Immunblotting ved diagnostisering av HIV. Immunoblotting (påvisning av antistoffer i sera hos pasienter mot visse patogene antigener) Hybridisering av nukleinsyrer
Enzymimmunanalyse (ELISA)
Enzymimmunanalyse (ELISA) utføres i to trinn: den første er interaksjonen av antistoffer med antigenet, den andre er den enzymatiske indikasjonen på antigen-antistoffkomplekset på grunn av utseendet av farging av reaksjonsblandingen og registrering av farging visuelt eller ved spektrofotometrisk metode.
Det er to varianter av ELISA: fast-fase og flytende-fase, forskjellig i måten komponentene i den immunkjemiske reaksjonen er separert. Sammenlignet med de tidligere beskrevne metodene for å påvise antigener og antistoffer, har ELISA betydelige fordeler:
høy følsomhet, som gjør det mulig å bestemme opptil 0,05 ng / ml av et stoff;
muligheten for å bruke minimale volumer av testmaterialet (1--2 µl);
muligheten for instrumentell eller visuell regnskapsføring av reaksjonen;
hurtighet og mulighet for å automatisere alle stadier av reaksjonen.
ELISA er i dag mye brukt i praksis for diagnostisering av mange infeksjonssykdommer som bakteriell, soppetiologi, protozoinfeksjoner og helmintiaser, men spesielt virusinfeksjoner, spesielt hepatitt A, B, C, D, E, G, HIV-infeksjon, herpesvirus, rotavirus, adenovirus, astrovirus, parvovirus og andre infeksjoner.
immunblotting
Prinsippet for immunblotting-metoden er å påvise antistoffer mot individuelle antigener av patogenet. Ved hjelp av denne metoden bestemmes antistoffer mot HIV-antigener (viruskappeglykoproteiner, kjerneproteiner og virusenzymer). Resultatene av immunblotting blir evaluert som positive, tvilsomme og negative, avhengig av det kvantitative og kvalitative settet av antistoffer som er påvist.
Det bør bemerkes at immunblotting er dårligere når det gjelder følsomhet for ELISA; i noen tilfeller kan et negativt resultat registreres i nærvær av HIV-infeksjon hos en pasient. Muligheten for å registrere falske positive resultater i ELISA ved HIV-infeksjon krever imidlertid en integrert tilnærming til diagnostisering av HIV-infeksjon, idet man i tillegg til resultatene av immunologiske reaksjoner (ELISA, immunblotting), tar hensyn til epidemiologiske og kliniske data.
Polymerasekjedereaksjon (PCR)
PCR-metoden ble utviklet av den amerikanske biokjemikeren Kary Mullis i 1983 basert på bruken av den termostabile DNA-polymerase (Tag polymerase) oppdaget av ham. Prinsippet for metoden er å øke med 10 6 -10 8 ganger antall kopier av en spesifikk DNA-region av patogenet katalysert in vitro av DNA-polymerase i automatisk modus.
Under kunstige forhold er reproduksjonen av replikasjonsprosessen av en genomregion spesifikk for en bestemt art eller slekt av patogener mulig forutsatt at dens nukleotidsekvens er kjent. Bruken av metoder for å påvise replikasjonsprodukter av slike regioner (amplikoner) gjør det mulig å fastslå tilstedeværelsen av et patogen i testprøven.
Den komplementære kjedekompletteringen beskrevet ovenfor begynner bare i visse startblokker, som er korte dobbelttrådete seksjoner. Når slike blokker er festet til spesifikke områder av DNA, er prosessen med syntese av en ny tråd kun rettet mot det valgte området, og ikke langs hele lengden av DNA-tråden. To oligonukleotidprimere, som kalles primere, brukes til å lage startblokker i gitte DNA-regioner. Primerne er komplementære til DNA-sekvensene på venstre og høyre grense av et spesifikt fragment og er orientert slik at fullføringen av en ny DNA-streng kun skjer mellom dem.
TIL fordelene med PCR-metoden bør inkludere:
høy følsomhet, som gjør det mulig å bestemme 10-1000 celler i en prøve;
høy spesifisitet, siden et DNA-fragment som er unikt for dette patogenet påvises i testmaterialet;
universaliteten til prosedyren for å oppdage forskjellige patogener fra en bioassay;
Høy analysehastighet (4--4,5 timer);
Muligheten for å diagnostisere ikke bare akutte, men også latente infeksjoner.
Bruken av PCR er effektiv for å diagnostisere et bredt spekter av bakterielle og virusinfeksjoner.
Nylig har kvantitative metoder for PCR-analyse blitt implementert ganske vellykket, som gjør det mulig å bestemme konsentrasjonen av patogenet i materialet (mikrobiell eller viral belastning), for eksempel for å vurdere den replikative aktiviteten til hepatitt B-viruset, HIV C. .
Det bør imidlertid tas i betraktning at PCR-metoden også har sine begrensninger, spesielt for diagnostisering av infeksjoner forårsaket av opportunistisk autoflora.
Hybridisering av nukleinsyrer
hybridisering av nukleinsyrer som PCR, lar deg identifisere patogenet i prøven uten forutgående isolasjon. For analyse syntetiseres en enkeltstrenget DNA- eller RNA-probe som er komplementær til spesifikke nukleotidsekvenser til patogenet. Proben er merket med et radionuklid, enzym eller annen lett gjenkjennelig markør. Testmaterialet utsettes for prosessering med det formål å lysere mikroorganismer som er tilstede i bioanalysen, isolering og denaturering av DNA. Deretter inkuberes proben med testprøven og mengden merket DNA som har gått inn i hybridisering med DNA i testprøven måles. Reaksjonen kan oppstå både på fastfase-sorbenter og i løsning, men en obligatorisk betingelse er utvasking av ubundne mengder av den merkede proben. Sensitiviteten til er dårligere enn PCR og er 103 mikrobielle celler per prøve.
Da jeg ble testet for kjønnssykdommer, bestemte jeg meg for å bli testet for HIV. Dagen etter fikk jeg ferdige tester for ifa, bortsett fra hiv. Det førte til at jeg fikk diagnosen klamydia. Herpes og mikroplasmose. Men vichen kom aldri. De ringer meg om 3 dager og sier at du må komme til AIDS-senteret for å ta blodet på nytt. Kan Imunablot være falskt positivt ved klamydiasykdommer Mycraplasmosis HPV Herpes
Woman.ru-eksperter
Få en ekspertuttalelse om emnet ditt
Anastasia Shesterikova
Rusina Irina Vladimirovna
Psykolog, Stressrelief. Spesialist fra b17.ru
Olga Yurievna Diganaeva
Psykolog. Spesialist fra b17.ru
Olga Borisenko
Psykolog, gestaltterapeut. Spesialist fra b17.ru
Dmitry Valerievich Tishakov
Psykolog, veileder, systemisk familieterapeut. Spesialist fra b17.ru
Shiyan Olga Vasilievna
Psykolog, Psykolog-konsulent. Spesialist fra b17.ru
Oksana Lushankina
Psykolog, Relasjoner i familien. Spesialist fra b17.ru
Anna Dashevskaya
Psykolog, Skype-konsultasjoner. Spesialist fra b17.ru
Irina Bukina
Psykolog. Spesialist fra b17.ru
Aksyonova Anna Mikhailovna
Psykolog, kandidat i gruppeanalyse. Spesialist fra b17.ru
Jeg vil ikke skremme deg, men når de ringer deg til AIDS-senteret, er det nesten alltid positivt, ikke ta det på nytt, lykke til, det viktigste er å ta terapi og leve lenge
En venn har levd med hiv i ti år og tatt vare på seg selv.
De sier at om tre år vil de trolig finne en kur.
I alle fall ikke fortvil og ikke spre det, bli behandlet
Nei, IB kan ikke være falsk positiv og ingen kjønnssykdommer påvirker denne analysen. Hvis den er positiv, så har du dessverre HIV, du må overvåke immuncellene dine og starte behandlingen i tide.
akk, nei ((hvis de ringte til senteret, så er det definitivt HIV
Så vidt jeg vet, kan de første og til og med påfølgende immunoblot-resultatene være tvilsomme. ikke falske positive, men tvilsomme. og deretter bestilles en reanalyse. Her er teksten fra nettsiden:
"Immun blotting brukes oftest for å bekrefte diagnosen HIV-infeksjon. WHO anser sera som positive hvis antistoffer mot to av HIV-kappeproteinene påvises ved immunblotting. I henhold til disse anbefalingene, hvis det er en reaksjon med bare ett av kappeproteinene (gp160, gp120, gp41) i kombinasjon med eller uten reaksjon med andre proteiner, anses resultatet som tvilsomt, og en andre studie anbefales ved bruk av et sett fra en annen serie eller fra et annet selskap. Hvis resultatet etter det fortsatt er tvilsomt, fortsettes studiene hver tredje måned.
du kan google. i så fall håper jeg du ikke tester positivt for HIV. men hvis det er bekreftet, vit at i dag med denne diagnosen lever og lever de like lenge som friske mennesker og føder barn. hovedbetingelsen er disiplin i behandlingen. helse til deg!
Antiretroviral terapi på nett
Kalkulatorer
Nettstedet er beregnet på medisinske og farmasøytiske arbeidere over 18 år
Dechiffrere analysen - immunoblot
Vennligst hjelp meg med å tyde analysen
ENV(GP160)+
ENV(GP110/120)+
ENV(GP41)+
GAG(P55)+
GAG(P40)+
GAG(P25)+
POL(P68)+
POL(P52)+
POL(P34)+
Hallo! For 2,5 år siden tok jeg en HIV-test, det var en slik immunblotting:
Gp-160+, Gp-110/120+, Gp-41+, p17+, p25+, p31+, p34+, p52+, p55+, p68+. Og her er immunblotten fra 30.05.18: Gp-160+, Gp-41+, GAG 1 -, poll+, env2-. Det er ikke klart hva kast + betyr? Er han den eneste der eller har han ikke blitt avslørt? Og hvor ble det av resten av proteinene?
Pol og Env er gener som koder for grupper av proteiner. Vurder det bare som en annen rekord. Spørsmålet er annerledes. Og hva venter vi på? Hvorfor vurderer vi en skamplett? Alt er ganske klart. Noe må gjøres.
Har allerede blitt vant til at jeg har HIV. Og klar for terapi.
Bare nysgjerrig på å høre din mening. Er dette en ny infeksjon eller mangler jeg noe? Eller noen ganger hender det at immunblotten sakte åpner seg mye?
I dag så jeg på analysene mine i min personlige fil (gjort i SC):
ELISA på første testsystem - positiv
ELISA på det andre testsystemet - negativ (hvordan er det?)
Ytterligere IB (gjort invitro og SC for en måned siden):
immunoblot på det første testsystemet: gp 160+, gp 41+
immunoblot på et annet testsystem: gp41+, p24+, p17+
immunoblot på det tredje testsystemet: gp160+, gp120+, gp41+, p24+
I følge prognosene mine kunne jeg ha blitt smittet for et år siden (det akutte stadiet var i april et sted), eller for 9 måneder siden, men generelt - xs når) brukte jeg alltid beskyttelse og hadde sex uten kondom bare en gang på høsten 2017.
I dag ga jeg nok en gang VN og IP videre. Teru starter om en måned, når bestillingen kommer.
Datoer satt på de nevnte prøvene.
Første blot før ELISA? Slår ikke. Det er ikke noe øyeblikk her som vil tillate oss å si at en ny infeksjon er høyst sannsynlig, eller omvendt.
Det vil forbli et mysterium hvis du ikke ved et uhell finner kilden og sammenligner.
For å avklare, da
Overlevert i Invitro.
Den første IFA er 11. mai.
Så gikk det samme serumet til blotet og en positiv analyse kom inn, hvor to proteiner ble identifisert.
gp 160+, gp 41+
Da har jeg allerede overlevert til SC igjen.
Donerte blod 29. mai.
Og der ble han kjørt gjennom flere testsystemer, hvor det første viste negativt, det andre positivt. Negativ ELISA er imidlertid morsomt.
Deretter går det samme serumet til blotet der dataene kom fra:
Første testsystem: gp41+, p24+, p17+
Andre testsystem: gp160+, gp120+, gp41+, p24+
Men ikke poenget.
En ny analyse av IP har kommet - 754. Dette gleder. VN er ikke klar ennå. Så snart den kommer, starter jeg sannsynligvis teru.
Jeg er 80% sikker på at infeksjonen var et år siden. Og det faktum at blottet sakte åpner seg og ELISA er negativ er merkelig. Eller er det innenfor normalområdet?
Negativ ELISA er imidlertid morsomt. Jeg vil også gjerne vite navnet på systemet for å kunne skrive det ned i en svart notatbok. Selv om dette øyeblikket, hvis du ikke tar teorien med ekteskap, er sterkt for tidlig infeksjon.
Jeg er 80% sikker på at infeksjonen var et år siden. Dårlig klatt for den perioden. Ikke umulig, men usannsynlig.
På et tidspunkt begynte jeg til og med å tvile på resultatene av HIV-tester - så jeg venter på VN.
Her vil det siste punktet i spørsmålet allerede være satt.
Betraktes det også innenfor normalområdet at IP har vokst med 200 eksemplarer uten tera på en måned? Jeg tar Ursosan nå for en polypp i galleblæren - innlegget sier at stoffet forbedrer immuniteten.
Det er nødvendig å evaluere begge med et relativt innhold, og ta hensyn til dataene fra ett laboratorium med en beregningsmetode. Fordi - Gud vet hva som skjer med CD4.
Generelt er CD4-tallet 780 celler/µl. VN - 250 kopier / ml.
Dette er uten terapi. Det vil si at CD4 av 486 hoppet til 780 på en måned.
BH falt fra 550 til 250 eksemplarer.
Likevel er ikke dette rart, eller er slike hopp innenfor normalområdet? Er det på tide å starte Tera?
Hallo! Jeg passerte ifa tre ganger, hver gang + kom en immunoblot p24+ p18+ fra SC. Den potensielle risikoen var for mer enn seks måneder siden. p24 indikerer at det fortsatt er HIV?
Blot tvilsomt, gjenta etter 6-8 uker. Mest sannsynlig falsk alarm.
God dag!
Testresultatene kom tilbake, inkludert en blot:
Farlig kontakt: 24.04.2018
ELISA-test for HIV 23.05.2018 (4 uker fra farlig kontakt eller 29 dager) resultat "+"
ELISA-test for HIV 28/05/2018 (5 uker fra farlig kontakt eller 34 dager) «retake»-resultat
ELISA-test for HIV 06/01/2018 (5 uker fra en farlig kontakt eller 38 dager) resultat "+"
En flekk kom fra den første analysen (23.05.18):
GP160 sl.
P24 sl.
Nye tester bestått 06.06.2018 ELISA og PCR HIV RNA ved det lokale AIDS-senteret. Vi venter fortsatt på resultatene.
Blot-spørsmål:
1. Hvis P24 er tilstede, er det nødvendigvis et HIV-antigen eller kan et slikt protein påvises ved andre sykdommer?
2. Hva betyr forkortelsen "sl" ved siden av proteinet? Vanligvis i de beskrevne blottene er det + eller -
3. Hva bestemmer utplasseringen av en blot? Fra begrepet eller fra kroppens individuelle egenskaper?
4. Med en slik klatt i 4. uke fra en farlig kontakt, er det en sjanse for at dette ikke er HIV?
Ha en fin dag og takk.
1. nei, det kan bare være et lignende protein av en annen natur. 2. svak. de. tvilsom. 3. Tidsfrister og realisere individuelle funksjoner, men i gjennomsnitt er alt veldig nært. 4. Spørsmålet er feil, det er alltid en sjanse til diagnosen er etablert.
Hallo!
Vennligst hjelp meg med å navigere i resultatene av analysene og forstå hvordan jeg skal oppføre meg riktig slik at de gjentatte analysene blir korrekte.
Analyser overlevert 25.05.2018
HIV IB
NY LAV BLOT 1 - udefinert fra 29.05.2018
IB HIV-markører
gp 160+
gp 120 —
gp 41 -
p55+
p40-
s 24+
s18-
s 68 —
s 52 —
s 34 —
HIV ELISA
ADVIA Centaur HIV Ag-Ab Reaktivitet ELISA 12.00 positiv (28.05.2018)
Det anbefales å gjenta analysen etter 2 uker.
I november 2017 hadde jeg NPA, hvoretter jeg tok tester på HIV Ag\Ab Combo Abbott Architect testsystem, da var resultatet negativt.
Samtidig hadde jeg full blodtelling. Lymfocytter er litt økt, eosinofiler er nøyaktig 0 (men jeg hadde slike indikatorer for eosinofiler før.
Hovedspørsmålet er:
Hvilke medisiner kan og kan ikke tas i løpet av disse to ukene? (Jeg vil at ingenting skal "blinke")
Jeg har av og til allergianfall, vanligvis drikker jeg tavegil. Bør det forlates?
Kan antibiotika tas før testing? (hvis foreskrevet av lege for behandling av andre infeksjoner og sykdommer)
Immunblotting i HIV-diagnostikk
Immunblotting (immunblot, Western blot, Western blot)- kombinerer enzymimmunoassay (ELISA) med foreløpig elektroforetisk overføring til en nitrocellulosestrimmel (strimmel) av virusantigener.
I dette vakre vitenskapelige navnet oversettes "blot" mest sannsynlig som "blot", og "vestlig" som "vestlig" gjenspeiler distribusjonsretningen til denne "flekken" på papir fra venstre til høyre, det vil si på et geografisk kart dette tilsvarer retningen fra vest til øst." Essensen av "immun blot"-metoden er at den immunoenzymatiske reaksjonen ikke utføres med en blanding av antigener, men med HIV-antigener, tidligere fordelt ved immunoforese i fraksjoner lokalisert i henhold til molekylvekten på overflaten av en nitrocellulosemembran. Som et resultat blir hovedproteinene til HIV, bærere av antigene determinanter, fordelt over overflaten i form av separate bånd, som vises under enzymimmunoanalysen.
Immunoblot inkluderer flere stadier:
Strip klargjøring. Immunsviktviruset (HIV), som tidligere har blitt renset og ødelagt til dets bestanddeler, utsettes for elektroforese, mens antigenene som utgjør HIV, separeres etter molekylvekt. Deretter, ved å blotting (analogt med å klemme overflødig blekk på en "blotter"), overføres antigenene til en stripe nitrocellulose, som nå inneholder et spekter av antigene bånd som er karakteristiske for HIV som er usynlige for øyet.
Eksempelstudie. Testmaterialet (serum, blodplasma til pasienten, etc.) påføres nitrocellulosestrimmelen, og hvis det er spesifikke antistoffer i prøven, binder de seg til de strengt korresponderende (komplementære) antigene båndene. Som et resultat av påfølgende manipulasjoner blir resultatet av denne interaksjonen visualisert - synliggjort.
Tolkning av resultatet. Tilstedeværelsen av bånd i visse områder av nitrocelluloseplaten bekrefter tilstedeværelsen i det studerte serumet av antistoffer mot strengt definerte HIV-antigener.
For tiden er immunblotting (immunoblot) hovedmetoden for å bekrefte tilstedeværelsen av virusspesifikke antistoffer i testserumet. I noen tilfeller av HIV-infeksjon, før serokonversjon, oppdages spesifikke antistoffer mer effektivt ved immunblotting enn ved ELISA. En immunblotting-studie viste at antistoffer mot gp 41 oftest påvises i sera fra AIDS-pasienter, og påvisning av p24 hos personer som undersøkes for profylaktiske formål krever ytterligere studier for tilstedeværelse av HIV-infeksjon. Immunoblot-testsystemer basert på genetisk konstruerte rekombinante proteiner viste seg å være mer spesifikke enn konvensjonelle systemer basert på renset viruslysat. Ved bruk av et rekombinant antigen dannes det ikke et diffust, men et klart definert smalt bånd av antigen, som er lett tilgjengelig for regnskap og evaluering.
Serum fra personer infisert med HIV-1, oppdager antistoffer mot følgende hovedproteiner og glykoproteiner - strukturelle kappeproteiner (env) - gp160, gp120, gp41; kjerner (gag) - p17, p24, p55, samt virusenzymer (pol) - p31, p51, p66. For HIV-2 er antistoffer mot env typiske - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol-p68.
Blant laboratoriemetodene som er nødvendige for å fastslå spesifisiteten til reaksjonen, har påvisningen av antistoffer mot HIV-1-kappeproteiner - gp41, gp120, gp160 og HIV-2 - gp36, gp105, gp140 den største anerkjennelsen.
WHO anser sera som positive hvis antistoffer mot to av HIV-glykoproteiner påvises ved immunblotting. I henhold til disse anbefalingene, hvis det er en reaksjon med bare ett av kappeproteinene (rp 160, rp 120, rp 41) i kombinasjon eller uten reaksjon med andre proteiner, anses resultatet som tvilsomt, og en ny test anbefales ved bruk av et sett fra en annen serie eller fra et annet selskap. Hvis resultatet etter dette fortsatt er tvilsomt, anbefales observasjon i 6 måneder (forskning etter 3 måneder).
Tilstedeværelsen av en positiv reaksjon med p24-antigenet kan indikere en periode med serokonversjon, siden antistoffer mot dette proteinet noen ganger vises først. I dette tilfellet anbefales det, avhengig av de kliniske og epidemiologiske dataene, å gjenta studien med en serumprøve tatt minst 2 uker senere, og dette er akkurat tilfellet når parrede sera er nødvendig ved HIV-infeksjon.
Positive reaksjoner med gag- og pol-proteiner uten tilstedeværelse av en reaksjon med env-proteiner kan reflektere stadiet av tidlig serokonversjon, og kan også indikere HIV-2-infeksjon eller en ikke-spesifikk reaksjon. Personer med slike resultater etter testing for HIV-2 blir undersøkt på nytt etter 3 måneder (innen 6 måneder).
Spørsmål: Gjentatt analyse for HIV?
Jeg ble testet for seksuelt overførbare infeksjoner (ingen symptomer, jeg ville ha tillit til et forhold med en kvinne). HIV-testen var positiv. Etter ultralyden viste en svulst på nyren, fjernet (den viste seg å være ondartet).
Jeg leste boken til Sazonova I.M., den sier at en ondartet svulst kan gi positivt testresultat for HIV.
Kan dette være tilfelle, eller er det ingenting å håpe på?
Du må ha en kontrolltest for HIV. Hvis den første HIV-testen ble bestemt av ELISA, kan resultatet være falskt positivt. Dens pålitelighet kan kontrolleres ved hjelp av en mer sensitiv diagnostisk metode - PCR (polymerasekjedereaksjon), som bestemmer virusets DNA i blodet.
Hjelp. 12/16/10 ELISA (+) IB (+) deretter fra 23/03/11 til 05/19/11 ni negative ELISA (-) og kvantitativ PCR. er ikke bestemt. i 2002 under graviditet ELISA deretter (+) deretter (-), men IB er alltid (-). Fra 2004 til 2008 besto jeg ELISA (-) 2 ganger i året, men 30.04.08 IFA (+) og IB-undefined. deretter igjen hver 2. måned overlevert IFA alltid (-). og siden desember 2010 har det vært skrevet ovenfor.. Samtidig har jeg aldri sprøytet, mannen min har alltid ELISA (-). CD4 980 celler. og til og med blod for syfilis fra 29.04 ga 3 +++ og deretter tre ganger. negativ hver 10. dag. hepatitt alle (-). Er det noen som har hatt en lignende. Takk skal du ha.
Vennligst spesifiser om du gjennomgikk RIBT (treponema pallidum immobiliseringsreaksjon), i så fall, hva er resultatene av denne studien.
nei, ingen tilbød meg å gjøre en slik analyse, hva vil den vise? Jeg håper du forstår at jeg snakket om HIV-tester. Takk skal du ha. Har du hatt lignende tilfeller i praksisen din? om informasjonssikkerhet i 2008 var forresten usikkert. var p24/25 protein. i 2010 IB(+) proteiner gp160.41.120 p24.17.31. så når ifa igjen 3 ganger (-) ble sendt til IB 4. april. resultatet ble positivt, men proteinene gp 120 og 41. resten er krysset over med rød pasta og nederst med rød IB REPEAT. men PCR fra samme nummer vil bli nektet. etter 4. april overleverte jeg IFA allerede 4 ganger nekte. alt i AIDS-senteret, inkludert antigen og antistoff. Nå venter jeg på en ny IB og en høykvalitets PCR. det er det. VELDIG SLITT Å TENKE OG VENTE. Håper på det beste. TAKK SKAL DU HA. Jeg ser frem til svar.
Hvis du stiller spørsmål, prøv neste gang å formulere det mer spesifikt, med en avklaring av diagnosen. RIBT brukes til å bekrefte diagnosen syfilis. For nøyaktig diagnose av HIV-infeksjon, bestemmes antistoffer mot HIV i blodet ved ELISA og immunoblot. Diagnosen bekreftes bare hvis begge disse resultatene er positive.
beklager at jeg formulerer spørsmålet unøyaktig. Jeg skrev at IFA og Imunoblot for HIV ble positive i desember. men siden mars er ifa for HIV negativ 9 ganger. hvis jeg var registrert på AIDS-senteret, skjer dette i prinsippet. HIV er enten alltid positivt eller negativt. og hvordan kan en immunoblot settes på HIV hvis resultatet av ELISA er negativt? da vil alle nekte om det må sjekkes for immunoblot, så hva skjer? i fartssenteret vårt kan de ikke svare meg noe. Her er hva jeg henvendte meg til deg. Takk skal du ha.
Dessverre kan både ELISA og immunoblot gi falske positive resultater. Det er grunnen til at diagnosen HIV anses som endelig, bare med samtidig påvisning av HIV ved ELISA og immunoblotmetoden.
hei i dag fikk jeg resultatet av en PCR for HIV, et kvalitativt virus ble ikke påvist og en gjentatt immunoblot for HIV, resultatet er usikkert pga protein 41. i AIDS SENTRUM sa de at det mest sannsynlig ikke er HIV, men i kroppen min er det kropper som i struktur ligner HIV. Hva tror du, gitt spørsmålene mine fra 15. og 16. juni (se ovenfor), er det HIV eller ikke. TAKK SKAL DU HA.
I dette tilfellet er diagnosen HIV-infeksjon tvilsom.
Du skriver at kun ved samtidig påvisning av HIV ved hjelp av IF og immunoblot, regnes diagnosen HIV som endelig. Men hva med i mitt tilfelle? tross alt vil alle ptsr nekte. og blot og ifa hoppe hele tiden. i 9 år. fortell meg, hvis viruset var i blodet mitt, så kunne dets RNA og DNA bestemmes nøyaktig i så mange år. og kan inkubasjonstiden eller "vinduet" vare så mange år? Er det falske negative resultater av PCR for HIV gitt en slik tidsperiode? Ja, jeg glemte å si at de raske HIV-testene jeg tar på CPD alltid er negative, eller kan jeg ikke stole på dem heller? Takk skal du ha.
I dette tilfellet er ikke PCR-diagnostikk hovedmetoden for å identifisere dynamikken i prosessen - serologiske metoder er mer informative. I dette tilfellet er sannsynligheten for falske negative resultater høy. raske HIV-tester har en høy sensitivitetsterskel, derfor kan de også gi et falskt negativt resultat.
Beklager. Jeg skrev definitivt på feil sted. vennligst svar i emnet HIV eller ikke HIV. Takk skal du ha.
I tilfelle du ikke har mottatt et varsel om mottak av svar på e-posten din, kan du se svaret på spørsmålet ditt på denne adressen http://tiensmed.ru/news/answers/vich-ili-ne-vich- .html
Hallo! Fortell meg at for å registrere meg på LCD-skjermen (nå 10 uker gravid), besto jeg tester for HIV, en lege ringte meg for et par dager siden og sa at de foreløpige testene for HIV var positive (den første ble gjort i Kirovograd, men det er fortsatt ikke noe offisielt resultat fra Kiev ), samme dag, i vårt bylaboratorium, ble to ekspresstester av Pharmasco-selskapet CITO TEST HIV 1/2 utført, begge resultatene er negative, laboratorieassistenten sa at disse testene er pålitelig og jeg trenger ikke å bekymre meg, siden dette skjer under graviditet, Og disse analysene kan rett og slett forvirre. Legen sa at jeg skulle donere blod igjen, og jeg donerte blodet mitt to ganger til for analyse på forskjellige sykehus (jeg har fortsatt ingen av de tre resultatene). Jeg er veldig bekymret, jeg er ikke narkoman, det var ingen tvilsomme seksuelle forhold, hvis jeg blir syk veldig sjelden, er andre tester alle normale. Kan man stole på hurtigtester? Skjer dette virkelig under svangerskapet? Smertefullt har legen skremt meg. Takk skal du ha
Først av alt må du roe deg ned og ikke tenke på det dårlige. Noen ganger under graviditet er det falske positive resultater. Det er nødvendig å gi blod på nytt for HIV og vente på resultatene av undersøkelsen.
Hallo! Saken er at hos meg for 2 måneder siden var det en seksuell kontakt med jenta (til nå vi møtes). etter 1,5 uke steg temperaturen til 37,4. sov snart. for å være sikker besto vi IF-analysen etter 2 uker og igjen etter 1,5 måneder. Begge svarene er negative. men jeg har fortsatt feber og hoste med varierende bedring. Kan du fortelle meg om det er en risiko? dessuten jobbet jeg lenge uten fridager og for en uke siden var jeg sykemeldt (orvi). blod- og lungeprøver er fine. Takk skal du ha.
Denne temperaturen kan være assosiert med en virussykdom, kroppen har ikke kommet seg ennå, eller kronisk overarbeid. I tilfelle at en organisk patologi er utelukket, er en generell blod- og urinprøve innenfor det normale området, så vel som dataene fra en fluorografisk studie også er innenfor det normale området, er det nødvendig å utelukke seksuelt overførbare sykdommer: klamydia, mykoplasmose, ureaplasmose, som kan forårsake betennelse i organene i det lille bekkenet og urinrøret og som et resultat en økning i kroppstemperaturen. Les mer om årsakene til økningen i kroppstemperatur ved å klikke på lenken: Høy temperatur.
Hallo. Det er noe slikt - For mer enn ett år siden var det ubeskyttet seksuell kontakt med en gående jente. Hun forsikret meg om at hun ikke var syk med noe, men jeg kan ikke tro henne 100 prosent. Hun forsikret også at hun hadde gjennomgått en medisinsk undersøkelse før hun fikk jobb (hun jobbet som selger) og alt var bra. 7 måneder etter kontakt besto jeg fortsatt en HIV-test i citylab-laboratoriet - resultatet var negativt. Men nylig begynte jeg ofte å bli syk - i 3 uker nå har jeg rød sår hals og kan ikke kurere den. Igjen begynte han å bli redd, men plutselig fanget han det da? Fortell meg, er dette mulig, og er det verdt å stole på analysen fra citylab? Jeg er redd for å gi opp igjen, nervene mine tåler det ikke..
I tilfelle resultatet er negativt, er du mest sannsynlig ikke syk og ikke smittet med HIV / AIDS. For å avklare diagnosen anbefales det imidlertid å analysere på nytt i spesialiserte laboratorier ved statlige institusjoner; denne undersøkelsen utføres anonymt. I tilfelle selvbehandling ikke gir ønsket resultat, anbefales det å konsultere en otolaryngolog for å gjennomføre en tilstrekkelig undersøkelse og foreskrive passende behandling. Les mer om HIV-testing i en serie artikler ved å klikke på lenken: HIV.
Fortell meg, kan du gi noen beskrivelse av citylab-laboratoriet? Likevel er det ikke alltid mulig å bestå en analyse ved en statlig institusjon. Og hva er den prosentvise sjansen for en mann å bli smittet gjennom ubeskyttet kontakt?
Dessverre gir vi ikke en sammenlignende vurdering av laboratorier og private medisinske institusjoner. I tilfelle du tviler på påliteligheten av resultatene, foreta en undersøkelse i et annet senter og be først om en lisens for å tilby disse medisinske tjenestene, om dette senteret har rett til å gjennomføre denne undersøkelsen og om alt er i samsvar med aksepterte standarder. Smitterisikoen er lik for begge kjønn ved ubeskyttet samleie. Les mer om HIV-testing i en serie artikler ved å klikke på lenken: HIV.
God ettermiddag Et 8 måneder gammelt barn ble testet for HIV ved ELISA, gp160 + og p25 + ble funnet i blodet, resten er minus, konklusjonen av IB er tvilsom. Etter disse analysene å dømme viser det seg at barnet er +? gp160 + gp110/120 - p68 - p55 - p52 - gp41 - p34 - p25 + p18 -
Dessverre, på grunnlag av innhentede data, er det umulig å stille en diagnose med 100 prosent sannsynlighet, siden et falskt positivt resultat ikke er utelukket. For å stille en nøyaktig diagnose må du gjennomgå en rekke undersøkelser, inkludert å gjenta denne analysen med ELISA, samt bestå en analyse ved hjelp av PCR-metoden. Etter det bør du kontakte en spesialisert medisinsk institusjon, hvor infeksjonsspesialisten vil kunne evaluere resultatene i et kompleks. Du kan lære mer om manifestasjonene av HIV-infeksjon i den tematiske delen av nettstedet vårt ved å klikke på lenken: HIV
Kan det vise et falskt positivt resultat ved "ARI" eller mer akutte infeksjonssykdommer? Et sted leste jeg at med 58 sykdommer eller enda høyere, kan det vise "+", inkludert vaksinasjon mot hepatitt B, om nyrene osv. lider?
Det er en mulighet for et falskt positivt resultat, så jeg anbefaler at du gjør følgende: analysere på nytt - ved ELISA og PCR, og deretter besøke en infeksjonsspesialist på nytt. Du kan lære mer om diagnosen HIV-infeksjon i temadelen: HIV
God ettermiddag Immunoblot ubestemt på grunn av p25-protein. Hva er sannsynligheten for HIV?
I denne situasjonen er det nødvendig å studere studieprotokollene nøye i kombinasjon med andre indikatorer, siden det ikke er mulig å gjøre en antagelse basert på disse dataene. Antagelig kan resultatet anses som tvilsomt og det kreves ny undersøkelse etter 3 måneder. Les mer på vår nettside: HIV
God ettermiddag.
Kan du kommentere ELISA for HIV
1 serum +3,559 k=13,3
+2,121 k=4,9
s 24 neg
Serum 2 +3,696 k=13,9
+2,477 k=5,7
I dette tilfellet er et falskt positivt resultat ikke utelukket, gitt at ELISA-metoden er indirekte, så jeg anbefaler at du tar en analyse med en annen, mer sensitiv metode - immunblotting. Du kan finne ut mer detaljert informasjon om dette problemet i den relevante delen av nettstedet vårt ved å klikke på følgende lenke: HIV
God ettermiddag, fortell meg hva jeg skal stille inn? For et år siden, da jeg planla et barn, gjennomgikk mannen min og jeg alle testene, inkludert for HIV (de tok det veldig seriøst og riktig), ble jeg undersøkt i Kr. AIDS i Kiev. Etter å ha bestått analysen ved Senteret, kom svaret negativt for meg også. Nå er jeg i stilling ved 14 uker, dvs. Jeg blir registrert, jeg går gjennom alle testene og igjen kom svaret tilbake, HIV-testen var ubestemt, jeg besto den på nytt på klinikken og besto en ekspresstest for å roe ned på Dovir, men de roet meg ikke ned , ekspresstesten viste et positivt resultat (den andre stripen var mindre uttalt), umiddelbart etter all denne prosedyren, uten å kaste bort tid, søkte jeg til AIDS-senteret og bestod også en analyse, jeg venter på resultatet. (Jeg kan ikke roe meg ned) Fortell meg hvor mye du kan stole på ekspresstestene og hvorfor første gang det ikke er noe svar på HIV-testen? (min mann og jeg fører en sunn livsstil og elsker hverandre). Takk skal du ha.
Ikke få panikk på forhånd - ekspressdiagnostikk er ikke grunnlaget for å stille en HIV-diagnose, den lar deg identifisere grupper av pasienter som trenger en mer dyptgående studie. I slike situasjoner anbefales det å utføre immunblotting og personlig konsultere en infeksjonslege. Du kan finne ut mer detaljert informasjon om dette problemet i den tematiske delen av nettstedet vårt ved å klikke på følgende lenke: HIV. Du kan også få tilleggsinformasjon i følgende del av nettstedet vårt: Laboratoriediagnostikk
Hei, jeg var i en infeksjonssykdom, bare i dag ble jeg skrevet ut da jeg dro, legen ringte meg og forklarte at jeg hadde en positiv ifa, først da jeg dro til sykehuset var den negativ, så da jeg tok meg igjen ble den positiv , de sendte en immunoblotstudie til falkonererne på fjellet de sa at den ville være klar neste uke, jeg var på sykehuset med sår hals og parainfluensavirus, jeg kommer i sjokktilstand, jeg forstår fortsatt ikke hvordan jeg skal se det, et utdrag for klinikken min ble også utarbeidet som indikerer at hvis det ble funnet og lavere at immunblotten var i arbeid, hvis jeg i morgen ble skrevet ut på klinikken din, vil alt bli indikert i dette utdraget, hvor sannsynlig er HIV? det mulig at på grunn av det faktum at jeg ble behandlet for sår hals av parainfluensaviruset, viser positive resultater for ifa?
Sannsynligheten for et falskt positivt resultat er svært høy. Tilstedeværelsen av ett positivt resultat gir foreløpig ikke grunnlag for å stille en HIV-diagnose, så vi anbefaler at du avventer resultatet av immunblotting, og deretter personlig konsulterer en infeksjonsspesialist om videre undersøkelse og observasjon. Angina, parainfluensa og andre forkjølelser påvirker ikke resultatene av analysen nevneverdig.
Jeg vil tro det, men i slutten av august hadde jeg et ubehag, temperaturen steg, 37,5-38 hadde løs avføring i ca 4 dager, det var på ferie hvor det var mye diskotek, jeg drakk vann fra springen som f.eks. mange andre, fordi det var veldig dyrt et glass vann kostet 300 rubler, jeg assosierte løs avføring med en slik temperatur med en slags tarminfeksjon fanget i vannet, jeg husker ikke nøyaktig, men det var også et lite utslett i overkroppen, da jeg kom hjem med feber ringte jeg legen, hun skrev en rotavirusinfeksjon, etter 5 dagers sykdom meldte jeg meg frivillig til å forlate ham og gå på jobb hvor jeg ble syk noen dager senere med bihulebetennelse (under den perioden jeg måtte være på gaten) jeg koblet det til at et stort temperaturfall fra ferie og forgiftning senket immuniteten min og derfor ble jeg forkjølet igjen med bihulebetennelse, totalt er det igjen en sykmelding, ved retningen av Laura drakk jeg klacid cf 500 i 10 dager, det gikk over, jeg gikk tilbake på jobb etter 3 uker var jeg på forretningsreise i et varmt land i 3 dager. klimaanleggene i transporten og hotellet var nådeløse og ved hjemkomsten hadde jeg på flyet en temperatur allerede på 39,5. Her var jeg hjemme med en temperatur på 40, ringte legen til huset, skrev orvi og sa min halsen var veldig rød, jeg hadde kronisk betennelse i mandlene og sa dette til Laura, hun skrev selv for å drikke en antibiotika Levolet r. ringte ambulanse fordi hun hadde feber og tempoet var 40 og gikk ikke ned, sykehusinnleggelse ble ikke tilbudt, neste dag samme historie - ambulansen ga en febernedsettende injeksjon og dro. Den tredje gangen jeg insisterte på sykehusinnleggelse, tok de meg så vidt til infeksjonssykehuset, hvor det ble oppdaget en blandingsinfeksjon av parainfluensa og adenovirusinfeksjon, men ved utskrivelse lege - avdelingsleder sa at jeg hadde positiv HIV ifa og at de gjorde det to ganger, jeg er i sjokk, jeg vet ikke hva jeg skal gjøre jeg kan ikke spise og drikke .hun sa at jeg har en uttalt akutt HIV-infeksjon og for bekreftelse sendte de en analyse av blodet mitt for en immunblotting til AIDS-senteret,
nå, med en analogi av hendelsene som har skjedd med meg i det siste, samt 3 sykemeldinger på rad, prøvde jeg på alle symptomene og jeg er forferdet over hva som kan være, etter å ha blitt skrevet ut samme dag, gikk for å ta en analyse i en in vitro anonymt og dagen etter var resultatet for ifa det samme +
Jeg beklager så detaljert informasjon, men jeg blir revet bort og drept, jeg drikker sterke beroligende midler og har ingen matlyst og spiser praktisk talt ikke, jeg har gått ned mye i vekt
Jeg har også et slikt spørsmål at legen med et utdrag fra sykehuset indikerte resultatet av HIV ved at hvis ble funnet og under det immunblotten er i arbeid, men så snart jeg lukker bl i klinikken min på stedet, vil alt skrives der. hva skal jeg gjøre? det vil ikke lenger være konfidensielt. Jeg ba legen om ikke å skrive denne analysen i utdraget, som hun nektet meg til, i hvilken grad mine rettigheter til ikke-utlevering av informasjon respekteres her.
Dessverre passer resultatene av studiene utført på sykehuset inn i utdraget, siden den behandlende distriktslegen må ha full informasjon om din helsetilstand. I denne situasjonen snakker vi ikke om utlevering av informasjon, siden den kun overføres til en annen behandlende lege, som vil fortsette å observere deg.
Hallo! Jeg tok tester for HIV fordi jeg trengte en sertifikat for FMS, de ga ikke testene på et par uker, så inviterte de meg til hodet og de ga meg et positivt resultat, de tok en haug med kvitteringer og sendte dem til det regionale AIDS-senteret for videre undersøkelse, som det står på sertifikatet. Jeg ønsker å passere på en annen klinikk og deretter gå til den regionale, eller er det fornuftig å ta den på nytt? Jeg forstår bare ikke hvorfor de ikke ga dem bort så lenge, men legen sa at de angivelig gjorde en slags analyse og jeg skylder dem ytterligere 4 tusen rubler, for hvis de gjorde det, ville de sannsynligvis gi detaljert opplysninger om sykdommen i tillegg til attesten?
I denne situasjonen bør man ikke få panikk på forhånd - å oppnå ett positivt resultat lar en ennå ikke bedømme pålitelig om en mulig infeksjon, siden falske positive resultater ikke er utelukket. Vi anbefaler at du tar testen på nytt og hvis det er et positivt resultat, må du gjennom en ny undersøkelse - immunblotting. Laboratoriet gir som regel ikke detaljert informasjon om resultatene, noe som er vanlig og vanlig praksis. Alle spørsmål du måtte ha kan besvares av behandlende lege etter undersøkelsen ved en personlig konsultasjon.
Jeg glemte å legge til at fra begynnelsen av juni til midten av september tok jeg meg en kurs med anabole steroider, nemlig sustanon 250 er en blanding av testosteroner og stanozolol med primabolan, jeg ønsket å forberede meg på sommeren og ferien, kunne de ta med ned immuniteten min og alt som skjedde med meg.
Immunforstyrrelser, så vel som tilstedeværelsen av autoimmune sykdommer, kan gi falske positive resultater av en HIV-test. Derfor anbefales immunblotting, i tilfelle du oppnår 2 positive resultater med ELISA, som lar deg svare nøyaktig på spørsmålet om det er infeksjon eller ikke.
hva betyr tilstedeværelsen av autoimmune sykdommer, hva er de?
generelt kan jeg si at jeg ble syk ganske ofte fra tidlig barndom, og til og med for et par tre år siden ba jeg den behandlende legen om å ta vare på immuniteten min, fordi jeg var konstant trøtt og ofte syk, for det meste øre, hals, nese , men hele tiden det var negative resultater for HIV, jeg overleverte dem med tilstrekkelig letthet, uten å nøle.
Et falskt positivt resultat av en HIV-test kan være etter en nylig virusinfeksjon, hepatitt B-vaksinasjon, tuberkulose, hepatitt, herpes, så vel som mot bakgrunnen av autoimmune sykdommer som: revmatoid artritt, systemisk lupus erythematosus, dermatomyositt, sklerodermi, bindevevssykdommer og etc.
Jeg vil legge til spørsmålet mitt, immunblotten min kom, den var negativ, men legen sa at siden det var to hvis + da jeg var på infeksjonssykehuset, må jeg fortsatt ta analysen på nytt, men litt senere
I dette tilfellet er medisinsk taktikk berettiget - vi anbefaler at du tar en immunoblot igjen om 1,5-2 måneder.
Hva er sannsynligheten: 2 ifa + forskjell mellom blodprøver på ca. 2 dager, immunoblot - ; Jeg var på infeksjonssykehuset med adenovirusinfeksjon og parainfluensa, hvor blodet ble tatt, immunblotten ble sendt til AIDS-senteret
God ettermiddag Jeg ble registrert på LCD-skjermen, gikk gjennom alle testene, legen sier at jeg har herpes i blodet, så ringer de fra AIDS-senteret og sier at jeg må ta det på nytt, jeg søkte og de forteller meg at jeg har HIV-positiv, i panikk gikk jeg sammen med mannen min for å sette opp et sekund. Jeg hadde også en ifa og en immunoblot + mannen min hadde en analyse, jeg ga den igjen en måned senere. Jeg har + mannen min - nå er jeg gravid i uke 23!
I denne situasjonen er det dessverre en mulighet for HIV-infeksjon, men den endelige diagnosen kan ikke stilles selv med en positiv immunblotting, gitt graviditetstilstanden. I denne situasjonen er utelukkelse av falske positive resultater nødvendig, derfor anbefaler vi at du tar testen på nytt og personlig konsulterer en spesialist på infeksjonssykdommer.
hvis immunblotten viste et positivt resultat for HIV, og screeningen er negativ, hvilket resultat bør man stole på?
Immunoblot er en mer nøyaktig studie, derfor, i denne studien, hvis et positivt resultat oppnås, er det nødvendig å fortsette studien og personlig besøke en spesialist på infeksjonssykdommer.
Hva er det - immunoblot? Dette er en vanlig metode for laboratoriediagnostikk av humane virusinfeksjoner. Det regnes som en av de mest nøyaktige og pålitelige måtene å oppdage tilstedeværelsen av HIV. I sin pålitelighet overgår det til og med resultatene av immunobloten anses som ugjendrivelige og endelige.
generell informasjon
Immunoblot - hva er det? For å gjenkjenne en HIV-infeksjon hos en person, er det nødvendig å gjennomgå en laboratorietest av blodserum for tilstedeværelse av antistoffer. Western blot-teknikken kalles også Western blot. Den brukes til å oppdage humane virusinfeksjoner som en ekstra ekspertmetode. Det er nødvendig å bekrefte ELISA - en laboratorietest som lar deg bestemme tilstedeværelsen av HIV-antistoffer i blodet. En positiv ELISA-analyse kontrolleres på nytt ved immunblotting. Det regnes som det mest følsomme, komplekse og kostbare.
hensikt
Hva er det - immunoblot? Dette er en teknikk for laboratorietesting av blodserum for tilstedeværelse av antistoffer mot viruset. Under studien forhåndsseparerer spesialisten proteinene til viruset i gelen og overfører dem til en nitrocellulosemembran. Immunoblotting-prosedyren er ment å bestemme HIV på forskjellige stadier. I det første trinnet blir det rensede viruset fra dets komponenter utsatt for elektroforese, og antigenene som utgjør sammensetningen separeres etter molekylvekt.
Den reproduserer seg i en levende celle, og legger den genetiske informasjonen inn i den. På dette stadiet blir en person bærer av HIV-viruset hvis han ble smittet. Sykdommens spesifisitet er at den kanskje ikke manifesterer seg på lenge. Viruset ødelegger lymfocytter, så den menneskelige immuniteten reduseres, og kroppen blir ikke i stand til å motstå infeksjoner. Hvis HIV behandles kompetent og i tide, vil pasienten leve til en moden alder. Mangel på terapi fører uunngåelig til døden. Fra infeksjonsøyeblikket, men uten behandling, er maksimal levetid ikke mer enn ti år.
Egendommer
Immunoblotanalyse er en pålitelig metode som lar deg bestemme tilstedeværelsen av antistoffer mot HIV-antigener av den første og andre typen. Hvis en person er smittet, oppstår antistoffer innen to uker, som kan oppdages mye senere. Det særegne ved HIV er at antallet antistoffer øker raskt og forblir i blodet til pasienten. Selv om de er tilstede, kan sykdommen ikke manifestere seg før to eller flere år. ELISA-metoden bestemmer ikke alltid tilstedeværelsen av sykdommen nøyaktig, derfor kreves bekreftelse av resultatene ved hjelp av immunoblotting og PCR hvis enzymimmunoanalysen er positiv.
Indikasjoner for avtale
Hva er denne "immunoblot" er allerede funnet ut, men hvem er denne studien foreskrevet? Grunnen til å ta tester for metoden for immunoblotting er et positivt ELISA-resultat. Det er nødvendig å gå gjennom enzymimmunanalyse for pasienter som skal opereres. I tillegg bør det gjøres en analyse for kvinner som planlegger en graviditet, samt for alle som er seksuelt promiskuøse. Tilordne immunblotting til pasienter med HIV, hvis resultatene av ELISA er i tvil. Følgende alarmerende symptomer kan være årsaken til å gå til legen:
- kraftig vekttap;
- svakhet, tap av arbeidskapasitet;
- tarmlidelse (diaré) som varer i tre uker;
- dehydrering av kroppen;
- feber;
- hovne lymfeknuter i kroppen;
- utvikling av candidiasis, tuberkulose, lungebetennelse, toksoplasmose, forverring av herpes.
Pasienten trenger ikke forberede seg før han donerer veneblod. 8-10 timer før studien kan du ikke spise. Det anbefales ikke å drikke alkoholholdige drikker og kaffedrikker, å delta i tunge fysiske øvelser, å oppleve spenning en dag før bloddonasjon.
Hvor skal man gjøre analysen?
Hvor kan jeg bli testet for HIV? ELISA, immunoblot-studier utføres i urbane private klinikker, resultatene utstedes innen en dag. Umiddelbar diagnose er også mulig. I statlige medisinske institusjoner utføres ELISA-tester og immunblotting gratis, i samsvar med lovgivningen i Den russiske føderasjonen. Gravide kvinner, samt pasienter som skal legges inn på sykehus eller opereres, er pålagt å bli testet for infeksjonssykdommer.
Hvordan gjøres forskningen?
Hvordan utføres ELISA? Immunoblot positiv/negativ bekrefter eller avkrefter resultatene av enzymimmunoassay. Forskningsprosedyren er ganske enkel. Spesialisten tar en venøs blodprøve, med tiden tar det ikke mer enn fem minutter. Etter prøvetaking skal injeksjonsstedet desinfiseres og forsegles med plaster. Prøvetakingen utføres på tom mage, så etter prosedyren gjør det ikke vondt å spise en bar med mørk sjokolade eller drikke en søt varm drikke.
For å få en henvisning til gratis analyse ved en offentlig medisinsk institusjon, må du oppsøke en allmennlege. Generelt skiller immunblotten seg ikke fra andre blodprøver når det gjelder prøvetakingsmetoden. Forskningsmetodikken er enkel. Hvis et virus er tilstede i en persons blod, begynner kroppen å produsere antistoffer for å ødelegge det. Hvert virus har sitt eget sett med antigenproteiner. Påvisningen av disse antistoffene er grunnlaget for Western blotting-teknikken.
Pris
Hvor mye koster analysen? Immunoblot for HIV gjelder ikke billig forskning. I gjennomsnitt koster en screeningundersøkelse med enzymimmunoassay fra 500 til 900 rubler. Immunoblotting er en verifiseringsstudie, hvis kostnad er fra tre til fem tusen rubler. Mer komplekse metoder er mye dyrere. For eksempel må du betale rundt 12 000 rubler for det.
Tolkning av resultatet
De vanligste metodene for å diagnostisere HIV-infeksjon er enzymimmunoassay og immunoblot. De brukes til å bestemme serumantistoffene mot immunsviktviruset. Tilstedeværelsen av infeksjon bekreftes vanligvis av to tester: screening og bekreftende. Tolkningen av resultatene av studien bør utføres av en lege, han stiller også en diagnose og foreskriver behandling. Hvis immunblotten er positiv, betyr dette at et virus er tilstede i menneskekroppen.
Et positivt resultat bør ikke være en grunn til selvbehandling, siden hver pasient kan ha sitt eget bilde av sykdommen. Kvalitativ analyse inkluderer screening og verifisering. Hvis pasienten ikke har et virus, er resultatet indikert som "negativt". Når det oppdages av screeningsmetoden, utføres en ekstra verifikasjonsstudie. En immunoblot er en analyse som bekrefter eller avkrefter en screening. Hvis det vises mørkere på teststrimmelen i visse områder (steder for proteinlokalisering), stilles en HIV-diagnose. Hvis resultatene er i tvil, utføres testene innen tre måneder.
Du kan forhindre infeksjon med immunsviktviruset hvis du følger visse regler: unngå tilfeldig sex, bruk kondom under kontakter, ikke ta narkotika. Hvis sykdommen oppdages hos en gravid kvinne, er det viktig å strengt følge anbefalingene fra den behandlende legen, ikke glem å gjennomgå undersøkelser for tilstedeværelsen av viruset.
IMMUNOBLOT(western blot) - en metode for laboratorietesting av blodserum for tilstedeværelse av antistoffer mot HIV; det er en mer nøyaktig test enn ELISA og brukes til å bekrefte ELISA-resultater. ELISA - enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA) - en laboratorietest som lar deg bestemme tilstedeværelsen av HIV-antistoffer i blodet; HIV antistoff test.
I følge WHOs anbefaling brukes immunblotting (western blot) ved diagnostisering av HIV-infeksjon som en ekstra ekspertmetode, som skal bekrefte resultatene av ELISA. Denne metoden brukes vanligvis for å dobbeltsjekke et positivt ELISA-resultat, da den anses som mer sensitiv og spesifikk, men mer kompleks og kostbar.
Immunoblotting kombinerer enzymimmunoassay (ELISA) med foreløpig elektroforetisk separering av virusproteiner i en gel og deres overføring til en nitrocellulosemembran. Immunoblotprosedyren består av flere stadier (). Først, forhåndsrenset og ødelagt til dets bestanddeler, blir HIV utsatt for elektroforese, mens alle antigenene som utgjør viruset er separert etter molekylvekt. Deretter, ved blotting, overføres antigenene fra gelen til en stripe med nitrocellulose eller et nylonfilter, som nå inneholder et spekter av proteiner som er karakteristisk for HIV, usynlig for øyet. Deretter påføres testmaterialet (serum, blodplasma til pasienten, etc.) på stripen, og hvis det er spesifikke antistoffer i prøven, binder de seg til stripene av antigenproteiner som strengt tatt tilsvarer dem. Som et resultat av påfølgende manipulasjoner (som ELISA), blir resultatet av denne interaksjonen visualisert - synliggjort. Tilstedeværelsen av striper i visse områder av stripen bekrefter tilstedeværelsen i det studerte serumet av antistoffer mot strengt definerte HIV-antigener.
Immunoblotting brukes oftest for å bekrefte diagnosen HIV-infeksjon. WHO anser sera som positive hvis antistoffer mot to av HIV-kappeproteinene påvises ved immunblotting. I henhold til disse anbefalingene, hvis det er en reaksjon med bare ett av kappeproteinene (gp160, gp120, gp41) i kombinasjon med eller uten reaksjon med andre proteiner, anses resultatet som tvilsomt, og en andre studie anbefales ved bruk av et sett fra en annen serie eller fra et annet selskap. Hvis resultatet etter det fortsatt er tvilsomt, fortsetter studiene hver tredje måned.
For immunoblotting, i det første trinnet, separeres proteinene i blodserumet i gelen i henhold til deres molekylvekt og ladning ved bruk av et elektrisk felt (gelelektroforesemetode). Deretter påføres en nitrocellulose- eller nylonmembran på gelen og "fuktes" (dette er blotting). Dette utføres i et spesielt kammer, som tillater fullstendig overføring av materialet fra gelen til membranen. Som et resultat blir mønsteret av proteinarrangementet som var på gelen reprodusert på membranen (blotten), som deretter enkelt kan manipuleres. Innledningsvis behandles membranen med antistoffer mot ønsket antigen, og etter å ha vasket av det ubundne materialet tilsettes et radioaktivt merket konjugat som spesifikt binder seg til antistoffer (som i ELISA). Plasseringen av det resulterende antigen-antistoff-merket konjugatkompleks bestemmes ved autoradiografi ved bruk av røntgenfilm. Etter manifestasjonen blir alt klart om det er antigener i blodet eller ikke.
Immunblotting -(fra engelsk "blot" - spot) - en metode for å identifisere antigener (eller antistoffer) ved bruk av kjente sera (eller antigener). Det er en kombinasjon av gelelektroforese med ELISA. Til å begynne med blir bakterieceller eller virioner ødelagt ved hjelp av ultralyd, og deretter separeres alle antigener til viruset eller bakteriecellene ved elektroforese og et kommersielt reagens oppnås på en spesiell nitrocellulosefilm. Ved oppsett av immunblotting påføres testserumet til pasienten på filmen med kjente antigener. Etter inkubasjon og vasking av ubundne antistoffer går de videre til ELISA - et antiserum mot humane immunglobuliner merket med et enzym og et kromogent substrat som endrer farge når de interagerer med enzymet påføres filmen. I nærvær av antigen-antistoff-antiserum mot immunoglobulin-enzymkomplekser, vises fargede flekker på bæreren. Metoden for immunoblotting lar deg separat oppdage antistoffer mot forskjellige antigener av patogenet (for eksempel ved HIV-infeksjon oppdager immunoblotting antistoffer mot gp120, gp24 og andre antigener av viruset).
Radioimmunoassay (RIA)
Metoden er basert på antigen-antistoff-reaksjonen ved bruk av et antigen eller antistoffmerke med et radionuklid. 125I, 14C, 3H, 51Cr og andre radionuklider brukes som etikett. De resulterende immunkompleksene isoleres fra systemet og deres radioaktivitet bestemmes på tellere (β-stråling). Strålingsintensiteten er direkte proporsjonal med antall bundne antigen- og antistoffmolekyler.
Fastfase-versjonen av RIA som bruker merkede antistoffer eller antigener adsorbert i brønnene på polystyrenpaneler er mye brukt.
RIA brukes til å påvise antigener av mikrober, virus, ulike hormoner, enzymer, medisinske stoffer, immunoglobuliner, samt andre stoffer som finnes i testmaterialet i mindre konsentrasjoner på 10–12–10–15 g/l.
Kontrollspørsmål
Immunbakteriolysereaksjon: hva slags reaksjon er det; hva er et antigen, hva er et antistoff, reaksjonsmekanisme, settingmetoder, praktisk anvendelse. Immunhemolysereaksjon: nødvendige ingredienser, innstillingsmetode; kontroller, praktisk anvendelse. Reaksjon av lokal hemolyse i gel (Yerne-reaksjon): reaksjonsprinsipp, formuleringsmetode, praktisk anvendelse. Komplementfikseringsreaksjon: reaksjonsprinsipp; hva som dannes når immunserumet interagerer med et spesifikt antigen; hva skjer med komplement hvis det er tilstede i denne interaksjonen? Hva er skjebnen til komplement hvis det ikke er noen spesifikk affinitet mellom antigen og antistoffer? Hvilken reaksjon kan brukes for å bestemme hva som skjedde med komplementet; hvorfor denne reaksjonen brukes; hva er det synlige positive resultatet av RSK? Hvorfor? Hvilken komplementegenskap brukes i den første fasen av CSC? I andre fase? Hvis sluttresultatet av RSK er hemolyse, betyr det et positivt eller negativt resultat? Forklar resultatene: RSK+ + + +, RSK+ + +, RSK+ +, RSK+. Nevn ingrediensene i det første RSK-systemet og ingrediensene i det andre RSK-systemet. Hvorfor må testserumet inaktiveres? Hvordan titreres komplement? Hemolytisk serum: hva inneholder det, hvordan oppnås det, hva er en titer og hvordan bestemmes det? Hvilke dyr brukes for å få RSC-komponenter? Teknikken for å sette RSC i kulde. Ved iscenesettelse av hvilke av følgende reaksjoner er deltakelse av et komplement nødvendig: utfelling, flokkulering, agglutinasjon, påvisning av ufullstendige antistoffer, immunbakteriolyse, immunhemolyse, Jerne, CSC? Immunfluorescensreaksjon (RIF) - angir hendelsesforløpet i den direkte Coons-reaksjonen; de nødvendige ingrediensene. Hva er et antigen, hva er et antistoff, hvordan merkes antistoffer, hvordan tas resultatet av reaksjonen i betraktning, hvordan ser et positivt resultat ut? Praktisk anvendelse - hva kan bestemmes ved hjelp av denne reaksjonen? Indirekte immunfluorescensreaksjon - angi sekvensen av hendelser i denne reaksjonen, de nødvendige ingrediensene, hva er antigenet, hvilke immunsera som brukes; praktisk bruk; fordel med indirekte RIF fremfor direkte reaksjon. Enzymimmunoassay (ELISA) - prinsippet for reaksjonen; nødvendige ingredienser; angi hendelsesforløpet når du setter opp en reaksjon for å påvise et antigen i testmaterialet; nødvendige ingredienser; hva skjer med et positivt resultat, hvordan ser det ut? Spesifiser handlingssekvensen under ELISA for å påvise antistoffer i testserumet; nødvendige ingredienser; hva skjer med et positivt resultat? Immunoblotting - prinsippet for reaksjonen; hovedstadier; nødvendige ingredienser; Hvordan blir resultatet tatt i betraktning? reaksjonsfordeler. Radioimmunoassay (RIA) - hva er hovedstadiene i reaksjonen; hva er antistoffer eller antigener merket med, hvordan tas resultatet i betraktning? Immunelektronmikroskopi - metodens prinsipp; hovedstadier; nødvendige ingredienser; Hva er antistoffer merket med? hvordan resultatet av reaksjonen tas i betraktning. Immobiliseringsreaksjoner - prinsippet for metoden, teknikken for innstilling, komponenter, regnskap for resultater.
Oppgaver å utføre i prosessen med egentrening.
Fyll ut immunitetsreaksjonstabellen for reaksjonene som dekkes i dette emnet.
Immunreaksjoner
Elevens arbeid i en praktisk leksjon
Start arbeidet umiddelbart med formuleringen av 1. fase av RSC, men skriv det ned i en notatbok senere (se nedenfor).
1. Reaksjonen av immun hemolyse. Se en demonstrasjonsreaksjon av immunhemolyse, tegn den som et diagram, forklar resultatet i forsøks- og kontrollrørene.
2. Komplementbindingsreaksjon
a) demonter RSC i henhold til tabellen;
b) tegne i en notatbok et skjema for å sette RSC i form av en tabell;
c) sette den andre fasen av RSK (den første fasen settes i begynnelsen av leksjonen);
d) demontere de diagnostiske preparatene som er nødvendige for RSK;
e) ta hensyn til resultatet. Formuler en konklusjon om tilstedeværelsen av spesifikke antistoffer i testserumet.
3. Immunfluorescensreaksjon. Studer tabellen, lag en plan for å sette opp reaksjonen i notatboken din; se diagnostiske sera; bestemme hva serumet inneholder, hvordan det fremstilles, for hvilken reaksjon (direkte eller indirekte RIF) det brukes. Se på demonstrasjonsresultatet av RIF i et fluorescerende mikroskop.
4. Enzymimmunanalyse (ELISA). Lag et reaksjonsskjema i to versjoner i notatboken: for påvisning av et antigen i testmaterialet og for påvisning av antistoffer i serum. Se gjennom ingredienssettet for diagnose av HIV og hepatitt B. Bestem hva hver ingrediens inneholder og hva den brukes til.
5. Immunblotting. Lag et diagram over reaksjonen i notatboken din; se demoen - resultatet av reaksjonen.
6. Radioimmunoassay (RIA). Tegn reaksjonsskjemaet i notatboken.
7. Immunelektronmikroskopi (IEM). Se demonstrasjonen - resultatet av reaksjonen, lag et reaksjonsskjema i notatboken, angi antigenet (viruset) og merkede antistoffer med piler.
Immunoblotting er en svært sensitiv proteindeteksjonsmetode basert på en kombinasjon av elektroforese og ELISA eller RIA. Immunoblotting brukes som diagnostisk metode for HIV-infeksjon mv.
I en generell forstand forstås immunblotting som analysen av en blanding av proteiner overført til en solid støttemembran, som de binder seg til ved kovalente bindinger, etterfulgt av immundeteksjon.
Det er mulig å analysere en blanding av proteiner som er avsatt direkte på et substrat (dot blot-analyse) eller etter dens foreløpige fraksjonering ved elektrofokusering, diskelektroforese eller todimensjonal elektroforese (Western blotting).
Patogenantigener separeres ved polyakrylamidgelelektroforese, overføres deretter fra gelen til aktivert papir eller nitrocellulosemembran og utvikles ved ELISA.
Bedrifter produserer slike strimler med "klatter" av antigener. Pasientens serum påføres disse stripene. . Deretter, etter inkubering, vaskes pasienten fra ubundne antistoffer fra pasienten og serum mot humane immunglobuliner merket med enzymet påføres. . Komplekset som dannes på stripen (antigen + antistoff til pasienten + antistoff mot humant Ig) påvises ved å tilsette et kromogent substrat som endrer farge under påvirkning av enzymet.
Denne metodikken brukes også for seleksjon av kloner av bakterier, fager eller virus som uttrykker produktene til de klonede målgenene.
Overføring av proteiner til membranen utføres enten passivt eller ved hjelp av elektrooverføringsapparater. Effektiviteten av proteinoverføring til membranen påvirkes av mange faktorer, slik som molekylvekten til proteinene, porøsiteten til gelen, overføringstiden og sammensetningen av bufferløsningen (transbuffer) som brukes.
Avhengig av oppgavene og betingelsene for eksperimentet, velges overføringsbetingelser som gir de beste resultatene. Substratene som vanligvis brukes er nitrocellulose, polyvinylidendifluorid (PVDF), eller positivt ladede nylonmembraner. Nitrocellulose kan binde opptil 80-100 mikrogram protein per 1 cm2.
Proteiner med lav molekylvekt (med en molekylvekt mindre enn 20 kDa) kan gå tapt som et resultat av vaskinger, noe som gjør det mulig å foreløpig studere polymorfismen til visse genetiske loci med lengdene til de tilsvarende restriksjons-DNA-fragmentene.
I tillegg, ved hjelp av Southern-hybridisering, er det lett å finne ut om målgenet har et sted for hydrolyse av et visst restriksjonsenzym i sin indre del, som lar deg velge den optimale strategien for kloning av regionen av genomet som studeres.
I henhold til et lignende skjema kan RNA-molekyler også overføres fra agarosegel til et nitrocellulosefilter. Denne metoden har blitt kalt Northern blotting i motsetning til Southern blotting, ettersom etternavnet Southern betyr "sørlig" på engelsk.
Overføringen til filtre fra proteingelen ble følgelig kalt Western blotting. Store proteiner (større enn 100 kDa) denaturert i natriumdodecylsulfat (SDS)-løsning kan bli dårlig overført til membranen hvis etanol er tilstede i trans-bufferen. Alkohol forbedrer overføringen av proteiner fra SDS-polyakrylamidgelen betydelig, men innsnevrer porene i gelen, noe som fører til retensjon av store proteiner.
PVDF-membranen er optimalisert for immundeteksjon og er i stand til å beholde spesifikt bundne proteiner opp til 160 µg/cm2 med et svært lavt nivå av ikke-spesifikk binding.
Immunblotting
En viktig egenskap ved denne membranen er muligheten for gjentatt bruk. Zeta-Probe nylonmembraner binder effektivt SDS-proteiner i fravær av alkohol, og denne bindingen er motstandsdyktig mot påfølgende behandlinger. Lavmolekylære proteiner beholdes også effektivt. Med en høy bindingskapasitet på omtrent 480 μg protein per 1 cm2, tillater Zeta-Probe-membraner påvisning av spormengder av protein i analyseblandinger.
Etter at antigenet er immobilisert på membranen, blokkeres de gjenværende bindingsstedene med løsninger av gelatin, eller bovint serumalbumin, eller skummet melk.
Deretter inkuberes membranen i en løsning av polyklonale eller monoklonale antistoffer mot det testede antigenet. Etter å ha vasket av ubundne antistoffer inkuberes membranen i en løsning av sekundære antistoffer, som er et konjugat av alkalisk fosfatase-enzymer (alkalisk fosfatase, AP) eller pepperrotperoksidase (HRP) med anti-arter antistoffer (geiteantistoffer mot kanin, mus eller humane immunglobuliner) eller proteiner A (Staphylococcus aureus-protein) eller G (Streptococcus sp.-protein) som har høy affinitet for Fc-regionen til immunglobuliner.
Påvisning av de dannede immunkompleksene utføres ved kjemisk eller kjemiluminescerende metode. Substrater for kjemisk reaksjon ved bruk av alkaliske fosfatasekonjugater er 5-brom-4-klor-3-indolylfosfat (BCIP) eller tetrazoliumblått (NBT), og ved bruk av pepperrotperoksidasekonjugater - 4-klor-1-naftol og hydrogenperoksid.
Som et resultat av enzymatiske reaksjoner dannes et farget bånd eller flekk på membranen på stedet for lokaliseringen av antigen-antistoffkomplekset.
Følsomheten til denne metoden er 100 pg protein ved bruk av AP-konjugater og 100-500 pg ved bruk av HRP-konjugater. Kjemiluminescerende påvisning av immunkomplekser kan påvise mindre enn 5 pg antigen. Prinsippet for denne metoden er at når HRP reagerer med hydrogenperoksid og syklisk diacylhydrazinluminol, sendes det ut lys ved en bølgelengde på 428 nm, som kan registreres på en fotosensitiv film.
Immunoblotting-reaksjonen (RI) ble utviklet på grunnlag av ELISA. Det er den mest spesifikke og sensitive metoden for immunkjemisk analyse. Immunoblotting (fra engelsk blot - to get wet, spot) kombinerer ELISA med elektroforese. Det brukes til å oppdage ikke komplekse antistoffer mot HIV, men antistoffer mot dets individuelle strukturelle proteiner (proteiner-p24, glykoproteiner-gp120, gp 41, etc.). Se ekspert (bekreftende) reaksjoner for diagnostisering av HIV-infeksjon.
Reaksjonen utføres i flere trinn:
Viruset blir ødelagt i komponenter - antigener (p24, gp120, gp 41, etc.), som utsettes for elektroforese i en polyakrylamidgel, det vil si separasjon av antigener i fraksjoner etter molekylvekt.
2. Gelen dekkes med en nitrocellulosemembran og antigenfraksjoner overføres til den ved hjelp av elektroforese. Nitrocellulose oppfører seg som tøypapir. Membranen kuttes i strimler (strimler). Bedrifter produserer slike strimler med "klatter" av antigener.
Immunoblotting - en ekstra indirekte metode
Strimler med HIV-antigener påført den nedsenkes i serumet til individet og vaskes deretter fra ubundet materiale.
4. Strimlene inkuberes med peroksidase-merket antiglobulinserum og vaskes.
Et substrat tilsettes og antall fargede fraksjoner (flekker) noteres, som tilsvarer lokaliseringssonen til AG-AT-komplekset.
Tilstedeværelsen av striper i visse områder av stripen bekrefter tilstedeværelsen i det studerte serumet av antistoffer mot strengt definerte HIV-antigener. Resultatet av immunblotting anses som positivt hvis bånd som tilsvarer to av de tre HIV-antigenene - p24, gp41 og gp 120 er synlige på membranen (fig. 37).
TEGNINGER
LISTE OVER BRUKT LITTERATUR
Hovedlitteratur
Medisinsk mikrobiologi, virologi og immunologi: en lærebok for medisinstudenter. universiteter 2. utg., rettet. og tillegg — 702 s. Ed. A.A. Vorobyov. M. : MIA, 2012.
2. Mikrobiologi, virologi og immunologi: en guide til laboratoriestudier: studieveiledning / (V.B. Sboychakov et al.); utg. V.B.Sboychakova, M.M.Karapats. – M.: GEOTAR-Media, 2014.- 320 s.: ill.
3. Medisinsk mikrobiologi, immunologi og virologi [Elektronisk ressurs]: en lærebok for honning.
universiteter - 760 s. — Tilgangsmodus: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html Korotyaev A.I., Babichev S.A. St. Petersburg: Spetslit, 2010.
4. Medisinsk mikrobiologi, virologi og immunologi [Elektronisk ressurs]: lærebok: i 2 bind / V. 1. - 448 s. — Tilgangsmodus: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html Zverev V.V., Boychenko M.N.
M. : Geotar Media, 2010. .
5. Medisinsk mikrobiologi, virologi og immunologi [Elektronisk ressurs]: lærebok: i 2 bind Vol. 2. - 480 s. Tilgangsmodus: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html Zverev V.V., Boychenko M.N. M. : Geotar Media, 2010.
tilleggslitteratur
1. Immundiagnostiske reaksjoner: lærebok / utarbeidet av: G.K. Davletshina, Z.G. Gabidullin, A.A. Akhtariyeva, M.M.
Khusnarizanova, Yu.Z. Gabidullin, M.M. Alsynbaev - Ufa: Publishing House of GBOU VPO BSMU ved Helsedepartementet i Russland, 2016. - 86s.
2. Funksjoner av noen egenskaper som bestemmer det patogene potensialet til ko-kultiverte varianter av Enterobacter, Сitrobacter, Serratia, E. coli, Proteus-bakterier: vitenskapelig publikasjon / Yu. Z. Gabidullin, R. S. Sufiyarov, I. I. Dolgushin - Ufa, 2015. 250 s.
Hjem » Immunoblot - hva er det? Immunoblot i diagnostisering av infeksjonssykdommer
Immunoblot - hva er det? Immunoblot i diagnostisering av infeksjonssykdommer
Hva er en immunoblot? Dette er en vanlig metode for laboratoriediagnostikk av humane virusinfeksjoner. Det er en av de mest nøyaktige og pålitelige måtene å oppdage tilstedeværelsen av HIV.
For pålitelighet er den enda større enn den enzymkoblede immunosorbentanalysen (elisa). Immunoblot-resultater anses som avgjørende og konkluderende. Generell informasjon
Immunoblot - hva er det? For å anerkjenne en person som HIV-positiv, må du gjennomgå en laboratorietest for å teste for tilstedeværelse av antistoffer i blodserumet.
Metoden for Western blot-seksjoner kalles også Western blot (western blot). Den brukes til å oppdage humane virusinfeksjoner, som en ekstra ekspertmetode. Dette er nødvendig for å bekrefte ELISA - en laboratorietest som lar deg bestemme tilstedeværelsen av antistoffer mot HIV i blodet. Immunoblot sjekk positiv ELISA på nytt.
Det regnes som det mest følsomme, komplekse og kostbare.
Mål
Hva er en immunoblot? Denne metoden for laboratorietesting av blodserum for tilstedeværelse av antistoffer mot viruset.
Under spesielle studier av de totale virale proteinene i gelen og på nitrocellulosemembraner.
Immunoblotting (påvisning av antistoffer i sera hos pasienter mot visse patogenantigener)
Western blot-seksjonsprosedyren er ment å bestemme HIV-infeksjon i forskjellige stadier. I det første trinnet blir det rensede viruset fra dets bestanddeler utsatt for elektroforese og antigenene som er inkludert i det, delt på molekylvekten.
Det humane immunsviktviruset replikerer seg i levende celler innebygd i dens genetiske informasjon. På dette stadiet blir personen bærer av HIV-viruset hvis du har blitt smittet.
Spesifisiteten til denne sykdommen er at den ikke manifesterer seg i lang tid. Viruset ødelegger lymfocytter, og dermed reduseres en persons immunitet og kroppen blir ikke i stand til å bekjempe infeksjoner.
Hvis HIV behandles riktig og rettidig, vil pasienten leve til en moden alder. Mangel på behandling fører uunngåelig til døden. Fra infeksjonsøyeblikket, men uten behandling, er den maksimale perioden ikke mer enn ti år.
Egendommer
Immunoblotanalyse er en pålitelig metode som lar deg bestemme tilstedeværelsen av antistoffer mot HIV-antigener av den første og andre typen.
Hvis en person er smittet, etter to uker med antistoffer, som kan oppdages mye senere. Et trekk ved HIV er at mengden antistoffer øker raskt og forblir i pasientens blod. Selv om de er tilstede, kan sykdommen ikke manifestere seg før to eller flere år. ELISA-metoden indikerer ikke alltid tilstedeværelsen av sykdommen nøyaktig, og krever bekreftelse av resultatene fra PCR- og Western blot-seksjoner hvis enzymimmunoanalysen viste et positivt resultat.
Indikasjoner for
Hva slags "immunoblot" er allerede funnet ut, men som blir introdusert i studien?
Årsaken til testing for humant immunsviktvirus (HIV) immunoblot vil være et positivt ELISA-resultat. Det er nødvendig å gå gjennom en enzymkoblet immunosorbentanalyse hos pasienter som skal opereres. I tillegg bør du gjøre en analyse av kvinner som planlegger graviditet, samt de som er promiskuøse. Western blot-seksjoner gis til pasienter med HIV-infeksjon dersom elisa-resultatene er tvilsomme.
Følgende alarmerende symptomer kan være årsaken til å gå til legen: raskt vekttap; svakhet, funksjonstap; tarmlidelser (diaré), som varer i tre uker; dehydrering; feber; hovne lymfeknuter i kroppen; utvikling av candidiasis, tuberkulose, lungebetennelse, toksoplasmose, forverring av herpes.
Pasienten trenger ikke forberede seg før han donerer veneblod.
Ikke spis på 8-10 timer før testen. Det anbefales ikke å drikke alkohol og kaffedrikker, tunge fysiske øvelser, for å oppleve spenning dagen før bloddonasjon.
Hvor skal man gjøre analysen?
Hvor kan jeg bli testet for HIV?
ELISA, en immunoblot-analyse utført i urbane private klinikker, gir resultater innen en dag. Umiddelbar diagnose er også mulig. I offentlige institusjoner er elisa medisinske tester og Western blot-seksjoner gratis, i samsvar med lovgivningen i den russiske føderasjonen.
Obligatorisk screening for smittsomme sykdommer hos gravide og pasienter som trenger sykehusinnleggelse eller operasjon Hvordan gjennomføres denne studien?
Hvordan gjennomføre en ELISA? Immunoblot positiv/negativ bekrefter eller avkrefter elisa-resultater. Prosedyren er ganske enkel. Spesialisten tar veneblod, med tiden tar det mindre enn fem minutter.
Etter prøvetaking skal injeksjonsstedet desinfiseres og forsegles med plaster. Prøvetakingen utføres på tom mage, så etter prosedyren gjør det ikke vondt å spise en bar med mørk sjokolade eller en søt varm drikke.
For å få en henvisning til gratis analyse ved en offentlig medisinsk institusjon, må du oppsøke en terapeut.
Generelt skiller ikke immunblotten seg fra andre blodprøver ved prøvetaking. Forskningsmetodikken er enkel. Hvis et virus er tilstede i en persons blod, begynner kroppen å produsere antistoffer for å ødelegge det. Det er mange proteinantigener for hvert virus. Påvisningen av disse antistoffene er grunnlaget for Western blot-seksjoneringsmetoden. Pris
Hvor mye analyse? Immunoblot HIV refererer til billig forskning.
I gjennomsnitt varierer screening-immunoanalysemetoder fra 500 til 900 rubler. Western blot-seksjoner er en studiesjekk, hvis kostnad varierer fra tre til fem tusen rubler. Mer komplekse metoder er mye dyrere. For eksempel, for analysen av polymerasekjedereaksjonen (PCR), må du betale omtrent 12 000 rubler.
Tolking av resultater
De vanligste metodene for å diagnostisere HIV-infeksjon er enzymimmunoassay og immunoblot.
De er for bestemmelse av serumantistoffer mot humant immunsviktvirus. Infeksjon bekreftes vanligvis ved to tester: screening og bekreftende. Tolkningen av resultatene bør gjøres av en lege, han diagnostiserer og foreskriver behandling. Hvis immunblotten er positiv, betyr det at menneskekroppen har et virus.
Et positivt resultat bør ikke være en grunn til selvbehandling, siden hver pasient kan ha sitt eget bilde av sykdommen.
Kvalitativ analyse inkluderer screening og sertifisering. Hvis pasienten ikke har viruset, er resultatet "negativt". Når dette sertifikatet er funnet, utføres ytterligere screeningtester. Immunoblotanalyse som bekrefter eller avkrefter screening. Hvis teststrimlene vises i mørke områder (proteinlokalisering), er diagnosen "HIV".
Hvis resultatene er tvilsomme, utføres testene innen tre måneder.
For å forhindre infeksjon med humant immunsviktvirus, er det mulig hvis du følger visse regler: unngå tilfeldig seksuell kontakt, bruk kondom under kontakt, ikke bruk narkotika.
Hvis sykdommen oppdages hos en gravid kvinne, er det viktig å følge anbefalingene fra den behandlende legen, ikke glem tester for tilstedeværelsen av viruset.
Hva er Western Blotting?
Proteinidentifikasjon i komplekse blandinger eller ekstrakter av forskjellige vev er et av problemene som ofte oppstår. Ved å bruke et slikt verktøy som spesifikke antistoffer, er det mulig å bestemme proteinet som studeres med et minimum av tid og økonomiske kostnader.
I Western blotting-metoden, i det første trinnet, separeres en blanding av proteiner ved elektroforese i nærvær av natriumdodecylsulfat (SDS), og overføres deretter til en nitrocellulosemembran ved elektroblotting.
Essensen av denne metoden ligger i det faktum at gelen etter elektroforese plasseres på en nitrocellulosemembran mellom lag med filterpapir. "Sandwichen" som er satt sammen på denne måten, plasseres i et elektrisk felt slik at protein-SDS-kompleksene beveger seg over gelplaten og immobiliseres (som et resultat av uspesifikk sorpsjon) på overflaten av nitrocellulosemembranen.
I bindingen av protein-SDS-komplekset til nitrocellulosemembranen er hovedsakelig elektriske krefter involvert, og denne interaksjonen er flerpunkts og fører til "spredning" av proteiner på membranoverflaten. Etter elektrooverføring får vi altså en kopi av gelen på nitrocellulose med proteiner arrangert på samme måte som i polyakrylamidgelen.
Etter SDS - elektroforese, elektrooverføring og sorpsjon av proteiner fra gelen til en nitrocellulosemembran, er den tertiære konformasjonen av proteinet sterkt endret, hvis det generelt er riktig å snakke om eksistensen av en tertiær struktur for proteinet etter en så hard behandling . Derfor, for immunkjemisk påvisning av proteinet som studeres, brukes vanligvis bare mono- eller polyklonale antistoffer spesifikke for de lineære områdene av proteinmolekylet.
51. Enzymimmunoanalyse, immunblotting. Mekanisme, komponenter, applikasjon.
Antistoffer spesifikke for konformasjonsepitoper (eller steder som involverer intersubunit-kontakter) er generelt ikke egnet for bruk i Western blot-metoden.
Etter proteinoverføring inkuberes membranen sekvensielt med antistoffer som er spesifikke for proteinet som studeres, og deretter med sekundære antistoffer spesifikke for Fc-fragmentene til de primære antistoffene, konjugert med et enzym (eller en annen) etikett (fig.
1A). I tilfellet når primære antistoffer spesifikke for det studerte antigenet er direkte konjugert med merkelappen, er det ikke nødvendig med sekundære antistoffer (fig. 1 B). Immunkompleksene dannet på stedet for den studerte proteinlokaliseringen "manifesteres" ved hjelp av et kromogent substrat (avhengig av type merke).
Metodens sensitivitet og spesifisitet er svært avhengig av hvilke antistoffer som brukes i studien.
Antistoffene som brukes må være spesifikke for en unik aminosyresekvens som kun er spesifikk for proteinet som studeres. Ellers er interaksjon (spesielt ved grove proteinekstrakter) av antistoffer med flere proteinmolekyler mulig, noe som igjen vil føre til utseendet av flere fargede bånd på membranen.
Identifikasjonen av proteinet som studeres i dette tilfellet er ofte vanskelig eller til og med umulig.
Den andre viktige faktoren å huske på når du velger antistoffer er affinitet. Jo høyere affinitet til antistoffene som brukes, jo lysere og klarere farges proteinbåndene, jo høyere er følsomheten til metoden. Ved bruk av antistoffer med høy affinitet kan sensitivitet på 1 ng og enda høyere oppnås.
For å visualisere resultatet av interaksjonen mellom det membranbundne antigenet og antistoffer, brukes sekundære antistoffer konjugert med midler som er i stand til å gi et bestemt signal under visse forhold.
Vanligvis brukes et enzym (peroksidase eller fosfatase) som et slikt middel, hvis reaksjonsprodukt har en farge og utfelles på membranen i form av et uløselig bunnfall.
Det er også mulig å bruke fluorescerende etiketter i denne metoden.
Ris. 1. Skjema for immunkjemisk farging av det studerte proteinet: A - ved bruk av sekundære antistoffer konjugert med en enzymmerking; B - det primære antistoffet er direkte konjugert med et enzymmerke.
Protokoll:
I. Gel- og membranfremstilling og elektrooverføring av proteiner
Polyakrylamidgelen ble etter elektroforese plassert i et bad med blotting-buffer (25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM glycin, 10 % etanol).
To ark med filterpapir, kuttet i form av blotting-kassetten og fuktet med blotting-buffer, legges på den delen av kassetten som skal vende mot anoden. Deretter legges en nitrocellulosemembran forhåndsfuktet med samme buffer på filterpapiret, og sørger for at det ikke er luftbobler mellom membranen og papiret.
Etter det skal gelen legges forsiktig på membranen, igjen med spesiell oppmerksomhet til fraværet av luftbobler mellom gelen og membranen. Sandwichen kompletteres av to lag fuktet filterpapir, som legges på overflaten av gelen (fig. 2). Den resulterende sandwichen klemmes fast i kassetten og plasseres mellom elektrodene slik at membranen vender mot anoden.
Ris. 2. Skjema for elektrooverføring av proteiner til membranen.
II. elektrooverføring
Elektrooverføring av proteiner til en nitrocellulosemembran utføres i en buffer som inneholder 25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM glycin, 10 % etanol i 30–50 minutter ved en konstant spenning på 100 V.
Elektrooverføringstiden avhenger av størrelsen på de overførte proteinene, jo større protein, desto lengre tid tar elektrooverføringen. Kvaliteten på elektrotransport og arrangementet av proteinbånd ble vurdert ved å farge nitrocellulosemembranen med 0,3 % Ponceau S i 1 % eddiksyre. Før immunfarging bør membranen vaskes flere ganger med en mildt alkalisk vandig Tris-løsning for å fjerne proteinbundet fargestoff.
III. Immunkjemisk farging av proteiner immobilisert på en nitrocellulosemembran
For å blokkere ikke-spesifikke antistoffbindingsseter, inkuberes membranen under konstant omrøring ved romtemperatur i 30 minutter i PBST (for bedre blokkering kan en PBST-løsning som inneholder 10 % skummetmelkpulver brukes).
Etter blokkering inkuberes membranen i én time ved romtemperatur under konstant omrøring i PBST som inneholder 1-10 μg/ml spesifikke antistoffer.
Den optimale konsentrasjonen av antistoffer velges empirisk og avhenger av affiniteten til interaksjonen mellom antistoffer og antigenet.
Ved slutten av inkubasjonen ble membranen vasket 5 ganger med PBST og overført til en løsning av sekundære antistoffer konjugert med pepperrotperoksidase. Fortynningen av konjugatet er vanligvis angitt av produsenten på emballasjen, eller velges empirisk av forskeren. Inkuber membranen i en løsning av sekundære antistoffer i 1 time under konstant omrøring.
Etter grundig vasking (minst 5-6 bufferskift) overføres PBST-membranen til en kromogen substratløsning som inneholder 3 mg diaminobenzidin (DAB) og 10 µl 30 % hydrogenperoksid i 10 ml 0,1 M Tris-HCl, pH 7,6 .
Inkubering utføres under omrøring i 5 til 10 minutter. Etter avsluttet inkubasjon med substratet, skal membranen vaskes med PBST, tørkes ved blotting med filterpapir, og umiddelbart lages en elektronisk kopi ved skanning i farger. Hvis membranen tørker helt ut, blekner de fargede proteinstripene, og bildet blir mindre lyst og kontrastfylt.
Merk: DAB er giftig og potensielt kreftfremkallende. Arbeid kun med gummihansker!