Pembuangan imun dalam diagnosis HIV. Immunoblotting (pengesanan antibodi dalam sera pesakit kepada antigen patogen tertentu) Hibridisasi asid nukleik

Enzim immunoassay (ELISA)

Enzim immunoassay (ELISA) dijalankan dalam dua peringkat: yang pertama ialah interaksi antibodi dengan antigen, yang kedua ialah petunjuk enzimatik kompleks antigen-antibodi disebabkan oleh penampilan pewarnaan campuran tindak balas dan pendaftaran pewarnaan secara visual atau dengan kaedah spektrofotometri.

Terdapat dua varian ELISA: fasa pepejal dan fasa cecair, berbeza dalam cara komponen tindak balas imunokimia diasingkan. Berbanding dengan kaedah yang diterangkan sebelum ini untuk mengesan antigen dan antibodi, ELISA mempunyai kelebihan yang ketara:

sensitiviti tinggi, membolehkan untuk menentukan sehingga 0.05 ng / ml bahan;

kemungkinan menggunakan isipadu minimum bahan ujian (1--2 µl);

kemungkinan perakaunan instrumental atau visual tindak balas;

kepantasan dan kemungkinan mengautomasikan semua peringkat tindak balas.

ELISA kini digunakan secara meluas dalam amalan untuk diagnosis banyak penyakit berjangkit bakteria, etiologi kulat, jangkitan protozoal dan helminthiases, tetapi terutamanya jangkitan virus, khususnya hepatitis A, B, C, D, E, G, jangkitan HIV, herpesvirus, rotavirus , adenovirus, astrovirus, parvovirus dan jangkitan lain.

penghapusan imun

Prinsip kaedah penghapusan imun adalah untuk mengesan antibodi terhadap antigen individu patogen. Menggunakan kaedah ini, antibodi kepada antigen HIV (glikoprotein sampul virus, protein teras dan enzim virus) ditentukan. Keputusan penghapusan imun dinilai sebagai positif, dipersoalkan dan negatif, bergantung pada set kuantitatif dan kualitatif antibodi yang dikesan.

Perlu diingatkan bahawa penghapusan imun adalah lebih rendah dalam kepekaan terhadap ELISA; dalam beberapa kes, keputusan negatif mungkin direkodkan dengan kehadiran jangkitan HIV pada pesakit. Walau bagaimanapun, kemungkinan mendaftarkan keputusan positif palsu dalam ELISA dalam jangkitan HIV memerlukan pendekatan bersepadu untuk diagnosis jangkitan HIV, dengan mengambil kira, sebagai tambahan kepada keputusan tindak balas imunologi (ELISA, imun blotting), data epidemiologi dan klinikal.

Tindak balas rantai polimerase (PCR)

Kaedah PCR telah dibangunkan oleh ahli biokimia Amerika Kary Mullis pada tahun 1983 berdasarkan penggunaan polimerase DNA termostabil (Tag polymerase) yang ditemui oleh beliau. Prinsip kaedah ini adalah untuk meningkatkan sebanyak 10 6 -10 8 kali ganda bilangan salinan kawasan DNA tertentu patogen yang dimangkin secara in vitro oleh polimerase DNA dalam mod automatik.

Di bawah keadaan buatan, pembiakan proses replikasi kawasan genom khusus untuk spesies atau genus patogen tertentu adalah mungkin dengan syarat jujukan nukleotidanya diketahui. Penggunaan kaedah untuk mengesan produk replikasi kawasan tersebut (amplikon) memungkinkan untuk memastikan kehadiran patogen dalam sampel ujian.

Penyiapan rantaian pelengkap yang diterangkan di atas bermula hanya dalam blok permulaan tertentu, iaitu bahagian bertali dua pendek. Apabila blok tersebut dilekatkan pada kawasan tertentu DNA, proses sintesis helai baru diarahkan hanya di kawasan yang dipilih, dan bukan sepanjang keseluruhan helai DNA. Dua primer oligonukleotida, yang dipanggil primer, digunakan untuk mencipta blok permulaan di kawasan DNA tertentu. Primer adalah pelengkap kepada urutan DNA pada sempadan kiri dan kanan serpihan tertentu dan berorientasikan supaya penyiapan untaian DNA baru berlaku hanya di antara mereka.

Kepada kelebihan kaedah PCR hendaklah termasuk:

sensitiviti tinggi, membolehkan untuk menentukan 10-1000 sel dalam sampel;

kekhususan yang tinggi, kerana serpihan DNA yang unik untuk patogen ini dikesan dalam bahan ujian;

kesejagatan prosedur untuk mengesan pelbagai patogen daripada satu bioassay;

Kelajuan analisis tinggi (4--4.5 jam);

Kemungkinan mendiagnosis bukan sahaja akut, tetapi juga jangkitan laten.

Penggunaan PCR berkesan untuk mendiagnosis pelbagai jangkitan bakteria dan virus.

Baru-baru ini, kaedah kuantitatif analisis PCR telah berjaya dilaksanakan, yang memungkinkan untuk menentukan kepekatan patogen dalam bahan (muatan mikrob atau virus), sebagai contoh, untuk menilai aktiviti replikasi virus hepatitis B, HIV C. .

Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa kaedah PCR juga mempunyai batasannya, khususnya, untuk diagnosis jangkitan yang disebabkan oleh autoflora oportunistik.

Hibridisasi asid nukleik

hibridisasi asid nukleik seperti PCR, membolehkan anda mengenal pasti patogen dalam sampel tanpa pengasingan terlebih dahulu. Untuk analisis, siasatan DNA atau RNA untai tunggal disintesis yang merupakan pelengkap kepada urutan nukleotida spesifik patogen. Probe dilabelkan dengan radionuklid, enzim atau label lain yang mudah dikenali. Bahan ujian tertakluk kepada pemprosesan untuk tujuan lisis mikroorganisma yang terdapat dalam bioassay, pengasingan dan denaturasi DNA. Seterusnya, probe diinkubasi dengan sampel ujian dan jumlah DNA berlabel yang telah memasuki hibridisasi dengan DNA dalam sampel ujian diukur. Tindak balas boleh berlaku pada kedua-dua sorben fasa pepejal dan dalam larutan; walau bagaimanapun, syarat wajib ialah membasuh jumlah yang tidak terikat probe berlabel. Kepekaan kaedah hibridisasi asid nukleik adalah lebih rendah daripada PCR dan ialah 103 sel mikrob setiap sampel.

Apabila saya menjalani ujian untuk STD, saya memutuskan untuk menjalani ujian HIV. Keesokan harinya, saya menerima ujian siap sedia untuk ifa, kecuali HIV. Akibatnya, saya disahkan menghidap klamidia. Herpes dan mikroplasmosis. Tetapi vich tidak pernah datang. Mereka menghubungi saya dalam masa 3 hari dan mengatakan anda perlu datang ke pusat AIDS untuk mengambil semula darah. Bolehkah Imunablot Menjadi Positif Palsu dalam Penyakit Chlamydia Mycraplasmosis HPV Herpes

Pakar Woman.ru

Dapatkan pendapat pakar tentang topik anda

Anastasia Shesterikova

Rusina Irina Vladimirovna

Pakar Psikologi, Melegakan Tekanan. Pakar dari b17.ru

Olga Yurievna Diganaeva

Pakar psikologi. Pakar dari b17.ru

Olga Borisenko

Pakar psikologi, ahli terapi Gestalt. Pakar dari b17.ru

Dmitry Valerievich Tishakov

Pakar psikologi, Penyelia, ahli terapi keluarga sistemik. Pakar dari b17.ru

Shiyan Olga Vasilievna

Psikologi, Psikologi-perunding. Pakar dari b17.ru

Oksana Lushankina

Psikologi, Hubungan dalam keluarga. Pakar dari b17.ru

Anna Dashevskaya

Pakar psikologi, perundingan Skype. Pakar dari b17.ru

Irina Bukina

Pakar psikologi. Pakar dari b17.ru

Aksyonova Anna Mikhailovna

Psikologi, Calon dalam analisis kumpulan. Pakar dari b17.ru

Saya tidak mahu menakutkan anda, tetapi apabila mereka memanggil anda ke pusat AIDS, ia hampir selalu positif, jangan ambil semula, semoga berjaya untuk anda, perkara utama adalah mengambil terapi dan hidup lama

Seorang rakan telah hidup dengan HIV selama sepuluh tahun, menjaga dirinya sendiri.
Mereka mengatakan bahawa dalam tiga tahun mereka mungkin akan menemui penawar.
Walau apa pun, jangan putus asa dan jangan sebarkan, dapatkan rawatan

Tidak, IB tidak boleh positif palsu dan tiada STD menjejaskan analisis ini, jika ia positif, maka malangnya, anda mempunyai HIV, anda perlu memantau sel imun anda dan memulakan terapi tepat pada masanya.

malangnya, tidak ((jika mereka menghubungi pusat, maka ia pasti HIV

Setakat yang saya tahu, keputusan imunoblot pertama dan seterusnya boleh dipersoalkan. bukan positif palsu, tetapi diragui. dan kemudian analisis semula diperintahkan. Berikut adalah teks dari tapak:
“Imun blotting paling kerap digunakan untuk mengesahkan diagnosis jangkitan HIV. WHO menganggap sera positif jika antibodi kepada mana-mana dua protein sampul HIV dikesan melalui immunoblotting. Menurut pengesyoran ini, jika terdapat tindak balas dengan hanya satu daripada protein sampul surat (gp160, gp120, gp41) dalam kombinasi dengan atau tanpa tindak balas dengan protein lain, hasilnya dianggap meragukan dan kajian kedua disyorkan menggunakan kit daripada siri yang berbeza atau dari syarikat lain. Jika selepas itu keputusan masih diragui, kajian diteruskan setiap 3 bulan.
anda boleh google. jika ya, saya harap anda tidak positif HIV. tetapi jika ia disahkan, ketahuilah bahawa hari ini dengan diagnosis ini mereka hidup dan hidup selagi orang sihat dan melahirkan anak. syarat utama ialah disiplin dalam rawatan. kesihatan kepada anda!

Terapi antiretroviral dalam talian

Kalkulator

Tapak ini bertujuan untuk pekerja perubatan dan farmaseutikal 18+

Mentafsir analisis - imunoblot

Tolong bantu saya menguraikan analisis
ENV(GP160)+
ENV(GP110/120)+
ENV(GP41)+
GAG(P55)+
GAG(P40)+
GAG(P25)+
POL(P68)+
POL(P52)+
POL(P34)+

hello! 2.5 tahun yang lalu saya mengambil ujian HIV, terdapat imunoblot seperti itu:
Gp-160+, Gp-110/120+, Gp-41+, p17+, p25+, p31+, p34+, p52+, p55+, p68+. Dan berikut ialah imunoblot dari 30/05/18: Gp-160+, Gp-41+, GAG 1 -, poll+, env2-. Tidak jelas apa maksud roll +? Adakah dia seorang sahaja di sana atau belum didedahkan? Dan ke manakah perginya protein selebihnya?

Pol dan Env ialah gen yang mengekod kumpulan protein. Anggap ia hanya rekod yang berbeza. Soalannya berbeza. Dan apa yang kita tunggu? Mengapa kita mempertimbangkan tompok? Semuanya cukup jelas. Sesuatu perlu dilakukan.

Sudah terbiasa dengan fakta bahawa saya mempunyai HIV. Dan bersedia untuk terapi.
Hanya ingin tahu untuk mendengar pendapat anda. Adakah ini jangkitan baru atau saya kehilangan sesuatu? Atau kadang-kadang ia berlaku bahawa imunoblot perlahan-lahan terbuka banyak?

Hari ini saya melihat analisis saya dalam fail peribadi saya (dilakukan dalam SC):
ELISA pada sistem ujian pertama - positif
ELISA pada sistem ujian kedua adalah negatif (bagaimana?)

IB selanjutnya (dilakukan secara invitro dan SC sebulan yang lalu):
imunoblot pada sistem ujian pertama: gp 160+, gp 41+
imunoblot pada sistem ujian lain: gp41+, p24+, p17+
imunoblot pada sistem ujian ketiga: gp160+, gp120+, gp41+, p24+

Menurut ramalan saya, saya mungkin dijangkiti setahun yang lalu (peringkat akut adalah pada April di suatu tempat), atau 9 bulan yang lalu, tetapi secara umum - xs apabila) Saya selalu menggunakan perlindungan dan melakukan hubungan seks tanpa kondom hanya sekali pada musim luruh. 2017.

Hari ini sekali lagi saya menyampaikan VN dan IP. Teru akan bermula dalam sebulan, apabila pesanan tiba.

Tarikh dimasukkan ke dalam ujian yang dinyatakan.

Tampalan pertama sebelum ELISA? Tidak berdegup. Tidak ada masa di sini yang membolehkan kita mengatakan bahawa jangkitan baru berkemungkinan besar, atau sebaliknya.
Ia akan kekal menjadi misteri jika anda tidak sengaja mencari sumber dan membandingkannya.

Untuk menjelaskan, maka

Diserahkan secara Invitro.
IFA pertama ialah 11 Mei.
Kemudian serum yang sama pergi ke blot dan analisis positif masuk, di mana dua protein dikenal pasti.
gp 160+, gp 41+

Kemudian saya sudah menyerahkan kepada SC semula.
Menderma darah pada 29 Mei.
Dan di sana dia dijalankan melalui beberapa sistem ujian, di mana yang pertama menunjukkan negatif, yang kedua positif. ELISA negatif adalah kelakar.
Kemudian serum yang sama pergi ke blot di mana data berasal:

Sistem ujian pertama: gp41+, p24+, p17+
Sistem ujian kedua: gp160+, gp120+, gp41+, p24+

Tetapi bukan maksudnya.
Analisis baru IP telah datang - 754. Ini menggembirakan. VN belum bersedia lagi. Sebaik sahaja ia tiba, saya mungkin akan mula teru.

Saya 80% pasti bahawa jangkitan itu adalah setahun yang lalu. Dan fakta bahawa tompok perlahan-lahan dibuka dan ELISA negatif adalah pelik. Atau adakah ia dalam julat normal?

ELISA negatif adalah kelakar. Saya juga ingin mengetahui nama sistem untuk menuliskannya dalam buku nota hitam. Walaupun, saat ini, jika anda tidak mengambil teori dengan perkahwinan, adalah sangat untuk jangkitan awal.
Saya 80% pasti bahawa jangkitan itu adalah setahun yang lalu. Noda buruk untuk tempoh itu. Tidak mustahil, tetapi tidak mungkin.

Pada satu ketika, saya juga mula meragui keputusan ujian HIV - jadi saya menunggu VN.
Di sini titik terakhir dalam soalan akan diletakkan.

Adakah ia juga dianggap dalam julat biasa bahawa IP telah berkembang sebanyak 200 salinan tanpa tera dalam sebulan? Saya mengambil Ursosan sekarang untuk polip dalam pundi hempedu - sisipan mengatakan bahawa ubat itu meningkatkan imuniti.

Ia adalah perlu untuk menilai kedua-duanya dengan kandungan relatif, dan mengambil kira data satu makmal dengan satu kaedah pengiraan. Kerana - Tuhan tahu apa yang berlaku dengan CD4.

Secara amnya, kiraan CD4 ialah 780 sel/µl. VN - 250 salinan / ml.
Ini tanpa terapi. Iaitu, CD4 daripada 486 melonjak kepada 780 dalam sebulan.
BH turun daripada 550 kepada 250 naskhah.

Namun, ini tidak pelik, atau adakah lompatan sedemikian dalam julat normal? Adakah masa untuk memulakan Tera?

hello! Saya lulus ifa tiga kali, setiap kali +, imunoblot p24+ p18+ datang daripada SC. Potensi risiko adalah lebih daripada enam bulan yang lalu. p24 menunjukkan bahawa ia masih HIV?

Blot ragu-ragu, ulangi selepas 6-8 minggu. Kemungkinan besar penggera palsu.

selamat hari!
Keputusan ujian kembali, termasuk bintik:

Hubungan berbahaya: 24/04/2018
Ujian ELISA untuk HIV 05/23/2018 (4 minggu dari sentuhan berbahaya atau 29 hari) keputusan "+"
Ujian ELISA untuk HIV 28/05/2018 (5 minggu dari sentuhan berbahaya atau 34 hari) keputusan "ambil semula"
Ujian ELISA untuk HIV 06/01/2018 (5 minggu dari sentuhan berbahaya atau 38 hari) keputusan "+"

Satu tompok datang dari analisis pertama (05/23/18):
GP160 sl.
P24 sl.

Ujian baharu lulus pada 06.06.2018 ELISA dan PCR HIV RNA di pusat AIDS tempatan. Kami masih menunggu keputusan.

Soalan Blot:
1. Jika P24 ada, adakah ia semestinya antigen HIV atau bolehkah protein tersebut dikesan dalam penyakit lain?
2. Apakah maksud singkatan "sl" di sebelah protein? Biasanya dalam tompok yang diterangkan terdapat + atau -
3. Apakah yang menentukan penggunaan blot? Dari istilah atau dari ciri-ciri individu badan?
4. Dengan tompok sebegitu pada minggu ke-4 daripada hubungan berbahaya, adakah terdapat kemungkinan bahawa ini bukan HIV?

Semoga harimu menyenangkan dan terima kasih.

1. tidak, ia mungkin hanya sejenis protein yang berbeza sifatnya. 2. lemah. mereka. ragu-ragu. 3. Tarikh akhir dan menyedari ciri individu, tetapi secara purata semuanya sangat dekat. 4. soalan itu salah, sentiasa ada peluang sehingga diagnosis ditubuhkan.

hello!
Tolong bantu saya untuk menavigasi hasil analisis dan memahami cara berkelakuan dengan betul supaya analisis yang berulang adalah betul.

Analisis diserahkan pada 25/05/2018
HIV IB
LAV BLOT 1 BARU - tidak ditentukan dari 29.05.2018
penanda HIV IB
gp 160+
gp 120 —
gp 41 -
p55+
p40-
p 24+
p18-
hlm 68 —
hlm 52 —
hlm 34 —
HIV ELISA
ADVIA Centaur HIV Ag-Ab Reaktiviti ELISA 12.00 positif (28.05.2018)
Adalah disyorkan untuk mengulangi analisis selepas 2 minggu.

Pada November 2017, saya mempunyai NPA, selepas itu saya mengambil ujian pada sistem ujian HIV Ag\Ab Combo Abbott Architect, kemudian keputusannya negatif.

Pada masa yang sama, saya mempunyai kiraan darah lengkap. Limfosit meningkat sedikit, eosinofil betul-betul 0 (tetapi saya mempunyai penunjuk sedemikian untuk eosinofil sebelum ini.

Soalan utama ialah:
Apakah ubat-ubatan yang boleh dan tidak boleh diambil selama dua minggu ini? (Saya tidak mahu apa-apa untuk "berkelip")
Saya mengalami serangan alahan sekali-sekala, biasanya saya minum tavegil. Patutkah ia ditinggalkan?
Bolehkah antibiotik diambil sebelum ujian? (jika ditetapkan oleh doktor untuk rawatan jangkitan dan penyakit lain)

Immunoblotting dalam diagnostik HIV

Penghapusan imun (immunoblot, Western Blot, Western blot)- menggabungkan enzim immunoassay (ELISA) dengan pemindahan elektroforetik awal kepada jalur nitroselulosa (jalur) antigen virus.

Dalam nama saintifik yang indah ini, "blot" kemungkinan besar diterjemahkan sebagai "blot", dan "western" sebagai "western" mencerminkan arah pengedaran "blot" ini di atas kertas dari kiri ke kanan, iaitu, pada peta geografi ini sesuai dengan arah dari barat ke timur." Intipati kaedah "immune blot" ialah tindak balas imunoenzimatik dilakukan bukan dengan campuran antigen, tetapi dengan antigen HIV, yang sebelum ini diedarkan oleh imunoforesis ke dalam pecahan yang terletak mengikut berat molekul pada permukaan membran nitroselulosa. Akibatnya, protein utama HIV, pembawa penentu antigenik, diedarkan di atas permukaan dalam bentuk jalur berasingan, yang muncul semasa immunoassay enzim.

Immunoblot merangkumi beberapa peringkat:

Penyediaan jalur. Virus immunodeficiency (HIV), yang sebelum ini telah disucikan dan dimusnahkan kepada komponen konstituennya, tertakluk kepada elektroforesis, manakala antigen yang membentuk HIV dipisahkan mengikut berat molekul. Kemudian, dengan blotting (bersamaan dengan memerah dakwat berlebihan pada "blotter"), antigen dipindahkan ke jalur nitroselulosa, yang kini mengandungi spektrum jalur antigenik ciri HIV yang tidak dapat dilihat oleh mata.

Contoh kajian. Bahan ujian (serum, plasma darah pesakit, dsb.) digunakan pada jalur nitroselulosa, dan jika terdapat antibodi khusus dalam sampel, ia mengikat pada jalur antigenik (pelengkap) yang sepadan. Hasil daripada manipulasi seterusnya, hasil interaksi ini divisualisasikan - dibuat kelihatan.

Tafsiran hasil. Kehadiran jalur di kawasan tertentu plat nitroselulosa mengesahkan kehadiran dalam serum antibodi yang dikaji kepada antigen HIV yang ditakrifkan dengan ketat.

Pada masa ini, pembekuan imun (immunoblot) adalah kaedah utama untuk mengesahkan kehadiran antibodi khusus virus dalam serum ujian. Dalam sesetengah kes jangkitan HIV, sebelum seroconversion, antibodi spesifik lebih berkesan dikesan melalui immunoblotting daripada ELISA. Kajian imunisasi menunjukkan bahawa antibodi kepada gp 41 paling kerap dikesan dalam sera pesakit AIDS, dan pengesanan p24 pada orang yang diperiksa untuk tujuan profilaksis memerlukan kajian tambahan untuk kehadiran jangkitan HIV. Sistem ujian imunoblot berdasarkan protein rekombinan kejuruteraan genetik terbukti lebih spesifik daripada sistem konvensional berdasarkan lisat virus yang telah dimurnikan. Apabila menggunakan antigen rekombinan, bukan resap, tetapi jalur antigen sempit yang jelas terbentuk, yang mudah diakses untuk perakaunan dan penilaian.

Serum orang yang dijangkiti HIV-1, mengesan antibodi kepada protein dan glikoprotein utama berikut - protein sampul struktur (env) - gp160, gp120, gp41; nukleus (gag) - p17, p24, p55, serta enzim virus (pol) - p31, p51, p66. Untuk HIV-2, antibodi kepada env adalah tipikal - gp140, gp105, gp36; lelucon - p16, p25, p56; pol-p68.

Antara kaedah makmal yang diperlukan untuk mewujudkan kekhususan tindak balas, pengesanan antibodi kepada protein sampul HIV-1 - gp41, gp120, gp160, dan HIV-2 - gp36, gp105, gp140 mempunyai pengiktirafan yang paling besar.

WHO menganggap sera positif jika antibodi kepada mana-mana dua glikoprotein HIV dikesan melalui immunoblotting. Mengikut pengesyoran ini, jika terdapat tindak balas dengan hanya satu daripada protein sampul (rp 160, rp 120, rp 41) dalam kombinasi atau tanpa tindak balas dengan protein lain, hasilnya dianggap meragukan dan ujian kedua disyorkan menggunakan kit. dari siri lain atau dari syarikat lain. Jika selepas ini keputusan masih diragui, pemerhatian selama 6 bulan adalah disyorkan (penyelidikan selepas 3 bulan).

Kehadiran tindak balas positif dengan antigen p24 mungkin menunjukkan tempoh seroconversion, kerana antibodi kepada protein ini kadang-kadang muncul dahulu. Dalam kes ini, adalah disyorkan, bergantung kepada data klinikal dan epidemiologi, untuk mengulangi kajian dengan sampel serum yang diambil sekurang-kurangnya 2 minggu kemudian, dan ini betul-betul berlaku apabila sera berpasangan diperlukan dalam jangkitan HIV.

Tindak balas positif dengan protein gag dan pol tanpa kehadiran tindak balas dengan protein env mungkin mencerminkan peringkat seroconversion awal, dan mungkin juga menunjukkan jangkitan HIV-2 atau tindak balas tidak spesifik. Individu yang mempunyai keputusan sedemikian selepas ujian HIV-2 diperiksa semula selepas 3 bulan (dalam tempoh 6 bulan).

Soalan: Analisis berulang untuk HIV?

Saya telah diuji untuk jangkitan seksual (tiada gejala, saya mahukan keyakinan dalam hubungan dengan seorang wanita). Ujian HIV adalah positif. Berikutan ultrasound menunjukkan tumor pada buah pinggang, dikeluarkan (ternyata menjadi malignan).
Saya membaca buku oleh Sazonova I.M., ia mengatakan bahawa tumor malignan boleh memberikan keputusan ujian positif untuk HIV.
Mungkinkah ini berlaku, atau tiada apa yang boleh diharapkan?

Anda perlu menjalani ujian kawalan untuk HIV. Jika ujian HIV pertama ditentukan oleh ELISA, maka keputusannya mungkin positif palsu. Kebolehpercayaannya boleh diperiksa dengan kaedah diagnostik yang lebih sensitif - PCR (tindak balas rantai polimerase), yang menentukan DNA virus dalam darah.

Tolong. 12/16/10 ELISA (+) IB (+) kemudian dari 03/23/11 hingga 05/19/11 sembilan ELISA negatif (-) dan PCR kuantitatif. tidak ditentukan. pada tahun 2002 semasa mengandung ELISA kemudian (+) kemudian (-) tetapi IB sentiasa (-). dari 2004 hingga 2008 saya mengambil ELISA (-) 2 kali setahun, tetapi pada 30.04.08 ifa (+) dan IB-undefined. kemudian sekali lagi setiap 2 bulan menyerahkan IFA sentiasa (-). dan sejak disember 2010 dah tertulis kat atas.. Dalam masa yang sama saya tak pernah inject, suami selalu ada ELISA (-). CD4 980 sel. malah darah untuk sifilis dari 29.04 memberikan 3 +++ dan kemudian tiga kali. negatif setiap 10 hari. hepatitis semua (-). Adakah sesiapa mempunyai yang serupa. terima kasih.

Sila nyatakan sama ada anda menjalani RIBT (reaksi imobilisasi treponema pallidum), jika ya, apakah keputusan kajian ini.

tidak, tiada siapa yang menawarkan saya untuk melakukan analisis sedemikian. apakah yang akan ditunjukkan? Saya harap anda faham bahawa saya bercakap tentang ujian HIV. terima kasih. Adakah anda mempunyai kes yang sama dalam amalan anda? by the way, tentang keselamatan maklumat pada tahun 2008 adalah tidak pasti. ialah protein p24/25. pada tahun 2010 IB(+) protein gp160.41.120 p24.17.31. kemudian apabila ifa sekali lagi 3 kali (-) dihantar ke IB pada 4 April. hasilnya positif, tetapi protein gp 120 dan 41. selebihnya dicoret dengan pes merah dan di bahagian bawah dengan IB REPEAT merah. tetapi PCR dari nombor yang sama akan dinafikan. selepas 4 April saya serahkan IFA sudah 4 kali menafikan. segala-galanya di pusat AIDS, termasuk antigen dan antibodi. Sekarang saya sedang menunggu IB kedua dan PCR berkualiti tinggi. itu sahaja. PENAT SANGAT UNTUK BERFIKIR DAN MENUNGGU. Mengharap yang terbaik. TERIMA KASIH. Saya menantikan jawapan.

Jika anda bertanya apa-apa soalan, sila cuba lain kali untuk merumuskannya dengan lebih khusus, dengan penjelasan diagnosis. RIBT digunakan untuk mengesahkan diagnosis sifilis. Untuk diagnosis tepat jangkitan HIV, antibodi kepada HIV dalam darah ditentukan oleh ELISA dan imunoblot. Diagnosis disahkan hanya jika kedua-dua keputusan ini positif.

maaf kerana tidak tepat merumuskan soalan. Saya menulis bahawa pada bulan Disember IFA dan Imunoblot untuk HIV positif. tetapi sejak Mac ifa untuk HIV negatif 9 kali. jika saya didaftarkan di pusat AIDS, adakah ini berlaku secara prinsip. HIV sama ada sentiasa positif atau negatif. dan bagaimanakah imunoblot boleh diletakkan pada HIV jika keputusan ELISA adalah negatif? maka semua orang akan menafikan jika ifa perlu diperiksa untuk imunoblot, jadi apa yang berlaku? di pusat kelajuan kami, mereka tidak dapat menjawab saya apa-apa. Inilah yang saya berpaling kepada anda. terima kasih.

Malangnya, kedua-dua ELISA dan imunoblot boleh memberikan hasil positif palsu. Itulah sebabnya diagnosis HIV dianggap muktamad, hanya dengan pengesanan HIV secara serentak oleh ELISA dan kaedah imunoblot.

Hello Hari ini saya menerima keputusan ujian PCR untuk HIV, virus kualitatif tidak dikesan dan imunoblot berulang untuk HIV, hasilnya tidak pasti kerana protein 41. PUSAT AIDS mengatakan bahawa kemungkinan besar tidak ada HIV, tetapi dalam badan saya ada badan yang serupa strukturnya dengan HIV. dan apa pendapat anda, memandangkan soalan saya pada 15 dan 16 Jun (lihat di atas), adakah HIV atau tidak. TERIMA KASIH.

Dalam kes ini, diagnosis jangkitan HIV adalah diragui.

Anda menulis bahawa hanya dengan pengesanan HIV serentak dengan bantuan IF dan immunoblot, diagnosis HIV dianggap muktamad. Tetapi bagaimana dengan kes saya? lagipun ptsr akan menafikan. dan blot dan ifa melompat sepanjang masa. selama 9 tahun. beritahu saya, jika virus itu berada dalam darah saya, maka RNA dan DNAnya boleh ditentukan dengan tepat selama bertahun-tahun. dan adakah tempoh inkubasi atau "tetingkap" boleh bertahan bertahun-tahun? Adakah terdapat keputusan negatif palsu PCR untuk HIV diberikan tempoh masa sedemikian? Ya, saya terlupa untuk mengatakan bahawa ujian HIV pantas yang saya ambil di CPD sentiasa negatif. Atau bolehkah saya tidak bergantung kepada mereka juga? terima kasih.

Dalam kes ini, diagnostik PCR bukanlah kaedah utama untuk mengenal pasti dinamik proses - kaedah serologi lebih bermaklumat. Dalam kes ini, kebarangkalian keputusan negatif palsu adalah tinggi. ujian HIV pantas mempunyai ambang sensitiviti yang tinggi, oleh itu ia juga boleh memberikan keputusan negatif palsu.

maaf. Saya pasti menulis di tempat yang salah. sila jawab dalam subjek HIV atau bukan HIV. terima kasih.

Sekiranya anda tidak menerima pemberitahuan penerimaan balasan kepada mel anda, anda boleh melihat jawapan kepada soalan anda di alamat ini http://tiensmed.ru/news/answers/vich-ili-ne-vich- .html

hello! Tolong beritahu saya, untuk mendaftar dengan LCD (kini mengandung 10 minggu), saya lulus ujian untuk HIV, seorang doktor menghubungi saya beberapa hari yang lalu dan mengatakan bahawa ujian awal untuk HIV adalah positif (yang pertama dilakukan di Kirovograd, tetapi masih tiada keputusan rasmi dari Kyiv ), pada hari yang sama, di makmal bandar kami, dua ujian ekspres syarikat Pharmasco CITO TEST HIV 1/2 telah dilakukan, kedua-dua keputusan negatif, pembantu makmal mengatakan bahawa ujian ini adalah boleh dipercayai dan saya tidak perlu risau, kerana ini berlaku semasa kehamilan, Dan analisis tersebut hanya boleh mengelirukan. Doktor berkata untuk menderma darah sekali lagi dan saya menderma darah saya dua kali lagi untuk analisis di hospital yang berbeza (saya masih tidak mempunyai sebarang keputusan). Saya sangat bimbang, saya bukan penagih dadah, tidak ada hubungan seksual yang meragukan, jika saya sakit sangat jarang, ujian lain semuanya normal. Bolehkah ujian pantas dipercayai? Adakah ini benar-benar berlaku semasa kehamilan? Sangat menyakitkan doktor telah menakutkan saya. Terima kasih

Pertama sekali, anda perlu bertenang dan tidak memikirkan yang buruk. Kadang-kadang semasa mengandung, terdapat hasil positif palsu. Ia adalah perlu untuk menderma semula darah untuk HIV dan menunggu keputusan peperiksaan.

hello! Masalahnya ialah pada saya 2 bulan lalu ada hubungan seksual dengan gadis itu (sehingga kini kami bertemu). selepas 1.5 minggu suhu meningkat kepada 37.4. tak lama kemudian tidur. yang pasti, kami lulus analisis IF selepas 2 minggu dan sekali lagi selepas 1.5 bulan. Kedua-dua jawapan adalah negatif. tetapi saya masih mengalami demam dan batuk dengan peningkatan yang berubah-ubah. Bolehkah anda beritahu saya jika ada risiko? lagipun dah lama bekerja tanpa cuti dan seminggu lepas cuti sakit (orvi). ujian darah dan paru-paru adalah baik. terima kasih.

Suhu ini mungkin dikaitkan dengan penyakit virus, badan masih belum pulih, atau kerja berlebihan yang kronik. Sekiranya patologi organik dikecualikan, ujian darah dan air kencing am berada dalam julat normal, serta data kajian fluorografi juga berada dalam julat normal, maka adalah perlu untuk mengecualikan penyakit menular seksual: klamidia, mycoplasmosis, ureaplasmosis, yang boleh menyebabkan keradangan organ-organ pelvis kecil dan uretra dan, akibatnya, peningkatan suhu badan. Baca lebih lanjut mengenai sebab peningkatan suhu badan dengan mengklik pada pautan: Suhu tinggi.

Hello. Terdapat perkara sedemikian - Lebih daripada setahun yang lalu terdapat hubungan seksual tanpa perlindungan dengan seorang gadis berjalan. Dia meyakinkan saya bahawa dia tidak sakit dengan apa-apa, tetapi saya tidak boleh mempercayainya 100 peratus. Dia juga memberi jaminan bahawa dia telah menjalani pemeriksaan kesihatan sebelum mendapat pekerjaan (dia bekerja sebagai jurujual) dan semuanya baik-baik saja. 7 bulan selepas berhubung, saya masih lulus ujian HIV di makmal citylab - keputusannya negatif. Tetapi baru-baru ini saya sering mula sakit - selama 3 minggu sekarang, saya mengalami sakit tekak merah dan saya tidak dapat menyembuhkannya. Sekali lagi dia mula takut, tetapi tiba-tiba dia menangkapnya? Beritahu saya, adakah ini mungkin, dan adakah patut mempercayai analisis daripada citylab? Saya takut untuk mengalah lagi, saraf saya tidak akan tahan..

Sekiranya keputusannya negatif, maka kemungkinan besar anda tidak sakit dan tidak dijangkiti HIV/AIDS. Walau bagaimanapun, untuk menjelaskan diagnosis, adalah disyorkan untuk menganalisis semula di makmal khusus di institusi negeri; pemeriksaan ini dijalankan tanpa nama. Sekiranya rawatan diri tidak membawa hasil yang diingini, disyorkan untuk berunding dengan pakar otolaryngolog untuk menjalankan pemeriksaan yang mencukupi dan menetapkan rawatan yang sesuai. Baca lebih lanjut mengenai ujian HIV dalam satu siri artikel dengan mengklik pada pautan: HIV.

Beritahu saya, bolehkah anda memberi sebarang penerangan tentang makmal citylab? Walau bagaimanapun, tidak selalu mungkin untuk lulus analisis di institusi negara. Dan apakah peratusan peluang bagi seorang lelaki untuk dijangkiti melalui sentuhan tanpa perlindungan?

Malangnya, kami tidak memberikan penilaian perbandingan makmal dan institusi perubatan swasta. Sekiranya anda meragui kebolehpercayaan keputusan, jalankan pemeriksaan di pusat lain dan minta lesen untuk menyediakan perkhidmatan perubatan ini terlebih dahulu, sama ada pusat ini mempunyai hak untuk menjalankan pemeriksaan ini dan sama ada semuanya mematuhi piawaian yang diterima. Risiko jangkitan adalah sama bagi kedua-dua jantina melalui persetubuhan tanpa perlindungan. Baca lebih lanjut mengenai ujian HIV dalam satu siri artikel dengan mengklik pada pautan: HIV.

Selamat petang! Seorang kanak-kanak berumur 8 bulan telah diuji HIV oleh ELISA, gp160 + dan p25 + dijumpai dalam darah, selebihnya semua tolak, kesimpulan IB diragui. Berdasarkan analisis ini, ternyata kanak-kanak itu +? gp160 + gp110/120 - p68 - p55 - p52 - gp41 - p34 - p25 + p18 -

Malangnya, berdasarkan data yang diperoleh, adalah mustahil untuk membuat diagnosis dengan kebarangkalian 100 peratus, kerana keputusan positif palsu tidak dikecualikan. Untuk membuat diagnosis yang tepat, anda perlu menjalani beberapa siri peperiksaan, termasuk mengulang analisis ini oleh ELISA, serta lulus analisis menggunakan kaedah PCR. Selepas itu, anda harus menghubungi institusi perubatan khusus, di mana pakar penyakit berjangkit akan dapat menilai keputusan dalam kompleks. Anda boleh mengetahui lebih lanjut mengenai manifestasi jangkitan HIV di bahagian tematik laman web kami dengan mengklik pada pautan: HIV

Bolehkah ia menunjukkan hasil positif palsu dalam "ARI" atau penyakit berjangkit yang lebih akut? Di suatu tempat saya membaca bahawa dengan 58 penyakit atau lebih tinggi, ia boleh menunjukkan "+", termasuk vaksinasi terhadap hepatitis B, jika buah pinggang, dsb., menderita?

Terdapat kemungkinan hasil positif palsu, jadi saya mengesyorkan anda melakukan perkara berikut: analisis semula - oleh ELISA dan PCR, dan kemudian melawat semula pakar penyakit berjangkit. Anda boleh mengetahui lebih lanjut mengenai diagnosis jangkitan HIV dalam bahagian tematik: HIV

Selamat petang! Immunoblot tidak tentu disebabkan oleh protein p25. Apakah kemungkinan HIV?

Dalam keadaan ini, adalah perlu untuk mengkaji dengan teliti protokol kajian dalam kombinasi dengan penunjuk lain, kerana tidak mungkin untuk membuat andaian berdasarkan data ini. Agaknya, keputusan itu boleh dianggap meragukan dan pemeriksaan semula diperlukan selepas 3 bulan. Baca lebih lanjut di bahagian laman web kami: HIV

Selamat petang.
Bolehkah anda mengulas tentang ELISA untuk HIV
1 serum +3.559 k=13.3
+2.121 k=4.9
p 24 neg
Serum 2 +3.696 k=13.9
+2.477 k=5.7

Dalam kes ini, keputusan positif palsu tidak diketepikan, memandangkan kaedah ELISA adalah tidak langsung, jadi saya mengesyorkan agar anda mengambil analisis menggunakan kaedah yang berbeza dan lebih sensitif - imunisasi. Anda boleh mengetahui maklumat lebih terperinci tentang isu ini di bahagian yang berkaitan di laman web kami dengan mengklik pada pautan berikut: HIV

Selamat petang, beritahu saya apa yang perlu didengari? Setahun yang lalu, semasa merancang anak, saya dan suami menjalani semua ujian, termasuk untuk HIV (mereka mengambilnya dengan sangat serius dan betul), saya telah diperiksa di Kr. AIDS di Kyiv. Setelah lulus analisis di Pusat, jawapannya juga negatif untuk saya. Sekarang saya berada dalam kedudukan pada 14 minggu, i.e. Saya mendaftar, saya menjalani semua ujian dan sekali lagi jawapannya kembali, ujian HIV tidak pasti, saya lulus semula di klinik dan lulus ujian ekspres untuk bertenang di Dovir, tetapi mereka tidak menenangkan saya. , ujian ekspres menunjukkan keputusan positif (jalur kedua kurang jelas), sejurus selepas semua prosedur ini, tanpa membuang masa, saya memohon ke Pusat AIDS dan juga lulus analisis, saya sedang menunggu hasilnya. (Saya tidak boleh bertenang) Tolong beritahu saya sejauh mana anda boleh mempercayai ujian ekspres dan mengapa kali pertama tiada jawapan untuk ujian HIV? (saya dan suami menjalani gaya hidup sihat dan saling menyayangi). Terima kasih.

Jangan panik lebih awal - diagnostik ekspres bukanlah asas untuk membuat diagnosis HIV, ia membolehkan anda mengenal pasti kumpulan pesakit yang memerlukan kajian yang lebih mendalam. Dalam situasi sedemikian, adalah disyorkan untuk menjalankan penghapusan imun dan berunding secara peribadi dengan doktor penyakit berjangkit. Anda boleh mengetahui maklumat lebih terperinci mengenai isu ini di bahagian tematik laman web kami dengan mengklik pada pautan berikut: HIV. Anda juga boleh mendapatkan maklumat tambahan di bahagian berikut di tapak web kami: Diagnostik makmal

Salam, saya menghidapi penyakit berjangkit, baru hari ini saya discaj semasa saya pergi, doktor menelefon saya dan menjelaskan bahawa saya positif ifa, mula-mula saya pergi ke hospital, negatif, kemudian apabila saya mengambil semula ia menjadi positif. , mereka menghantar kajian imunoblot kepada falconers di atas gunung mereka berkata ia akan siap minggu depan, saya berada di hospital dengan sakit tekak dan virus parainfluenza, saya tiba dalam keadaan terkejut, saya masih tidak faham bagaimana untuk anggap saja, ekstrak untuk klinik saya juga telah dibuat menunjukkan bahawa ifa telah dijumpai dan menurunkan bahawa imunoblot sedang bekerja, jika esok saya dibenarkan keluar di klinik anda, maka semuanya akan ditunjukkan dalam ekstrak ini, seberapa besar kemungkinan HIV? adakah mungkin disebabkan saya telah dirawat kerana sakit tekak akibat virus parainfluenza, menunjukkan keputusan positif untuk ifa?

Kebarangkalian keputusan positif palsu adalah sangat tinggi. Kehadiran satu keputusan positif belum lagi memberi alasan untuk membuat diagnosis HIV, jadi kami mengesyorkan agar anda menunggu keputusan imunoblotting, dan kemudian berunding secara peribadi dengan pakar penyakit berjangkit mengenai pemeriksaan dan pemerhatian lanjut. Angina, parainfluenza dan selsema lain tidak menjejaskan keputusan analisis dengan ketara.

Saya mahu percaya, tetapi pada penghujung Ogos saya rasa tidak sihat, suhu saya meningkat, 37.5-38 Saya mempunyai najis yang longgar selama lebih kurang 4 hari, semasa bercuti di mana terdapat banyak disko, saya minum air paip seperti banyak. yang lain, kerana ia sangat mahal segelas air berharga 300 rubel, saya mengaitkan najis yang longgar dengan suhu sedemikian dengan sejenis jangkitan usus yang ditangkap di dalam air, saya tidak ingat dengan tepat, tetapi terdapat juga ruam kecil di bahagian atas badan, apabila saya tiba di rumah dengan suhu saya menghubungi doktor, dia menulis jangkitan rotavirus, selepas 5 hari sakit, saya secara sukarela meninggalkannya dan pergi bekerja di mana saya jatuh sakit beberapa hari kemudian dengan resdung (semasa itu tempoh masa saya terpaksa berada di jalanan) Saya menghubungkannya bahawa penurunan suhu yang besar akibat percutian dan keracunan menurunkan imuniti saya dan oleh itu saya diserang selsema sekali lagi dengan sinusitis, secara keseluruhannya ia sekali lagi cuti sakit, atas arahan Laura Saya minum klacid cf 500 selama 10 hari, ia berlalu, saya kembali bekerja selepas 3 minggu saya dalam perjalanan perniagaan ke negara gerbang selama 3 hari. penghawa dingin di dalam pengangkutan dan hotel adalah tanpa belas kasihan dan apabila pulang ke rumah, dalam pesawat saya mempunyai suhu 39.5. Di sini saya berada di rumah dengan suhu 40, memanggil doktor ke rumah, menulis orvi dan berkata saya tekak sangat merah, saya mempunyai tonsillitis kronik dan berkata ini kepada Laura, dia sendiri menulis untuk minum antibiotik Levolet r. menelefon ambulans kerana dia demam dan kadarnya adalah 40 dan tidak berkurangan, kemasukan ke hospital tidak ditawarkan, seterusnya hari cerita yang sama - ambulans memberikan suntikan antipiretik dan pergi. Kali ketiga saya berkeras untuk dimasukkan ke hospital, mereka hampir tidak membawa saya ke hospital penyakit berjangkit, di mana jangkitan campuran parainfluenza dan jangkitan adenovirus dikesan, tetapi selepas keluar, doktor - ketua jabatan mengatakan bahawa saya positif HIV ifa dan mereka melakukannya dua kali, saya terkejut, saya tidak tahu apa yang perlu saya lakukan Saya tidak boleh makan dan minum .dia berkata bahawa saya mempunyai menyatakan jangkitan HIV akut dan untuk pengesahan mereka menghantar analisis darah saya untuk imunoblot ke pusat AIDS,
kini, melukis analogi peristiwa yang berlaku kepada saya kebelakangan ini, serta 3 helaian cuti sakit berturut-turut, saya mencuba semua gejala dan saya ngeri dengan apa yang boleh berlaku, selepas discaj pada hari yang sama, saya pergi untuk mengambil analisis secara in vitro secara anatomi dan keesokan harinya keputusan untuk ifa adalah sama +
Saya minta maaf untuk maklumat terperinci seperti itu, tetapi saya hanyut dan dibunuh, saya minum ubat penenang yang kuat dan saya tidak mempunyai selera makan dan saya hampir tidak makan, saya telah kehilangan banyak berat badan
Saya juga mempunyai soalan sedemikian bahawa doktor dengan ekstrak dari hospital menunjukkan keputusan HIV oleh ifa telah dijumpai dan di bawah bahawa imunoblot sedang bekerja, tetapi sebaik sahaja saya menutup bl di klinik saya di tempat itu, semuanya akan ditulis di sana. apa yang perlu saya lakukan? ia tidak lagi dirahsiakan. Saya meminta doktor untuk tidak menulis analisis ini dalam ekstrak, yang mana dia menolak saya, sejauh mana hak saya untuk tidak mendedahkan maklumat dihormati di sini.

Malangnya, hasil kajian yang dijalankan di hospital sesuai dengan ekstrak, kerana doktor daerah yang hadir mesti mempunyai maklumat penuh tentang keadaan kesihatan anda. Dalam situasi ini, kami tidak bercakap tentang pendedahan maklumat, kerana ia hanya dipindahkan kepada doktor yang merawat yang lain, yang akan terus memerhati anda.

hello! Saya mengambil ujian untuk HIV kerana saya memerlukan sijil untuk FMS, mereka tidak memberikan ujian selama beberapa minggu, kemudian mereka menjemput saya ke kepala dan mereka memberi saya keputusan positif, mereka mengambil sekumpulan resit dan menghantar mereka ke pusat AIDS serantau untuk pemeriksaan lanjut, seperti yang tertera pada sijil. Saya mahu lulus di klinik lain dan kemudian pergi ke klinik serantau, atau adakah masuk akal untuk mengambilnya semula? Saya hanya tidak faham mengapa mereka tidak memberikannya untuk sekian lama, tetapi doktor mengatakan bahawa mereka didakwa melakukan beberapa jenis analisis dan saya berhutang 4 ribu rubel lagi, kerana jika mereka melakukannya, mereka mungkin akan memberikan butiran terperinci. maklumat tentang penyakit selain sijil?

Dalam situasi ini, seseorang tidak seharusnya panik terlebih dahulu - mendapatkan satu keputusan positif belum lagi membenarkan seseorang menilai dengan pasti tentang kemungkinan jangkitan, kerana keputusan positif palsu tidak dikecualikan. Kami mengesyorkan agar anda mengambil ujian sekali lagi dan jika terdapat keputusan positif, anda perlu menjalani pemeriksaan lain - immunoblotting. Sebagai peraturan, makmal tidak memberikan maklumat terperinci tentang keputusan, yang merupakan amalan biasa dan biasa. Semua soalan yang anda mungkin ada boleh dijawab oleh doktor yang merawat selepas pemeriksaan pada perundingan peribadi.

Saya terlupa untuk menambah bahawa dari awal bulan Jun hingga pertengahan September, saya melakukan kursus steroid anabolik sendiri, iaitu sustanon 250 adalah campuran testosteron dan stanozolol dengan primabolan, saya ingin mempersiapkan diri untuk musim panas dan percutian, bolehkah mereka menurunkan imuniti saya dan semua yang berlaku kepada saya.

Gangguan imun, serta kehadiran penyakit autoimun, boleh memberikan keputusan positif palsu ujian HIV. Itulah sebabnya, dalam hal mendapatkan 2 keputusan positif oleh ELISA, immunoblotting disyorkan, yang akan membolehkan anda menjawab dengan tepat soalan sama ada terdapat jangkitan atau tidak.

apakah maksud kehadiran penyakit autoimun?apakah itu?
secara umum, saya boleh mengatakan bahawa saya sering sakit sejak awal kanak-kanak dan bahkan beberapa tiga tahun lalu saya meminta doktor yang merawat untuk menjaga imuniti saya, kerana saya sentiasa letih dan sering sakit, kebanyakannya telinga, tekak, hidung , tetapi sepanjang masa terdapat keputusan negatif untuk HIV, saya saya menyerahkannya dengan cukup mudah, tanpa teragak-agak.

Keputusan positif palsu ujian HIV boleh berlaku selepas jangkitan virus baru-baru ini, vaksinasi hepatitis B, batuk kering, hepatitis, herpes, serta terhadap latar belakang penyakit autoimun seperti: rheumatoid arthritis, lupus erythematosus sistemik, dermatomyositis, scleroderma, penyakit tisu penghubung dan lain-lain.

Saya ingin menambah soalan saya, imunoblot saya datang, ia adalah negatif, tetapi doktor mengatakan bahawa kerana terdapat dua ifs + semasa saya berada di hospital penyakit berjangkit, saya masih perlu mengambil semula analisis, tetapi sedikit kemudian.

Dalam kes ini, taktik perubatan adalah wajar - kami mengesyorkan agar anda mengambil imunoblot sekali lagi dalam 1.5-2 bulan.

Apakah kebarangkalian: 2 ifa + perbezaan antara pensampelan darah kira-kira 2 hari, imunoblot - ; berada di hospital penyakit berjangkit dengan jangkitan adenovirus dan parainfluenza, di mana darah diambil, imunoblot dihantar ke pusat AIDS

Selamat petang! Saya telah mendaftar dengan LCD, menjalani semua ujian, doktor mengatakan bahawa saya mempunyai herpes dalam darah saya, kemudian mereka menghubungi dari pusat AIDS dan mengatakan bahawa saya perlu mengambilnya semula, saya memohon dan mereka memberitahu saya bahawa saya telah HIV positif, dalam keadaan panik saya pergi dengan suami saya untuk menyediakan kedua saya juga mempunyai ifa dan imunoblot + suami saya ada analisis, saya berikan lagi sebulan kemudian. Saya mempunyai + suami saya - kini saya hamil 23 minggu!

Dalam keadaan ini, malangnya, terdapat kemungkinan jangkitan HIV, tetapi diagnosis akhir tidak dapat dibuat walaupun dengan imunoblot positif, memandangkan keadaan kehamilan. Dalam keadaan ini, pengecualian keputusan positif palsu diperlukan, oleh itu kami mengesyorkan agar anda mengambil ujian sekali lagi dan berunding secara peribadi dengan pakar penyakit berjangkit.

jika imunoblot menunjukkan keputusan positif untuk HIV, dan saringan adalah negatif, keputusan yang manakah harus dipercayai?

Immunoblot adalah kajian yang lebih tepat, oleh itu, dalam kajian ini, jika keputusan positif diperoleh, ia dikehendaki meneruskan kajian dan melawat pakar penyakit berjangkit secara peribadi.

Apakah itu - imunoblot? Ini adalah kaedah biasa untuk diagnosis makmal jangkitan virus manusia. Ia dianggap sebagai salah satu cara yang paling tepat dan boleh dipercayai untuk mengesan kehadiran HIV. Dalam kebolehpercayaannya, ia mengatasi walaupun keputusan imunoblot dianggap tidak dapat disangkal dan muktamad.

maklumat am

Immunoblot - apakah itu? Untuk mengenali jangkitan HIV pada seseorang, perlu menjalani ujian makmal serum darah untuk kehadiran antibodi. Teknik Western blot juga dipanggil Western blot. Ia digunakan untuk mengesan jangkitan virus manusia sebagai kaedah pakar tambahan. Ia adalah perlu untuk mengesahkan ELISA - ujian makmal yang membolehkan anda menentukan kehadiran antibodi HIV dalam darah. Analisis ELISA positif disemak semula dengan immunoblotting. Ia dianggap paling sensitif, kompleks dan mahal.

tujuan

Apakah itu - imunoblot? Ini adalah teknik untuk ujian makmal serum darah untuk kehadiran antibodi kepada virus. Semasa kajian, pakar mengasingkan terlebih dahulu protein virus dalam gel dan memindahkannya ke membran nitroselulosa. Prosedur immunoblotting bertujuan untuk menentukan HIV pada peringkat yang berbeza. Pada peringkat pertama, virus yang telah disucikan daripada bahagian konstituennya tertakluk kepada elektroforesis, dan antigen yang membentuk komposisinya dipisahkan oleh berat molekul.

Ia membiak dalam sel hidup, membenamkan maklumat genetiknya ke dalamnya. Pada peringkat ini, seseorang menjadi pembawa virus HIV jika dia dijangkiti. Kekhususan penyakit ini adalah bahawa ia mungkin tidak nyata untuk masa yang lama. Virus ini memusnahkan limfosit, jadi imuniti manusia berkurangan, dan badan menjadi tidak dapat menahan jangkitan. Sekiranya HIV dirawat dengan cekap dan tepat pada masanya, pesakit akan hidup hingga tua. Kekurangan terapi tidak dapat dielakkan membawa kepada kematian. Dari saat jangkitan, tetapi tanpa rawatan, jangka hayat maksimum tidak lebih daripada sepuluh tahun.

Keanehan

Analisis imunoblot adalah kaedah yang boleh dipercayai yang membolehkan anda menentukan kehadiran antibodi terhadap antigen HIV jenis pertama dan kedua. Jika seseorang dijangkiti, antibodi muncul dalam masa dua minggu, yang boleh dikesan lebih lama kemudian. Keistimewaan HIV ialah bilangan antibodi meningkat dengan cepat dan kekal dalam darah pesakit. Walaupun mereka hadir, penyakit itu mungkin tidak nyata selama dua tahun atau lebih. Kaedah ELISA tidak selalu menentukan kehadiran penyakit dengan tepat, oleh itu, pengesahan keputusan menggunakan immunoblotting dan PCR diperlukan jika immunoassay enzim adalah positif.

Petunjuk untuk pelantikan

Apakah "imunoblot" ini telah diketahui, tetapi kepada siapa kajian ini ditetapkan? Sebab untuk mengambil ujian untuk kaedah immunoblotting adalah keputusan ELISA yang positif. Ia perlu melalui enzim immunoassay untuk pesakit yang akan dibedah. Di samping itu, analisis harus dibuat untuk wanita yang merancang kehamilan, serta untuk semua orang yang melakukan hubungan seks bebas. Berikan imunoblotting kepada pesakit HIV, jika keputusan ELISA diragui. Gejala membimbangkan berikut mungkin menjadi sebab untuk pergi ke doktor:

• penurunan berat badan yang tajam;
• kelemahan, kehilangan kapasiti kerja;
• gangguan usus (cirit-birit) yang berlangsung selama tiga minggu;
• dehidrasi badan;
• demam;
• nodus limfa bengkak di dalam badan;
• perkembangan kandidiasis, batuk kering, radang paru-paru, toksoplasmosis, pemburukan herpes.

Pesakit tidak perlu bersedia sebelum menderma darah vena. 8-10 jam sebelum kajian, anda tidak boleh makan. Ia tidak disyorkan untuk minum minuman beralkohol dan kopi, untuk melakukan senaman fizikal yang berat, untuk mengalami keseronokan sehari sebelum menderma darah.

Di mana untuk membuat analisis?

Di manakah saya boleh mendapatkan ujian HIV? ELISA, kajian imunoblot dijalankan di klinik swasta bandar, hasilnya dikeluarkan dalam masa sehari. Diagnosis segera juga mungkin. Di institusi perubatan negeri, ujian ELISA dan immunoblotting dijalankan secara percuma, mengikut undang-undang Persekutuan Rusia. Wanita hamil, serta pesakit yang akan dimasukkan ke hospital atau menjalani pembedahan, dikehendaki menjalani ujian untuk penyakit berjangkit.

Bagaimanakah penyelidikan dilakukan?

Bagaimanakah ELISA dilakukan? Immunoblot positif/negatif mengesahkan atau menafikan keputusan immunoassay enzim. Prosedur penyelidikan agak mudah. Pakar menjalankan pensampelan darah vena, dalam masa ia mengambil masa tidak lebih daripada lima minit. Selepas pensampelan, tapak suntikan hendaklah dibasmi kuman dan ditutup dengan plaster. Persampelan dijalankan pada perut kosong, jadi selepas prosedur tidak menyakitkan untuk makan sebatang coklat gelap atau minum minuman panas yang manis.

Untuk mendapatkan rujukan untuk analisis percuma di institusi perubatan awam, anda perlu melawat pengamal am. Secara umum, imunoblot tidak berbeza daripada ujian darah lain dari segi kaedah pensampelan. Metodologi penyelidikan adalah mudah. Jika virus terdapat dalam darah seseorang, badan mula menghasilkan antibodi untuk memusnahkannya. Setiap virus mempunyai set protein antigen sendiri. Pengesanan antibodi ini adalah asas kepada teknik Western blotting.

harga

Berapakah kos analisis? Immunoblot untuk HIV tidak digunakan untuk penyelidikan murah. Secara purata, pemeriksaan pemeriksaan oleh immunoassay enzim berharga dari 500 hingga 900 rubel. Immunoblotting adalah kajian pengesahan, kosnya adalah dari tiga hingga lima ribu rubel. Kaedah yang lebih kompleks jauh lebih mahal. Sebagai contoh, anda perlu membayar kira-kira 12,000 rubel untuknya.

Tafsiran hasil

Kaedah yang paling biasa untuk mendiagnosis jangkitan HIV ialah immunoassay enzim dan imunoblot. Ia digunakan untuk menentukan antibodi serum kepada virus immunodeficiency. Kehadiran jangkitan biasanya disahkan oleh dua ujian: saringan dan pengesahan. Tafsiran hasil kajian harus dijalankan oleh doktor, dia juga membuat diagnosis dan menetapkan rawatan. Jika imunoblot positif, ini bermakna virus terdapat dalam tubuh manusia.

Keputusan positif tidak sepatutnya menjadi alasan untuk rawatan diri, kerana setiap pesakit mungkin mempunyai gambaran sendiri tentang penyakit ini. Analisis kualitatif termasuk saringan dan pengesahan. Sekiranya pesakit tidak mempunyai virus, maka hasilnya ditunjukkan sebagai "negatif". Apabila dikesan oleh kaedah saringan, kajian pengesahan tambahan dijalankan. Imunoblot ialah analisis yang mengesahkan atau menafikan saringan. Jika kegelapan muncul pada jalur ujian di kawasan tertentu (tapak penyetempatan protein), diagnosis HIV dibuat. Sekiranya keputusannya diragui, ujian dijalankan dalam masa tiga bulan.

Anda boleh mencegah jangkitan virus immunodeficiency jika anda mengikuti peraturan tertentu: elakkan hubungan seks kasual, gunakan kondom semasa bersentuhan, jangan mengambil dadah. Sekiranya penyakit itu dikesan pada wanita hamil, adalah penting untuk mematuhi cadangan doktor yang hadir dengan ketat, jangan lupa untuk menjalani pemeriksaan untuk kehadiran virus.

IMMUNOBLOT(western blot) - kaedah ujian makmal serum darah untuk kehadiran antibodi kepada HIV; ia adalah ujian yang lebih tepat daripada ELISA dan digunakan untuk mengesahkan keputusan ELISA. ELISA - ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) - ujian makmal yang membolehkan anda menentukan kehadiran antibodi HIV dalam darah; ujian antibodi HIV.

Menurut cadangan WHO, immunoblotting (western blot) digunakan dalam diagnosis jangkitan HIV sebagai kaedah pakar tambahan, yang sepatutnya mengesahkan keputusan ELISA. Kaedah ini biasanya digunakan untuk menyemak semula keputusan ELISA yang positif, kerana ia dianggap lebih sensitif dan khusus, walaupun lebih kompleks dan mahal.

Immunoblotting menggabungkan enzim immunoassay (ELISA) dengan pemisahan elektroforesis awal protein virus dalam gel dan pemindahannya ke membran nitroselulosa. Prosedur imunoblot terdiri daripada beberapa peringkat (). Pertama, pra-dimurnikan dan dimusnahkan kepada komponen konstituennya, HIV tertakluk kepada elektroforesis, manakala semua antigen yang membentuk virus dipisahkan oleh berat molekul. Kemudian, dengan blotting, antigen dipindahkan dari gel ke jalur nitroselulosa atau penapis nilon, yang kini mengandungi spektrum protein yang merupakan ciri HIV, tidak dapat dilihat oleh mata. Seterusnya, bahan ujian (serum, plasma pesakit, dll.) Digunakan pada jalur, dan jika terdapat antibodi khusus dalam sampel, mereka mengikat jalur protein antigen yang sesuai dengannya. Hasil daripada manipulasi berikutnya (seperti ELISA), hasil interaksi ini divisualisasikan - menjadi kelihatan. Kehadiran jalur di kawasan tertentu jalur mengesahkan kehadiran dalam serum antibodi yang dikaji terhadap antigen HIV yang ditakrifkan dengan ketat.

Immunoblotting paling biasa digunakan untuk mengesahkan diagnosis jangkitan HIV. WHO menganggap sera positif jika antibodi kepada mana-mana dua protein sampul HIV dikesan melalui immunoblotting. Menurut pengesyoran ini, jika terdapat tindak balas dengan hanya satu daripada protein sampul surat (gp160, gp120, gp41) dalam kombinasi dengan atau tanpa tindak balas dengan protein lain, hasilnya dianggap meragukan dan kajian kedua disyorkan menggunakan kit daripada siri yang berbeza atau dari syarikat lain. Jika selepas itu keputusan masih diragui, kajian diteruskan setiap 3 bulan.

Untuk immunoblotting, pada peringkat pertama, protein yang terkandung dalam serum darah diasingkan dalam gel mengikut berat molekul dan cajnya menggunakan medan elektrik (kaedah elektroforesis gel). Kemudian membran nitroselulosa atau nilon digunakan pada gel dan "dibasahi" (ini adalah blotting). Ini dijalankan di dalam ruang khas, yang membolehkan pemindahan lengkap bahan dari gel ke membran. Akibatnya, corak susunan protein yang ada pada gel dihasilkan semula pada membran (blot), yang kemudiannya boleh dimanipulasi dengan mudah. Pada mulanya, membran dirawat dengan antibodi kepada antigen yang dikehendaki, dan selepas membasuh bahan yang tidak terikat, konjugat berlabel radioaktif ditambah yang secara khusus mengikat antibodi (seperti dalam ELISA). Lokasi kompleks konjugat berlabel antigen-antibodi yang terhasil ditentukan oleh autoradiografi menggunakan filem x-ray. Selepas manifestasinya, semuanya menjadi jelas sama ada terdapat antigen dalam darah atau tidak.

Immunoblotting -(dari bahasa Inggeris "blot" - spot) - kaedah untuk mengenal pasti antigen (atau antibodi) menggunakan sera (atau antigen) yang diketahui. Ia adalah gabungan elektroforesis gel dengan ELISA. Pada mulanya, sel bakteria atau virion dimusnahkan menggunakan ultrasound, dan kemudian semua antigen virus atau sel bakteria dipisahkan oleh elektroforesis dan reagen komersial diperoleh pada filem nitroselulosa khas. Apabila menyediakan immunoblotting, serum ujian pesakit digunakan pada filem dengan antigen yang diketahui. Selepas pengeraman dan pencucian antibodi yang tidak terikat, mereka meneruskan ke ELISA - antiserum kepada imunoglobulin manusia yang dilabelkan dengan enzim dan substrat kromogenik yang berubah warna apabila berinteraksi dengan enzim digunakan pada filem. Dengan kehadiran antigen-antibodi-antiserum kepada kompleks imunoglobulin-enzim, bintik-bintik berwarna muncul pada pembawa. Kaedah immunoblotting membolehkan anda mengesan antibodi secara berasingan kepada pelbagai antigen patogen (contohnya, dalam jangkitan HIV, immunoblotting mengesan antibodi kepada gp120, gp24 dan antigen virus lain).

Radioimmunoassay (RIA)

Kaedah ini berdasarkan tindak balas antigen-antibodi menggunakan label antigen atau antibodi dengan radionuklid. 125I, 14C, 3H, 51Cr dan radionuklid lain digunakan sebagai label. Kompleks imun yang terhasil diasingkan daripada sistem dan keradioaktifannya ditentukan pada pembilang (radiasi β). Keamatan sinaran adalah berkadar terus dengan bilangan molekul antigen dan antibodi yang terikat.

Versi fasa pepejal RIA menggunakan antibodi berlabel atau antigen yang terjerap dalam telaga panel polistirena digunakan secara meluas.

RIA digunakan untuk mengesan antigen mikrob, virus, pelbagai hormon, enzim, bahan perubatan, imunoglobulin, serta bahan lain yang terkandung dalam bahan ujian dalam kepekatan kecil 10–12–10–15 g/l.

soalan ujian

Tindak balas bakteriolisis imun: apakah jenis tindak balas itu; apakah antigen, apakah antibodi, mekanisme tindak balas, kaedah penetapan, aplikasi praktikal. Reaksi hemolisis imun: ramuan yang diperlukan, kaedah penetapan; kawalan, aplikasi praktikal. Tindak balas hemolisis tempatan dalam gel (tindak balas Yerne): prinsip tindak balas, kaedah perumusan, aplikasi praktikal. Tindak balas penetapan pelengkap: prinsip tindak balas; apa yang terbentuk apabila serum imun berinteraksi dengan antigen tertentu; apa yang berlaku untuk melengkapkan jika ia hadir dalam interaksi ini? Apakah nasib pelengkap jika tiada pertalian khusus antara antigen dan antibodi? Apakah tindak balas yang boleh digunakan untuk menentukan apa yang berlaku kepada pelengkap; mengapa tindak balas ini digunakan; apakah hasil positif RSK yang boleh dilihat? kenapa? Apakah sifat pelengkap yang digunakan dalam fasa pertama CSC? Dalam fasa kedua? Jika keputusan akhir RSK ialah hemolisis, adakah itu bermakna keputusan positif atau negatif? Terangkan keputusan: RSK+ + + +, RSK+ + +, RSK+ +, RSK+. Namakan ramuan sistem RSK pertama dan ramuan sistem RSK kedua. Mengapa serum ujian perlu dinyahaktifkan? Bagaimanakah pelengkap dititrasi? Serum hemolitik: apakah kandungannya, bagaimana ia diperoleh, apakah titer dan bagaimana ia ditentukan? Apakah haiwan yang digunakan untuk mendapatkan komponen RSC? Teknik menetapkan RSC dalam keadaan sejuk. Apabila menentukan tindak balas berikut, penyertaan pelengkap adalah perlu: pemendakan, pemberbukuan, aglutinasi, pengesanan antibodi yang tidak lengkap, bakteriolisis imun, hemolisis imun, Jerne, CSC? Tindak balas imunofluoresensi (RIF) - menunjukkan urutan kejadian dalam tindak balas Coons langsung; bahan-bahan yang diperlukan. Apakah antigen, apakah antibodi, bagaimana antibodi dilabelkan, bagaimanakah keputusan tindak balas diambil kira, apakah keputusan positif? Aplikasi praktikal - apakah yang boleh ditentukan menggunakan tindak balas ini? Tindak balas imunofluoresensi tidak langsung - menunjukkan urutan kejadian dalam tindak balas ini, bahan-bahan yang diperlukan, apakah antigen, apakah sera imun digunakan; kegunaan praktikal; kelebihan RIF tidak langsung berbanding tindak balas langsung. Enzim immunoassay (ELISA) - prinsip tindak balas; bahan-bahan yang diperlukan; nyatakan urutan kejadian apabila menyediakan tindak balas untuk mengesan antigen dalam bahan ujian; bahan-bahan yang diperlukan; apa yang berlaku dengan keputusan positif, bagaimana rupanya? Nyatakan urutan tindakan semasa ELISA untuk mengesan antibodi dalam serum ujian; bahan-bahan yang diperlukan; apa yang berlaku dengan keputusan yang positif? Immunoblotting - prinsip tindak balas; langkah utama; bahan-bahan yang diperlukan; Bagaimanakah keputusan diambil kira? faedah tindak balas. Radioimmunoassay (RIA) - apakah peringkat utama tindak balas; apa yang dilabelkan dengan antibodi atau antigen, bagaimanakah keputusan diambil kira? Mikroskopi imunoelektron - prinsip kaedah; langkah utama; bahan-bahan yang diperlukan; Antibodi dilabelkan dengan apa? bagaimana keputusan tindak balas diambil kira. Reaksi imobilisasi - prinsip kaedah, teknik penetapan, komponen, perakaunan untuk keputusan.

Tugas yang perlu dilaksanakan dalam proses latihan kendiri.

Lengkapkan jadual Reaksi Kekebalan untuk tindak balas yang diliputi dalam topik ini.

Reaksi imun

Hasil kerja pelajar dalam pelajaran amali

Mulakan kerja dengan segera dengan perumusan fasa pertama RSC, tetapi tuliskannya dalam buku nota kemudian (lihat di bawah).

1. Tindak balas hemolisis imun. Lihat reaksi demonstrasi hemolisis imun, lukiskannya sebagai gambar rajah, terangkan keputusan dalam tiub eksperimen dan kawalan.

2. Tindak balas pengikatan pelengkap

a) buka RSC mengikut jadual;

b) lukis dalam buku nota skema untuk menetapkan RSC dalam bentuk jadual;

c) meletakkan fasa kedua RSK (fasa pertama diletakkan pada permulaan pelajaran);

d) membuka persediaan diagnostik yang diperlukan untuk RSK;

e) mengambil kira keputusan. Merumuskan kesimpulan tentang kehadiran antibodi spesifik dalam serum ujian.

3. Tindak balas imunofluoresensi. Kaji jadual, buat skema untuk menyediakan tindak balas dalam buku nota anda; lihat sera diagnostik; tentukan kandungan serum, bagaimana ia disediakan, untuk tindak balas (RIF langsung atau tidak langsung) ia digunakan. Lihat hasil demonstrasi RIF dalam mikroskop pendarfluor.

4. Enzim immunoassay (ELISA). Dalam buku nota anda, buat skema tindak balas dalam dua versi: untuk pengesanan antigen dalam bahan ujian dan untuk pengesanan antibodi dalam serum. Semak Kit Ramuan Diagnosis HIV dan Hepatitis B. Tentukan kandungan setiap ramuan dan kegunaannya.

5. Immunoblotting. Buat gambar rajah tindak balas dalam buku nota anda; lihat demo - hasil reaksi.

6. Radioimmunoassay (RIA). Lukiskan skema tindak balas dalam buku nota anda.

7. Mikroskopi elektron imun (IEM). Tonton demonstrasi - hasil tindak balas, buat skema tindak balas dalam buku nota anda, tunjukkan antigen (virus) dan antibodi berlabel dengan anak panah.

Immunoblotting ialah kaedah pengesanan protein yang sangat sensitif berdasarkan gabungan elektroforesis dan ELISA atau RIA. Immunoblotting digunakan sebagai kaedah diagnostik untuk jangkitan HIV, dsb.

Dalam erti kata umum, immunoblotting difahami sebagai analisis campuran protein yang dipindahkan ke membran sokongan pepejal, yang dengannya ia mengikat oleh ikatan kovalen, diikuti oleh immunodetection.

Adalah mungkin untuk menganalisis campuran protein yang didepositkan secara langsung pada substrat (analisis bintik-bintik) atau selepas pecahan awalnya dengan pemfokusan elektro, elektroforesis cakera, atau elektroforesis dua dimensi (pembuangan Barat).

Antigen patogen dipisahkan oleh elektroforesis gel polyacrylamide, kemudian dipindahkan dari gel ke kertas diaktifkan atau membran nitroselulosa dan dibangunkan oleh ELISA.

Firma menghasilkan jalur sedemikian dengan "blots" antigen. Serum pesakit digunakan pada jalur ini. . Kemudian, selepas pengeraman, pesakit dibasuh daripada antibodi pesakit yang tidak terikat dan serum terhadap imunoglobulin manusia yang dilabelkan dengan enzim digunakan. . Kompleks yang terbentuk pada jalur (antigen + antibodi pesakit + antibodi terhadap Ig manusia) dikesan dengan menambahkan substrat kromogenik yang berubah warna di bawah tindakan enzim.

Metodologi ini juga digunakan untuk pemilihan klon bakteria, faj atau virus yang menyatakan produk gen klon sasaran.

Pemindahan protein ke membran dilakukan sama ada secara pasif atau menggunakan radas pemindahan elektro. Kecekapan pemindahan protein ke membran dipengaruhi oleh banyak faktor, seperti berat molekul protein, keliangan gel, masa pemindahan, dan komposisi larutan penimbal (trans buffer) yang digunakan.

Bergantung pada tugas dan syarat percubaan, syarat pemindahan dipilih yang memberikan hasil terbaik. Substrat yang biasa digunakan ialah nitrocellulose, polyvinylidene difluoride (PVDF), atau membran nilon bercas positif. Nitroselulosa boleh mengikat sehingga 80-100 mikrogram protein setiap 1 cm2.

Protein berat molekul rendah (dengan berat molekul kurang daripada 20 kDa) boleh hilang akibat daripada pencucian, yang memungkinkan untuk mengkaji terlebih dahulu polimorfisme lokus genetik tertentu dengan panjang serpihan DNA sekatan yang sepadan.

Di samping itu, menggunakan hibridisasi Selatan, adalah mudah untuk mengetahui sama ada gen sasaran mempunyai tapak hidrolisis oleh enzim sekatan tertentu di bahagian dalamannya, yang membolehkan anda memilih strategi optimum untuk mengklonkan kawasan genom yang dikaji.

Mengikut skema yang sama, molekul RNA juga boleh dipindahkan dari gel agarose ke penapis nitroselulosa. Kaedah ini telah dipanggil Northern blotting berbanding Southern blotting, kerana nama keluarga Southern bermaksud "selatan" dalam bahasa Inggeris.

Pemindahan kepada penapis daripada gel protein sewajarnya dipanggil Western blotting. Protein besar (lebih daripada 100 kDa) yang didenaturasi dalam larutan natrium dodesil sulfat (SDS) mungkin akan dipindahkan dengan buruk ke membran jika etanol terdapat dalam penimbal trans. Alkohol dengan ketara meningkatkan pemindahan protein daripada gel SDS-polyacrylamide, tetapi mengecilkan liang-liang dalam gel, yang membawa kepada pengekalan protein besar.

Membran PVDF dioptimumkan untuk pengesanan imuno dan mampu mengekalkan protein terikat khusus sehingga 160 µg/cm2 dengan tahap pengikatan tidak spesifik yang sangat rendah.

Immunoblotting

Sifat penting membran ini adalah kemungkinan penggunaan berulang. Membran nilon Zeta-Probe mengikat protein SDS dengan berkesan tanpa ketiadaan alkohol, dan pengikatan ini tahan terhadap rawatan seterusnya. Protein berat molekul rendah juga dikekalkan dengan berkesan. Dengan kapasiti pengikatan tinggi kira-kira 480 μg protein setiap 1 cm2, membran Zeta-Probe membenarkan pengesanan jumlah surih protein dalam campuran ujian.

Selepas antigen tidak bergerak pada membran, tapak pengikat yang tinggal disekat dengan larutan gelatin, atau albumin serum lembu, atau susu skim.

Kemudian membran diinkubasi dalam larutan antibodi poliklonal atau monoklonal kepada antigen yang diuji. Selepas membasuh antibodi yang tidak terikat, membran diinkubasi dalam larutan antibodi sekunder, yang merupakan konjugat enzim alkali fosfatase (alkali fosfatase, AP) atau lobak pedas peroksidase (HRP) dengan antibodi anti-spesies (antibodi kambing terhadap arnab, tikus atau immunoglobulin manusia) atau protein A (protein Staphylococcus aureus) atau G (protein Streptococcus sp.) yang mempunyai pertalian tinggi untuk rantau Fc imunoglobulin.

Pengesanan kompleks imun yang terbentuk dijalankan dengan kaedah kimia atau chemiluminescent. Substrat untuk tindak balas kimia apabila menggunakan konjugat alkali fosfatase ialah 5-bromo-4-chloro-3-indolylphosphate (BCIP) atau tetrazolium blue (NBT), dan apabila menggunakan konjugat peroksidase lobak pedas - 4-chloro-1-naphthol dan hidrogen peroksida.

Hasil daripada tindak balas enzimatik, jalur berwarna atau bintik terbentuk pada membran di tapak penyetempatan kompleks antigen-antibodi.

Kepekaan kaedah ini ialah 100 pg protein apabila menggunakan konjugat AP dan 100-500 pg apabila menggunakan konjugat HRP. Pengesanan chemiluminescent kompleks imun boleh mengesan kurang daripada 5 pg antigen. Prinsip kaedah ini ialah apabila HRP bertindak balas dengan hidrogen peroksida dan diasilhydrazineluminol kitaran, cahaya dipancarkan pada panjang gelombang 428 nm, yang boleh dirakam pada filem fotosensitif.

Reaksi imunoblotting (RI) telah dibangunkan berdasarkan ELISA. Ia adalah kaedah analisis imunokimia yang paling spesifik dan sensitif. Immunoblotting (dari bahasa Inggeris blot - to get wet, spot) menggabungkan ELISA dengan elektroforesis. Ia digunakan untuk mengesan bukan antibodi kompleks kepada HIV, tetapi antibodi kepada protein struktur individunya (protein-p24, glycoproteins-gp120, gp 41, dll.). Rujuk kepada reaksi pakar (pengesahan) untuk diagnosis jangkitan HIV.

Tindak balas dijalankan dalam beberapa peringkat:

Virus ini dimusnahkan kepada komponen - antigen (p24, gp120, gp 41, dll.), Yang tertakluk kepada elektroforesis dalam gel poliakrilamida, iaitu, pemisahan antigen kepada pecahan mengikut berat molekul.

2. Gel ditutup dengan membran nitroselulosa dan pecahan antigen dipindahkan kepadanya melalui elektroforesis. Nitroselulosa berkelakuan seperti kertas blotting. Membran dipotong menjadi jalur (jalur). Firma menghasilkan jalur sedemikian dengan "blots" antigen.

Immunoblotting - kaedah tidak langsung tambahan

Jalur dengan antigen HIV yang digunakan padanya direndam dalam serum subjek dan kemudian dibasuh daripada bahan yang tidak terikat.

4. Jalur diinkubasi dengan serum antiglobulin berlabel peroksidase dan dicuci.

Substrat ditambah dan bilangan pecahan berwarna (bintik) dicatatkan, yang sepadan dengan zon penyetempatan kompleks AG-AT.

Kehadiran jalur di kawasan tertentu jalur mengesahkan kehadiran dalam serum antibodi yang dikaji terhadap antigen HIV yang ditakrifkan dengan ketat. Keputusan imunoblotting dianggap positif jika jalur yang sepadan dengan mana-mana dua daripada tiga antigen HIV - p24, gp41 dan gp 120 kelihatan pada membran (Rajah 37).

LUKISAN

SENARAI LITERATUR TERGUNA

Sastera utama

Mikrobiologi perubatan, virologi dan imunologi: buku teks untuk pelajar perubatan. universities 2nd ed., diperbetulkan. dan tambahan — 702 hlm. Ed. A.A. Vorobyov. M. : MIA, 2012.

2. Mikrobiologi, virologi dan imunologi: panduan kepada kajian makmal: panduan kajian / (V.B. Sboychakov et al.); ed. V.B.Sboychakova, M.M.Karapats. – M.: GEOTAR-Media, 2014.- 320 ms.: ill.

3. Mikrobiologi perubatan, imunologi dan virologi [Sumber elektronik]: buku teks untuk madu.

universiti - 760 p. — Mod akses: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html Korotyaev A.I., Babichev S.A. St. Petersburg: Spetslit, 2010.

4. Mikrobiologi perubatan, virologi dan imunologi [Sumber elektronik]: buku teks: dalam 2 jilid / V. 1. - 448 p. — Mod akses: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html Zverev V.V., Boychenko M.N.

M. : Geotar Media, 2010. .

5. Mikrobiologi perubatan, virologi dan imunologi [Sumber elektronik]: buku teks: dalam 2 jilid. Jilid 2. - 480 p. Mod akses: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html Zverev V.V., Boychenko M.N. M. : Geotar Media, 2010.

sastera tambahan

1. Reaksi imunodiagnostik: buku teks / disusun oleh: G.K. Davletshina, Z.G. Gabidullin, A.A. Akhtarieva, M.M. .

Khusnarizanova, Yu.Z. Gabidullin, M.M. Alsynbaev - Ufa: Rumah Penerbitan GBOU VPO BSMU Kementerian Kesihatan Rusia, 2016. - 86p.

2. Ciri-ciri beberapa sifat yang menentukan potensi patogenik variasi yang ditanam bersama Enterobacter, Сitrobacter, Serratia, E. coli, bakteria Proteus: penerbitan saintifik / Yu. Z. Gabidullin, R. S. Sufiyarov, I. I. Dolgushin - Ufa, 2015. - 250 s.

Laman Utama » Immunoblot - apakah itu? Immunoblot dalam diagnosis penyakit berjangkit

Immunoblot - apakah itu? Immunoblot dalam diagnosis penyakit berjangkit

Apakah imunoblot? Ini adalah kaedah biasa untuk diagnosis makmal jangkitan virus manusia. Ia adalah salah satu cara yang paling tepat dan boleh dipercayai untuk mengesan kehadiran HIV.

Untuk kebolehpercayaan, ia lebih besar daripada ujian immunosorbent (elisa) yang digabungkan dengan enzim. Keputusan imunoblot dianggap konklusif dan konklusif. Maklumat Am

Immunoblot - apakah itu? Untuk mengenali seseorang sebagai HIV positif, anda mesti menjalani ujian makmal untuk menguji kehadiran antibodi dalam serum darah.

Kaedah bahagian Western blot juga dipanggil Western blot (western blot). Ia digunakan untuk mengesan jangkitan virus manusia, sebagai kaedah pakar tambahan. Ini adalah perlu untuk mengesahkan ELISA - ujian makmal yang membolehkan anda menentukan kehadiran antibodi kepada HIV dalam darah. Immunoblot semak semula ELISA positif.

Ia dianggap paling sensitif, kompleks dan mahal.

Sasaran

Apakah imunoblot? Kaedah ini ujian makmal serum darah untuk kehadiran antibodi kepada virus.

Semasa kajian khas jumlah protein virus dalam gel dan pada membran nitroselulosa.

Immunoblotting (pengesanan antibodi dalam sera pesakit kepada antigen patogen tertentu)

Prosedur bahagian Western blot bertujuan untuk menentukan jangkitan HIV pada peringkat yang berbeza. Pada langkah pertama, virus yang telah disucikan daripada bahagian konstituennya tertakluk kepada elektroforesis dan antigen yang disertakan di dalamnya, dibahagikan dengan berat molekul.

Virus kekurangan imun manusia mereplikasi dalam sel hidup yang tertanam dalam maklumat genetiknya. Pada peringkat ini, orang itu menjadi pembawa virus HIV jika anda telah dijangkiti.

Kekhususan penyakit ini adalah bahawa ia tidak nyata untuk masa yang lama. Virus ini memusnahkan limfosit, oleh itu, imuniti seseorang berkurangan dan badan menjadi tidak dapat melawan jangkitan.

Sekiranya HIV dirawat dengan betul dan tepat pada masanya, pesakit akan hidup hingga tua. Kekurangan rawatan tidak dapat dielakkan membawa kepada kematian. Dari saat jangkitan, tetapi tanpa rawatan, tempoh maksimum tidak lebih dari sepuluh tahun.

Keanehan

Analisis imunoblot adalah kaedah yang boleh dipercayai yang membolehkan anda menentukan kehadiran antibodi terhadap antigen HIV jenis pertama dan kedua.

Jika seseorang dijangkiti, selepas dua minggu antibodi, yang boleh dikesan lebih lama kemudian. Ciri HIV ialah jumlah antibodi meningkat dengan cepat dan kekal dalam darah pesakit. Walaupun mereka hadir, penyakit itu mungkin tidak nyata selama dua tahun atau lebih. Kaedah ELISA tidak selalu menunjukkan kehadiran penyakit dengan tepat, memerlukan pengesahan keputusan dari bahagian PCR dan Western blot jika immunoassay enzim menunjukkan hasil yang positif.

Petunjuk untuk

Apakah jenis "imunoblot" yang telah ditemui, tetapi yang sedang diperkenalkan dalam kajian?

Sebab untuk ujian imunoblot human immunodeficiency virus (HIV) adalah hasil ELISA yang positif. Ia perlu melalui ujian imunosorben berkaitan enzim pada pesakit yang akan menjalani pembedahan. Di samping itu, anda harus membuat analisis tentang wanita yang merancang kehamilan, serta mereka yang melakukan hubungan seks. Bahagian Western blot diberikan kepada pesakit yang dijangkiti HIV jika keputusan elisa diragui.

Gejala membimbangkan berikut mungkin menjadi sebab untuk pergi ke doktor: penurunan berat badan yang cepat; kelemahan, kehilangan fungsi; gangguan usus (cirit-birit), yang berlangsung selama tiga minggu; dehidrasi; demam; nodus limfa bengkak dalam badan; perkembangan kandidiasis, batuk kering, radang paru-paru, toksoplasmosis, pemburukan herpes.

Pesakit tidak perlu bersedia sebelum menderma darah vena.

Jangan makan selama 8-10 jam sebelum ujian. Ia tidak digalakkan untuk minum minuman beralkohol dan kopi, senaman fizikal yang berat, untuk mengalami keseronokan sehari sebelum menderma darah.

Di mana untuk membuat analisis?

Di manakah saya boleh mendapatkan ujian HIV?

ELISA, analisis imunoblot yang dijalankan di klinik swasta bandar, memberikan hasil dalam masa sehari. Diagnosis segera juga mungkin. Di institusi awam, ujian perubatan elisa dan bahagian Western blot adalah percuma, mengikut undang-undang Persekutuan Rusia.

Saringan mandatori untuk penyakit berjangkit wanita hamil, dan pesakit yang memerlukan kemasukan ke hospital atau pembedahan. Bagaimanakah kajian ini dijalankan?

Bagaimana untuk menjalankan ELISA? Immunoblot positif/negatif mengesahkan atau menafikan keputusan elisa. Prosedurnya agak mudah. Pakar mengambil darah vena, dalam masa ia mengambil masa kurang dari lima minit.

Selepas pensampelan, tapak suntikan hendaklah dibasmi kuman dan ditutup dengan plaster. Persampelan dijalankan pada perut kosong, jadi selepas prosedur tidak menyakitkan untuk makan sebatang coklat gelap atau minuman panas yang manis.

Untuk mendapatkan rujukan untuk analisis percuma di institusi perubatan awam, anda mesti melawat ahli terapi.

Secara umum, imunoblot tidak berbeza daripada ujian darah lain melalui pensampelan. Metodologi penyelidikan adalah mudah. Jika virus terdapat dalam darah seseorang, badan mula menghasilkan antibodi untuk memusnahkannya. Terdapat banyak antigen protein untuk setiap virus. Pengesanan antibodi ini adalah asas kaedah pembahagian Western blot. harga

Berapa banyak analisis? Immunoblot HIV merujuk kepada penyelidikan murah.

Secara purata, kaedah pemeriksaan immunoassay berkisar antara 500 hingga 900 rubel. Bahagian Western blot adalah pemeriksaan kajian, kosnya antara tiga hingga lima ribu rubel. Kaedah yang lebih kompleks jauh lebih mahal. Sebagai contoh, untuk analisis tindak balas rantai polimerase (PCR), anda perlu membayar kira-kira 12,000 rubel.

Tafsiran keputusan

Kaedah yang paling biasa untuk mendiagnosis jangkitan HIV ialah immunoassay enzim dan imunoblot.

Mereka adalah untuk penentuan antibodi serum kepada virus kekurangan imun manusia. Jangkitan biasanya disahkan melalui dua ujian: saringan dan pengesahan. Tafsiran keputusan harus dibuat oleh doktor, dia mendiagnosis dan menetapkan rawatan. Jika imunoblot positif, ia bermakna tubuh manusia mempunyai virus.

Keputusan positif tidak sepatutnya menjadi alasan untuk rawatan diri, kerana setiap pesakit mungkin mempunyai gambaran sendiri tentang penyakit ini.

Analisis kualitatif termasuk saringan dan pensijilan. Jika pesakit tidak mempunyai virus, hasilnya adalah "negatif". Apabila sijil ini ditemui, ujian saringan tambahan dijalankan. Analisis imunoblot yang mengesahkan atau menafikan pemeriksaan. Jika jalur ujian muncul dalam kegelapan kawasan tertentu (penyetempatan protein), diagnosis adalah "HIV".

Sekiranya keputusannya diragui, maka ujian dijalankan dalam tempoh tiga bulan.

Untuk mengelakkan jangkitan dengan virus kekurangan imun manusia, adalah mungkin jika anda mengikuti peraturan tertentu: elakkan hubungan seksual kasual, gunakan kondom semasa bersentuhan, jangan gunakan dadah.

Sekiranya penyakit itu dikesan pada wanita hamil, adalah penting untuk mengikuti cadangan doktor yang hadir, jangan lupa tentang ujian untuk kehadiran virus.

Apakah itu Western Blotting?

Pengenalpastian protein dalam campuran kompleks atau ekstrak pelbagai tisu adalah salah satu masalah yang sering dihadapi. Menggunakan alat sedemikian sebagai antibodi khusus, adalah mungkin untuk menentukan protein yang dikaji dengan kos masa dan kewangan yang minimum.

Dalam kaedah Western blotting, pada peringkat pertama, campuran protein dipisahkan oleh elektroforesis dengan kehadiran natrium dodesil sulfat (SDS), kemudian dipindahkan ke membran nitroselulosa dengan electroblotting.

Intipati kaedah ini terletak pada fakta bahawa gel selepas elektroforesis diletakkan pada membran nitroselulosa di antara lapisan kertas penapis. "sandwic" yang dipasang dengan cara ini diletakkan dalam medan elektrik supaya kompleks protein-SDS bergerak melintasi plat gel dan tidak bergerak (akibat penyerapan tidak spesifik) pada permukaan membran nitroselulosa.

Dalam pengikatan kompleks protein-SDS ke membran nitroselulosa, terutamanya daya elektrik terlibat, dan interaksi ini adalah multipoint dan membawa kepada "penyebaran" protein pada permukaan membran. Oleh itu, selepas pemindahan elektro, kami memperoleh replika gel pada nitroselulosa dengan protein yang disusun dengan cara yang sama seperti dalam gel polyacrylamide.

Selepas SDS - elektroforesis, pemindahan elektro dan penyerapan protein dari gel ke membran nitroselulosa, konformasi tersier protein sangat berubah, jika secara amnya betul untuk bercakap tentang kewujudan struktur tertier untuk protein selepas rawatan yang begitu keras. . Oleh itu, untuk pengesanan imunokimia protein yang sedang dikaji, hanya antibodi mono- atau poliklonal khusus untuk kawasan linear molekul protein biasanya digunakan.

51. Enzim immunoassay, immunoblotting. Mekanisme, komponen, aplikasi.

Antibodi khusus untuk epitop konformasi (atau tapak yang melibatkan hubungan antara subunit) biasanya tidak sesuai untuk digunakan dalam kaedah Western blot.

Selepas pemindahan protein, membran diinkubasi secara berurutan dengan antibodi khusus untuk protein yang sedang dikaji, dan kemudian dengan antibodi sekunder khusus untuk serpihan Fc antibodi primer, terkonjugasi dengan label enzim (atau beberapa yang lain) (Rajah 1).

1 A). Dalam kes apabila antibodi primer khusus untuk antigen yang dikaji dikonjugasikan secara langsung dengan label, antibodi sekunder tidak diperlukan (Rajah 1 B). Kompleks imun yang terbentuk di tapak penyetempatan protein yang dikaji "dimanifestasikan" dengan bantuan substrat kromogenik (bergantung pada jenis label).

Kepekaan dan kekhususan kaedah sangat bergantung pada antibodi mana yang digunakan dalam kajian.

Antibodi yang digunakan mestilah khusus untuk urutan asid amino unik yang khusus hanya untuk protein yang dikaji. Jika tidak, interaksi (terutamanya dalam kes ekstrak protein kasar) antibodi dengan beberapa molekul protein adalah mungkin, yang seterusnya akan membawa kepada penampilan beberapa jalur berwarna pada membran.

Pengenalpastian protein yang dikaji dalam kes ini selalunya sukar atau bahkan mustahil.

Faktor penting kedua yang perlu diingat semasa memilih antibodi ialah pertalian. Semakin tinggi pertalian antibodi yang digunakan, semakin cerah dan jelas kesan jalur protein, semakin tinggi kepekaan kaedah. Apabila menggunakan antibodi pertalian tinggi, sensitiviti 1 ng dan lebih tinggi boleh dicapai.

Untuk menggambarkan hasil interaksi antigen dan antibodi yang terikat membran, antibodi sekunder yang digabungkan dengan agen yang mampu memberikan isyarat tertentu dalam keadaan tertentu digunakan.

Biasanya, enzim (peroksidase atau fosfatase) digunakan sebagai agen sedemikian, hasil tindak balas yang mempunyai warna dan mendakan pada membran dalam bentuk mendakan tidak larut.

Anda juga boleh menggunakan label pendarfluor dalam kaedah ini.

nasi. 1. Skim pewarnaan imunokimia protein yang dikaji: A - menggunakan antibodi sekunder yang digabungkan dengan label enzim; B - antibodi primer terkonjugasi secara langsung dengan label enzim.

Protokol:

I. Penyediaan gel dan membran dan pemindahan elektroprotein

Gel poliakrilamida selepas elektroforesis diletakkan di dalam tab mandi dengan penimbal blotting (25 mM Tris, pH 8.3, 192 mM glisin, 10% etanol).

Dua helai kertas turas, dipotong mengikut bentuk kaset blotting dan dibasahkan dengan penimbal blotting, diletakkan pada bahagian kaset yang akan menghadap anod. Kemudian, membran nitroselulosa yang telah dibasahi dengan penimbal yang sama diletakkan di atas kertas turas, memastikan tiada gelembung udara di antara membran dan kertas.

Selepas itu, gel harus diletakkan dengan teliti pada membran, sekali lagi memberi perhatian khusus kepada ketiadaan gelembung udara antara gel dan membran. Sandwic dilengkapkan dengan dua lapisan kertas penapis yang dibasahi, yang diletakkan pada permukaan gel (Rajah 2). Sandwic yang terhasil diapit dalam kaset dan diletakkan di antara elektrod supaya membran menghadap anod.

nasi. 2. Skim pemindahan elektro protein ke membran.

II. pemindahan elektrik

Pemindahan elektroprotein ke membran nitroselulosa dilakukan dalam penimbal yang mengandungi 25 mM Tris, pH 8.3, 192 mM glisin, 10% etanol selama 30-50 minit pada voltan malar 100 V.

Masa electrotransfer bergantung pada saiz protein yang dipindahkan, lebih besar protein, lebih lama electrotransfer mengambil. Kualiti pengangkutan elektro dan susunan jalur protein dinilai dengan mengotorkan membran nitroselulosa dengan 0.3% Ponceau S dalam 1% asid asetik. Sebelum imunostaining, membran perlu dibasuh beberapa kali dengan larutan Tris berair yang beralkali sedikit untuk menghilangkan pewarna terikat protein.

III. Pewarnaan imunokimia protein yang tidak bergerak pada membran nitroselulosa

Untuk menyekat tapak pengikat antibodi yang tidak spesifik, membran diinkubasi dengan kacau berterusan pada suhu bilik selama 30 minit dalam PBST (untuk penyekatan yang lebih baik, larutan PBST yang mengandungi 10% susu tepung skim boleh digunakan).

Selepas menyekat, membran diinkubasi selama satu jam pada suhu bilik dengan kacau berterusan dalam PBST yang mengandungi 1-10 μg/ml antibodi spesifik.

Kepekatan optimum antibodi dipilih secara empirik dan bergantung kepada pertalian interaksi antibodi dengan antigen.

Pada akhir pengeraman, membran dibasuh 5 kali dengan PBST dan dipindahkan ke larutan antibodi sekunder yang dikonjugasikan dengan lobak pedas peroksidase. Pencairan konjugat biasanya ditunjukkan oleh pengilang pada pembungkusan, atau dipilih secara empirik oleh penyelidik. Inkubasi membran dalam larutan antibodi sekunder selama 1 jam dengan kacau berterusan.

Selepas mencuci menyeluruh (sekurang-kurangnya 5-6 perubahan penimbal), membran PBST dipindahkan ke dalam larutan substrat kromogenik yang mengandungi 3 mg diaminobenzidine (DAB) dan 10 µl 30% hidrogen peroksida dalam 10 ml 0.1 M Tris-HCl, pH 7.6 .

Pengeraman dijalankan dengan kacau selama 5 hingga 10 minit. Selepas tamat pengeraman dengan substrat, membran harus dibasuh dengan PBST, dikeringkan dengan mengeringkan dengan kertas penapis, dan segera membuat salinan elektronik dengan mengimbas dalam warna. Jika membran kering sepenuhnya, jalur protein yang dicelup akan pudar, dan imej menjadi kurang terang dan kontras.

Nota: DAB adalah toksik dan berpotensi karsinogen. Bekerja hanya dengan sarung tangan getah!