Immunoblotting w diagnostyce HIV. Immunoblotting (wykrywanie przeciwciał w surowicy pacjentów na określone antygeny patogenów) Hybrydyzacja kwasów nukleinowych

Test immunoenzymatyczny (ELISA)

Test immunoenzymatyczny (ELISA) przeprowadzane w dwóch etapach: pierwszy to oddziaływanie przeciwciał z antygenem, drugi to oznaczenie enzymatyczne kompleksu antygen-przeciwciało dzięki pojawieniu się wybarwienia mieszaniny reakcyjnej oraz rejestracji wybarwienia wizualnie lub metodą spektrofotometryczną.

Istnieją dwa warianty testu ELISA: w fazie stałej iw fazie ciekłej, różniące się sposobem rozdzielenia składników reakcji immunochemicznej. W porównaniu do wcześniej opisanych metod wykrywania antygenów i przeciwciał, test ELISA ma istotne zalety:

wysoka czułość, pozwalająca na oznaczenie do 0,05 ng/ml substancji;

możliwość użycia minimalnych objętości badanego materiału (1--2 µl);

możliwość instrumentalnego lub wizualnego rozliczenia reakcji;

szybkość i możliwość automatyzacji wszystkich etapów reakcji.

Test ELISA jest obecnie szeroko stosowany w praktyce w diagnostyce wielu chorób zakaźnych o etiologii bakteryjnej, grzybiczej, zakażeń pierwotniakami i robaczycami, ale przede wszystkim infekcji wirusowych, w szczególności wirusowego zapalenia wątroby typu A, B, C, D, E, G, zakażenia wirusem HIV, herpeswirusem, rotawirusy, adenowirusy, astrowirusy, parwowirusy i inne infekcje.

blotting immunologiczny

Zasada metody blottingu immunologicznego polega na wykrywaniu przeciwciał przeciwko poszczególnym antygenom patogenu. Za pomocą tej metody oznacza się przeciwciała przeciwko antygenom wirusa HIV (glikoproteiny otoczki wirusa, białka rdzenia i enzymy wirusa). Wyniki blottingu immunologicznego są oceniane jako dodatnie, wątpliwe i ujemne, w zależności od ilościowego i jakościowego zestawu wykrytych przeciwciał.

Należy zauważyć, że immunoblotting ma gorszą czułość niż test ELISA; w niektórych przypadkach wynik negatywny może zostać odnotowany w obecności zakażenia wirusem HIV u pacjenta. Jednak możliwość rejestracji wyników fałszywie dodatnich w teście ELISA w zakażeniu HIV wymaga zintegrowanego podejścia do diagnostyki zakażenia HIV, uwzględniającego oprócz wyników reakcji immunologicznych (ELISA, immunoblotting) dane epidemiologiczne i kliniczne.

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR)

Metoda PCR została opracowana przez amerykańskiego biochemika Kary'ego Mullisa w 1983 roku w oparciu o wykorzystanie odkrytej przez niego termostabilnej polimerazy DNA (polimerazy Tag). Zasada metody polega na 10 6 -10 8-krotnym zwiększeniu liczby kopii określonego regionu DNA patogenu katalizowanego in vitro przez polimerazę DNA w trybie automatycznym.

W sztucznych warunkach możliwe jest odtworzenie procesu replikacji regionu genomu specyficznego dla określonego gatunku lub rodzaju patogenów, o ile znana jest jego sekwencja nukleotydowa. Zastosowanie metod wykrywania produktów replikacji takich regionów (amplikonów) umożliwia stwierdzenie obecności patogenu w badanej próbce.

Opisane powyżej uzupełnienie łańcucha komplementarnego rozpoczyna się tylko w pewnych blokach początkowych, które są krótkimi odcinkami dwuniciowymi. Kiedy takie bloki są przyłączone do określonych regionów DNA, proces syntezy nowej nici jest ukierunkowany tylko w wybranym regionie, a nie na całej długości nici DNA. Dwa startery oligonukleotydowe, zwane starterami, służą do tworzenia bloków startowych w danych regionach DNA. Startery są komplementarne do sekwencji DNA na lewej i prawej granicy określonego fragmentu i są zorientowane tak, że uzupełnienie nowej nici DNA następuje tylko między nimi.

DO zalety metody PCR powinno zawierać:

wysoka czułość, pozwalająca na oznaczenie 10-1000 komórek w próbce;

wysoka specyficzność, ponieważ w badanym materiale wykrywany jest fragment DNA unikalny dla tego patogenu;

uniwersalność procedury wykrywania różnych patogenów z jednego testu biologicznego;

Wysoka prędkość analizy (4-4,5 h);

Możliwość diagnozowania nie tylko ostrych, ale także utajonych infekcji.

Zastosowanie PCR jest skuteczne w diagnozowaniu szerokiego zakresu infekcji bakteryjnych i wirusowych.

Ostatnio z powodzeniem wdrożono ilościowe metody analizy PCR, które umożliwiają określenie stężenia patogenu w materiale (obciążenie mikrobiologiczne lub wirusowe), na przykład w celu oceny aktywności replikacyjnej wirusa zapalenia wątroby typu B, HIV C .

Należy jednak pamiętać, że metoda PCR ma również swoje ograniczenia, w szczególności w diagnostyce zakażeń wywołanych autoflorą oportunistyczną.

Hybrydyzacja kwasów nukleinowych

hybrydyzacja kwasów nukleinowych podobnie jak PCR, pozwala na identyfikację patogenu w próbce bez wcześniejszej izolacji. Do analizy syntetyzuje się jednoniciową sondę DNA lub RNA, która jest komplementarna do określonych sekwencji nukleotydowych patogenu. Sonda jest znakowana radionuklidem, enzymem lub innym łatwo rozpoznawalnym znacznikiem. Materiał do badań poddawany jest obróbce w celu lizy mikroorganizmów obecnych w teście biologicznym, izolacji i denaturacji DNA. Następnie sondę inkubuje się z badaną próbką i mierzy się ilość znakowanego DNA, który wszedł w hybrydyzację z DNA w badanej próbce. Reakcja może zachodzić zarówno na sorbentach w fazie stałej, jak iw roztworze, jednak warunkiem koniecznym jest wypłukanie niezwiązanych ilości znakowanej sondy. Czułość metody hybrydyzacji kwasów nukleinowych jest gorsza niż PCR i wynosi 103 komórki drobnoustrojów na próbkę.

Kiedy zostałem przebadany na obecność chorób przenoszonych drogą płciową, zdecydowałem się na test na obecność wirusa HIV. Następnego dnia otrzymałem gotowe testy na ifa, oprócz HIV, w wyniku czego zdiagnozowano u mnie chlamydię. Opryszczka i mikroplazmoza. Ale vich nigdy nie przyszedł. Dzwonią do mnie za 3 dni i mówią, że musisz przyjść do centrum AIDS, aby ponownie pobrać krew. Czy Imunablot może być fałszywie dodatni w chorobach Chlamydia Mycraplasmosis HPV Herpes

Eksperci Woman.ru

Uzyskaj opinię eksperta na swój temat

Anastazja Szesterikowa

Rusina Irina Władimirowna

Psycholog, Odstresowanie. Specjalista z b17.ru

Olga Juriewna Diganajewa

Psycholog. Specjalista z b17.ru

Olga Borisenko

Psycholog, terapeuta Gestalt. Specjalista z b17.ru

Dmitrij Waleriewicz Tiszakow

Psycholog, superwizor, systemowy terapeuta rodzinny. Specjalista z b17.ru

Shiyan Olga Wasiliewna

Psycholog, Psycholog-konsultant. Specjalista z b17.ru

Oksana Luszankina

Psycholog, Relacje w rodzinie. Specjalista z b17.ru

Anna Daszewska

Psycholog, konsultacje przez Skype. Specjalista z b17.ru

Irina Bukina

Psycholog. Specjalista z b17.ru

Aksjonowa Anna Michajłowna

Psycholog, Kandydat w analityce grupowej. Specjalista z b17.ru

Nie chcę cię straszyć, ale kiedy wzywają cię do centrum AIDS, prawie zawsze jest to pozytywne, nie powtarzaj tego, powodzenia, najważniejsze jest podjęcie terapii i długie życie

Pewien przyjaciel żyje z HIV od dziesięciu lat, dbając o siebie.
Mówią, że za trzy lata prawdopodobnie znajdą lekarstwo.
W każdym razie nie rozpaczaj i nie rozsiewaj, lecz się

Nie, IB nie może być fałszywie dodatnia i żadne choroby przenoszone drogą płciową nie mają wpływu na tę analizę, jeśli jest pozytywna, to niestety masz HIV, musisz monitorować swoje komórki odpornościowe i rozpocząć terapię na czas.

niestety nie ((jeśli zadzwonili do centrum, to zdecydowanie HIV

O ile mi wiadomo, pierwsze, a nawet kolejne wyniki immunoblotów mogą być wątpliwe. nie fałszywe alarmy, ale wątpliwe. a następnie zlecana jest ponowna analiza. Oto tekst ze strony:
„Blotowanie immunologiczne jest najczęściej stosowane w celu potwierdzenia rozpoznania zakażenia wirusem HIV. WHO uznaje surowice za dodatnie, jeśli metodą immunoblottingu zostaną wykryte przeciwciała przeciwko dowolnym dwóm białkom otoczki wirusa HIV. Zgodnie z tymi zaleceniami, jeśli dojdzie do reakcji tylko z jednym z białek otoczki (gp160, gp120, gp41) w połączeniu z lub bez reakcji z innymi białkami, wynik uważa się za wątpliwy i zaleca się drugie badanie z użyciem zestawu firmy innej serii lub innej firmy. Jeśli po tym czasie wynik pozostaje wątpliwy, badania są kontynuowane co 3 miesiące.
możesz googlować. jeśli tak, mam nadzieję, że nie uzyskasz pozytywnego wyniku testu na obecność wirusa HIV. ale jeśli się potwierdzi to wiedzcie że dzisiaj z tą diagnozą żyją i żyją tak długo jak ludzie zdrowi i rodzą dzieci. głównym warunkiem jest dyscyplina w leczeniu. zdrowie dla Ciebie!

Terapia antyretrowirusowa online

Kalkulatory

Strona przeznaczona jest dla pracowników medycznych i farmaceutycznych w wieku 18+

Rozszyfrowanie analizy - immunoblot

Proszę o pomoc w rozszyfrowaniu analizy
ENV(GP160)+
ENV(GP110/120)+
ENV(GP41)+
GAG(P55)+
GAG(P40)+
GAG(P25)+
POL(P68)+
POL(P52)+
POL(P34)+

Cześć! 2,5 roku temu zrobiłem test na HIV, był taki immunoblot:
GP-160+, GP-110/120+, GP-41+, p17+, p25+, p31+, p34+, p52+, p55+, p68+. A oto immunoblot z 30.05.18: Gp-160+, Gp-41+, GAG 1-, ankieta+, env2-. Nie jest jasne, co oznacza rzut +? Czy jest tam jedyny, czy nie został ujawniony? A gdzie się podziała reszta białek?

Pol i Env to geny kodujące grupy białek. Potraktuj to jako inny zapis. Pytanie jest inne. A na co czekamy? Dlaczego rozważamy blota? Wszystko jest dość jasne. Trzeba coś zrobić.

Już przyzwyczaiłem się do tego, że mam HIV. I gotowe na terapię.
Po prostu ciekawy, aby usłyszeć swoją opinię. Czy to świeża infekcja, czy coś przegapiłem? A może czasem zdarza się, że immunoblot powoli bardzo się otwiera?

Dziś zajrzałem do moich analiz w aktach osobowych (sporządzonych w SC):
ELISA na pierwszym systemie testowym - pozytywny
Test ELISA na drugim systemie testowym jest negatywny (jak to jest?)

Kolejne IB (wykonane in vitro i SC miesiąc temu):
immunoblot na pierwszym systemie testowym: gp 160+, gp 41+
immunoblot na innym systemie testowym: gp41+, p24+, p17+
immunoblot na trzecim układzie testowym: gp160+, gp120+, gp41+, p24+

Według moich przewidywań mogłam zarazić się rok temu (ostra faza była gdzieś w kwietniu), albo 9 miesięcy temu, ale ogólnie - xs kiedy) Zawsze stosowałam zabezpieczenia i uprawiałam seks bez prezerwatywy tylko raz jesienią 2017.

Dzisiaj po raz kolejny zdałem na VN i IP. Teru ruszy za miesiąc, jak przyjdzie zamówienie.

Daty poddane wspomnianym testom.

Pierwsza plama przed ELISA? Nie bije. Nie ma tu ani jednego momentu, który pozwalałby stwierdzić, że wysoce prawdopodobne jest świeże zakażenie lub odwrotnie.
Pozostanie tajemnicą, jeśli przypadkowo nie znajdziesz źródła i nie porównasz.

W takim razie dla wyjaśnienia

Przekazane w Invitro.
Pierwsza IFA już 11 maja.
Następnie ta sama surowica trafiła do blotu i przyszła pozytywna analiza, w której zidentyfikowano dwa białka.
GP 160+, GP 41+

Potem już ponownie przekazałem SC.
Krew oddana 29 maja br.
I tam został przeprowadzony przez kilka systemów testowych, gdzie pierwszy dał wynik negatywny, drugi pozytywny. Negatywny test ELISA jest jednak zabawny.
Następnie ta sama surowica trafia do blotu, z którego pochodzą dane:

Pierwszy układ testowy: gp41+, p24+, p17+
Drugi układ testowy: gp160+, gp120+, gp41+, p24+

Ale nie o to chodzi.
Nadeszła nowa analiza IP - 754. To się podoba. VN nie jest jeszcze gotowy. Jak tylko nadejdzie, prawdopodobnie zacznę teru.

Jestem na 80% pewien, że infekcja miała miejsce rok temu. A fakt, że kleks powoli się otwiera, a test ELISA jest negatywny, jest dziwny. A może mieści się w granicach normy?

Negatywny test ELISA jest jednak zabawny. Chciałbym również znać nazwę systemu, aby zapisać ją w czarnym zeszycie. Chociaż ten moment, jeśli nie weźmiesz teorii z małżeństwa, jest zdecydowanie za wczesną infekcją.
Jestem na 80% pewien, że infekcja miała miejsce rok temu. Słaby kleks jak na ten okres. Nie niemożliwe, ale mało prawdopodobne.

W pewnym momencie zacząłem nawet wątpić w wyniki testów na obecność wirusa HIV - więc czekam na VN.
Tutaj ostatni punkt pytania zostanie już umieszczony.

Czy uważa się również, że w normalnym zakresie IP wzrosło o 200 kopii bez tera w ciągu miesiąca? Biorę teraz Ursosan na polipa w pęcherzyku żółciowym - w ulotce jest napisane, że lek poprawia odporność.

Konieczna jest ocena obu ze względną zawartością i uwzględnienie danych jednego laboratorium za pomocą jednej metody obliczeniowej. Ponieważ - Bóg wie, co się dzieje z CD4.

Ogólnie liczba CD4 wynosi 780 komórek/µl. VN - 250 kopii / ml.
To jest bez terapii. Oznacza to, że CD4 z 486 skoczyło do 780 w ciągu miesiąca.
BH spadł z 550 do 250 egzemplarzy.

Jednak nie jest to dziwne, czy takie skoki mieszczą się w normie? Czy nadszedł czas, aby rozpocząć Tera?

Cześć! Zdałem ifa trzy razy, za każdym razem +, immunoblot p24+ p18+ pochodził z SC. Potencjalne ryzyko istniało ponad sześć miesięcy temu. p24 wskazuje, że nadal jest to HIV?

Osuszyć wątpliwe, powtórzyć po 6-8 tygodniach. Najprawdopodobniej fałszywy alarm.

Dobry dzień!
Wróciły wyniki testu, w tym kleks:

Niebezpieczny kontakt: 24.04.2018
Test ELISA na HIV 23.05.2018 (4 tygodnie od niebezpiecznego kontaktu lub 29 dni) wynik "+"
Test ELISA na HIV 28.05.2018 (5 tygodni od niebezpiecznego kontaktu lub 34 dni) wynik „ponowny”
Test ELISA na HIV 01.06.2018 (5 tygodni od niebezpiecznego kontaktu lub 38 dni) wynik "+"

Plama pochodzi z pierwszej analizy (23.05.18):
GP160 sl.
P24 sl.

Nowe testy zdane 06.06.2018 ELISA i PCR HIV RNA w lokalnym centrum AIDS. Nadal czekamy na wyniki.

Wymazuj pytania:
1. Jeśli obecne jest P24, czy koniecznie jest to antygen HIV, czy też takie białko można wykryć w innych chorobach?
2. Co oznacza skrót „sl” obok białka? Zwykle w opisywanych kleksach występuje + lub -
3. Co decyduje o rozmieszczeniu blotu? Z terminu czy z indywidualnych cech ciała?
4. Czy przy takiej plamie w 4 tygodniu od niebezpiecznego kontaktu jest szansa, że ​​to nie HIV?

Miłego dnia i dziękuję.

1. nie, może to być po prostu podobne białko o innym charakterze. 2. słaby. te. wątpliwy. 3. Terminy i realizacja poszczególnych funkcji, ale średnio wszystko jest bardzo blisko. 4. źle postawione pytanie, zawsze jest szansa do ustalenia diagnozy.

Cześć!
Proszę o pomoc w nawigowaniu po wynikach analiz i zrozumieniu jak prawidłowo się zachować, aby powtarzane analizy były poprawne.

Analizy przekazane 25.05.2018
HIV IB
NOWY LAV BLOT 1 - niezdefiniowany od 29.05.2018r
Markery IB HIV
GP 160+
gp 120 —
GP 41 -
p55+
p40-
strona 24+
s.18-
str. 68 —
str. 52 —
str. 34 —
ELISA HIV
ADVIA Centaur HIV Ag-Ab Reaktywność ELISA 12.00 pozytywny (28.05.2018)
Zaleca się powtórzenie analizy po 2 tygodniach.

W listopadzie 2017 miałam NPA, po którym zrobiłam testy na systemie testowym HIV Ag\Ab Combo Abbott Architect, wtedy wynik był negatywny.

W tym samym czasie wykonałem pełną morfologię krwi. Limfocyty są nieznacznie zwiększone, eozynofile są dokładnie 0 (ale wcześniej miałem takie wskaźniki dla eozynofili.

Główne pytanie brzmi:
Jakie leki można, a jakich nie można przyjmować w ciągu tych dwóch tygodni? (Nie chcę, żeby nic „migało”)
Od czasu do czasu miewam ataki alergii, zwykle piję tavegil. Czy należy go porzucić?
Czy przed badaniem można brać antybiotyki? (jeśli został przepisany przez lekarza w celu leczenia innych infekcji i chorób)

Immunoblotting w diagnostyce HIV

Immunoblotting (immunoblot, Western Blot, Western blot)- łączy test immunoenzymatyczny (ELISA) ze wstępnym przeniesieniem elektroforetycznym na pasek nitrocelulozowy (pasek) antygenów wirusowych.

W tej pięknej naukowej nazwie „plamka” najprawdopodobniej tłumaczy się jako „plamka”, a „zachodnia” jako „zachodnia” odzwierciedla kierunek rozmieszczenia tej „plamki” na papierze od lewej do prawej, czyli na mapie geograficznej to odpowiada kierunkowi z zachodu na wschód”. Istotą metody „immune blot” jest to, że reakcję immunoenzymatyczną przeprowadza się nie z mieszaniną antygenów, ale z antygenami HIV, uprzednio rozdzielonymi przez immunoforezę na frakcje zlokalizowane zgodnie z masą cząsteczkową na powierzchni błony nitrocelulozowej. W rezultacie główne białka wirusa HIV, nośniki determinant antygenowych, rozkładają się na powierzchni w postaci oddzielnych prążków, które pojawiają się podczas testu immunoenzymatycznego.

Immunoblot obejmuje kilka etapów:

Przygotowanie paska. Wirus niedoboru odporności (HIV), który został wcześniej oczyszczony i zniszczony do składników składowych, jest poddawany elektroforezie, podczas gdy antygeny tworzące HIV są rozdzielane według masy cząsteczkowej. Następnie, za pomocą bibuły (analogicznie do wyciskania nadmiaru atramentu na „blotter”), antygeny są przenoszone na pasek nitrocelulozy, który zawiera teraz niewidoczne dla oka widmo antygenowych prążków charakterystycznych dla wirusa HIV.

Przykładowe badanie. Materiał testowy (surowica, osocze krwi pacjenta itp.) jest nakładany na pasek nitrocelulozowy i jeśli w próbce znajdują się specyficzne przeciwciała, wiążą się one ze ściśle odpowiadającymi im (komplementarnymi) prążkami antygenowymi. W wyniku kolejnych manipulacji wynik tej interakcji zostaje zwizualizowany – uwidoczniony.

Interpretacja wyniku. Obecność prążków w niektórych obszarach płytki nitrocelulozowej potwierdza obecność w badanej surowicy przeciwciał przeciwko ściśle określonym antygenom HIV.

Obecnie główną metodą potwierdzania obecności przeciwciał swoistych dla wirusa w badanej surowicy jest immunoblot (immunoblot). W niektórych przypadkach zakażenia wirusem HIV, przed serokonwersją, specyficzne przeciwciała są skuteczniej wykrywane metodą immunoblottingu niż metodą ELISA. Badanie blottingu immunologicznego wykazało, że przeciwciała przeciwko gp 41 są najczęściej wykrywane w surowicach pacjentów z AIDS, a wykrycie p24 u osób badanych w celach profilaktycznych wymaga dodatkowych badań na obecność zakażenia wirusem HIV. Systemy testowe Immunoblot oparte na rekombinowanych białkach uzyskanych metodą inżynierii genetycznej okazały się bardziej specyficzne niż konwencjonalne systemy oparte na oczyszczonym lizacie wirusa. Podczas stosowania rekombinowanego antygenu powstaje nie rozproszony, ale wyraźnie określony wąski prążek antygenu, który jest łatwo dostępny do rozliczenia i oceny.

W surowicy osób zakażonych wirusem HIV-1 wykrywa się przeciwciała przeciwko następującym głównym białkom i glikoproteinom - strukturalnym białkom otoczki (env) - gp160, gp120, gp41; jądra (gag) - p17, p24, p55, a także enzymy wirusa (pol) - p31, p51, p66. W przypadku HIV-2 typowe są przeciwciała przeciwko env - gp140, gp105, gp36; knebel - s. 16, s. 25, s. 56; pol-p68.

Spośród metod laboratoryjnych niezbędnych do ustalenia swoistości reakcji, największe uznanie cieszy się wykrywanie przeciwciał przeciwko białkom otoczki wirusa HIV-1 - gp41, gp120, gp160 i HIV-2 - gp36, gp105, gp140.

WHO uważa surowice za dodatnie, jeśli przeciwciała przeciwko dwóm glikoproteinom HIV zostaną wykryte metodą immunoblottingu. Zgodnie z tymi zaleceniami, w przypadku wystąpienia reakcji tylko z jednym z białek otoczki (rp 160, rp 120, rp 41) w połączeniu lub bez reakcji z innymi białkami, wynik uważa się za wątpliwy i zaleca się wykonanie drugiego testu z użyciem zestawu z innej serii lub innej firmy. Jeśli po tym czasie wynik pozostaje wątpliwy, zalecana jest obserwacja przez 6 miesięcy (badania po 3 miesiącach).

Obecność pozytywnej reakcji z antygenem p24 może świadczyć o okresie serokonwersji, ponieważ przeciwciała przeciwko temu białku pojawiają się czasami jako pierwsze. W takim przypadku zaleca się, w zależności od danych klinicznych i epidemiologicznych, powtórzenie badania z próbką surowicy pobraną co najmniej 2 tygodnie później, a dokładnie tak jest w przypadku, gdy w zakażeniu HIV konieczne są sparowane surowice.

Dodatnie reakcje z białkami gag i pol bez obecności reakcji z białkami env mogą odzwierciedlać stadium wczesnej serokonwersji, a także mogą wskazywać na zakażenie HIV-2 lub reakcję niespecyficzną. Osoby z takimi wynikami po badaniu w kierunku HIV-2 są ponownie badane po 3 miesiącach (w ciągu 6 miesięcy).

Pytanie: Powtarzana analiza w kierunku HIV?

Zostałam przebadana pod kątem chorób przenoszonych drogą płciową (brak objawów, chciałam mieć pewność w związku z kobietą). Test na HIV był pozytywny. Po USG wykazał guz na nerce, usunięty (okazał się złośliwy).
Czytałem książkę Sazonova I.M., jest napisane, że złośliwy guz może dać pozytywny wynik testu na HIV.
Czy tak może być, czy nie ma na co liczyć?

Musisz wykonać test kontrolny na obecność wirusa HIV. Jeśli pierwszy test na obecność wirusa HIV został określony za pomocą testu ELISA, wynik może być fałszywie dodatni. Jego wiarygodność można sprawdzić bardziej czułą metodą diagnostyczną - PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy), która określa DNA wirusa we krwi.

Pomoc. 16.12.10 ELISA (+) IB (+) następnie od 23.03.11 do 19.05.11 dziewięć negatywnych ELISA (-) i ilościowy PCR. nie są zdeterminowane. w 2002 podczas ciąży ELISA wtedy (+) potem (-) ale IB to zawsze (-). od 2004 do 2008 robiłem ELISA (-) 2 razy w roku, ale w dniu 30.04.08 ifa (+) i IB-undefined. potem znowu co 2 miesiące przekazywałem IFA zawsze (-). a od grudnia 2010 r. jest napisane powyżej.Jednocześnie nigdy nie robiłam zastrzyków,mąż zawsze ma ELISA(-). Komórki CD4 980. a nawet krew na syfilis z 29.04 dała 3+++.a potem trzy razy. negatywny co 10 dni. zapalenie wątroby wszystkie (-). Czy ktoś miał podobnie. Dziękuję.

Proszę określić, czy wykonano u Państwa RIBT (treponema pallidum unieruchomienie reakcji), jeśli tak, jakie są wyniki tego badania.

nie, nikt mi nie proponował takiej analizy, co ona pokaże? Mam nadzieję, że rozumiecie, że mówiłem o testach na HIV. Dziękuję. Czy mieliście podobne przypadki w swojej praktyce? nawiasem mówiąc, o bezpieczeństwie informacji w 2008 roku było niepewnie. było białkiem p24/25. w 2010 IB(+) białka gp160.41.120 p24.17.31. następnie, gdy ifa została ponownie 3 razy (-) wysłana do IB 4 kwietnia. wynik wyszedł pozytywny, ale białka gp 120 i 41. reszta przekreślona czerwoną pastą i na dole czerwoną IB REPEAT. ale PCR z tego samego numeru zostanie odrzucony. po 4 kwietnia wręczyłem IFA już 4 razy odmów. wszystko w centrum AIDS, w tym antygen i przeciwciało. Teraz czekam na drugie IB i wysokiej jakości PCR. Otóż ​​to. BARDZO ZMĘCZONY MYŚLEĆ I CZEKAĆ. Mając nadzieję na najlepsze. DZIĘKUJĘ. Czekam na odpowiedź.

Jeśli zadasz jakieś pytanie, spróbuj następnym razem sformułować je bardziej szczegółowo, z wyjaśnieniem diagnozy. RIBT służy do potwierdzenia rozpoznania kiły. W celu dokładnego rozpoznania zakażenia wirusem HIV przeciwciała przeciwko wirusowi HIV we krwi oznacza się za pomocą testu ELISA i immunoblotu. Diagnoza jest potwierdzona tylko wtedy, gdy oba te wyniki są pozytywne.

przepraszam za nieprecyzyjne sformułowanie pytania. Napisałem, że w grudniu IFA i Imunoblot na HIV wyszły pozytywnie. ale od marca ifa dla HIV jest 9 razy ujemna. jeśli byłem zarejestrowany w centrum AIDS, to dzieje się to w zasadzie. HIV jest zawsze pozytywny lub negatywny. i jak można umieścić immunoblot na HIV, jeśli wynik testu ELISA jest negatywny? wtedy każdy zaprzeczy, że trzeba sprawdzić immunoblot, więc co się dzieje? w naszym centrum prędkości nie mogą mi nic odpowiedzieć. Oto, co zwróciłem się do ciebie. Dziękuję.

Niestety, zarówno test ELISA, jak i immunoblot mogą dawać wyniki fałszywie dodatnie. Dlatego diagnoza HIV jest uważana za ostateczną, tylko z równoczesnym wykryciem wirusa HIV metodą ELISA i metodą immunoblot.

Witam Dzisiaj otrzymałem wyniki testu PCR na HIV, jakościowego wirusa nie wykryto i powtórnego immunoblotu na HIV, wynik jest niepewny ze względu na białko 41. CENTRUM AIDS stwierdziło, że najprawdopodobniej nie ma HIV, ale w w moim ciele są ciała podobne w budowie do wirusa HIV. i jak myślisz, biorąc pod uwagę moje pytania z 15 i 16 czerwca (patrz wyżej), czy istnieje HIV, czy nie. DZIĘKUJĘ.

W takim przypadku rozpoznanie zakażenia wirusem HIV jest wątpliwe.

Piszesz, że tylko przy jednoczesnym wykryciu HIV za pomocą IF i immunoblotu, diagnoza HIV jest uważana za ostateczną. Ale co w moim przypadku? przecież ptsr zaprzeczy. i blot i ifa skaczą cały czas. przez 9 lat. powiedz mi, gdyby wirus był we krwi, to jego RNA i DNA można by dokładnie określić przez tyle lat. i czy okres inkubacji lub „okno” może trwać tyle lat? Czy są fałszywie ujemne wyniki PCR w kierunku HIV po takim okresie czasu? Tak, zapomniałem powiedzieć, że szybkie testy na obecność wirusa HIV, które wykonuję w CPD, są zawsze ujemne, czy też nie mogę na nich polegać? Dziękuję.

W tym przypadku diagnostyka PCR nie jest główną metodą identyfikacji dynamiki procesu - metody serologiczne są bardziej pouczające. W takim przypadku prawdopodobieństwo wyników fałszywie ujemnych jest wysokie. szybkie testy na obecność wirusa HIV mają wysoki próg czułości, dlatego też mogą dawać wynik fałszywie ujemny.

Przepraszam. Na pewno napisałem w złym miejscu. proszę o odpowiedź w temacie HIV czy nie HIV. Dziękuję.

W przypadku, gdy nie otrzymałeś powiadomienia o otrzymaniu odpowiedzi na swoją pocztę, możesz zobaczyć odpowiedź na swoje pytanie pod tym adresem http://tiensmed.ru/news/answers/vich-ili-ne-vich- .html

Cześć! Proszę mi powiedzieć, aby zarejestrować się w LCD (teraz w 10 tygodniu ciąży), przeszłam testy na obecność wirusa HIV, lekarz zadzwonił do mnie kilka dni temu i powiedział, że wstępne testy na obecność wirusa HIV są pozytywne (pierwsze przeprowadzono w Kirowogradzie, ale wciąż nie ma oficjalnego wyniku z Kijowa ), tego samego dnia w naszym laboratorium miejskim wykonano dwa ekspresowe testy firmy Pharmasco CITO TEST HIV 1/2, oba wyniki są negatywne, asystent laboratoryjny powiedział, że te testy są wiarygodne i nie muszę się martwić, ponieważ dzieje się to w czasie ciąży, a te analizy mogą po prostu zmylić. Lekarz kazał ponownie oddać krew, a ja oddałam swoją krew jeszcze dwa razy do analiz w różnych szpitalach (nadal nie mam żadnego z trzech wyników). Bardzo się martwię, nie jestem narkomanem, nie było wątpliwych związków seksualnych, jeśli choruję bardzo rzadko, inne testy są w normie. Czy można ufać szybkim testom? Czy to naprawdę dzieje się w czasie ciąży? Boleśnie mocno przestraszył mnie lekarz. Dziękuję

Przede wszystkim musisz się uspokoić i nie myśleć o złych rzeczach. Czasami w czasie ciąży wyniki są fałszywie dodatnie. Konieczne jest ponowne oddanie krwi na HIV i oczekiwanie na wyniki badania.

Cześć! Rzecz w tym, że u mnie 2 miesiące temu był kontakt seksualny z dziewczyną (do tej pory się spotykamy). po 1,5 tygodnia temperatura wzrosła do 37,4. wkrótce spał. dla pewności zdaliśmy analizę IF po 2 tygodniach i ponownie po 1,5 miesiąca. Obie odpowiedzi są negatywne. ale nadal mam gorączkę i kaszel ze zmienną poprawą. Czy możesz mi powiedzieć, czy istnieje ryzyko? poza tym długo pracowałam bez dni wolnych a tydzień temu byłam na zwolnieniu lekarskim (orvi). badania krwi i płuc są w porządku. Dziękuję.

Taka temperatura może być związana z chorobą wirusową, organizm jeszcze się nie zregenerował lub przewlekłym przepracowaniem. W przypadku wykluczenia patologii organicznej ogólne badanie krwi i moczu mieści się w normalnym zakresie, a dane z badania fluorograficznego również mieszczą się w normalnym zakresie, wówczas konieczne jest wykluczenie chorób przenoszonych drogą płciową: chlamydii, mykoplazmoza, ureaplasmosis, które mogą powodować stany zapalne narządów miednicy małej i cewki moczowej, aw efekcie wzrost temperatury ciała. Przeczytaj więcej o przyczynach wzrostu temperatury ciała klikając w link: Wysoka temperatura.

Cześć. Jest coś takiego - Ponad rok temu doszło do kontaktu seksualnego bez zabezpieczenia z chodzącą dziewczyną. Zapewniała, że ​​na nic nie choruje, ale nie mogę jej w 100 procentach uwierzyć. Zapewniła też, że przed podjęciem pracy przeszła badania lekarskie (pracowała jako sprzedawca) i wszystko jest w porządku. Po 7 miesiącach od kontaktu nadal zdałem test na obecność wirusa HIV w laboratorium citylab - wynik był negatywny. Ale ostatnio często zacząłem chorować - od 3 tygodni boli mnie gardło na czerwono i nie mogę tego wyleczyć. Znowu zaczął się bać, ale nagle to złapał? Powiedzcie, czy jest to możliwe i czy warto ufać analizom z citylab? Boję się znowu poddać, nerwy tego nie wytrzymają..

W przypadku, gdy wynik jest negatywny, najprawdopodobniej nie jesteś chory i nie jesteś zarażony wirusem HIV / AIDS. Jednak w celu wyjaśnienia diagnozy zaleca się ponowną analizę w wyspecjalizowanych laboratoriach instytucji państwowych, badanie to przeprowadzane jest anonimowo. W przypadku, gdy samodzielne leczenie nie przyniesie pożądanego rezultatu, zaleca się konsultację z otolaryngologiem w celu przeprowadzenia odpowiedniego badania i przepisania odpowiedniego leczenia. Przeczytaj więcej o testach na obecność wirusa HIV w serii artykułów, klikając łącze: HIV.

Powiedz mi, czy możesz podać jakiś opis laboratorium citylab? Mimo to nie zawsze można przejść analizę w instytucji państwowej. A jaka jest procentowa szansa, że ​​mężczyzna zarazi się przez kontakt bez zabezpieczenia?

Niestety nie dokonujemy oceny porównawczej laboratoriów i prywatnych placówek medycznych. W przypadku wątpliwości co do wiarygodności wyników, należy przeprowadzić badanie w innym ośrodku i najpierw zapytać o koncesję na świadczenie tych usług medycznych, czy ten ośrodek ma prawo przeprowadzać to badanie i czy wszystko jest zgodne z przyjętymi standardami. Ryzyko zakażenia jest takie samo dla obu płci poprzez stosunek płciowy bez zabezpieczenia. Przeczytaj więcej o testach na obecność wirusa HIV w serii artykułów, klikając łącze: HIV.

Dzień dobry 8-miesięczne dziecko zostało przebadane na obecność wirusa HIV metodą ELISA, we krwi stwierdzono gp160+ i p25+, reszta to wszystko minus, wniosek IB jest wątpliwy. Sądząc po tych analizach, okazuje się, że dziecko jest +? gp160 + gp110/120 - p68 - p55 - p52 - gp41 - p34 - p25 + p18 -

Niestety na podstawie uzyskanych danych niemożliwe jest postawienie diagnozy ze 100-procentowym prawdopodobieństwem, ponieważ nie wyklucza się wyniku fałszywie dodatniego. Aby postawić trafną diagnozę, będziesz musiał przejść szereg badań, w tym powtórzyć tę analizę za pomocą testu ELISA, a także przejść analizę metodą PCR. Następnie należy skontaktować się ze specjalistyczną placówką medyczną, w której specjalista chorób zakaźnych będzie mógł ocenić wyniki w kompleksie. Możesz dowiedzieć się więcej o przejawach zakażenia wirusem HIV w sekcji tematycznej naszej witryny, klikając link: HIV

Czy może wykazać fałszywie dodatni wynik w przypadku „ARI” lub bardziej ostrych chorób zakaźnych? Gdzieś przeczytałem, że przy 58 chorobach lub nawet wyższych może pokazać „+”, w tym szczepienie przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B, jeśli cierpią nerki itp.?

Istnieje możliwość uzyskania wyniku fałszywie dodatniego, dlatego zalecam wykonanie następujących czynności: ponowną analizę - metodą ELISA i PCR, a następnie ponowną wizytę u specjalisty chorób zakaźnych. Więcej o diagnostyce zakażenia wirusem HIV dowiesz się w dziale tematycznym: HIV

Dzień dobry Immunoblot nieokreślony z powodu białka p25. Jakie jest prawdopodobieństwo zakażenia wirusem HIV?

W tej sytuacji konieczne jest dokładne przestudiowanie protokołów badań w połączeniu z innymi wskaźnikami, ponieważ nie jest możliwe poczynienie założeń na podstawie tych danych. Przypuszczalnie wynik można uznać za wątpliwy i wymagane jest ponowne badanie po 3 miesiącach. Przeczytaj więcej w sekcji naszej witryny: HIV

Dzień dobry.
Czy możesz skomentować test ELISA na HIV
1 surowica +3,559 k=13,3
+2,121k=4,9
str. 24 neg
Surowica 2 +3,696 k=13,9
+2,477k=5,7

W takim przypadku nie można wykluczyć wyniku fałszywie dodatniego, biorąc pod uwagę, że metoda ELISA jest metodą pośrednią, dlatego zalecam wykonanie analizy przy użyciu innej, bardziej czułej metody - immunoblottingu. Więcej szczegółowych informacji na ten temat można znaleźć w odpowiedniej sekcji naszej witryny internetowej, klikając następujący link: HIV

Dzień dobry, powiedz mi, co włączyć? Rok temu, planując dziecko, zrobiliśmy z mężem wszystkie badania, w tym na obecność wirusa HIV (podeszli do tego bardzo poważnie i prawidłowo), zostałam przebadana w Kr.AIDS w Kijowie. Po przejściu analizy w Ośrodku, dla mnie również odpowiedź była negatywna. Teraz jestem w pozycji w 14 tygodniu, tj. Rejestruję się, przechodzę wszystkie testy i znowu odpowiedź wróciła, test na HIV był nieokreślony, zdałam ponownie w przychodni i zdałam ekspresowy test na uspokojenie w Dovir, ale mnie nie uspokoili , ekspresowy test dał wynik pozytywny (drugi pasek był mniej wyraźny), zaraz po całej tej procedurze, nie tracąc czasu, zgłosiłem się do Centrum ds. AIDS i również przeszedłem analizę, czekam na wynik. (nie mogę się uspokoić) Proszę mi powiedzieć, na ile można ufać ekspresowym testom i dlaczego za pierwszym razem nie ma odpowiedzi na test na obecność wirusa HIV? (ja i ​​mój mąż prowadzimy zdrowy tryb życia i kochamy się). Dziękuję.

Nie panikuj zawczasu – ekspresowa diagnostyka nie jest podstawą do postawienia diagnozy HIV, pozwala zidentyfikować grupy pacjentów, którzy wymagają bardziej dogłębnych badań. W takich sytuacjach wskazane jest wykonanie blottingu immunologicznego i osobista konsultacja z lekarzem chorób zakaźnych. Bardziej szczegółowe informacje na ten temat można znaleźć w sekcji tematycznej naszej witryny, klikając następujący link: HIV. Możesz również uzyskać dodatkowe informacje w następującym dziale naszej witryny: Diagnostyka laboratoryjna

Witam byłam w chorobie zakaźnej dopiero dzisiaj zostałam wypisana jak wyszłam lekarz zadzwonił do mnie i wyjaśnił że mam ifa dodatnie najpierw jak poszłam do szpitala to było ujemne a potem jak zrobiłam powtórkę to wyszło pozytywnie , wysłali sokolnikom na górze badanie immunoblot, powiedzieli, że będzie gotowe w przyszłym tygodniu, byłem w szpitalu z bólem gardła i wirusami paragrypy, przybywam w stanie szoku, nadal nie rozumiem, jak zważcie na to, sporządzono również wyciąg dla mojej kliniki wskazujący, że jeśli znaleziono i niżej, że immunoblot działał, jeśli jutro zostanę wypisany w waszej klinice, to wszystko będzie wskazane w tym wyciągu, jak prawdopodobne jest HIV? czy to możliwe, że w związku z tym, że byłem leczony na ból gardła wirusem paragrypy, pokażę pozytywne wyniki dla ifa?

Prawdopodobieństwo wyniku fałszywie dodatniego jest bardzo wysokie. Obecność jednego pozytywnego wyniku nie daje jeszcze podstaw do postawienia diagnozy HIV, dlatego zalecamy poczekać na wynik immunoblottingu, a następnie osobiście skonsultować się ze specjalistą chorób zakaźnych w celu dalszego badania i obserwacji. Angina, paragrypa i inne przeziębienia nie wpływają znacząco na wyniki analizy.

chce mi się wierzyć, ale pod koniec sierpnia źle się poczułam, temperatura mi wzrosła 37,5-38 miałam luźne stolce jakieś 4 dni, to było na wakacjach gdzie było dużo dyskotek, piłam wodę z kranu jak wielu inne, bo to było bardzo drogie, szklanka wody kosztowała 300 rubli, luźne stolce z taką temperaturą kojarzyły mi się z jakąś infekcją jelitową złapaną w wodzie, nie pamiętam dokładnie, ale była też mała wysypka w górną część ciała, kiedy wróciłem do domu z temperaturą, zadzwoniłem do lekarza, ona napisała infekcję rotawirusową, po 5 dniach choroby, zgłosiłem się na ochotnika, aby go zostawić i iść do pracy, gdzie kilka dni później zachorowałem na zapalenie zatok (w tym czasie okres czasu musiałem być na ulicy) skojarzyłem to, że duży spadek temperatury od wakacji i zatrucia obniżyły moją odporność i w związku z tym znowu się przeziębiłem z zapaleniem zatok, w sumie to znowu zwolnienie lekarskie, na kierunku Laura Klacid cf 500 piłem 10 dni, przeszło, wróciłem do pracy po 3 tygodniach byłem w delegacji do arch kraj przez 3 dni. klimatyzatory w transporcie i hotelu były bezlitosne i po powrocie do domu w samolocie miałem już temperaturę 39,5. tu byłem w domu z temperaturą 40, wezwałem lekarza do domu, napisałem orvi i powiedziałem, że moja gardło było bardzo zaczerwienione, miałem chroniczne zapalenie migdałków i powiedziałem to Laurze, ona sama napisała, żeby wypić antybiotyk Levolet r. wezwał karetkę, ponieważ miała gorączkę, a tempo wynosiło 40 i nie zmniejszało się, nie zaproponowano hospitalizacji, następna dzień ta sama historia - karetka dała zastrzyk przeciwgorączkowy i odjechała.Za trzecim razem nalegałem na hospitalizację, ledwo zawieźli mnie do szpitala zakaźnego, gdzie wykryto mieszaną infekcję paragrypy i adenowirusa, ale po wypisie lekarz - ordynator oddziału powiedział, że mam pozytywny HIV ifa i że zrobili to dwa razy, jestem w szoku, nie wiem co robić, nie mogę jeść i pić. powiedziała, że ​​mam stwierdzono ostrą infekcję wirusem HIV i w celu weryfikacji wysłali analizę mojej krwi na immunoblot do centrum AIDS,
teraz, rysując analogię zdarzeń, które mi się ostatnio przytrafiły, a także 3 arkusze zwolnień lekarskich pod rząd, przymierzyłem wszystkie objawy i jestem przerażony tym, co może być, po wypisaniu tego samego dnia, poszłam zrobić analizę in vitro na zwierzętach i następnego dnia wynik dla ifa był taki sam +
Przepraszam za tak szczegółowe informacje, ale jestem zmieciony i zabity, piję silne środki uspokajające i nie mam apetytu i praktycznie nie jem, bardzo schudłem
Mam też takie pytanie że lekarz wypisem ze szpitala wskazał wynik HIV wg ifa a poniżej że immunoblot działa ale jak tylko zamknę bl w mojej przychodni na miejscu to wszystko będzie być tam napisane. co mam zrobić? to już nie będzie poufne. Prosiłam panią doktor, aby nie pisała tej analizy w wyciągu, na co mi odmówiła, w jakim stopniu moje prawa do nieujawniania informacji są tu respektowane.

Niestety wyniki badań przeprowadzonych w szpitalu pasują do wyciągu, gdyż lekarz okręgowy prowadzący musi mieć pełną informację o Twoim stanie zdrowia. W tej sytuacji nie mówimy o ujawnieniu informacji, ponieważ są one przekazywane tylko innemu lekarzowi prowadzącemu, który będzie Cię dalej obserwował.

Cześć! Zrobiłam testy na HIV, bo potrzebowałam zaświadczenia do FMS, nie dawali testów przez kilka tygodni, potem zaprosili mnie do głowy i dali mi wynik pozytywny, wzięli kupę kwitów i wysłali ich do regionalnego centrum ds. AIDS w celu dalszego zbadania, jak jest napisane na zaświadczeniu. Chcę zdać w innej przychodni, a potem iść do regionalnej, czy jest sens powtarzać? Nie rozumiem tylko, dlaczego tak długo ich nie oddawali, ale lekarz powiedział, że podobno zrobili jakąś analizę i jestem im winien kolejne 4 tysiące rubli, bo gdyby to zrobili, pewnie daliby szczegółowe informację o chorobie oprócz zaświadczenia?

W takiej sytuacji nie należy przedwcześnie wpadać w panikę – uzyskanie jednego wyniku dodatniego nie pozwala jeszcze na wiarygodną ocenę ewentualnej infekcji, gdyż wyniki fałszywie dodatnie nie są wykluczone. Zalecamy ponowne wykonanie testu, a jeśli wynik będzie pozytywny, konieczne będzie poddanie się kolejnemu badaniu - immunoblottingowi. Z reguły laboratorium nie podaje szczegółowych informacji o wynikach, co jest normalną i powszechną praktyką. Na wszystkie pytania odpowie lekarz prowadzący po badaniu podczas osobistej konsultacji.

Zapomniałem dodać, że od początku czerwca do połowy września robiłem sobie kurs sterydów anabolicznych, a mianowicie sustanon 250 to mieszanka testosteronów i stanozololu z primabolanem, chciałem się przygotować do lata i wakacji, czy mogą obniżyć moją odporność i wszystko, co mi się przydarzyło.

Zaburzenia immunologiczne, a także obecność chorób autoimmunologicznych, mogą dawać fałszywie dodatnie wyniki testu na obecność wirusa HIV. Dlatego w przypadku uzyskania 2 pozytywnych wyników w teście ELISA zalecany jest immunoblotting, który pozwoli precyzyjnie odpowiedzieć na pytanie, czy doszło do zakażenia, czy też nie.

co oznacza obecność chorób autoimmunologicznych, czym one są?
ogólnie mogę powiedzieć, że dość często chorowałem od wczesnego dzieciństwa i jeszcze parę 3 lat temu prosiłem lekarza prowadzącego, żeby zadbał o moją odporność, bo byłem ciągle zmęczony i często chorowałem, głównie ucho, gardło, nos , ale cały czas były wyniki ujemne na HIV, oddawałem je z wystarczającą łatwością, bez wahania.

Fałszywie dodatni wynik testu na obecność wirusa HIV może być po niedawnej infekcji wirusowej, szczepieniu przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B, gruźlicy, zapaleniu wątroby, opryszczce, a także na tle chorób autoimmunologicznych, takich jak: reumatoidalne zapalenie stawów, toczeń rumieniowaty układowy, zapalenie skórno-mięśniowe, twardzina skóry, choroby tkanki łącznej itp.

dodam do pytania, przyszedł mój immunoblot, był negatywny, ale lekarz powiedział, że skoro były dwa if + jak byłam na oddziale zakaźnym, to jeszcze muszę powtórzyć analizę, ale trochę później

W takim przypadku taktyka medyczna jest uzasadniona - zalecamy ponowne wykonanie immunoblotu za 1,5-2 miesiące.

Jakie jest prawdopodobieństwo: 2 ifa + różnica między próbkami krwi około 2 dni, immunoblot - ; przebywał w szpitalu zakaźnym z zakażeniem adenowirusem i paragrypą, gdzie pobrano krew, immunoblot wysłano do centrum AIDS

Dzień dobry Zarejestrowałem się w LCD, przeszedłem wszystkie badania, lekarz mówi, że mam opryszczkę we krwi, potem dzwonią z centrum AIDS i mówią, że muszę to powtórzyć, złożyłem wniosek i mówią mi, że mam HIV pozytywny, w panice pojechałam z mężem założyć drugie miałam też ifa i immunoblot + mąż miał analizę, oddałam ponownie po miesiącu. Mam + mojego męża - teraz jestem w 23 tygodniu ciąży!

W tej sytuacji niestety istnieje możliwość zakażenia wirusem HIV, ale nie można postawić ostatecznej diagnozy nawet przy dodatnim immunoblocie, biorąc pod uwagę stan ciąży. W takiej sytuacji wymagane jest wykluczenie wyników fałszywie dodatnich, dlatego zalecamy ponowne wykonanie testu i osobistą konsultację ze specjalistą chorób zakaźnych.

jeśli immunoblot wykazał pozytywny wynik w kierunku HIV, a badanie przesiewowe jest negatywne, któremu wynikowi należy zaufać?

Immunoblot jest dokładniejszym badaniem, dlatego w tym badaniu w przypadku uzyskania pozytywnego wyniku wymagane jest kontynuowanie badania i osobista wizyta u specjalisty chorób zakaźnych.

Co to jest - immunoblot? Jest to powszechna metoda laboratoryjnej diagnostyki infekcji wirusowych u ludzi. Jest uważany za jeden z najdokładniejszych i najbardziej niezawodnych sposobów wykrywania obecności wirusa HIV. W swojej niezawodności przewyższa nawet wyniki immunoblotu, które są uważane za niepodważalne i ostateczne.

informacje ogólne

Immunoblot – co to jest? Aby rozpoznać zakażenie wirusem HIV u osoby, konieczne jest poddanie się badaniu laboratoryjnemu surowicy krwi na obecność przeciwciał. Technika Western blot jest również nazywana Western blot. Służy do wykrywania ludzkich infekcji wirusowych jako dodatkowa metoda ekspercka. Konieczne jest potwierdzenie testu ELISA – testu laboratoryjnego, który pozwala na stwierdzenie obecności przeciwciał HIV we krwi. Pozytywny wynik testu ELISA jest ponownie sprawdzany przez immunoblotting. Jest uważany za najbardziej wrażliwy, złożony i kosztowny.

zamiar

Co to jest - immunoblot? Jest to technika laboratoryjnego badania surowicy krwi na obecność przeciwciał przeciwko wirusowi. Podczas badania specjalista dokonuje wstępnej separacji białek wirusa w żelu i przenosi je na membranę nitrocelulozową. Procedura immunoblottingu ma na celu określenie HIV na różnych etapach. W pierwszym etapie oczyszczony wirus z jego części składowych poddawany jest elektroforezie, a antygeny tworzące jego skład są rozdzielane według masy cząsteczkowej.

Rozmnaża się w żywej komórce, osadzając w niej swoją informację genetyczną. Na tym etapie osoba staje się nosicielem wirusa HIV, jeśli została zarażona. Specyfika choroby polega na tym, że może nie objawiać się przez długi czas. Wirus niszczy limfocyty, więc ludzka odporność jest obniżona, a organizm nie jest w stanie oprzeć się infekcjom. Jeśli HIV zostanie leczony kompetentnie i na czas, pacjent dożyje sędziwego wieku. Brak terapii nieuchronnie prowadzi do śmierci. Od momentu zakażenia, ale bez leczenia, maksymalna długość życia wynosi nie więcej niż dziesięć lat.

Osobliwości

Analiza immunoblot to niezawodna metoda, która pozwala określić obecność przeciwciał przeciwko antygenom HIV pierwszego i drugiego typu. Jeśli dana osoba jest zarażona, przeciwciała pojawiają się w ciągu dwóch tygodni, co można wykryć znacznie później. Osobliwością wirusa HIV jest to, że liczba przeciwciał szybko wzrasta i pozostaje we krwi pacjenta. Nawet jeśli są obecne, choroba może nie objawiać się przez dwa lub więcej lat. Metoda ELISA nie zawsze dokładnie określa obecność choroby, dlatego w przypadku pozytywnego wyniku testu immunoenzymatycznego wymagane jest potwierdzenie wyników metodą immunoblottingu i PCR.

Wskazania do wizyty

Czym jest ten „immunoblot”, już ustalono, ale komu przepisano to badanie? Powodem podjęcia badań metodą immunoblottingu jest pozytywny wynik testu ELISA. Konieczne jest wykonanie testu immunoenzymatycznego dla pacjentów, którzy będą operowani. Ponadto należy przeprowadzić analizę dla kobiet planujących ciążę, a także dla wszystkich osób uprawiających rozwiązłość seksualną. Przydziel immunoblotting pacjentom z HIV, jeśli wyniki testu ELISA są wątpliwe. Następujące niepokojące objawy mogą być powodem pójścia do lekarza:

• ostra utrata masy ciała;
• słabość, utrata zdolności do pracy;
• zaburzenie jelit (biegunka), które trwa przez trzy tygodnie;
• odwodnienie organizmu;
• gorączka;
• obrzęk węzłów chłonnych w ciele;
• rozwój kandydozy, gruźlicy, zapalenia płuc, toksoplazmozy, zaostrzenia opryszczki.

Pacjent nie musi się przygotowywać przed oddaniem krwi żylnej. 8-10 godzin przed badaniem nie możesz jeść. Nie zaleca się picia napojów alkoholowych i kawowych, wykonywania ciężkich ćwiczeń fizycznych, przeżywania podniecenia na dzień przed oddaniem krwi.

Gdzie wykonać analizę?

Gdzie mogę zrobić test na obecność wirusa HIV? Badania ELISA, immunoblot są przeprowadzane w prywatnych klinikach miejskich, wyniki są wydawane w ciągu jednego dnia. Możliwa jest również natychmiastowa diagnoza. W państwowych placówkach medycznych testy ELISA i immunoblotting są przeprowadzane bezpłatnie, zgodnie z ustawodawstwem Federacji Rosyjskiej. Kobiety w ciąży, a także pacjenci, którzy mają być hospitalizowani lub poddani operacji, są zobowiązani do przebadania się w kierunku chorób zakaźnych.

Jak przebiega badanie?

Jak przeprowadza się test ELISA? Immunoblot pozytywny/negatywny potwierdza lub odrzuca wyniki testu immunoenzymatycznego. Procedura badania jest dość prosta. Specjalista przeprowadza pobieranie krwi żylnej, w czasie zajmuje to nie więcej niż pięć minut. Po pobraniu próbki miejsce wstrzyknięcia należy zdezynfekować i zakleić plastrem. Pobieranie próbki odbywa się na czczo, więc po zabiegu nie zaszkodzi zjeść tabliczkę gorzkiej czekolady lub napić się słodkiego gorącego napoju.

Aby otrzymać skierowanie na bezpłatne badanie w publicznej placówce medycznej, należy udać się do lekarza pierwszego kontaktu. Zasadniczo immunoblot nie różni się od innych badań krwi sposobem pobierania próbek. Metodologia badań jest prosta. Jeśli wirus jest obecny we krwi człowieka, organizm zaczyna wytwarzać przeciwciała, aby go zniszczyć. Każdy wirus ma swój własny zestaw białek antygenowych. Wykrywanie tych przeciwciał jest podstawą techniki Western blotting.

Cena

Ile kosztuje analiza? Immunoblot na HIV nie dotyczy tanich badań. Średnio badanie przesiewowe za pomocą enzymatycznego testu immunologicznego kosztuje od 500 do 900 rubli. Immunoblotting to badanie weryfikacyjne, którego koszt wynosi od trzech do pięciu tysięcy rubli. Bardziej złożone metody są znacznie droższe. Na przykład będziesz musiał zapłacić za to około 12 000 rubli.

Interpretacja wyniku

Najczęstszymi metodami diagnozowania zakażenia wirusem HIV są testy immunoenzymatyczne i immunoblot. Służą do oznaczania przeciwciał w surowicy przeciwko wirusowi niedoboru odporności. Obecność zakażenia zwykle potwierdza się dwoma testami: przesiewowym i potwierdzającym. Interpretacji wyników badania powinien dokonać lekarz, on również stawia diagnozę i przepisuje leczenie. Jeśli immunoblot jest pozytywny, oznacza to, że wirus jest obecny w ludzkim ciele.

Dodatni wynik nie powinien być powodem do samodzielnego leczenia, ponieważ każdy pacjent może mieć swój własny obraz choroby. Analiza jakościowa obejmuje selekcję i weryfikację. Jeśli pacjent nie ma wirusa, wynik jest oznaczony jako „negatywny”. W przypadku wykrycia metodą przesiewową przeprowadzane jest dodatkowe badanie weryfikacyjne. Immunoblot to analiza, która potwierdza lub odrzuca badanie przesiewowe. Jeśli na pasku testowym pojawi się ciemnienie w niektórych obszarach (miejscach lokalizacji białka), stawia się diagnozę HIV. Jeśli wyniki są wątpliwe, badania przeprowadza się w ciągu trzech miesięcy.

Możesz zapobiec zakażeniu wirusem niedoboru odporności, przestrzegając pewnych zasad: unikaj przypadkowego seksu, używaj prezerwatywy podczas kontaktów, nie bierz narkotyków. Jeśli choroba zostanie wykryta u kobiety w ciąży, ważne jest, aby ściśle przestrzegać zaleceń lekarza prowadzącego, nie zapomnij poddać się badaniom na obecność wirusa.

IMMUNOBLOT(western blot) - metoda laboratoryjnego badania surowicy krwi na obecność przeciwciał przeciwko HIV; jest to dokładniejszy test niż test ELISA i służy do potwierdzania wyników testu ELISA. ELISA - test immunoenzymatyczny (ELISA) - test laboratoryjny, który pozwala określić obecność przeciwciał HIV we krwi; Test na przeciwciała HIV.

Zgodnie z zaleceniami WHO immunoblotting (western blot) jest stosowany w diagnostyce zakażenia wirusem HIV jako dodatkowa metoda ekspercka, która powinna potwierdzać wyniki testu ELISA. Ta metoda jest zwykle używana do podwójnego sprawdzenia pozytywnego wyniku testu ELISA, ponieważ jest uważana za bardziej czułą i specyficzną, chociaż bardziej złożoną i kosztowną.

Immunoblotting łączy test immunoenzymatyczny (ELISA) ze wstępną elektroforetyczną separacją białek wirusowych w żelu i przeniesieniem ich na membranę nitrocelulozową. Procedura immunoblot składa się z kilku etapów (). Po pierwsze, wstępnie oczyszczony i rozbity na składniki, HIV jest poddawany elektroforezie, podczas gdy wszystkie antygeny tworzące wirusa są rozdzielane według masy cząsteczkowej. Następnie, metodą blottingu, antygeny są przenoszone z żelu na pasek nitrocelulozy lub filtr nylonowy, który zawiera teraz niewidoczne dla oka spektrum białek charakterystycznych dla wirusa HIV. Następnie na pasek nakładany jest materiał testowy (surowica, osocze pacjenta itp.), a jeśli w próbce znajdują się swoiste przeciwciała, wiążą się one z paskami ściśle odpowiadających im białek antygenu. W wyniku kolejnych manipulacji (np. ELISA) wynik tej interakcji zostaje zwizualizowany – uwidoczniony. Obecność pasków w niektórych obszarach paska potwierdza obecność w badanej surowicy przeciwciał przeciwko ściśle określonym antygenom HIV.

Immunoblotting jest najczęściej stosowany w celu potwierdzenia rozpoznania zakażenia wirusem HIV. WHO uznaje surowice za dodatnie, jeśli metodą immunoblottingu zostaną wykryte przeciwciała przeciwko dowolnym dwóm białkom otoczki wirusa HIV. Zgodnie z tymi zaleceniami, jeśli dojdzie do reakcji tylko z jednym z białek otoczki (gp160, gp120, gp41) w połączeniu z lub bez reakcji z innymi białkami, wynik uważa się za wątpliwy i zaleca się drugie badanie z użyciem zestawu firmy innej serii lub innej firmy. Jeśli po tym czasie wynik pozostaje wątpliwy, badania są kontynuowane co 3 miesiące.

W przypadku immunoblottingu w pierwszym etapie białka zawarte w surowicy krwi są rozdzielane w żelu według ich masy cząsteczkowej i ładunku za pomocą pola elektrycznego (metoda elektroforezy żelowej). Następnie na żel nakłada się membranę nitrocelulozową lub nylonową i „zwilża” (jest to blotting). Odbywa się to w specjalnej komorze, która umożliwia całkowite przeniesienie materiału z żelu na membranę. W rezultacie wzór ułożenia białek, który znajdował się na żelu, jest odtwarzany na membranie (blot), którą następnie można łatwo manipulować. Początkowo membranę traktuje się przeciwciałami skierowanymi przeciwko żądanemu antygenowi, a po wypłukaniu niezwiązanego materiału dodaje się znakowany radioaktywnie koniugat, który specyficznie wiąże się z przeciwciałami (jak w teście ELISA). Umiejscowienie powstałego kompleksu koniugatu znakowanego antygen-przeciwciało określa się przez autoradiografię z użyciem kliszy rentgenowskiej. Po jego manifestacji wszystko staje się jasne, czy we krwi są antygeny, czy nie.

Immunoblotting -(z angielskiego „blot” – spot) – metoda identyfikacji antygenów (lub przeciwciał) przy użyciu znanych surowic (lub antygenów). Jest połączeniem elektroforezy żelowej z testem ELISA. Początkowo komórki lub wiriony bakteryjne są niszczone za pomocą ultradźwięków, a następnie wszystkie antygeny wirusa lub komórki bakteryjne są rozdzielane za pomocą elektroforezy i uzyskiwany jest komercyjny odczynnik na specjalnej błonie nitrocelulozowej. Podczas ustawiania immunoblottingu surowica testowa pacjenta jest nakładana na film ze znanymi antygenami. Po inkubacji i wypłukaniu niezwiązanych przeciwciał przechodzą do testu ELISA - na kliszę nakładana jest antyserum skierowane na immunoglobuliny ludzkie znakowane enzymem oraz substrat chromogenny zmieniający kolor pod wpływem interakcji z enzymem. W obecności kompleksów antygen-przeciwciało-surowica odpornościowa wobec immunoglobuliny-enzymu na nośniku pojawiają się kolorowe plamki. Metoda immunoblottingu umożliwia oddzielne wykrywanie przeciwciał przeciwko różnym antygenom patogenu (na przykład w zakażeniu wirusem HIV immunoblotting wykrywa przeciwciała przeciwko gp120, gp24 i innym antygenom wirusa).

Test radioimmunologiczny (RIA)

Metoda opiera się na reakcji antygen-przeciwciało z użyciem znakowanego antygenu lub przeciwciała z radionuklidem. Jako znacznik stosuje się 125I, 14C, 3H, 51Cr i inne radionuklidy. Powstałe kompleksy immunologiczne są izolowane z układu, a ich radioaktywność oznaczana jest na licznikach (promieniowanie β). Intensywność promieniowania jest wprost proporcjonalna do liczby związanych cząsteczek antygenu i przeciwciała.

Szeroko stosowana jest wersja RIA na fazie stałej, wykorzystująca znakowane przeciwciała lub antygeny zaadsorbowane w dołkach płyt styropianowych.

RIA służy do wykrywania antygenów drobnoustrojów, wirusów, różnych hormonów, enzymów, substancji leczniczych, immunoglobulin, a także innych substancji zawartych w materiale testowym w niewielkich stężeniach 10–12–10–15 g/l.

Pytania kontrolne

Reakcja bakteriolizy immunologicznej: jaki to rodzaj reakcji; co to jest antygen, co to jest przeciwciało, mechanizm reakcji, metody wiązania, praktyczne zastosowanie. Reakcja hemolizy immunologicznej: niezbędne składniki, sposób wiązania; sterowanie, praktyczne zastosowanie. Reakcja miejscowej hemolizy w żelu (reakcja Yerne'a): zasada reakcji, sposób formułowania, zastosowanie praktyczne. Reakcja wiązania dopełniacza: zasada reakcji; co powstaje, gdy surowica odpornościowa oddziałuje z określonym antygenem; co dzieje się z dopełnieniem, jeśli jest obecne w tej interakcji? Jaki jest los dopełniacza, jeśli nie ma swoistego powinowactwa między antygenem a przeciwciałami? Jakiej reakcji można użyć do określenia, co stało się z dopełniaczem; dlaczego stosuje się tę reakcję; jaki jest widoczny pozytywny wynik RSK? Dlaczego? Jaka właściwość dopełniacza jest wykorzystywana w pierwszej fazie CSC? W drugiej fazie? Jeśli końcowym wynikiem RSK jest hemoliza, czy oznacza to wynik pozytywny czy negatywny? Wyjaśnij wyniki: RSK+ + + +, RSK+ + +, RSK+ +, RSK+. Wymień składniki pierwszego systemu RSK i składniki drugiego systemu RSK. Dlaczego surowica testowa musi być inaktywowana? Jak miareczkowany jest dopełniacz? Surowica hemolityczna: co zawiera, jak się ją otrzymuje, co to jest miano i jak się je określa? Z jakich zwierząt pozyskiwane są komponenty RSC? Technika ustawiania RSC na zimno. Podczas inscenizacji której z poniższych reakcji konieczny jest udział dopełniacza: wytrącanie, flokulacja, aglutynacja, wykrywanie niekompletnych przeciwciał, bakterioliza immunologiczna, hemoliza immunologiczna, Jerne, CSC? Reakcja immunofluorescencyjna (RIF) - wskazuje sekwencję zdarzeń w bezpośredniej reakcji Coonsa; niezbędne składniki. Co to jest antygen, co to jest przeciwciało, jak znakuje się przeciwciała, jak bierze się pod uwagę wynik reakcji, jak wygląda wynik dodatni? Praktyczne zastosowanie - co można określić za pomocą tej reakcji? Pośrednia reakcja immunofluorescencji - wskazać kolejność zdarzeń w tej reakcji, niezbędne składniki, jaki jest antygen, jakie surowice odpornościowe są użyte; praktyczne użycie; przewaga pośredniego RIF nad bezpośrednią reakcją. Test immunoenzymatyczny (ELISA) - zasada działania reakcji; niezbędne składniki; wskazać kolejność zdarzeń przy ustalaniu reakcji w celu wykrycia antygenu w materiale testowym; niezbędne składniki; co się dzieje z wynikiem pozytywnym, jak to wygląda? Określ kolejność czynności podczas testu ELISA w celu wykrycia przeciwciał w surowicy testowej; niezbędne składniki; co się dzieje z wynikiem pozytywnym? Immunoblotting - zasada reakcji; główne sceny; niezbędne składniki; W jaki sposób wynik jest brany pod uwagę? korzyści z reakcji. Test radioimmunologiczny (RIA) - jakie są główne etapy reakcji; czym znakowane są przeciwciała lub antygeny, w jaki sposób wynik jest brany pod uwagę? Mikroskopia immunoelektronowa - zasada metody; główne sceny; niezbędne składniki; Czym są znakowane przeciwciała? w jaki sposób wynik reakcji jest brany pod uwagę. Reakcje immobilizacji - zasada metody, technika wiązania, składowe, rozliczanie wyników.

Zadania do wykonania w procesie samokształcenia.

Wypełnij tabelę Reakcje odpornościowe dla reakcji omówionych w tym temacie.

Reakcje immunologiczne

Praca ucznia na lekcji praktycznej

Natychmiast rozpocznij pracę od sformułowania pierwszej fazy RSC, ale później zapisz to w zeszycie (patrz poniżej).

1. Reakcja hemolizy immunologicznej. Obejrzyj demonstracyjną reakcję hemolizy immunologicznej, narysuj ją w postaci diagramu, wyjaśnij wynik w probówkach doświadczalnych i kontrolnych.

2. Reakcja wiązania dopełniacza

a) zdemontować RSC zgodnie z tabelą;

b) narysuj w zeszycie schemat ustawiania RSC w formie tabeli;

c) umieścić drugą fazę RSK (pierwsza faza jest umieszczona na początku lekcji);

d) zdemontować preparaty diagnostyczne niezbędne do RSK;

e) wziąć pod uwagę wynik. Sformułuj wniosek o obecności swoistych przeciwciał w badanej surowicy.

3. Reakcja immunofluorescencyjna. Przestudiuj tabelę, opracuj schemat konfiguracji reakcji w zeszycie; patrz surowice diagnostyczne; określić, co zawiera surowica, jak jest przygotowywana, do jakiej reakcji (bezpośredniej lub pośredniej RIF) jest używana. Spójrz na wynik demonstracji RIF w mikroskopie fluorescencyjnym.

4. Test immunoenzymatyczny (ELISA). W zeszycie sporządź schemat reakcji w dwóch wersjach: na wykrycie antygenu w materiale testowym i na wykrycie przeciwciał w surowicy. Przejrzyj zestaw składników do diagnostyki HIV i wirusowego zapalenia wątroby typu B. Określ, co zawiera każdy składnik i do czego jest używany.

5. Immunoblotting. Zrób diagram reakcji w zeszycie; zobacz demo - wynik reakcji.

6. Test radioimmunologiczny (RIA). Narysuj schemat reakcji w zeszycie.

7. Immunologiczna mikroskopia elektronowa (IEM). Obejrzyj pokaz - wynik reakcji, sporządź schemat reakcji w zeszycie, wskaż antygen (wirus) i oznacz strzałkami przeciwciała.

Immunoblotting to wysoce czuła metoda wykrywania białek oparta na połączeniu elektroforezy i testu ELISA lub RIA. Immunoblotting jest metodą diagnostyczną zakażenia wirusem HIV itp.

W ogólnym sensie immunoblotting jest rozumiany jako analiza mieszaniny białek przeniesionych na stałą błonę nośną, z którą wiążą się wiązaniami kowalencyjnymi, po czym następuje immunodetekcja.

Możliwa jest analiza mieszaniny białek osadzonych bezpośrednio na podłożu (analiza dot blot) lub po jej wstępnym frakcjonowaniu poprzez elektroogniskowanie, elektroforezę dyskową lub elektroforezę dwuwymiarową (Western blotting).

Antygeny patogenów są oddzielane za pomocą elektroforezy w żelu poliakryloamidowym, następnie przenoszone z żelu na aktywowaną bibułę lub membranę nitrocelulozową i wywoływane metodą ELISA.

Firmy produkują takie paski z „plamami” antygenów. Na te paski nakłada się surowicę pacjenta. . Następnie po inkubacji pacjenta wypłukuje się z niezwiązanych przeciwciał pacjenta i nanosi znakowaną enzymem surowicę przeciwko ludzkim immunoglobulinom. . Powstały na pasku kompleks (antygen + przeciwciało pacjenta + przeciwciało przeciwko ludzkiej Ig) jest wykrywany przez dodanie chromogennego substratu, który zmienia kolor pod wpływem działania enzymu.

Metodologię tę stosuje się również do selekcji klonów bakterii, fagów lub wirusów wykazujących ekspresję produktów sklonowanych docelowych genów.

Transfer białek na membranę odbywa się biernie lub za pomocą aparatury do elektrotransferu. Na efektywność transferu białka na membranę ma wpływ wiele czynników, takich jak masa cząsteczkowa białek, porowatość żelu, czas transferu oraz skład użytego roztworu buforowego (bufor trans).

W zależności od zadań i warunków eksperymentu dobierane są warunki transferu, które zapewniają najlepsze wyniki. Powszechnie stosowane podłoża to nitroceluloza, polifluorek winylidenu (PVDF) lub dodatnio naładowane membrany nylonowe. Nitroceluloza może związać do 80-100 mikrogramów białka na 1 cm2.

Białka niskocząsteczkowe (o masie cząsteczkowej poniżej 20 kDa) mogą być tracone w wyniku wypłukiwania, co umożliwia wstępne badanie polimorfizmu niektórych loci genetycznych na podstawie długości odpowiednich fragmentów restrykcyjnych DNA.

Ponadto, stosując hybrydyzację Southerna, łatwo stwierdzić, czy docelowy gen ma w swojej wewnętrznej części miejsce hydrolizy przez określony enzym restrykcyjny, co pozwala wybrać optymalną strategię klonowania badanego regionu genomu.

Według podobnego schematu cząsteczki RNA można również przenosić z żelu agarozowego na filtr nitrocelulozowy. Ta metoda została nazwana Northern blotting w przeciwieństwie do Southern blotting, ponieważ nazwisko Southern oznacza po angielsku „południowy”.

Przeniesienie na filtry z żelu białkowego nazwano odpowiednio Western blotting. Duże białka (większe niż 100 kDa) zdenaturowane w roztworze dodecylosiarczanu sodu (SDS) mogą być słabo przenoszone na membranę, jeśli w buforze trans obecny jest etanol. Alkohol znacznie poprawia przenoszenie białek z żelu SDS-poliakryloamidowego, ale zwęża pory w żelu, co prowadzi do zatrzymywania dużych białek.

Membrana PVDF jest zoptymalizowana pod kątem immunodetekcji i jest w stanie zatrzymać specyficznie związane białka do 160 µg/cm2 przy bardzo niskim poziomie wiązania nieswoistego.

Immunoblotting

Ważną właściwością tej membrany jest możliwość jej wielokrotnego użytku. Membrany nylonowe Zeta-Probe skutecznie wiążą białka SDS pod nieobecność alkoholu, a wiązanie to jest odporne na kolejne zabiegi. Białka o niskiej masie cząsteczkowej są również skutecznie zatrzymywane. Dzięki wysokiej zdolności wiązania około 480 μg białka na 1 cm2 membrany Zeta-Probe umożliwiają wykrywanie śladowych ilości białka w mieszaninach testowych.

Po unieruchomieniu antygenu na błonie pozostałe miejsca wiązania blokuje się roztworami żelatyny, albuminy surowicy bydlęcej lub odtłuszczonego mleka.

Następnie błonę inkubuje się w roztworze przeciwciał poliklonalnych lub monoklonalnych przeciwko badanemu antygenowi. Po wypłukaniu niezwiązanych przeciwciał membranę inkubuje się w roztworze przeciwciał wtórnych, które są koniugatem enzymów fosfatazy alkalicznej (fosfataza alkaliczna, AP) lub peroksydazy chrzanowej (HRP) z przeciwciałami przeciwgatunkowymi (kozimi przeciwciałami przeciw króliczym, mysim lub ludzkie immunoglobuliny) lub białka A (białko Staphylococcus aureus) lub G (białko Streptococcus sp.) mające wysokie powinowactwo do regionu Fc immunoglobulin.

Wykrywanie utworzonych kompleksów immunologicznych przeprowadza się metodą chemiczną lub chemiluminescencyjną. Substratami reakcji chemicznej przy zastosowaniu koniugatów fosfatazy alkalicznej są 5-bromo-4-chloro-3-indolilofosforan (BCIP) lub błękit tetrazolowy (NBT), a przy zastosowaniu koniugatów peroksydazy chrzanowej - 4-chloro-1-naftol i nadtlenek wodoru.

W wyniku reakcji enzymatycznych na membranie w miejscu lokalizacji kompleksu antygen-przeciwciało powstaje zabarwiony pasek lub plamka.

Czułość tej metody wynosi 100 pg białka przy użyciu koniugatów AP i 100-500 pg przy użyciu koniugatów HRP. Detekcja chemiluminescencyjna kompleksów immunologicznych może wykryć mniej niż 5 pg antygenu. Zasada tej metody polega na tym, że gdy HRP reaguje z nadtlenkiem wodoru i cyklicznym diacylohydrazynoluminolem, emitowane jest światło o długości fali 428 nm, które można zarejestrować na kliszy światłoczułej.

Reakcję immunoblottingu (RI) opracowano na podstawie testu ELISA. Jest to najbardziej specyficzna i czuła metoda analizy immunochemicznej. Immunoblotting (z angielskiego blot - zamoczyć, plamić) łączy ELISA z elektroforezą. Służy do wykrywania nie złożonych przeciwciał przeciwko HIV, ale przeciwciał przeciwko jego poszczególnym białkom strukturalnym (białka-p24, glikoproteiny-gp120, gp 41 itp.). Zapoznaj się z reakcjami ekspertów (potwierdzającymi) w celu rozpoznania zakażenia wirusem HIV.

Reakcja przebiega w kilku etapach:

Wirus jest niszczony na składniki - antygeny (p24, gp120, gp 41 itp.), Które poddaje się elektroforezie w żelu poliakryloamidowym, czyli rozdzielaniu antygenów na frakcje według masy cząsteczkowej.

2. Żel pokrywa się membraną nitrocelulozową i za pomocą elektroforezy przenosi się na nią frakcje antygenu. Nitroceluloza zachowuje się jak bibuła. Membrana jest cięta na paski (paski). Firmy produkują takie paski z „plamami” antygenów.

Immunoblotting – dodatkowa metoda pośrednia

Paski z naniesionymi antygenami HIV zanurza się w surowicy osobnika, a następnie wypłukuje z niezwiązanego materiału.

4. Paski inkubuje się ze znakowaną peroksydazą surowicą antyglobulinową i przemywa.

Dodaje się substrat i odnotowuje liczbę kolorowych frakcji (plam), które odpowiadają strefie lokalizacji kompleksu AG-AT.

Obecność pasków w niektórych obszarach paska potwierdza obecność w badanej surowicy przeciwciał przeciwko ściśle określonym antygenom HIV. Wynik immunoblottingu uważa się za pozytywny, jeśli na błonie widoczne są prążki odpowiadające dwóm z trzech antygenów HIV - p24, gp41 i gp 120 (ryc. 37).

RYSUNKI

WYKAZ WYKORZYSTANEJ LITERATURY

Literatura główna

Mikrobiologia medyczna, wirusologia i immunologia: podręcznik dla studentów medycyny. uniwersytety wyd. 2, poprawione. i dodatkowe — 702 s. wyd. AA Worobyow. M. : MIA, 2012.

2. Mikrobiologia, wirusologia i immunologia: przewodnik po badaniach laboratoryjnych: przewodnik po badaniach / (VB Sboychakov i in.); wyd. V.B.Sboychakova, M.M.Karapats. – M.: GEOTAR-Media, 2014.- 320 s.: il.

3. Mikrobiologia medyczna, immunologia i wirusologia [Zasoby elektroniczne]: podręcznik do miodu.

uczelnie - 760 pkt. — Tryb dostępu: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html Korotyaev A.I., Babichev S.A. Petersburg: Spetslit, 2010.

4. Mikrobiologia medyczna, wirusologia i immunologia [Zasoby elektroniczne]: podręcznik: w 2 tomach / V. 1. - 448 s. — Tryb dostępu: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html Zverev V.V., Boychenko M.N.

M.: Geotar Media, 2010. .

5. Mikrobiologia medyczna, wirusologia i immunologia [Zasoby elektroniczne]: podręcznik: w 2 tomach, t. 2. - 480 s. Tryb dostępu: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html Zverev V.V., Boychenko M.N. M.: Geotar Media, 2010.

literatura dodatkowa

1. Reakcje immunodiagnostyczne: podręcznik / opracowanie: G.K. Davletshina, Z.G. Gabidullin, A.A. Akhtarieva, M.M. .

Khusnarizanova, Yu.Z. Gabidullin, M.M. Alsynbaev - Ufa: Wydawnictwo GBOU VPO BSMU Ministerstwa Zdrowia Rosji, 2016. - 86 s.

2. Cechy niektórych właściwości, które określają potencjał patogenny współhodowanych odmian bakterii Enterobacter, Citrobacter, Serratia, E. coli, Proteus: publikacja naukowa / Yu. Z. Gabidullin, R. S. Sufiyarov, I. I. Dolgushin - Ufa, 2015. - 250 sek.

Strona główna » Immunoblot – co to jest? Immunoblot w diagnostyce chorób zakaźnych

Immunoblot – co to jest? Immunoblot w diagnostyce chorób zakaźnych

Co to jest immunoblot? Jest to powszechna metoda laboratoryjnej diagnostyki infekcji wirusowych u ludzi. Jest to jeden z najdokładniejszych i najbardziej niezawodnych sposobów wykrywania obecności wirusa HIV.

Jeśli chodzi o niezawodność, jest on nawet większy niż test immunosorpcyjny sprzężony z enzymem (elisa). Wyniki testu Immunoblot są uznawane za rozstrzygające i rozstrzygające. Informacje ogólne

Immunoblot – co to jest? Aby rozpoznać osobę zakażoną wirusem HIV, należy przejść badanie laboratoryjne na obecność przeciwciał w surowicy krwi.

Metoda skrawków Western blot jest również nazywana Western blot (western blot). Służy do wykrywania infekcji wirusowych u ludzi, jako dodatkowa metoda ekspercka. Jest to niezbędne do potwierdzenia testu ELISA - testu laboratoryjnego, który pozwala na stwierdzenie obecności przeciwciał przeciwko wirusowi HIV we krwi. Test Immunoblot ponownie z pozytywnym wynikiem testu ELISA.

Jest uważany za najbardziej wrażliwy, złożony i kosztowny.

Cel

Co to jest immunoblot? Ta metoda laboratoryjnego badania surowicy krwi na obecność przeciwciał przeciwko wirusowi.

Podczas specjalnych badań całkowitych białek wirusowych w żelu i na membranach nitrocelulozowych.

Immunoblotting (wykrywanie przeciwciał w surowicy pacjentów na określone antygeny patogenów)

Procedura skrawków Western blot ma na celu określenie zakażenia wirusem HIV na różnych etapach. W pierwszym etapie oczyszczony wirus z części składowych poddawany jest elektroforezie, a zawarte w nim antygeny dzielone są przez masę cząsteczkową.

Ludzki wirus niedoboru odporności replikuje się w żywych komórkach osadzonych w jego informacji genetycznej. Na tym etapie osoba staje się nosicielem wirusa HIV, jeśli zostałaś zarażona.

Specyfika tej choroby polega na tym, że nie objawia się ona przez długi czas. Wirus niszczy limfocyty, przez co spada odporność człowieka i organizm nie jest w stanie walczyć z infekcjami.

Jeśli HIV jest leczony prawidłowo i na czas, pacjent dożyje sędziwego wieku. Brak leczenia nieuchronnie prowadzi do śmierci. Od momentu zakażenia, ale bez leczenia, maksymalny okres wynosi nie więcej niż dziesięć lat.

Osobliwości

Analiza immunoblot to niezawodna metoda, która pozwala określić obecność przeciwciał przeciwko antygenom HIV pierwszego i drugiego typu.

Jeśli dana osoba jest zarażona, po dwóch tygodniach pojawiają się przeciwciała, które można wykryć znacznie później. Cechą HIV jest to, że ilość przeciwciał szybko wzrasta i pozostaje we krwi pacjenta. Nawet jeśli są obecne, choroba może nie objawiać się przez dwa lub więcej lat. Metoda ELISA nie zawsze dokładnie wskazuje na obecność choroby, wymagając potwierdzenia wyników skrawków PCR i Western blot, jeśli test immunoenzymatyczny dał wynik pozytywny.

Wskazania do

Jaki rodzaj „immunoblotu” już ustalono, ale który jest wprowadzany do badania?

Powodem wykonania testu immunoblot w kierunku ludzkiego wirusa upośledzenia odporności (HIV) będzie pozytywny wynik testu ELISA. Konieczne jest wykonanie testu immunoenzymatycznego u pacjentów, którzy mają zostać poddani operacji. Ponadto należy dokonać analizy kobiet planujących ciążę, a także tych, które są rozwiązłe. Skrawki Western blot podaje się pacjentom z zakażeniem wirusem HIV, jeśli wyniki testu Elisa są wątpliwe.

Powodem pójścia do lekarza mogą być następujące niepokojące objawy: szybka utrata masy ciała; osłabienie, utrata funkcji; zaburzenia jelitowe (biegunka), trwające trzy tygodnie; odwodnienie; gorączka; powiększone węzły chłonne w organizmie; rozwój kandydozy, gruźlica, zapalenie płuc, toksoplazmoza, zaostrzenie opryszczki.

Pacjent nie musi się przygotowywać przed oddaniem krwi żylnej.

Nie jedz przez 8-10 godzin przed badaniem. Nie zaleca się picia alkoholu i napojów kawowych, ciężkich ćwiczeń fizycznych, przeżywania podniecenia na dzień przed oddaniem krwi.

Gdzie wykonać analizę?

Gdzie mogę zrobić test na obecność wirusa HIV?

ELISA, analiza immunoblot przeprowadzana w miejskich prywatnych klinikach, daje wyniki w ciągu jednego dnia. Możliwa jest również natychmiastowa diagnoza. W placówkach publicznych testy elisa i skrawki Western blot są bezpłatne, zgodnie z ustawodawstwem Federacji Rosyjskiej.

Obowiązkowe badania przesiewowe w kierunku chorób zakaźnych kobiet w ciąży oraz pacjentów wymagających hospitalizacji lub operacji Jak przebiega to badanie?

Jak przeprowadzić test ELISA? Immunoblot pozytywny/negatywny potwierdza lub odrzuca wyniki testu elisa. Procedura jest dość prosta. Specjalista pobiera krew żylną, z czasem zajmuje to mniej niż pięć minut.

Po pobraniu próbki miejsce wstrzyknięcia należy zdezynfekować i zakleić plastrem. Pobieranie odbywa się na czczo, więc po zabiegu nie zaszkodzi zjeść tabliczkę gorzkiej czekolady lub słodki gorący napój.

Aby otrzymać skierowanie na bezpłatną analizę w publicznej placówce medycznej, należy udać się do terapeuty.

Ogólnie rzecz biorąc, immunoblot nie różni się od innych badań krwi poprzez pobieranie próbek. Metodologia badań jest prosta. Jeśli wirus jest obecny we krwi człowieka, organizm zaczyna wytwarzać przeciwciała, aby go zniszczyć. Dla każdego wirusa istnieje wiele antygenów białkowych. Wykrywanie tych przeciwciał jest podstawą metody cięcia metodą Western blot. Cena

Ile analiz? Immunoblot HIV odnosi się do tanich badań.

Średnio przesiewowe metody testów immunologicznych wahają się od 500 do 900 rubli. Sekcje Western blot to czek badawczy, którego koszt waha się od trzech do pięciu tysięcy rubli. Bardziej złożone metody są znacznie droższe. Na przykład za analizę reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) trzeba będzie zapłacić około 12 000 rubli.

Interpretacja wyników

Najczęstszymi metodami diagnozowania zakażenia wirusem HIV są testy immunoenzymatyczne i immunoblot.

Służą do oznaczania przeciwciał w surowicy przeciwko ludzkiemu wirusowi niedoboru odporności. Zakażenie jest zwykle potwierdzane dwoma testami: przesiewowym i potwierdzającym. Interpretacji wyników powinien dokonać lekarz, który stawia diagnozę i przepisuje leczenie. Jeśli immunoblot jest pozytywny, oznacza to, że organizm ludzki ma wirusa.

Dodatni wynik nie powinien być powodem do samodzielnego leczenia, ponieważ każdy pacjent może mieć swój własny obraz choroby.

Analiza jakościowa obejmuje badania przesiewowe i certyfikację. Jeśli pacjent nie ma wirusa, wynik jest „negatywny”. Po znalezieniu tego certyfikatu przeprowadzane są dodatkowe badania przesiewowe. Analiza immunoblotów, która potwierdza lub odrzuca badania przesiewowe. Jeśli paski testowe pojawiają się w ciemnych obszarach (lokalizacja białka), diagnoza brzmi „HIV”.

Jeśli wyniki są wątpliwe, badania przeprowadza się w ciągu trzech miesięcy.

Aby zapobiec zakażeniu ludzkim wirusem niedoboru odporności, można przestrzegać pewnych zasad: unikać przypadkowych kontaktów seksualnych, używać prezerwatyw podczas kontaktu, nie używać narkotyków.

Jeśli choroba zostanie wykryta u kobiety w ciąży, ważne jest, aby postępować zgodnie z zaleceniami lekarza prowadzącego, nie zapomnij o testach na obecność wirusa.

Co to jest Western Blot?

Identyfikacja białek w złożonych mieszaninach lub ekstraktach różnych tkanek jest jednym z często spotykanych problemów. Używając takiego narzędzia, jak specyficzne przeciwciała, możliwe jest określenie badanego białka przy minimalnym nakładzie czasu i kosztów finansowych.

W metodzie Western blotting w pierwszym etapie mieszanina białek jest rozdzielana metodą elektroforezy w obecności dodecylosiarczanu sodu (SDS), a następnie przenoszona metodą elektroblottingu na membranę nitrocelulozową.

Istota tej metody polega na tym, że żel po elektroforezie umieszcza się na membranie nitrocelulozowej pomiędzy warstwami bibuły filtracyjnej. Złożoną w ten sposób „kanapkę” umieszcza się w polu elektrycznym, dzięki czemu kompleksy białko-SDS przemieszczają się po płytce żelowej i unieruchamiają (w wyniku sorpcji nieswoistej) na powierzchni błony nitrocelulozowej.

W wiązaniu kompleksu białko-SDS do błony nitrocelulozowej biorą udział głównie siły elektryczne, a oddziaływanie to jest wielopunktowe i prowadzi do „rozprzestrzeniania się” białek na powierzchni błony. Tym samym po elektrotransferze otrzymujemy replikę żelu na nitrocelulozie z białkami ułożonymi identycznie jak w żelu poliakryloamidowym.

Po SDS - elektroforezie, elektrotransferze i sorpcji białek z żelu na membranę nitrocelulozową, trzeciorzędowa konformacja białka jest znacznie zmieniona, jeśli ogólnie można mówić o istnieniu trzeciorzędowej struktury białka po tak ostrej obróbce . Dlatego do immunochemicznego wykrywania badanego białka zwykle stosuje się tylko przeciwciała mono- lub poliklonalne specyficzne dla liniowych regionów cząsteczki białka.

51. Test immunoenzymatyczny, immunoblotting. Mechanizm, komponenty, zastosowanie.

Przeciwciała specyficzne dla epitopów konformacyjnych (lub miejsc obejmujących kontakty między podjednostkami) generalnie nie nadają się do stosowania w metodzie Western blot.

Po przeniesieniu białka membranę inkubuje się kolejno z przeciwciałami swoistymi dla badanego białka, a następnie z przeciwciałami wtórnymi swoistymi dla fragmentów Fc przeciwciał pierwszorzędowych skoniugowanymi z enzymem (lub jakimś innym) znacznikiem (ryc.

1A). W przypadku, gdy przeciwciała pierwszorzędowe swoiste dla badanego antygenu są skoniugowane bezpośrednio ze znacznikiem, przeciwciała drugorzędowe nie są wymagane (ryc. 1 B). Kompleksy immunologiczne powstające w miejscu lokalizacji badanego białka są „manifestowane” za pomocą chromogennego substratu (w zależności od typu znacznika).

Czułość i specyficzność metody w dużym stopniu zależy od tego, jakie przeciwciała zostaną zastosowane w badaniu.

Zastosowane przeciwciała muszą być specyficzne dla unikalnej sekwencji aminokwasowej specyficznej tylko dla badanego białka. W przeciwnym razie możliwa jest interakcja (zwłaszcza w przypadku gruboziarnistych ekstraktów białkowych) przeciwciał z kilkoma cząsteczkami białka, co z kolei doprowadzi do pojawienia się kilku kolorowych pasm na błonie.

Identyfikacja badanego białka jest w tym przypadku często trudna lub wręcz niemożliwa.

Drugim ważnym czynnikiem, o którym należy pamiętać przy wyborze przeciwciał, jest powinowactwo. Im wyższe powinowactwo zastosowanych przeciwciał, jaśniejsze i wyraźniejsze barwienie prążków białkowych, tym wyższa czułość metody. Stosując przeciwciała o wysokim powinowactwie, można osiągnąć czułość 1 ng, a nawet wyższą.

Aby zobrazować wynik interakcji antygenu związanego z błoną i przeciwciał, stosuje się przeciwciała drugorzędowe skoniugowane z czynnikami zdolnymi do dawania określonego sygnału w określonych warunkach.

Zwykle jako taki środek stosuje się enzym (peroksydazę lub fosfatazę), którego produkt reakcji ma kolor i wytrąca się na membranie w postaci nierozpuszczalnego osadu.

W tej metodzie możliwe jest również zastosowanie znaczników fluorescencyjnych.

Ryż. 1. Schemat barwienia immunochemicznego badanego białka: A - przy użyciu przeciwciał drugorzędowych skoniugowanych ze znacznikiem enzymatycznym; B - przeciwciało pierwszorzędowe jest bezpośrednio skoniugowane ze znacznikiem enzymatycznym.

Protokół:

I. Przygotowanie żeli i błon oraz elektrotransfer białek

Żel poliakryloamidowy po elektroforezie umieszczono w łaźni z buforem do blottingu (25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM glicyna, 10% etanol).

Na części kasety zwróconej w stronę anody umieszcza się dwa arkusze bibuły filtracyjnej, przycięte do kształtu kasety bibułowej i zwilżone buforem bibułowym. Następnie na bibule filtracyjnej umieszcza się membranę nitrocelulozową wstępnie zwilżoną tym samym buforem, upewniając się, że między membraną a bibułą nie ma pęcherzyków powietrza.

Następnie żel należy ostrożnie umieścić na membranie, ponownie zwracając szczególną uwagę na brak pęcherzyków powietrza między żelem a membraną. Kanapkę uzupełniają dwie warstwy zwilżonej bibuły filtracyjnej, które umieszcza się na powierzchni żelu (ryc. 2). Powstała kanapka jest zaciskana w kasecie i umieszczana między elektrodami tak, aby membrana była skierowana w stronę anody.

Ryż. 2. Schemat elektrotransferu białek do błony.

II. elektrotransfer

Elektrotransfer białek na błonę nitrocelulozową przeprowadza się w buforze zawierającym 25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM glicyny, 10% etanolu przez 30–50 min przy stałym napięciu 100 V.

Czas elektrotransferu zależy od wielkości przenoszonych białek, im większe białko, tym dłużej trwa elektrotransfer. Jakość elektrotransportu i ułożenie prążków białkowych oceniano przez barwienie membrany nitrocelulozowej 0,3% Ponceau S w 1% kwasie octowym. Przed barwieniem immunologicznym membranę należy kilkakrotnie przemyć lekko zasadowym wodnym roztworem Tris w celu usunięcia barwnika związanego z białkami.

III. Immunochemiczne barwienie białek immobilizowanych na membranie nitrocelulozowej

W celu zablokowania miejsc wiązania nieswoistych przeciwciał membranę inkubuje się z ciągłym mieszaniem w temperaturze pokojowej przez 30 minut w PBST (dla lepszego blokowania można zastosować roztwór PBST zawierający 10% odtłuszczonego mleka w proszku).

Po zablokowaniu membranę inkubuje się przez godzinę w temperaturze pokojowej przy ciągłym mieszaniu w PBST zawierającym 1-10 μg/ml swoistych przeciwciał.

Optymalne stężenie przeciwciał dobierane jest empirycznie i zależy od powinowactwa oddziaływania przeciwciał z antygenem.

Pod koniec inkubacji membranę przemyto 5 razy PBST i przeniesiono do roztworu przeciwciał drugorzędowych skoniugowanych z peroksydazą chrzanową. Rozcieńczenie koniugatu jest zwykle podawane przez producenta na opakowaniu lub dobierane empirycznie przez badacza. Inkubować membranę w roztworze przeciwciał drugorzędowych przez 1 godzinę przy ciągłym mieszaniu.

Po dokładnym przemyciu (co najmniej 5-6 zmian buforu) membranę PBST przenosi się do chromogenicznego roztworu substratu zawierającego 3 mg diaminobenzydyny (DAB) i 10 µl 30% nadtlenku wodoru w 10 ml 0,1 M Tris-HCl, pH 7,6 .

Inkubację prowadzi się mieszając przez 5 do 10 minut. Po zakończeniu inkubacji z podłożem membranę należy przemyć PBST, osuszyć bibułą filtracyjną i niezwłocznie wykonać kopię elektroniczną skanując w kolorze. Jeśli membrana całkowicie wyschnie, zabarwione paski białkowe bledną, a obraz jest mniej jasny i kontrastowy.

Uwaga: DAB jest toksyczny i potencjalnie rakotwórczy. Pracuj tylko w gumowych rękawiczkach!