Yksikerroksiset soluviljelmät. soluviljelmä

soluviljelmiä

Soluviljelytekniikka koostuu solujen kasvattamisesta elävien organismien ulkopuolella.

Kasvisoluviljelmät

Kasvisoluviljelmät eivät ole vain tärkeä askel siirtogeenisten kasvien luomisessa, vaan myös ympäristön kannalta hyväksyttäviä ja taloudellisesti kannattavaa luonnontuotteiden lähde, joilla on terapeuttisia ominaisuuksia, kuten paklitakseli (paklitakseli), joka sisältyy marjapuuhun ja on valmistettu kemoterapialääkkeenä nimeltä Taxol (Taxol). Kasvisoluviljelmiä käytetään myös elintarviketeollisuuden maku- ja väriaineina käyttämien aineiden tuottamiseen.

Hyönteissoluviljelmät

Hyönteissoluviljelmien tutkimus ja soveltaminen laajentaa mahdollisuuksia ihmisten kehittää ja käyttää biologisia tekijöitä, jotka tuhoavat tuhohyönteisiä, mutta eivät vaikuta hyödyllisten hyönteisten elinkykyyn eivätkä myöskään kerry ympäristöön. Vaikka biologisten tuholaistorjuntamenetelmien edut ovat olleet tiedossa jo pitkään, tällaisten biologisesti aktiivisten aineiden ja patogeenien tuotanto hyönteisille ja mikro-organismeille teollisina määrinä on erittäin vaikeaa. Hyönteissoluviljelmien käyttö voi ratkaista tämän ongelman täysin. Lisäksi, aivan kuten kasvisoluja, hyönteissoluja voidaan käyttää lääkkeiden syntetisoimiseen. Tätä näkökulmaa tutkitaan parhaillaan aktiivisesti. Lisäksi tutkitaan mahdollisuutta käyttää hyönteissoluja VLP-rokotteiden (VLP - viruksen kaltaiset partikkelit - viruksen kaltaiset hiukkaset) tuottamiseen tartuntatautien, kuten SARS:n ja influenssan, hoitoon. Tämä tekniikka voisi vähentää huomattavasti kustannuksia ja poistaa perinteiseen kananmunamenetelmään liittyvät turvallisuusongelmat.

Nisäkässoluviljelmät

Nisäkässoluviljelmät ovat olleet yksi karjankasvatuksen asiantuntijoiden tärkeimmistä työkaluista yli vuosikymmenen ajan. Laboratorio-olosuhteissa korkealaatuisten lehmien munat hedelmöitetään kunkin härän siittiöillä. Tuloksena saatuja alkioita kasvatetaan koeputkessa useita päiviä, minkä jälkeen ne istutetaan sijaisemälehmien kohtuun. Sama tekniikka on ihmisen koeputkihedelmöityksen perusta.

Tällä hetkellä nisäkässoluviljelmien käyttö ulottuu paljon muutakin kuin keinosiemennys. Nisäkässolut voivat täydentää ja ehkä joskus korvata eläinten käytön uusien lääkkeiden turvallisuuden ja tehon testaamiseksi. Lisäksi, aivan kuten kasvi- ja hyönteissoluja, nisäkässoluja voidaan käyttää syntetisoimaan lääkkeitä, erityisesti joitain eläinproteiineja, jotka ovat liian monimutkaisia ​​geneettisesti muunnettujen mikro-organismien syntetisoimiseksi. Esimerkiksi monoklonaalisia vasta-aineita syntetisoidaan nisäkässoluviljelmillä.

Tiedemiehet harkitsevat myös nisäkässolujen käyttöä rokotteiden tuottamiseen. Vuonna 2005 Yhdysvaltain terveys- ja henkilöstöministeriö myönsi Sanofi Pasteurille 97 miljoonan dollarin sopimuksen. Yrityksen asiantuntijoiden tehtävänä on kehittää menetelmiä nisäkässolujen viljelyyn influenssarokotteiden kehittämisen nopeuttamiseksi ja sitä kautta ihmiskunnan pandemiavalmiuden lisäämiseksi.

Kulttuuriin perustuvat terapiat aikuisten kantasolut Joissakin kehon kudoksissa (luuytimessä, rasvakudoksessa, aivoissa jne.) löydetyt aineet ottavat myös pian oikeutetun paikkansa kliinisessä käytännössä. Tutkijat ovat havainneet, että elimistö voi käyttää kantasoluja korjaamaan vaurioituneita kudoksia. Aikuisten hematopoieettisia kantasoluja on käytetty pitkään luuydinsiirtoina. Ne ovat välttämättömiä kaikenlaisten verisolujen kypsymis- ja muodostumisprosessien palauttamiseksi. Tällaisia ​​soluja voidaan saada suuria määriä napanuoraverestä, mutta niiden eristäminen on melko monimutkainen prosessi.

Tutkijat työstävät parhaillaan menetelmiä kantasolujen eristämiseksi istukasta ja rasvakudoksesta. Useat asiantuntijat kehittävät menetelmiä solujen uudelleenohjelmointiin - kehon kypsien solujen, esimerkiksi ihosolujen, palauttamiseen erilaistumattomaan tilaan ja sen jälkeen niiden erilaistumisen stimuloimiseen vaaditun tyyppisiksi kudoksiksi.

Alkion kantasolut

Käyttö alkion kantasolut Sitä pidetään myös mahdollisena hoitomenetelmänä moniin sairauksiin. Kuten nimestä voi päätellä, alkiosolut saadaan alkioista, erityisesti niistä, jotka kehittyvät munasoluista, hedelmöitetään in vitro (in vitro -hedelmöitysklinikat) ja luovutetaan luovuttajien suostumuksella tutkijoille tieteelliseen käyttöön. Yleensä käytetään blastokystoja - 4-5 päivän ikäisiä alkioita, jotka näyttävät mikroskoopin alla palloilta, jotka koostuvat useista sadoista soluista.

Ihmisalkion kantasolujen eristämiseksi blastokystan sisäinen solumassa siirretään ravinnerikkaaseen viljelyalustaan, jossa solut alkavat jakautua aktiivisesti. Muutamassa päivässä solut peittävät viljelylevyn koko pinnan. Sen jälkeen tutkijat keräävät jakautuvat solut, jakavat ne osiin ja asettavat ne uusille levyille. Solujen siirtämistä uusille levyille kutsutaan prosessiksi uudelleenkylvö ja voidaan toistaa monta kertaa useiden kuukausien aikana. Solun passage-sykliä kutsutaan kulku. Alkion kantasoluja, jotka ovat olleet viljelmässä vähintään kuusi kuukautta ilman erilaistumista (eli pysyvät pluripotenteina - kykenevät erilaistumaan minkä tahansa kehon kudoksen soluiksi) ja säilyttävät normaalin geenisarjan. alkion kantasolulinja.

Viljelylevyn sisäpinta on usein peitetty ihosoluilla, jotka ovat peräisin hiiren alkioista, jotka on geneettisesti muunnettu epäonnistumaan jakautumaan. Nämä solut muodostavat syöttökerroksen - "ravinnesubstraatin", jonka ansiosta alkiosolut kiinnittyvät pintaan. Tutkijat yrittävät parantaa olemassa olevaa menetelmää ja poistaa tarpeen käyttää hiiren soluja, koska niiden läsnäolo aiheuttaa aina riskin viruspartikkeleista ja hiiren proteiineista, jotka voivat aiheuttaa allergisen reaktion päästä ihmissolujen viljelmään.

Kantasoluhoidon ja kudostekniikan maksimiarvo voidaan saavuttaa, jos terapeuttiset kantasolut ja niistä kasvatetut kudokset ovat geneettisesti identtisiä vastaanottajan solujen kanssa. Siksi, jos potilas itse ei ole niiden lähde, kantasoluja on muunnettava korvaamalla niiden geneettinen materiaali vastaanottajan geeneillä ja vasta sitten erilaistettava tietyntyyppisiksi soluiksi. Tällä hetkellä geneettisen materiaalin korvaaminen ja uudelleenohjelmointi voidaan suorittaa onnistuneesti vain alkion kantasoluilla.

soluviljelmä

Soluviljely on prosessi, jolla prokaryoottien ja eukaryoottien yksittäisiä soluja (tai yksittäistä solua) kasvatetaan keinotekoisesti in vitro kontrolloiduissa olosuhteissa. Käytännössä termi "soluviljelmä" viittaa pääasiassa monisoluisista eukaryooteista, yleisimmin eläimistä, peräisin olevien yksikudossolujen viljelyyn. Soluviljelmien kasvatustekniikan ja -tekniikoiden historiallinen kehitys liittyy erottamattomasti kudosviljelmien ja kokonaisten elinten viljelyyn.

Tarina

Englantilainen fysiologi S. Ringer kehitti 1800-luvulla natriumia, kaliumia, kalsiumia ja magnesiumkloridia sisältävän suolaliuoksen ylläpitämään eläinten sydämenlyöntiä kehon ulkopuolella. Vuonna 1885 Wilhelm Roux otti käyttöön kudosviljelmän periaatteen, poisti osan luuytimestä kanan alkiosta ja piti sitä lämpimässä suolaliuoksessa useita päiviä. Ross Granville Harrison, joka työskenteli Johns Hopkinsin lääketieteellisessä koulussa ja sitten Yalen yliopistossa, julkaisi kokeidensa tulokset vuosina 1907-1910 ja loi kudosviljelymetodologian. Soluviljelytekniikat kehittyivät merkittävästi 1940- ja 1950-luvuilla virologian tutkimuksen yhteydessä. Virusten viljely soluviljelmissä mahdollisti puhtaan virusmateriaalin saamisen rokotteiden tuotantoa varten. Poliorokote oli yksi ensimmäisistä lääkkeistä, jotka valmistettiin massatuotantona soluviljelyteknologialla.

Viljelyn perusperiaatteet

Solujen eristäminen

Kehon ulkopuolella viljelyyn eläviä soluja voidaan saada useilla tavoilla. Solut voidaan eristää verestä, mutta vain leukosyytit voivat kasvaa viljelmässä. Mononukleaariset solut voidaan eristää pehmytkudoksesta käyttämällä entsyymejä, kuten kollagenaasia, trypsiiniä, pronaasia, jotka tuhoavat solunulkoisen matriisin. Lisäksi kudospaloja voidaan laittaa ravintoalustaan. Suoraan kohteesta otettuja soluja kutsutaan ensisijaiseksi. Useimmilla primaarisoluilla, lukuun ottamatta kasvainsoluja, on rajoitettu elinikä. Tietyn määrän jakautumisen jälkeen solut käyvät läpi ikääntymisprosessin ja lopettavat jakautumisen, mutta eivät menetä elinkykyisyyttä. On olemassa "kuolemattomia" solulinjoja, jotka voivat lisääntyä loputtomasti. Tämä kyky on seurausta satunnaisesta mutaatiosta tai hankittu keinotekoisesti tukahduttamalla telomeraasigeeni.

Kasvavat solut

Soluja kasvatetaan erityisessä ravintoalustassa, vakiolämpötilassa ja erityisessä kaasumaisessa ympäristössä soluviljelyinkubaattorissa. Eri soluviljelmien ravintoalustat eroavat koostumuksesta, pH:sta, glukoosipitoisuudesta, kasvutekijöiden koostumuksesta jne. Ravinneväliaineissa käytetyt kasvutekijät saadaan yleisimmin verestä. Yksi riskitekijöistä tässä tapauksessa on mahdollisuus soluviljelmän infektioon prioneilla tai viruksilla. Viljelyssä yksi tärkeimmistä tehtävistä on välttää tai minimoida saastuneiden ainesosien käyttöä. Käytännössä tätä ei kuitenkaan aina saavuteta. Soluja voidaan kasvattaa suspensiossa tai liimautuvassa tilassa. Jotkut solut (kuten verisolut) ovat luonnostaan ​​suspensiossa. On myös solulinjoja, joita on keinotekoisesti muunnettu niin, että ne eivät voi kiinnittyä pintoihin solutiheyden lisäämiseksi viljelmässä. Kiinnittyneiden solujen kasvu vaatii pinnan, kuten kudosviljelmän tai muovin, joka on päällystetty solunulkoisilla matriisielementeillä adheesion parantamiseksi sekä kasvun ja erilaistumisen edistämiseksi. Useimmat pehmeä- ja kovakudossolut ovat tarttuvia. Adhesiivisesta viljelmästä erotetaan organotyyppinen soluviljelmä, joka on kolmiulotteinen ympäristö, toisin kuin perinteiset laboratoriolasit. Tämä viljelyjärjestelmä muistuttaa fysikaalisesti ja biokemiallisesti eniten eläviä kudoksia, mutta sen ylläpidossa on joitain teknisiä vaikeuksia (esimerkiksi se tarvitsee diffuusiota).

Solulinjojen ristikontaminaatio

Kun tutkijat työskentelevät soluviljelmien kanssa, he voivat kohdata ristikontaminaation ongelman. Tutkimustulosten perusteella voidaan olettaa, että 15-20 % tapauksista kokeissa käytetyt solut olivat vaurioituneet tai kontaminoituneet muiden solulinjojen soluilla.

Kasvavien solujen ominaisuudet

Soluja kasvatettaessa voi jatkuvasta jakautumisesta johtuen esiintyä niiden ylimäärää viljelmässä. Seurauksena voi olla seuraavia ongelmia:

• Erittymistuotteiden, mukaan lukien myrkyllisten, kertyminen ravintoaineeseen.
• Kuolleiden solujen, jotka ovat lopettaneet elintärkeän toimintansa, kerääntyminen viljelmään.
• Suuren solumäärän kerääntyminen vaikuttaa negatiivisesti solukiertoon, kasvu ja jakautuminen hidastuvat ja solut alkavat ikääntyä ja kuolla (kontaktikasvun esto).
• Samasta syystä solujen erilaistuminen voi alkaa.

Soluviljelmien normaalin toiminnan ylläpitämiseksi sekä negatiivisten ilmiöiden estämiseksi ravinnealustan vaihto, matkustaja ja solujen transfektio suoritetaan määräajoin. Viljelmien bakteerien, hiivojen tai muiden solulinjojen kontaminoitumisen välttämiseksi kaikki käsittelyt suoritetaan yleensä aseptisissa olosuhteissa steriilissä laatikossa. Mikroflooran tukahduttamiseksi ravintoalustaan ​​voidaan lisätä antibiootteja (penisilliini, streptomysiini) ja sienilääkkeitä (amfoterisiini B).

Ihmisen solulinjat

Yksi varhaisimmista ihmissoluviljelmistä, Henrietta Lacksilta, joka kuoli kohdunkaulan syöpään. Soluviljelyytimet värjätään siniseksi.

Ihmissolujen viljely on jossain määrin bioetiikan sääntöjen vastaista, koska eristyksissä kasvatetut solut voivat ylittää emo-organismin ja niitä voidaan sitten käyttää kokeiden tekemiseen tai uusien hoitojen kehittämiseen ja siitä hyötymiseen. Ensimmäinen tuomioistuimen päätös tällä alalla annettiin Kalifornian korkeimmassa oikeudessa asiassa John Moore v. University of California, jossa potilailla ei ole omistusoikeutta solulinjoihin, jotka on johdettu heidän suostumuksellaan poistetuista elimistä.

Solulinja "Hybridooma"

Bioteknologian tuotteet

Teollinen menetelmä soluviljelmistä tuottaa tuotteita, kuten entsyymejä, synteettisiä hormoneja, monoklonaalisia vasta-aineita, interleukiineja, lymfokiineja, kasvainlääkkeitä. Vaikka monia yksinkertaisia ​​proteiineja voidaan saada suhteellisen helposti käyttämällä rDNA:ta bakteeriviljelmissä, monimutkaisempia proteiineja, kuten glykoproteiineja, voidaan tällä hetkellä saada vain eläinsoluista. Yksi näistä tärkeistä proteiineista on erytropoietiinihormoni. Nisäkässoluviljelmien viljelykustannukset ovat melko korkeat, joten parhaillaan tutkitaan mahdollisuutta tuottaa monimutkaisia ​​proteiineja hyönteisten tai korkeampien kasvien soluviljelmissä.

kudosviljelmiä

Soluviljely on olennainen osa kudosviljelyteknologiaa ja kudostekniikkaa, koska se määrittelee perustan solujen kasvattamiselle ja niiden ylläpitämiselle elinkelpoisessa tilassa ex vivo.

Rokotteet

Soluviljelytekniikoilla valmistetaan parhaillaan rokotteita poliomyeliittiä, tuhkarokkoa, sikotautia, vihurirokkoa ja vesirokkoa vastaan. Yhdysvaltojen aiheuttaman influenssapandemian uhan vuoksi se rahoittaa tutkimusta rokotteen saamiseksi

K.K. - Nämä ovat monisoluisen organismin soluja, jotka elävät ja lisääntyvät keinotekoisissa olosuhteissa kehon ulkopuolella.

Kehon ulkopuolella eläville soluille tai kudoksille on ominaista koko joukko metabolisia, morfologisia ja geneettisiä ominaisuuksia, jotka eroavat jyrkästi elinten ja kudosten solujen ominaisuuksista in vivo.

Yksikerroksisia soluviljelmiä on kahta päätyyppiä: primaarinen ja siirretty.

Pääasiassa trypsinoitu. Termi "primaarinen" viittaa soluviljelmään, joka on saatu suoraan ihmisen tai eläimen kudoksista alkion tai synnytyksen jälkeisenä aikana. Tällaisten kasvien elinikä on rajoitettu. Tietyn ajan kuluttua niissä esiintyy epäspesifisen rappeutumisen ilmiöitä, jotka ilmenevät sytoplasman rakeistumisessa ja vakuolisaatiossa, solujen pyöristymisessä, solujen ja kiinteän substraatin välisen yhteyden katkeamisessa, jolla niitä kasvatettiin. Säännöllinen väliaineen vaihto, muutokset jälkimmäisen koostumuksessa ja muut toimenpiteet voivat vain hieman pidentää primäärisoluviljelmän elinikää, mutta eivät voi estää sen lopullista tuhoutumista ja kuolemaa. Todennäköisesti tämä prosessi liittyy sellaisten solujen metabolisen aktiivisuuden luonnolliseen häviämiseen, jotka ovat poissa koko organismissa vaikuttavien neurohumoraalisten tekijöiden hallinnasta.

Vain populaation yksittäiset solut tai soluryhmät voivat säilyttää kykynsä kasvaa ja lisääntyä useimpien solukerroksen rappeutumisen taustalla. Nämä solut, jotka ovat löytäneet loputtoman lisääntymiskyvyn in vitro, aiheuttavat siirretyt soluviljelmät.

Siirrettävien solulinjojen tärkein etu verrattuna primaariviljelmiin on rajaton lisääntymismahdollisuus kehon ulkopuolella ja suhteellinen autonomia, joka tuo ne lähemmäksi bakteereja ja yksisoluisia alkueläimiä.

Suspensiokulttuurit- yksittäiset solut tai soluryhmät, joita on kasvatettu suspensiossa nestemäisessä alustassa. Ne ovat suhteellisen homogeeninen solupopulaatio, joka altistuu helposti kemikaaleille.

Suspensioviljelmiä käytetään laajalti mallijärjestelminä sekundaaristen aineenvaihduntareittien, entsyymien induktion ja geeniekspression, vieraiden yhdisteiden hajoamisen, sytologisten tutkimusten jne. tutkimiseen.

Merkki "hyvästä" linjasta on solujen kyky järjestää uudelleen aineenvaihduntaa ja korkea lisääntymisnopeus tietyissä viljelyolosuhteissa. Tällaisen linjan morfologiset ominaisuudet:

korkea hajoamisaste (5-10 solua ryhmää kohden);

solujen morfologinen yhtenäisyys (pieni koko, pallomainen tai soikea muoto, tiheä sytoplasma);

Trakeidin kaltaisten elementtien puuttuminen.

Diploidisolukannat. Nämä ovat samantyyppisiä soluja, jotka pystyvät läpikäymään jopa 100 jakautumista in vitro säilyttäen samalla alkuperäisen diploidisen kromosomisarjan epäonnistumisen (Hayflick, 1965). Ihmisalkioista peräisin olevia diploidisia fibroblastikantoja käytetään laajalti diagnostisessa virologiassa ja rokotetuotannossa sekä kokeellisissa tutkimuksissa. On pidettävä mielessä, että jotkin virusgenomin piirteet toteutuvat vain soluissa, jotka säilyttävät normaalin erilaistumistason.

130. Bakteriofagit. Morfologia ja kemiallinen koostumus

Bakteriofagit (faagit) (muista kreikkalaisista sanoista φᾰγω - "syön") ovat viruksia, jotka infektoivat selektiivisesti bakteerisoluja. Useimmiten bakteriofagit lisääntyvät bakteerien sisällä ja aiheuttavat niiden hajoamisen. Bakteriofagi koostuu pääsääntöisesti proteiinikuoresta ja yksijuosteisen tai kaksijuosteisen nukleiinihapon geneettisestä materiaalista (DNA tai harvemmin RNA). Partikkelikoko on noin 20-200 nm.

Eri bakteriofagien hiukkasten - virionien - rakenne on erilainen. Toisin kuin eukaryoottisilla viruksilla, bakteriofageilla on usein erityinen kiinnityselin bakteerisolun pintaan tai häntäprosessi, joka on järjestetty vaihtelevalla monimutkaisuusasteella, mutta joillakin faageilla ei ole häntäprosessia. Kapsidi sisältää faagin geneettisen materiaalin, sen genomin. Eri faagien geneettistä materiaalia voivat edustaa erilaiset nukleiinihapot. Jotkut faagit sisältävät DNA:ta geneettisenä materiaalinaan, toiset sisältävät RNA:ta. Useimpien faagien genomi on kaksijuosteista DNA:ta, ja joidenkin suhteellisen harvinaisten faagien genomi on yksijuosteista DNA:ta. Joidenkin faagien DNA-molekyylien päissä on "tahmeita alueita" (yksijuosteisia komplementaarisia nukleotidisekvenssejä), toisissa faageissa ei ole tahmeita alueita. Joillakin faageilla on ainutlaatuiset geenisekvenssit DNA-molekyyleissä, kun taas toisilla faageilla on geenipermutaatioita. Joissakin faageissa DNA on lineaarinen, toisissa se on suljettu renkaaseen. Joissakin faageissa on useiden geenien terminaaliset toistot DNA-molekyylin päissä, kun taas toisissa faageissa tämä terminaalinen redundanssi varmistetaan suhteellisen lyhyiden toistojen läsnäololla. Lopuksi joissakin faageissa genomia edustaa joukko useita nukleiinihappofragmentteja.

Evoluution näkökulmasta niin erityyppistä geneettistä materiaalia käyttävät bakteriofagit eroavat toisistaan ​​paljon enemmän kuin muut eukaryoottisten organismien edustajat. Samaan aikaan huolimatta sellaisista perustavanlaatuisista eroista geneettisen tiedon kantajien - nukleiinihappojen - rakenteessa ja ominaisuuksissa, erilaiset bakteriofagit osoittavat monessa suhteessa yhteistä, ensisijaisesti niiden interventioiden luonteessa solujen aineenvaihdunnassa herkkien bakteerien infektion jälkeen.

Bakteriofagit, jotka pystyvät aiheuttamaan tuottavan soluinfektion, ts. infektio, joka johtaa elinkelpoisiin jälkeläisiin, määritellään viattomaksi. Kaikilla viattomilla faageilla on kaksi tilaa: solunulkoisen tai vapaan faagin tila (jota joskus kutsutaan myös kypsäksi faagiksi) ja vegetatiivisen faagin tila. Joillekin ns. lauhkeille faageille profagin tila on myös mahdollinen.

Solunulkoiset faagit ovat hiukkasia, joilla on tämän tyyppiselle faagille tyypillinen rakenne, joka varmistaa faagin genomin säilymisen infektioiden välillä ja sen siirtymisen seuraavaan herkkään soluun. Solunulkoinen faagi on biokemiallisesti inertti, kun taas vegetatiivinen faagi, faagin aktiivinen ("elävä") tila, tapahtuu herkkien bakteerien infektion tai profagin induktion jälkeen.

Joskus herkkien solujen infektio viattomalla faagilla ei johda elinkelpoisten jälkeläisten muodostumiseen. Tämä voi tapahtua kahdessa tapauksessa: abortoivan infektion aikana tai johtuen solun lysogeenisesta tilasta infektion aikana lauhkealla faagilla.

Syynä infektion abortiiviseen luonteeseen voi olla tiettyjen solujärjestelmien aktiivinen häiriö infektion kulussa, esimerkiksi bakteeriin tuodun faagigenomin tuhoutuminen tai jonkin infektion kannalta välttämättömän tuotteen puuttuminen solusta. faagin kehitys jne.

Faagit luokitellaan yleensä kolmeen tyyppiin. Tyyppi määräytyy tuottavan faagiinfektion vaikutuksen luonteen mukaan tartunnan saaneen solun kohtaloon.

Ensimmäinen tyyppi ovat todella virulentteja faageja. Solun infektoiminen virulentilla faagilla johtaa väistämättä infektoituneen solun kuolemaan, sen tuhoutumiseen ja jälkeläisfaagin vapautumiseen (lukuun ottamatta abortoituneita infektioita). Tällaisia ​​faageja kutsutaan todella virulenteiksi niiden erottamiseksi virulenteista lauhkean alueen faagimutanteista.

Toinen tyyppi- lauhkeat faagit. Solun tuottavan infektion aikana lauhkealla faagilla on kaksi pohjimmiltaan erilaista tapaa kehittyä: lyyttinen, yleensä (tuloksessaan) samanlainen kuin virulenttien faagien lyyttinen sykli, ja lysogeeninen, kun kohtalaisen faagin genomi siirtyy erityistilaan - profaagiin. Profaagia sisältävää solua kutsutaan lysogeeniseksi tai yksinkertaisesti lysogeeniksi (koska se voi käydä läpi faagilyyttistä kehitystä tietyissä olosuhteissa). Lauhkeita faageja, jotka reagoivat profaagitilassa indusoivan tekijän käyttöön lyyttisen kehityksen alkaessa, kutsutaan indusoituviksi, ja faageja, jotka eivät reagoi tällä tavalla, kutsutaan ei-indusoituviksi. Virulentteja mutantteja voi esiintyä lauhkeissa faageissa. Virulenssimutaatiot johtavat sellaiseen muutokseen operaattorialueiden nukleotidisekvenssissä, mikä heijastuu affiniteetin häviämisenä repressoriin.

Kolmas faagityyppi ovat faagit, joiden tuottava infektio ei johda bakteerien kuolemaan. Nämä faagit pystyvät poistumaan tartunnan saaneesta bakteerista aiheuttamatta sen fyysistä tuhoa. Tällaisella faagilla infektoitunut solu on jatkuvan (pysyvän) tuottavan infektion tilassa. Faagin kehittyminen hidastaa jonkin verran bakteerien jakautumisnopeutta.

Bakteriofagit eroavat kemiallisesta rakenteesta, nukleiinihapon tyypistä, morfologiasta ja vuorovaikutuksesta bakteerien kanssa. Bakteerivirukset ovat satoja ja tuhansia kertoja pienempiä kuin mikrobisolut.

Tyypillinen faagipartikkeli (virion) koostuu päästä ja hännästä. Hännän pituus on yleensä 2-4 kertaa pään halkaisija. Pää sisältää geneettistä materiaalia - yksijuosteista tai kaksijuosteista RNA:ta tai DNA:ta, jonka transkriptaasientsyymi on inaktiivisessa tilassa, jota ympäröi proteiini- tai lipoproteiinikuori - kapsidi, joka säilyttää genomin solun ulkopuolella.

Nukleiinihappo ja kapsidi yhdessä muodostavat nukleokapsidin. Bakteriofageilla voi olla ikosaedrinen kapsidi, joka on koottu yhden tai kahden spesifisen proteiinin useista kopioista. Yleensä kulmat koostuvat proteiinin pentameereistä ja kummankin puolen tuki saman tai samanlaisen proteiinin heksameereistä. Lisäksi faagit voivat olla muodoltaan pallomaisia, sitruunan muotoisia tai pleomorfisia. Häntä on proteiiniputki - jatkoa pään proteiinikuorelle, hännän tyvessä on ATPaasi, joka regeneroi energiaa geneettisen materiaalin injektiota varten. On myös bakteriofageja, joilla on lyhyt prosessi, ilman prosessia ja filamenttisia.

Faagien pääkomponentit ovat proteiinit ja nukleiinihapot. On tärkeää huomata, että faagit, kuten muutkin virukset, sisältävät vain yhden tyyppistä nukleiinihappoa, deoksiribonukleiinihappoa (DNA) tai ribonukleiinihappoa (RNA). Tällä ominaisuudella virukset eroavat mikro-organismeista, jotka sisältävät molempia nukleiinihappotyyppejä soluissaan.

Nukleiinihappo sijaitsee päässä. Pieni määrä proteiinia (noin 3 %) löydettiin myös faagin pään sisältä.

Siten kemiallisen koostumuksen mukaan faagit ovat nukleoproteiineja. Nukleiinihappojensa tyypistä riippuen faagit jaetaan DNA:han ja RNA:han. Proteiinin ja nukleiinihapon määrä eri faageissa on erilainen. Joissakin faageissa niiden pitoisuus on lähes sama, ja jokainen näistä komponenteista on noin 50%. Muissa faageissa näiden pääkomponenttien välinen suhde voi olla erilainen.

Näiden pääkomponenttien lisäksi faagit sisältävät pieniä määriä hiilihydraatteja ja joitain pääosin neutraaleja rasvoja.

Kuva 1: Kaavio faagipartikkelin rakenteesta.

Kaikki tunnetut toisen morfologisen tyypin faagit ovat RNA:ta. Kolmannen morfologisen tyypin faageista löytyy sekä RNA- että DNA-muotoja. Muiden morfologisten tyyppien faagit ovat DNA-tyyppisiä.

131. Interferoni. Mikä se on?

häiritä noin n(latinan kielestä - keskenään, keskenään ja ferio - lyön, lyön), suojaava proteiini, jota tuottavat nisäkkäiden ja lintujen kehon solut sekä soluviljelmät vastauksena niiden virustartunnalle; estää virusten lisääntymistä (replikaatiota) solussa. Englantilaiset tiedemiehet A. Isaacs ja J. Lindenman löysivät I.:n vuonna 1957 tartunnan saaneiden kanojen soluista; myöhemmin kävi ilmi, että bakteerit, riketsiat, toksiinit, nukleiinihapot, synteettiset polynukleotidit aiheuttavat myös I.:n muodostumista. I. ei ole yksittäinen aine, vaan ryhmä matalan molekyylipainon proteiineja (molekyylipaino 25 000–110 000), jotka ovat stabiileja laajalla pH-alueella, resistenttejä nukleaaseille ja hajotetaan proteolyyttisten entsyymien vaikutuksesta. Muodostuminen I.:n soluissa liittyy viruksen kehittymiseen niissä, eli se on solun reaktio vieraan nukleiinihapon tunkeutumiseen. Infektoivan viruksen solusta katoamisen jälkeen ja normaaleissa soluissa Ja. sitä ei löydy. Vaikutusmekanismin mukaan I. on pohjimmiltaan erilainen kuin vasta-aineet: se ei ole spesifinen virusinfektioille (se toimii eri viruksia vastaan), ei neutraloi viruksen tarttuvuutta, mutta estää sen lisääntymistä kehossa, tukahduttaen synteesiä viruksen nukleiinihapoista. Kun se joutuu soluihin virusinfektion kehittymisen jälkeen, I. ei ole tehokas. Lisäksi And. on yleensä ominaista sen muodostaville soluille; esimerkiksi kanan solujen I. on aktiivinen vain näissä soluissa, mutta ei suppressoi viruksen lisääntymistä kanin tai ihmissoluissa. Uskotaan, ettei I. itse vaikuta viruksiin, vaan toinen sen vaikutuksen alaisena tuotettu proteiini. Virussairauksien (herpeettinen silmätulehdus, influenssa, sytomegalia) ehkäisyä ja hoitoa koskevissa testeissä I. on saatu rohkaisevia tuloksia. I.:n laajaa kliinistä käyttöä rajoittavat kuitenkin lääkkeen saannin vaikeus, tarve toistuvasti antaa kehoon ja sen lajispesifisyys.

132. Disjunktiivinen tapa. Mikä se on?

1.Tuottava virusinfektio esiintyy kolmessa jaksossa:

· alkukausi Sisältää viruksen adsorptiovaiheet soluun, soluun tunkeutumisen, viruksen hajoamisen (proteiininpoiston) tai "riisumisen". Viruksen nukleiinihappo kuljetettiin sopiviin solurakenteisiin ja vapautuu lysosomaalisten soluentsyymien vaikutuksesta suojaavista proteiinikuorista. Tämän seurauksena muodostuu ainutlaatuinen biologinen rakenne: infektoitunut solu sisältää 2 genomia (oma ja virus) ja 1 synteettinen laite (solu);

Sen jälkeen se alkaa toinen ryhmä virusten lisääntymisprosessit, mukaan lukien keskiverto ja viimeiset jaksot, jonka aikana tapahtuu solun repressio ja virusgenomin ilmentyminen. Solun genomin tukahduttaminen saadaan aikaan pienimolekyylipainoisilla säätelyproteiineilla, kuten histoneilla, joita syntetisoidaan missä tahansa solussa. Virusinfektiolla tämä prosessi tehostuu, nyt solu on rakenne, jossa geneettistä laitetta edustaa virusgenomi ja synteettistä laitetta edustavat solun synteettiset järjestelmät.

2. Solun tapahtumien jatkokulkua ohjataanviruksen nukleiinihappojen replikaatioon(uusien virionien geneettisen materiaalin synteesi) ja sen sisältämän geneettisen tiedon täytäntöönpanoa(proteiinikomponenttien synteesi uusille virioneille). DNA:ta sisältävissä viruksissa, sekä prokaryootti- että eukaryoottisoluissa, virus-DNA:n replikaatio tapahtuu solun DNA:sta riippuvan DNA-polymeraasin osallistuessa. Tässä tapauksessa ensin muodostuu yksijuosteisia DNA:ta sisältäviä viruksia täydentäviä juoste - niin kutsuttu replikatiivinen muoto, joka toimii mallina tytär-DNA-molekyyleille.

3. DNA:n sisältämän viruksen geneettisen tiedon toteutus tapahtuu seuraavasti: DNA-riippuvaisen RNA-polymeraasin osallistuessa syntetisoidaan mRNA:ita, jotka pääsevät solun ribosomeihin, joissa syntetisoidaan virusspesifisiä proteiineja. Kaksijuosteisissa DNA:ta sisältävissä viruksissa, joiden genomi transkriptoituu isäntäsolun sytoplasmaan, tämä on sen oma genominen proteiini. Virukset, joiden genomit transkriptoivat solun tumassa, käyttävät sen sisältämää solun DNA-riippuvaista RNA-polymeraasia.

klo RNA-virukset prosessit replikointi Niiden genomi, transkriptio ja geneettisen tiedon translaatio suoritetaan muilla tavoilla. Viruksen RNA:n replikaatio, sekä miinus- että plussäikeet, tapahtuu RNA:n replikatiivisen muodon kautta (komplementti alkuperäiselle), jonka synteesin tarjoaa RNA-riippuvainen RNA-polymeraasi, genominen proteiini, joka on kaikilla RNA:ta sisältävillä viruksilla. . Miinusjuosteisten virusten RNA:n replikatiivinen muoto (plus-juoste) ei toimi vain templaattina tytärvirus-RNA-molekyylien (miinusjuosteet) synteesille, vaan suorittaa myös mRNA:n tehtäviä, eli menee ribosomeihin ja varmistaa virusproteiinien synteesi (lähettää).

klo plus-filamentti RNA:ta sisältävät virukset suorittavat sen kopioiden translaatiotoiminnon, jonka synteesi suoritetaan replikatiivisen muodon (negatiivisen juosteen) kautta viruksen RNA-riippuvaisten RNA-polymeraasien osallistuessa.

Joillakin RNA-viruksilla (reoviruksilla) on täysin ainutlaatuinen transkriptiomekanismi. Sitä tarjoaa erityinen virusentsyymi - käänteinen transkriptaasi (käänteiskopioija) ja sitä kutsutaan käänteistranskriptioksi. Sen olemus piilee siinä, että ensin muodostuu transkriptio viruksen RNA-matriisiin osallistumalla käänteiskopiointiin, joka on yksi DNA-juoste. Sen päällä syntetisoidaan toinen juoste solu-DNA-riippuvaisen DNA-polymeraasin avulla ja muodostuu kaksijuosteinen DNA-transkripti. Siitä tavanomaisella tavalla i-RNA:n muodostuksen kautta realisoituu virusgenomin tiedot.

Kuvattujen replikaatio-, transkriptio- ja translaatioprosessien tulos on muodostuminen tytärmolekyylit virusnukleiinihappo ja virusproteiinit koodattu viruksen genomiin.

Sen jälkeen tulee kolmas, viimeinen jakso vuorovaikutus viruksen ja solun välillä. Uusia virioneja kootaan solun sytoplasmisen retikulumin kalvojen rakenteellisista komponenteista (nukleiinihapot ja proteiinit). Solu, jonka genomi on repressoitu (suppressoitu), yleensä kuolee. vasta muodostuneet virionit passiivisesti(solukuoleman vuoksi) tai aktiivisesti(silmuamalla) poistuvat solusta ja löytävät itsensä sen ympäristöstä.

Täten, virusnukleiinihappojen ja -proteiinien synteesi ja uusien virionien kokoaminen esiintyvät tietyssä järjestyksessä (ajallisesti erotettuina) ja erilaisissa solurakenteissa (avaruudessa erotettuina), joiden yhteydessä virusten lisääntymismenetelmä nimettiin disjunktiivinen(hajallaan). Abortiivisen virusinfektion yhteydessä viruksen vuorovaikutusprosessi solun kanssa keskeytyy syystä tai toisesta ennen kuin solun genomin tukahduttaminen on tapahtunut. Ilmeisesti tässä tapauksessa viruksen geneettinen informaatio ei realisoidu eikä viruksen lisääntyminen tapahdu, ja solu säilyttää toimintansa muuttumattomina.

Latentin virusinfektion aikana molemmat genomit toimivat solussa samanaikaisesti, kun taas viruksen aiheuttamien transformaatioiden aikana virusgenomi tulee osaksi solun genomia, toimii ja periytyy sen mukana.

133. Camelpox-virus

Isorokko (Variola)- tarttuva tarttuva sairaus, jolle on ominaista kuume ja papulaarinen-pustuloinen ihottuma iholla ja limakalvoilla.
Taudin aiheuttajat kuuluvat isorokkoheimon (Poxviridae) eri suvuihin ja virustyyppeihin. Itsenäisiä lajeja ovat virukset: luonnollinen lehmä yuspa, vaccinia (suku Orthopoxvirus), luonnollinen lammasrokko, vuohet (suku Carpipoxvirus), siat (suku Suipoxvirus), linnut (suku Avipoxvirus) kolmella päälajilla (kanojen, kyyhkysten ja isorokon aiheuttajat) kanarialaiset).
Isorokon taudinaiheuttajat eri eläinlajit ovat morfologisesti samanlaisia. Nämä ovat DNA:ta sisältäviä viruksia, joille on tunnusomaista suhteellisen suuret koot (170 - 350 nm), epiteliotropia ja kyky muodostaa soluissa alkeellisia pyöristettyjä sulkeumia (Paschen, Guarnieli, Bollinger-kappaleet), jotka näkyvät valomikroskoopilla Moro-zovin mukaan värjäyksen jälkeen. Vaikka on olemassa fylogeneettinen Eri eläinlajien isorokkon aiheuttajien välillä on vahva yhteys, patogeenisyyden kirjo ei ole sama, eivätkä immunogeeniset suhteet säily kaikissa tapauksissa. Lampaiden, vuohien, sikojen ja lintujen Variola-virukset ovat patogeenisiä vain vastaaville lajeille, ja luonnollisissa olosuhteissa jokainen niistä aiheuttaa itsenäisen (alkuperäisen) isorokon. Variola-lehmärokko- ja vacciniaviruksilla on laaja kirjo patogeenisyyttä, mukaan lukien nautakarja, puhvelit, al-boats, aasit, muulit, kamelit, kanit, apinat ja ihmiset.

Kamelirokko VARIOLA CAMELINA tarttuva sairaus, joka ilmenee tyypillisen kyhmymäisen pustulaarisen isorokkoihottuman muodostumisen yhteydessä iholle ja limakalvoille. Isorokkon nimi Variola tulee latinan sanasta Varus, joka tarkoittaa kieroa (pockmarked).

Taudin epizootologia. Kaiken ikäiset kamelit ovat alttiita isorokolle, mutta nuoret eläimet ovat useammin ja vakavammin sairaita. Kiinteillä alueilla, joilla on isorokkoongelmia, aikuiset kamelit sairastuvat harvoin, koska melkein kaikki heistä saavat isorokkon nuorena. Raskaana olevilla kameleilla isorokko voi aiheuttaa abortin.

Muiden lajien eläimet eivät ole alttiita alkuperäiselle kamerokkovirukselle luonnollisissa olosuhteissa. Lehmien ja kamelien lisäksi lehmärokkovirukselle ja rokotteelle ovat herkkiä puhvelit, hevoset, aasit, siat, kanit ja ihmiset, jotka eivät ole immuuneja isorokolle. Laboratorioeläimistä marsut ovat herkkiä lehmärokko- ja vacciniaviruksille sen jälkeen, kun virusta on levitetty silmien sarveiskalvoon (F. A. Petunii, 1958).

Tärkeimmät isorokkovirusten lähteet ovat isorokkoeläimet ja ihmiset, joilla on vaccinia ja jotka toipuvat yliherkkyydestä vaccinia-viruksella immunisoinnin jälkeen isorokkovasikan detrituksessa. Sairaat eläimet ja ihmiset levittävät virusta ulkoiseen ympäristöön, pääasiassa viruksen sisältävän ihon ja limakalvojen hylkineen epiteelin mukana. Virus vapautuu myös ulkoiseen ympäristöön abortoituneiden sikiöiden kanssa (K. N. Buchnev ja R. G. Sadykov, 1967). Isorokon aiheuttajaa voivat mekaanisesti levittää isorokolle immuunit koti- ja luonnonvaraiset eläimet, mukaan lukien linnut, sekä isorokkolle immuunit ihmiset rokoterokotetuilta lapsilta.

Luonnollisissa olosuhteissa terveet kamelit saavat tartunnan joutuessaan kosketuksiin sairaiden eläinten kanssa viruksen saastuttamalla alueella saastuneen veden, rehun, tilojen ja hoitovälineiden kautta sekä aerogeenisesti ruiskuttamalla sairaiden eläinten viruksia sisältäviä ulosvirtauksia. Kamelit saavat useammin tartunnan, kun virus joutuu kehoon ihon ja limakalvojen kautta, varsinkin kun niiden eheys rikotaan tai A-vitamiinin puutos ilmenee.

Eläinkulkutaudin muodossa kamelien isorokkoa esiintyy noin 20-25 vuoden välein. Tällä hetkellä nuoret eläimet ovat erityisen vakavasti sairaita. Epidemioiden välisenä aikana paikallaan olevilla alueilla, joilla on isorokko kamelien keskuudessa, isorokkoa esiintyy tarttuvana ja satunnaisina tapauksina, joita esiintyy enemmän tai vähemmän säännöllisesti 3–6 vuoden välein, pääasiassa 2–4-vuotiailla eläimillä. Tällaisissa tapauksissa eläimet sairastuvat suhteellisen helposti, varsinkin lämpimänä vuodenaikana. Kylmällä säällä isorokko on vakavampi, pidempi ja siihen liittyy komplikaatioita erityisesti nuorilla eläimillä. Pienillä tiloilla lähes kaikki herkät kamelit sairastuvat 2–4 viikossa. On syytä muistaa, että isorokkoepidemia kamelien keskuudessa voi aiheuttaa sekä alkuperäinen kamelirokkovirus että lehmärokkovirus, jotka eivät luo immuniteettia toisiaan vastaan. Siksi eri isorokkovirusten aiheuttamat taudinpurkaukset voivat seurata toisiaan tai esiintyä samanaikaisesti.

Patogeneesi taudinaiheuttajan selvä epiteliotropismi määrää. Eläimen kehossa virus lisääntyy ja tunkeutuu vereen (viremia), imusolmukkeisiin, sisäelimiin, ihon ja limakalvojen epiteelikerrokseen ja aiheuttaa niissä spesifisten eksanteemien ja enanteemien muodostumisen, vakavuus joista riippuu organismin reaktiivisuudesta ja viruksen virulenssista, sen tunkeutumisreitit kehoon ja epiteelikerroksen tilasta. Pocks kehittyy peräkkäin vaiheittain: roseolasta, jossa on kyhmy, märkärakkulaksi, jossa on kuori ja arpia muodostuva.

Oireet. Itämisaika kamelien iästä, viruksen ominaisuuksista ja kehoon pääsystä riippuen vaihtelee 3–15 päivää: nuorilla eläimillä 4–7, aikuisilla 6–15 päivää. Immuunimattomien kamelien kamelit voivat sairastua 2-5 päivää syntymän jälkeen. Lyhin itämisaika (2-3 päivää) tapahtuu kameleilla sen jälkeen, kun ne ovat saaneet vaccinia-virustartunnan.

Prodromaalisella kaudella sairaiden kamelien ruumiinlämpö nousee 40-41 ° C:seen, ilmaantuu letargiaa ja ruokkimista kieltäytymistä, sidekalvo ja suun ja nenän limakalvot ovat hyperemiaa. Näitä merkkejä havaitaan kuitenkin usein, etenkin taudin puhkeamisen alussa tilalla.

Myös isorokon kulku kameleilla on erilainen iästä riippuen: nuorilla eläimillä, erityisesti vastasyntyneellä, se on useammin akuutti (jopa 9 päivää); aikuisilla - subakuutti ja krooninen, joskus piilevä, useammin raskaana olevilla kameleilla. Kamelin isorokkon tyypillisin muoto on iho, jossa taudin kulku on subakuutti (kuva 1).

Taudin subakuutissa kulmassa suusta ja nenästä vapautuu kirkasta, myöhemmin sameaa, harmahtavan likaista limaa. Eläimet pudistelevat päätään, haistelevat ja haukottelevat ja heittävät ulos viruksen vaikutuksen alaisen epiteelin sekä virusta sisältävän liman. Pian huulten, sieraimien ja silmäluomien alueelle muodostuu turvotusta, joka leviää joskus leuanväliselle alueelle, kaulalle ja jopa dewlap-alueelle. Submandibulaariset ja alemmat kohdunkaulan imusolmukkeet ovat laajentuneet. Eläimillä on vähentynyt ruokahalu, ne makaavat tavallista useammin ja pidempään ja nousevat ylös suurilla vaikeuksilla. Tähän mennessä huulten, nenän ja silmäluomien iholle, suun ja nenän limakalvoille ilmestyy punertavan harmaita täpliä; niiden alle muodostuu tiheitä kyhmyjä, jotka lisääntyessä muuttuvat harmaiksi papuleiksi ja sitten herneen ja pavun kokoisiksi märkärakkuloiksi, joissa on uppoamiskeskus ja rullamainen paksuus reunoilla.

Märkärakkulat pehmenevät, puhkeavat ja niistä vapautuu vaaleanharmaata tahmeaa nestettä. Pään turvotus katoaa tähän mennessä. 3-5 päivän kuluttua avautuneet märkärakkulat peittyvät kuorilla. Jos he eivät vahingoita karkearehua, sairaus päättyy siihen. Poistetuissa tai pudonneissa primaarisissa kuorissa on käänteisiä kraatterimaisia ​​märkärakkuloita. Arvet jää jälkien tilalle. Kaikki nämä ihovauriot muodostuvat 8-15 päivän kuluessa.

Sairaiden kamelien taskut ilmestyvät usein ensin päähän. Yhdestä neljään vuoden iässä kamelit sairastuvat yleensä helposti. Vauriot sijaitsevat päänahassa, pääasiassa huulissa ja nenässä. Kameleilla utare kärsii usein. Muutama päivä pään alueen primaaristen märkärakkuloiden avautumisen jälkeen iholle ja muille vähäkarvaisille kehon alueille muodostuu isorokkovaurioita (rintaluun, kainaloiden, perineumin ja kivespussin alueille, peräaukon ympärille, sisäpuolelle kyynärvarren ja reiden) ja kameleilla myös emättimen limakalvon limakalvolla. Tällä hetkellä kamelien ruumiinlämpötila nousee yleensä uudelleen, joskus jopa 41,5 °:seen, ja viimeisen raskauskuukauden kamelit tuovat ennenaikaisia ​​ja alikehittyneitä kameleja, jotka yleensä kuolevat pian.

Joillakin eläimillä silmän sarveiskalvo (pisara) samenee, mikä aiheuttaa tilapäistä sokeutta toisessa silmässä 5-10 päiväksi ja kameleilla useammin molempiin silmiin. Pian syntymän jälkeen sairastuville kamelivasikoille kehittyy ripuli. Tässä tapauksessa he kuolevat 3-9 päivän kuluessa taudista.

Eläimet toipuvat 17-22 päivässä suhteellisen hyvänlaatuisen subakuutin isorokon aikana ja yleensä vacciniavirustartunnan jälkeen.

Aikuisilla kameleilla suun limakalvon avautuvat märkärakkulat sulautuvat usein yhteen ja vuotavat verta, etenkin jos ne loukkaantuvat karkearavinnoksi. Tämä vaikeuttaa ruokintaa, eläimet laihtuvat, paranemisprosessi viivästyy 30-40 päivään ja sairaudesta tulee krooninen.

Isorokkoprosessin yleistyessä joskus kehittyy pyemiaa ja komplikaatioita (keuhkokuume, gastroenteriitti, nekrobakterioosi jne.), jolloin tauti kestää jopa 45 päivää tai kauemmin. On tapauksia, joissa mahan ja suoliston toimintahäiriöt, joihin liittyy atonia ja ummetus. Joillakin sairailla eläimillä havaitaan raajojen turvotusta.

Kameleilla, joilla on piilevä isorokko (ilman taudin tyypillisiä kliinisiä oireita, vain kuumeen ollessa läsnä), abortteja tapahtuu 1–2 kuukautta ennen varsoimista (jopa 17–20 %).

Aikuisten kamelien taudin ennuste on suotuisa, kameleilla, joilla on akuutti kulku, erityisesti 15-20 päivän iässä ja kameleilla, jotka ovat syntyneet ei-immuuni-isorokkoon. Kamelit ovat vakavasti sairaita ja jopa 30-90 % heistä kuolee. Kamelit 1-3-vuotiaat sairastuvat helpommin isorokkoon, ja vanhemmalla iällä, vaikka he ovatkin vakavasti sairaita, mutta joilla on merkkejä selvästä yleistyneestä prosessista, kuolleisuus on alhainen (4-7%).

Patologisille muutoksille on ominaista edellä kuvatut ihon, limakalvojen ja silmien sarveiskalvon vauriot. Tarkkoja verenvuotoja havaitaan epikardiumissa ja suoliston limakalvoissa. Rinnan keuhkopussin rintaontelossa näkyy joskus myös pieniä verenvuotoja ja kyhmyjä, joiden koko vaihtelee hirssinjyvästä harmaan ja harmaanpunaisen värisiin linsseihin, joissa on juoksevaa sisältöä. Ruokatorven limakalvo on peitetty hirssin kokoisilla kyhmyillä, joita ympäröivät harjanteiset kohoumat. Arven (joskus virtsarakon) limakalvolla on samanlaisia ​​verenvuotoja ja kyhmyjä, joissa on rosoiset reunat, sekä pieniä haavaumia, joissa on painunut punertava keskus. Näppylöitä voidaan havaita alkeiskappaleita, kuten Paschen-kappaleita, joilla on diagnostista arvoa mikroskopiassa sivelyvalmisteesta upotettuna tavanomaisen valomikroskoopin läpi.

Diagnoosi perustuu kliinisten ja epitsoottisten tietojen analyysiin (ottaen huomioon kamelien tartunnan mahdollisuus ihmisestä), patologisiin muutoksiin, positiivisiin mikroskopiatuloksiin (käsiteltäessä näppylöitä tuoreista näppylistä Morozovin hopeamenetelmällä) tai elektronoskopiaan, kuten sekä biotestit isorokolle herkille eläimille. Virus on mahdollista eristää isorokkoa sairastavien kamelien abortoituneiden sikiöiden elimistä. Isorokkoa diagnosoitaessa on suositeltavaa käyttää myös diffuusiosaostusreaktiota agargeelissä ja neutralointireaktiota aktiivisten spesifisten seerumien tai globuliinien läsnä ollessa.

Erotusdiagnoosi tehdään epäilyttävissä tapauksissa (ottaen huomioon kliiniset ja epitsoottiset ominaisuudet). Isorokko on erotettava nekrobakterioosista mikroskoopilla patologisesta materiaalista otetuista sivelysoluista ja sille alttiiden valkoisten hiirten infektiosta; suu- ja sorkkataudista - marsujen infektio patologisen materiaalin suspensiolla takajalkojen ihon plantaarisessa pinnassa; sieni-infektioista ja syyhystä - etsimällä vastaavat taudinaiheuttajat tutkituista raapimista, jotka on otettu vaurioituneilta ihoalueilta; luomistaudilta aborttien, keskenmenojen ja ennenaikaisten varsojen aikana - tutkimalla RA- ja RSK-kamelien veriseerumi ja sikiöiden bakteriologinen tutkimus eristämällä mikrobiviljelmä ravintoalustaan ​​ja mikroskoopilla (käytä tarvittaessa marsujen biomääritystä ja sen jälkeen veren ja seerumin bakteriologiset ja serologiset tutkimukset).

Kun diagnosoidaan isorokko kameleilla, on myös suljettava pois ei-tarttuva, mutta joskus laajalle levinnyt sairaus, joka esiintyy ihovaurioilla huulissa ja nenässä - yantak-bash (Turkm.), Jantak-bas (Kazakstani), joka esiintyy vahingoittaa niitä syödessään kamelin piikkipensaita (yantak, jantak, Alhagi). Tämä tauti voidaan yleensä havaita syksyllä nuorilla, pääasiassa alle vuoden ikäisillä kameleilla. Kamelin piikki vaikuttaa aikuisiin kameleihin vain vähän. Yantak-bashilla suun limakalvolla ei yleensä ole kyhmyjä tai papulaarisia vaurioita, toisin kuin isorokko. Yantak-bashissa näkyvä harmahtava pinnoite on suhteellisen helppo poistaa. On kuitenkin otettava huomioon, että yantak-bash edistää isorokkotautia kameleilla ja etenee usein samanaikaisesti sen kanssa.

Eristettäessä isorokkovirusta on tarpeen määrittää sen tyyppi (alkuperäinen, lehmärokko tai vaccinia) käyttäen menetelmiä, jotka on määritelty Neuvostoliiton terveysministeriön ohjeissa vuodelta 1968. Lehmärokon ehkäisystä ihmisillä, tiedot, jotka on saatu infektio (eristetyissä olosuhteissa) kameleilla, joilla oli ollut isorokkovacciniavirus ja eristettyjä taudinaiheuttajia.

Sairaiden kamelien hoito on pääasiassa oireenmukaista. Vaurioituneet alueet käsitellään kaliumpermanganaattiliuoksella (1:3000), ja kuivumisen jälkeen ne voidellaan seoksella, jossa on 10-prosenttista joditinktuuraa glyseriinin kanssa (1:2 tai 1:3). Avaamisen jälkeen isorokko käsitellään 5-prosenttisella syntomysiiniemulsiolla väkevöidyn kalaöljyn päällä, johon lisätään joditinktuura suhteessa 1:15-1:20; voiteet - sinkki, ihtioli, penisilliini jne. Vaseliiniin voi käyttää 2 % salisyyli- tai boorivoidetta ja 20-30 % propolisvoidetta. Kuumalla säällä 3 % kreoliinivoidetta, tervaa ja heksakloraanipölyä on ilmoitettu. Vaurioituneet alueet voidellaan emulsioihin ja voiteisiin kastetuilla vanupuikoilla 2-3 kertaa päivässä.

Vaurioitunut suuontelon limakalvo pestään 2-3 kertaa päivässä 10-prosenttisella kaliumpermanganaattiliuoksella tai 3-prosenttisella vetyperoksidiliuoksella tai salvia-, kamomilla- ja muiden desinfiointi- ja supistumisaineiden keitteillä. Sidekalvotulehduksessa silmät pestään 0,1-prosenttisella sinkkisulfaattiliuoksella.

Sekundaarisen mikrobiinfektion ja mahdollisten komplikaatioiden kehittymisen estämiseksi on suositeltavaa pistää penisilliiniä ja streptomysiiniä lihakseen. Yleisellä heikkoudella ja komplikaatioilla sydänhoitoja suositellaan.

Erityisistä hoitokeinoista taudin vakavissa tapauksissa voit käyttää isorokkoa sairastaneiden kamelien seerumia tai verta (subkutaanisesti nopeudella 1-2 ml / 1 kg eläimen painoa). Pistoskohdat leikataan huolellisesti etukäteen ja pyyhitään joditinktuuralla.

Sairaille ja toipuville kameleille annetaan usein puhdasta vettä, lese- tai ohrajauhoseos, pehmeää sinimailanen tai hienoa sinimailasen heinää tai ohrajauhoilla maustettuja puuvillankuoria. Kylmällä säällä sairaita eläimiä, erityisesti kameleja, pidetään puhtaassa, kuivassa ja lämpimässä huoneessa tai peitettynä huovilla.

Luonnollisesti sairaiden isorokokameleiden immuniteetti kestää jopa 20-25 vuotta, eli lähes eliniän. Immuniteetin luonne on ihohumoraalinen, mistä on osoituksena neutraloivien vasta-aineiden läsnäolo toipuneiden eläinten veren seerumissa ja kamelien vastustuskyky uudelleentartuntaa vastaan ​​homologisella isorokkoviruksella. Kamelit, jotka ovat syntyneet isorokkoa sairastaneista kameleista, eivät ole alttiita sille isorokolle, jota kamelilla on ollut, varsinkaan kolmen ensimmäisen vuoden aikana eli murrosikään asti. Kamelivasikat, jotka ovat kohdun alla epitsoottisen kauden aikana, eivät pääsääntöisesti saa isorokkoa tai sairastu suhteellisen helposti ja lyhytaikaisesti.

Ennaltaehkäisy- ja valvontatoimenpiteet ovat kaikkia eläinlääkintä-, terveys- ja karanteenitoimenpiteitä tiukasti noudattaen, taudin oikea-aikaista diagnosointia ja viruksen tyypin määrittämistä. Henkilöiden ei pitäisi antaa hoitaa kameleja rokotuksen aikana ja rokotuksen jälkeisenä aikana, ennen kuin he (tai heidän lapsensa) ovat saaneet kokonaan päätökseen kliinisesti selvän reaktion rokotteen isorokkoon. Kaikki tilalle tulevat kamelit, lehmät ja hevoset on säilytettävä eristyssellissä 30 päivää.

Kun isorokko esiintyy kamelien, lehmien ja hevosten keskuudessa, piirin toimeenpanevan komitean erityisellä päätöksellä alue, asutus tai piiri, laidun, jossa tämä tauti havaitaan, julistetaan isorokolle epäedulliseksi ja karanteeniin, rajoitus- ja terveystoimenpiteisiin ryhdytään.

Isorokon ilmaantumisesta ilmoitetaan välittömästi ylemmille eläinlääkintäjärjestöille, naapuritiloille ja alueille, jotta ne ryhtyisivät tarvittaviin toimenpiteisiin taudin leviämisen estämiseksi.

Kamelien lehmärokkotartunnan estämiseksi on suositeltavaa käyttää lääketieteellistä valmistetta - isorokkodetritus, jota käytetään kaikkien kliinisesti terveiden kamelien immunisoimiseen iästä, sukupuolesta ja fysiologisesta tilasta (raskauden ja imetyksen aikana) katsomatta epäedullisessa ja uhanalaisessa lehmärokossa. maatiloilla. Tätä varten kamelin kaulan alempaan kolmannekseen leikataan villa, käsitellään alkoholieetterillä tai 0,5-prosenttisella karbolihappoliuoksella, pyyhitään kuivaksi vanulla tai kuivataan, iho karsitaan ja levitetään paksulla neulalla, veitsen tai leikkurin päähän 2-3 matalaa yhdensuuntaista naarmua, pituus -4 cm.. 3-4 tippaa liuennutta rokotetta levitetään juuri puhdistetulle ihopinnalle ja hierotaan kevyesti lastalla. Liuota rokote ampullien ja ampullilaatikoiden etikettien mukaisesti. Laimennettu ja käyttämätön rokote ja rokoteampullit desinfioidaan keittämällä ja tuhotaan. Rokotukseen käytetyt työkalut pestään 3-prosenttisella karbolihappoliuoksella tai 1-prosenttisella formaldehydiliuoksella ja steriloidaan keittämällä.

Jos kameli ei ollut immuuni lehmärokolle, 5-7 päivänä rokotuksen jälkeen näppylöiden tulisi ilmestyä karifikaatiokohtaan. Jos niitä ei ole, rokotus toistetaan, mutta niskan vastakkaiselle puolelle ja eri sarjan rokotteella. Isorokkoa vastaan ​​immuuni henkilöt ja henkilökohtaisen hygienian säännöt saavat hoitaa rokotettuja ja sairaita kameleja. Nuoret eläimet, erityisesti heikossa ryhmässä, voivat joskus reagoida voimakkaasti rokotuksiin ja sairastua voimakkain isorokon oirein.

Sairaat ja erittäin herkät kamelit eristetään ja hoidetaan (katso edellä). Eläinrakennukset ja isorokkoviruksen saastuttamat paikat on suositeltavaa desinfioida kuumilla 2-4 % kaustisen soodan ja kaustisen potaskan liuoksilla, 3 % rikki-karboliseoksen liuoksella tai 2-3 % rikkihapon tai kirkastetuilla liuoksilla. valkaisuainetta, joka sisältää 2-6 % aktiivista klooria, jotka inaktivoivat isorokkoviruksen 2-3 tunnissa (O. Trabaev, 1970). Voit myös käyttää 3-5 % kloramiiniliuosta ja 2 % formaldehydiliuosta. Lanta on poltettava tai desinfioitava biotermisesti. Isorokon kliinisillä oireilla kaatuneiden kamelien ruumiit on poltettava. Sairaiden ja isorokkoon epäiltyjen kamelien maitoa, jos se ei sisällä mätäepäpuhtauksia eikä se ole muusta syystä vasta-aiheinen, voidaan syödä vasta 5 minuutin keittämisen tai 85 ° -30 minuutin pastöroinnin jälkeen. Isorokkotilojen vaikeuksien aikana tapettujen kamelien villa ja nahka käsitellään eläinperäisten raaka-aineiden desinfiointiohjeiden mukaisesti.

On suositeltavaa poistaa isorokkoon epäsuotuisat rajoitukset maatiloilta ja paikkakunnilta aikaisintaan 20 päivää kaikkien isorokkoeläinten ja ihmisten toipumisen jälkeen ja perusteellisen loppudesinfioinnin jälkeen.

134. Virusten kemiallinen koostumus ja biokemialliset ominaisuudet

1.1 Virionien rakenne ja kemiallinen koostumus.

Suurimmat virukset (rokkovirukset) ovat kooltaan lähellä bakteerien pientä kokoa, pienimmät (enkefaliitin, poliomyeliitin, suu- ja sorkkataudin aiheuttajat) suuria veren hemoglobiinimolekyyleihin suunnattuja proteiinimolekyylejä. Toisin sanoen virusten joukossa on jättiläisiä ja kääpiöitä. Virusten mittaamiseen käytetään ehdollista arvoa, jota kutsutaan nanometriksi (nm). Yksi nm on millimetrin miljoonasosa. Eri virusten koot vaihtelevat 20:stä useisiin satoihin 1 nm:iin.

Yksinkertaiset virukset koostuvat proteiineista ja nukleiinihapoista. Viruspartikkelin tärkein osa, nukleiinihappo, on geneettisen tiedon kantaja. Jos ihmisten, eläinten, kasvien ja bakteerien solut sisältävät aina kahdenlaisia ​​nukleiinihappoja - deoksiribonukleiinihappo-DNA:ta ja ribonukleiinihappo-RNA:ta, niin eri viruksista löytyi vain yksi tyyppi joko DNA:ta tai RNA:ta, mikä on niiden luokittelun perusta. Virionin toinen pakollinen komponentti, proteiinit eroavat eri viruksista, mikä mahdollistaa niiden tunnistamisen immunologisten reaktioiden avulla.

Rakenteeltaan monimutkaisempi virukset sisältävät proteiinien ja nukleiinihappojen lisäksi hiilihydraatteja ja lipidejä. Jokaisella virusryhmällä on omat proteiinit, rasvat, hiilihydraatit ja nukleiinihapot. Jotkut virukset sisältävät entsyymejä. Virionien jokaisella komponentilla on tiettyjä tehtäviä: proteiinikuori suojaa niitä haittavaikutuksilta, nukleiinihappo on vastuussa perinnöllisistä ja tarttuvista ominaisuuksista ja sillä on johtava rooli virusten vaihtelussa, ja entsyymit osallistuvat niiden lisääntymiseen. Yleensä nukleiinihappo sijaitsee virionin keskustassa ja sitä ympäröi proteiinikuori (kapsidi), ikään kuin se olisi pukeutunut siihen.

Kapsidi koostuu tietyllä tavalla järjestetyistä samanlaisista proteiinimolekyyleistä (kapsomeereistä), jotka muodostavat symmetrisiä geometrisia muotoja paikoilleen viruksen nukleiinihapon (nukleokapsidin) kanssa. Nukleokapsidin kuutiosymmetrian tapauksessa nukleiinihappojuoste kiertyy palloksi ja kapsomeerit ovat tiiviisti pakatut sen ympärille. Näin poliovirukset, suu- ja sorkkatauti jne.

Nukleokapsidin kierteisellä (sauvan muotoisella) symmetrialla viruslanka on kierretty spiraalin muodossa, ja jokainen sen kierukka on peitetty kapsomeereillä, jotka ovat tummina vierekkäin. Kapsomeerien rakennetta ja virionien ulkonäköä voidaan tarkkailla elektronimikroskopialla.

Suurin osa ihmisissä ja eläimissä infektioita aiheuttavista viruksista on kuutiosymmetriatyyppiä. Kapsidilla on melkein aina ikosaedrisen säännöllisen 20-sivuisen heksaedrin muoto, jossa on kaksitoista kärkeä ja tasasivuisten kolmioiden pinnat.

Monilla viruksilla on proteiinikapsidin lisäksi ulkokuori. Virusproteiinien ja glykoproteiinien lisäksi se sisältää myös isäntäsolun plasmakalvolta lainattuja lipidejä. Influenssavirus on esimerkki helikaalisesta vaipallisesta virionista, jolla on kuutiosymmetrinen tyyppi.

Nykyaikainen virusten luokittelu perustuu niiden nukleiinihappojen tyyppiin ja muotoon, symmetriatyyppiin ja ulkokuoren olemassaoloon tai puuttumiseen.

Biokemialliset ominaisuudet - katso. manuaali!!!

135. Elinten palaset, jotka säilyttävät toiminnallisen ja lisääntyvän aktiivisuuden in vitro

Soluviljely

minkä tahansa eläinkudoksen solut, jotka pystyvät kasvamaan yksikerroksen muodossa keinotekoisissa olosuhteissa lasi- tai muovipinnalla, joka on täytetty erityisellä ravintoaineella. Solujen lähde on juuri saatu eläinkudos - primaarisolut, laboratoriosolukannat - siirretty to-ry. soluja. Alkio- ja kasvainsoluilla on paras kyky kasvaa keinotekoisissa olosuhteissa. Ihmisen ja apinan solujen diploidi to-ra siirretään rajoitetun määrän kertoja, joten sitä kutsutaan joskus ns. puolitransplantoitavissa oleva soluparvi. Solujen vastaanottovaiheet: lähteen murskaus; trypsiinihoito; vapautuminen detriuksesta; ravintoalustaan ​​suspendoitujen solujen määrän standardointi antibioottien avulla; kaataminen koeputkiin tai pulloihin, joissa solut asettuvat seinille tai pohjalle ja alkavat lisääntyä; yksikerroksen muodostumisen hallinta. To-ry-soluja käytetään viruksen eristämiseen tutkimuksesta. materiaalia virussuspension keräämiseen, St. in:n tutkimus. Viime aikoina sitä on käytetty bakteriologiassa.

136. Parastesiat. Mikä se on?

PARESTESIA(kreikan sanasta para-lähes, toisin kuin aisthesis-tuntemus), kutsutaan joskus myös dysestesiaksi, joita ei aiheuta ulkoinen ärsytys, tunnottomuus, pistely, hanhennahka (myrmeciasis, myrmecismus, formicatio), polttaminen, kutina, kivulias flunssa (eli n. psykroestesia), liikkeet jne., tuntemukset ilmeisesti säilyneissä raajoissa amputoiduilla (pseudomelia paraesthetica). P.:n syyt voivat olla erilaisia. P. voi esiintyä paikallisten verenkierron muutosten seurauksena, Renaudin taudissa, erytromelalgiassa, akroparestesiassa, endarteriitissa, spontaanin kuolioon alkuoireena. Joskus niitä esiintyy hermoston vaurioituessa, traumaattisessa hermotulehduksessa (vrt. tyypillinen P., jossa on mustelma n. ulnaris sulcus olecrani -alueella), myrkyllinen ja tarttuva hermotulehdus, radikuliitti, selkärangan pakymeningiitti (pakymeningiitti) juuret), akuutilla ja hronilla. myeliitti, erityisesti selkäytimen puristuminen (selkäytimen kasvaimet) ja tabes dorsalis. Niiden diagnostinen arvo kaikissa näissä tapauksissa on sama kuin kivun, anestesian ja hyperestesian diagnostinen arvo: ne voivat esiintyä tietyillä alueilla, yhden tai toisen ääreishermon alueella tai yhden tai toisen radikulaarisen hermotuksen alueella. antaa arvokkaita viitteitä patologian sijainnista. prosessi. Esineet ovat myös mahdollisia aivovaurion ilmenemismuotoina. Joten aivokuoren epilepsiassa kohtaukset alkavat usein P.:llä, joka sijaitsee raajassa, josta kouristukset sitten alkavat. Usein niitä havaitaan myös aivoarterioskleroosissa tai aivokupassa ja ne ovat joskus apoplektisen aivohalvauksen ennakkoedustajia - Erillinen asema on ns. henkinen P., eli P., joka on psykogeenistä, hypokondriaalista alkuperää, jolle on erityisen ominaista, että heillä ei ole alkeellista, kuten orgaanista, vaan monimutkaista luonnetta - "matojen ryömiminen päänahan alle", "pallon nostaminen vatsasta" niskaan” (Oppenheim) jne. Niiden diagnostinen arvo on tietysti täysin erilainen kuin orgaanisen P:n

137. Viruksia sisältävän materiaalin kanssa työskentelyyn ja turvatoimiin liittyvät säännöt

138. Tarttuva naudan rinotrakeiittivirus

Tarttuva rinotrakeiitti(lat. - Rhinotracheitis infectiosa bovum; Englanti - Infectious bovine rhinotracheites; IRT, rakkuloita aiheuttava ihottuma, tarttuva vulvovaginiitti, tarttuva nuha, "punainen nenä", ylempien hengitysteiden tarttuva katarri) on karjan akuutti tarttuva tauti, jolle on ominaista pääasiassa kataraali hengitysteiden nekroottiset vauriot, kuume, yleinen masennus ja sidekalvotulehdus sekä märkärakkulainen vulvovaginiitti ja abortti.

IRT:n aiheuttaja - Herpesvirus bovis 1, kuuluu herpesvirusten perheeseen, DNA:ta sisältävä, virionin halkaisija on 120 ... 140 nm. Tämän viruksen 9 rakenneproteiinia on eristetty ja karakterisoitu.

RTI-virusta viljellään helposti useissa soluviljelmissä, mikä aiheuttaa CPP:tä. Viruksen lisääntymiseen liittyy mitoottisen solun jakautumisen estyminen ja tumansisäisten sulkeumien muodostuminen. Sillä on myös hemagglutinoivia ominaisuuksia ja tropismia hengitys- ja lisääntymiselinten soluille ja se voi siirtyä limakalvoilta keskushermostoon, voi tartuttaa sikiön raskauden ensimmäisen ja toisen puoliskon lopussa.

-60 ... -70 "C:ssa virus selviää 7 ... 9 kuukautta, 56 ° C:ssa se inaktivoituu 20 minuutin kuluttua, 37 ° C:ssa - 4 ... 10 päivän kuluttua, 22 ° C:ssa - 50 päivän kuluttua. Klo 4 " Viruksen aktiivisuus laskee hieman. Pakastaminen ja sulattaminen vähentää sen virulenssia ja immunogeenistä aktiivisuutta.

Formaliiniliuokset 1: 500 inaktivoivat viruksen 24 tunnin kuluttua, 1: 4000 - 46 tunnin kuluttua, 1: 5000 - 96 tunnin kuluttua Happamassa ympäristössä virus menettää nopeasti aktiivisuutensa, se pysyy pitkään (jopa 9 kuukautta) pH:ssa 6,0 ... 9,0 ja lämpötilassa 4 °C. Viruksen selviytymisestä on tietoa härän siemennesteessä, jota on säilytetty kuivajään lämpötilassa 4 ... 12 kuukautta, ja nestemäisessä typessä - vuoden ajan. Viruksen inaktivoitumisen mahdollisuus härän siemennesteessä osoitettiin, kun sitä käsiteltiin 0,3-prosenttisella trypsiiniliuoksella.

Tartunnan aiheuttajan lähteitä ovat sairaat eläimet ja piilevät viruksen kantajat. Virulentilla kannalla tartunnan jälkeen kaikista eläimistä tulee viruksen piileviä kantajia. Siitossonnit ovat erittäin vaarallisia, koska sairastuttuaan ne erittävät virusta 6 kuukauden ajan ja voivat tartuttaa lehmiä parittelun aikana. Virus vapautuu ympäristöön nenäeritteen, silmä- ja sukuelinten eritteen, maidon, virtsan, ulosteiden ja siemennesteen mukana. Wildebeestin uskotaan olevan RTI-viruksen säiliö Afrikan maissa. Lisäksi virus voi replikoitua punkeissa, joilla on tärkeä rooli taudin aiheuttajana nautaeläimillä.

Viruksen leviämistekijöitä ovat ilma, rehu, siemenneste, ajoneuvot, hoitovälineet, linnut, hyönteiset sekä ihmiset (maatilan työntekijät). Tartuntatavat - kosketus, ilmassa, tarttuva, ravitsemus.

Taudille alttiita eläimiä ovat nautakarja sukupuolesta ja iästä riippumatta. Vakavin tauti on lihanaudalla. Kokeessa oli mahdollista tartuttaa lampaita, vuohia, sikoja ja peuroja. Eläimet sairastuvat yleensä 10...15 päivää toimintahäiriöiselle tilalle saapumisen jälkeen.

RTI:n ilmaantuvuus on 30...100 %, kuolleisuus - 1...15 %, voi olla suurempi, jos tautia komplisoivat muut hengitystieinfektiot.

Ensisijaisissa pesäkkeissä tauti vaikuttaa lähes koko karjaan, kun taas kuolleisuus on 18 %. IRT:tä esiintyy usein teollisuustyyppisillä tiloilla, kun eri tiloilta tuotuja eläinryhmiä täydennetään.

Kun virus joutuu hengitysteiden tai sukuelinten limakalvoille, se tunkeutuu epiteelisoluihin, missä se lisääntyy aiheuttaen niiden kuoleman ja hilseilyn. Sitten hengitysteiden limakalvon pinnalle muodostuu haavaumia ja sukuelinten kyhmyjä ja märkärakkuloita. Primaarisista vaurioista virus pääsee ilmalla keuhkoputkiin, ja ylemmistä hengitysteistä se voi päästä sidekalvoon, missä se aiheuttaa rappeuttavia muutoksia sairastuneissa soluissa, mikä aiheuttaa kehon tulehdusreaktion. Sitten virus adsorboituu leukosyyteihin ja leviää imusolmukkeiden kautta ja sieltä se pääsee vereen. Viremiaan liittyy eläimen yleinen masennus, kuume. Vasikoilla virus voi kulkeutua veren mukana parenkymaalisiin elimiin, missä se lisääntyy aiheuttaen rappeuttavia muutoksia. Kun virus kulkee veri-aivojen ja istukan esteiden läpi, aivoissa, istukassa, kohtussa ja sikiössä ilmaantuu patologisia muutoksia. Patologinen prosessi riippuu suurelta osin myös mikroflooran aiheuttamista komplikaatioista.

Itämisaika on keskimäärin 2-4 päivää, hyvin harvoin pidempään. Periaatteessa sairaus on akuutti. IRT:tä on viisi muotoa: ylempien hengitysteiden infektiot, vaginiitti, enkefaliitti, sidekalvotulehdus ja niveltulehdus.

Hengityselinten tappiolla on mahdollista krooninen seroosi-märkivä keuhkokuume, jossa noin 20% vasikoista kuolee. Sukuelinten muodossa vaurioituvat ulkoiset sukuelimet, lehmillä kehittyy joskus endometriittiä ja isoissa orkiittia, mikä voi aiheuttaa hedelmättömyyttä. Keinosiemennykseen käytetyillä sonneilla IRT ilmenee toistuvana ihottumana välikalvossa, pakarassa, peräaukon ympärillä, joskus pyrstössä, kivespussissa. Viruksen saastuttama siemenneste voi aiheuttaa endometriitin ja hedelmättömyyden lehmillä.

Abortteja ja sikiön kuolemaa kohdussa havaitaan 3 viikkoa tartunnan jälkeen, mikä on samaan aikaan kun vasta-ainetiitteri kohoaa raskaana olevien toipilaan lehmien veressä, jonka läsnäolo ei estä abortteja ja sikiön kuolemaa kohdussa.

IRT:n taipumus piilevään kulkuun havaittiin sukuelinten muoto. Emättimen limakalvon epiteelissä, sen eteisessä ja häpyssä muodostuu lukuisia erikokoisia märkärakkuloita (pustulaarinen vulvovaginiitti). Eroosiot ja haavaumat ilmestyvät niiden tilalle. Haavaisten leesioiden parantumisen jälkeen limakalvolle jäävät hyperemiset kyhmyt pitkään. Sairailla sonneilla prosessi sijoittuu esinahkaan ja penikseen. Märkärakkuloiden ja rakkuloiden muodostuminen on ominaista. Pienellä osalla tiineitä lehmiä abortit, sikiön resorptio tai ennenaikainen poikiminen ovat mahdollisia. Keskeytetyillä eläimillä oli yleensä aiemmin ollut rinotrakeiitti tai sidekalvotulehdus. Keskeytyneillä lehmillä ei ole poissuljettu metriitin ja sikiön hajoamisen aiheuttamia kuolemantapauksia. Aborttitapaukset eivät kuitenkaan ole harvinaisia, jos lehmän kohdun limakalvolla ei ole tulehdusprosesseja. IRT:ssä on tapauksia akuutista utaretulehduksesta. Utare on jyrkästi tulehtunut ja laajentunut, kivulias tunnustettaessa. Maidon tuotto pienenee jyrkästi.

klo meningoenkefaliitti sorron ohella havaitaan motoristen toimintojen häiriö ja epätasapaino. Sairauteen liittyy lihasvapina, alentuminen, hampaiden kiristys, kouristukset, syljeneritys. Tämä taudin muoto vaikuttaa pääasiassa 2–6 kuukauden ikäisiin vasikoihin.

Hengitysmuoto infektiolle on ominaista äkillinen ruumiinlämmön nousu 41 ... 42 "C, nenän limakalvon, nenänielun ja henkitorven hyperemia, masennus, kuiva kivulias yskä, runsas seroosi-limavuoto nenästä (nuha) ja vaahtoava syljeneritys Taudin kehittyessä limaa paksuuntuu, hengitysteihin muodostuu limatulppia ja kuoliopesäkkeitä.Vakavassa sairaudessa havaitaan tukehtumisen merkkejä.Hyperemia ulottuu nenäpeiliin ("punainen nenä"). IRT-virus nuorten nautaeläinten massakeratokonjunktiviitissä on todistettu. Nuorilla nautakarjalla tauti ilmenee joskus mm. enkefaliitti. Se alkaa äkillisestä jännityksestä, mellakasta ja aggressiosta, liikkeiden koordinaation heikkenemisestä. Kehon lämpötila on normaali. Nuorilla vasikoilla jotkin RTI-viruskannat aiheuttavat akuutin maha-suolikanavan sairauden.

Yleensä sairailla eläimillä hengitysmuoto on kliinisesti selvästi ilmaistu, sukupuolielinten muoto jää usein huomaamatta.

Akuutissa hengitysmuodossa tapettujen tai kuolleiden eläinten ruumiinavaus paljastaa yleensä merkkejä seroosista sidekalvotulehduksesta, katarraali-märkivästä nuhasta, kurkunpään tulehduksesta ja trakeiitista sekä lisäonteloiden limakalvovaurioista. Turbinaattien limakalvo on edematoottinen ja hyperemia, peitetty mukopurulentilla päällysteillä. Paikoin paljastuu erimuotoisia ja -kokoisia eroosiovaurioita. Märkivä erite kerääntyy nenä- ja lisäonteloihin. Kurkunpään ja henkitorven limakalvoilla petechial verenvuotoa ja eroosiota. Vakavissa tapauksissa henkitorven limakalvolle tapahtuu fokaalinen nekroosi, kuolleilla eläimillä bronkopneumonia on mahdollista. Keuhkoissa on atelektaasin fokusalueita. Alveolien ja keuhkoputkien ontelo vaurioituneilla alueilla on täytetty seroos-märkivällä eritteellä. Interstitiaalisen kudoksen vakava turvotus. Kun silmät kärsivät, silmäluomen sidekalvo on hyperemia ja turvotusta, joka ulottuu myös silmämunan sidekalvoon. Sidekalvo on peitetty taliplakilla. Usein siihen muodostuu noin 2 mm:n kokoisia papillaarisia tuberkuloita, pieniä eroosiota ja haavaumia.

Sukuelinten muodossa emättimen ja ulkosynnyttimen voimakkaasti tulehtuneella limakalvolla näkyy eri kehitysvaiheissa märkärakkuloita, eroosioita ja haavaumia. Vulvovaginiitin lisäksi voidaan havaita serokataraalinen tai märkivä kohdunkaulantulehdus, endometriitti ja paljon harvemmin proktiitti. Isillä vaikeissa tapauksissa fimoosi ja parafimoosi liittyvät pustulaariseen balanopostiittiin.

Tuoreet abortoidut sikiöt ovat yleensä turvottavia, ja niissä on vähäisiä autolyyttisiä ilmiöitä. Pienet verenvuodot limakalvoilla ja seroosikalvoilla. Pitkän ajan kuluttua sikiön kuolemasta muutokset ovat vakavampia; lihaksenvälisessä sidekudoksessa ja kehon onteloissa kertyy tummanpunaista nestettä, parenkymaalisiin elimiin - nekroosipesäkkeitä.

Kun utare vaikuttaa, havaitaan seroosi-märkivä diffuusi utaretulehdus. Leikkauspinta on turvonnut, selvästi rakeinen johtuen sairastuneiden lobulusten lisääntymisestä. Painettaessa siitä virtaa samea, mätämäinen salaisuus. Säiliön limakalvo on hyperemia, turvonnut ja siinä on verenvuotoa. Aivotulehduksella havaitaan verisuonten hyperemia, kudosten turvotus ja pienet verenvuodot.

IRT diagnosoidaan kliinisten ja epitsotologisten tietojen sekä elinten ja kudosten patologisten muutosten perusteella, ja ne on vahvistettava laboratoriomenetelmin. Piilevä infektio todetaan vain laboratoriotesteillä.

Laboratoriodiagnostiikka sisältää: 1) viruksen eristyksen patologisesta materiaalista soluviljelmässä ja sen tunnistamisen RN- tai RIF-soluista; 2) RTI-virusantigeenien havaitseminen patologisesta materiaalista RIF:n avulla; 3) antigeenien havaitseminen sairaiden ja toipuneiden eläinten veriseerumissa (retrospektiivinen diagnoosi) RN:ssä tai RIGAssa.

Virologista tutkimusta varten limaa otetaan sairailta eläimiltä nenäontelosta, silmistä, emättimestä, esinahasta; pakkoteurastetuista ja kaatuneista - nenän väliseinän, henkitorven, keuhkojen, maksan, pernan, aivojen, alueellisten imusolmukkeiden palasia, jotka on otettu viimeistään 2 tuntia kuoleman jälkeen. Veriseerumia otetaan myös retrospektiivistä serologista diagnoosia varten. Laboratoriodiagnostiikkaa varten IRT käytä nautaeläinten IRT-diagnostiikkasarjaa ja punasoludiagnostiikkasarjaa infektion serodidiagnosointiin RIGAssa.

IRT-diagnoosi tehdään samanaikaisesti parainfluenssa-3:n, adenovirusinfektion, hengitysteiden synsyyttiinfektion ja virusripulin materiaalin tutkimuksen kanssa.

IRT:n alustava diagnoosi nautaeläimillä tehdään patologisen materiaalin antigeenin havaitsemisen positiivisten tulosten perusteella. RIUTTA ottaen huomioon epitsotologiset ja kliiniset tiedot sekä patologiset muutokset. Lopullinen diagnoosi määritetään RIF-tulosten yhteensopivuuden perusteella viruksen eristämisen ja tunnistamisen kanssa.

Tarttuvan rinotrakeiitin erotusdiagnoosissa on suljettava pois suu- ja sorkkatauti, pahanlaatuinen katarraalikuume, parainfluenssa-3, adenovirus- ja klamydiainfektiot, virusripuli, hengitysteiden synsytiaalinen infektio, pastörelloosi.

Tautiin liittyy jatkuva ja pitkäaikainen immuniteetti, joka voi tarttua jälkeläisiin ternimaidon vasta-aineilla. Toipuneiden eläinten immuniteetti kestää vähintään 1,5...2 vuotta, mutta selväkään humoraalinen immuniteetti ei estä viruksen pysymistä toipilaisilla eläimillä, ja niitä tulee pitää mahdollisena tartuntalähteenä muille eläimille. Siksi kaikkia eläimiä, joilla on vasta-aineita RTI:tä vastaan, on pidettävä piilevän viruksen kantajina.

139. Kehittyvien lintualkioiden ravintoainevarasto on

Ottaen huomioon lintujen monimutkainen ja melko pitkä alkion muodostumisprosessi, on tarpeen muodostaa erityisiä väliaikaisia ​​alkion ulkopuolisia - väliaikaisia ​​elimiä. Ensimmäinen näistä muodostaa keltuaisen pussin ja sen jälkeen loput väliaikaiset elimet: lapsivesikalvo (amnion), seroosikalvo, allantois. Aikaisemmassa evoluutiossa keltuainen pussi löytyi vain sammista, joilla on jyrkästi telolesitaalinen solu ja alkion muodostumisprosessi on monimutkainen ja pitkä. Keltuaisen pussin muodostumisen aikana havaitaan keltuaisen likaantumista lehtien osilla, joita kutsumme alkionulkoisiksi lehdeiksi tai alkionulkoiseksi materiaaliksi. Mutta alkion ulkopuolinen endodermi alkaa kasvaa keltuaisen reunalla. Alkion ulkopuolinen mesodermi on kerrostunut kahteen levyyn: viskeraalinen ja parietaalinen, kun taas viskeraalinen levy on alkion ulkopuolisen endodermin vieressä ja parietaalinen - alkion ulkoisen ektodermin vieressä.

Alkion ulkopuolinen ektoderma työntää proteiinin sivuun ja kasvattaa myös keltuaisen. Vähitellen keltuaismassat ympäröi kokonaan seinä, joka koostuu alkion ulkopuolisesta endodermistä ja alkion ulkopuolisen mesodermin viskeraalisesta levystä - muodostuu ensimmäinen väliaikainen elin, keltuainen pussi.

Keltuaisen pussin toiminnot. Keltuaispussin endodermisolut alkavat erittää hydrolyyttisiä entsyymejä, jotka hajottavat keltuaismassat. Pilkkoutumistuotteet imeytyvät ja kuljetetaan verisuonten kautta alkioon. Joten keltuainen pussi tarjoaa troofisen toiminnan. Viskeraalisesta mesodermista muodostuvat ensimmäiset verisuonet ja ensimmäiset verisolut, ja siksi keltuaispussi suorittaa myös hematopoieettista toimintaa. Lintuilla ja nisäkkäillä keltuaisen pussin soluista löytyy varhain sukuelinten silmusoluja, gonoblastia.

140. Uudelleenaktivointi. Mikä se on?

Genotyyppiä muuttamalla mutaatiot jaetaan pisteisiin (lokalisoituvat yksittäisiin geeneihin) ja geeniin (vaikuttavat suurempiin genomin osiin).
Herkkien solujen virusinfektio on luonteeltaan monimuotoista, ts. soluun tulee useita virioneja kerralla. Tässä tapauksessa replikaatioprosessissa olevat virusgenomit voivat toimia yhteistyössä tai häiritä. Yhteistoiminnallisia vuorovaikutuksia virusten välillä edustavat geneettinen rekombinaatio, geneettinen uudelleenaktivaatio, komplementaatio ja fenotyyppinen sekoittuminen.
Geneettinen rekombinaatio on yleisempää DNA:ta sisältävissä viruksissa tai RNA:ta sisältävissä viruksissa, joiden genomi on fragmentoitunut (influenssavirus). Geneettisen rekombinaation aikana tapahtuu vaihtoa virusgenomien homologisten alueiden välillä.
Geneettistä uudelleenaktivoitumista havaitaan sukua olevien virusten genomien välillä, joissa on mutaatioita eri geeneissä. Kun geneettinen materiaali jaetaan uudelleen, muodostuu täysimittainen genomi.
Komplementaatio tapahtuu, kun yksi solua infektoivista viruksista syntetisoi ei-funktionaalisen proteiinin mutaation seurauksena. Villityypin virus, joka syntetisoi täydellisen proteiinin, korvaa sen puuttumisen mutanttiviruksesta.

Kehon ulkopuolella kasvaneiden elinten alkeet (in vitro). Solujen ja kudosten viljely perustuu steriiliyden tiukkaan noudattamiseen ja erityisten ravintoalustojen käyttöön, jotka varmistavat viljeltyjen solujen elintärkeän toiminnan ylläpitämisen ja ovat mahdollisimman samanlaisia ​​kuin ympäristön, jonka kanssa solut ovat vuorovaikutuksessa kehossa. Solu- ja kudosviljelmän hankintamenetelmä on yksi tärkeimmistä kokeellisessa biologiassa. Solu- ja kudosviljelmät voidaan pakastaa ja säilyttää pitkään nestetypen lämpötilassa (-196 °C). Amerikkalainen tiedemies R. Harrison suoritti eläinsolujen viljelyn perustavanlaatuisen kokeen vuonna 1907 asettamalla palan sammakon alkion hermoston alkeesta imusolmukkeeseen. Sukusolut pysyivät elossa useita viikkoja, hermosäikeet kasvoivat niistä. Ajan myötä menetelmää paransivat A. Carrel (Ranska), M. Burroughs (USA), A. A. Maksimov (Venäjä) ja muut tutkijat, jotka käyttivät veriplasmaa ja alkion kudosten uutetta ravintoalustana. Myöhemmin edistyminen solu- ja kudosviljelmien hankinnassa yhdistettiin tietyn kemiallisen koostumuksen omaavien väliaineiden kehittämiseen erityyppisten solujen viljelyä varten. Yleensä ne sisältävät suoloja, aminohappoja, vitamiineja, glukoosia, kasvutekijöitä, antibiootteja, jotka estävät viljelmän tartunnan bakteereilla ja mikroskooppisilla sienillä. F. Steward (USA) aloitti solu- ja kudosviljelymenetelmän luomisen kasveissa (porkkanafloemin palassa) vuonna 1958.

Eläin- ja ihmissolujen viljelyyn voidaan käyttää eri alkuperää olevia soluja: epiteelisoluja (maksa, keuhkot, maitorauhanen, iho, virtsarakko, munuainen), sidekudos (fibroblastit), luusto (luu ja rusto), lihas (luuranko, sydän- ja sileät lihakset), hermosto (gliasolut ja neuronit), hormoneja erittävät rauhassolut (lisämunuaiset, aivolisäke, Langerhansin saarekkeiden solut), melanosyytit ja erilaiset kasvainsolut. Niiden viljelyssä on kaksi suuntaa: soluviljely ja elinviljely (elin- ja kudosviljely). Soluviljelmän - geneettisesti homogeenisen nopeasti lisääntyvän populaation - saamiseksi kehosta poistetaan kudospalat (yleensä noin 1 mm 3), käsitellään sopivilla entsyymeillä (solujen välisten kontaktien tuhoamiseksi) ja tuloksena oleva suspensio asetetaan ravintoalustaan. . Alkiokudoksista johdetuille viljelmille on tunnusomaista parempi eloonjääminen ja aktiivisempi kasvu (alkioiden alhaisesta erilaistumisasteesta ja progenitorikantasolujen esiintymisestä johtuen) verrattuna vastaaviin aikuisesta organismista otettuihin kudoksiin. Normaalit kudokset synnyttävät viljelmiä, joiden elinikä on rajoitettu (ns. Hayflick-raja), kun taas kasvaimista saadut viljelmät voivat lisääntyä loputtomasti. Kuitenkin jopa normaalien solujen viljelmässä jotkut solut ikuistuvat spontaanisti eli muuttuvat kuolemattomiksi. Ne säilyvät hengissä ja synnyttävät solulinjoja, joiden elinikä on rajoittamaton. Alkuperäinen solulinja voidaan saada solupopulaatiosta tai yhdestä solusta. Jälkimmäisessä tapauksessa linjaa kutsutaan klooniksi tai klooniksi. Pitkäaikaisessa viljelyssä eri tekijöiden vaikutuksesta normaalien solujen ominaisuudet muuttuvat, tapahtuu transformaatiota, jonka pääpiirteet ovat solumorfologian rikkomukset, kromosomien lukumäärän muutos (aneuploidia). Korkealla transformaatioasteella tällaisten solujen vieminen eläimeen voi aiheuttaa kasvaimen muodostumisen. Elinviljelyssä kudoksen rakenteellinen organisoituminen, solujen väliset vuorovaikutukset säilyvät ja histologinen ja biokemiallinen erilaistuminen säilyy. Hormoneista riippuvaiset kudokset säilyttävät herkkyytensä ja ominaisvasteensa, rauhassolut jatkavat tiettyjen hormonien eritystä ja niin edelleen. Tällaisia ​​viljelmiä kasvatetaan viljelyastiassa lautoilla (paperi, millipore) tai ravinnealustan pinnalla kelluvassa metalliverkossa.

Kasveissa soluviljely perustuu yleensä samoihin periaatteisiin kuin eläimissä. Kasvisolujen rakenteelliset ja biologiset ominaisuudet määräävät viljelymenetelmien erot. Useimmat kasvikudosten solut ovat totipotentteja: yhdestä sellaisesta solusta voi tietyissä olosuhteissa kehittyä täysimittainen kasvi. Kasvisoluviljelmän saamiseksi käytetään palaa mistä tahansa kudoksesta (esimerkiksi kalluksesta) tai elimestä (juuri, varsi, lehti), jossa on eläviä soluja. Se asetetaan ravintoalustaan, joka sisältää mineraalisuoloja, vitamiineja, hiilihydraatteja ja fytohormoneja (useimmiten sytokiineja ja auksiineja). Kasviviljelmät kestävät 22-27 °C:n lämpötiloissa, pimeässä tai valossa.

Solu- ja kudosviljelmiä käytetään laajasti biologian ja lääketieteen eri aloilla. Somaattisten solujen (kaikkien elinten ja kudosten solut sukupuolisoluja lukuun ottamatta) viljely kehon ulkopuolella määritti mahdollisuuden kehittää uusia menetelmiä korkeampien organismien genetiikan tutkimiseen käyttämällä klassisen genetiikan menetelmien ohella molekyylibiologian menetelmiä. . Nisäkkään somaattisten solujen molekyyligenetiikka on saanut suurimman kehityksen, mikä liittyy mahdollisuuteen suoria kokeita ihmissoluilla. Solu- ja kudosviljelmää käytetään sellaisten yleisten biologisten ongelmien ratkaisemiseen, kuten geenien ilmentymismekanismien selvittäminen, alkion varhainen kehitys, erilaistuminen ja lisääntyminen, ytimen ja sytoplasman vuorovaikutus, solut ympäristön kanssa, sopeutuminen erilaisiin kemiallisiin ja fysikaalisiin vaikutuksiin, ikääntyminen, pahanlaatuinen transformaatio jne., sitä käytetään perinnöllisten sairauksien diagnosointiin ja hoitoon. Testikohteina soluviljelmät ovat vaihtoehto eläinten käytölle uusien farmakologisten aineiden testauksessa. Ne ovat välttämättömiä siirtogeenisten kasvien saamiseksi, kloonien lisäämiseksi. Soluviljelmillä on tärkeä rooli bioteknologiassa hybridien luomisessa, rokotteiden ja biologisesti aktiivisten aineiden tuotannossa.

Katso myös solutekniikka.

Lit.: Soluviljelymenetelmät. L., 1988; Eläinsolujen viljely. Menetelmät / Toimittanut R. Freshni. M., 1989; Viljeltyjen solujen biologia ja kasvibioteknologia. M., 1991; Freshney R. I. Eläinsolujen viljely: perustekniikan käsikirja. 5. painos Hoboken, 2005.

O. P. Kisurina-Jevgeniev.