Kaedah untuk menentukan lipid dalam darah.Biokimia. Kaedah untuk mengkaji penunjuk metabolisme lipid

lipid dipanggil lemak yang masuk ke dalam badan bersama makanan dan terbentuk di dalam hati. Darah (plasma atau serum) mengandungi 3 kelas utama lipid: trigliserida (TG), kolesterol (CS) dan esternya, fosfolipid (PL).
Lipid mampu menarik air, tetapi kebanyakannya tidak larut dalam darah. Mereka diangkut dalam keadaan terikat protein (dalam bentuk lipoprotein atau, dengan kata lain, lipoprotein). Lipoprotein berbeza bukan sahaja dalam komposisi, tetapi juga dalam saiz dan ketumpatan, tetapi strukturnya hampir sama. Bahagian tengah (teras) diwakili oleh kolesterol dan esternya, asid lemak, trigliserida. Cangkang molekul terdiri daripada protein (apoprotein) dan lipid larut air (fosfolipid dan kolesterol tidak tersterifikasi). Bahagian luar apoprotein mampu membentuk ikatan hidrogen dengan molekul air. Oleh itu, lipoprotein sebahagiannya boleh larut dalam lemak, sebahagiannya dalam air.
Kilomikron selepas memasuki darah terurai kepada gliserol dan asid lemak, mengakibatkan pembentukan lipoprotein. Sisa kilomikron yang mengandungi kolesterol diproses di dalam hati.
Daripada kolesterol dan trigliserida dalam hati, lipoprotein ketumpatan sangat rendah (VLDL) terbentuk, yang mendermakan sebahagian daripada trigliserida kepada tisu periferal, manakala sisanya kembali ke hati dan ditukar kepada lipoprotein ketumpatan rendah (LDL).
LPN II adalah pengangkut kolesterol untuk tisu periferi, yang digunakan untuk membina membran sel dan tindak balas metabolik. Dalam kes ini, kolesterol yang tidak diester memasuki plasma darah dan mengikat lipoprotein berketumpatan tinggi (HDL). Kolesterol tersterifikasi (dikaitkan dengan ester) ditukar kepada VLDL. Kemudian kitaran berulang.
Darah juga mengandungi lipoprotein ketumpatan perantaraan (LDL), yang merupakan sisa kilomikron dan VLDL dan mengandungi sejumlah besar kolesterol. LDL dalam sel hati dengan penyertaan lipase ditukar menjadi LDL.
Plasma darah mengandungi 3.5-8 g/l lipid. Peningkatan tahap lipid dalam darah dipanggil hiperlipidemia, dan penurunan dipanggil hipolipidemia. Penunjuk jumlah lipid darah tidak memberikan gambaran terperinci tentang keadaan metabolisme lemak dalam badan.
Nilai diagnostik ialah penentuan kuantitatif lipid tertentu. Komposisi lipid plasma darah dibentangkan dalam jadual.

Komposisi lipid plasma darah

Klasifikasi dislipidemia

- sekumpulan bahan yang heterogen dalam struktur kimia dan sifat fiziko-kimia. Dalam serum darah, mereka terutamanya diwakili oleh asid lemak, trigliserida, kolesterol dan fosfolipid.

Trigliserida adalah bentuk utama penyimpanan lipid dalam tisu adiposa dan pengangkutan lipid dalam darah. Kajian tahap trigliserida adalah perlu untuk menentukan jenis hiperlipoproteinemia dan menilai risiko mengembangkan penyakit kardiovaskular.

Kolestrol melaksanakan fungsi yang paling penting: ia adalah sebahagian daripada membran sel, adalah pendahulu asid hempedu, hormon steroid dan vitamin D, dan bertindak sebagai antioksidan. Kira-kira 10% daripada penduduk Rusia mempunyai paras kolesterol darah yang tinggi. Keadaan ini adalah tanpa gejala dan boleh membawa kepada penyakit serius (penyakit vaskular aterosklerotik, penyakit jantung koronari).

Lipid tidak larut dalam air, oleh itu ia diangkut oleh serum darah dalam kombinasi dengan protein. Kompleks lipid + protein dipanggil lipoprotein. Protein yang terlibat dalam pengangkutan lipid dipanggil apoprotein.

Beberapa kelas terdapat dalam serum darah lipoprotein: kilomikron, lipoprotein ketumpatan sangat rendah (VLDL), lipoprotein ketumpatan rendah (LDL) dan lipoprotein ketumpatan tinggi (HDL).

Setiap pecahan lipoprotein mempunyai fungsinya sendiri. disintesis dalam hati, membawa terutamanya trigliserida. Mereka memainkan peranan penting dalam atherogenesis. Lipoprotein ketumpatan rendah (LDL) kaya dengan kolesterol, menghantar kolesterol ke tisu periferi. Tahap VLDL dan LDL menyumbang kepada pemendapan kolesterol dalam dinding vesel dan dianggap sebagai faktor aterogenik. Lipoprotein ketumpatan tinggi (HDL) mengambil bahagian dalam pengangkutan terbalik kolesterol dari tisu, mengambilnya dari sel-sel tisu yang berlebihan dan memindahkannya ke hati, yang "menggunakan" dan mengeluarkannya dari badan. Tahap HDL yang tinggi dianggap sebagai faktor anti-aterogenik (melindungi badan daripada aterosklerosis).

Peranan kolesterol dan risiko membina aterosklerosis bergantung pada pecahan lipoprotein yang mana ia termasuk. Untuk menilai nisbah lipoprotein aterogenik dan antiaterogenik, indeks aterogenik.

Apolipoprotein adalah protein yang terletak pada permukaan lipoprotein.

Apolipoprotein A (protein ApoA) adalah komponen protein utama lipoprotein (HDL), mengangkut kolesterol dari sel-sel tisu periferi ke hati.

Apolipoprotein B (protein ApoB) adalah sebahagian daripada lipoprotein yang mengangkut lipid ke tisu periferi.

Pengukuran kepekatan apolipoprotein A dan apolipoprotein B dalam serum darah memberikan penentuan yang paling tepat dan tidak jelas tentang nisbah sifat aterogenik dan anti-aterogenik lipoprotein, yang dianggarkan sebagai risiko membina lesi vaskular aterosklerotik dan penyakit jantung koronari. lima tahun akan datang.

Dalam penyelidikan profil lipid termasuk penunjuk berikut: kolesterol, trigliserida, VLDL, LDL, HDL, pekali aterogenik, nisbah kolesterol / trigliserida, glukosa. Profil ini memberikan maklumat lengkap tentang metabolisme lipid, membolehkan anda menentukan risiko mengembangkan lesi vaskular aterosklerotik, penyakit jantung koronari, mengenal pasti kehadiran dislipoproteinemia dan menaipnya, dan, jika perlu, pilih terapi penurun lipid yang betul.

Petunjuk

Meningkatkan kepekatankolesterol mempunyai nilai diagnostik dalam hiperlipidemia keluarga primer (bentuk keturunan penyakit); kehamilan, hipotiroidisme, sindrom nefrotik, penyakit hati obstruktif, penyakit pankreas (pankreatitis kronik, neoplasma malignan), diabetes mellitus.

Kepekatan berkurangankolesterol mempunyai nilai diagnostik dalam penyakit hati (sirosis, hepatitis), kebuluran, sepsis, hipertiroidisme, anemia megaloblastik.

Meningkatkan kepekatantrigliserida mempunyai nilai diagnostik dalam hiperlipidemia primer (bentuk keturunan penyakit); obesiti, pengambilan karbohidrat yang berlebihan, alkoholisme, diabetes mellitus, hipotiroidisme, sindrom nefrotik, kegagalan buah pinggang kronik, gout, pankreatitis akut dan kronik.

Kepekatan berkurangantrigliserida mempunyai nilai diagnostik dalam hipolipoproteinemia, hipertiroidisme, sindrom malabsorpsi.

Lipoprotein ketumpatan sangat rendah (VLDL) digunakan untuk mendiagnosis dislipidemia (jenis IIb, III, IV dan V). Kepekatan tinggi VLDL dalam serum darah secara tidak langsung mencerminkan sifat aterogenik serum.

Meningkatkan kepekatanlipoprotein ketumpatan rendah (LDL) mempunyai nilai diagnostik dalam hiperkolesterolemia primer, dislipoproteinemia (jenis IIa dan IIb); dengan obesiti, jaundis obstruktif, sindrom nefrotik, diabetes mellitus, hipotiroidisme. Penentuan tahap LDL adalah perlu untuk pelantikan rawatan jangka panjang, tujuannya adalah untuk mengurangkan kepekatan lipid.

Meningkatkan kepekatan mempunyai nilai diagnostik dalam sirosis hati, alkoholisme.

Kepekatan berkuranganlipoprotein ketumpatan tinggi (HDL) mempunyai nilai diagnostik dalam hipertrigliseridemia, aterosklerosis, sindrom nefrotik, diabetes mellitus, jangkitan akut, obesiti, merokok.

Pengesanan tahap apolipoprotein A ditunjukkan untuk penilaian risiko awal penyakit jantung koronari; pengenalpastian pesakit yang mempunyai kecenderungan keturunan untuk aterosklerosis pada usia yang agak muda; memantau rawatan dengan ubat penurun lipid.

Meningkatkan kepekatanapolipoprotein A mempunyai nilai diagnostik dalam penyakit hati, kehamilan.

Kepekatan berkuranganapolipoprotein A mempunyai nilai diagnostik dalam sindrom nefrotik, kegagalan buah pinggang kronik, trigliseridemia, kolestasis, sepsis.

Nilai diagnostikapolipoprotein B- penunjuk yang paling tepat tentang risiko mengembangkan penyakit kardiovaskular, juga merupakan penunjuk yang paling mencukupi untuk keberkesanan terapi statin.

Meningkatkan kepekatanapolipoprotein B mempunyai nilai diagnostik dalam dislipoproteinemia (jenis IIa, IIb, IV dan V), penyakit jantung koronari, diabetes mellitus, hipotiroidisme, sindrom nefrotik, penyakit hati, sindrom Itsenko-Cushing, porfiria.

Kepekatan berkuranganapolipoprotein B mempunyai nilai diagnostik dalam hipertiroidisme, sindrom malabsorpsi, anemia kronik, penyakit radang sendi, pelbagai myeloma.

Metodologi

Penentuan dijalankan pada penganalisis biokimia "Arkitek 8000".

Latihan

kepada kajian profil lipid (kolesterol, trigliserida, HDL-C, LDL-C, Apo-protein lipoprotein (Apo A1 dan Apo-B)

Ia adalah perlu untuk menahan diri daripada aktiviti fizikal, alkohol, merokok dan dadah, perubahan dalam diet sekurang-kurangnya dua minggu sebelum pensampelan darah.

Darah diambil hanya semasa perut kosong, 12-14 jam selepas makan terakhir.

Adalah dinasihatkan untuk mengambil ubat pagi selepas mengambil darah (jika boleh).

Prosedur berikut tidak boleh dilakukan sebelum menderma darah: suntikan, tusukan, urutan umum badan, endoskopi, biopsi, ECG, pemeriksaan X-ray, terutamanya dengan pengenalan agen kontras, dialisis.

Jika, bagaimanapun, terdapat sedikit aktiviti fizikal, anda perlu berehat sekurang-kurangnya 15 minit sebelum menderma darah.

Ujian lipid tidak dijalankan dalam penyakit berjangkit, kerana terdapat penurunan dalam tahap jumlah kolesterol dan HDL-C, tanpa mengira jenis agen berjangkit, keadaan klinikal pesakit. Profil lipid hanya perlu diperiksa selepas pesakit pulih sepenuhnya.

Adalah sangat penting bahawa cadangan ini dipatuhi dengan ketat, kerana hanya dalam kes ini keputusan ujian darah yang boleh dipercayai akan diperolehi.

Hiperlipidemia (hiperlipemia) - peningkatan dalam kepekatan jumlah lipid plasma sebagai fenomena fisiologi boleh diperhatikan 1-4 jam selepas makan. Hiperlipemia pencernaan lebih ketara, semakin rendah tahap lipid dalam darah pesakit semasa perut kosong.

Kepekatan lipid dalam darah berubah dalam beberapa keadaan patologi:

Sindrom nefrotik, nefrosis lipoid, nefritis akut dan kronik;

Sirosis hempedu hati, hepatitis akut;

Obesiti - aterosklerosis;

Hipotiroidisme;

Pankreatitis, dsb.

Kajian tahap kolesterol (CS) hanya mencerminkan patologi metabolisme lipid dalam badan. Hiperkolesterolemia adalah faktor risiko yang didokumenkan untuk aterosklerosis koronari. CS ialah komponen penting membran semua sel, sifat fizikokimia khas kristal CS dan konformasi molekulnya menyumbang kepada keteraturan dan mobiliti fosfolipid dalam membran dengan perubahan suhu, yang membolehkan membran berada dalam keadaan fasa pertengahan. (“kristal gel-cecair”) dan mengekalkan fungsi fisiologi . CS digunakan sebagai prekursor dalam biosintesis hormon steroid (gluko- dan mineralokortikoid, hormon seks), vitamin D 3, dan asid hempedu. Adalah mungkin untuk membezakan 3 kumpulan CS:

A - cepat bertukar (30 g);

B - bertukar perlahan-lahan (50 g);

B - sangat perlahan bertukar (60 g).

Kolesterol endogen disintesis dalam jumlah yang besar dalam hati (80%). Kolesterol eksogen memasuki badan dalam komposisi produk haiwan. Pengangkutan kolesterol dari hati ke tisu ekstrahepatik dijalankan

LDL. Perkumuhan kolesterol dari hati dari tisu ekstrahepatik ke hati dihasilkan oleh bentuk matang HDL (50% LDL, 25% HDL, 17% VLDL, 5% HM).

Hiperlipoproteinemia dan hiperkolesterolemia (klasifikasi Fredrickson):

jenis 1 - hyperchylomicronemia;

jenis 2 - a - hyper-β-lipoproteinemia, b - hyper-β dan hyperpre-β-lipoproteinemia;

jenis 3 - dis-β-lipoproteinemia;

jenis 4 - hiper-pra-β-lipoproteinemia;

Jenis 5 - hiper-pra-β-lipoproteinemia dan hyperchylomicronemia.

Yang paling aterogenik ialah jenis 2 dan 3.

Fosfolipid - sekumpulan lipid yang mengandungi, sebagai tambahan kepada asid fosforik (komponen wajib), alkohol (biasanya gliserol), sisa asid lemak dan bes nitrogen. Dalam amalan klinikal dan makmal, terdapat kaedah untuk menentukan tahap jumlah fosfolipid, tahap yang meningkat pada pesakit dengan hiperlipoproteinemia primer dan sekunder IIa dan IIb. Penurunan berlaku dalam beberapa penyakit:

Distrofi makanan;

degenerasi lemak hati,

sirosis portal;

Kemajuan aterosklerosis;

Hipertiroidisme, dsb.

Peroksidasi lipid (LPO) adalah proses radikal bebas, permulaannya berlaku semasa pembentukan spesies oksigen reaktif - superoksida O 2 . ; radikal hidroksil H O . ; radikal hidroperoksida HO 2 . ; oksigen singlet O 2 ; ion hipoklorit ClO - . Substrat utama peroksidasi lipid ialah asid lemak tak tepu yang berada dalam struktur fosfolipid membran. Ion logam besi adalah pemangkin terkuat. LPO ialah proses fisiologi yang penting untuk badan, kerana ia mengawal kebolehtelapan membran, menjejaskan pembahagian dan pertumbuhan sel, memulakan fagosintesis, dan merupakan laluan untuk biosintesis bahan biologi tertentu (prostaglandin, tromboksan). Tahap LPO dikawal oleh sistem antioksidan (asid askorbik, asid urik, β-karotena, dll.). Kehilangan keseimbangan antara kedua-dua sistem membawa kepada kematian sel dan struktur selular.

Untuk diagnostik, adalah lazim untuk menentukan kandungan produk peroksidasi lipid dalam plasma dan eritrosit (konjugasi diena, malondialdehid, asas Schiff), kepekatan antioksidan semulajadi utama - alfa-tokoferol dengan pengiraan pekali MDA / TF. Ujian penting untuk menilai peroksidasi lipid ialah penentuan kebolehtelapan membran eritrosit.

2. pertukaran pigmen satu set transformasi kompleks pelbagai bahan berwarna dalam badan manusia dan haiwan.

Pigmen darah yang paling terkenal ialah hemoglobin (kromoprotein, yang terdiri daripada bahagian protein globin dan kumpulan prostetik, diwakili oleh 4 hemes, setiap heme terdiri daripada 4 nukleus pirol, yang saling berkaitan oleh jambatan metin, di tengahnya adalah ion besi dengan keadaan pengoksidaan 2 +) . Purata jangka hayat eritrosit ialah 100-110 hari. Pada akhir tempoh ini, pemusnahan dan pemusnahan hemoglobin berlaku. Proses pereputan bermula sudah di dalam katil vaskular, berakhir dengan unsur selular sistem sel mononuklear fagositik (sel Kupffer hati, histiosit tisu penghubung, sel plasma sumsum tulang). Hemoglobin dalam katil vaskular mengikat haptoglobin plasma dan dikekalkan dalam katil vaskular tanpa melalui penapis buah pinggang. Disebabkan oleh tindakan rantaian beta haptoglobin seperti trypsin dan perubahan konformasi yang disebabkan oleh pengaruhnya dalam cincin heme porphyrin, keadaan dicipta untuk pemusnahan hemoglobin yang lebih mudah dalam unsur-unsur selular sistem mononuklear fagositik. Pigmen hijau molekul tinggi dengan itu terbentuk verdoglobin(sinonim: verdohemoglobin, choleglobin, pseudohemoglobin) ialah kompleks yang terdiri daripada globin, sistem cincin porfirin yang rosak dan besi ferik. Transformasi selanjutnya membawa kepada kehilangan besi dan globin oleh verdoglobin, akibatnya cincin porfirin terbentang menjadi rantai dan pigmen hempedu hijau berat molekul rendah terbentuk - biliverdin. Hampir kesemuanya dikurangkan secara enzimatik kepada pigmen hempedu merah-kuning yang paling penting - bilirubin, yang merupakan komponen biasa plasma darah.Pada permukaan membran plasma hepatosit mengalami pemisahan. Dalam kes ini, bilirubin yang dilepaskan membentuk sekutu sementara dengan lipid membran plasma dan bergerak melaluinya disebabkan oleh aktiviti sistem enzim tertentu. Laluan lanjut bilirubin bebas ke dalam sel berlaku dengan penyertaan dua protein pembawa dalam proses ini: ligandin (ia mengangkut jumlah utama bilirubin) dan protein Z.

Ligandin dan protein Z juga terdapat dalam buah pinggang dan usus, oleh itu, dalam kes kegagalan hati, mereka bebas untuk mengimbangi kelemahan proses detoksifikasi dalam organ ini. Kedua-duanya agak larut dalam air, tetapi tidak mempunyai keupayaan untuk bergerak melalui lapisan lipid membran. Disebabkan oleh pengikatan bilirubin kepada asid glukuronik, ketoksikan semula jadi bilirubin bebas sebahagian besarnya hilang. Hidrofobik, bilirubin bebas lipofilik, mudah larut dalam lipid membran dan menembusi akibatnya ke dalam mitokondria, melepaskan respirasi dan fosforilasi oksidatif di dalamnya, mengganggu sintesis protein, aliran ion kalium melalui membran sel dan organel. Ini memberi kesan negatif kepada keadaan sistem saraf pusat, menyebabkan beberapa gejala neurologi ciri pada pesakit.

Bilirubinglucuronides (atau terikat, bilirubin konjugasi), berbeza dengan bilirubin bebas, segera bertindak balas dengan bilirubin diazoreaktif (“langsung”). Perlu diingat bahawa dalam plasma darah itu sendiri, bilirubin yang tidak berkonjugasi dengan asid glukuronik boleh dikaitkan dengan albumin atau tidak. Pecahan terakhir (tidak dikaitkan dengan albumin, lipid, atau komponen darah bilirubin yang lain) adalah yang paling toksik.

Bilirubinglucuronides, terima kasih kepada sistem enzim membran, bergerak secara aktif melaluinya (berlawanan dengan kecerunan kepekatan) ke dalam saluran hempedu, dilepaskan bersama hempedu ke dalam lumen usus. Di dalamnya, di bawah pengaruh enzim yang dihasilkan oleh mikroflora usus, ikatan glukuronida dipecahkan. Bilirubin bebas yang dibebaskan dipulihkan dengan pembentukan dalam usus kecil, pertama mesobilirubin, dan kemudian mesobilinogen (urobilinogen). Biasanya, bahagian tertentu mesobilinogen, diserap dalam usus kecil dan di bahagian atas usus besar, memasuki hati melalui sistem vena portal, di mana ia hampir musnah sepenuhnya (oleh pengoksidaan), bertukar menjadi sebatian dipyrrole - propent -diopent dan mesobilileucan.

Mesobilinogen (urobilinogen) tidak memasuki peredaran umum. Sebahagian daripadanya, bersama-sama dengan produk pemusnahan, sekali lagi dihantar ke lumen usus sebagai sebahagian daripada hempedu (peredaran enterohepotal). Walau bagaimanapun, walaupun dengan perubahan paling kecil dalam hati, fungsi penghalangnya sebahagian besarnya "dibuang" dan mesobilinogen mula-mula memasuki peredaran umum dan kemudian ke dalam air kencing. Sebahagian besarnya dihantar dari usus kecil ke usus besar, di mana, di bawah pengaruh mikroflora anaerobik (E. coli dan bakteria lain), ia menjalani pemulihan selanjutnya dengan pembentukan stercobilinogen. Stercobilinogen yang terhasil (jumlah harian 100-200 mg) hampir sepenuhnya dikumuhkan dalam tinja. Di udara, ia teroksida dan bertukar menjadi stercobilin, yang merupakan salah satu pigmen tahi. Sebahagian kecil stercobilinogen diserap melalui membran mukus usus besar ke dalam sistem vena kava inferior, dihantar dengan darah ke buah pinggang dan dikumuhkan dalam air kencing.

Oleh itu, dalam air kencing orang yang sihat, mesobilinogen (urobilinogen) tidak hadir, tetapi ia mengandungi beberapa stercobilin (yang sering salah dipanggil "urobilin")

Untuk menentukan kandungan bilirubin dalam serum (plasma) darah, terutamanya kaedah penyelidikan kimia dan fiziko-kimia digunakan, antaranya terdapat kolorimetrik, spektrofotometri (manual dan automatik), kromatografi, fluorimetrik dan beberapa yang lain.

Salah satu tanda subjektif penting pelanggaran metabolisme pigmen ialah penampilan jaundis, yang biasanya diperhatikan apabila tahap bilirubin dalam darah adalah 27-34 μmol / l atau lebih. Penyebab hiperbilirubinemia boleh menjadi: 1) peningkatan hemolisis eritrosit (lebih daripada 80% daripada jumlah bilirubin diwakili oleh pigmen yang tidak terkonjugasi); 2) pelanggaran fungsi sel hati dan 3) kelewatan dalam aliran keluar hempedu (hiperbilirubinemia berasal dari hepatik, jika lebih daripada 80% daripada jumlah bilirubin adalah bilirubin terkonjugasi). Dalam kes pertama, mereka bercakap tentang apa yang dipanggil jaundis hemolitik, yang kedua - mengenai parenchymal (mungkin disebabkan oleh kecacatan keturunan dalam proses pengangkutan bilirubin dan glukuronidasinya), dalam yang ketiga - mengenai mekanikal (atau obstruktif, kongestif). ) penyakit kuning.

Dengan jaundis parenchymal terdapat perubahan yang merosakkan-dystropik dalam sel parenkim hati dan perubahan infiltratif dalam stroma, yang membawa kepada peningkatan tekanan dalam saluran hempedu. Stagnasi bilirubin dalam hati juga difasilitasi oleh kelemahan mendadak proses metabolik dalam hepatosit yang terjejas, yang kehilangan keupayaan untuk biasanya melakukan pelbagai proses biokimia dan fisiologi, khususnya, memindahkan bilirubin terikat dari sel ke dalam hempedu terhadap kecerunan kepekatan. Peningkatan kepekatan bilirubin terkonjugasi dalam darah membawa kepada penampilannya dalam air kencing.

Tanda kerosakan hati yang paling "halus" dalam hepatitis adalah penampilan mesobilinogen(urobilinogen) dalam air kencing.

Dengan jaundis parenchymal, kepekatan bilirubin terkonjugasi (konjugasi) dalam darah meningkat terutamanya. Kandungan bilirubin bebas meningkat, tetapi pada tahap yang lebih rendah.

Di tengah-tengah patogenesis jaundis obstruktif adalah pemberhentian aliran hempedu ke dalam usus, yang membawa kepada kehilangan stercobilinogen dari air kencing. Dengan jaundis kongestif, terutamanya kandungan bilirubin terkonjugasi dalam darah meningkat. Jaundis kolestatik ekstrahepatik disertai oleh tiga serangkai tanda klinikal: najis berubah warna, air kencing gelap, dan kulit gatal. Kolestasis intrahepatik secara klinikal ditunjukkan oleh kegatalan kulit dan jaundis. Dalam kajian makmal, hiperbilirubinemia (disebabkan berkaitan), bilirubinuria, peningkatan fosfatase alkali dengan nilai normal transaminase dalam serum darah dicatatkan.

Jaundis hemolitik disebabkan oleh hemolisis eritrosit dan, akibatnya, peningkatan pembentukan bilirubin. Peningkatan kandungan bilirubin bebas adalah salah satu tanda utama jaundis hemolitik.

Dalam amalan klinikal, hiperbilirubinemia berfungsi kongenital dan diperolehi diasingkan, disebabkan oleh pelanggaran penghapusan bilirubin dari badan (kehadiran kecacatan dalam enzim dan sistem lain untuk pemindahan bilirubin melalui membran sel dan glukuronidasi di dalamnya). Sindrom Gilbert ialah penyakit kronik benigna keturunan yang berlaku dengan hiperbilirubinemia tak terkonjugasi bukan hemolitik yang sederhana teruk. Hiperbilirubinemia posthepatitic Kalka - kecacatan enzim yang diperolehi yang membawa kepada peningkatan tahap bilirubin bebas dalam darah, jaundis Crigler-Najjar bukan hemolitik familial kongenital (ketiadaan pemindahan glukuronil dalam hepatosit), jaundis dalam hipotiroidisme kongenital (tiroksil merangsang glukuronil). sistem transferase), jaundis fisiologi neonatal, jaundis dadah, dsb.

Gangguan metabolisme pigmen boleh disebabkan oleh perubahan bukan sahaja dalam proses pecahan heme, tetapi juga dalam pembentukan prekursornya - porfirin (sebatian organik kitaran berdasarkan cincin porphin, yang terdiri daripada 4 pirol yang disambungkan oleh jambatan metin). Porphyrias adalah sekumpulan penyakit keturunan yang disertai oleh kekurangan genetik dalam aktiviti enzim yang terlibat dalam biosintesis heme, di mana peningkatan kandungan porfirin atau prekursornya ditemui di dalam badan, yang menyebabkan beberapa tanda klinikal ( pembentukan berlebihan produk metabolik, menyebabkan perkembangan gejala neurologi dan (atau) peningkatan fotosensitiviti kulit).

Kaedah yang paling banyak digunakan untuk penentuan bilirubin adalah berdasarkan interaksinya dengan diazoreagen (reagen Ehrlich). Kaedah Jendrassik-Grof telah meluas. Dalam kaedah ini, campuran kafein dan natrium benzoat dalam penimbal asetat digunakan sebagai "pembebas" bilirubin. Penentuan enzimatik bilirubin adalah berdasarkan pengoksidaannya oleh bilirubin oksidase. Adalah mungkin untuk menentukan bilirubin tak terkonjugasi dengan kaedah pengoksidaan enzimatik yang lain.

Pada masa ini, penentuan bilirubin dengan kaedah "kimia kering" semakin meluas, terutamanya dalam diagnostik ekspres.

Vitamin.

Vitamin dipanggil bahan berat molekul rendah yang tidak boleh diganti yang memasuki badan dengan makanan dari luar dan terlibat dalam pengawalan proses biokimia pada tahap enzim.

Persamaan dan perbezaan antara vitamin dan hormon.

persamaan- mengawal metabolisme dalam tubuh manusia melalui enzim:

· vitamin adalah sebahagian daripada enzim dan merupakan koenzim atau kofaktor;

· Hormon atau mengawal aktiviti enzim yang sedia ada dalam sel, atau merupakan induktor atau penindas dalam biosintesis enzim yang diperlukan.

Beza:

· vitamin- sebatian organik berat molekul rendah, faktor eksogen untuk pengawalan metabolisme dan datang dengan makanan dari luar.

· Hormon- sebatian organik molekul tinggi, faktor endogen yang disintesis dalam kelenjar endokrin badan sebagai tindak balas kepada perubahan dalam persekitaran luaran atau dalaman tubuh manusia, dan juga mengawal metabolisme.

Vitamin dikelaskan kepada:

1. Larut lemak: A, D, E, K, A.

2. Larut air: kumpulan B, PP, H, C, THFA (asid tetrahydrofolic), asid pantotenik (B 3), P (rutin).

Vitamin A (retinol, antixerophthalmic) - struktur kimia diwakili oleh cincin β-ionone dan 2 sisa isoprena; keperluan dalam badan ialah 2.5-30 mg sehari.

Tanda awal dan spesifik hipovitaminosis A ialah hemeralopia (rabun malam) - pelanggaran penglihatan senja. Ia berlaku kerana kekurangan pigmen visual - rhodopsin. Rhodopsin mengandungi retina (vitamin A aldehid) sebagai kumpulan aktif - ia terdapat dalam batang retina. Sel-sel ini (rod) melihat isyarat cahaya dengan intensiti rendah.

Rhodopsin = opsin (protein) + cis-retinal.

Apabila rhodopsin dirangsang oleh cahaya, cis-retinal, hasil daripada penyusunan semula enzimatik di dalam molekul, memasuki semua-trans-retinal (dalam cahaya). Ini membawa kepada penyusunan semula konformasi keseluruhan molekul rhodopsin. Rhodopsin berpecah kepada opsin dan trans-retinal, yang merupakan pencetus yang merangsang impuls dalam hujung saraf optik, yang kemudiannya dihantar ke otak.

Dalam gelap, akibat tindak balas enzimatik, trans-retinal sekali lagi ditukar menjadi cis-retinal dan, digabungkan dengan opsin, membentuk rhodopsin.

Vitamin A juga mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan epitelium integumen. Oleh itu, dengan beriberi, kerosakan pada kulit, membran mukus dan mata diperhatikan, yang menunjukkan dirinya dalam keratinisasi patologi kulit dan membran mukus. Pesakit mengalami xerophthalmia - kekeringan kornea mata, kerana saluran lacrimal tersumbat akibat keratinisasi epitelium. Oleh kerana mata berhenti dibasuh dengan air mata, yang mempunyai kesan bakteria, konjunktivitis berkembang, ulser dan melembutkan kornea - keratomalacia. Dengan beriberi A, mungkin juga terdapat kerosakan pada membran mukus saluran gastrousus, saluran pernafasan dan genitouriner. Melanggar rintangan semua tisu kepada jangkitan. Dengan perkembangan beriberi pada zaman kanak-kanak - terencat pertumbuhan.

Pada masa ini, penyertaan vitamin A dalam perlindungan membran sel daripada agen pengoksida telah ditunjukkan - iaitu, vitamin A mempunyai fungsi antioksidan.

Ketumpatan yang berbeza dan merupakan penunjuk metabolisme lipid. Terdapat pelbagai kaedah untuk penentuan kuantitatif jumlah lipid: kolorimetrik, nephelometric.

Prinsip kaedah. Hasil hidrolisis lipid tak tepu membentuk sebatian merah dengan reagen fosfonilin, keamatan warna yang berkadar terus dengan kandungan jumlah lipid.

Kebanyakan lipid dalam darah tidak berada dalam keadaan bebas, tetapi sebagai sebahagian daripada kompleks protein-lipid: kilomikron, α-lipoprotein, β-lipoprotein. Lipoprotein boleh dipisahkan dengan pelbagai kaedah: sentrifugasi dalam larutan garam pelbagai ketumpatan, elektroforesis, kromatografi lapisan nipis. Semasa ultrasentrifugasi, kilomikron dan lipoprotein dengan ketumpatan yang berbeza diasingkan: tinggi (HDL - α-lipoprotein), rendah (LDL - β-lipoprotein), sangat rendah (VLDL - pra-β-lipoprotein), dsb.

Pecahan lipoprotein berbeza dalam jumlah protein, berat molekul relatif lipoprotein, dan peratusan komponen lipid individu. Oleh itu, α-lipoprotein yang mengandungi sejumlah besar protein (50-60%) mempunyai ketumpatan relatif yang lebih tinggi (1.063-1.21), manakala β-lipoprotein dan pra-β-lipoprotein mengandungi kurang protein dan sejumlah besar lipid - sehingga 95% daripada jumlah berat molekul relatif dan ketumpatan relatif rendah (1.01-1.063).

Prinsip kaedah. Apabila LDL serum darah berinteraksi dengan reagen heparin, kekeruhan muncul, keamatannya ditentukan secara fotometrik. Reagen heparin ialah campuran heparin dan kalsium klorida.

Bahan dalam kajian: serum darah.

Reagen: 0.27% larutan CaCl 2, larutan heparin 1%.

peralatan: mikropipet, FEK, kuvet dengan panjang laluan optik 5 mm, tabung uji.

KEMAJUAN. 2 ml larutan 0.27% CaCl 2 dan 0.2 ml serum darah ditambah ke dalam tabung uji, dicampur. Tentukan ketumpatan optik larutan (E 1) terhadap larutan CaCl 2 0.27% dalam kuvet dengan penapis cahaya merah (630 nm). Larutan daripada kuvet dituangkan ke dalam tabung uji, 0.04 ml larutan heparin 1% ditambah dengan mikropipet, dicampur, dan tepat selepas 4 minit ketumpatan optik larutan (E 2) ditentukan semula dalam keadaan yang sama .

Perbezaan dalam ketumpatan optik dikira dan didarabkan dengan 1000 - pekali empirikal yang dicadangkan oleh Ledvina, kerana pembinaan lengkung penentukuran dikaitkan dengan beberapa kesukaran. Jawapannya dinyatakan dalam g/l.

x (g / l) \u003d (E 2 - E 1) 1000.

. Kandungan LDL (b-lipoprotein) dalam darah berbeza-beza bergantung pada umur, jantina dan biasanya 3.0-4.5 g / l. Peningkatan kepekatan LDL diperhatikan dalam aterosklerosis, jaundis obstruktif, hepatitis akut, penyakit hati kronik, diabetes, glikogenosis, xanthomatosis dan obesiti, penurunan b-plasmocytoma. Purata kandungan kolesterol dalam LDL adalah kira-kira 47%.

Penentuan jumlah kolesterol dalam serum darah berdasarkan tindak balas Liebermann-Burchard (kaedah Ilk)

Kolesterol eksogen dalam jumlah 0.3-0.5 g datang dengan makanan, dan kolesterol endogen disintesis dalam badan dalam jumlah 0.8-2 g sehari. Terutamanya banyak kolesterol disintesis dalam hati, buah pinggang, kelenjar adrenal, dinding arteri. Kolesterol disintesis daripada 18 molekul asetil-KoA, 14 molekul NADPH, 18 molekul ATP.

Apabila anhidrida asetik dan asid sulfurik pekat ditambah ke dalam serum darah, cecair bertukar menjadi merah, biru, dan akhirnya hijau. Tindak balas adalah disebabkan oleh pembentukan kolesterilena asid sulfonik hijau.

Reagen: Reagen Liebermann-Burchard (campuran asid asetik glasier, anhidrida asetik dan asid sulfurik pekat dalam nisbah 1:5:1), larutan kolesterol standard (1.8 g / l).

peralatan: tabung uji kering, pipet kering, FEK, kuvet dengan panjang laluan optik 5 mm, termostat.

KEMAJUAN. Semua tabung uji, pipet, kuvet mestilah kering. Ia perlu bekerja dengan reagen Liebermann-Burchard dengan berhati-hati. 2.1 ml reagen Liebermann-Burchard diletakkan dalam tiub kering, 0.1 ml serum darah tidak hemolisis ditambah dengan perlahan di sepanjang dinding tiub, tiub itu digoncang dengan kuat, dan kemudian dipanaskan selama 20 minit pada 37ºС. Warna hijau zamrud terbentuk, iaitu kolorimetrik pada FEC dengan penapis cahaya merah (630-690 nm) terhadap reagen Liebermann-Burchard. Ketumpatan optik yang diperolehi pada FEC digunakan untuk menentukan kepekatan kolesterol mengikut keluk penentukuran. Kepekatan kolesterol yang ditemui didarabkan dengan 1000, kerana 0.1 ml serum diambil dalam eksperimen. Faktor penukaran kepada unit SI (mmol/l) ialah 0.0258. Kandungan normal jumlah kolesterol (bebas dan esterifikasi) dalam serum darah ialah 2.97-8.79 mmol / l (115-340 mg%).

Pembinaan graf penentukuran. Dari penyelesaian standard kolesterol, di mana 1 ml mengandungi 1.8 mg kolesterol, ambil 0.05; 0.1; 0.15; 0.2; 0.25 ml dan dilaraskan kepada isipadu 2.2 ml dengan reagen Liebermann-Burchard (masing-masing 2.15; 2.1; 2.05; 2.0; 1.95 ml). Jumlah kolesterol dalam sampel ialah 0.09; 0.18; 0.27; 0.36; 0.45 mg. Penyelesaian standard kolesterol yang diperolehi, serta tabung uji eksperimen, digoncang dengan kuat dan diletakkan dalam termostat selama 20 minit, selepas itu ia difotometer. Graf penentukuran dibina mengikut nilai kepupusan yang diperoleh hasil daripada fotometri larutan piawai.

Nilai klinikal dan diagnostik. Melanggar metabolisme lemak, kolesterol boleh terkumpul dalam darah. Peningkatan kolesterol darah (hiperkolesterolemia) diperhatikan dalam aterosklerosis, diabetes mellitus, jaundis obstruktif, nefritis, nefrosis (terutamanya nefrosis lipoid), dan hipotiroidisme. Penurunan kolesterol darah (hipokolesterolemia) diperhatikan dengan anemia, kelaparan, batuk kering, hipertiroidisme, cachexia kanser, jaundis parenchymal, kerosakan CNS, keadaan demam, dengan pengenalan

Untuk penentuan kuantitatif jumlah lipid dalam serum darah, kaedah kolorimetrik dengan reagen phosphovanillin paling kerap digunakan. Jumlah lipid bertindak balas selepas hidrolisis dengan asid sulfurik dengan reagen fosvanilin untuk membentuk warna merah. Keamatan warna adalah berkadar dengan kandungan jumlah lipid dalam serum darah.

1. Masukkan reagen ke dalam tiga tabung uji mengikut skema berikut:

2. Campurkan kandungan tiub, biarkan dalam gelap selama 40-60 minit. (warna larutan berubah daripada kuning kepada merah jambu).

3. Campurkan lagi dan ukur penyerapan pada 500-560 nm (penapis hijau) terhadap sampel buta dalam kuvet 5 mm.

4. Kira jumlah jumlah lipid menggunakan formula:

D 2 - kepupusan larutan penentukuran lipid dalam kuvet;

X ialah kepekatan jumlah lipid dalam larutan piawai.

Takrifkan istilah "jumlah lipid". Bandingkan nilai yang anda terima dengan nilai biasa. Apakah proses biokimia yang boleh dinilai oleh penunjuk ini?

Pengalaman 4. Penentuan kandungan b- dan pra-b-lipoprotein dalam serum darah.

2. Satu set pipet.

3. Batang kaca.

5. Kuvet, 0.5 cm.

Reagen. 1. Serum darah.

2. Kalsium klorida, larutan 0.025M.

3. Heparin, larutan 1%.

4. Air suling.

1. Tuangkan 2 ml kalsium klorida 0.025 M ke dalam tabung uji dan tambah 0.2 ml serum darah.

2. Campurkan dan ukur ketumpatan optik sampel (D 1) pada FEK-e pada panjang gelombang 630-690 nm (penapis cahaya merah) dalam kuvet dengan ketebalan lapisan 0.5 cm terhadap air suling. Tuliskan nilai ketumpatan optik D 1 .

3. Kemudian tambah 0.04 ml larutan heparin 1% (1000 IU dalam 1 ml) ke dalam kuvet dan ukur ketumpatan optik D 2 sekali lagi tepat 4 minit kemudian.

Perbezaan dalam nilai (D 2 - D 1) sepadan dengan ketumpatan optik disebabkan oleh sedimen b-lipoprotein.

Kira kandungan b- dan pra-b-lipoprotein menggunakan formula:

di mana 12 ialah pekali, untuk penukaran dalam g/l.

Nyatakan tapak biosintesis b-lipoprotein. Apakah fungsi yang mereka lakukan dalam tubuh manusia dan haiwan? Bandingkan nilai yang anda terima dengan nilai biasa. Dalam kes apakah penyelewengan daripada nilai normal diperhatikan?

Pelajaran nombor 16. "Metabolisme lipid (bahagian 2)"

Tujuan pelajaran: untuk mengkaji proses katabolisme dan anabolisme asid lemak.

SOALAN UNTUK MENGAWAL KERJA:

1. Mekanisme biokimia pengoksidaan asid lemak.

2. Pertukaran badan keton: pendidikan, tujuan biokimia. Apakah faktor yang menyebabkan haiwan terdedah kepada ketosis?

3. Mekanisme biokimia sintesis asid lemak.

4. Biosintesis triasilgliserol. Peranan biokimia proses ini.

5. Biosintesis fosfolipid. Peranan biokimia proses ini.

Tarikh siap ________ Skor ____ Tandatangan pengajar ____________

Kerja eksperimen.

Pengalaman 1. Kaedah nyata untuk menentukan badan keton dalam air kencing, susu, serum darah (ujian Lestrade).

Peranti. 1. Rak dengan tabung uji.

2. Satu set pipet.

3. Batang kaca.

4. Kertas penapis.

Reagen. 1. Serbuk reagen.

3. Serum darah.

4. Susu.

1. Letakkan sedikit (0.1-0.2 g) serbuk reagen pada kertas turas di hujung pisau bedah.

2. Pindahkan beberapa titik serum darah ke serbuk reagen.

Tahap minimum badan keton dalam darah, memberikan tindak balas positif, ialah 10 mg / 100 ml (10 mg%). Kadar perkembangan warna dan keamatannya adalah berkadar dengan kepekatan badan keton dalam sampel ujian: jika warna ungu berlaku serta-merta, kandungannya ialah 50-80 mg% atau lebih; jika ia muncul selepas 1 minit, sampel mengandungi 30-50 mg%; perkembangan warna samar selepas 3 minit menunjukkan kehadiran 10-30 mg% badan keton.

Perlu diingat bahawa ujian adalah lebih daripada 3 kali lebih sensitif dalam menentukan asid acetoacetic daripada aseton. Daripada semua badan keton dalam serum darah manusia, asid acetoacetic adalah utama, bagaimanapun, dalam darah lembu yang sihat, 70-90% badan keton adalah asid b-hydroxybutyric, dalam susu ia menyumbang 87-92%.

Buat kesimpulan berdasarkan hasil kajian anda. Terangkan mengapa pembentukan badan keton yang berlebihan dalam badan manusia dan haiwan adalah berbahaya?