јас бев рече дека некој реагенс не работи, треба повторно да го земам во Центарот за СИДА во Киев. Откако го направив тестот во Центар, и мене одговорот ми беше негативен. Сега сум на позицијата 14-та недела т.е. Се пријавив и ги поминав сите тестови и пак ми се врати одговорот, тестот за ХИВ беше неодреден, го направив пак на клиника и експресно направив тест кај Довир за да ме разубедат, но не ме уверија експресниот тестот покажа позитивен резултат (втората линија беше помалку изразена), веднаш по целата оваа процедура, не губев време да се јавам во Центарот за СИДА, а исто така направив тест и го чекам резултатот. (Не можам да се смирам) Те молам кажи ми колку можеш да им веруваш на експресните тестови и зошто нема одговор на тестот за ХИВ првиот пат? (јас и мојот сопруг водиме здрав начин на живот и се сакаме). Ви благодарам.

Нема потреба да се паничи пред време - експресната дијагностика не е основа за дијагностицирање на ХИВ; таа ви овозможува да идентификувате групи на пациенти на кои им е потребно подлабоко истражување. Во такви ситуации, се препорачува да се спроведе имуно размачкана и лично да се консултира со специјалист за заразни болести. Подетални информации за ова прашање можете да дознаете во тематскиот дел на нашата веб-страница со кликнување на следната врска: ХИВ. Дополнителни информации можете да добиете и во следниот дел на нашата веб-страница: Лабораториска дијагностика

Здраво, бев на инфективното одделение, баш денес бев отпуштен на заминување, ми се јави докторот и ми објасни дека имам позитивен ИФА, прво кога ме примија во болница беше негативен, па кога повторно направив тест. стана позитивно, испратија тестови за имуноблот на планината Соколники рекоа дека ќе биде готова следната недела, бев во болница со болно грло и вируси на параинфлуенца, пристигнувам во состојба на шок, уште не ми е јасно како за да го оценам ова, изготвен е и екстракт за мојата клиника кој покажува дека ако е откриен и под тоа имуноблотот е на работа, ако бидам отпуштен утре во вашата клиника, тогаш во овој извадок се ќе биде наведено, колку е веројатно ХИВ да бидам присутен?Дали може поради тоа што се лекував од болки во грлото од вирусот параинфлуенца, да покажам позитивни резултати за ифа?

Веројатноста за лажно позитивен резултат е многу голема. Присуството на еден позитивен резултат сè уште не дава основа за поставување дијагноза на ХИВ, па затоа препорачуваме да го почекате резултатот од имуноблотинг, а потоа лично да се консултирате со лекар за заразни болести за понатамошно испитување и набљудување. Болки во грлото, параинфлуенца и други настинки немаат значително влијание врз резултатите од анализата.

Сакам да верувам во ова, но на крајот на август ми беше лошо, температурата се зголеми, 37,5-38 имав течна столица околу 4 дена, беше на одмор каде имаше многу дискотеки, пиев вода од чешма како многу други, бидејќи што беше многу скапо, чашка вода чинеше 300 рубли, течна столица ја поврзав со таква температура со некоја цревна инфекција фатена во водата, не се сеќавам точно, но имаше и мал осип во горниот дел од телото, кога стигнав дома со температура се јавив на доктор, напиша ротавирус инфекција, после 5 дена боледување, доброволно го оставив и одам на работа, каде неколку дена подоцна се разболев од синузитис (во тој период, поради работните обврски, имав потреба да бидам надвор) Ова го препишав на тоа што големиот пад на температурата од одмор и труење ми го намалија имунитетот и затоа повторно настинав со синузитис, па ова е Повторно боледување по упатство на ОРЛ земав Клацид СР 500 10 дена помина, се вратив на работа после 3 недели, 3 дена бев на службен пат во топла земја. Клима уредите во транспортот и хотелот беа безмилосни и при враќањето дома во авион температурата веќе ми беше 39,5 еве јас сум дома со температура од 40, се јавив на лекар дома, пишав акутна респираторна инфекција и ја кажав мојата грлото беше многу црвено, имам хроничен тонзилитис и му кажав на специјалист ОРЛ, јас самиот пишав да го земам антибиотикот Леволет р. Викав брза помош бидејќи имав температура и стапката беше 40 и не се намали, не ми понудија хоспитализација. утредента истата приказна - Брзата помош ми стави антипиретик и си замина Третиот пат инсистирав на хоспитализација, едвај ме однесоа во инфективната болница каде беше откриена мешана инфекција на параинфлуенца и аденовирусна инфекција, но по излегувањето , докторот-раководител на одделение рече дека ми е дијагностициран ХИВ ако е позитивен и дека тоа го направиле два пати, во шок сум, не знам што да правам, не можам да јадам ниту да пијам. Таа рече дека Јасно е дека имам акутна ХИВ инфекција и за да проверам, ми испратија тест за имуноблот на крвта во центарот за СИДА.
Сега, правејќи аналогија на настаните што ми се случија последниот пат, како и 3 боледувања по ред, ги пробав сите симптоми и се згрозив од она што може да биде, откако бев отпуштен истиот ден. отиде да се тестира на инвитро анонимно и следниот ден резултатот од ИФА беше ист +
Жал ми е за толку детални информации, но јас сум збунет и убиен, пијам јаки седативи и немам апетит и практично не јадам, ослабев многу
Имам и едно прашање: докторот со отпуштањето од болница го посочи резултатот од ХИВ откриен од ИФА и подолу дека имуноблотот е во тек, но како да го затворам бл во мојата клиника на местото каде што се ќе пишува таму. Што да правам?Ова повеќе нема да биде доверливо. Ја замолив лекарот што посетуваше да не ја пишува оваа анализа во извадокот, до кој таа ме одби, колку се почитуваат моите права во однос на необјавување на информации?

За жал, резултатите од студиите спроведени во болницата се вклучени во екстрактот, бидејќи локалниот лекар што присуствува мора да има целосни информации за вашата здравствена состојба. Во оваа ситуација, не зборуваме за откривање информации, бидејќи тие се пренесуваат само на друг лекар кој посетува, кој дополнително ќе ве следи.

Здраво! Направив тестови за ХИВ затоа што ми требаше потврда за ФМС, не ги даваа тестовите неколку недели, потоа ме поканија кај менаџерот и ми дадоа позитивен резултат, земаа еден куп сметки и ги испратија до регионалниот центар за СИДА за дополнително испитување, како што пишува на потврдата. Сакам да го земам на друга клиника и потоа да одам во регионалната или нема поента да го земам повторно? Само не ми е јасно зошто толку долго не ги дадоа, епа докторот рече дека наводно направиле некаква анализа и демек им должам уште 4 илјади рубљи, затоа што ако го направиле тоа, тогаш веројатно дополнително на потврдата би дале детални информации за болеста?

Во оваа ситуација, не треба да паничите пред време - добивањето на еден позитивен резултат не ви дозволува со сигурност да судите за можна инфекција, бидејќи не може да се исклучат лажни позитивни резултати. Ви препорачуваме повторно да го направите тестот и доколку има позитивен резултат ќе треба да направите уште еден преглед - имуноблотинг. Како по правило, лабораторијата не дава детални информации за резултатите, што е нормална и вообичаена практика. На сите прашања што може да ги имате може да одговори вашиот лекар што посетува по преглед за време на лична консултација.

Заборавив да додадам дека од почетокот на јуни до средината на септември земав курс на анаболни стероиди, имено Sustanon 250, мешавина од тестостерони и станозолол со примаболан, сакав да се подготвам за лето и одмор, може ли да срушат мојот имунитет и се што ми се случи.

Нарушениот имунитет, како и присуството на автоимуни болести, може да дадат лажно позитивни резултати од тестот за ХИВ. Токму затоа, во случај на добивање 2 позитивни резултати со методот ELISA, се препорачува имуноблотирање, што ќе ни овозможи точно да одговориме на прашањето дали има инфекција или не.

Што значи да имате автоимуни болести кои се тие?
Во принцип, можам да кажам дека бев доста често болна од раното детство, па дури и пред неколку години побарав од лекарот што посетуваше да се грижи за мојот имунитет, бидејќи бев постојано уморна и често се разболев, главно уво, грло, нос. , но цело време имаше негативни резултати за ХИВ, јас ги поминав прилично лесно, без двоумење.

Лажно позитивен резултат од тестот за ХИВ може да се појави по неодамнешна вирусна инфекција, вакцинација против хепатитис Б, туберкулоза, хепатитис, херпес, како и против позадината на автоимуни болести како што се ревматоиден артритис, системски лупус еритематозус, дерматомиозитис, склеродерма, сврзно ткиво болести и сл.

Би сакал да додадам на моето прашање, мојот имуноблот се врати негативен, но докторот рече дека со оглед на тоа што имав два ИФА + кога бев во болницата за инфективни болести, сепак треба да го повторам тестот, но малку подоцна

Во овој случај, медицинските тактики се оправдани - препорачуваме повторно да го земате имуноблот по 1,5-2 месеци.

Која е веројатноста: 2 IFA + разликата помеѓу земање крв е околу 2 дена, имуноблот - ; Бев во болница за инфективни болести со аденовирусна инфекција и параинфлуенца, каде што се вадеше крв, имуноблот беше испратен во центарот за СИДА

Добар ден Се пријавив во станбениот комплекс, ги поминав сите тестови, докторот вели дека имам херпес во крвта, потоа ми се јавуваат од центарот за сида и велат дека треба да се повторам, прашав и ми рекоа дека сум ХИВ позитивен. , во паника со сопругот отидовме на повторно тестирање го направив тестот и добив ИФА и имуноблот + маж ми го доби, а јас пак после месец дена. Го имам + мојот сопруг - сега сум бремена 23 недели!

Во оваа ситуација, за жал, постои можност за инфекција со ХИВ, но конечна дијагноза не може да се постави ниту со позитивен имуноблот, со оглед на состојбата на бременоста. Во оваа ситуација, неопходно е да се исклучат лажни позитивни резултати, затоа препорачуваме повторно да го направите тестот и лично да се консултирате со специјалист за заразни болести.

Ако имуноблотот покаже позитивен резултат за ХИВ, но скринингот е негативен, на кој резултат треба да веруваме?

Имуноблот е попрецизен тест, затоа, со оваа студија, ако се добие позитивен резултат, треба да ја продолжите студијата и лично да посетите специјалист за заразни болести.

Што е имуноблот? Ова е вообичаен метод за лабораториска дијагноза на човечки вирусни инфекции. Се смета за еден од најточните и најсигурни начини за откривање на присуството на ХИВ. Во својата сигурност, тој ги надминува дури и резултатите од имуноблот се сметаат за непобитни и конечни.

генерални информации

Имуноблот - што е тоа? За да се препознае ХИВ инфекцијата кај некоја личност, неопходно е да се изврши лабораториски тест на крвниот серум за присуство на антитела. Техниката на имуноблотинг се нарекува и вестерн блот. Се користи за откривање на човечки вирусни инфекции како дополнителен експертски метод. Неопходно е да се потврди ELISA - лабораториски тест кој ви овозможува да го одредите присуството на ХИВ антитела во крвта. Позитивниот ELISA тест се проверува двојно со имуноблотирање. Се смета за најчувствителен, сложен и скап.

Цел

Што е имуноблот? Ова е лабораториски метод за тестирање на крвниот серум за присуство на антитела на вирусот. За време на студијата, специјалист прво ги одвојува вирусните протеини во гел и ги пренесува во нитроцелулозна мембрана. Постапката за имуноблотирање е наменета за откривање на ХИВ во различни фази. Во првата фаза, прочистениот вирус од неговите составни делови е подложен на електрофореза, а антигените вклучени во неговиот состав се одделени со молекуларна тежина.

Се репродуцира во жива клетка, вградувајќи ги своите генетски информации во неа. Во оваа фаза, едно лице станува носител на ХИВ вирусот ако е заразено. Специфичноста на болеста е што може да не се манифестира долго време. Вирусот ги уништува лимфоцитите, така што имунитетот на една личност се намалува и телото не може да се спротивстави на инфекции. Ако ХИВ се лекува правилно и на време, пациентот ќе доживее длабока старост. Недостатокот на терапија неизбежно води до смрт. Од моментот на инфекција, но без третман, максималниот животен век не е повеќе од десет години.

Особености

Анализата на имуноблот е сигурен метод кој ви овозможува да го одредите присуството на антитела на антигени на ХИВ од првиот и вториот тип. Ако некое лице е заразено, во рок од две недели се појавуваат антитела, кои можат да се откријат многу подоцна. Особеноста на ХИВ е тоа што количината на антитела брзо се зголемува и останува во крвта на пациентот. Дури и ако се присутни, болеста може да не се манифестира две или повеќе години. Методот ELISA не секогаш точно го одредува присуството на болеста, затоа е потребна потврда на резултатите со помош на имуноблотинг и PCR доколку ензимската имуноанализа покаже позитивен резултат.

Индикации за употреба

Што е „имуноблот“ веќе е откриено, но за кого е препишана оваа студија? Причината за тестирање со помош на имуноблотинг е позитивен резултат на ELISA. Неопходно е да се изврши ензимска имуноанализа за пациентите кои ќе бидат подложени на операција. Покрај тоа, жените кои планираат бременост, како и сите кои се промискуитетни, треба да се тестираат. Имуноблотирањето се препишува на пациенти со ХИВ ако резултатите од ELISA се сомнежни. Следниве алармантни симптоми може да бидат причина да се консултирате со лекар:

• ненадејно губење на тежината;
• слабост, губење на перформансите;
• цревни тегоби (дијареа) кои траат три недели;
• дехидрација на телото;
• треска;
• зголемени лимфни јазли на телото;
• развој на кандидијаза, туберкулоза, пневмонија, токсоплазмоза, егзацербација на херпес.

Пациентот не треба да се подготвува пред да донира венска крв. Не треба да јадете храна 8-10 часа пред тестот. Еден ден пред дарувањето крв, не се препорачува да пиете алкохолни или кафе пијалоци, да се занимавате со напорни физички вежби или да чувствувате анксиозност.

Каде да се направи анализата?

Каде можам да се тестирам за ХИВ? Студиите за ELISA и имуноблот се вршат во градските приватни клиники, резултатите се даваат во рок од 24 часа. Можна е и итна дијагноза. Во јавните медицински установи, ELISA тестовите и имуноблотирањето се вршат бесплатно, во согласност со законодавството на Руската Федерација. Бремените жени, како и пациентите кои се подложени на хоспитализација или операција, се обврзани да подлежат на тестирање за заразни болести.

Како се спроведува истражувањето?

Како се изведува ELISA анализата? Позитивниот/негативниот имуноблот ги потврдува или побива резултатите од ензимската имуноанализа. Постапката за истражување е прилично едноставна. Специјалистот зема венска крв, која трае не повеќе од пет минути. По земањето примероци, местото на инјектирање треба да се дезинфицира и покрие со фластер. Земањето мостри се врши на празен стомак, така што по постапката нема да ви наштети да изедете парче темно чоколадо или да пиете сладок топол пијалок.

За да добиете упат за бесплатен тест во јавна медицинска установа, мора да посетите општ лекар. Општо земено, имуноблотирањето не се разликува од другите тестови на крвта во однос на методот на земање примероци. Методологијата на истражување е едноставна. Ако има вирус во крвта на една личност, телото почнува да произведува антитела за да го уништи. Секој вирус има свој сет на антигени протеини. Откривањето на овие антитела е основа на техниката на имуноблотирање.

Цена

Колку чини анализата? Имуноблот за ХИВ не е евтин тест. Во просек, скрининг преглед со помош на ензимски имуноесејски методи чини од 500 до 900 рубли. Имуноблотинг е студија за верификација, чија цена е од три до пет илјади рубли. Покомплексните методи се многу поскапи. На пример, ќе треба да платите околу 12.000 рубли.

Толкување на резултатот

Најчестите методи за дијагностицирање на ХИВ инфекција се ензимски имуносорбентни анализи и имуноблоти. Тие се користат за одредување на антитела на вирусот на имунодефициенција во крвниот серум. Присуството на инфекција обично се потврдува со два теста: скрининг и потврдувачки. Толкувањето на резултатите од студијата треба да го изврши лекар, кој исто така поставува дијагноза и пропишува третман. Ако имуноблотот е позитивен, тоа значи дека вирусот е присутен во човечкото тело.

Позитивниот резултат не треба да биде причина за независен третман, бидејќи секој пациент може да има различна слика за болеста. Квалитативната анализа вклучува скрининг и верификација. Ако пациентот нема вирус, резултатот е означен како „негативен“. Доколку се открие со скрининг, се спроведува дополнителна студија за верификација. Имуноблот е анализа која го потврдува или побива скринингот. Ако се појави затемнување на тест лентата во одредени области (локации на протеини), се поставува дијагноза на ХИВ. Ако резултатите се сомневаат, тестовите се вршат во рок од три месеци.

Можете да спречите инфекција со вирусот на имунодефициенција ако следите одредени правила: избегнувајте секс без обврски, користете кондом за време на контакт, не земајте лекови. Ако болеста е откриена кај бремена жена, важно е строго да се следат препораките на лекарот што посетува и не заборавајте да се подложите на прегледи за присуство на вирусот.

ИМУНОБЛОТ(вестерн блот) - метод за лабораториско тестирање на крвниот серум за присуство на антитела на ХИВ; тоа е попрецизен тест од ELISA и се користи за потврдување на резултатите од ELISA. ELISA - ензимски имуносорбентна анализа (ELISA) - лабораториски тест кој ви овозможува да го одредите присуството на ХИВ антитела во крвта; Тест за антитела за ХИВ.

Според препораките на СЗО, имуноблотинг (Western blot) се користи во дијагнозата на ХИВ инфекцијата како дополнителна експертска метода, која треба да ги потврди резултатите од ELISA. Вообичаено, овој метод двапати го проверува позитивен резултат на ELISA, бидејќи се смета за почувствителен и специфичен, иако покомплексен и скап.

Имуноблотинг комбинира ензимски имуносорбентен тест (ELISA) со прелиминарно електрофоретско раздвојување на вирусните протеини во гел и нивно пренесување во нитроцелулозна мембрана. Постапката за имуноблот се состои од неколку фази (). Прво, ХИВ, претходно прочистен и уништен во неговите составни компоненти, е подложен на електрофореза, а сите антигени вклучени во вирусот се одделени по молекуларна тежина. Потоа, со помош на методот на blotting, антигените се пренесуваат од гелот во лента од нитроцелулозен или најлонски филтер, кој сега содржи спектар на протеини карактеристични за ХИВ, невидливи за окото. Следно, материјалот за тестирање (серум, крвна плазма на пациентот, итн.) се нанесува на лентата, а доколку има специфични антитела во примерокот, тие се врзуваат за лентите на антигенските протеини кои строго одговараат на нив. Како резултат на последователни манипулации (слично на ELISA), резултатот од оваа интеракција се визуелизира - станува видлив. Присуството на ленти во одредени области на лентата го потврдува присуството во тестираниот серум на антитела на строго дефинираните антигени на ХИВ.

Имуноблотинг најчесто се користи за да се потврди дијагнозата на ХИВ инфекција. СЗО смета дека се позитивни серуми во кои антителата на било кои два пликови на ХИВ протеини се детектираат со имуноблотирање. Според овие препораки, доколку има реакција само со еден од протеините на обвивката (gp160, gp120, gp41) во комбинација или без реакција со други протеини, резултатот се смета за сомнителен и се препорачува повторно тестирање, користејќи комплет од различна серија или од друга компанија. Ако и после ова резултатот останува сомнителен, студиите се продолжуваат на секои 3 месеци.

За да се спроведе имуноблотинг, првиот чекор е да се одвојат протеините содржани во крвниот серум во гел според нивната молекуларна тежина и полнење со помош на електрично поле (гел електрофореза). Потоа на гелот се става нитроцелулозна или најлонска мембрана и се „размачка“ (ова е размачкана). Ова се изведува во посебна комора, која овозможува целосно пренесување на материјалот од гелот до мембраната. Како резултат на тоа, шемата на распоредот на протеините што беше на гелот се репродуцира на мембраната (blot), која потоа може лесно да се манипулира. Првично, мембраната се третира со антитела на саканиот антиген, а по миењето на неврзаниот материјал, се додава радиоактивно означен конјугат кој специфично се врзува за антителата (како во ELISA). Локацијата на добиениот конјугат означен со антиген-антитела се определува со авторадиографија со помош на рендген филм. По нејзината манифестација, сè станува јасно дали има антигени во крвта или не.

имуноблотинг -(од англискиот „blot“ - место) - метод за идентификување на антигени (или антитела) со користење на познати серуми (или антигени). Тоа е комбинација на гел електрофореза и ELISA. Првично, бактериските клетки или вириони се уништуваат со помош на ултразвук, а потоа сите антигени на вирусот или бактериските клетки се одвојуваат со електрофореза и се добива комерцијален реагенс на специјална нитроцелулозна фолија. Кога се врши имуноблотирање, серумот на пациентот што се испитува се нанесува на филм со познати антигени. По инкубација и миење на неврзаните антитела, продолжете со ELISA - антисерум за човечки имуноглобулини означени со ензим и хромоген супстрат што ја менува бојата при интеракција со ензимот се нанесуваат на филмот. Во присуство на комплекси на антиген-антитело-антисерум на имуноглобулин-ензим, на носачот се појавуваат обоени дамки. Методот на имуноблотирање ви овозможува одделно да откриете антитела на различни патогени антигени (на пример, при ХИВ инфекција, имуноблотирањето открива антитела на gp120, gp24 и други вирусни антигени).

Радиоимуноанализа (РИА)

Методот се заснова на реакција антиген-антитело користејќи антиген или антитело означен со радионуклид. 125I, 14C, 3H, 51Cr и други радионуклиди се користат како ознаки. Добиените имуни комплекси се изолирани од системот и нивната радиоактивност се одредува на бројачи (β-зрачење). Интензитетот на зрачењето е директно пропорционален на бројот на врзани антиген и молекули на антитела.

Широко е распространета верзијата на РИА во цврста фаза која користи означени антитела или антигени сорбирани во бунарите на полистиренските панели.

РИА се користи за откривање на антигени на микроби, вируси, различни хормони, ензими, лекови, имуноглобулини, како и други супстанции содржани во материјалот за испитување во помали концентрации од 10-12-10-15 g/l.

Контролни прашања

Реакција на имунолошка бактериолиза: каква реакција се работи; што е антиген, што е антитело, механизам за реакција, методи на производство, практична примена. Реакција на имунолошка хемолиза: неопходни состојки, процедура; контроли, практична примена. Локална реакција на хемолиза во гел (реакција на Јерне): принцип на реакција, начин на формулација, практична примена. Реакција на фиксација на комплемент: принцип на реакција; што се формира кога имунолошкиот серум е во интеракција со специфичен антиген; што се случува со комплементот ако е присутен за време на оваа интеракција? Која е судбината на комплементот ако не постои специфичен афинитет помеѓу антигенот и антителата? Која реакција може да се искористи за да се утврди што се случило со комплементот; зошто се користи оваа конкретна реакција; Кој е видливиот позитивен резултат на RSC? Зошто? Кое својство на комплементот се користи во првата фаза на RSC? Во втората фаза? Ако крајниот резултат на RSC е хемолиза, дали ова значи позитивен или негативен резултат? Објаснете ги резултатите: RSK+ + + +, RSK+ + +, RSK+ +, RSK+. Наведете ги состојките на првиот RSK систем и состојките на вториот RSK систем. Зошто треба да се деактивира тест серумот? Како се титрира комплементот? Хемолитички серум: што содржи, како се добива, кој е титар и како се одредува? Кои животни се користат за добивање на RSC компоненти? Методологија за поставување на RSC на студ. При стадиум, која од следните реакции бара учество на комплементот: таложење, флокулација, аглутинација, откривање на нецелосни антитела, имунолошка бактериолиза, имунолошка хемолиза, Јерне, РСЦ? Реакција на имунофлуоресценција (RIF) - означете ја низата на настани во директната реакција на Кунс; потребни состојки. Што е антиген, што е антитело, со што се означени антителата, како се зема предвид резултатот од реакцијата, како изгледа позитивен резултат? Практична примена - што може да се одреди со помош на оваа реакција? Индиректна реакција на имунофлуоресценција - означете го редоследот на настаните во текот на оваа реакција, потребните состојки, што е антигенот, какви имуни серуми се користат; практична употреба; предноста на индиректната RIF во споредба со директната реакција. Ензимски имуносорбентна анализа (ELISA) – принцип на реакција; потребни состојки; означете ја низата на настани при изведување на реакција за откривање на антиген во материјалот што се тестира; потребни состојки; Што се случува кога резултатот е позитивен, како изгледа? Наведете ја низата на дејства при спроведување на ELISA за откривање на антитела во тест серумот; потребни состојки; што ќе се случи ако резултатот е позитивен? Имуноблотинг - принцип на реакција; главни фази; потребни состојки; како резултатот се зема предвид; придобивките од реакцијата. Радиоимуноанализа (РИА) - кои се главните фази на реакцијата; Со што се означени антителата или антигените, како се зема предвид резултатот? Имуноелектронска микроскопија - принципот на методот; главни фази; потребни состојки; со што се означени антителата? како се зема предвид резултатот од реакцијата. Реакции на имобилизација – принцип на методот, техника на поставување, компоненти, запишување на резултатите.

Задачи што треба да се завршат за време на процесот на самостојно учење.

Пополнете ја табелата „Имунолошки реакции“ во однос на реакциите дискутирани во оваа тема.

Имунолошки реакции

Работа на учениците за време на практичен час

Започнете ја работата веднаш со поставување на фаза 1 на RSK, но подоцна запишете ја во вашата тетратка (видете подолу).

1. Реакција на имунолошка хемолиза. Погледнете ја демонстративната реакција на имунолошката хемолиза, скицирајте ја во форма на дијаграм, објаснете го резултатот во експерименталните и контролните цевки.

2. Реакција на фиксација на комплементот

а) анализирајте го RSK според табелата;

б) нацртајте во тетратка дијаграм за поставување на RSC во форма на табела;

в) ставете ја втората фаза од РСК (првата фаза се става на почетокот на лекцијата);

г) анализираат дијагностичките препарати неопходни за RSC;

г) земете го предвид резултатот. Формулирајте заклучок за присуството на специфични антитела во тест серумот.

3. Реакција на имунофлуоресценција. Проучете ја табелата, направете дијаграм на реакцијата во вашата тетратка; погледнете ги дијагностички серуми; одреди што содржи серумот, како се подготвува, за каква реакција (директна или индиректна RIF) се користи. Погледнете го резултатот од демонстрацијата на RIF во флуоресцентен микроскоп.

4. Ензимско-поврзана имуносорбентна анализа (ELISA). Во вашата тетратка, подгответе шема за поставување на реакција во две верзии: за откривање на антиген во материјалот што се проучува и за откривање на антитела во серумот. Прегледајте го комплетот за состојки за ХИВ и хепатитис Б. Идентификувајте што содржи секоја состојка и за што се користи.

5. Имуноблотинг. Направете дијаграм на реакцијата во вашата тетратка; гледајте ја демонстрацијата - резултатот од реакцијата.

6. Радиоимуноанализа (РИА). Направете дијаграм на реакцијата во вашата тетратка.

7. Имуна електронска микроскопија (IEM). Гледајте ја демонстрацијата - резултатот од реакцијата, нацртајте дијаграм на реакцијата во вашата тетратка, со стрелки означете го антигенот (вирусот) и означените антитела.

Имуноблотирањето е високо чувствителна метода за откривање на протеини, базирана на комбинација на електрофореза и ELISA или RIA. Имуноблотирањето се користи како дијагностичка метода за ХИВ инфекција, итн.

Во општа смисла, имуноблотирањето се однесува на анализа на мешавина на протеини пренесени во цврста мембранска потпора, на која тие се врзани со ковалентни врски, проследени со имунодетекција.

Можете да анализирате мешавина од протеини директно нанесени на подлогата - анализа на точка blot - или по нејзината прелиминарна фракционирање со електрофокусирање, електрофореза на диск или дводимензионална електрофореза - анализа Western blot.

Патогените антигени се одвојуваат со помош на електрофореза со полиакриламид гел, потоа се пренесуваат од гелот на активирана хартија или нитроцелулозна мембрана и се развиваат со помош на ELISA.

Компаниите произведуваат такви ленти со „дамки“ на антигени. Серумот на пациентот се нанесува на овие ленти. . Потоа, по инкубацијата, пациентот се мие од неврзаните антитела и се применува серум против човечки имуноглобулини означен со ензим . Комплексот формиран на лентата (антиген + антитело на пациентот + антитело против човечко Ig) се открива со додавање на хромоген супстрат кој ја менува бојата под дејство на ензим.

Оваа методологија се користи и за избор на клонови на бактерии, фаги или вируси кои ги изразуваат целните клонирани генски производи.

Преносот на протеините во мембраната се врши или пасивно или со помош на опрема за електротрансфер. Ефикасноста на преносот на протеините во мембраната е под влијание на многу фактори, како што се молекуларната тежина на протеините, порозноста на гелот, времето на пренос и составот на употребениот пуфер раствор (транс пуфер).

Во зависност од целите и условите на експериментот, се избираат услови за пренос кои даваат најдобри резултати. Како супстрати најчесто се користат нитроцелулоза, поливинилиден дифлуорид (PVDF) или позитивно наелектризирани најлонски мембрани. Нитроцелулозата може да врзе до 80 - 100 μg протеин на 1 cm2.

Протеините со ниска молекуларна тежина (со молекуларна тежина помала од 20 kDa) може да се изгубат како резултат на миење.Ова овозможува прелиминарно проучување на полиморфизмот на одредени генетски локуси врз основа на должината на соодветните рестриктивни фрагменти на ДНК.

Покрај тоа, користејќи Јужна хибридизација, можете лесно да дознаете дали целниот ген има место на хидролиза со одреден рестриктивен ензим во неговиот внатрешен дел, што ви овозможува да ја изберете оптималната стратегија за клонирање на истражуваниот регион на геномот.

Користејќи слична шема, молекулите на РНК може да се пренесат од гел агароза во филтер за нитроцелулоза. Овој метод беше наречен северен blotting, за разлика од Southern blotting, бидејќи името Southern на англиски значи „јужен“.

Трансферот на протеините на филтри од гелот беше соодветно наречен Western blotting. Големите протеини (>100 kDa) денатурирани во раствор на натриум додекал сулфат (SDS) може лошо да се пренесат во мембраната ако етанолот е присутен во транс пуферот. Алкохолот значително го подобрува трансферот на протеини од гелот SDS-полиакриламид, но ги стеснува порите во гелот, што доведува до задржување на големи протеини.

PVDF мембраната е оптимизирана за имунодетекција и е способна да задржи до 160 μg/cm2 специфично врзани протеини со многу ниски нивоа на неспецифично врзување.

Имуноблотинг

Важна особина на оваа мембрана е можноста за нејзина повеќекратна употреба. Најлонските мембрани Zeta-Probe ефикасно ги врзуваат SDS протеините во отсуство на алкохол, и ова врзување е отпорно на следните третмани. Протеините со ниска молекуларна тежина, исто така, ефикасно се задржуваат. Со висок капацитет за врзување од приближно 480 μg протеин на cm2, мембраните Zeta-Probe овозможуваат откривање на траги од протеини во мешавините за тестирање.

Откако антигенот ќе се имобилизира на мембраната, преостанатите места за врзување се блокирани со раствори од желатин, говедски серумски албумин или обезмастено млеко.

Потоа мембраната се инкубира во раствор од поликлонални или моноклонални антитела на антигенот што се испитува. По измивање на неврзаните антитела, мембраната се инкубира во раствор од секундарни антитела, кои се конјугат на ензимите алкална фосфатаза (AP) или пероксидаза од рен (HRP) со антитела против видови (козјо антитела кон зајаци, глувци или човечки имуноглобулини ) или протеини А (протеин на Staphylococcus aureus) или G (протеин на Streptococcus sp.), кои имаат висок афинитет за Fc регионот на имуноглобулините.

Откривањето на формираните имуни комплекси се врши хемиски или хемилуминисцентно. Подлоги за хемиска реакција при употреба на конјугати на алкална фосфатаза се 5-бромо-4-хлоро-3-индолил фосфат (BCIP) или син тетразолиум (NBT), а кога се користат конјугати од пероксидаза од рен - 4-хлоро-1-нафтол и водород пероксид .

Како резултат на ензимски реакции, на мембраната се формира обоена лента или дамка на местото на локализација на комплексот антиген-антитела.

Чувствителноста на овој метод е 100 pg протеин кога се користат AP конјугати и 100-500 pg кога се користат HRP конјугати. Хемилуминисцентното откривање на имуни комплекси овозможува откривање на помалку од 5 pg антиген. Принципот на овој метод е дека кога HRP реагира со водород пероксид и цикличен диацилхидразин луминол, светлината се емитува на бранова должина од 428 nm, што може да се сними на фотосензитивен филм.

Реакцијата на имуноблотинг (IB) беше развиена врз основа на ELISA. Тоа е најспецифичен и најчувствителен метод за имунохемиска анализа. Имуноблотинг (од англискиот blot - blot, дамка) комбинира ELISA со електрофореза. Се користи за откривање не сложени антитела на ХИВ, туку антитела на неговите индивидуални структурни протеини (протеини p24, гликопротеини gp120, gp 41, итн.). Се однесува на експертски (потврдувачки) реакции за дијагностицирање на ХИВ инфекција.

Реакцијата се изведува во неколку фази:

Вирусот се уништува во компоненти - антигени (p24, gp120, gp 41, итн.), кои се подложени на електрофореза во гел од полиакриламид, односно раздвојување на антигените во фракции по молекуларна тежина.

2. Гелот е покриен со нитроцелулозна мембрана и на него се пренесуваат антигенски фракции со помош на електрофореза. Нитроцелулозата се однесува како бришечка хартија. Мембраната се сече на ленти. Компаниите произведуваат такви ленти со „дамки“ на антигени.

Имуноблотинг - дополнителен индиректен метод

Лентите обложени со антигени на ХИВ се потопуваат во серумот на субјектот и потоа се мијат за да се отстрани неврзаниот материјал.

4. Лентите се инкубираат со антиглобулински серум означен со пероксидаза и се мијат.

Се додава подлогата и се забележува бројот на обоени фракции (дамки) кои одговараат на зоната на локализација на комплексот AG-AT.

Присуството на ленти во одредени области на лентата го потврдува присуството во тестираниот серум на антитела на строго дефинираните антигени на ХИВ. Резултатот од имуноблотирањето се смета за позитивен ако на мембраната се видливи ленти кои одговараат на било кои два од трите ХИВ антигени - p24, gp41 и gp 120 (сл. 37).

ЦРТЕЖИ

СПИСОК НА КОРИСТЕНИ РЕФЕРЕНЦИ

Главна литература

Медицинска микробиологија, вирусологија и имунологија: учебник за студенти по медицина. универзитети 2nd ed., rev. и дополнителни - 702 стр. Ед. А.А. Воробјова. М.: МВР, 2012 година.

2. Микробиологија, вирусологија и имунологија: прирачник за лабораториска настава: учебник/(В.Б. Сбојчаков и други); Изменето од В.Б.Сбојчакова, М.М.Карапатс. – М.: ГЕОТАР-Медиа, 2014.- 320 стр.: ил.

3. Медицинска микробиологија, имунологија и вирусологија [Електронски ресурс]: учебник за мед.

универзитети - 760 стр. — Режим на пристап: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html Коротјаев А.И., Бабичев С.А. Санкт Петербург: Спецлит, 2010 година.

4. Медицинска микробиологија, вирусологија и имунологија [Електронски ресурс]: учебник: во 2 тома / том 1. - 448 стр. — Режим на пристап: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html Зверев В.В., Бојченко М.Н.

М.: Геотар Медиа, 2010. .

5. Медицинска микробиологија, вирусологија и имунологија [Електронски ресурс]: учебник: во 2 тома T. 2. - 480 стр. Режим на пристап: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html Зверев В.В., Бојченко М.Н. М.: Геотар Медиа, 2010 година.

дополнителна литература

1. Имунодијагностички реакции: учебник / комп.: Г.К.Давлетшина, З.Г.Габидулин, А.А.Ахтариева, М.М.Туигунов, А.К.Булгаков, Т.А.Савченко, Р.Ф.

Куснаризанова, Ју.З.

2. Карактеристики на некои својства што го одредуваат патогениот потенцијал на ко-култивираните варијации на бактерии Enterobacter, Citrobacter, Serratia, E.coli, Proteus: научна публикација / Yu. Z. Gabidullin, R. S. Sufiyarov, I. I. Dolgushin - Ufa, 2015 година. - 250 с.

Дома » Имуноблот - што е тоа? Имуноблот во дијагнозата на заразни болести

Имуноблот - што е тоа? Имуноблот во дијагнозата на заразни болести

Што е имуноблот? Ова е вообичаен метод за лабораториска дијагноза на човечки вирусни инфекции. Тоа е еден од најточните и најсигурни начини за откривање на присуството на ХИВ.

За сигурност, тој е дури и поголем од ензимската имуносорбентна анализа (елиса). Резултатите од имуноблот се сметаат за убедливи и убедливи Општи информации

Имуноблот - што е тоа? За да препознаете дека некое лице има ХИВ, мора да направите лабораториски тест за да го тестирате вашиот крвен серум за присуство на антитела.

Секциите за вестерн блот се нарекуваат и вестерн блотови. Се користи за откривање на човечки вирусни инфекции како дополнителен експертски метод. Ова е неопходно за да се потврди ELISA - лабораториски тест кој ви овозможува да го одредите присуството на антитела на ХИВ во крвта. Повторна проверка на имуноблот позитивна ELISA.

Се смета за најчувствителен, сложен и скап.

Цел

Што е имуноблот? Овој метод на лабораториско тестирање на крвниот серум за присуство на антитела на вирусот.

За време на специјални студии, вкупните вирусни протеини беа пронајдени во гелот и на нитроцелулозните мембрани.

Имуноблотинг (откривање на антитела во серумот на пациентите на одредени патогени антигени)

Постапката за секција со вестерн блот е наменета за утврдување на ХИВ инфекцијата во различни фази. Во првата фаза, прочистениот вирус од неговите составни делови е подложен на електрофореза и антигените вклучени во него се поделени по молекуларна тежина.

Вирусот на човечка имунодефициенција се репродуцира во живи клетки вградени во неговите генетски информации. Во оваа фаза, едно лице станува носител на ХИВ вирусот ако сте заразени.

Специфичноста на оваа болест е тоа што не се манифестира долго време. Вирусот ги уништува лимфоцитите, така што имунитетот на една личност се намалува и телото станува неспособно да се бори против инфекциите.

Ако ХИВ се лекува правилно и навремено, пациентот ќе доживее длабока старост. Недостатокот на третман неизбежно води до смрт. Од моментот на инфекција, но без третман, максималниот период не е повеќе од десет години.

Особености

Анализата на имуноблот е сигурен метод кој ви овозможува да го одредите присуството на антитела на антигени на ХИВ од првиот и вториот тип.

Ако некое лице е заразено, по две недели антителата може да се откријат многу подоцна. Посебна карактеристика на ХИВ е тоа што количината на антитела брзо се зголемува и останува во крвта на пациентот. Дури и ако се присутни, болеста може да не се манифестира две или повеќе години. Методот ELISA не секогаш точно укажува на присуство на болеста, што бара потврда на резултатите од секциите на PCR и Western blot доколку ензимската имуноанализа покажала позитивен резултат.

Индикации за

Каков вид „имуноблот“ е веќе откриен, но кој се воведува во студијата?

Причината за тестирање за вирусот на хумана имунодефициенција (ХИВ) ќе биде позитивен резултат на ELISA. Неопходно е да се помине низ ензимски имуносорбентна анализа кај пациенти кои треба да бидат подложени на операција. Покрај тоа, треба да направите анализа на жените кои планираат бременост, како и оние кои се промискуитетни. Секциите со вестерн блот се препишуваат на пациенти со ХИВ инфекција доколку резултатите од Елиса се двосмислени.

Следниве алармантни симптоми може да бидат причина за контакт со лекар: брзо губење на тежината; слабост, губење на функцијата; цревни нарушувања (дијареа), која трае три недели; дехидрација; треска; зголемени лимфни јазли во телото; развој на кандидијаза, туберкулоза , пневмонија, токсоплазмоза, егзацербација на херпес.

Пациентот не треба да се подготвува пред да донира венска крв.

Не јадете 8-10 часа пред тестот. Еден ден пред дарувањето крв, не се препорачува да пиете алкохол или кафе, да правите тешки физички вежби или да чувствувате анксиозност.

Каде да се направи анализата?

Каде можам да се тестирам за ХИВ?

ELISA, имуноблот анализа, спроведена во градските приватни клиники, дава резултати во рок од еден ден. Можна е и итна дијагноза. Во јавните институции, медицинските тестови Елиса и вестерн блот делови се бесплатни, во согласност со законодавството на Руската Федерација.

Задолжителен скрининг за заразни болести кај трудници и пациенти на кои им е потребна хоспитализација или операција Како се изведува овој тест?

Како да се изврши ELISA? Имуноблот позитивен/негативен ги потврдува или побива резултатите од elisa. Постапката е прилично едноставна. Специјалистот собира венска крв, што трае помалку од пет минути.

По земање мостри, местото на инјектирање треба да се дезинфицира и покрие со завој. Земањето мостри се врши на празен стомак, така што по процедурата нема да ви наштети да изедете парче темно чоколадо или сладок топол пијалок.

За да добиете упат за бесплатен тест во јавна медицинска установа, мора да посетите терапевт.

Општо земено, имуноблотот не се разликува од другите крвни тестови по собирање. Методологијата на истражување е едноставна. Ако вирусот е присутен во крвта на една личност, телото почнува да произведува антитела за да го уништи. За секој вирус има многу протеински антигени. Откривањето на овие антитела е основа на методот Western blot секција. Цена

Колку трае анализата? ХИВ имуноблот е еден од најевтините тестови.

Во просек, методите за скрининг на имуноанализа се движат од 500 до 900 рубли. Секциите за вестерн блот се проучување на тестови, чија цена се движи од три до пет илјади рубли. Покомплексните методи се многу поскапи. На пример, за анализа на полимеразна верижна реакција (PCR) ќе треба да платите околу 12.000 рубли.

Толкување на резултатите

Најчестите методи за дијагностицирање на ХИВ инфекцијата се ензимски имуносорбентна анализа и имуноблот.

Тие се користат за одредување на антитела на вирусот на хумана имунодефициенција во серумот. Инфекцијата обично се потврдува со два теста: скрининг и потврдувачки. Резултатите мора да ги толкува лекар, кој дијагностицира и пропишува третман. Ако имуноблотот е позитивен, тоа значи дека има вирус во човечкото тело.

Позитивниот резултат не треба да биде причина за независен третман, бидејќи секој пациент може да има своја слика за болеста.

Квалитативната анализа вклучува скрининг и сертификација. Ако вирусот не е откриен кај пациентот, резултатот е „негативен“. Кога ќе се открие овој сертификат, се вршат дополнителни скрининг студии. Анализа на имуноблот, која го потврдува или побива скринингот. Ако тест лентите се појават во одредени темни области (локализација на протеини), се поставува дијагноза на ХИВ.

Ако резултатите се сомнителни, тогаш тестовите се вршат во рок од три месеци.

За да се спречи инфекција со вирусот на хумана имунодефициенција, можно е ако следите одредени правила: избегнувајте случајни сексуални контакти, користете кондоми за време на контакт, не користете лекови.

Ако болеста е откриена кај бремена жена, важно е да се следат препораките на лекарот што посетува и не заборавајте да се тестирате за присуство на вирусот.

Што е вестерн blotting?

Идентификацијата на протеините во сложени мешавини или екстракти од различни ткива е еден од најчесто сретнуваните проблеми. Користејќи алатка како што се специфични антитела, можно е да се одреди протеинот што се проучува со минимални временски и финансиски трошоци.

Во методот на Western blotting, во првата фаза, мешавината на протеини се одделува со електрофореза во присуство на натриум додекал сулфат (SDS), а потоа се пренесува во нитроцелулозна мембрана со електроблокирање.

Суштината на овој метод е дека по електрофореза гелот се става на нитроцелулозна мембрана помеѓу слоевите филтер-хартија. Вака склопениот „сендвич“ се става во електрично поле, така што комплексите протеин-SDS се движат низ гел-плочката и се имобилизираат (како резултат на неспецифична сорпција) на површината на нитроцелулозната мембрана.

Врзувањето на комплексот протеин-SDS за нитроцелулозната мембрана вклучува главно сили од електрична природа, а оваа интеракција е повеќекратна и води до „ширење“ на протеините на површината на мембраната. Така, по електротрансфер, добиваме реплика на гел на нитроцелулоза со протеини лоцирани на ист начин како и во гел од полиакриламид.

По SDS електрофореза, електротрансфер и сорпција на протеини од гелот на нитроцелулозна мембрана, терциерната конформација на протеинот е значително променета, ако генерално е точно да се зборува за постоење на терцијарна структура за протеинот по таков груб третман. Затоа, за имунохемиска детекција на протеинот што се испитува, обично се користат само моно- или поликлонални антитела специфични за линеарни региони на протеинската молекула.

51. Ензимска имуноанализа, имуноблотинг. Механизам, компоненти, примена.

Антителата специфични за конформационите епитопи (или региони кои вклучуваат контакти меѓу подединицата) генерално не се погодни за употреба во Western blotting.

По трансферот на протеини, мембраната се инкубира последователно со антитела специфични за протеинот што се испитува, а потоа со секундарни антитела специфични за Fc фрагментите на примарните антитела, конјугирани со ензимска (или некоја друга) ознака (Сл.

1 А). Во случај кога примарните антитела специфични за антигенот што се испитува се директно конјугирани со ознаката, секундарните антитела не се потребни (сл. 1 Б). Имуните комплекси формирани на местото на локализација на протеинот што се испитува се „манифестираат“ со користење на хромоген супстрат (во зависност од видот на ознаката).

Чувствителноста и специфичноста на методот во голема мера зависат од тоа кои антитела се користат во истражувањето.

Користените антитела мора да бидат специфични за уникатна аминокиселинска секвенца карактеристична само за протеинот што се проучува. Во спротивно, можна е интеракција (особено во случај на сурови протеински екстракти) на антитела со неколку протеински молекули, што пак ќе доведе до појава на неколку обоени ленти на мембраната.

Идентификацијата на протеинот што се проучува во овој случај е често тешко, па дури и невозможно.

Вториот важен фактор што треба да се има предвид при изборот на антитела е афинитетот. Колку е поголем афинитетот на употребените антитела, толку посветли и појасни се обоени протеинските ленти, толку е поголема чувствителноста на методот. Кога се користат антитела со висок афинитет, може да се постигне чувствителност од 1 ng или дури и повисока.

За да се визуелизира резултатот од интеракцијата помеѓу мембрански врзан антиген и антитела, се користат секундарни антитела, конјугирани со агенси способни да произведат одреден сигнал под одредени услови.

Вообичаено, како таков агенс се користи ензим (пероксидаза или фосфатаза), чијшто производ на реакција е обоен и се таложи на мембраната во форма на нерастворлив талог.

Исто така, во овој метод е можно да се користат флуоресцентни етикети.

Ориз. 1. Шема на имунохемиско боење на протеинот што се испитува: А - користење на секундарни антитела конјугирани со ензимска ознака; Б - примарното антитело е директно конјугирано со ензимска ознака.

Протокол:

I. Подготовка на гел и мембрана и електротрансфер на протеини

По електрофорезата, гелот од полиакриламид се става во бања со пуфер за размачкување (25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM глицин, 10% етанол).

На делот од касетата што ќе биде свртен кон анодата се ставаат два листа филтер-хартија, исечени според обликот на касетата за бришење и навлажнета со пуфер за блотирање. Потоа на филтер-хартијата се става нитроцелулозна мембрана претходно навлажнета со истиот пуфер, при што се внимава да нема воздушни меури помеѓу мембраната и хартијата.

Гелот потоа треба внимателно да се стави на мембраната, повторно обрнувајќи особено внимание да се осигура дека нема воздушни меури помеѓу гелот и мембраната. Формирањето на сендвичот го завршуваат два слоја навлажнета филтер-хартија, кои се поставуваат на површината на гелот (сл. 2). Добиениот сендвич се стега во касета и се става помеѓу електродите така што мембраната е свртена кон анодата.

Ориз. 2. Шема на електротрансфер на протеини во мембраната.

II. Електричен трансфер

Електротрансферот на протеините во нитроцелулозна мембрана се врши во пуфер кој содржи 25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM глицин, 10% етанол за 30-50 мин со постојан напон од 100 V.

Времето на електротрансфер зависи од големината на протеините што се пренесуваат; колку е поголем протеинот, толку подолго трае електротрансферот. Квалитетот на електротрансферот и локацијата на протеинските ленти се оценуваат со боење на нитроцелулозната мембрана со 0,3% раствор на Ponceau S во 1% оцетна киселина. Пред имунохемиското боење, мембраната треба да се измие неколку пати со слабо алкален воден раствор на Трис за да се отстрани бојата врзана за протеините.

III. Имунохемиско боење на протеини имобилизирани на нитроцелулозна мембрана

За да се блокираат местата на неспецифично врзување на антителата, мембраната се инкубира со постојано мешање на собна температура 30 минути во PBST (за подобро блокирање, може да се користи PBST раствор кој содржи 10% обезмастено млеко во прав).

По блокирањето, мембраната се инкубира еден час на собна температура со постојано мешање во PBST што содржи 1-10 μg/ml специфични антитела.

Оптималната концентрација на антитела се избира емпириски и зависи од афинитетот на интеракцијата на антителата со антигенот.

На крајот на инкубацијата, измијте ја мембраната 5 пати со PBST и префрлете ја во раствор од секундарни антитела конјугирани со пероксидаза од рен. Разредувањето на конјугатот обично го означува производителот на пакувањето или е избрано емпириски од истражувачот. Инкубирајте ја мембраната во секундарниот раствор на антитела 1 час со постојано мешање.

По темелно миење (променете го пуферот најмалку 5-6 пати), мембраната PBST се пренесува во раствор на хромоген супстрат кој содржи 3 mg диаминобензидин (DAB) и 10 μl 30% водород пероксид во 10 ml од 0,1 M Tris-HCl. , pH 7,6.

Инкубацијата се изведува со мешање 5-10 минути. По завршувањето на инкубацијата со подлогата, мембраната треба да се измие со PBST, да се исуши со бришење со филтер-хартија и веднаш да се направи електронска копија со скенирање во боја. Ако мембраната целосно се исуши, обоените протеински ленти бледнеат и сликата се покажува помалку светла и контрастна.

Забелешка: DAB е токсичен и потенцијален канцероген. Работете само со гумени ракавици!