Mga pamamaraan ng pananaliksik sa virological sa mga nakakahawang sakit. Virological studies Backup gamit ang Time Machine

Mayroong tatlong pangunahing diskarte sa pagsusuri sa laboratoryo ng mga impeksyon sa viral.

1) direktang pagsusuri ng materyal para sa pagkakaroon ng isang viral antigen o mga nucleic acid;

2) paghihiwalay at pagkakakilanlan ng virus mula sa klinikal na materyal;

Mga direktang pamamaraan para sa pag-diagnose ng klinikal na materyal

Ang mga direktang pamamaraan ay mga pamamaraan na nagpapahintulot sa pagtuklas ng isang virus, viral antigen o viral nucleic acid (NA) nang direkta sa klinikal na materyal, iyon ay, sila ang pinakamabilis (2-24 na oras).

Electron microscopy (EM). Gamit ang pamamaraang ito, maaari mong makita ang aktwal na virus.

immune electron microscopy (IEM), na gumagamit ng mga partikular na antibodies sa mga virus. Bilang resulta ng pakikipag-ugnayan ng mga antibodies sa mga virus, ang mga complex ay nabuo, na, pagkatapos ng negatibong paglamlam, ay mas madaling napansin.

Immunofluorescence reaction (RIF). Ang pamamaraan ay batay sa paggamit ng dye-bound antibodies

Ang paraan ng RIF ay malawakang ginagamit upang mabilis na matukoy ang etiology ng acute respiratory viral infection sa pagsusuri ng mga smears-print mula sa mauhog lamad ng upper respiratory tract.

Enzyme immunoassay (ELISA). Ang mga pamamaraan ng immunoassay ng enzyme para sa pagtukoy ng mga viral antigen ay sa prinsipyo ay katulad ng RIF, ngunit nakabatay sa pag-label ng mga antibodies na may mga enzyme sa halip na mga tina.

Radioimmunoassay (RIA). Ang pamamaraan ay batay sa pag-label ng mga antibodies na may radioisotopes, na nagsisiguro ng mataas na sensitivity sa pagtukoy ng viral antigen.

Mga pamamaraan ng molekular. Sa una, ang lubos na tiyak na paraan ng NA hybridization ay itinuturing na isang klasikong pamamaraan para sa pag-detect ng viral genome, ngunit ngayon ang paghihiwalay ng mga genome ng virus gamit ang polymerase chain reaction (PCR) ay lalong ginagamit.

Molecular hybridization ng mga nucleic acid. Ang pamamaraan ay batay sa hybridization ng mga pantulong na strands ng DNA o RNA na may pagbuo ng mga double-stranded na istruktura at sa kanilang pagtuklas.

Ang PCR ay batay sa prinsipyo ng natural na pagtitiklop ng DNA. Ang kakanyahan ng pamamaraan ay paulit-ulit na pag-uulit ng mga cycle ng synthesis (amplification) ng isang virus-specific DNA sequence gamit ang isang thermostable Taq DNA polymerase at dalawang partikular na primer - ang tinatawag na mga primer.

Ang mga cytological na pamamaraan ay kasalukuyang may limitadong halaga ng diagnostic, ngunit dapat pa ring gamitin sa ilang mga impeksyon. Ang mga materyales sa autopsy, biopsy, smear ay sinusuri, na, pagkatapos ng naaangkop na pagproseso, ay nabahiran at sinusuri sa ilalim ng mikroskopyo.

Para sa matagumpay na paghihiwalay ng mga virus, ang klinikal na materyal ay dapat kunin alinsunod sa pathogenesis ng pinaghihinalaang sakit at sa lalong madaling panahon.

Bilang isang tuntunin, kunin ang:

- sa kaso ng mga impeksyon sa paghinga - nasopharyngeal lavage;

- may mga impeksyon sa enterovirus - flushing at feces (reo-, enteroviruses);

- na may mga sugat sa balat at mauhog na lamad - mga scrapings, ang mga nilalaman ng mga vesicle (herpes, chicken pox);

- may mga impeksyong exanthemic - pamunas (tigdas, rubella);

- sa mga impeksyon sa arbovirus - dugo, cerebrospinal fluid.

Ang mga cell culture, mga hayop sa laboratoryo, mga embryo ng manok ay ginagamit upang ihiwalay ang mga virus. Ang proseso ay mahaba, kung minsan ay nangangailangan ng ilang mga sipi, bago matukoy at matukoy ang virus gamit ang isa o higit pang mga pamamaraan - sa neutralization test (RN), RIF, ELISA o PCR.

Serodiagnostics

Ang mga serological diagnostic na batay sa reaksyon ng antigen-antibody ay maaaring gamitin upang matukoy ang pareho, at gumaganap ng isang papel sa pagtukoy ng etiology ng isang impeksyon sa viral kahit na may mga negatibong resulta ng paghihiwalay ng virus.

Ang RSK ay isa sa mga tradisyunal na serological na pagsusuri at ginagamit upang masuri ang maraming mga impeksyon sa viral. Dalawang sistema ang nakikibahagi sa reaksyon: mga antibodies ng serum ng pasyente + karaniwang virus at mga erythrocytes ng tupa + mga antibodies sa kanila, pati na rin ang isang titrated na pandagdag. Kung magkatugma ang mga antibodies at ang virus, ang kumplikadong ito ay nagbubuklod ng komplemento at ang lysis ng mga erythrocyte ng tupa ay hindi mangyayari (positibong reaksyon). Sa isang negatibong RSC, ang pandagdag ay nag-aambag sa lysis ng mga erythrocytes. Ang kawalan ng pamamaraan ay ang hindi sapat na mataas na sensitivity nito at ang kahirapan sa pag-standardize ng mga reagents. Ang IF method, tulad ng ELISA, ay ginagamit upang matukoy ang mga antibodies sa serum.

Mga pamamaraan ng pananaliksik sa virological- mga pamamaraan para sa pag-aaral ng biology ng mga virus at ang kanilang pagkakakilanlan. Sa virology, ang mga pamamaraan ng molecular biology ay malawakang ginagamit, sa tulong kung saan posible na maitaguyod ang molekular na istraktura ng mga particle ng viral, kung paano sila tumagos sa cell at ang mga tampok ng pagpaparami ng mga virus, ang pangunahing istraktura ng mga viral nucleic acid. at mga protina. Ang mga pamamaraan para sa pagtukoy ng pagkakasunud-sunod ng mga bumubuo ng mga elemento ng viral nucleic acid at protina amino acids ay binuo. Nagiging posible na iugnay ang mga pag-andar ng mga nucleic acid at ang mga protina na kanilang na-encode sa pagkakasunud-sunod ng nucleotide at upang maitaguyod ang mga sanhi ng mga proseso ng intracellular na gumaganap ng mahalagang papel sa impeksyon ng e-virus.

Ang mga pamamaraan ng pananaliksik sa virological ay batay din sa mga proseso ng immunological (pakikipag-ugnayan ng antigen sa mga antibodies), mga biological na katangian ng virus (kakayahang mag-hemagglutinate, hemolysis, aktibidad ng enzymatic), mga tampok ng pakikipag-ugnayan ng virus sa host cell (ang likas na katangian ng cytopathic epekto, ang pagbuo ng intracellular inclusions, atbp.) .

Sa pagsusuri ng mga impeksyon sa viral, sa paglilinang, paghihiwalay at pagkakakilanlan ng mga virus, pati na rin sa paghahanda ng mga paghahanda ng bakuna, ang paraan ng tissue at cell culture ay malawakang ginagamit. Ginagamit ang pangunahin, pangalawa, matatag na tuluy-tuloy at diploid na mga kultura ng cell. Ang mga pangunahing kultura ay nakuha sa pamamagitan ng dispersing tissue na may proteolytic enzymes (trypsin, collagenase). Ang pinagmulan ng mga selula ay maaaring mga tisyu at organo (mas madalas na bato) ng mga embryo ng tao at hayop. Ang isang suspensyon ng mga cell sa isang nutrient medium ay inilalagay sa tinatawag na mga kutson, bote o Petri dish, kung saan, pagkatapos na ikabit sa ibabaw ng sisidlan, ang mga selula ay nagsisimulang dumami. Para sa impeksyon sa virus, karaniwang ginagamit ang isang cell monolayer. Ang nutrient liquid ay pinatuyo, ang viral suspension ay ipinakilala sa ilang mga dilution, at pagkatapos makipag-ugnay sa mga cell, ang sariwang nutrient medium ay idinagdag, kadalasang walang suwero.

Ang mga cell mula sa karamihan sa mga pangunahing kultura ay maaaring i-subculture at tinutukoy bilang pangalawang kultura. Sa karagdagang pagpasa ng mga cell, ang isang populasyon ng fibroblast-like na mga cell ay nabuo, na may kakayahang mabilis na pagpaparami, karamihan sa mga ito ay nagpapanatili ng orihinal na hanay ng mga chromosome. Ito ang mga tinatawag na diploid cells. Sa serial cultivation ng mga cell, ang matatag na tuluy-tuloy na mga kultura ng cell ay nakuha. Sa panahon ng mga sipi, lumilitaw ang mabilis na paghahati ng mga homogenous na selula na may heteroploid na hanay ng mga chromosome. Ang mga matatag na linya ng cell ay maaaring monolayer at suspension. Ang mga kultura ng monolayer ay lumalaki sa anyo ng isang tuluy-tuloy na layer sa ibabaw ng salamin, ang mga kultura ng suspensyon ay lumalaki sa anyo ng mga suspensyon sa iba't ibang mga sisidlan gamit ang mga agitator. Mayroong higit sa 400 cell line na nagmula sa 40 iba't ibang uri ng hayop (kabilang ang mga primata, ibon, reptilya, amphibian, isda, insekto) at mga tao.

Ang mga piraso ng mga indibidwal na organo at tisyu (mga kultura ng organ) ay maaaring linangin sa artipisyal na nutrient media. Ang mga uri ng kulturang ito ay nagpapanatili ng istraktura ng tissue, na kung saan ay lalong mahalaga para sa paghihiwalay at pagpasa ng mga virus na hindi dumarami sa mga hindi nakikilalang tissue culture (halimbawa, mga coronavirus).

Sa mga nahawaang cell culture, ang mga virus ay maaaring matukoy sa pamamagitan ng pagbabago sa cell morphology, cytopathic action, na maaaring tiyak, ang hitsura ng mga inklusyon, sa pamamagitan ng pagtukoy ng mga viral antigen sa cell at sa fluid ng kultura; pagpapasiya ng mga biological na katangian ng viral progeny sa culture fluid at titration ng mga virus sa tissue culture, chick embryo o sensitibong hayop; sa pamamagitan ng pagtuklas ng mga indibidwal na viral nucleic acid sa mga cell sa pamamagitan ng molecular hybridization o mga kumpol ng nucleic acid sa pamamagitan ng cytochemical method gamit ang fluorescent microscopy.

Ang paghihiwalay ng mga virus ay isang matrabaho at mahabang proseso. Isinasagawa ito upang matukoy ang uri o variant ng virus na umiikot sa populasyon (halimbawa, upang matukoy ang serovariant ng virus a, ligaw o bakuna na strain ng virus a, atbp.); sa mga kaso kung saan kinakailangan na magsagawa ng mga kagyat na hakbang sa epidemiological; kapag lumitaw ang mga bagong uri o variant ng mga virus; kung kinakailangan, kumpirmahin ang paunang pagsusuri; para sa indikasyon ng mga virus sa mga bagay sa kapaligiran. Kapag naghihiwalay ng mga virus, ang posibilidad ng kanilang pagtitiyaga sa katawan ng tao, pati na rin ang paglitaw ng magkahalong impeksiyon na dulot ng dalawa o higit pang mga virus, ay isinasaalang-alang. Ang isang genetically homogenous na populasyon ng isang virus na nakuha mula sa isang solong virion ay tinatawag na isang viral clone, at ang proseso ng pagkuha nito ay tinatawag na cloning.

ang pagbuo ng mga symplast at syncytia, ang pagtuklas ng mga intracellular inclusions, pati na rin ang isang tiyak na antigen na nakita gamit ang immunofluorescence, hemadsorption, hemagglutination (sa hemagglutinating virus), atbp. Ang mga palatandaang ito ay makikita lamang pagkatapos ng 2-3 mga sipi ng virus.

Para sa paghihiwalay ng isang bilang ng mga virus, halimbawa mga virus a, ginagamit ang mga embryo ng manok, para sa paghihiwalay ng ilang mga virus ng Coxsackie at isang bilang ng mga arbovirus - mga bagong panganak na daga. Ang pagkilala sa mga nakahiwalay na virus ay isinasagawa gamit ang mga serological test at iba pang mga pamamaraan.

Kapag nagtatrabaho sa mga virus, tinutukoy ang kanilang titer. Ang titration ng mga virus ay kadalasang isinasagawa sa tissue culture, na tinutukoy ang pinakamataas na pagbabanto ng fluid na naglalaman ng virus, kung saan nangyayari ang pagkabulok ng tissue, ang mga inklusyon at mga antigen na partikular sa virus ay nabuo. Ang paraan ng plaka ay maaaring gamitin upang titrate ang isang bilang ng mga virus. Ang mga plaque, o mga negatibong kolonya ng mga virus, ay foci ng mga cell na nasira ng virus ng isang solong layer na tissue culture sa ilalim ng agar coating. Ang pagbilang ng kolonya ay nagbibigay-daan sa isang quantitative analysis ng nakakahawang aktibidad ng mga virus sa batayan na ang isang nakakahawang partikulo ng virus ay bumubuo ng isang plaka. Nakikilala ang mga plake sa pamamagitan ng paglamlam sa kultura ng mahahalagang tina, kadalasang neutral na pula; ang mga plake ay hindi sumisipsip sa pangulay at samakatuwid ay nakikita bilang mga light spot laban sa background ng mga stained living cell. Ang titer ng virus ay ipinahayag bilang ang bilang ng mga yunit na bumubuo ng plaka sa 1 ml.

Ang paglilinis at konsentrasyon ng mga virus ay karaniwang isinasagawa sa pamamagitan ng differential ultracentrifugation na sinusundan ng centrifugation sa concentration o density gradients. Upang linisin ang mga virus, ginagamit ang mga immunological na pamamaraan, chromatography ng palitan ng ion, immunosorbents, atbp.

Kasama sa pagsusuri sa laboratoryo ng mga impeksyon sa viral ang pagtuklas ng pathogen o mga bahagi nito sa klinikal na materyal; paghihiwalay ng virus mula sa materyal na ito; serodiagnosis. Ang pagpili ng paraan ng diagnostic ng laboratoryo sa bawat indibidwal na kaso ay depende sa likas na katangian ng sakit, ang panahon ng sakit at ang mga kakayahan ng laboratoryo. Ang modernong diagnosis ng mga impeksyon sa viral ay batay sa mga express na pamamaraan na nagbibigay-daan sa iyong makakuha ng sagot ilang oras pagkatapos kumuha ng klinikal na materyal sa mga unang yugto pagkatapos ng sakit. Kabilang dito ang electron at immune electron microscopy,

pati na rin ang immunofluorescence, molecular hybridization method, detection ng lgM class antibodies, atbp.

Ang electron microscopy ng mga negatibong batik na mga virus ay nagbibigay-daan sa pagkita ng kaibahan ng mga virus at pagtukoy ng kanilang konsentrasyon. Ang paggamit ng electron microscopy sa diagnosis ng mga impeksyon sa viral ay limitado sa mga kaso kung saan ang konsentrasyon ng mga viral particle sa klinikal na materyal ay sapat na mataas (10 5 sa 1 ml at mas mataas). Ang kawalan ng pamamaraan ay ang kawalan ng kakayahang makilala sa pagitan ng mga virus na kabilang sa parehong pangkat ng taxonomic. Ang kawalan na ito ay inalis sa pamamagitan ng paggamit ng immune electron microscopy. Ang pamamaraan ay batay sa pagbuo ng mga immune complex kapag ang partikular na suwero ay idinagdag sa mga particle ng viral, habang ang sabay-sabay na konsentrasyon ng mga particle ng viral ay nangyayari, na ginagawang posible na makilala ang mga ito. Ang pamamaraan ay ginagamit din upang makita ang mga antibodies. Para sa layunin ng express diagnostics, ang isang electron microscopic na pagsusuri ng tissue extracts, feces, fluid mula sa vesicle, at mga lihim mula sa nasopharynx ay isinasagawa. Ang electron microscopy ay malawakang ginagamit upang pag-aralan ang morphogenesis ng virus; ang mga kakayahan nito ay pinalawak sa paggamit ng mga may label na antibodies.

Ang paraan ng molecular hybridization, batay sa pagtuklas ng mga nucleic acid na partikular sa virus, ay ginagawang posible na makakita ng mga solong kopya ng mga gene at walang katumbas sa mga tuntunin ng sensitivity. Ang reaksyon ay batay sa hybridization ng mga pantulong na strands ng DNA o RNA (probes) at ang pagbuo ng mga double-stranded na istruktura. Ang pinakamurang probe ay cloned recombinant DNA. Ang probe ay may label na radioactive precursors (karaniwan ay radioactive phosphorus). Ang paggamit ng mga reaksyong colorimetric ay nangangako. Mayroong ilang mga variant ng molecular hybridization: point hybridization, blot hybridization, sandwich hybridization, in situ hybridization, atbp.

Ang mga antibodies ng klase ng lgM ay lumalabas nang mas maaga kaysa sa mga antibodies ng klase G (sa ika-3-5 araw ng pagkakasakit) at nawawala pagkatapos ng ilang linggo, kaya ang kanilang pagtuklas ay nagpapahiwatig ng isang kamakailang impeksiyon. Ang mga antibodies ng klase ng IgM ay natutukoy ng immunofluorescence o enzyme immunoassay gamit ang anti-m antisera (anti-IgM heavy chain sera).

Ang mga pamamaraan ng serological sa virology ay batay sa mga klasikal na reaksyon ng immunological (tingnan. Mga pamamaraan ng immunological na pananaliksik ): pandagdag sa mga reaksyon ng fixation

pagsugpo sa hemagglutination, biological neutralization, immunodiffusion, hindi direktang hemagglutination, radial hemolysis, immunofluorescence, enzyme immunoassay, radioimmunoassay. Ang mga micromethod para sa maraming mga reaksyon ay binuo, at ang kanilang mga diskarte ay patuloy na pinapabuti. Ang mga pamamaraan na ito ay ginagamit upang makilala ang mga virus gamit ang isang hanay ng kilalang sera at para sa serodiagnosis upang matukoy ang pagtaas ng mga antibodies sa pangalawang serum kumpara sa una (ang unang serum ay kinuha sa mga unang araw pagkatapos ng sakit, ang pangalawa - pagkatapos 2-3 linggo). Ang halaga ng diagnostic ay hindi bababa sa apat na beses na pagtaas ng mga antibodies sa pangalawang serum. Kung ang pagtuklas ng mga antibodies ng klase ng lgM ay nagpapahiwatig ng isang kamakailang impeksyon, kung gayon ang mga antibodies ng klase ng lgC ay nagpapatuloy sa loob ng ilang taon, at kung minsan ay habang-buhay.

Upang matukoy ang mga indibidwal na antigen ng mga virus at antibodies sa kanila sa mga kumplikadong pinaghalong walang paunang paglilinis ng protina, ginagamit ang immunoblotting. Pinagsasama ng pamamaraan ang fractionation ng protina gamit ang polyacrylamide gel electrophoresis na may kasunod na immunoassay ng mga protina sa pamamagitan ng enzyme immunoassay. Ang paghihiwalay ng mga protina ay binabawasan ang mga kinakailangan para sa kemikal na kadalisayan ng antigen at ginagawang posible na makilala ang mga indibidwal na pares ng antigen-antibody. Ang gawaing ito ay may kaugnayan, halimbawa, sa serodiagnosis ng impeksyon sa HIV, kung saan ang mga maling positibong enzyme immunoassay na reaksyon ay dahil sa pagkakaroon ng mga antibodies sa mga antigen ng cell, na naroroon bilang isang resulta ng hindi sapat na paglilinis ng mga viral protein. Ang pagkakakilanlan ng mga antibodies sa sera ng mga pasyente sa panloob at panlabas na mga antigen ng viral ay ginagawang posible upang matukoy ang yugto ng sakit, at sa pagsusuri ng mga populasyon - ang pagkakaiba-iba ng mga protina ng viral. Ang immunoblotting sa HIV infection ay ginagamit bilang confirmatory test para makita ang mga indibidwal na viral antigens at antibodies sa kanila. Kapag sinusuri ang mga populasyon, ang pamamaraan ay ginagamit upang matukoy ang pagkakaiba-iba ng mga viral protein. Ang malaking halaga ng pamamaraan ay nakasalalay sa posibilidad ng pag-aaral ng mga antigen na na-synthesize gamit ang teknolohiyang recombinant DNA, na nagtatatag ng kanilang laki at ang pagkakaroon ng mga antigenic determinants.

Bibliograpiya: Bukrinskaya A.G. Virology, M., 1986; Virology, Methods, ed. B. Meikhi, trans. mula sa English, M., 1988; Handbook ng microbiological at virological na pamamaraan ng pananaliksik, ed. M.O. Birger, M., 1982.

Ang mga pamamaraan ng pananaliksik sa virological ay malawakang ginagamit sa gamot para sa pagsusuri ng maraming mga nakakahawang at ilang mga oncological na sakit ng isang viral na kalikasan.

Ginagamit din ang mga pamamaraan ng pananaliksik sa virological upang matukoy, pag-aralan ang kanilang biology at kakayahang makaapekto sa mga selula ng hayop at tao, na higit na nakakatulong upang maunawaan ang pathogenesis ng mga sakit na viral at piliin ang mga tamang pamamaraan para sa kanilang paggamot. Bilang karagdagan sa pagtatatag ng etiology ng sakit at pagsubaybay sa pagiging epektibo ng therapy, ang mga pamamaraan ng virological research ay may malaking kahalagahan sa pagtukoy at pagpapatupad ng mga hakbang laban sa epidemya.

Direktang pamamaraan ng pananaliksik sa virology

Ang mga direktang pamamaraan ng pagsasaliksik sa virological ay nagbibigay-daan sa pag-detect ng isang virus, viral nucleic acid o viral antigen nang direkta sa klinikal na materyal at sa gayon ay ang pinakamabilis (mga paraan ng pagpapahayag - hanggang 24 na oras). Ang mga pamamaraang ito ay hindi gaanong nagbibigay-kaalaman at nangangailangan ng kumpirmasyon sa laboratoryo sa pamamagitan ng mga hindi direktang pamamaraan ng diagnostic dahil sa madalas na pagtanggap ng mga maling negatibo o maling positibong resulta. Ang mga direktang pamamaraan ay kinabibilangan ng mga sumusunod na pamamaraan ng pananaliksik:

electron microscopy na may paglamlam ng mga virus sa pamamagitan ng negatibong paglamlam (nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang pagkakaroon ng virus at ang konsentrasyon nito sa materyal, sa kondisyon na ang 1 ml ay naglalaman ng hindi bababa sa 105 na mga particle ng viral);
immune electron microscopy, batay sa pakikipag-ugnayan ng mga partikular na antibodies sa mga virus upang bumuo ng mga complex na mas madaling makita na may negatibong kaibahan kaysa sa mga virus lamang;
enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) gamit ang enzyme-labeled antibodies na nagbubuklod sa mga antigens, na bumubuo ng mga complex na nakikita kapag ang substrate para sa ginamit na enzyme ay idinagdag;
immunofluorescence reaction (RIF) - direkta o hindi direkta - batay sa paggamit ng mga antibodies na nauugnay sa isang fluorescent dye;
radioimmunoassay (RIA) ay batay sa paggamit ng radioisotope-labeled antibodies at gamma counter;
Ang mga pamamaraan ng cytological ay batay sa mikroskopikong pagsusuri ng mga stained smears, biopsy, autopsy na materyales;
Mga pamamaraan ng molekular - molecular hybridization ng mga nucleic acid at polymerase chain reaction (ang una ay batay sa pagtuklas ng mga pantulong na hibla ng mga nucleic acid gamit ang isang label, ang pangalawa ay batay sa prinsipyo ng pagtitiklop ng pagkakasunud-sunod ng DNA na partikular sa virus sa tatlong yugto) .

Mayroong tatlong mga opsyon para sa molecular hybridization ng mga nucleic acid - point hybridization, blot hybridization (ginagamit upang masuri ang HIV infection) at in situ hybridization (direkta sa mga nahawaang selula). Ang PCR (polymerase chain reaction) ay lalong ginagamit ngayon sa pagsubaybay at pagsusuri ng mga impeksyon sa viral dahil sa mataas na sensitivity at pagtitiyak ng pamamaraang ito.

Hindi direktang pamamaraan ng pananaliksik sa virological

Ang mga pamamaraang ito ay batay sa paghihiwalay at pagkakakilanlan ng virus. Ang mga ito ay mas matagal at matagal na pamamaraan, gayunpaman, mas tumpak. Ang materyal para sa naturang mga pag-aaral ay maaaring ang mga nilalaman ng mga vesicle, scrapings (para sa bulutong-tubig, herpetic lesions ng balat at mucous membranes), nasopharyngeal lavage (para sa respiratory infections), dugo at cerebrospinal fluid (para sa arbovirus infections), feces (para sa enterovirus infections). ), pamunas (para sa tigdas, rubella, atbp.). Dahil sa katotohanan na ang mga virus ay maaari lamang dumami sa mga buhay na selula, ang paglilinang ng virus ay isinasagawa sa tissue culture, embryo ng manok o sa katawan ng isang hayop (hamster, puting mouse, aso, pusa, ilang mga species ng unggoy). Ang indikasyon ng virus ay isinasagawa sa pamamagitan ng cytopathic action, sa hemadsorption reaction, sa isang color test, ayon sa mga resulta ng hemagglutination inhibition reaction, ayon sa mga pagbabago o kanilang kawalan sa mga embryo ng manok o tissue culture, ayon sa kaligtasan ng sensitibong hayop.

Serological diagnostic na pamamaraan na ginagamit sa virology

Ang ibig sabihin ng serological ay virological research method batay sa antigen-antibody reaction. Sa kasong ito, ang ipinares na sera ng dugo ay kadalasang ginagamit, na kinukuha sa pagitan ng ilang linggo. Sa pagtaas ng titer ng antibody ng 4 o higit pang beses, ang reaksyon ay itinuturing na positibo. Upang matukoy ang uri ng pagtitiyak ng mga virus, ang isang reaksyon ng neutralisasyon ng virus ay ginagamit, upang matukoy ang pagtitiyak ng grupo, ang isang reaksyon ng pag-aayos ng pandagdag ay ginagamit. Ang mga reaksyon ng passive hemagglutination, pagsugpo ng hemagglutination, reverse passive hemagglutination, RIF at iba't ibang variant ng enzyme immunoassay ay malawakang ginagamit din.

Kamakailan lamang, sa kurso ng genetic engineering research, isang paraan para sa pagkuha ng monoclonal antibodies ay binuo. Ang makitid na pagtitiyak ng mga monoclones ay napagtagumpayan sa pamamagitan ng paggamit ng ilang mga monoclonal antibodies sa iba't ibang viral determinants. Pinataas nito ang pagiging sensitibo at pagtitiyak ng mga pamamaraan ng pananaliksik sa virological na may pagtukoy ng mga antigen ng viral. Sa kasalukuyan, maraming iba't ibang mga sistema ng pagsubok ang nilikha para sa immunological diagnosis ng mga impeksyon sa viral.

mga pamamaraan para sa pag-aaral ng biology ng mga virus at ang kanilang pagkakakilanlan. Sa virology, ang mga pamamaraan ng molecular biology ay malawakang ginagamit, sa tulong kung saan posible na maitaguyod ang molekular na istraktura ng mga particle ng viral, kung paano sila tumagos sa cell at ang mga tampok ng pagpaparami ng mga virus, ang pangunahing istraktura ng mga viral nucleic acid. at mga protina. Ang mga pamamaraan para sa pagtukoy ng pagkakasunud-sunod ng mga bumubuo ng mga elemento ng viral nucleic acid at protina amino acids ay binuo. Nagiging posible na maiugnay ang mga pag-andar ng mga nucleic acid at ang mga protina na naka-encode ng mga ito sa pagkakasunud-sunod ng nucleotide at upang maitaguyod ang mga sanhi ng mga proseso ng intracellular na may mahalagang papel sa pathogenesis ng isang impeksyon sa viral.

Ang mga pamamaraan ng pananaliksik sa virological ay batay din sa mga proseso ng immunological (pakikipag-ugnayan ng isang antigen na may mga antibodies), ang mga biological na katangian ng virus (ang kakayahang mag-hemagglutinate, hemolysis, aktibidad ng enzymatic), ang mga tampok ng pakikipag-ugnayan ng virus sa host cell (ang likas na katangian ng cytopathic effect, ang pagbuo ng intracellular inclusions, atbp.).

Ang mga cell mula sa karamihan sa mga pangunahing kultura ay maaaring i-subculture at tinutukoy bilang pangalawang kultura. Sa karagdagang pagpasa ng mga cell, isang populasyon ng mga fibroblast-like na mga cell ay nabuo, na may kakayahang mabilis na pagpaparami, karamihan sa mga ito ay nagpapanatili ng orihinal na hanay ng mga chromosome. Ito ang mga tinatawag na diploid cells. Sa serial cultivation ng mga cell, ang matatag na tuluy-tuloy na mga kultura ng cell ay nakuha. Sa panahon ng mga sipi, lumilitaw ang mabilis na paghahati ng mga homogenous na selula na may heteroploid na hanay ng mga chromosome. Ang mga matatag na linya ng cell ay maaaring monolayer at suspension. Ang mga kultura ng monolayer ay lumalaki sa anyo ng isang tuluy-tuloy na layer sa ibabaw ng salamin, ang mga kultura ng suspensyon ay lumalaki sa anyo ng mga suspensyon sa iba't ibang mga sisidlan gamit ang mga agitator. Mayroong higit sa 400 cell line na nagmula sa 40 iba't ibang uri ng hayop (kabilang ang mga primata, ibon, reptilya, amphibian, isda, insekto) at mga tao.

Ang paghihiwalay ng mga virus ay isang matrabaho at mahabang proseso. Isinasagawa ito upang matukoy ang uri o variant ng virus na umiikot sa populasyon (halimbawa, upang matukoy ang serovariant ng influenza virus, ligaw o bakuna na strain ng polio virus, atbp.); sa mga kaso kung saan kinakailangan na magsagawa ng mga kagyat na hakbang sa epidemiological; kapag lumitaw ang mga bagong uri o variant ng mga virus; kung kinakailangan, kumpirmahin ang paunang pagsusuri; para sa indikasyon ng mga virus sa mga bagay sa kapaligiran. Kapag naghihiwalay ng mga virus, ang posibilidad ng kanilang pagtitiyaga sa katawan ng tao, pati na rin ang paglitaw ng magkahalong impeksiyon na dulot ng dalawa o higit pang mga virus, ay isinasaalang-alang. Ang isang genetically homogenous na populasyon ng isang virus na nakuha mula sa isang solong virion ay tinatawag na isang viral clone, at ang proseso ng pagkuha nito ay tinatawag na cloning.

Upang ihiwalay ang mga virus, impeksyon ng madaling kapitan ng mga hayop sa laboratoryo, ginagamit ang mga embryo ng manok, ngunit ang tissue culture ay kadalasang ginagamit. Ang pagkakaroon ng isang virus ay karaniwang tinutukoy ng tiyak na pagkabulok ng cell (cytopathic effect), ang pagbuo ng mga symplast at syncytia, ang pagtuklas ng mga intracellular inclusions, pati na rin ang isang tiyak na antigen na nakita gamit ang immunofluorescence, hemadsorption, hemagglutination (sa hemagglutinating virus), atbp. . Ang mga palatandaang ito ay makikita lamang pagkatapos ng 2-3 mga sipi ng virus.

Para sa paghihiwalay ng isang bilang ng mga virus, tulad ng mga virus ng trangkaso, ginagamit ang mga embryo ng manok, para sa paghihiwalay ng ilang mga virus ng Coxsackie at isang bilang ng mga arbovirus, ginagamit ang mga bagong panganak na daga. Ang pagkilala sa mga nakahiwalay na virus ay isinasagawa gamit ang mga serological test at iba pang mga pamamaraan.

Kasama sa pagsusuri sa laboratoryo ng mga impeksyon sa viral ang pagtuklas ng pathogen o mga bahagi nito sa klinikal na materyal; paghihiwalay ng virus mula sa materyal na ito; serodiagnosis. Ang pagpili ng paraan ng diagnostic ng laboratoryo sa bawat indibidwal na kaso ay depende sa likas na katangian ng sakit, ang panahon ng sakit at ang mga kakayahan ng laboratoryo. Ang mga modernong diagnostic ng mga impeksyon sa viral ay batay sa mga express na pamamaraan na nagbibigay-daan sa iyong makakuha ng tugon ilang oras pagkatapos kumuha ng klinikal na materyal sa mga unang yugto pagkatapos ng sakit. Kabilang dito ang electron at immune electron microscopy, pati na rin ang immunofluorescence, ang paraan ng molecular hybridization , ang pagtuklas ng mga antibodies ng klase ng IgM, atbp.

Ang mga antibodies ng klase ng lgM ay lumalabas nang mas maaga kaysa sa mga antibodies ng klase G (sa ika-3-5 araw ng pagkakasakit) at nawawala pagkatapos ng ilang linggo, kaya ang kanilang pagtuklas ay nagpapahiwatig ng isang kamakailang impeksiyon. Ang mga antibodies ng klase ng IgM ay nakita ng immunofluorescence o enzyme immunoassay gamit ang anti-μ antisera (anti-IgM heavy chain sera).

Ang mga serological na pamamaraan sa virology ay batay sa mga klasikal na immunological na reaksyon (tingnan ang Immunological na pamamaraan ng pananaliksik) : complement fixation reactions, hemagglutination inhibition, biological neutralization, immunodiffusion, indirect hemagglutination, radial hemolysis, immunofluorescence, enzyme immunoassay, radioimmunoassay. Ang mga micromethod para sa maraming mga reaksyon ay binuo, at ang kanilang mga diskarte ay patuloy na pinapabuti. Ang mga pamamaraan na ito ay ginagamit upang makilala ang mga virus gamit ang isang hanay ng kilalang sera at para sa serodiagnosis upang matukoy ang pagtaas ng mga antibodies sa pangalawang serum kumpara sa una (ang unang serum ay kinuha sa mga unang araw pagkatapos ng sakit, ang pangalawa - pagkatapos 2-3 linggo). Ang halaga ng diagnostic ay hindi bababa sa apat na beses na pagtaas ng mga antibodies sa pangalawang serum. Kung ang pagtuklas ng mga antibodies ng klase ng lgM ay nagpapahiwatig ng isang kamakailang impeksyon, kung gayon ang mga antibodies ng klase ng lgC ay nagpapatuloy sa loob ng ilang taon, at kung minsan ay habang-buhay.

20) Ang pangunahing bahagi ng istruktura ng mga virion (kumpletong viral particle) ay isang nucleocapsid, i.e. ang kaluban ng protina (capsid) na nakapaloob sa viral genome (DNA o RNA). Ang nucleocapsid ng karamihan sa mga pamilya ng virus ay napapalibutan ng isang lipoprotein envelope. Sa pagitan ng sobre at nucleocapsid sa ilang mga virus (ortho-, paramyxo-, rhabdo-, filo- at retroviruses) mayroong isang non-glycosylated matrix protein, na nagbibigay ng karagdagang higpit sa mga virion. Ang mga virus ng karamihan sa mga pamilya ay may isang sobre na gumaganap ng isang mahalagang papel sa pagkahawa. Nakukuha ng mga virion ang panlabas na layer ng sobre kapag ang nucleocapsid ay tumagos sa lamad ng cell sa pamamagitan ng budding. Ang mga protina ng sobre ay na-encode ng virus, at ang mga lipid ay hiniram mula sa lamad ng cell. Ang mga glycoprotein ay kadalasang nasa anyo ng mga dimer at trimer ay bumubuo ng mga peplomer (protrusions) sa ibabaw ng mga virion (ortho-, paramyxoviruses, rhabdo-, filo-, corona-, bunya-, arena-, retroviruses). Ang mga glycosylated fusion protein ay nauugnay sa mga peplomer at may mahalagang papel sa pagpasok ng virus sa cell. Ang mga capsid at sobre ng mga virion ay nabuo ng maraming kopya ng isa o higit pang mga uri ng mga subunit ng protina bilang resulta ng proseso ng self-assembly. Ang pakikipag-ugnayan sa sistema ng protina-protina, dahil sa mahinang mga bono ng kemikal, ay humahantong sa pag-iisa ng mga simetriko na capsid. Ang mga pagkakaiba sa mga virus sa hugis at laki ng mga virion ay nakasalalay sa hugis, sukat at bilang ng mga istrukturang protina na subunit at ang likas na katangian ng pakikipag-ugnayan sa pagitan ng mga ito. Ang capsid ay binubuo ng maraming morphologically expressed subunits (capsomeres) na binuo mula sa viral polypeptides sa isang mahigpit na tinukoy na paraan, alinsunod sa medyo simpleng geometric na mga prinsipyo. Ang mga subunit ng protina, na nagkokonekta sa isa't isa, ay bumubuo ng mga capsid ng dalawang uri ng simetrya: isometric at helical. Ang istraktura ng nucleocapsid ng mga nakabalot na virus ay katulad ng istraktura ng nucleocapsid ng mga hindi nakabalot na mga virus. Sa ibabaw ng sobre ng mga virus, ang morphologically expressed glycoprotein structures - ang mga peplomer ay nakikilala. Ang komposisyon ng supercapsid membrane ay kinabibilangan ng mga lipid (hanggang sa 20-35%) at carbohydrates (hanggang sa 7-8%), na kung saan ay cellular na pinagmulan. Binubuo ito ng double layer ng cellular lipids at mga virus-specific na protina na matatagpuan sa labas at loob ng lipid biolayer. Ang panlabas na layer ng supercapsid shell ay kinakatawan ng mga peplomer (protrusions) ng isa o higit pang mga uri, na binubuo ng isa o higit pang mga molekula ng glycoproteins. Ang nucleocapsid ng mga enveloped virus ay kadalasang tinatawag na core, at ang gitnang bahagi ng mga virion na naglalaman ng nucleic acid ay tinatawag na nucleoid. Ang mga capsomeres (peplomer) ay binubuo ng mga istrukturang yunit na binuo mula sa isa o ilang homologous o heterologous na polypeptide chain (mga subunit ng protina). klasipikasyon ng mga virus Ang mga isometric capsid ay hindi mga sphere, ngunit regular na polyhedra (icosahedrons). Ang kanilang mga linear na sukat ay magkapareho sa kahabaan ng mga palakol ng mahusay na proporsyon. Ayon kina Kaspar at Klug (1962), ang mga capsomeres sa capsids ay nakaayos ayon sa icosahedral symmetry. Ang ganitong mga capsid ay binubuo ng magkaparehong mga subunit na bumubuo ng isang icosahedron. Mayroon silang 12 vertices (sulok), 30 mukha at 20 ibabaw sa anyo ng isosceles triangles. Alinsunod sa panuntunang ito, ang capsid ng poliovirus at foot-and-mouth disease virus ay nabuo ng 60 protein structural units, bawat isa ay binubuo ng apat na polypeptide chain. Ang icosahedron ay mahusay na nilulutas ang problema ng pag-iimpake ng paulit-ulit na mga subunit sa isang mahigpit na compact na istraktura na may isang minimum na dami. Ilan lang sa mga configuration ng mga structural subunit ang maaaring bumuo sa mga surface, vertices at mukha ng viral icosahedron. Halimbawa, ang mga istrukturang subunit ng adenovirus ay bumubuo ng hexagonal capsomeres (hexon) sa mga ibabaw at mukha, at pentagonal capsomeres (peptones) sa mga tuktok. Sa ilang mga virus, ang parehong mga uri ng capsomeres ay nabuo ng parehong polypeptides, sa iba, sa pamamagitan ng iba't ibang polypeptides. Dahil ang mga istrukturang subunit ng iba't ibang mga virus ay naiiba sa bawat isa, ang ilang mga virus ay tila mas hexagonal, ang iba ay mas spherical. Ang lahat ng kilalang vertebrate virus na naglalaman ng DNA, maliban sa mga virus ng bulutong, gayundin ang maraming mga virus na naglalaman ng RNA (7 pamilya) ay may uri ng cubic capsid symmetry. Ang mga reovirus, hindi tulad ng ibang mga vertebrate virus, ay may dobleng capsid (panlabas at panloob), bawat isa ay binubuo ng mga morphological unit. Ang mga virus na may uri ng helical symmetry ay may anyo ng isang cylindrical filamentous na istraktura, ang kanilang genomic RNA ay may anyo ng isang spiral at matatagpuan sa loob ng capsid. Ang lahat ng mga virus ng hayop ng helical symmetry ay napapalibutan ng isang lipoprotein envelope. Ang mga helical nucleocapsid ay nailalarawan sa pamamagitan ng haba, diameter, helix pitch, at ang bilang ng mga capsomeres sa bawat pagliko ng helix. Kaya, sa Sendai virus (paramyxovirus), ang nucleocapsid ay isang helix na halos 1 μm ang haba, 20 nm ang lapad, at isang helix na pitch na 5 nm. Ang capsid ay binubuo ng humigit-kumulang 2400 mga yunit ng istruktura, na ang bawat isa ay isang protina na may timbang na molekular na 60 kD. Mayroong 11-13 subunits bawat pagliko ng helix. Sa mga virus na may helical nucleocapsid symmetry, ang pagtitiklop ng mga molekula ng protina sa isang helix ay nagsisiguro ng pinakamataas na interaksyon sa pagitan ng nucleic acid at mga subunit ng protina. Sa mga virus na icosahedral, ang nucleic acid ay nakapulupot sa loob ng mga virion at nakikipag-ugnayan sa isa o higit pang polypeptides na matatagpuan sa loob ng capsid.

Mga antireceptor (receptor) Viral- mga protina sa ibabaw ng virion, halimbawa, hemagglutinin, na nagbubuklod sa isang pantulong na paraan sa kaukulang receptor ng isang madaling kapitan ng cell.

21) Immunological na pamamaraan sa virological research.

Ang mga pagsusuri sa serological ay nag-iiba sa kanilang kakayahang makita ang mga indibidwal na klase ng antibodies. Ang agglutination test, halimbawa, ay mahusay sa pag-detect ng IgM antibodies, ngunit hindi gaanong sensitibo para sa pag-detect ng IgG antibodies. Ang mga complement fixation at hemolysis test, na nangangailangan ng complement, ay hindi nakakakita ng non-complement-attaching antibodies, gaya ng IgA antibodies at IgE antibodies. Ang mga antibodies lamang na nakadirekta laban sa mga antigenic determinants ng ibabaw ng virion na nauugnay sa pathogenicity ay lumahok sa reaksyon ng neutralisasyon ng virus. Sensitivity I. m. at. lumalampas sa lahat ng iba pang mga pamamaraan para sa pag-aaral ng mga antigen at antibodies, sa partikular, ang radioimmunoassay at enzyme immunoassay ay nagbibigay-daan sa pagkuha ng pagkakaroon ng protina sa mga dami na sinusukat sa nanograms at maging sa picograms. Sa tulong ng I. m. at. tukuyin ang grupo at suriin ang kaligtasan ng dugo (hepatitis B at HIV infection). Sa paglipat ng mga tela at katawan At m. payagan ang pagpapasiya ng tissue compatibility at pagsubok ng incompatibility suppression method. Sa forensic na gamot, ang reaksyon ng Castellani ay ginagamit upang matukoy ang pagtitiyak ng species ng isang protina at ang reaksyon ng aglutinasyon upang matukoy ang uri ng dugo.

Ang mga immunological na pamamaraan ay malawakang ginagamit sa mga diagnostic ng laboratoryo ng mga nakakahawang sakit. Ang etiology ng sakit ay itinatag din batay sa pagtaas ng mga antibodies sa pathogen sa serum ng dugo ng convalescent kumpara sa sample na kinuha sa mga unang araw ng sakit. Batay sa I. m. at. pag-aralan ang kaligtasan sa sakit ng populasyon kaugnay ng mga malawakang impeksyon, tulad ng trangkaso, at suriin din ang pagiging epektibo ng mga preventive vaccination.

Depende sa kanilang mekanismo at ang account ng mga resulta I. m. at. ay maaaring nahahati sa mga reaksyon batay sa hindi pangkaraniwang bagay ng agglutination; mga reaksyon batay sa kababalaghan ng pag-ulan; mga reaksyong kinasasangkutan ng pandagdag; reaksyon ng neutralisasyon; mga reaksyon gamit ang kemikal at pisikal na pamamaraan.

Mga reaksyon batay sa phenomenon ng agglutination. Ang Agglutination ay ang pagdikit ng mga cell o indibidwal na mga particle - mga carrier ng isang antigen sa tulong ng immune serum sa antigen na ito.

Ang bacterial agglutination test gamit ang naaangkop na antibacterial serum ay isa sa pinakasimpleng serological test. Ang isang suspensyon ng bakterya ay idinagdag sa iba't ibang mga dilution ng nasubok na serum ng dugo at pagkatapos ng isang tiyak na oras ng pakikipag-ugnay sa t ° 37 ° ito ay naitala kung saan nangyayari ang pinakamataas na pagbabanto ng serum agglutination ng dugo. Ang agglutination reaction ng bacteria ay ginagamit upang masuri ang maraming mga nakakahawang sakit: brucellosis, tularemia, typhoid fever at paratyphoid fever, bacillary dysentery, at typhus.

Ang reaksyon ng passive, o hindi direktang, hemagglutination (RPGA, RNGA). Gumagamit ito ng mga erythrocytes o neutral na synthetic na materyales (halimbawa, mga latex particle), sa ibabaw kung saan ang mga antigens (bacterial, viral, tissue) o antibodies ay na-adsorbed. Ang kanilang aglutinasyon ay nangyayari kapag ang naaangkop na sera o antigens ay idinagdag.

Ang passive hemagglutination reaction ay ginagamit upang masuri ang mga sakit na dulot ng bacteria (typhoid at paratyphoid, dysentery, brucellosis, plague, cholera, atbp.), protozoa (malaria) at mga virus (influenza, adenovirus infections, viral hepatitis B, tigdas, tick-borne encephalitis, Crimean hemorrhagic fever, atbp.), pati na rin upang matukoy ang ilang mga hormone, upang matukoy ang hypersensitivity ng pasyente sa mga gamot at hormone, tulad ng penicillin at insulin.

Ang hemagglutination inhibition test (HITA) ay batay sa phenomenon ng pag-iwas (inhibition) ng immune serum ng hemagglutination ng mga erythrocytes ng mga virus, at ginagamit upang tuklasin at i-titrate ang mga antiviral antibodies. Ito ay nagsisilbing pangunahing paraan ng serodiagnosis ng trangkaso, tigdas, rubella, beke, tick-borne encephalitis at iba pang mga impeksyon sa viral, ang mga sanhi ng ahente na may mga katangian ng hemagglutinating. halimbawa, para sa serodiagnosis ng tick-borne encephalitis, ang dalawang beses na dilution ng serum ng pasyente sa isang alkaline borate buffer solution ay ibinubuhos sa mga balon ng panel. Pagkatapos ay isang tiyak na halaga, kadalasang 8 AU (agglutinating units), ng tick-borne encephalitis antigen ay idinagdag, at pagkatapos ng 18 oras na pagkakalantad sa t ° 4 °, ang isang suspensyon ng goose erythrocytes na inihanda sa isang acidic phosphate buffer solution ay idinagdag. Kung mayroong mga antibodies sa tick-borne encephalitis virus sa serum ng dugo ng pasyente, pagkatapos ay ang antigen ay neutralisado at ang erythrocyte agglutination ay hindi mangyayari.

Mga reaksyon batay sa kababalaghan ng pag-ulan. Ang pag-ulan ay nangyayari bilang isang resulta ng pakikipag-ugnayan ng mga antibodies sa mga natutunaw na antigens. Ang pinakasimpleng halimbawa ng reaksyon ng pag-ulan ay ang pagbuo ng isang opaque precipitation band sa isang test tube sa hangganan ng antigen layering sa isang antibody. Malawakang ginagamit ang iba't ibang uri ng mga reaksyon ng precipitation sa semi-liquid agar o agarose gels (Ouchterlon double immunodiffusion method, radial immunodiffusion method, immunoelectrophoresis), na parehong qualitative at quantitative. Bilang isang resulta ng libreng pagsasabog sa gel ng antigens at antibodies sa zone ng kanilang pinakamainam na ratio, ang mga tiyak na complex ay nabuo - mga precipitation band, na nakikita nang biswal o sa pamamagitan ng paglamlam. Ang isang tampok ng pamamaraan ay ang bawat pares ng antigen-antibody ay bumubuo ng isang indibidwal na banda ng pag-ulan, at ang reaksyon ay hindi nakasalalay sa pagkakaroon ng iba pang mga antigen at antibodies sa system na pinag-aaralan.

Ang mga reaksyon na kinasasangkutan ng complement, na ginagamit bilang sariwang guinea pig serum, ay batay sa kakayahan ng Clq complement subcomponent at pagkatapos ay iba pang mga complement na bahagi na ilakip sa mga immune complex.

Ang complement fixation reaction (CFR) ay nagpapahintulot sa titration ng antigens o antibodies ayon sa antas ng complement fixation ng antigen-antibody complex. Ang reaksyong ito ay binubuo ng dalawang yugto: ang interaksyon ng antigen sa test blood serum (test system) at ang interaksyon ng hemolytic serum na may ram erythrocytes (indicator system). Sa isang positibong reaksyon, ang pag-aayos ng pandagdag ay nangyayari sa system na pinag-aaralan, at pagkatapos, kapag nagdaragdag ng antibody-sensitized erythrocytes, ang hemolysis ay hindi sinusunod. Ang reaksyon ay ginagamit para sa serodiagnosis ng syphilis (Wassermann reaction), viral at bacterial infection.

Ang reaksyon ng neutralisasyon ay batay sa kakayahan ng mga antibodies na i-neutralize ang ilang partikular na function ng macromolecular o natutunaw na antigens, tulad ng aktibidad ng enzyme, bacterial toxins, at pathogenicity ng mga virus. Ang reaksyon ng neutralisasyon ng mga lason ay maaaring masuri ng biological na epekto, halimbawa, ang anti-tetanus at anti-botulinum sera ay titrated. Ang pinaghalong lason at antiserum na ibinibigay sa mga hayop ay hindi nagiging sanhi ng kanilang kamatayan. Ang iba't ibang variant ng reaksyon ng neutralisasyon ay ginagamit sa virology. Kapag ang mga virus ay hinaluan ng naaangkop na antiserum at ang halo na ito ay ibinibigay sa mga hayop o mga cell culture, ang pathogenicity ng mga virus ay neutralisado at ang mga hayop ay hindi nagkakasakit, at ang mga cell ng mga kultura ay hindi dumaranas ng pagkasira.

Mga reaksyon gamit ang kemikal at pisikal na mga label. Ang immunofluorescence ay binubuo sa paggamit ng mga antibodies na may label na fluorochrome, mas tiyak, ang bahagi ng immunoglobulin ng mga antibodies ng IgG. Ang isang antibody na may label na fluorochrome ay bumubuo ng isang antigen-antibody complex na may antigen, na nagiging available para sa pagmamasid sa ilalim ng mikroskopyo sa UV rays na nagpapasigla sa luminescence ng fluorochrome. Ang direktang reaksyon ng immunofluorescence ay ginagamit upang pag-aralan ang mga cellular antigens, tuklasin ang virus sa mga nahawaang selula, at tuklasin ang bacteria at rickettsia sa mga pahid.

Ang paraan ng hindi direktang immunofluorescence ay mas malawak na ginagamit. batay sa pagtuklas ng isang antigen-antibody complex gamit ang isang luminescent anti-lgG antibody sera at ginagamit upang makita hindi lamang ang mga antigen, kundi pati na rin ang antibody titration.

Ang immunoenzyme, o enzyme immunological, na mga pamamaraan ay batay sa paggamit ng mga antibodies na pinagsama sa mga enzyme, pangunahin ang malunggay peroxidase o alkaline phosphatase. Tulad ng immunofluorescence, ang enzyme immunoassay ay ginagamit upang makita ang mga antigen sa mga cell o upang mag-titrate ng mga antibodies sa mga cell na naglalaman ng antigen.

Ang radioimmunological method ay batay sa paggamit ng radioisotope label ng antigens o antibodies. Ito ang pinakasensitibong paraan para sa pagtukoy ng mga antigen at antibodies, na ginagamit upang matukoy ang mga hormone, gamot at antibiotic, upang masuri ang bacterial, viral, rickettsial, protozoal na sakit, upang pag-aralan ang mga protina ng dugo, tissue antigens.

Ginagamit ang immunoblotting upang makita ang mga antibodies sa mga indibidwal na antigen o "kilalanin" ang mga antigen mula sa kilalang sera. Ang pamamaraan ay binubuo ng 3 yugto: paghihiwalay ng mga biological macromolecules (halimbawa, isang virus) sa mga indibidwal na protina gamit ang polyacrylamide gel electrophoresis; paglilipat ng mga pinaghiwalay na protina mula sa gel papunta sa isang solidong suporta (blot) sa pamamagitan ng paglalagay ng polyacrylamide gel plate sa activated paper o nitrocellulose (electroblotting); pagtuklas ng mga gustong protina sa substrate gamit ang direkta o hindi direktang enzyme immunoassay. Bilang isang paraan ng diagnostic, ang immunoblotting ay ginagamit para sa impeksyon sa HIV. Ang halaga ng diagnostic ay ang pagtuklas ng mga antibodies sa isa sa mga protina ng panlabas na shell ng virus.

22) Mga uri ng symmetry ng mga virus (cubic, helical, mixed). Pakikipag-ugnayan ng mga protina at nucleic acid sa packaging ng mga genome ng virus.

Depende sa pakikipag-ugnayan ng capsid sa nucleic acid, ang mga particle ng virus ay maaaring nahahati sa ilang uri ng simetrya:

1). Uri ng cubic symmetry.

Ang mga cubic capsid ay mga icosiders na may humigit-kumulang 20 triangular na ibabaw at 12 vertices. Bumubuo sila ng isang istraktura na kahawig ng isang spherical formation, ngunit sa katunayan ito ay isang polyhedron. Sa ilang mga kaso, ang mga espesyal na pormasyon ng lipoprotein na tinatawag na mga spike ay nakakabit sa mga vertices ng naturang icosahedral polyhedra. Ang papel ng mga spike na ito ay malamang na nabawasan sa pakikipag-ugnayan ng mga virion o mga partikulo ng viral na may kaukulang mga lugar ng mga host cell na sensitibo sa kanila. Sa pamamagitan ng cubic symmetry, ang viral nucleic acid ay nakaimpake nang mahigpit (ginulong sa isang bola), at pinalilibutan ito ng mga molekula ng protina, na bumubuo ng polyhedron (icosahedron). Ang icosahedron ay isang polyhedron na may dalawampung triangular na mukha na may kubiko symmetry at humigit-kumulang spherical na hugis. Kasama sa mga virus ng Icosahedral ang herpes simplex virus, reovirus, atbp.

2). Uri ng spiral symmetry. Ang mga spiral capsid ay medyo mas simple. Yung. Ang mga capsomeres na bumubuo sa capsid ay sumasakop sa helical NK at bumubuo rin ng medyo matatag na shell ng protina ng mga virus na ito. At kapag gumagamit ng mga high-resolution na electron microscope at angkop na paraan ng paghahanda, makikita ng isa ang mga spiral structure sa mga virus. Sa helical symmetry ng capsid, ang viral nucleic acid ay bumubuo ng isang helical (o helical) figure, guwang sa loob, at ang mga subunit ng protina (capsomeres) ay nakasalansan din sa paligid nito sa isang spiral (tubular capsid). Ang isang halimbawa ng isang virus na may helical symmetry ng capsid ay ang tobacco mosaic virus, na hugis baras, at ang haba nito ay 300 nm na may diameter na 15 nm. Kasama sa komposisyon ng isang viral particle ang isang molekula ng RNA na humigit-kumulang 6000 nucleotides ang laki. Ang capsid ay binubuo ng 2000 magkaparehong mga subunit ng protina na nakaayos sa isang helix.

3). Mixed o kumplikadong uri ng symmetry. Bilang isang patakaran, ang ganitong uri ng mahusay na proporsyon ay matatagpuan higit sa lahat sa mga bacterial virus. At ang mga klasikong halimbawa ay ang mga phage, E. coli o temperate phages. Ito ay mga kumplikadong pormasyon na may ulo na may panloob na nilalamang nucleic, iba't ibang uri ng mga appendage, proseso ng buntot, at isang aparato na may iba't ibang antas ng pagiging kumplikado. At ang bawat bahagi ng naturang mga particle ay pinagkalooban ng isang tiyak na pag-andar na natanto sa proseso ng pakikipag-ugnayan sa pagitan ng virus at ng cell. Sa madaling salita, ang isang kumplikadong uri ng mahusay na proporsyon ay isang kumbinasyon ng cubic symmetry, ang ulo ay isang icosider polyhedron at ang mga pormasyon na hugis ng baras ay ang mga proseso ng buntot. Bagama't sa mga bacterial virus mayroon ding mga simpleng organisadong virion, na primitive nucleocapsids, spherical o cubic ang hugis. Ang mga bacterial virus ay mas kumplikado kaysa sa mga virus ng halaman at hayop.

24) Pakikipag-ugnayan ng isang phage sa isang cell. Virulent at mapagtimpi na mga phage.

Adsorption.

Ang pakikipag-ugnayan ay nagsisimula sa pag-attach ng mga viral particle sa ibabaw ng cell. Nagiging posible ang proseso sa pagkakaroon ng naaangkop na mga receptor sa ibabaw ng cell at mga anti-receptor sa ibabaw ng viral particle.

Gumagamit ang mga virus ng mga cell receptor na idinisenyo upang maghatid ng mga mahahalagang sangkap: mga nutrient na particle, hormone, growth factor, atbp.

Mga Receptor: protina, carbohydrate na bahagi ng mga protina at lipid, lipid. Tinutukoy ng mga partikular na receptor ang karagdagang kapalaran ng viral particle (transportasyon, paghahatid sa mga lugar ng cytoplasm o nucleus). Ang virus ay maaaring mag-attach sa hindi tiyak na mga receptor at kahit na tumagos sa cell. Gayunpaman, ang prosesong ito ay hindi nagiging sanhi ng impeksiyon.

Sa una, ang isang solong bono sa pagitan ng antireceptor at ang receptor ay nabuo. Ang bono na ito ay marupok at maaaring masira. Para sa pagbuo ng hindi maibabalik na adsorption, kinakailangan ang multivalent attachment. Ang matatag na pagbubuklod ay nangyayari dahil sa malayang paggalaw ng mga molekula ng receptor sa lamad. Sa panahon ng pakikipag-ugnayan ng virus sa cell, ang pagtaas sa pagkalikido ng mga lipid ay sinusunod, at ang pagbuo ng mga patlang ng receptor sa lugar ng pakikipag-ugnayan sa pagitan ng virus at ng cell. Ang mga receptor ng isang bilang ng mga virus ay maaari lamang naroroon sa isang limitadong hanay ng mga host cell. Tinutukoy nito ang pagiging sensitibo ng organismo sa virus na ito. Kaya, ang viral DNA at RNA ay may kakayahang makahawa sa mas malawak na hanay ng mga host cell.

Ang mga antireceptor ay matatagpuan sa mga natatanging organelle ng viral: mga istruktura ng paglaki sa T-bacteriophage, mga hibla sa adenovirus, mga spike sa ibabaw ng mga lamad ng viral, corona sa mga coronavirus.

Pagpasok.

2 mekanismo - receptor endocytosis at pagsasanib ng lamad.

Endositosis ng receptor:

Ang karaniwang mekanismo para sa pagpasok ng mga nutrients at regulatory substance sa cell. Nangyayari sa mga espesyal na lugar - kung saan may mga espesyal na hukay na natatakpan ng clathrin, ang mga partikular na receptor ay matatagpuan sa ilalim ng hukay. Ang mga hukay ay nagbibigay ng mabilis na invagination at ang pagbuo ng mga vacuole na natatakpan ng clathrin (hindi hihigit sa 10 minuto ang lumipas mula sa sandali ng adsorption, hanggang sa 2000 vacuoles ay maaaring mabuo sa isang minuto). Ang mga vacuole ay nagsasama sa mas malalaking cytoplasmic na mga vacuole upang bumuo ng mga receptorosome (hindi na naglalaman ng clathrin), na siya namang nagsasama sa mga lysosome.

Pagsasama ng viral at cell membranes:

Sa enveloped virus, ang pagsasanib ay pinapamagitan ng mga point interaction ng viral protein na may cell membrane lipids, na nagreresulta sa pagsasama ng viral lipoprotein envelope sa cell membrane. Sa mga virus na hindi nakabalot, ang isa sa mga pang-ibabaw na protina ay nakikipag-ugnayan din sa mga lipid ng cell membrane at ang panloob na bahagi ay dumadaan sa lamad (sa paramyxoviruses, ang F-protein; sa orthomyxoviruses, ang HA2 hemagglutinating subunit). Ang conformation ng mga protina sa ibabaw ay apektado ng pH.

Maghubad.

Sa prosesong ito, nawawala ang nakakahawang aktibidad, madalas na lumilitaw ang pagiging sensitibo sa mga nucleases, at lumalabas ang paglaban sa mga antibodies. Ang huling produkto ng paghuhubad ay mga nucleic acid na nakagapos sa isang panloob na protina ng viral. Nililimitahan din ng yugto ng paghuhubad ang posibilidad ng impeksyon (ang mga virus ay hindi nakakapaghubad ng damit sa bawat cell). Ang pagtanggal ng damit ay nangyayari sa mga espesyal na lugar ng cell: lysosomes, ang Golgi apparatus, at ang perinuclear space.

Ang paghuhubad ay nangyayari bilang isang resulta ng isang serye ng mga reaksyon. Halimbawa, sa mga picornavirus, ang paghuhubad ay nagpapatuloy sa pagbuo ng mga intermediate subviral particle na may sukat mula 156 hanggang 12S. Sa mga adenovirus sa cytoplasm at nuclear pores at may hindi bababa sa 3 yugto:

Ang pagbuo ng mga subviral na particle na may mas mataas na density kaysa sa mga virion;

Ang pagbuo ng mga core kung saan nawawala ang 3 viral protein;

Pagbuo ng isang DNA-protein complex kung saan ang DNA ay covalently na naka-link sa isang terminal na protina.

Pagkilala sa mga virulent at temperate phages.

Kapag ang isang bacterium ay nahawaan ng isang phage, ang tinatawag na lytic infection ay nangyayari, ibig sabihin, ang impeksiyon ay nagtatapos sa lysis ng host cell, ngunit ito ay katangian lamang ng tinatawag na virulent phages, ang pakikipag-ugnayan nito sa cell. humahantong sa pagkamatay ng cell at pagbuo ng phage progeny.

Kasabay nito, ang mga sumusunod na yugto ay nakikilala ayon sa mga pakikipag-ugnayan ng phage sa cell: paghahalo ng phage sa cell culture (ang multiplicity ng impeksyon ay 1 phage bawat 10 cell), at ang konsentrasyon ay dapat sapat na mataas upang ang mga phage ay maaaring makipag-ugnayan sa mga selula. Upang maiwasan ang muling impeksyon - pagkatapos ng impeksyon sa loob ng maximum na 5 minuto, kapag ang mga phage ay na-adsorbed - ang halo ng mga cell na ito na may phage ay natunaw. Mayroong isang nakatagong panahon kung saan ang bilang ng mga phage ay hindi tumataas, pagkatapos ay isang napakaikling panahon ng paglabas, kapag ang bilang ng mga particle ng phage ay tumaas nang husto, kapag ang mga cell lyses at phage progeny ay inilabas, at pagkatapos ay ang bilang ng mga phage ay nananatili sa parehong antas, dahil hindi nangyayari ang muling impeksyon. Batay sa curve na ito, ang mga phase na ito ay maaaring makilala: ang vegetative period ng "growth" (latent period), ang exit period at kalkulahin ang phage yield sa bawat 1 infected na cell. Sa panahon ng nakatagong panahon, walang makikitang kahawig ng mga particle ng phage sa bakterya, at hindi posible na ihiwalay ang nakahahawang prinsipyo mula sa mga naturang selula sa nakatagong panahon. Tanging ang mga mature na particle ng phage lamang ang maaaring makahawa sa bakterya. Kaya, ang mga virulent phage ay palaging nagiging sanhi ng pagkamatay ng bakterya at gumagawa ng impeksyon, na ipinahayag sa paggawa ng mga bagong partikulo ng virus na may kakayahang makahawa sa susunod at iba pang sensitibong mga selula.

Sa kaibahan sa mga virulent, ang impeksyon sa mga temperate phage ay hindi humahantong sa lysis ng mga bacterial cells, ngunit ang pagbuo ng isang espesyal na estado ng magkakasamang buhay ng isang phage na may bacterial cell ay natanto. Ang magkakasamang buhay na ito ay ipinahayag sa katotohanan na ang isang tiyak na simula ng phage ay naroroon sa bacterial cell nang walang anumang hindi kanais-nais na mga kondisyon para dito at napanatili mula sa henerasyon hanggang sa henerasyon. Sa ilang mga yugto ng naturang magkakasamang buhay, ang phage ay isinaaktibo sa cell at pumapasok sa estado ng lytic cycle ng pag-unlad, na nagiging sanhi ng cell lysis at pagpapalabas ng phage progeny. Ang mga naturang phage ay tinatawag na lysogenic o temperate phage, at ang estado ng katamtamang pag-iral kasama ang phage ay lysogeny, at ang bacteria na naglalaman ng naturang latent phage ay tinatawag na lysogenic bacteria. Ang terminong lysogenic bacteria ay nagmula sa katotohanan na ang mga kultura ay minsang natuklasan kung saan ang isang phage ay kusang lumitaw, at ang bacteriophage na ito ay nagsimulang ituring bilang kontaminasyon sa kultura, iyon ay, ang isang bacterial virus ay pumapasok sa kultura, at ang mga naturang kultura ay tinatawag na lysogenic, iyon ay. , bumubuo sila ng lysis .

Ang paghihiwalay ng mga virus ay isang matrabaho at mahabang proseso. Isinasagawa ito upang matukoy ang uri o variant ng virus na umiikot sa populasyon (halimbawa, upang matukoy ang serovariant ng influenza virus, ligaw o bakuna na strain ng polio virus, atbp.); sa mga kaso kung saan kinakailangan na magsagawa ng mga kagyat na hakbang sa epidemiological; kapag lumitaw ang mga bagong uri o variant ng mga virus; kung kinakailangan, kumpirmahin ang paunang pagsusuri; para sa indikasyon ng mga virus sa mga bagay sa kapaligiran. Kapag naghihiwalay ng mga virus, ang posibilidad ng kanilang pagtitiyaga sa katawan ng tao, pati na rin ang paglitaw ng magkahalong impeksiyon na dulot ng dalawa o higit pang mga virus, ay isinasaalang-alang. Ang isang genetically homogenous na populasyon ng isang virus na nakuha mula sa isang solong virion ay tinatawag na isang viral clone, at ang proseso ng pagkuha nito ay tinatawag na cloning.

Kasama sa pagsusuri sa laboratoryo ng mga impeksyon sa viral ang pagtuklas ng pathogen o mga bahagi nito sa klinikal na materyal; paghihiwalay ng virus mula sa materyal na ito; serodiagnosis. Ang pagpili ng paraan ng diagnostic ng laboratoryo sa bawat indibidwal na kaso ay depende sa likas na katangian ng sakit, ang panahon ng sakit at ang mga kakayahan ng laboratoryo. Ang mga modernong diagnostic ng mga impeksyon sa viral ay batay sa mga express na pamamaraan na nagbibigay-daan sa iyong makakuha ng tugon ilang oras pagkatapos kumuha ng klinikal na materyal sa mga unang yugto pagkatapos ng sakit. Kabilang dito ang electron at immune electron microscopy, pati na rin ang immunofluorescence, ang paraan ng molecular hybridization , ang pagtuklas ng mga antibodies ng klase ng IgM, atbp.

Ang mga antibodies ng klase ng lgM ay lumalabas nang mas maaga kaysa sa mga antibodies ng klase G (sa ika-3-5 araw ng pagkakasakit) at nawawala pagkatapos ng ilang linggo, kaya ang kanilang pagtuklas ay nagpapahiwatig ng isang kamakailang impeksiyon. Ang mga antibodies ng klase ng IgM ay nakita ng immunofluorescence o enzyme immunoassay gamit ang anti-μ antisera (anti-IgM heavy chain sera).

- mga pamamaraan para sa pag-neutralize ng basura na naglalaman ng mga organikong sangkap, batay sa kanilang pag-init bilang isang resulta ng mahalagang aktibidad ng mga thermophilic aerobic microorganism ...
Medical Encyclopedia
- mga pamamaraan ng histochemical para sa pagtuklas ng mga enzyme, batay sa reaksyon ng pagbuo ng calcium o magnesium phosphate precipitates sa lokalisasyon ng aktibidad ng enzymatic sa panahon ng pagpapapisa ng itlog ng mga seksyon ng tissue na may organic ...
Medical Encyclopedia
- mga pamamaraan para sa pag-detect ng mga histiocytes sa paghahanda ng nervous tissue at iba't ibang mga organo gamit ang ammonia silver o pyridine-soda solution ng pilak ...
Medical Encyclopedia
- mga pamamaraan para sa pagtatasa ng mga pagpapalagay tungkol sa likas na katangian ng mana, batay sa isang paghahambing ng naobserbahan at inaasahang ratio ng mga may sakit at malusog na tao sa mga pamilya na nabibigatan ng mga namamana na sakit, na isinasaalang-alang ang pamamaraan ...
Medical Encyclopedia
- ay ginagamit upang pag-aralan ang istraktura at paggana ng mga selula at tisyu ng mga tao, hayop at halaman sa normal, pathological at eksperimentong kondisyon...
Medical Encyclopedia
- mga pamamaraan para sa pagtukoy ng mga kemikal sa mga seksyon ng histological. Isang mahalagang bahagi ng G. m. ay mga cytochemical na pamamaraan na nakakakita ng mga kemikal sa mga selula ng mga inihandang smear at mga kopya ...
Medical Encyclopedia
- mga pamamaraan para sa dami at husay na pagpapasiya ng glucose sa dugo at ihi, batay sa oksihenasyon ng glucose na may atmospheric oxygen sa pagkakaroon ng enzyme glucose oxidase ...
Medical Encyclopedia
- mga pamamaraan ng diagnostic na pananaliksik batay sa partikular na pakikipag-ugnayan ng mga antigen at antibodies ...
Medical Encyclopedia
- mga pamamaraan para sa pag-detect ng mga fibrous na istruktura ng connective tissue at neuroglia sa histological na paghahanda, batay sa kanilang multicolor staining...
Medical Encyclopedia
- 1) paraan ng paglamlam ng mga histological na paghahanda ng dermis gamit ang hematun ni Mayer, isang solusyon ng potassium alum at rhodamine; mantsang asul ang cell nuclei, mantsang pula ng eleidine...
Medical Encyclopedia
- sa medisina - isang hanay ng mga pamamaraan para sa dami ng pag-aaral at pagsusuri ng estado at pag-uugali ng mga bagay at sistema na nauugnay sa gamot at pangangalagang pangkalusugan ...
Medical Encyclopedia
- mga paraan upang pag-aralan ang iba't ibang bagay gamit ang mikroskopyo ...
Medical Encyclopedia
- batay sa paggamit ng mga batas ng optika na may kaugnayan sa kalikasan, pagpapalaganap at pakikipag-ugnayan sa bagay ng electromagnetic radiation sa optical range ...
Medical Encyclopedia
- mga pamamaraan ng pananaliksik at pagsusuri ng kalidad ng mga bagay sa kapaligiran sa tulong ng mga pandama na organo ...
Medical Encyclopedia
- ang pangkalahatang pangalan ng isang bilang ng mga pamamaraan para sa pagpapabinhi ng mga histological na paghahanda na may pilak upang makita ang glial at iba pang argyrophilic fibers ...
Medical Encyclopedia
- ay hinirang ng imbestigador at ng hukuman upang lutasin ang mga espesyal na isyu na nagmumula sa pagsisiyasat ng mga krimen at ang pagsasaalang-alang ng mga kasong sibil. Hinahawakan din ang mga ito sa mungkahi ng forensic...
Medical Encyclopedia

"Mga pamamaraan ng pananaliksik sa virological" sa mga libro

Rage Against The Machine Killing In The Name (1992)

ang may-akda na si Tsaler Igor

Rage Against The Machine Killing In The Name (1992) Ang unang album ng banda ng Los Angeles na Rage Against The Machine ay pinagsama ang hip-hop at hard rock, na nagwiwisik sa kanila ng mga topical political manifesto at, kawili-wili, isang malaking dosis ng siksik na funk ritmo. Sa kantang "Killing in the name", kasama sa unang single,

James Brown Get Up (I Feel Like Being A) Sex Machine (1970)

Mula sa aklat na Popular Music of the 20th Century: Jazz, Blues, Rock, Pop, Country, Folk, Electronic, Soul ang may-akda na si Tsaler Igor

James Brown Get Up (I Feel Like Being A) Sex Machine (1970) Sa pagtatapos ng 1960s, nagsimulang mag-eksperimento si James Brown. Ang nakakadurog na kaluluwa mula sa The Famous Flames ay nagbigay daan sa sizzling funk mula sa The J.B.'s. Isa sa pinakamahalagang milestone ng paparating na funk era ay ang "Sex Machine", na sa loob ng sampung minutong bersyon

Galit Laban sa Makina

Mula sa librong Against the Impossible (koleksiyon ng mga artikulo tungkol sa kultura) may-akda Koltashov Vasily Georgievich

Rage Against The Machine Tom Morello: “Ang aming layunin ay tulungan ang mga tao na palayain ang kanilang sarili mula sa mga tanikala ng kasinungalingan at karahasan na buhol sa kanila sa mga gobyerno, internasyonal na korporasyon, media at partidong pampulitika, upang bigyan ang mga tao sa buong mundo ng kumpiyansa sa bukas at

Maligayang pagdating sa makina

Mula sa aklat na Bell Time may-akda Smirnov Ilya

Maligayang pagdating sa makina Maaari nating i-date ang simula ng perestroika sa ating kasaysayan hanggang Enero 1987. Pagkatapos ay naganap ang liberal Plenum ng Komite Sentral, at nagkaroon kami ng pagkakataon na mag-publish sa Yunost ng isang hindi na-edit na listahan ng mga modernong "bituin" ng Soviet rock, kabilang ang DDT, CLOUD EDGE at

Gumagana ang Toyoda Machine

Mula sa aklat na Gemba kaizen. Ang landas tungo sa pagbabawas ng gastos at pagpapabuti ng kalidad ni Imai Masaaki

Toyoda Machine Works Ayon kay Yoshio Shima, direktor ng Toyoda Machine Works, ang mga benepisyo ng pagtatatag ng isang sistema ng kalidad at mga pamantayan para sa kalidad ng kasiguruhan ay naging maliwanag noong 1980s, nang ipakilala ng kumpanya ang konsepto ng "kabuuang pamamahala batay sa kalidad"

makina

Mula sa aklat na Philosophical Dictionary may-akda Comte Sponville Andre

Machine (Machine) "Kung ang mga shuttle ay hinabi ang kanilang mga sarili," minsang sinabi ni Aristotle, "hindi mangangailangan ang mga artisano ng mga manggagawa, at ang mga amo ay hindi mangangailangan ng mga alipin" ("Politika", I, 4). Ito ay tinatayang tinatawag nating makina - isang bagay na may kakayahang gumalaw, walang kaluluwa (automaton) at

Mula sa aklat na Internet Intelligence [Action Guide] may-akda Yushchuk Evgeny Leonidovich

Archive ng mga site Internet Archive Wayback Machine E-mail address - http://web.archive.org Sinuman na nakakolekta ng impormasyon sa isang problemang interesado sa kanya sa loob ng sapat na mahabang panahon ay alam kung gaano kahalaga kung minsan ang paghahanap ng impormasyong nai-publish sa ang site ilang taon na ang nakalipas. Minsan lang

Internet Archive Wayback Machine

Mula sa librong Countering Black PR sa Internet may-akda Kuzin Alexander Vladimirovich

Archive ng mga site Internet Archive Wayback Machine Kadalasan ang pag-atake ng mga taong itim na PR ay dumarating nang hindi inaasahan para sa iyo. Sa kasong ito, sa unang pagkakataon, nahaharap ka sa pangangailangang masusing pag-aralan ang kaaway. Kung ipinapalagay mo ang gayong pag-unlad ng mga kaganapan (halimbawa, sa

4.9. I-backup gamit ang Time Machine

may-akda na si Skrylina Sofya

4.9. Ang pag-back up sa Time Machine Mac OS X Leopard ay nagbibigay-daan sa iyong regular na i-back up ang iyong computer gamit ang Time Machine application. Pagkatapos ng naaangkop na mga setting, ang application ay awtomatikong

4.9.2. Gawin ang iyong unang backup gamit ang Time Machine

Mula sa aklat na Macintosh Tutorial may-akda na si Skrylina Sofya

4.9.2. Gumawa ng iyong unang backup gamit ang Time Machine Bago mo simulan ang paggawa ng iyong unang backup, dapat kang magpasok ng external drive o magkaroon ng libreng hard drive partition na nakalaan para sa backup lang.

4.9.4. Gamit ang Time Machine

Mula sa aklat na Macintosh Tutorial may-akda na si Skrylina Sofya

4.9.4. Paggamit ng Time Machine Kapag nagawa mo na ang mga kinakailangang setting ng Time Machine at nakagawa ng ilang backup, maaari mong simulan ang paghahanap at pagpapanumbalik ng mga naunang bersyon ng iyong mga file. Para dito: 1. Magbukas ng Finder window at piliin ang file na kailangan mong i-restore.2. Kung