FISH ialah kajian untuk diagnosis pembezaan. Pendarfluor in situ hibridisasi Kaedah diagnostik terkini

Kaedah ini digunakan hari ini untuk mendiagnosis jenis tumor kanser tertentu, kerana degenerasi malignan sel disebabkan oleh perubahan dalam genomnya. Sehubungan itu, setelah mengesan keabnormalan ciri dalam gen, adalah mungkin untuk mengklasifikasikan sel ini sebagai kanser dengan kepastian yang tinggi. Di samping itu, ujian FISH digunakan untuk mengesahkan diagnosis yang telah ditetapkan, serta untuk mendapatkan data tambahan tentang kemungkinan menggunakan ubat kemoterapi khusus untuk tujuan menjalankan kemoterapi untuk kanser payudara dan menjelaskan prognosis penyakit.

Contoh baik penggunaan ujian IKAN adalah apabila ia digunakan pada pesakit kanser payudara. Dengan teknik ini, tisu biopsi diperiksa untuk mendapatkan salinan gen yang dipanggil HER-2. Jika gen ini ada, bermakna terdapat sejumlah besar reseptor HER2 yang terletak di permukaan sel. Mereka sensitif kepada isyarat yang merangsang perkembangan dan percambahan unsur tumor. Dalam kes ini, peluang terbuka untuk penggunaan trastuzumab yang berkesan - ubat ini menghalang aktiviti reseptor HER2, dan oleh itu menghalang pertumbuhan tumor.

Bagaimanakah ujian IKAN dilakukan?

Penyimpangan dalam struktur kromosom ini terdapat dalam beberapa jenis:
translokasi – pergerakan sebahagian daripada bahan kromosom ke kedudukan baharu dalam kromosom yang sama atau lain;
penyongsangan – putaran bahagian kromosom sebanyak 1800 tanpa pemisahan daripada badan utamanya;
pemadaman - kehilangan mana-mana kawasan kromosom;
duplikasi ialah penyalinan sebahagian daripada kromosom, yang membawa kepada peningkatan bilangan salinan gen yang sama yang terkandung dalam sel.

Setiap gangguan ini membawa tanda dan maklumat diagnostik tertentu. Sebagai contoh, translokasi mungkin menunjukkan kehadiran leukemia, limfoma atau sarkoma, dan kehadiran duplikasi gen membantu untuk menetapkan terapi yang paling berkesan.

Apakah kelebihan ujian IKAN?

Satu lagi kelebihan ujian FISH ialah ia boleh digunakan pada bahan yang baru diperolehi daripada pesakit. Untuk analisis sitogenetik standard, perlu terlebih dahulu mengembangkan budaya sel, iaitu, membenarkan sel pesakit membiak di makmal. Proses ini mengambil masa kira-kira 2 minggu, dan seminggu lagi dihabiskan untuk menjalankan ujian biasa, manakala keputusan ujian FISH akan diperolehi dalam beberapa hari sahaja.

Perkembangan berterusan sains perubatan secara beransur-ansur membawa kepada pengurangan kos ujian FISH dan kemasukannya yang semakin meluas dalam amalan harian pakar onkologi.

Kanser payudara adalah penyakit berbahaya, secara statistik menduduki tempat pertama dalam kalangan penyakit kanser pada wanita. Risiko mendapat penyakit ini meningkat pada semua wanita yang berumur lebih dari 40 tahun dan mungkin disebabkan oleh beberapa faktor lain. Penyebab kanser payudara yang paling mungkin termasuk obesiti, kecenderungan genetik atau keturunan, permulaan haid awal dan lewat selesai, terapi hormon atau radiasi.

Di samping itu, risiko morbiditi meningkat pada wanita nulipara dan wanita yang telah pun menghidap kanser. Lelaki juga boleh mendapat kanser payudara.

Jenis dan kaedah diagnosis

Peringkat pertama untuk mendiagnosis kanser payudara adalah pemeriksaan rutin oleh pakar mammologi. Wanita yang berumur lebih dari 40 tahun perlu menjalani peperiksaan sedemikian sekurang-kurangnya sekali setiap dua tahun. Doktor melakukan pemeriksaan visual, palpasi dan mamografi kelenjar susu. Tanda-tanda visual perkembangan penyakit mungkin termasuk:

maklumat am

X-ray payudara (mamografi) membolehkan anda menentukan kehadiran, saiz dan lokasi tumor. Untuk meningkatkan ketepatan keputusan yang diperoleh, teknologi memperkenalkan agen kontras digunakan. Sekiranya tumor telah dikesan, maka kaedah pneumocystography digunakan - mengeluarkan cecair tumor dan memasukkan udara ke dalam rongga. Sekiranya kehadiran tumor tidak dinyatakan, maka duktografi digunakan - pengenalan agen kontras ke dalam saluran susu.

Kaedah ini membolehkan anda memvisualisasikan kehadiran pembentukan dalam tisu payudara.

Jika kehadiran tumor juga menjadi jelas pada mamografi, pesakit diberi rujukan untuk satu set langkah diagnostik:

Menggunakan ultrasound, doktor boleh membezakan tumor daripada sista dan menjelaskan lokasi pembentukan. Selepas ini, sampel tisu diambil daripadanya untuk biopsi. Biopsi membolehkan anda mengetahui jenis tumor: benigna atau malignan, dan juga menentukan sama ada tumor itu bergantung kepada hormon. Maklumat ini membolehkan doktor memutuskan strategi rawatan, tetapi tidak selalu memungkinkan untuk menentukan peringkat. Selalunya, walaupun dengan semua langkah diagnostik yang diperlukan, ia hanya boleh ditentukan selepas pembedahan.

Mekanisme kajian histologi

Biopsi tisu dilakukan sebelum dan selepas pembedahan. Prosedur ini dijalankan selepas penyetempatan pembentukan telah dijelaskan.

Biopsi ialah proses mengeluarkan sekeping tisu, dan kajiannya dipanggil "pemeriksaan histologi" atau hanya "histologi".

Seorang pekerja perubatan menggunakan jarum khas untuk mengeluarkan sedikit tisu daripada tumor, atau tumor yang telah dikeluarkan dari badan pesakit dihantar untuk pemeriksaan histologi. Kemudian serpihan tisu diwarnakan dan diproses khas untuk meningkatkan kontras dan memudahkan untuk belajar. Pakar memeriksa bahagian menggunakan mikroskop dan memberi pendapat tentang kualiti pembentukan tumor. Banyak dalam kajian ini bergantung kepada perhatian dan kelayakan juruteknik makmal yang memberikan kesimpulan.

Kajian serupa ialah imunohistokimia. Secara umum, ia juga boleh dipanggil "histologi", kerana kaedah ini berdasarkan kajian tisu, tetapi imunohistokimia adalah kaedah analisis yang lebih maju. Dalam kajian ini, tisu juga diwarnai dengan reagen khas, yang bukan sahaja meningkatkan kontras visual, tetapi juga menggabungkan ("label") dengan antibodi dengan cara yang istimewa, yang memungkinkan untuk menjelaskan lebih banyak ciri tumor. Dalam kes ini, tindak balas berlaku lebih cepat, yang membolehkan anda mendapatkan hasil analisis dengan cepat.

Imunohistokimia membolehkan bukan sahaja untuk menjelaskan jenis tumor, tetapi juga untuk merancang strategi rawatan pesakit berdasarkan mengenal pasti sensitiviti tisu tumor kepada pelbagai jenis kesan terapeutik. Di samping itu, kajian ini adalah automatik yang mungkin, yang membolehkan kami meminimumkan kemungkinan ralat diagnostik disebabkan oleh faktor manusia.

Terdapat juga langkah diagnostik moden yang memungkinkan untuk mengesan kehadiran tumor dalam badan: ini adalah ujian darah spektrum, analisis imunologi (biokimia), ujian IKAN tisu tumor. Ujian darah genetik membolehkan mana-mana wanita mengesahkan sama ada dia mempunyai atau tidak mempunyai prasyarat untuk kanser payudara. CT dan MRI memungkinkan untuk menentukan lokasi tumor dengan tepat dan memantau dinamik perkembangannya, menilai struktur tumor.

Bagaimana untuk mengesan kanser menggunakan ujian darah?

Ujian darah biasanya ditetapkan oleh doktor selepas pemeriksaan ultrasound. Terdapat situasi apabila pesakit, atas inisiatifnya sendiri, menderma darah untuk penanda tingkap atau analisis genetik untuk mengenal pasti kecenderungan untuk kanser payudara. Dalam sesetengah kes, ujian darah am mungkin menjadi sebab untuk menghubungi klinik onkologi (bersama-sama dengan palpasi ketulan atau tanda-tanda visual kanser).

Analisis biokimia

Darah sebagai bahan untuk penyelidikan membolehkan langkah diagnostik berikut dijalankan:

Pada masa yang sama, hanya dua analisis pertama yang boleh dipanggil kaedah khusus untuk menentukan kanser, yang kedua adalah lebih daripada langkah pencegahan daripada operasi. Dua ujian darah lain dijalankan terutamanya sebelum pembedahan untuk menentukan keadaan badan dan tahap proses. Walau bagaimanapun, seperti yang telah disebutkan, jika benjolan dirasai di dada dan ujian darah am menunjukkan lebih daripada dua pekali diagnostik negatif, ini adalah sebab untuk berunding dengan pakar. Pekali negatif adalah penunjuk di luar norma dalam parameter tertentu komposisi darah.

Ujian darah biokimia boleh mengesan kehadiran antibodi kepada sel tumor. Badan sedemikian dipanggil penanda tumor. Bilangan dan jenis penanda tumor bergantung kepada kekhususan (lokasi) tumor kanser dan peringkat perkembangannya. Penanda tumor termasuk:

Dalam kes kanser payudara, doktor yang merawat akan sangat berminat dengan kehadiran penanda tumor CA-15-3, kerana kehadirannya dalam darah jelas menunjukkan kanser payudara. Penyahkodan keputusan mengambil purata satu hari. Analisis biokimia dijalankan beberapa kali semasa perjalanan penyakit. Darah untuk ini diambil dari urat pada separuh pertama hari pada perut kosong. Dua minggu sebelum ujian, pesakit berhenti mengambil semua ubat (untuk disahkan dengan doktor yang hadir). Dua hari sebelum menderma darah, anda tidak boleh minum alkohol, makanan berlemak atau bergoreng.

Satu jam sebelum prosedur, anda tidak boleh merokok dan dinasihatkan untuk mengurangkan tekanan emosi. Darah biasanya tidak didermakan untuk analisis biokimia sejurus selepas rawatan radiasi dan fisioterapeutik.

Penentuan faktor genetik

Sebelum bercakap tentang ujian darah genetik, adalah wajar untuk menekankan perbezaan antara konsep "genetik" dan "keturunan". Faktor genetik kanser adalah konsep yang lebih luas yang membayangkan bukan sahaja kehadiran saudara-mara dengan kanser payudara, tetapi juga mutasi gen tertentu yang meningkatkan risiko penyakit ini.

Keturunan membayangkan potensi risiko kanser payudara berdasarkan sejarah keluarga. Pada masa yang sama, bukan sahaja wanita, tetapi juga lelaki boleh menerima gen mutan, tetapi pembawanya tidak semestinya akan jatuh sakit.

Mana-mana wanita boleh menjalani ujian genetik. Ini amat disyorkan untuk mereka yang mempunyai saudara langsung yang menghidap kanser payudara. Sebelum menderma darah untuk analisis, pesakit harus bercakap dengan pakar dalam bidang genetik, yang akan menerangkan nuansa menguraikan keputusan. Tiada persiapan khusus diperlukan daripada pesakit sebelum menderma darah.

Jika anda menerima keputusan positif untuk mutasi gen BRCA, tetapi jika tiada gejala membimbangkan lain, tidak perlu panik. Wanita yang mengalami mutasi dalam gen ini mungkin dinasihatkan untuk menjalani pemeriksaan diri dan pemeriksaan fizikal secara berkala sebagai langkah pencegahan. Selepas 40 tahun, masuk akal untuk berfikir tentang mengeluarkan ovari dan payudara; wanita muda yang tidak merancang untuk mempunyai anak pada masa hadapan kadang-kadang disyorkan untuk mengambil kontraseptif. Keputusan mengenai langkah-langkah ini terletak sepenuhnya di bahu wanita itu sendiri dan memerlukan pendekatan yang bijak dan perundingan dengan doktor.

Kaedah diagnostik terkini

Ujian darah spektrum mendedahkan kehadiran tumor dalam badan dengan kebarangkalian sehingga 93%. Ini adalah kaedah diagnostik yang agak murah, yang berdasarkan penyinaran serum darah dengan spektrum inframerah dan analisis komposisi molekulnya.

Kesimpulan mengenai ujian darah spektrum diberikan mengikut prinsip "kehadiran-ketiadaan" dan bertujuan untuk mengenal pasti kebanyakan jenis tumor malignan. Ujian ini juga boleh menentukan peringkat perkembangan kanser payudara. Hasilnya ditafsirkan di makmal dan tidak memerlukan pendapat doktor tambahan.

Untuk menderma darah untuk analisis spektrum, adalah perlu untuk berhenti mengambil ubat 2 bulan sebelum prosedur. Sekurang-kurangnya 3 bulan mesti berlalu dari saat X-ray atau penyinaran lain, serta kemoterapi. Di samping itu, wanita itu tidak boleh hamil atau datang haid semasa pengambilan darah. Pensampelan darah berlaku semasa perut kosong pada separuh pertama hari itu. Ujian darah spektrum mengambil masa purata 12 hari bekerja.

Salah satu kaedah terbaru untuk mendiagnosis kanser ialah apa yang dipanggil "ujian ikan" (FISH, hibridisasi pendarfluor). Keberkesanannya masih dalam perbincangan, persoalan utama kebolehlaksanaannya ialah prosedur penyelidikan yang mahal. Intipati kaedah adalah untuk melabelkan serpihan sel dengan komposisi pendarfluor dan pemeriksaan mikroskopik selanjutnya terhadap sel. Berdasarkan bahagian bahan genetik yang dikaitkan dengan serpihan berlabel, seseorang boleh memahami sama ada pesakit mempunyai kecenderungan untuk kanser dan kaedah rawatan yang akan relevan dalam kes tertentu.

Ujian FISH tidak memerlukan sel matang sepenuhnya, jadi ia lebih cepat untuk dilakukan berbanding ujian makmal lain. Di samping itu, kaedah FISH membolehkan anda melihat dengan lebih jelas kerosakan genetik, yang tidak mungkin dilakukan dengan jenis analisis lain. Ujian FISH paling kerap digunakan untuk mengesan kanser payudara, tetapi ia juga berfungsi untuk mengesan beberapa jenis kanser lain.

Kelemahan ujian FISH termasuk, sebagai tambahan kepada kosnya yang tinggi, ketidakupayaannya untuk bekerja pada beberapa kawasan kromosom disebabkan oleh kekhususan tag. Di samping itu, ujian FISH mengabaikan beberapa jenis mutasi dan pecah kod genetik, yang boleh menjadi peninggalan penting dalam diagnosis. Kajian perbandingan FISH dengan ujian IHC yang lebih murah tidak menunjukkan kelebihan ketara dalam menentukan kerentanan sel kanser kepada Herceptin. Walau bagaimanapun, ujian FISH pada masa ini adalah yang terpantas di antara kaedah yang sangat tepat untuk mendiagnosis kanser.

Teknik hibridisasi FISH - Fluorescent in situ telah dibangunkan pada pertengahan 1980-an dan digunakan untuk mengesan kehadiran atau ketiadaan jujukan DNA tertentu pada kromosom, serta DNA satelit alfa yang terletak pada sentromer kromosom 6, CEP6(6p11. 1-q11. 1).

Ini memberikan perubahan ketara dalam diagnosis penyakit onkologi asal melanocytic akibat penemuan antigen tumor. Terhadap latar belakang malignan, mutasi dalam tiga antigen ditentukan: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) dan CMM1 (1p). Dalam hal ini, kemungkinan diagnosis pembezaan objektif, berdasarkan penentuan ciri genetik tumor kulit melanocytic, adalah sangat penting dalam diagnosis awal melanoma dan prekursornya.Dalam nukleus dengan set normal gen dan kromosom 6 yang dikaji , dua gen RREB1 diperhatikan, berwarna merah, dua gen MYB, berwarna kuning, dua gen CCND1 berwarna hijau, dan dua sentromer kromosom 6 berwarna biru. Ujian pendarfluor digunakan untuk tujuan diagnostik.

Penilaian hasil tindak balas: bilangan isyarat merah, kuning, hijau dan biru dalam 30 nukleus setiap sampel dikira, empat parameter pelbagai variasi gangguan genetik dikenal pasti, di mana sampel secara genetik sepadan dengan melanoma. Sebagai contoh, sampel adalah konsisten dengan melanoma jika bilangan purata gen CCND1 setiap nukleus ialah ≥2.5. Nombor salinan gen lain dinilai menggunakan prinsip yang sama. Sesuatu ubat dianggap positif IKAN jika sekurang-kurangnya satu daripada empat syarat dipenuhi. Sampel di mana keempat-empat parameter berada di bawah nilai cutoff dianggap negatif IKAN.

Penentuan urutan DNA tertentu pada kromosom dijalankan pada bahagian biopsi atau bahan pembedahan. Dalam pelaksanaan praktikal, tindak balas FISH kelihatan seperti ini: bahan yang dikaji, yang mengandungi DNA dalam nukleus melanosit, diproses untuk memusnahkan sebahagian molekulnya untuk memecahkan struktur untai dua dan dengan itu memudahkan akses ke kawasan yang dikehendaki dari gen. Sampel dikelaskan mengikut tempat ia melekat pada molekul DNA. Bahan untuk tindak balas IKAN dalam amalan klinikal ialah bahagian tisu parafin, calitan dan cetakan.

Reaksi FISH membolehkan anda mengesan perubahan yang telah berlaku dalam molekul DNA akibat daripada peningkatan bilangan salinan gen, kehilangan gen, perubahan dalam bilangan kromosom dan perubahan kualitatif - pergerakan lokus gen kedua-duanya dalam keadaan yang sama. kromosom dan antara dua kromosom.

Untuk memproses data yang diperoleh apabila menggunakan tindak balas FISH dan mengkaji hubungan antara nombor salinan gen bagi tiga kumpulan kajian, pekali korelasi Spearman digunakan.

Melanoma dicirikan oleh peningkatan bilangan salinan berbanding nevus dan nevus displastik.

Nevus mudah, berbanding dengan nevus displastik, mempunyai lebih sedikit keabnormalan dalam nombor salinan (iaitu, lebih banyak nombor salinan biasa).

Untuk membina peraturan keputusan yang memungkinkan untuk meramalkan sama ada sampel tergolong dalam satu kelas atau yang lain (diagnosis pembezaan nevi mudah dan displastik), radas matematik "pokok keputusan" digunakan. Pendekatan ini telah membuktikan dirinya dengan baik dalam amalan, dan keputusan menggunakan kaedah ini (tidak seperti kebanyakan kaedah lain, seperti rangkaian saraf) boleh ditafsirkan dengan jelas untuk membina peraturan keputusan untuk membezakan nevi dan melanoma yang mudah, displastik. Data awal dalam semua kes ialah nombor salinan empat gen.

Tugas membina peraturan keputusan untuk diagnosis pembezaan dibahagikan kepada beberapa peringkat. Pada peringkat pertama, melanoma dan nevus dibezakan, tanpa mengambil kira jenis nevus. Pada peringkat seterusnya, peraturan keputusan dibina untuk memisahkan nevi mudah dan displastik. Akhirnya, pada peringkat terakhir, adalah mungkin untuk membina "pokok keputusan" untuk menentukan tahap displasia nevus displastik.

Pembahagian tugas mengklasifikasikan nevi kepada subtugasan ini memungkinkan untuk mencapai ketepatan tinggi ramalan pada setiap peringkat. Data input untuk membina "pokok keputusan" ialah data mengenai nombor salinan empat gen untuk pesakit yang didiagnosis dengan melanoma dan pesakit yang didiagnosis dengan bukan melanoma (pesakit dengan pelbagai jenis nevus - mudah dan displastik). Bagi setiap pesakit, terdapat data mengenai nombor salinan gen untuk 30 sel.

Oleh itu, membahagikan masalah meramalkan diagnosis kepada beberapa peringkat memungkinkan untuk membina peraturan keputusan yang sangat tepat bukan sahaja untuk membezakan antara melanoma dan nevi, tetapi juga untuk menentukan jenis nevi dan meramalkan tahap displasia untuk nevus displastik. "Pokok keputusan" yang dibina ialah cara visual untuk meramalkan diagnosis berdasarkan maklumat tentang nombor salinan gen dan boleh digunakan dengan mudah dalam amalan klinikal untuk membezakan neoplasma melanocytic benigna, pra-malignan dan malignan pada kulit. Kaedah tambahan diagnosis pembezaan yang dicadangkan amat penting apabila pengasingan nevi berpigmen kongenital gergasi dan nevi displastik dalam pesakit kanak-kanak, kerana peratusan tinggi kesilapan diagnostik diperhatikan apabila pesakit sedemikian melawat institusi perubatan. Keputusan menggunakan kaedah yang diterangkan adalah sangat berkesan; adalah dinasihatkan untuk menggunakannya dalam diagnosis tumor kulit berpigmen, terutamanya pada pesakit dengan sindrom FAMM.

Kaedah invasif diagnostik pranatal membolehkan bukan sahaja untuk melihat masa depan dan dengan pasti meramalkan sama ada bayi yang belum lahir akan menghadapi penyakit yang berkaitan dengan kecacatan intrauterin, tetapi juga untuk mengetahui sifat dan punca patologi kongenital.

Walau bagaimanapun, sebarang maklumat adalah berharga hanya jika tepat pada masanya. Apabila ia datang kepada keadaan perkembangan janin, kelajuan mendapatkan keputusan ujian menjadi sangat penting.

Oleh itu, kaedah FISH, yang membolehkan seseorang menilai kehadiran anomali perkembangan yang paling biasa dalam embrio dalam masa yang sesingkat mungkin, sangat diperlukan dalam diagnostik genetik.

FISH ialah singkatan yang menguraikan intipati teknologi untuk mengesan keabnormalan kromosom - hibridisasi pendarfluor in situ - hibridisasi pendarfluor dalam persekitaran "rumah".

Teknik ini, yang dicadangkan pada akhir 70-an abad yang lalu oleh J. Goll dan M.-L. Pardew, adalah berdasarkan kepada kemungkinan memulihkan jujukan serpihan asid nukleik (DNA atau RNA) selepas denaturasinya.

Penulis telah membangunkan kaedah yang membolehkan, menggunakan hibridisasi in situ probe DNA berlabel (probe) yang dicipta secara buatan dan bahan sitogenetik yang diambil untuk analisis, untuk mengenal pasti sisihan kuantitatif dan kualitatif kromosom yang diminati.

Pada penghujung abad yang lalu, selepas kejayaan penggunaan pewarna pendarfluor untuk mengotorkan probe DNA, kaedah FISH menerima namanya dan sejak itu telah dipertingkatkan dan dipelbagaikan secara intensif.

Teknik analisis IKAN moden berusaha untuk memastikan bahawa adalah mungkin untuk mendapatkan maklumat yang paling lengkap untuk analisis bahan genetik yang dipilih dalam satu prosedur hibridisasi.

Hakikatnya ialah sekali selepas penghibridan, hanya bilangan kromosom yang terhad daripada bahan sitogenetik yang sama boleh dinilai. Keupayaan untuk menghibridkan semula rantaian DNA berkurangan dari semasa ke semasa.

Oleh itu, pada masa ini dalam diagnostik genetik, kaedah hibridisasi in situ paling kerap digunakan untuk menjawab soalan dengan cepat mengenai aneuploidi sedia ada yang paling biasa pada kromosom 21, 13, 18, serta pada kromosom seks X, Y.

Mana-mana sampel tisu atau sel sesuai untuk analisis IKAN.

Dalam diagnosis pranatal, ini mungkin sampel darah, ejakulasi, atau.

Kepantasan mendapatkan keputusan dipastikan oleh fakta bahawa sel-sel yang diperoleh daripada bahan yang diambil untuk analisis tidak perlu ditanam dalam media nutrien, mencapai pembahagiannya kepada nombor yang diperlukan, seperti kaedah karyotyping klasik.

Bahan yang dipilih menjalani penyediaan khas untuk mendapatkan suspensi sel tulen pekat. Seterusnya, proses denaturasi sampel DNA dan DNA asli sampel yang dikaji dijalankan kepada keadaan terkandas tunggal dan proses hibridisasi, di mana probe DNA berwarna diinkubasi dengan DNA sampel.

Oleh itu, kromosom (berwarna) yang dikehendaki dalam sel divisualisasikan, bilangannya, struktur struktur genetik, dan lain-lain dinilai. Kanta mata mikroskop pendarfluor khas membolehkan anda memeriksa rantai DNA yang bercahaya.

Pada masa ini, kaedah FISH digunakan secara meluas untuk tujuan diagnostik untuk mengenal pasti penyakit genetik, penyimpangan kromosom dalam perubatan reproduktif, onkologi, hematologi, dosimetri biologi, dsb.

Bagaimanakah diagnostik IKAN untuk janin digunakan?

Dalam bidang perubatan reproduktif, kaedah FISH, sebagai salah satu kaedah diagnostik sitogenetik molekul, digunakan pada semua peringkat.

• beberapa.

Untuk menentukan karyotype ibu bapa masa depan, ia dijalankan sekali, kerana genom manusia kekal tidak berubah sepanjang hayat.

Karyotaip pasangan sebelum mengandung anak akan membantu mengenal pasti sama ada ibu bapa adalah pembawa patologi genetik yang diwarisi, termasuk yang tersembunyi. Serta keadaan umum genom ibu dan bapa yang mengandung, yang boleh menjejaskan kejayaan mengandung bayi dan membawa kehamilan hingga ke bulan.

Diagnostik menggunakan kaedah FISH dalam kes ini sering bertindak sebagai pemeriksaan tambahan kepada karyotyping klasik, apabila mengenal pasti patologi kromosom dalam bahan ujian (darah vena ibu bapa), jika terdapat kecurigaan mozek.

Pemeriksaan tambahan menggunakan kaedah FISH dengan pasti akan mengesahkan atau menafikan kehadiran anomali yang disyaki dalam sel induk masa depan.

• Kajian ejakulasi.

Ditunjukkan untuk kesukaran dengan pembiakan dalam pasangan kerana "faktor lelaki". Analisis sperma menggunakan kaedah FISH akan membolehkan anda menilai tahap sperma abnormal dalam set kromosom, serta menentukan sama ada seorang lelaki adalah pembawa penyakit genetik yang dikaitkan dengan seks.

Jika pasangan itu kemudiannya menggunakan konsep IVF, analisis IKAN terhadap ejakulasi akan membolehkan pemilihan sperma berkualiti tinggi untuk menyuburkan telur.

• Dengan IVF.

Untuk diagnosis genetik praimplantasi (PGD). Berdasarkan hasil kajian karyotype ibu bapa, kemungkinan penyimpangan kromosom dan genetik yang boleh dihantar kepada embrio ditentukan.

Terima kasih kepada keupayaan diagnostik FISH, kajian kesihatan genetik embrio yang terhasil boleh dijalankan dalam masa beberapa jam sebelum dipindahkan ke rongga rahim untuk memastikan kehamilan dengan janin yang diketahui sihat.

Di samping itu, keupayaan PGD memungkinkan untuk menentukan jantina embrio, dan, oleh itu, untuk "memerintahkan" jantina anak yang belum lahir, jika perlu.

• Semasa mengandung.

Dalam diagnostik pranatal: analisis sel janin yang diperoleh menggunakan pensampelan vilus chorionic, amniocentesis atau cordocentesis menggunakan kaedah FISH biasanya ditawarkan oleh pusat perubatan sebagai tambahan kepada kajian genetik klasik sel janin (karyotyping).

Kaedah ini sangat diperlukan apabila perlu untuk mendapatkan jawapan dengan cepat tentang kehadiran kecacatan kromosom yang paling biasa pada janin: trisomi pada kromosom 21, 18, 13, penyimpangan dalam kromosom X dan Y, kadang-kadang juga aneuploidi pada kromosom 14 (atau 17), 15, 16.

Kelebihan analisis IKAN

Menjalankan analisis genetik menggunakan kaedah FISH, walaupun hari ini masih menjadi kaedah tambahan untuk mendiagnosis patologi kromosom, kemungkinan pelaksanaannya ditentukan oleh kelebihan yang tidak dapat dinafikan:

• kelajuan mendapatkan keputusan mengenai kromosom yang diuji adalah dalam masa beberapa jam - tidak lebih daripada 72.

Ini mungkin penting jika nasib kehamilan bergantung kepada diagnosis pakar genetik;

• sensitiviti tinggi dan kebolehpercayaan kaedah FISH - analisis yang berjaya adalah mungkin pada jumlah biomaterial yang boleh diabaikan - satu sel cukup, ralat keputusan tidak lebih daripada 0.5%.

Ini mungkin penting apabila bilangan sel dalam sampel asal adalah terhad, contohnya, apabila pembahagiannya lemah.

• kemungkinan melakukan diagnostik menggunakan kaedah FISH pada mana-mana peringkat kehamilan (dari minggu ke-7) dan menggunakan mana-mana sampel biologi: serpihan chorion, cecair amniotik, darah janin, dll.

Di manakah saya boleh membuat diagnosis menggunakan kaedah FISH?

Di Moscow, kaedah FISH untuk diagnosis pranatal keabnormalan kromosom janin digunakan di pusat perubatan berikut:

Sebagai peraturan, klinik menawarkan perkhidmatan diagnostik IKAN sebagai sebahagian daripada karyotyping janin lengkap melalui campur tangan invasif dengan bayaran tambahan. Dan, sebagai peraturan, ibu bapa masa depan bersetuju untuk membayar tambahan, kerana terima kasih kepada kaedah FISH, hanya dalam beberapa hari anda boleh mengetahui perkara yang paling penting tentang bayi anda

Kanser payudara tidak boleh dipandang remeh. Ia boleh menjejaskan semua orang - muda dan tua, wanita dan lelaki. Kerumitan rawatan yang melampau, kematian yang tinggi, dan dinamika morbiditi yang semakin meningkat adalah sebab peningkatan perhatian kepada masalah ini daripada perubatan.

Sehingga kini, tiada kaedah rawatan yang 100% menjamin hasil positif penyakit ini. Kaedah sedia ada adalah intensif buruh, mahal dan boleh menyebabkan kerosakan cagaran yang besar kepada badan.

Ini adalah salah satu penyakit yang boleh kita katakan bahawa rawatan terbaik adalah penghapusan faktor risiko dan diagnosis tepat pada masanya.

Kecenderungan untuk kanser payudara

Walaupun fakta bahawa kanser pertama kali diterangkan pada abad ke-15 SM dan saintis mempunyai sejumlah besar maklumat, ia masih tidak mencukupi untuk menerangkan sepenuhnya etiologi kanser payudara.

Faktor persekitaran yang mempengaruhi kejadian atau perkembangan kanser tidak dijumpai dengan kebolehpercayaan yang mencukupi. Kajian individu yang menunjukkan karsinogen tertentu tidak mendapat pengiktirafan penuh oleh seluruh komuniti perubatan. Walau bagaimanapun, terdapat beberapa korelasi antara kanser payudara dan yang berikut:

Salah satu faktor terpenting yang disenaraikan di atas ialah umur: selama bertahun-tahun, kemungkinan untuk mendapat kanser payudara meningkat mengikut urutan magnitud. Secara umumnya, kerumitan isu etiologi kanser payudara adalah disebabkan oleh sifat genetiknya. Tidak diketahui mengapa kerosakan tiba-tiba berlaku dan tisu payudara mula membahagi secara tidak terkawal, menjejaskan tisu jiran dan membawa kepada metastasis ke seluruh badan.

Tetapi saintis bersetuju dengan satu perkara: kehidupan moden lebih kondusif kepada kanser berbanding sebelum ini.

Oleh itu, dos sinaran elektromagnet yang tinggi, ekologi yang buruk, paras oksigen yang rendah di bandar, ketidakaktifan fizikal, tekanan, dan lain-lain ditunjukkan. Seseorang tidak boleh tidak mengambil kira umur yang meningkat dengan ketara, kerana kanser adalah penyakit yang biasanya datang dalam dewasa.

Ujian yang diperlukan

Kemungkinan hasil kanser yang positif secara langsung berkaitan dengan masa permulaan rawatan, jadi sikap terhadap diagnosis harus menjadi yang paling serius.

Kaedah diagnostik berikut diperlukan:

• pemeriksaan sendiri bulanan (ujian palpation);
• semak dengan doktor sekali seperempat;
• Ultrasound setiap enam bulan;
• MRI setiap tahun.

Mamogram (x-ray) tidak disyorkan sebelum umur 30 tahun, kerana pendedahan kepada radiasi sebaiknya dielakkan pada usia muda. Jika anda mengesyaki kanser payudara, anda perlu menjalani ujian berikut:

Kaedah penyelidikan IKAN

Kajian IKAN (analisis IKAN) adalah kaedah sitogenetik yang digunakan untuk mengkaji protein membran HER2 (Human Estrogen Receptor2). Semasa menjalankan kajian FISH, probe DNA yang dilabelkan dengan pewarna pendarfluor digunakan. Probe ini dimasukkan ke dalam kawasan DNA yang dikehendaki dan dapat mengukur tahap penguatan HER2. Oleh kerana kajian dijalankan dari masa ke masa dan gen terus membahagi, adalah mungkin untuk menganggarkan nisbah bilangan salinan gen HER2 kepada bilangan salinan rantau yang membahagi biasa. Jika lebih besar daripada atau sama dengan 2, hasilnya dianggap positif HER2.

Analisis IKAN memainkan peranan penting dalam prognosis kanser dan pilihan prinsip rawatan. Oleh itu, penguatan atau peningkatan aktiviti protein ini berlaku dalam 30% kes kanser dan memerlukan kaedah rawatan khas yang bertujuan untuk menghalang fungsinya. Dalam keadaan biasa, HER2 mengawal pertumbuhan sel, pembahagian dan pembaikan diri. Dalam kes kanser, protein ini menghasilkan terlalu banyak reseptor membran dan mengarahkan sel untuk membahagi secara tidak terkawal. Ini adalah bagaimana sel bertukar menjadi kanser.

Jika keputusan ujian FISH positif, rawatan yang bertujuan untuk menyekat HER2 ditetapkan. Ubat utama hari ini ialah Herceptin. Jika ujian ini tidak dilakukan atau keputusannya diabaikan, pilihan rawatan akan menjadi tidak betul dan kanser akan berkembang ke peringkat terminal. Di samping itu, kanser sedemikian adalah lebih agresif dalam pembangunan daripada kanser HER2-negatif.

Analisis imunohistokimia dilakukan bersama dengan analisis IKAN. Ini juga merupakan kaedah gen untuk mengkaji protein HER2, tetapi dalam kes analisis imunohistokimia, jumlah protein HER2 dikesan bukan dalam sel, tetapi dalam sampel tertentu.

Ia berbeza daripada kaedah ikan dalam kos, tetapi output memberikan hasil yang kurang bermaklumat, yang bergantung kepada penyelidik, makmal dan kriteria yang digunakan. Jumlah protein HER2 ditentukan oleh warna sampel ujian dan dijaringkan pada skala dari sifar hingga tiga. Bersama-sama, kedua-dua kaedah ini adalah standard emas untuk mengkaji status HER2 pesakit.

Oleh itu, walaupun imejnya, kanser payudara agak boleh dirawat. Pakar onkologi mempunyai semua pencapaian perubatan yang maju dalam senjata mereka. Semua cara ini agak mudah diakses oleh rakyat biasa.

Perkara utama dalam hasil yang berjaya penyakit ini adalah ujian tepat pada masanya untuk kanser payudara, memilih kaedah rawatan yang betul dan memulakannya lebih awal. Jangan putus asa jika tiada keputusan, kerana latar belakang emosi yang positif juga mempunyai kesan yang signifikan terhadap perjalanan penyakit.