FISH to badanie służące diagnostyce różnicowej. Fluorescencyjna hybrydyzacja in situ Najnowsze metody diagnostyczne

Metodę tę stosuje się dziś do diagnozowania niektórych typów nowotworów złośliwych, ponieważ złośliwe zwyrodnienie komórki jest spowodowane zmianami w jej genomie. W związku z tym, po wykryciu charakterystycznych nieprawidłowości w genach, można z dużą pewnością zaklasyfikować tę komórkę jako nowotworową. Ponadto test FISH służy do potwierdzenia już postawionej diagnozy, a także uzyskania dodatkowych danych na temat możliwości zastosowania określonych leków chemioterapeutycznych w celu przeprowadzenia chemioterapii raka piersi i wyjaśnienia rokowania choroby.

Dobrym przykładem zastosowania testu FISH jest zastosowanie go u pacjentów z rakiem piersi. Dzięki tej technice tkanka biopsyjna jest badana pod kątem kopii genu zwanego HER-2. Jeśli ten gen jest obecny, oznacza to, że na powierzchni komórek znajduje się duża liczba receptorów HER2. Są wrażliwe na sygnały stymulujące rozwój i proliferację elementów nowotworowych. W tym przypadku otwiera się szansa na skuteczne zastosowanie trastuzumabu – lek ten blokuje działanie receptorów HER2, a co za tym idzie, hamuje wzrost nowotworu.

Jak przeprowadza się test FISH?

Te odchylenia w strukturze chromosomów występują w kilku typach:
translokacja – przeniesienie części materiału chromosomowego na nowe miejsce w obrębie tego samego lub innego chromosomu;
inwersja – rotacja części chromosomu do roku 1800 bez oddzielenia się od jego głównego korpusu;
delecja – utrata dowolnego regionu chromosomowego;
duplikacja to kopiowanie części chromosomu, co prowadzi do wzrostu liczby kopii tego samego genu zawartego w komórce.

Każde z tych zaburzeń niesie ze sobą pewne znaki diagnostyczne i informacje. Na przykład translokacje mogą wskazywać na obecność białaczki, chłoniaków lub mięsaków, a obecność duplikacji genów pomaga w przepisaniu najskuteczniejszej terapii.

Jaka jest zaleta testu FISH?

Kolejną zaletą testu FISH jest to, że można go zastosować na materiale niedawno pobranym od pacjenta. Do standardowej analizy cytogenetycznej konieczne jest najpierw wyhodowanie hodowli komórkowej, czyli umożliwienie namnażania się komórek pacjenta w laboratorium. Proces ten trwa około 2 tygodni, kolejny tydzień przeznacza się na regularne badanie, natomiast wynik badania FISH można uzyskać już po kilku dniach.

Stały rozwój nauk medycznych prowadzi stopniowo do obniżenia kosztów badania FISH i jego coraz szerszego włączania do codziennej praktyki onkologów.

Rak piersi jest chorobą niebezpieczną, statystycznie plasującą się na pierwszym miejscu wśród chorób nowotworowych u kobiet. Ryzyko rozwoju tej choroby wzrasta u wszystkich kobiet po 40. roku życia i może wynikać z kilku innych czynników. Do najbardziej prawdopodobnych przyczyn raka piersi zalicza się otyłość, predyspozycje genetyczne lub dziedziczne, wczesny początek i późne zakończenie miesiączki, terapię hormonalną lub radioterapię.

Ponadto ryzyko zachorowania jest zwiększone u nieródek i kobiet, które już chorowały na nowotwór. Mężczyźni również mogą zachorować na raka piersi.

Rodzaje i metody diagnozy

Pierwszym etapem diagnozowania raka piersi jest rutynowe badanie mammologiczne. Kobiety po 40. roku życia powinny poddawać się takim badaniom przynajmniej raz na dwa lata. Lekarz przeprowadza badanie wizualne, palpacyjne i mammograficzne gruczołów sutkowych. Wizualne oznaki rozwoju choroby mogą obejmować:

informacje ogólne

Rentgen piersi (mammografia) pozwala określić obecność, wielkość i lokalizację guza. Aby zwiększyć dokładność uzyskanych wyników, stosuje się technologię wprowadzania środka kontrastowego. Jeśli guz został już wykryty, stosuje się metodę pneumocystografii - usunięcie płynu nowotworowego i wprowadzenie powietrza do jamy. Jeśli nie określono obecności guza, stosuje się duktografię - wprowadzenie środka kontrastowego do przewodów mlecznych.

Metody te pozwalają na wizualizację obecności formacji w tkance piersi.

Jeżeli obecność nowotworu ujawni się także w mammografii, pacjentka zostaje skierowana na zestaw badań diagnostycznych:

Za pomocą ultradźwięków lekarz może odróżnić guz od torbieli i wyjaśnić lokalizację formacji. Następnie pobiera się z niego próbkę tkanki do biopsji. Biopsja pozwala określić rodzaj guza: łagodny lub złośliwy, a także określić, czy guz jest hormonozależny. Informacje te pozwalają lekarzowi podjąć decyzję o strategii leczenia, ale nie zawsze pozwalają określić etap. Często, nawet przy wszystkich niezbędnych środkach diagnostycznych, można to ustalić dopiero po operacji.

Mechanizm badań histologicznych

Biopsję tkanki wykonuje się zarówno przed, jak i po operacji. Procedurę przeprowadza się po wyjaśnieniu lokalizacji formacji.

Biopsja to proces usuwania kawałka tkanki, a jej badanie nazywa się „badaniem histologicznym” lub po prostu „histologią”.

Pracownik medyczny za pomocą specjalnej igły pobiera niewielką ilość tkanki z guza lub guz, który został już usunięty z organizmu pacjenta, kierowany jest do badania histologicznego. Następnie fragment tkanki jest specjalnie barwiony i przetwarzany w celu zwiększenia kontrastu i ułatwienia badania. Specjalista bada wycinek pod mikroskopem i wydaje opinię na temat jakości powstawania guza. Wiele w tym badaniu zależy od uwagi i kwalifikacji technika laboratoryjnego, który wyciąga wnioski.

Podobnym badaniem jest immunohistochemia. Ogólnie można to nazwać „histologią”, ponieważ metoda opiera się na badaniu tkanek, ale immunohistochemia jest bardziej zaawansowaną metodą analizy. W tym badaniu tkanka jest również barwiona specjalnymi odczynnikami, które nie tylko zwiększają kontrast wizualny, ale także łączą („znakują”) z przeciwciałami w specjalny sposób, co umożliwia wyjaśnienie większej liczby cech nowotworu. W tym przypadku reakcja zachodzi znacznie szybciej, co pozwala na szybkie uzyskanie wyników analiz.

Immunohistochemia pozwala nie tylko określić rodzaj nowotworu, ale także zaplanować strategię leczenia pacjenta w oparciu o określenie wrażliwości tkanki nowotworowej na różnego rodzaju efekty terapeutyczne. Ponadto badanie to jest maksymalnie zautomatyzowane, co pozwala zminimalizować prawdopodobieństwo popełnienia błędu diagnostycznego spowodowanego czynnikiem ludzkim.

Istnieją również nowoczesne środki diagnostyczne, które umożliwiają wykrycie obecności nowotworu w organizmie: jest to spektralne badanie krwi, analiza immunologiczna (biochemiczna), test FISH tkanki nowotworowej. Genetyczne badanie krwi pozwala każdej kobiecie sprawdzić, czy ma lub nie ma przesłanek do zachorowania na raka piersi. CT i MRI pozwalają dokładnie określić lokalizację guza i monitorować dynamikę jego rozwoju, oceniając strukturę guza.

Jak wykryć raka za pomocą badania krwi?

Badanie krwi jest zwykle przepisywane przez lekarza po badaniu USG. Zdarzają się sytuacje, gdy pacjentka z własnej inicjatywy oddaje krew na markery okienkowe lub do analizy genetycznej w celu stwierdzenia predyspozycji do zachorowania na raka piersi. W niektórych przypadkach powodem zgłoszenia się do poradni onkologicznej może być ogólne badanie krwi (wraz z palpacją guza lub wizualnymi objawami nowotworu).

Analiza biochemiczna

Krew jako materiał do badań pozwala na wykonanie następujących badań diagnostycznych:

Jednocześnie tylko dwie pierwsze analizy można nazwać specjalistycznymi metodami wykrywania nowotworu, z których druga ma charakter bardziej zapobiegawczy niż operacyjny. Dwa inne badania krwi wykonuje się głównie przed operacją, aby określić stan organizmu i rozległość procesu. Jednakże, jak już wspomniano, jeśli w klatce piersiowej wyczuwalny jest guzek, a ogólne badanie krwi wykazuje więcej niż dwa ujemne współczynniki diagnostyczne, jest to powód do konsultacji ze specjalistą. Współczynniki ujemne są wskaźnikami wykraczającymi poza normę w niektórych parametrach składu krwi.

Biochemiczne badanie krwi może wykryć obecność przeciwciał przeciwko komórkom nowotworowym. Takie ciała nazywane są markerami nowotworowymi. Liczba i rodzaj markerów nowotworowych zależy od specyfiki (lokalizacji) guza nowotworowego i stopnia jego rozwoju. Markery nowotworowe obejmują:

W przypadku raka piersi lekarza prowadzącego zainteresuje przede wszystkim obecność markera nowotworowego CA-15-3, gdyż jego obecność we krwi jednoznacznie wskazuje na raka piersi. Dekodowanie wyniku zajmuje średnio jeden dzień. Analizę biochemiczną przeprowadza się kilka razy w trakcie choroby. W tym celu krew pobierana jest z żyły w pierwszej połowie dnia na pusty żołądek. Na dwa tygodnie przed badaniem pacjent odstawia wszelkie leki (do potwierdzenia z lekarzem prowadzącym). Na dwa dni przed oddaniem krwi nie należy pić alkoholu, tłustych i smażonych potraw.

Na godzinę przed zabiegiem nie należy palić i wskazane jest ograniczenie stresu emocjonalnego. Krew zwykle nie jest oddawana do analizy biochemicznej bezpośrednio po radioterapii i leczeniu fizjoterapeutycznym.

Oznaczanie czynników genetycznych

Zanim zaczniemy mówić o genetycznych badaniach krwi, warto podkreślić różnicę pomiędzy pojęciami „genetyczny” i „dziedziczny”. Czynnik genetyczny nowotworu to szersze pojęcie, które implikuje nie tylko obecność w rodzinie chorych na raka piersi, ale także konkretną mutację genu zwiększającą ryzyko wystąpienia tej choroby.

Dziedziczność oznacza potencjalne ryzyko raka piersi na podstawie wywiadu rodzinnego. Jednocześnie nie tylko kobiety, ale także mężczyźni mogą otrzymać zmutowany gen, ale jego nosiciel niekoniecznie zachoruje.

Każda kobieta może poddać się badaniom genetycznym. Jest to szczególnie zalecane w przypadku osób, których bezpośredni krewni chorowali na raka piersi. Przed oddaniem krwi do analizy pacjent powinien porozmawiać ze specjalistą z zakresu genetyki, który wyjaśni niuanse rozszyfrowania wyników. Przed oddaniem krwi pacjent nie wymaga specjalnego przygotowania.

Jeśli uzyskasz pozytywny wynik na mutację genu BRCA, ale przy braku innych niepokojących objawów, nie ma powodu do paniki. Kobietom z mutacjami w tych genach można zalecić regularne wykonywanie samobadań i badań fizykalnych w ramach środków zapobiegawczych. Po 40 latach warto pomyśleć o usunięciu jajników i piersi, czasami młodszym kobietom, które nie planują mieć dzieci w przyszłości, zaleca się stosowanie środków antykoncepcyjnych. Decyzja o tych środkach leży całkowicie na barkach samej kobiety i wymaga przemyślanego podejścia i konsultacji z lekarzami.

Najnowsze metody diagnostyczne

Spektralne badanie krwi ujawnia obecność nowotworów w organizmie z prawdopodobieństwem sięgającym 93%. Jest to stosunkowo tania metoda diagnostyczna, która polega na naświetlaniu surowicy krwi widmem podczerwieni i analizie jej składu molekularnego.

Wnioski z spektralnego badania krwi wydawane są zgodnie z zasadą „obecności-nieobecności” i mają na celu identyfikację większości typów nowotworów złośliwych. Badanie to może również określić stadium rozwoju raka piersi. Wyniki są odszyfrowywane w laboratorium i nie wymagają dodatkowej opinii lekarza.

Aby oddać krew do analizy spektralnej należy na 2 miesiące przed zabiegiem odstawić leki. Od momentu wykonania zdjęcia rentgenowskiego lub innego napromieniania, a także chemioterapii, muszą minąć co najmniej 3 miesiące. Ponadto w momencie pobierania krwi kobieta nie może być w ciąży ani miesiączkować. Pobieranie krwi odbywa się na czczo w pierwszej połowie dnia. Spektralne badanie krwi trwa średnio 12 dni roboczych.

Jedną z najnowszych metod diagnozowania nowotworów jest tzw. „test rybny” (FISH, hybrydyzacja fluorescencyjna). Jego skuteczność jest wciąż przedmiotem dyskusji, a głównym pytaniem o jego wykonalność jest kosztowna procedura badawcza. Istotą metody jest znakowanie fragmentów komórek kompozycją fluorescencyjną i dalsze badanie mikroskopowe komórek. Na podstawie tego, z jakimi częściami materiału genetycznego powiązane są znakowane fragmenty, można stwierdzić, czy pacjent ma predyspozycję do nowotworu i jakie metody leczenia będą w danym przypadku istotne.

Test FISH nie wymaga w pełni dojrzałych komórek, dlatego jest znacznie szybszy do wykonania niż inne badania laboratoryjne. Ponadto metoda FISH pozwala wyraźniej zaobserwować uszkodzenia genetyczne, czego nie da się zrobić innymi rodzajami analiz. Test FISH jest najczęściej używany do wykrywania raka piersi, ale sprawdza się również w wykrywaniu kilku innych typów nowotworów.

Wady testu FISH obejmują, oprócz wysokiego kosztu, niemożność pracy na niektórych regionach chromosomów ze względu na specyficzność znaczników. Ponadto test FISH ignoruje niektóre rodzaje mutacji i pęknięć w kodzie genetycznym, co może być istotnym pominięciem w diagnostyce. Badania porównawcze FISH z tańszym testem IHC nie wykazały istotnej przewagi w określaniu wrażliwości komórek nowotworowych na Herceptynę. Jednak test FISH jest obecnie najszybszą spośród bardzo dokładnych metod diagnozowania nowotworów.

Technika FISH – fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ została opracowana w połowie lat 80-tych XX wieku i służy do wykrywania obecności lub braku specyficznych sekwencji DNA na chromosomach, a także satelitarnego DNA alfa zlokalizowanego na centromerze chromosomu 6, CEP6(6p11. 1-q11.1).

Dało to znaczącą zmianę w diagnostyce chorób onkologicznych pochodzenia melanocytowego dzięki odkryciu antygenów nowotworowych. Na tle złośliwym określa się mutację w trzech antygenach: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) i CMM1(1p). W związku z tym możliwość obiektywnej diagnostyki różnicowej, opartej na określeniu cech genetycznych melanocytowych nowotworów skóry, ma ogromne znaczenie we wczesnej diagnostyce czerniaka i jego prekursorów.W jądrze z prawidłowym zestawem badanych genów i chromosomem 6 , obserwuje się dwa geny RREB1 w kolorze czerwonym, dwa geny MYB w kolorze żółtym, dwa geny CCND1 w kolorze zielonym i dwa centromery chromosomu 6 w kolorze niebieskim. Testy fluorescencyjne służą do celów diagnostycznych.

Ocena wyników reakcji: oblicza się liczbę sygnałów czerwonych, żółtych, zielonych i niebieskich w 30 jądrach każdej próbki, identyfikuje cztery parametry różnych wariantów chorób genetycznych, w których próbka genetycznie odpowiada czerniakowi. Na przykład próbka jest zgodna z czerniakiem, jeśli średnia liczba genu CCND1 w jądrze wynosi ≥2,5. Liczbę kopii innych genów ocenia się na tej samej zasadzie. Lek uznaje się za pozytywny w teście FISH, jeśli spełniony jest co najmniej jeden z czterech warunków. Próbki, w których wszystkie cztery parametry są poniżej wartości odcięcia, uważa się za ujemne w badaniu FISH.

Oznaczenie specyficznych sekwencji DNA na chromosomach przeprowadza się na skrawkach biopsji lub materiale chirurgicznym. W praktyce reakcja FISH wygląda następująco: badany materiał, zawierający DNA w jądrach melanocytów, poddaje się obróbce w celu częściowego zniszczenia jego cząsteczki, w celu rozbicia struktury dwuniciowej i tym samym ułatwienia dostępu do pożądanego obszaru melanocytów gen. Próbki są klasyfikowane według miejsca przyłączenia do cząsteczki DNA. Materiałem do reakcji FISH w praktyce klinicznej są skrawki tkankowe parafinowe, rozmazy i odciski.

Reakcja FISH pozwala wykryć zmiany, jakie zaszły w cząsteczce DNA w wyniku wzrostu liczby kopii genów, utraty genów, zmian w liczbie chromosomów oraz zmian jakościowych – przemieszczania się loci genów zarówno w tym samym chromosomie i pomiędzy dwoma chromosomami.

Aby przetworzyć dane uzyskane przy użyciu reakcji FISH i zbadać związek między liczbą kopii genów trzech grup badawczych, wykorzystano współczynnik korelacji Spearmana.

Czerniak charakteryzuje się wzrostem liczby kopii w porównaniu ze znamięm i znamięm dysplastycznym.

Znamię proste w porównaniu ze znamię dysplastyczne ma mniej nieprawidłowości w liczbie kopii (tj. Więcej normalnej liczby kopii).

Do konstruowania reguł decyzyjnych pozwalających przewidzieć, czy próbka należy do tej czy innej klasy (diagnostyka różnicowa znamion prostych i dysplastycznych), wykorzystuje się aparat matematyczny „drzew decyzyjnych”. Podejście to sprawdziło się w praktyce, a wyniki stosowania tej metody (w przeciwieństwie do wielu innych metod, np. sieci neuronowych) można łatwo zinterpretować w celu skonstruowania reguł decyzyjnych różnicowania znamion prostych, dysplastycznych i czerniaka. We wszystkich przypadkach początkowymi danymi była liczba kopii czterech genów.

Zadanie skonstruowania reguły decyzyjnej dla diagnostyki różnicowej podzielone jest na kilka etapów. W pierwszym etapie różnicuje się czerniaka i znamię, bez uwzględnienia rodzaju znamienia. W kolejnym etapie konstruowana jest reguła decyzyjna oddzielająca znamiona proste i dysplastyczne. Wreszcie na ostatnim etapie możliwe jest skonstruowanie „drzewa decyzyjnego” w celu określenia stopnia dysplazji znamion dysplastycznych.

Taki podział zadania klasyfikacji znamion na podzadania pozwala na osiągnięcie dużej dokładności predykcji na każdym etapie. Dane wejściowe do konstrukcji „drzewa decyzyjnego” stanowią dane dotyczące liczby kopii czterech genów u pacjentów, u których zdiagnozowano czerniaka i pacjentów, u których zdiagnozowano nowotwór nieczerniakowy (pacjenci z różnymi typami znamion – prostymi i dysplastycznymi). Dla każdego pacjenta dostępne są dane dotyczące liczby kopii genów dla 30 komórek.

Zatem podzielenie problemu przewidywania rozpoznania na kilka etapów pozwala na skonstruowanie bardzo dokładnych reguł decyzyjnych nie tylko w różnicowaniu czerniaka od znamion, ale także w określaniu rodzaju znamion i przewidywaniu stopnia dysplazji w przypadku znamion dysplastycznych. Skonstruowane „drzewa decyzyjne” stanowią wizualny sposób przewidywania diagnozy na podstawie informacji o liczbie kopii genów i można je z łatwością zastosować w praktyce klinicznej do różnicowania łagodnych, przednowotworowych i złośliwych nowotworów melanocytowych skóry. Proponowana dodatkowa metoda diagnostyki różnicowej jest szczególnie ważna przy wycinaniu olbrzymich wrodzonych znamion barwnikowych i znamion dysplastycznych u pacjentów pediatrycznych, ponieważ obserwuje się wysoki odsetek błędów diagnostycznych podczas wizyt takich pacjentów w placówkach medycznych. Wyniki stosowania opisanej metody są bardzo skuteczne, dlatego wskazane jest jej stosowanie w diagnostyce barwnikowych nowotworów skóry, zwłaszcza u chorych z zespołem FAMM.

Inwazyjne metody diagnostyki prenatalnej pozwalają nie tylko spojrzeć w przyszłość i wiarygodnie przewidzieć, czy u nienarodzonego dziecka wystąpią choroby związane z wadami wewnątrzmacicznymi, ale także poznać charakter i przyczyny patologii wrodzonych.

Jednak każda informacja jest cenna tylko wtedy, gdy jest aktualna. Jeśli chodzi o stan rozwoju płodu, niezwykle istotna jest szybkość uzyskania wyników badań.

Dlatego w diagnostyce genetycznej istnieje duże zapotrzebowanie na metodę FISH, która pozwala w możliwie najkrótszym czasie ocenić obecność najczęstszych anomalii rozwojowych u zarodka.

FISH to skrót, który odszyfrowuje istotę technologii wykrywania nieprawidłowości chromosomowych - fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ - hybrydyzacji fluorescencyjnej w środowisku „domowym”.

Technika ta, zaproponowana pod koniec lat 70. ubiegłego wieku przez J. Golla i M.-L. Pardew opiera się na możliwości odtworzenia sekwencji fragmentów kwasów nukleinowych (DNA lub RNA) po ich denaturacji.

Autorzy opracowali metodę, która pozwala, wykorzystując hybrydyzację in situ sztucznie wytworzonych znakowanych sond (sond) DNA i materiału cytogenetycznego pobranego do analizy, na identyfikację odchyleń ilościowych i jakościowych interesujących nas chromosomów.

Pod koniec ubiegłego wieku, po pomyślnym zastosowaniu barwników fluorescencyjnych do barwienia sond DNA, metoda FISH otrzymała swoją nazwę i od tego czasu jest intensywnie udoskonalana i różnicowana.

Nowoczesne techniki analizy FISH dążą do tego, aby w jednej procedurze hybrydyzacji możliwe było uzyskanie jak najpełniejszej informacji do analizy wybranego materiału genetycznego.

Faktem jest, że po hybrydyzacji można ocenić jedynie ograniczoną liczbę chromosomów tego samego materiału cytogenetycznego. Zdolność do ponownej hybrydyzacji łańcuchów DNA zmniejsza się od czasu do czasu.

Dlatego obecnie w diagnostyce genetycznej najczęściej stosuje się metodę hybrydyzacji in situ, aby szybko odpowiedzieć na pytania dotyczące istniejących, najczęstszych aneuploidii na chromosomach 21, 13, 18, a także na chromosomach płci X, Y.

Do analizy FISH nadają się dowolne próbki tkanek lub komórek.

W diagnostyce prenatalnej mogą to być próbki krwi, ejakulat lub.

Szybkość uzyskania wyników zapewnia fakt, że komórki uzyskane z materiału pobranego do analizy nie wymagają hodowli w pożywkach, osiągając ich podział do wymaganej liczby, jak w klasycznej metodzie kariotypowania.

Wybrany materiał poddawany jest specjalnemu przygotowaniu w celu uzyskania skoncentrowanej zawiesiny czystych komórek. Następnie przeprowadza się proces denaturacji próbki DNA i natywnego DNA badanej próbki do stanu jednoniciowego oraz proces hybrydyzacji, podczas którego inkubuje się kolorowe sondy DNA z DNA próbki.

W ten sposób wizualizuje się pożądane (kolorowe) chromosomy w komórce, ocenia ich liczbę, strukturę struktur genetycznych itp. Okular specjalnego mikroskopu fluorescencyjnego pozwala na badanie świecących łańcuchów DNA.

Obecnie metoda FISH jest szeroko stosowana w celach diagnostycznych do identyfikacji chorób genetycznych, aberracji chromosomowych w medycynie rozrodu, onkologii, hematologii, dozymetrii biologicznej itp.

Jak wykorzystuje się diagnostykę FISH płodu?

W dziedzinie medycyny rozrodu metoda FISH, jako jedna z metod diagnostyki cytogenetycznej molekularnej, stosowana jest na wszystkich etapach.

• parę.

Aby określić kariotyp przyszłych rodziców, przeprowadza się go raz, ponieważ ludzki genom pozostaje niezmieniony przez całe życie.

Kariotyp pary przed poczęciem dziecka pomoże ustalić, czy rodzice są nosicielami patologii genetycznych dziedzicznych, w tym ukrytych. A także ogólny stan genomu przyszłej matki i ojca, który może mieć wpływ na powodzenie poczęcia dziecka i donoszenie ciąży.

Diagnostyka metodą FISH w tym przypadku często pełni funkcję badania dodatkowego w stosunku do klasycznego kariotypowania, przy identyfikacji patologii chromosomalnych w materiale badanym (krew żylna rodziców), jeśli istnieje podejrzenie mozaikowatości.

Dodatkowe badanie metodą FISH rzetelnie potwierdzi lub wykluczy obecność podejrzanej anomalii w komórkach przyszłego rodzica.

• Badanie ejakulatu.

Wskazany przy trudnościach z rozrodem w parze ze względu na „czynnik męski”. Analiza plemników metodą FISH pozwoli ocenić poziom nieprawidłowych plemników w zestawie chromosomowym, a także ustalić, czy mężczyzna jest nosicielem chorób genetycznych związanych z płcią.

Jeśli para zdecyduje się później na poczęcie za pomocą zapłodnienia in vitro, analiza ejakulatu metodą FISH umożliwi wybranie plemnika najwyższej jakości do zapłodnienia komórki jajowej.

• Z zapłodnieniem in vitro.

Do przedimplantacyjnej diagnostyki genetycznej (PGD). Na podstawie wyników badań kariotypu rodziców określa się możliwe aberracje chromosomowe i genetyczne, które mogą zostać przekazane na zarodek.

Dzięki możliwościom diagnostyki FISH badanie stanu genetycznego powstałych zarodków można przeprowadzić już w ciągu kilku godzin przed przeniesieniem do jamy macicy, aby zapewnić ciążę ze znanym zdrowym płodem.

Ponadto możliwości PGD pozwalają określić płeć zarodków, a co za tym idzie, w razie potrzeby „uporządkować” płeć nienarodzonego dziecka.

• Podczas ciąży.

W diagnostyce prenatalnej: oprócz klasycznego badania genetycznego komórek płodowych (kariotypowanie) ośrodki medyczne oferują zazwyczaj analizę komórek płodowych uzyskanych za pomocą pobierania próbek kosmówki kosmówkowej, amniopunkcję lub kordocentezę metodą FISH.

Metoda ta jest niezastąpiona, gdy konieczne jest szybkie uzyskanie odpowiedzi na temat obecności najczęstszych defektów chromosomowych u płodu: trisomii na chromosomach 21, 18, 13, aberracji na chromosomach X i Y, czasami także aneuploidii na chromosomach 14 (lub 17), 15, 16.

Zalety analizy FISH

Przeprowadzanie analizy genetycznej metodą FISH, choć dziś pozostaje metodą pomocniczą w diagnozowaniu patologii chromosomowych, o wykonalności jej wdrożenia decydują niezaprzeczalne zalety:

• szybkość uzyskania wyników dotyczących badanych chromosomów wynosi kilka godzin – nie więcej niż 72.

Może to mieć znaczenie, jeśli los ciąży zależy od diagnozy genetyków;

• wysoka czułość i niezawodność metody FISH - możliwa jest skuteczna analiza na znikomej ilości biomateriału - wystarczy jedna komórka, błąd wyników nie przekracza 0,5%.

Może to mieć znaczenie, gdy liczba komórek w pierwotnej próbce jest ograniczona, np. gdy ich podział jest słaby.

• możliwość przeprowadzenia diagnostyki metodą FISH na każdym etapie ciąży (od 7 tygodnia) z wykorzystaniem dowolnej próbki biologicznej: fragmentów kosmówki, płynu owodniowego, krwi płodu itp.

Gdzie mogę postawić diagnozę metodą FISH?

W Moskwie metodę FISH do diagnostyki prenatalnej nieprawidłowości chromosomowych płodu stosuje się w następujących ośrodkach medycznych:

Z reguły kliniki oferują diagnostykę FISH w ramach pełnego kariotypowania płodu poprzez interwencję inwazyjną za dodatkową opłatą. I z reguły przyszli rodzice zgadzają się dopłacić, ponieważ dzięki metodzie FISH w ciągu zaledwie kilku dni możesz dowiedzieć się najważniejszych rzeczy o swoim dziecku

Nie należy lekceważyć raka piersi. Może dotknąć absolutnie każdego – młodych i starszych, kobiety i mężczyzn. Ogromna złożoność leczenia, wysoka śmiertelność i rosnąca dynamika zachorowań powodują, że medycyna poświęca coraz większą uwagę temu problemowi.

Do chwili obecnej nie ma metody leczenia, która w 100% gwarantowałaby pozytywny wynik choroby. Istniejące metody są pracochłonne, drogie i mogą powodować ogromne uszkodzenia uboczne w organizmie.

To jedna z tych chorób, w przypadku których można powiedzieć, że najlepszym leczeniem jest eliminacja czynników ryzyka i wczesna diagnoza.

Predyspozycja do raka piersi

Pomimo tego, że nowotwór został po raz pierwszy opisany w XV wieku p.n.e., a naukowcy dysponują ogromną ilością informacji, to wciąż za mało, aby w pełni opisać etiologię raka piersi.

Czynniki środowiskowe wpływające na występowanie lub rozwój nowotworów nie zostały zidentyfikowane z wystarczającą wiarygodnością. Indywidualne badania wskazujące na konkretny czynnik rakotwórczy nie cieszą się pełnym uznaniem całego środowiska medycznego. Istnieje jednak pewna korelacja pomiędzy rakiem piersi a następującymi schorzeniami:

Jednym z najważniejszych czynników wymienionych powyżej jest wiek: z biegiem lat prawdopodobieństwo zachorowania na raka piersi wzrasta o rzędy wielkości. Generalnie złożoność zagadnienia etiologii raka piersi wynika z jego genetycznego charakteru. Nie wiadomo, dlaczego nagle dochodzi do nieprawidłowego działania i tkanka piersi zaczyna się dzielić w niekontrolowany sposób, wpływając na sąsiednie tkanki i prowadząc do przerzutów w całym organizmie.

Ale naukowcy są zgodni co do jednego: współczesne życie znacznie bardziej sprzyja nowotworom niż wcześniej.

Wskazuje się więc na wysokie dawki promieniowania elektromagnetycznego, złą ekologię, niski poziom tlenu w miastach, brak aktywności fizycznej, stres itp. Nie sposób nie wziąć pod uwagę znacznie wydłużonego wieku życia, bo nowotwór to choroba, która zwykle pojawia się wiek dojrzały.

Niezbędne badania

Możliwość pozytywnego wyniku nowotworu jest bezpośrednio powiązana z momentem rozpoczęcia leczenia, dlatego też podejście do diagnozy powinno być jak najpoważniejsze.

Wymagane są następujące metody diagnostyczne:

• comiesięczna samokontrola (badanie palpacyjne);
• skonsultuj się z lekarzem raz na kwartał;
• USG co sześć miesięcy;
• MRI co roku.

Nie zaleca się wykonywania mammografii (prześwietlenia rentgenowskiego) przed 30. rokiem życia, ponieważ najlepiej unikać narażenia na promieniowanie w młodym wieku. Jeśli podejrzewasz raka piersi, będziesz musiała przejść następujące badania:

Metoda badania RYB

Badanie FISH (analiza FISH) to metoda cytogenetyczna stosowana do badania białka błonowego HER2 (ludzkiego receptora estrogenowego 2). Podczas przeprowadzania badania FISH wykorzystuje się sondy DNA znakowane barwnikiem fluorescencyjnym. Sondy te są wstawiane do pożądanych regionów DNA i są w stanie określić ilościowo stopień amplifikacji HER2. Ponieważ badanie jest prowadzone w czasie, a geny nadal się dzielą, możliwe jest oszacowanie stosunku liczby kopii genu HER2 do liczby kopii regionu normalnie dzielącego się. Jeśli jest większy lub równy 2, wynik uważa się za HER2 dodatni.

Analiza FISH odgrywa kluczową rolę w prognozowaniu nowotworu i wyborze zasad leczenia. Zatem amplifikacja lub zwiększona aktywność tego białka występuje w 30% przypadków nowotworów i wymaga specjalnych metod leczenia, mających na celu zahamowanie jego funkcji. W normalnych warunkach HER2 kontroluje wzrost, podział i samonaprawę komórek. W przypadku raka białko to wytwarza zbyt wiele receptorów błonowych i instruuje komórki do niekontrolowanego podziału. W ten sposób komórka zamienia się w nowotwór.

Jeśli wynik testu FISH jest pozytywny, przepisuje się leczenie mające na celu supresję HER2. Głównym lekiem jest dziś Herceptin. Jeżeli badanie to nie zostanie wykonane lub jego wyniki zostaną zignorowane, wybór leczenia będzie błędny, a nowotwór osiągnie stadium terminalne. Ponadto taki rak rozwija się bardziej agresywnie niż rak HER2-ujemny.

Analizę immunohistochemiczną przeprowadza się łącznie z analizą FISH. Jest to również metoda genowa służąca do badania białka HER2, jednak w przypadku analizy immunohistochemicznej ilość białka HER2 wykrywa się nie w komórce, ale w konkretnej próbce.

Różni się od metody rybnej kosztem, ale wyniki dają mniej informacyjne wyniki, które zależą od badacza, laboratorium i zastosowanych kryteriów. Ilość białka HER2 określa się na podstawie koloru badanej próbki i ocenia się w skali od zera do trzech. Razem te dwie metody stanowią złoty standard w badaniu statusu HER2 pacjenta.

Zatem pomimo swojego wizerunku rak piersi jest całkiem uleczalny. Onkolodzy mają w swoim arsenale wszystkie zaawansowane osiągnięcia medycyny. Wszystkie te środki są dość dostępne dla najzwyklejszego obywatela.

Najważniejsze dla pomyślnego wyniku choroby jest terminowe wykonanie badań w kierunku raka piersi, wybranie właściwej metody leczenia i wcześniejsze jej rozpoczęcie. Nie rozpaczaj, jeśli nie będzie rezultatów, ponieważ pozytywne podłoże emocjonalne również ma istotny wpływ na przebieg choroby.