Употреба на комбинираниот тест во дијагнозата на ХИВ. Современи методи за дијагностицирање на ХИВ инфекција Видео: едукативен филм MGMU im.

Сопствениците на патентот RU 2283497:

Пронајдокот се однесува на полето на биотехнологијата и медицината. Тест систем за ензимска имуноанализа за идентификација на спектарот на антитела на вирусот на хумана имунодефициенција (ХИВ) од првиот и вториот тип, првиот тип од групата О и откривањето на антигенот на вирусот на хумана имунодефициенција од првиот тип p24 вклучува имуносорбент базиран на антигени на хуманиот вирус на имунодефициенција кои претставуваат gp41 (env ХИВ-1 и ХИВ-2 група О), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env ХИВ-2), антитела на антигенот ХИВ 1 p24 , и реагенси за откривање, додека горенаведените ХИВ антигени и ХИВ антитела се сорбираат во различни бунари на плочи за ензимска имуноанализа, а 96-бунарски полистиренски склопувачки или не-склопувачки плочи се користат за сорпција. Пронајдокот обезбедува зголемена чувствителност, поедноставување, исклучување на субјективноста на оценувањето на резултатите. 1 з.п. f-ly, 10 таб., 1 лошо.

Пронајдокот се однесува на полето на биотехнологијата и медицината. Употреба: диференцирано откривање на сите класи на специфични антитела на протеините на вирусот на хумана имунодефициенција 1 и 2, ХИВ 1 група О и ХИВ 1 p24 антиген.

Суштина: добивање на систем за ензимски имуноанализа за идентификација на спектарот на антитела од сите класи на поединечни протеини и ХИВ 1 и 2, ХИВ 1 група О и ХИВ 1 p24 антиген во крвниот серум (плазма), имуноглобулини и крвни продукти со цел да се идентификуваат спектарот на антитела на ХИВ 1 и 2, ХИВ 1 група О, детекција на ХИВ 1 p24 антиген и потврда на позитивни или неодредени скрининг резултати за антитела на ХИВ 1 и 2, ХИВ 1 група О и ХИВ 1 p24 антиген.

ОПИС НА ПРОНАЈДОТ

Лабораториската дијагноза на ХИВ инфекцијата се заснова на три области: а) индикација за ХИВ и неговите компоненти; б) откривање на антитела на ХИВ; в) определување на промени во имунолошкиот систем. Меѓу постојните методи на лабораториска дијагностика, најчести се серолошките методи - откривање на антитела на вирусни антигени.

За откривање на антитела кај ХИВ инфекцијата, главно се користат ензимски имуносорбентна анализа (ELISA) и имуноблотинг (IB). ELISA се заснова на имобилизација на вирусни антигени на плочите, кои ги врзуваат антителата на пациентот, а комплексот антиген-антитела е откриен со помош на моноклонални антитела на глувчето конјугирани со пероксидаза од рен на човечките имуноглобулини Г и М. Методот е доста специфичен и чувствителен и овозможува откривање на вирусни специфични антитела кај 95% од пациентите. Останатите 5% од случаите се јавуваат во раните фази на инфекцијата, кога се уште има малку антитела во крвниот серум или во терминалните фази на болеста, кога телото повеќе не е во можност да синтетизира антитела поради нагло намалување на имунолошкиот систем. Можни се и лажно-позитивни резултати од ELISA, главно кај пациенти со автоимуни и онколошки заболувања, како и кај инфекции предизвикани од вирусот Eshptein-Barr. Во овој случај, постои вкрстена реакција на антитела на ревматоидниот фактор, вирусот Epstein-Barr или на антигенски детерминанти слични на протеините од главниот комплекс на хистокомпатибилност класа 1 и 2 (HLA-4 и DQW3) и имаат способност да се врзат за ХИВ антигени. Лажно позитивни резултати често се забележуваат кај бремени жени и постари лица. Хемолиза, липемија, бактериска контаминација на серумите исто така може да бидат причина за неверодостојни резултати.

Во овој поглед, голем број методи се предложени и користени за тестирање на специфичноста на резултатите од откривањето на антителата. Од овие методи, најчесто користена реакција е „имуно блот“ во модификацијата на „Вестерн блот“. Суштината на методот е како што следува: во првата фаза, ХИВ протеините се одвојуваат по молекуларна тежина со помош на електрофореза на полиакриламид гел. Ова е проследено со електрофоретски трансфер од полиакриламидниот гел до површината на нитроцелулозната мембрана. Антигените пренесени на овој начин се детектираат на мембраната со помош на индиректна анализа: мембраната се инкубира со материјалот за тестирање; содржаните антитела се врзуваат за антигените на ХИВ пренесени во нитроцелулозната мембрана, а потоа мембранските ленти се инкубираат со конјугатот; кога се формира комплекс антиген-антитело, конјугатот се прикачува на него, по миењето од конјугатот и инкубацијата со подлогата, доаѓа до боење на тие делови од нитроцелулоза, каде што настанало формирањето на комплексот антиген-антитело-конјугат. Цртежот покажува примери на позитивни, слабо позитивни и негативни резултати од имуноблот.

Во серумот на лица инфицирани со ХИВ-1 и ХИВ-2, се пронајдени антитела на следните протеини (p) и гликопротеини (gp): Табела А.

Во табела Б се претставени критериумите за проценка на резултатите од имунолотирање препорачани од СЗО и Рускиот центар за превенција и контрола на СИДА.

Врз основа на критериумите на СЗО, серумите се сметаат за позитивни доколку антителата на кои било два пликови на протеините на ХИВ-1 се детектираат со методот ИБ. Ако има реакција само со еден од протеините на обвивката (gp160, gp120, gp41), во комбинација со реакција со други протеини или без него, резултатот се смета за сомнителен. Според Сојузниот научно-методолошки центар на Министерството за здравство на Руската Федерација за превенција и контрола на СИДА, можно е да се толкуваат серумите како позитивни дури и во присуство на антитела на протеин само на еден слој.

Откривањето на антитела на антигенот p24 може да укаже на периодот на почетокот на сероконверзија, бидејќи прво се појавуваат антитела кон овој протеин. Позитивните реакции со gag и pol протеини без реакција со env протеини може да ја одразат фазата на рана сероконверзија, како и да укажуваат на присуство на инфекција со ХИВ-2 или неспецифична реакција.

Употребата на имуноблотинг како експертски метод за дијагностицирање на ХИВ има голем број значајни недостатоци:

1. Неможноста да се потврди откривањето на p24 антигенот на ХИВ 1 во случај на користење на тестови кои истовремено го одредуваат антигенот и антителата на ХИВ, што го прави несоодветно (бесмислено) да се користат скрининг тестови за истовремена детекција на антиген и антитела. на ХИВ (Наредба на Министерството за здравство на Руската Федерација бр. 292 од 30.07. 2001 година: „за да се испитаат донаторите на станиците за трансфузија на крв, неопходно е да се користат системи за тестирање кои откриваат и антиген и антитела на ХИВ“).

2. Детекција на антитела само од класата IgG. Невозможно е целосно да се потврдат позитивните резултати добиени со помош на тестови од 3-та и 4-та генерација (откривање на IgG и IgM антитела).

3. Субјективноста на толкувањето на резултатот од тестот, особено во случаите на „сомнителни“ и „неизвесни“ резултати и во почетните фази на сероконверзија (забележливите ленти на нитроцелулозните мембрани во овие случаи се нејасни, едвај видливи со голо око , и често има несогласувања кога се оценуваат од различни лица).

4. Неможноста за автоматизирана квантитативна евалуација на резултатите од анализата.

5. Пониска чувствителност во споредба со ELISA.

6. Кршливост на складирањето (за време на складирањето, лентите од нитроцелулозната мембрана бледнеат и не можат да бидат објективна потврда за откривање или неоткривање на ХИВ во контроверзни случаи).

7. Тешкотии во поставувањето на реакцијата и складирањето (лентите од нитроцелулозната мембрана се многу кревки и често се кршат).

8. Висока цена на IS комплетите.

Познат реагенс, кој е комплет за истовремено одредување на антигени и антитела на истиот патоген, вклучувајќи го и ХИВ (DE 4236189 F1, 28.04.1994). Сепак, не е откриен тест систем кој овозможува дијагностицирање на ХИВ инфекцијата во различни фази.

Целта на овој пронајдок е да се добие тест систем со кој е можно да се потврдат позитивни или сомнителни резултати од скрининг тестовите за антитела на ХИВ 1 и 2, ХИВ 1 група О и ХИВ 1 p24 антиген со помош на тестови за истовремено откривање на антигени и антитела.

Предложеното техничко решение е постигнато со систем за ензимска имуноанализа за идентификација на спектарот на антитела на вирусот на хумана имунодефициенција (ХИВ) од првиот и вториот тип, првиот тип од групата О и откривање на p24 антиген на вирусот на хумана имунодефициенција од првиот тип p24, се карактеризира со тоа што вклучува имуносорбент базиран на антигени вирус на хумана имунодефициенција, кои се gp41 (env ХИВ-1 и ХИВ-2 група О), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol) , gp36 (env HIV-2), антитела на ХИВ антигенот 1 p24 и реагенси за откривање, каде што горенаведените ХИВ антигени и ХИВ антитела се адсорбираат во различни бунари на плочи за ензимска имуноанализа.

Дополнително, за сорпција се користат полистиренски склопувачки или не-склопувачки плочи за ензимска имуноанализа со 96 бунари.

Техничкиот резултат постигнат со овој пронајдок е можноста за потврдување позитивни резултати за антитела на ХИВ 1 и 2, ХИВ 1 група О и ХИВ 1 p24 антиген, висока чувствителност, можност за автоматско толкување на резултатите, со што се елиминира субјективноста на проценката, леснотијата на извршување на тестот, помалку отколку со постојните трошковни IS комплети.

Ова техничко решение се разликува од познатите:

1. Употреба како плоча за носење на цврста фаза за имунолошки реакции.

2. Истовремена употреба на антитела на стр 24 ХИВ и збир на ХИВ антигени како сорбент.

Пронајдокот е илустриран со следниот пример.

Активниот принцип на развиениот тест систем „DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1“ се:

Имуносорбент - рекомбинантни антигени слични на ХИВ-1 структурни протеини: gp41 (env ХИВ-1 и ХИВ 1 група О), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), ХИВ-2: gp36 (env) и моноклонални Антитела на глувчето кон антигенот ХИВ 1(p24) се адсорбираат посебно на ленти од полистиренска склоплива плоча.

За подготовка на имуносорбенти, користете:

1. ХИВ-1 gp41 е протеин произведен од сојот на E. Coli бр. AHIV 103.

2. ХИВ-1 gp120 е протеин произведен од сојот на E. Coli бр. AHIV 109.

3. ХИВ-1 p24 - протеин произведен од сојот E. Coli бр. AHIV 105.

4. ХИВ-1 p31 - протеин произведен од сојот E. Coli бр. AHIV 108.

5. ХИВ-2 p36 - протеин произведен од сојот E. Coli бр. AHIV 106.

Коњугат 1, лиофилизирани или течни, моноклонални антитела на глушец на антигенот ХИВ1 p24, конјугирани со биотин.

1. Конјугат 2, лиофилизиран или течен, мешавина од рекомбинантни антигени слични на структурните протеини на ХИВ-1: gp41 (env ХИВ-1 и ХИВ 1 група О), gp120 (env), p24 (gag), p31 (po1 ); ХИВ-2: gp36 (env) конјугиран со биотин;

2. Коњугати 3, 4 - лиофилизиран или течен - стрептавидин означен со пероксидаза од рен;

Во текот на прелиминарните студии, беше избран дизајнот на системот за тестирање, беше разработена технологијата за подготовка на неговите компоненти и беа оптимизирани условите за спроведување на ензимската имуноанализа.

При поставување на ELISA во системот за тестирање „DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1“, 25 μl конјугат-1 се додаваат во бунарите на плочата со адсорбирани антитела на p24, и во бунарите со адсорбирани антигени - 25 µl конјугат-2. Шемата за реакција е прикажана подолу. Следно, во секоја бунар се додаваат 25 μl од тест-мострата. Во исто време, во бунарите со антигени, бојата се менува од портокалова во розова, а во бунарот со антитела, од зелена во сива. Смесата се инкубира 45 минути на 37°C на шејкер (или 1 час на 37°C во термостат). Потоа, без миење, во бунарите на таблетата се додаваат 50 μl конјугат-3 за одредување на антигенот p24, а 50 μl конјугат-4 се додаваат во бунарите за одредување на антитела. По инкубација 20 мин на 37°C на шејкер (или 30 мин на 37°C во термостат), плочата се мие и се развива со смесата на подлогата. Вкупно време на реакција 1 час 25 минути (или 1 час 50 минути). Антигенот p24 присутен во примерокот за тестирање се врзува за моноклонални антитела на p24, а специфичните антитела формираат комплекс со рекомбинантни антигени на плочата. Добиениот имунолошки комплекс анти-p24 со p24 е откриен со конјугати против p24-биотин, потоа со стрептавидин-пероксидаза, а имуните комплекси на Ag-HIV со At-HIV се детектираат со конјугат Аг-биотин, потоа со стрептавидин-пероксидаза .

Шема на поставување на реакцијата.

Сметководството за резултатите се врши спектрофотометриски на две бранови должини: 450 /620-680 nm со инструментот поставен на „воздух“. Да ги земеме предвид резултатите на една бранова должина од 450 nm.

Резултатите од анализата се земаат предвид ако просечните вредности на оптичка густина (OD) во бунари со K- не се повеќе од 0,2, во бунари со K+ - не помали од 1,0. ОП крит. пресметано со формулата:

ОП крит. gp41 = сп. вредност OP K-(gp41)+0,15

ОП крит. gp120 = сп. вредност OP K-(gp120)+0,15

ОП крит. стр24 = сп. вредност ОП К-(р24)+0,15

ОП крит. p31 = сп. вредност ОП К-(р31)+0,15

ОП крит. gp36 = сп. вредност OP K-(gp36)+0,15

ОП крит. Ag p24 = сп. вредност OD до- (Ag p24) + 0,04

каде што 0,15 и 0,04 се коефициенти утврдени со методот на статистичка обработка кај производителот. Во процесот на развивање на системот за тестирање, се користеа следново:

1. Примероци од крвен серум од здрави дарители (n=610).

2. Примероци од крвен серум на пациенти со различни заразни болести кои не се поврзани со ХИВ (АРИ, пневмонија, тонзилитис, херпетични и цитомегаловирусни инфекции, сифилис, кламидија, вирусен хепатитис А, Б и Ц (n=224)).

3. Примероци од крвен серум на пациенти со различни незаразни болести - повреди, болести на кардиоваскуларниот систем, онкологија (n=35).

4. Примероци од крвен серум на трудници (n=40).

5. Примероци од крвен серум, серопозитивни во ELISA и потврдени во имуноблот (n=428).

6. Серумски примероци со позитивен резултат добиени во системи за ензимска имуноанализа за истовремено определување на ХИВ 1,2 антитела и p24 антиген, и неодреден резултат на имуноблот (n=123).

7. Внатрешен панел на серуми кои содржат и не содржат антитела на ХИВ 1.2, тестирани на ензимски имуноанализи регистрирани од Министерството за здравство на Руската Федерација и имуноблот (n=21).

8. Стандард „ХИВ 1 АНТИГЕН СТАНДАРД“, „БИО РАД“, Франција, кат. бр. 72217, што е антиген добиен од вирусен лизат.

9. Внатрешниот стандард на претпријатието. Примерок кој содржи p 24 антиген во концентрација од 200 pg/ml, добиен од вирусен лизат и титриран според компанијата „HIV 1 ANTIGEN STANDARD“ „BIO RAD“, Франција, кат. бр.72217.

10. Стандарден панел на серуми кои содржат антитела на вирусот на хумана имунодефициенција од првиот тип (ХИВ 1) - OSO 42-28-212-93-02P, Медико-биолошки сојуз, Новосибирск.

11. Стандарден панел на серуми кои содржат антитела на вирусот на хумана имунодефициенција од вториот тип (ХИВ 2) - OSO-42-28-216-02P, Медико-биолошки сојуз, Новосибирск.

12. Стандарден панел на серуми кои не содржат антитела на вирусот на хумана имунодефициенција од првиот тип и вториот (ХИВ 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, Медико-биолошки сојуз, Новосибирск.

Евалуацијата на чувствителноста на системот за тестирање за откривање на антигенот p24 беше спроведена со користење на Стандардот „HIV I ANTIGEN STANDARD“, „BIO RAD“, Внатрешниот стандард на претпријатието. Користејќи го внатрешниот стандард, беа подготвени 4 последователни двократни разредувања од 40 pg/mL до 5 pg/mL со нормална донаторска плазма без антитела на ХИВ 1, 2 како разредувач. Како критериум за чувствителност беше земена најмала количина на антиген што може да се открие. Добиените податоци се прикажани во табела 1.

За да се процени чувствителноста на системот за тестирање за откривање на специфични антитела, користени се стандардни панели на примероци кои содржат антитела на вирусот на хумана имунодефициенција (ХИВ 1, 2) (OSO 42-28-212-93-02P стр.012, OSO 42-28-216- 02P (ХИВ 2) стр.003).

Добиените податоци се прикажани во табелите 3, 4.

Дијагностичката ефикасност на системот за тестирање „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1“ беше споредена со тест системите „Jenscrin-HIV-Ag/Am“ (Bio-Rad), „DIA-HIV 1/2" (Diaprof-Med), "Vironostics of HIV Uniform II Ag/Am" (Biomerioux), "Recombinant-HIV1.2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1.2 K" (Amercard) , " ХИВ-1, ХИВ-2-ЕЛИСА-Авицена“ (Авицена). За таа цел, серумските примероци од внатрешниот панел беа тестирани во сите наведени тестови. Резултатите претставени во Табела 5 укажуваат на високата дијагностичка ефикасност на „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1“.

Студиите за чувствителност на системот за тестирање „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1“ беа исто така спроведени со крвните серуми на пациенти потврдени во имуноблот како ХИВ позитивни. Беа тестирани вкупно 428 примероци од овие серуми. Добиени се неколку опции за откривање на антитела на различни ХИВ протеини и p24 антиген. Резултатите се прикажани во табела 6.

При тестирање на ХИВ 1 позитивни примероци, 3% од серумите покажаа позитивна реакција со gp36 (env HIV 2). Пратеник/ОПкрит во овие примероци не надминува 2,0. Нашите податоци за вкрстената реактивност на протеините од надворешната обвивка на ХИВ 1 (gp41) и ХИВ 2 (gp36) се конзистентни со податоците од литературата.

Толкување на резултатите

Анализата на тестирање на ХИВ-позитивни серуми и примероци од стандардни и внатрешни панели во „DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1“ овозможи да се развијат критериуми за толкување на резултатите од овој тест. Препорачаните критериуми се прикажани во Табела 7.

Врз основа на овие критериуми, сите примероци од серуми ХИВ позитивни (n=428) беа идентификувани како позитивни во „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1“. Од 16 примероци на стандардната табла која содржи антитела за ХИВ 1, 14 беа утврдени како позитивни, а 2 како неодредени. Сите 8 примероци од стандардниот панел кој содржи антитела за ХИВ 2 беа утврдени како позитивни. Од 10 примероци од внатрешниот панел што содржи антитела за ХИВ 1, 7 беа идентификувани како позитивни, а 3 како неодредени.

Студии за чувствителност на системот за тестирање „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1“ беа исто така спроведени со крвните серуми на пациенти со позитивен резултат во системите за тестирање на ензимски имуноесеј кои истовремено откриваат антитела и антигенот p24 , и неопределен во имуноблот . Испитани се вкупно 123 вакви примероци. Податоците се прикажани во табела 8.

При тестирање на серумите со неодреден резултат на имуноблот (n=123) во „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1“, 72 примероци (58,5%) покажаа позитивен резултат. Од нив, 26 серуми (21,1%) се позитивни само за p24, 20 (16,3%) - само за антитела, 16 (13%) - за p24 со антитела на еден од протеините, 10 (8,1%) - на p24 со антитела на два или повеќе од протеините. Така, само тестирањето за антитела (без детекција на p24) ќе резултира со позитивни 30 примероци (24,4%). Откривањето на антигенот p24 во тестот овозможи да се утврдат како позитивни дополнителни 42 примероци (34,1%).

За да се процени специфичноста на системот за тестирање, користен е стандарден панел од серуми кои не содржат антитела за ХИВ 1, 2 (n=20); примероци од крвен серум од здрави дарители (n=610), примероци од крвен серум од пациенти со различни заразни болести (n=224) кои не се поврзани со ХИВ; примероци од крвен серум на пациенти со различни незаразни болести - повреди, болести на кардиоваскуларниот систем, онкологија (n=35); примероци од крвен серум на трудници (n=40). Тестирани се вкупно 929 примероци. Еден примерок од крвните серуми на здрави дарители покажа лажно позитивен резултат - откриени се антитела на gp41 и p24. 7 примероци од крвни серуми од здрави дарители и 2 примероци од крвни серуми од пациенти со заразни болести кои не се поврзани со ХИВ покажале лажно позитивен резултат за p24.

За да се процени специфичноста на системот за тестирање, користен е стандарден панел со негативни примероци (OSO 42-28-214-94-02p, стр. 009). Специфичноста беше 100%.

Така, студиите покажаа дека специфичноста на системот за тестирање „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1“ е 99% во студијата на примероци од крвен серум на нормални донатори и пациенти со различни инфективни и соматски заболувања.

Добиените податоци ја покажуваат високата дијагностичка ефикасност на развиениот тест систем „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1“. Системот за тестирање може да се користи за откривање на антитела на поединечни протеини од типот 1 и 2 на ХИВ и антигенот ХИВ1 p24 со цел да се потврди позитивен резултат од скрининг со тест системи што откриваат антитела или системи за тестирање кои истовремено откриваат антитела и ХИВ1 p24 антиген. Системот за тестирање може да се користи како алтернативен тест за имуноблот за да се потврдат позитивните резултати, како и да се проучува динамиката на антителата на ХИВ и антигенот p24 во различни фази на инфекција.

ПРИДОБИВКИ ОД ТЕСТОТ

1. Формат на плоча за имуноанализа на конфирматорни ензими

2. Потврден тест кој комбинира ХИВ 1, 2 спектар на антитела и ХИВ 1 p24 антиген

3. Детекција на антитела од сите Ig класи

4. Чувствителноста за откривање на p24 не е помала од 5 pg/ml

5. Ги намалува неодредените резултати во споредба со имуноблот

6. Време на анализа - 1 час 25 минути (имуноблот - од 3 до 20 часа)

7. Визуелна проценка на воведувањето на сите компоненти и примероци.

1. Систем за тестирање ELISA за идентификација на спектарот на антитела на вирусот на хумана имунодефициенција (ХИВ) од првиот и вториот тип, првиот тип од групата О и откривање на антигенот p24 на вирусот на хумана имунодефициенција од првиот тип p24, се карактеризира со тоа што вклучува имуносорбент базиран на антигени на вирусот на имунодефициенција gp41 (env ХИВ-1 и ХИВ-2 група О), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env ХИВ-2), антитела на ХИВ антигенот 1 p24, и реагенси за откривање, додека горенаведените ХИВ антигени и ХИВ антитела се адсорбираат во различни бунари на плочи за ензимска имуноанализа.

2. Систем за тестирање ELISA според барањето 1, назначен со тоа, што за сорпција се користат полистиренски склопувачки или не-склопувачки плочи со 96 бунари за ензимска имуноанализа.

Навременото дијагностицирање на ХИВ инфекцијата станува исклучително важна мерка, бидејќи раниот третман во голема мера може да го одреди понатамошниот развој на болеста и да го продолжи животот на пациентот. Во последните години е забележан значителен напредок на полето на откривање на оваа страшна болест: старите системи за тестирање се заменуваат со понапредни, методите на испитување стануваат подостапни, а нивната точност е значително зголемена.

Во оваа статија ќе зборуваме за современи методи за дијагностицирање на ХИВ инфекцијата, кои се корисни за навремено лекување на овој проблем и одржување на нормалниот квалитет на живот на пациентот.

Методи за дијагностицирање на ХИВ

Во Русија, за дијагноза на ХИВ инфекција, се спроведува стандардна процедура, која вклучува две нивоа:

• ELISA тест систем (скрининг анализа);
• имун blotting (IB).

Може да се користат и други дијагностички методи:

• експресни тестови.

ELISA тест системи

Во првата фаза од дијагнозата, скрининг тест (ELISA) се користи за откривање на инфекција со ХИВ, кој се заснова на ХИВ протеините создадени во лаборатории кои доловуваат специфични антитела произведени во телото како одговор на инфекција. По нивната интеракција со реагенсите (ензимите) на системот за тестирање, бојата на индикаторот се менува. Понатаму, овие промени на бојата се обработуваат на специјална опрема, што го одредува резултатот од извршената анализа.

Ваквите ELISA тестови можат да покажат резултати во рок од неколку недели по воведувањето на ХИВ инфекцијата. Оваа анализа не го одредува присуството на вирусот, туку открива производство на антитела кон него. Понекогаш, во човечкото тело, производството на антитела за ХИВ започнува по 2 недели по инфекцијата, но кај повеќето луѓе тие се произведуваат подоцна, по 3-6 недели.

Постојат четири генерации на ELISA тестови со различна чувствителност. Во последните години почесто се користат тест системи од III и IV генерација, кои се базираат на синтетички пептиди или рекомбинантни протеини и имаат поголема специфичност и точност. Тие може да се користат за дијагностицирање на ХИВ инфекција, следење на преваленцата на ХИВ и обезбедување безбедност при тестирање на донирана крв. Точноста на системите за тестирање ELISA од III и IV генерација е 93-99% (почувствителни се тестовите што се произведуваат во Западна Европа - 99%).

За да се изврши ELISA тест, се земаат 5 ml крв од вената на пациентот. Помеѓу последниот оброк и анализата треба да биде најмалку 8 часа (по правило, се изведува наутро на празен стомак). Таков тест се препорачува да се направи не порано од 3 недели по наводната инфекција (на пример, по незаштитен однос со нов сексуален партнер).

Резултатите од ELISA тестот се добиваат по 2-10 дена:

• негативен резултат: укажува на отсуство на ХИВ инфекција и не бара упатување до специјалист;
• лажно негативен резултат: може да се забележи во раните фази на инфекцијата (до 3 недели), во доцните фази на СИДА со тешка имунолошка супресија и со неправилна подготовка на крв;
• лажно позитивен резултат: може да се забележи кај некои болести и во случај на неправилна подготовка на крв;
• позитивен резултат: укажува на инфекција со ХИВ инфекција, бара ИБ и упатување на пациентот до специјалист во центар за СИДА.

Зошто тестот ELISA може да даде лажно позитивни резултати?

Лажно позитивните резултати од ELISA тестот за ХИВ може да се забележат со неправилна обработка на крвта или кај пациенти со такви состојби и болести:

• мултипен миелом;
• заразни болести предизвикани од вирусот Епштајн-Бар;
• состојба по ;
• автоимуни болести;
• против позадината на бременоста;
• состојба по вакцинацијата.

Од причините опишани погоре, во крвта може да бидат присутни антитела кои не се специфични со вкрстено реагирање, чие производство не е предизвикано од ХИВ инфекција.

Во последниве години, фреквенцијата на лажно позитивни резултати значително се намали поради употребата на системи за тестирање од III и IV генерација, кои содржат почувствителни пептиди и рекомбинантни протеини (тие се синтетизираат со помош на генетски инженеринг ин витро). По почетокот на употребата на ваквите ELISA тестови, фреквенцијата на лажно позитивни резултати значително се намали и изнесува околу 0,02-0,5%.

Лажно позитивен резултат не значи дека некое лице е заразено со ХИВ. Во такви случаи, СЗО препорачува уште еден ELISA тест (задолжителен IV генерација).

Крвта на пациентот се испраќа во референтна или арбитражна лабораторија со ознака „повтори“ и се тестира на систем за тестирање ELISA од IV генерација. Ако резултатот од новата анализа е негативен, тогаш првиот резултат се препознава како погрешен (лажно позитивен) и IB не се спроведува. Ако резултатот е позитивен или сомнителен за време на вториот тест, од пациентот се бара да се подложи на ИБ за 4-6 недели за да се потврди или побие ХИВ инфекцијата.

имун blotting

Дефинитивна дијагноза на ХИВ инфекцијата може да се постави само откако ќе се добие позитивен резултат на имуно-блотинг (IB). За нејзино спроведување се користи лента од нитроцелулоза, на која се применуваат вирусни протеини.

Земањето крв за ИБ се врши од вена. Потоа се подложува на посебен третман и протеините содржани во неговиот серум се одвојуваат во посебен гел според полнењето и молекуларната тежина (манипулацијата се врши на специјална опрема под влијание на електрично поле). Лента од нитроцелулоза се нанесува на гелот од крвниот серум и се врши размачкана („blotting“) во посебна комора. Лентата се обработува и доколку употребените материјали содржат антитела за ХИВ, тие се врзуваат за антигенските ленти на ИБ и се појавуваат како линии.

IB се смета за позитивен ако:

• според американските критериуми за ЦДЦ - има две или три линии gp41, p24, gp120 / gp160 на лентата;
• според американските критериуми на FDA - има две линии p24, p31 и линија gp41 или gp120 / gp160 на лентата.

Во 99,9% од случаите, позитивен резултат на ИБ укажува на ХИВ инфекција.

Во отсуство на линии - IB е негативен.

Кога се идентификуваат линиите со gp160, gp120 и gp41, IB е сомнителен. Таков резултат може да се открие кога:

• онколошки заболувања;
• бременост;
• чести трансфузии на крв.

Во такви случаи, се препорачува да се изврши втора студија користејќи комплет од друга компанија. Ако, по дополнителното ИБ, резултатот останува сомнителен, тогаш е неопходно следење шест месеци (IB се изведува на секои 3 месеци).

полимеразна верижна реакција

ПЦР тестот може да ја открие РНК на вирусот. Неговата чувствителност е доста висока и овозможува откривање на ХИВ инфекцијата веќе 10 дена по инфекцијата. Во некои случаи, PCR може да даде лажно позитивни резултати, бидејќи неговата висока чувствителност може да реагира и на антитела на други инфекции.

Оваа дијагностичка техника е скапа, бара специјална опрема и високо квалификувани специјалисти. Овие причини не дозволуваат да се спроведе при масовно тестирање на населението.

PCR се користи во такви случаи:

• откривање на ХИВ кај новороденчиња кои се родени од мајки инфицирани со ХИВ;
• за откривање на ХИВ во „периодот на прозорецот“ или во случај на сомнителна ИБ;
• за контрола на концентрацијата на ХИВ во крвта;
• за проучување на донаторска крв.

Само со PCR тест, дијагнозата на ХИВ не се поставува, туку се спроведува како дополнителен дијагностички метод за решавање на спорови.

Експресни методи

Една од иновациите во дијагностиката на ХИВ стана брзите тестови, чии резултати може да се проценат за 10-15 минути. Најефикасни и најточни резултати се добиваат со имунохроматографски тестови засновани на принципот на капиларен проток. Тие се специјални ленти на кои се нанесува крв или други тест течности (плунка, урина). Во присуство на антитела на ХИВ, по 10-15 минути, на тестот се појавува обоена и контролна лента - позитивен резултат. Ако резултатот е негативен, се појавува само контролната линија.

Како и кај ELISA тестовите, резултатите од брзиот тест треба да се потврдат со IB анализа. Само тогаш може да се постави дијагноза на ХИВ инфекција.

Постојат експресни комплети за домашно тестирање. Тестот OraSure Technologies1 (САД) е одобрен од FDA, достапен без рецепт и може да се користи за откривање на ХИВ. По тестот, во случај на позитивен резултат, на пациентот му се препорачува да се подложи на преглед во специјализиран центар за да се потврди дијагнозата.

Останатите тестови за домашна употреба сè уште не се одобрени од FDA и нивните резултати може да бидат многу сомнителни.

И покрај фактот дека брзите тестови се инфериорни во однос на точноста на тестовите ELISA од IV генерација, тие се широко користени за дополнително тестирање на популацијата.

Може да се тестирате за ХИВ инфекција во која било поликлиника, Централната регионална болница или во специјализирани центри за СИДА. На територијата на Русија тие се чуваат апсолутно доверливо или анонимно. Секој пациент може да очекува да добие медицински или психолошки совет пред или по анализата. Тестовите за ХИВ ќе треба да плаќате само во комерцијални медицински установи, а во јавните клиники и болници тие се вршат бесплатно.

За информации за тоа како можете да добиете ХИВ инфекција и кои митови постојат за можностите да се заразите, прочитајте

Опис

Обука

Индикации

Толкување на резултатите

Опис

Начин на определување Ензимска имуноанализа (ELISA).

Материјал што се проучуваСерум

Достапна е домашна посета

Комбинирана детекција на антитела на ХИВ типови 1 и 2 и ХИВ p24 антиген, квалитативен тест.

Внимание. Во случај на позитивни и сомнителни реакции, рокот за издавање на резултатот може да се продолжи до 10 работни дена. ХИВ (вирус на хумана имунодефициенција), кој предизвикува СИДА (синдром на стекната имунодефициенција), припаѓа на семејството на ретровируси. Се пренесува од човек на човек преку употреба на контаминирани игли и шприцови за интравенска употреба на дрога или терапевтски процедури, преку сексуален однос, и хетеросексуален и хомосексуален. Пренесувањето на вирусот може да се случи преку трансфузија на заразена крв и нејзини производи, донација на органи или семена течност, кај здравствените работници - кога се повредени од заразени игли или инструменти. ХИВ инфекцијата е можна преку нејзино пренесување од заразена мајка на дете (вертикален пат), иако современите методи на превенција со користење на антиретровирусна терапија, доколку се почитуваат сите препораки, можат да го намалат овој ризик на минимум.

Процесот на интеракција на вирусот со клетката вклучува голем број фази: врзување на вирусот за клетката, негово ослободување од обвивката, пенетрација во цитоплазмата, синтеза на ДНК од вирусна РНК и интеграција на вирусна ДНК во геномот. на клетката домаќин. По ова започнува латентната фаза на инфекција. Во оваа состојба, провиралната ДНК може да постои некое време без да покажува активност и без да влијае на виталната активност на клетката домаќин. Сè додека не постои експресија на вирусни протеини, нема имунолошки одговор на вирусот. Антителата на ХИВ, кои го карактеризираат имунолошкиот одговор на телото, се појавуваат по активирањето на вирусната ДНК и почетокот на активната репродукција на вирусот. Времетраењето на латентниот период зависи од повеќе фактори, вклучувајќи ги и индивидуалните генетски карактеристики на организмот.

Антителата на ХИВ може да се појават почнувајќи од втората недела по инфекцијата; нивната содржина се зголемува во рок од 2-4 недели и опстојува многу години. Кај 90-95% од заразените се појавуваат во првите три месеци по инфекцијата, кај 5-9% - во периодот од три до шест месеци, кај 0,5-1% - подоцна.

Во првите недели од инфекцијата, дури и пред појавата на антитела на вирусот (т.е. пред сероконверзија), присуството на антигени на ХИВ, вклучувајќи го и неговиот капсид протеин p24, може да се открие во примероците од серумот или плазмата. Подоцна, по сероконверзија, обично станува незабележливо.

Комбинираните анализи од четвртата генерација, како што е ХИВ Ag/Ab Комбо тестот (Архитект, Абот), ги откриваат и антителата на ХИВ тип 1 и 2 и антигенот ХИВ p24, овозможувајќи рано откривање на инфекцијата. Посебните карактеристики на скрининг тестот што се користи во лабораторијата INVITRO за откривање на ХИВ инфекцијата ја вклучуваат високата специфичност на студијата (> 99,5%); 100% чувствителност на анализата на антитела карактеристични за периодот на сероконверзија, а чувствителноста на тестот на p24 антигенот е околу 18 pg/ml.

Постапката за лабораториско тестирање за ХИВ е строго регулирана со наредби на Министерството за здравство на Руската Федерација и вклучува фаза на скрининг (скрининг) студија за присуство на антитела на ХИВ со методи на ензимска имуноанализа (ELISA) одобрени за употреба. , и фаза на верификација (потврдувачка) подетална студија во лабораторијата на градскиот центар за СИДА. Треба да се напомене дека дури и најдобрите системи за скрининг ELISA не гарантираат 100% специфичност, односно, постои одредена можност за добивање неспецифични, лажно позитивни резултати поврзани со карактеристиките на крвниот серум на пациентот. Затоа, позитивен резултат од скрининг ELISA може да не се потврди во потврдните тестови, по што на пациентот ќе му се даде негативен или неодреден резултат. Ако резултатот од потврдната студија е неодреден, тестирањето треба да се повтори во динамика за 2-3 недели.

Лабораториска дијагноза на ХИВ инфекција кај деца родени од мајки инфицирани со ХИВ има свои карактеристики. Мајчините антитела кон ХИВ (класа IgG) можат да циркулираат во нивната крв до 18 месеци од моментот на раѓање. Отсуството на антитела за ХИВ кај новороденчињата не значи дека вирусот не ја преминал плацентарната бариера. Децата на мајки инфицирани со ХИВ подлежат на лабораториски дијагностички преглед во рок од 36 месеци по раѓањето.

Обука

Не е потребна посебна подготовка. Земањето крв се препорачува не порано од 4 часа по последниот оброк. Може да се најдат општи препораки за подготовка за истражување. Препорачливо е да се спроведе тест за откривање на антиген и антитела на ХИВ не порано од две недели по можна инфекција, повторувајќи го по три и шест недели во случај на негативен резултат. Регистрацијата на апликации за истражување во ИНВИТРО ДОО се врши според пасош или документ што го заменува (миграциона карта, привремена регистрација во местото на живеење, потврда за сервисер, потврда од канцеларијата за пасоши во случај на губење на пасош, картичка за регистрација од хотел). Презентираниот документ мора да содржи информации за привремена или трајна регистрација на територијата на Руската Федерација и фотографија. Во отсуство на пасош (документ што го заменува), пациентот има право да поднесе анонимна апликација за испорака на биоматеријал. Со анонимен преглед, на апликацијата и на примерокот од биоматеријалот добиен од клиентот им се доделува број кој е познат само на пациентот и медицинскиот персонал кој ја направил нарачката. ! Резултатите од студиите извршени анонимно не можат да се поднесат на хоспитализација, стручни прегледи и не се предмет на регистрација во ORUIB.

Индикации за назначување

• Зголемување на лимфните јазли во повеќе од две области.
• Леукопенија со лимфопенија.
• Ноќно потење.
• Ненадејно губење на тежината од непозната причина.
• Дијареа повеќе од три недели од непозната причина.
• Треска од непозната причина.
• Планирање за бременост.
• Предоперативна подготовка, хоспитализација.
• Идентификација на следните инфекции или нивни комбинации: туберкулоза, манифестирана токсоплазмоза, често рекурентна херпесвирусна инфекција, кандидијаза на внатрешните органи, повторена херпес-зостер невралгија, пневмонија предизвикана од микоплазми, пневмоцистис или легионела.
• Капошиов сарком на млада возраст.
• Неврзан секс.

Толкување на резултатите

Толкувањето на резултатите од тестот содржи информации за лекарот што посетува и не е дијагноза. Информациите во овој дел не треба да се користат за самодијагностика или само-лекување. Точна дијагноза ја поставува лекарот, користејќи ги и резултатите од овој преглед и потребните информации од други извори: историја, резултати од други прегледи итн.

Мерни единици во Самостојна лабораторија INVITRO: квалитативен тест. Форма на презентација на резултатите: во отсуство на антитела на ХИВ 1 и 2 и антигенот p24, одговорот е „негативен“. Во случај на откривање на антитела на ХИВ или антиген во скрининг ELISA тестот, примерокот од серумот се испраќа на анализа со метод на потврден имуноблот во градскиот центар за СИДА, со што се верификуваат позитивни и неодредени резултати.

Позитивен резултат:

1. ХИВ инфекција;
2. лажно позитивен резултат кој бара повторени или дополнителни студии*);
3. студијата не е информативна за деца под 18 месеци родени од мајки инфицирани со ХИВ.

*Специфичноста на системот за скрининг тест ХИВ 1 и 2 антитела и ХИВ 1 и 2 антигенот (HIV Ag/Ab Combo, Abbott) се проценува од производителот на реагенсот на околу 99,6% и кај општата популација и кај групата пациенти со потенцијални интерференции (инфекции HBV, HCV, рубеола, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E.coli, Chl.trach., итн., автоимуни патологии (вклучувајќи ревматоиден артритис, присуство на антинуклеарни антитела), бременост, покачена нивоа на IgG, IgM, моноклонална гамопатија, хемодијализа, повеќекратни трансфузии на крв).

ELISA (ензимски имуносорбентна анализа, ELISA - англиски) влезе во животот на практичната медицина некаде на друго место во 60-тите години на минатиот век. Неговата почетна задача беше хистолошки истражувања за научни цели, кои се сведуваа на пребарување и идентификација на антигенската структура на клетките на живиот организам.

Методот ELISA се заснова на интеракцијата на специфични (AT) и сродни антигени (AG) со формирање на комплекс антиген-антитело, кој се открива со помош на ензим. Овој факт ги наведе научниците до идејата дека методот може да се користи за дијагностички цели за да се идентификуваат специфични имуноглобулини од различни класи вклучени во имунолошкиот одговор на одредена инфекција. И тоа беше пробив во клиничката лабораториска дијагностика!

Методот почна активно да се користи само во раните 80-ти, а потоа главно во специјализирани институции. Центрите и станиците за трансфузија на крв, заразните болести и венеролошките болници беа снабдени со првите ензимски имуноанализатори, бидејќи страшната СИДА, родена на африканскиот континент, се појави на хоризонтот со нас и веднаш им се придружи на „старите“ инфекции, бараа итни мерки за дијагностицирање и потрага по терапевтски лекови кои го погодуваат.

Опсег на методот ELISA

Можностите за ензимска имуноанализа се навистина обемни.Сега е тешко да се замисли како може да се направи без такви студии, кои се користат буквално во сите гранки на медицината. Се чини дека ELISA може да направи во онкологијата? Излегува дека може. И многу. Способноста на анализата да најде маркери карактеристични за одредени видови малигни неоплазми лежи во основата на раното откривање на туморот, кога тој сè уште не е откриен со други методи поради неговата мала големина.

Современата клиничка лабораториска дијагностика (CDL), покрај туморските маркери, има значителен арсенал на панели за ELISA и ги користи за дијагностицирање на различни патолошки состојби (инфективни процеси, хормонални нарушувања) и следење на фармацевтските лекови со цел да се идентификува нивниот ефект врз пациентот. тело и, патем, не само човечки. Во моментов, ензимскиот имуноанализа е широко користен во ветеринарната служба, бидејќи „нашите помали браќа“ се исто така подложни на многу болести, од кои, понекогаш, многу страдаат.

Така, ELISA, поради неговата чувствителност и специфичност, може да одреди од примерок од крв земен од вена:

• Хормонален статус (тироидни и надбубрежни хормони, полови хормони);
• Присуство на вирусна и бактериска инфекција (ХИВ, Б и Ц, кламидија, сифилис и, и, како и многу други болести предизвикани од патогени микроорганизми);
• Траги од витална активност на микроорганизми кои го иницираа инфективниот процес, кој заврши успешно и се пресели во фаза на формирање на имунолошки одговор на овој патоген. Таквите траги, односно антителата, во многу случаи остануваат да циркулираат во крвта доживотно, што го штити човекот од повторна инфекција.

Која е суштината на АКО?

Методот на ензимска имуноанализа овозможува да се утврди не само присуството на самиот патоген (квалитативна анализа), туку и неговата квантитативна содржина во крвниот серум на пациентот.

Вирусна или бактериска доза значително влијае на текот на инфективниот процес и неговиот исход, така што квантитативната анализа игра важна улога во дијагнозата и третманот на болестите во различни форми и фази.

Сепак, знаејќи ги ензимските имуносорбентни анализи како метод на ELISA, не ни размислуваме како тој успева да опфати толку широк спектар на микроорганизми кои ја населуваат нашата планета, од кои многу претставуваат директна закана за здравјето и животот на луѓето и животни. Факт е дека ELISA има многу опции (неконкурентни и конкурентни - директни и индиректни), од кои секоја го решава својот проблем и, на тој начин, овозможува насочено пребарување.

За откривање на имуноглобулини од една или друга класа, се користи традиционален полистиренски панел (таблета) со 96 бунари, во чии бунари се концентрираат адсорбираните рекомбинантни протеини во цврста фаза. Антителата или антигените што влегле во бунарот со крвниот серум наоѓаат „познат“ предмет и формираат комплекс со него (AG - AT), кој, фиксиран од ензимскиот конјугат, ќе се манифестира како промена на бојата на бунарот. при читање на резултатите.

Ензимската имуноанализа се изведува на тест системи со одредена специфичност, направени во специјални лаборатории и опремени со сите потребни компоненти за реакција. Студиите може да се спроведат со помош на подлошки („подлошки“) и спектрофотометри за читање, каде што е вклучен најголемиот дел од физичката работа. На целосно автоматски машини, кои го ослободуваат лабораторискиот асистент од монотоно капнување, перење и други рутински задачи, се разбира, е побрзо и поудобно за работа, но не сите лаборатории можат да си дозволат таков луксуз и да продолжат да работат на старомоден начин. - на полуавтоматски уреди.

Толкувањето на резултатите од ELISA е во надлежност на докторот по лабораториска дијагностика, додека нужно е земена предвид способноста својствена за речиси сите имунохемиски реакции да дадат лажно позитивни или лажно негативни одговори.

Видео: модерна ензимска имуноанализа

Резултатите од ELISA на примерот на сифилис

ELISA е погодна за откривање на сите форми, и, дополнително, се користи во скрининг студиите. За анализа, се користи венска крв на пациентот земена на празен стомак. Во работата се користат плочи со одредена специфичност (AT класи A, M, G) или тотални антитела.

Имајќи предвид дека антителата кај сифилисот се произведуваат во специфична секвенца, ELISA може лесно да одговори на прашањето кога настанала инфекцијата и во која фаза е процесот, а декодирањето на добиените резултати може да се претстави во следната форма:

• IgM укажува на времетраење на инфективниот процес (може да се појави за време на егзацербација на хронични воспалителни болести);
• IgA наведуваат дека инфекцијата се случила пред повеќе од еден месец;
• IgG покажува дека инфекцијата е во полн замав или неодамнешен третман, што лесно се открива при собирање на анамнезата.

При тестирање за сифилис, негативните бунари (и негативната контрола) ќе останат безбојни, додека позитивните (како позитивната контрола) ќе покажат светло жолта боја поради промената на бојата на хромогенот додаден за време на тестот. Сепак, интензитетот на бојата не секогаш се совпаѓа со контролата, односно може да биде малку побледа или малку жолтеникава. Ова се сомнителни резултати, кои, по правило, се предмет на преиспитување со задолжително разгледување на квантитативните индикатори добиени на спектрофотометар, но генерално, бојата е директно пропорционална со бројот на имуни комплекси (антигени и антитела поврзани со едни со други).

Највозбудливата ензимска имуноанализа - ELISA за ХИВ

Анализата за, можеби, повеќе од другите е од интерес за широк опсег на населението, бидејќи сè уште не може со сигурност да се каже дека многу социјални проблеми (проституција, зависност од дрога итн.) исчезнале. За жал, ХИВ влијае не само на овие делови од човечкото општество, туку може да се заразите под различни околности кои не се поврзани со сексуална промискуитетност или употреба на дрога. Но, ако има потреба од тест за ХИВ, тогаш не треба да се плашите дека сите околу ќе дознаат за посета на таква лабораторија. Сега луѓето заразени со ХИВ се заштитени со закон, а оние кои се сомневаат можат да се обратат до анонимни канцеларии каде што можат да го решат проблемот без страв од публицитет и осуда.

Ензимската имуноанализа што се користи за дијагностицирање на ХИВ инфекцијата е една од примарните стандардни студии, која, сепак, бара посебни услови, бидејќи темата е многу чувствителна.

Има смисла да се спроведе ELISA за ХИВ по сексуален контакт, трансфузија на крв, други медицински процедури кои вклучуваат инфекција и на крајот од периодот на инкубација („серонегативен прозорец“), но треба да се има на ум дека овој временски период не е константна. Може да заврши за 14-30 дена или може да трае до шест месеци, така што просечната вредност се смета за интервал од 45 до 90 дена. За ХИВ се дарува крв на ист начин како и за други инфекции - од вена на празен стомак. Резултатите ќе бидат готови во зависност од акумулацијата на материјалот во лабораторијата и нејзиниот обем на работа (од 2 до 10 дена), иако повеќето лаборатории даваат одговор истиот ден или наредниот ден.

Што може да се очекува од резултатите од ХИВ?

ELISA за ХИВ инфекција открива антитела на два типа на вирус: ХИВ-1 (почест во Русија и други европски и азиски земји) и ХИВ-2 (почест во Западна Африка).

Задачата на ХИВ ELISA е да бара антитела од класа Г, кои се детектирани на сите системи за тестирање, но во подоцнежен период, и антитела од класа А и М, откриени на комплетите за рекомбинантни тестови од новата генерација, кои овозможуваат откривање на антитела кај најраните фази (периодот на инкубација е серонегативен прозорец). Следниве одговори може да се очекуваат од ELISA:

1. Примарен позитивен резултат: крвта е предмет на повторна проверка на систем за тестирање од ист тип, но, ако е можно, од различна серија и од друго лице (лабораториски асистент);
2. Повтореното (+) вклучува ново земање крв од пациент со негово истражување слично на примарната анализа;
3. Следниот позитивен резултат е предмет на референтна анализа, која користи високо специфични тест комплети (2-3 парчиња);
4. Позитивен резултат во двата (или три) системи се испраќа за имуноблотирање (истата ELISA, но се изведува поединечно на тест комплети со особено висока специфичност).

Заклучокот за ХИВ инфекцијата се прави само врз основа на имуноблотирање. Со заразеното лице се води разговор во целосна доверливост. Откривањето медицински тајни во Русија, како и во други земји, подлежи на кривична казна.

Анализите за кламидија и цитомегаловирус со ензимски имуноесеј, исто така, добија особена популарност, поради фактот што тие ви овозможуваат да го одредите времето на инфекција, фазата на болеста и ефективноста на терапевтските мерки.

За време на воведувањето, исто така е можно да се набљудува појавата на антитела од различни класи.во различни фази на патолошка состојба предизвикана од инфективен агенс:

• IgM може да се открие веќе седум дена по инфекцијата;
• IgA укажува на тоа дека инфекцијата живее во телото повеќе од еден месец;
• IgG ја потврдува дијагнозата на кламидија, помага да се следи третманот и да се утврди неговата ефикасност. Треба да се напомене дека антителата од класа G остануваат и циркулираат во телото без оглед на времетраењето на болеста, затоа, за правилно толкување на анализата, треба да се земат предвид референтните вредности​​(норми), кои, со начинот, се различни за секој CDL: земајќи го предвид брендот на системот за тестирање и специфичноста на реагенсите вклучени во комплетот. Нормалните вредности се внесуваат во формуларот веднаш до резултатот ELISA.

Што се однесува до, тука е малку поинаку:Антителата од класа М се појавуваат за околу месец и половина, односно позитивниот резултат (IgM +) станува во фаза на примарна инфекција или при реактивирање на латентна инфекција и останува таков од 4 месеци до шест месеци.

Присуството на антитела од класа G е карактеристично за почеток на примарна акутна инфекција или реинфекција. Во анализата се наведува дека вирусот е присутен, но не дава информации за фазата на заразниот процес. Во меѓувреме, одредувањето на нормата на титарот на IgG, исто така, предизвикува тешкотии, бидејќи тоа целосно зависи од имунолошкиот статус на одредена личност, кој, сепак, се утврдува со откривање на имуноглобулини од класа G. Со оглед на ваквото однесување на антителата, при дијагностицирање на CMVI, станува неопходно да се процени способноста на антителата од класа G да комуницираат со CMV, со цел да се „неутрализира“ подоцна (AT avidity). Во почетната фаза на болеста, IgG се врзуваат многу слабо за антигените на вирусот (ниска авидност) и дури тогаш почнуваат да покажуваат активност, затоа, можеме да зборуваме за зголемување на страста на антителата.

За предностите на ензимската имуноанализа можеме да зборуваме долго време, бидејќи овој метод успеа да реши многу дијагностички проблеми користејќи само венска крв. Нема потреба од долги чекања, грижи и проблеми со земање материјал за истражување. Дополнително, системите за тестирање за ELISA продолжуваат да се подобруваат и не е далеку денот кога тестот ќе даде 100% сигурност на резултатот.

Видео: едукативен филм на Московскиот државен медицински универзитет. Сеченов за основите на ELISA