Metoder til bestemmelse af lipider i blodet Biokemi. Metoder til undersøgelse af lipidmetabolismeindikatorer

lipider kaldet fedtstoffer, der kommer ind i kroppen med mad og dannes i leveren. Blod (plasma eller serum) indeholder 3 hovedklasser af lipider: triglycerider (TG), kolesterol (CS) og dets estere, fosfolipider (PL).
Lipider er i stand til at tiltrække vand, men de fleste af dem opløses ikke i blodet. De transporteres i proteinbundet tilstand (i form af lipoproteiner eller med andre ord lipoproteiner). Lipoproteiner adskiller sig ikke kun i sammensætning, men også i størrelse og tæthed, men deres struktur er næsten den samme. Den centrale del (kerne) er repræsenteret af kolesterol og dets estere, fedtsyrer, triglycerider. Molekylets skal består af proteiner (apoproteiner) og vandopløselige lipider (phospholipider og ikke-esterificeret kolesterol). Den ydre del af apoproteiner er i stand til at danne hydrogenbindinger med vandmolekyler. Således kan lipoproteiner delvist opløses i fedtstoffer, delvist i vand.
Chylomikroner, efter at de er kommet ind i blodet, nedbrydes til glycerol og fedtsyrer, hvilket resulterer i dannelsen af ​​lipoproteiner. Kolesterolholdige rester af chylomikroner behandles i leveren.
Fra kolesterol og triglycerider i leveren dannes der meget lavdensitetslipoproteiner (VLDL), som donerer en del af triglyceriderne til perifert væv, mens deres rester vender tilbage til leveren og omdannes til low density lipoproteiner (LDL).
LPN II er transportører af kolesterol til perifert væv, som bruges til at bygge cellemembraner og metaboliske reaktioner. I dette tilfælde kommer ikke-esterificeret kolesterol ind i blodplasmaet og binder sig til high-density lipoproteins (HDL). Esterificeret kolesterol (associeret med estere) omdannes til VLDL. Derefter gentages cyklussen.
Blodet indeholder også intermediate density lipoproteins (LDL), som er rester af chylomikroner og VLDL og indeholder store mængder kolesterol. LDL i leverceller med deltagelse af lipase omdannes til LDL.
Blodplasma indeholder 3,5-8 g/l lipider. En stigning i niveauet af lipider i blodet kaldes hyperlipidæmi, og et fald kaldes hypolipidæmi. Indikatoren for totale blodlipider giver ikke en detaljeret idé om tilstanden af ​​fedtstofskiftet i kroppen.
Diagnostisk værdi er den kvantitative bestemmelse af specifikke lipider. Lipidsammensætningen af ​​blodplasma er vist i tabellen.

Lipidsammensætning af blodplasma

Klassificering af dyslipidæmi

- en gruppe af stoffer, der er heterogene i kemisk struktur og fysisk-kemiske egenskaber. I blodserum er de hovedsageligt repræsenteret af fedtsyrer, triglycerider, kolesterol og fosfolipider.

Triglycerider er hovedformen for lipidlagring i fedtvæv og lipidtransport i blodet. Studiet af triglyceridniveauer er nødvendigt for at bestemme typen af ​​hyperlipoproteinæmi og vurdere risikoen for at udvikle hjerte-kar-sygdomme.

Kolesterol udfører de vigtigste funktioner: det er en del af cellemembraner, er en forløber for galdesyrer, steroidhormoner og D-vitamin og fungerer som en antioxidant. Omkring 10% af den russiske befolkning har forhøjede kolesterolniveauer i blodet. Denne tilstand er asymptomatisk og kan føre til alvorlige sygdomme (aterosklerotisk karsygdom, koronar hjertesygdom).

Lipider er uopløselige i vand, derfor transporteres de af blodserum i kombination med proteiner. Komplekser af lipider + protein kaldes lipoproteiner. Proteiner involveret i lipidtransport kaldes apoproteiner.

Flere klasser er til stede i blodserumet lipoproteiner: chylomikroner, meget lav densitet lipoproteiner (VLDL), lav densitet lipoproteiner (LDL) og høj densitet lipoproteiner (HDL).

Hver lipoproteinfraktion har sin egen funktion. syntetiseret i leveren, bærer hovedsageligt triglycerider. De spiller en vigtig rolle i atherogenese. Lavdensitetslipoproteiner (LDL) rig på kolesterol, leverer kolesterol til perifere væv. VLDL- og LDL-niveauer bidrager til aflejringen af ​​kolesterol i karvæggen og betragtes som atherogene faktorer. Højdensitetslipoproteiner (HDL) deltage i den omvendte transport af kolesterol fra væv, tage det fra overbelastede vævsceller og overføre det til leveren, som "udnytter" og fjerner det fra kroppen. Et højt niveau af HDL betragtes som en anti-aterogen faktor (beskytter kroppen mod åreforkalkning).

Kolesterolets rolle og risikoen for at udvikle åreforkalkning afhænger af, hvilke fraktioner af lipoproteiner det indgår i. For at vurdere forholdet mellem atherogene og antiatherogene lipoproteiner, aterogent indeks.

Apolipoproteiner er proteiner, der er placeret på overfladen af ​​lipoproteiner.

Apolipoprotein A (ApoA-protein) er den vigtigste proteinkomponent i lipoproteiner (HDL), der transporterer kolesterol fra celler i perifert væv til leveren.

Apolipoprotein B (ApoB protein) er en del af lipoproteiner, der transporterer lipider til perifere væv.

Måling af koncentrationen af ​​apolipoprotein A og apolipoprotein B i blodserum giver den mest nøjagtige og entydige bestemmelse af forholdet mellem aterogene og antiatherogene egenskaber af lipoproteiner, hvilket estimeres som risikoen for at udvikle aterosklerotiske vaskulære læsioner og koronar hjertesygdom i løbet af de næste fem år.

I forskning lipid profil omfatter følgende indikatorer: kolesterol, triglycerider, VLDL, LDL, HDL, atherogen koefficient, kolesterol/triglycerid-forhold, glucose. Denne profil giver fuldstændig information om lipidmetabolisme, giver dig mulighed for at bestemme risikoen for at udvikle aterosklerotiske vaskulære læsioner, koronar hjertesygdom, identificere tilstedeværelsen af ​​dyslipoproteinæmi og skrive det, og om nødvendigt vælge den rigtige lipidsænkende behandling.

Indikationer

Stigende koncentrationkolesterol har diagnostisk værdi ved primære familiære hyperlipidæmier (arvelige former for sygdommen); graviditet, hypothyroidisme, nefrotisk syndrom, obstruktive leversygdomme, bugspytkirtelsygdomme (kronisk pancreatitis, maligne neoplasmer), diabetes mellitus.

Nedsat koncentrationkolesterol har diagnostisk værdi ved leversygdomme (cirrose, hepatitis), sult, sepsis, hyperthyroidisme, megaloblastisk anæmi.

Stigende koncentrationtriglycerider har diagnostisk værdi ved primære hyperlipidæmier (arvelige former af sygdommen); fedme, overdreven forbrug af kulhydrater, alkoholisme, diabetes mellitus, hypothyroidisme, nefrotisk syndrom, kronisk nyresvigt, gigt, akut og kronisk pancreatitis.

Nedsat koncentrationtriglycerider har diagnostisk værdi ved hypolipoproteinæmi, hyperthyroidisme, malabsorptionssyndrom.

meget lav densitet lipoproteiner (VLDL) bruges til at diagnosticere dyslipidæmi (IIb, III, IV og V typer). Høje koncentrationer af VLDL i blodserum afspejler indirekte serums aterogene egenskaber.

Stigende koncentrationlavdensitetslipoprotein (LDL) har diagnostisk værdi ved primær hyperkolesterolæmi, dyslipoproteinæmi (IIa- og IIb-typer); med fedme, obstruktiv gulsot, nefrotisk syndrom, diabetes mellitus, hypothyroidisme. Bestemmelse af niveauet af LDL er nødvendigt for udnævnelsen af ​​langtidsbehandling, hvis formål er at reducere koncentrationen af ​​lipider.

Stigende koncentration har diagnostisk værdi ved levercirrhose, alkoholisme.

Nedsat koncentrationhigh density lipoprotein (HDL) har diagnostisk værdi ved hypertriglyceridæmi, åreforkalkning, nefrotisk syndrom, diabetes mellitus, akutte infektioner, fedme, rygning.

Niveaudetektion apolipoprotein A indiceret til tidlig risikovurdering af koronar hjertesygdom; identifikation af patienter med en arvelig disposition for aterosklerose i en relativt ung alder; monitorering af behandling med lipidsænkende lægemidler.

Stigende koncentrationapolipoprotein A har diagnostisk værdi ved sygdomme i leveren, graviditet.

Nedsat koncentrationapolipoprotein A har diagnostisk værdi ved nefrotisk syndrom, kronisk nyresvigt, triglyceridæmi, kolestase, sepsis.

Diagnostisk værdiapolipoprotein B- den mest nøjagtige indikator for risikoen for at udvikle hjerte-kar-sygdomme, er også den mest passende indikator for effektiviteten af ​​statinbehandling.

Stigende koncentrationapolipoprotein B har diagnostisk værdi ved dyslipoproteinæmier (IIa, IIb, IV og V typer), koronar hjertesygdom, diabetes mellitus, hypothyroidisme, nefrotisk syndrom, leversygdomme, Itsenko-Cushings syndrom, porfyri.

Nedsat koncentrationapolipoprotein B har diagnostisk værdi ved hyperthyroidisme, malabsorptionssyndrom, kronisk anæmi, betændelsessygdomme i leddene, myelomatose.

Metode

Bestemmelsen udføres på en biokemisk analysator "Architect 8000".

Uddannelse

til undersøgelse af lipidprofilen (kolesterol, triglycerider, HDL-C, LDL-C, Apo-proteiner af lipoproteiner (Apo A1 og Apo-B)

Det er nødvendigt at afstå fra fysisk aktivitet, alkohol, rygning og stoffer, ændringer i kosten i mindst to uger før blodprøvetagning.

Blod tages kun på tom mave, 12-14 timer efter det sidste måltid.

Det er tilrådeligt at tage morgenmedicinen efter at have taget blod (hvis muligt).

Følgende procedurer bør ikke udføres før donation af blod: injektioner, punkteringer, generel kropsmassage, endoskopi, biopsi, EKG, røntgenundersøgelse, især med indføring af kontrastmiddel, dialyse.

Hvis der alligevel var en lille fysisk aktivitet, skal du hvile i mindst 15 minutter, før du donerer blod.

Lipidtestning udføres ikke ved infektionssygdomme, da der er et fald i totalkolesterol og HDL-C, uanset typen af ​​infektionsmiddel, patientens kliniske tilstand. Lipidprofilen bør kun kontrolleres, efter at patienten er helt restitueret.

Det er meget vigtigt, at disse anbefalinger overholdes strengt, da kun i dette tilfælde opnås pålidelige resultater af blodprøven.

Hyperlipidæmi (hyperlipæmi) - en stigning i koncentrationen af ​​totale plasmalipider som et fysiologisk fænomen kan observeres 1-4 timer efter et måltid. Alimentær hyperlipæmi er mere udtalt, jo lavere niveauet af lipider i patientens blod på tom mave.

Koncentrationen af ​​lipider i blodet ændres i en række patologiske tilstande:

Nefrotisk syndrom, lipoid nefrose, akut og kronisk nefritis;

Galdecirrhose i leveren, akut hepatitis;

Fedme - åreforkalkning;

Hypothyroidisme;

Pancreatitis osv.

Undersøgelsen af ​​niveauet af kolesterol (CS) afspejler kun patologien af ​​lipidmetabolisme i kroppen. Hyperkolesterolæmi er en dokumenteret risikofaktor for koronar åreforkalkning. CS er en væsentlig bestanddel af membranen af ​​alle celler, de særlige fysisk-kemiske egenskaber af CS-krystaller og konformationen af ​​dets molekyler bidrager til orden og mobilitet af phospholipider i membraner med temperaturændringer, hvilket gør det muligt for membranen at være i en mellemfasetilstand ("gel-flydende krystal") og opretholde fysiologiske funktioner. CS bruges som en forløber i biosyntesen af ​​steroidhormoner (gluco- og mineralokortikoider, kønshormoner), vitamin D 3 og galdesyrer. Det er betinget muligt at skelne mellem 3 puljer af CS:

A - hurtig udveksling (30 g);

B - langsomt udskiftning (50 g);

B - meget langsomt udveksling (60 g).

Endogent kolesterol syntetiseres i en betydelig mængde i leveren (80%). Eksogent kolesterol kommer ind i kroppen i sammensætningen af ​​animalske produkter. Transport af kolesterol fra leveren til ekstrahepatisk væv udføres

LDL. Udskillelse af kolesterol fra leveren fra ekstrahepatisk væv til leveren produceres af modne former for HDL (50% LDL, 25% HDL, 17% VLDL, 5% HM).

Hyperlipoproteinæmi og hyperkolesterolæmi (Fredrickson-klassifikation):

type 1 - hyperchylomikronæmi;

type 2 - a - hyper-β-lipoproteinæmi, b - hyper-β og hyperpre-β-lipoproteinæmi;

type 3 - dis-β-lipoproteinæmi;

type 4 - hyper-præ-β-lipoproteinæmi;

Type 5 - hyper-præ-β-lipoproteinæmi og hyperchylomikronæmi.

De mest aterogene er type 2 og 3.

Fosfolipider - en gruppe af lipider, der ud over fosforsyre (en obligatorisk komponent) indeholder alkohol (normalt glycerol), fedtsyrerester og nitrogenholdige baser. I klinisk og laboratoriepraksis er der en metode til at bestemme niveauet af totale fosfolipider, hvis niveau stiger hos patienter med primær og sekundær hyperlipoproteinæmi IIa og IIb. Faldet forekommer i en række sygdomme:

Fordøjelsesdystrofi;

fedtdegeneration af leveren,

portal cirrhose;

Progression af aterosklerose;

Hyperthyroidisme osv.

Lipidperoxidation (LPO) er en fri-radikal proces, hvis initiering sker under dannelsen af ​​reaktive oxygenarter - superoxid O 2 . ; hydroxylradikal HO . ; hydroperoxidradikal HO 2 . ; singlet oxygen O2; hypochlorit-ion ClO-. De vigtigste substrater for lipidperoxidation er flerumættede fedtsyrer, der er i strukturen af ​​membranfosfolipider. Jernmetalioner er den stærkeste katalysator. LPO er en fysiologisk proces, der er vigtig for kroppen, da den regulerer membranpermeabilitet, påvirker celledeling og vækst, starter fagosyntese og er en vej for biosyntese af visse biologiske stoffer (prostaglandiner, thromboxaner). LPO-niveauet styres af antioxidantsystemet (ascorbinsyre, urinsyre, β-caroten osv.). Tabet af balance mellem de to systemer fører til død af celler og cellulære strukturer.

Til diagnostik er det sædvanligt at bestemme indholdet af lipidperoxidationsprodukter i plasma og erytrocytter (dienkonjugater, malondialdehyd, Schiff-baser), koncentrationen af ​​den vigtigste naturlige antioxidant - alfa-tocopherol med beregning af MDA / TF-koefficienten. En integreret test til vurdering af lipidperoxidation er bestemmelsen af ​​permeabiliteten af ​​erytrocytmembraner.

2. pigmentudveksling et sæt komplekse transformationer af forskellige farvede stoffer i menneske- og dyrekroppen.

Det mest kendte blodpigment er hæmoglobin (chromoprotein, som består af proteindelen af ​​globin og protesegruppen, repræsenteret ved 4 hæmer, hver hæm består af 4 pyrrolkerner, som er forbundet med methinbroer, i midten er en jernion med en oxidationstilstand på 2+) . Den gennemsnitlige levetid for en erytrocyt er 100-110 dage. I slutningen af ​​denne periode sker ødelæggelsen og ødelæggelsen af ​​hæmoglobin. Nedbrydningsprocessen begynder allerede i det vaskulære leje, ender i de cellulære elementer i systemet af fagocytiske mononukleære celler (Kupffer-celler i leveren, histiocytter i bindevævet, plasmaceller i knoglemarven). Hæmoglobin i karlejet binder til plasmahaptoglobin og tilbageholdes i karlejet uden at passere gennem nyrefilteret. På grund af den trypsinlignende virkning af haptoglobins beta-kæde og de konformationelle ændringer forårsaget af dets påvirkning i hæmporphyrinringen, skabes betingelser for lettere ødelæggelse af hæmoglobin i de cellulære elementer i det fagocytiske mononuklearonsystem. molekylært grønt pigment verdoglobin(synonymer: verdohæmoglobin, choleglobin, pseudohæmoglobin) er et kompleks bestående af globin, et brudt porfyrinringsystem og ferrijern. Yderligere transformationer fører til tab af jern og globin af verdoglobin, som et resultat af hvilket porphyrinringen folder sig ud i en kæde og et lavmolekylært grønt galdepigment dannes - biliverdin. Næsten alt er enzymatisk reduceret til det vigtigste rød-gule galdepigment - bilirubin, som er en almindelig komponent i blodplasma På overfladen af ​​plasmamembranen af ​​hepatocytten gennemgår dissociation. I dette tilfælde danner det frigivne bilirubin en midlertidig forbindelse med lipiderne i plasmamembranen og bevæger sig gennem den på grund af aktiviteten af ​​visse enzymsystemer. Yderligere passage af fri bilirubin ind i cellen sker med deltagelse af to bærerproteiner i denne proces: ligandin (det transporterer hovedmængden af ​​bilirubin) og protein Z.

Ligandin og protein Z findes også i nyrerne og tarmene, derfor er de i tilfælde af leversvigt frie til at kompensere for svækkelsen af ​​afgiftningsprocesser i dette organ. Begge er ret godt opløselige i vand, men mangler evnen til at bevæge sig gennem membranens lipidlag. På grund af bindingen af ​​bilirubin til glucuronsyre går den iboende toksicitet af fri bilirubin stort set tabt. Hydrofobt, lipofilt fri bilirubin, der let opløses i membranlipider og som et resultat trænger ind i mitokondrier, afkobler respiration og oxidativ fosforylering i dem, forstyrrer proteinsyntesen, strømmen af ​​kaliumioner gennem membranen af ​​celler og organeller. Dette påvirker centralnervesystemets tilstand negativt, hvilket forårsager en række karakteristiske neurologiske symptomer hos patienter.

Bilirubinglucuronider (eller bundet, konjugeret bilirubin), i modsætning til frit bilirubin, reagerer umiddelbart med et diazoreaktivt ("direkte" bilirubin). Man skal huske på, at i selve blodplasmaet kan bilirubin, der ikke er konjugeret med glucuronsyre, enten være forbundet med albumin eller ej. Den sidste fraktion (ikke forbundet med albumin, lipider eller andre blodkomponenter af bilirubin) er den mest toksiske.

Bilirubinglucuronider, takket være membranernes enzymsystemer, bevæger sig aktivt gennem dem (mod koncentrationsgradienten) ind i galdekanalerne og frigives sammen med galden ind i tarmens lumen. I det, under påvirkning af enzymer produceret af tarmmikrofloraen, brydes glucuronidbindingen. Det frigivne frie bilirubin genoprettes med dannelsen i tyndtarmen, først mesobilirubin og derefter mesobilinogen (urobilinogen). Normalt kommer en vis del af mesobilinogen, der absorberes i tyndtarmen og i den øverste del af tyktarmen, ind i leveren gennem portvenesystemet, hvor det næsten ødelægges fuldstændigt (ved oxidation), og bliver til dipyrrolforbindelser - propent -diopent og mesobilileucan.

Mesobilinogen (urobilinogen) kommer ikke ind i det generelle kredsløb. En del af det, sammen med destruktionsprodukterne, sendes igen til tarmens lumen som en del af galde (enterohepotal cirkulation). Men selv med de mest mindre ændringer i leveren er dens barrierefunktion stort set "fjernet", og mesobilinogen kommer først ind i det generelle kredsløb og derefter i urinen. Hovedparten af ​​det sendes fra tyndtarmen til tyktarmen, hvor det under påvirkning af anaerob mikroflora (E. coli og andre bakterier) gennemgår yderligere restaurering med dannelse af stercobilinogen. Det resulterende stercobilinogen (daglig mængde på 100-200 mg) udskilles næsten fuldstændigt i fæces. I luften oxiderer det og bliver til stercobilin, som er et af de fækale pigmenter. En lille del af stercobilinogen absorberes gennem slimhinden i tyktarmen ind i systemet af vena cava inferior, leveres med blod til nyrerne og udskilles i urinen.

I urinen fra en rask person er mesobilinogen (urobilinogen) således fraværende, men det indeholder nogle stercobilin (som ofte forkert kaldes "urobilin")

For at bestemme indholdet af bilirubin i blodets serum (plasma) anvendes hovedsageligt kemiske og fysisk-kemiske forskningsmetoder, blandt hvilke der er kolorimetriske, spektrofotometriske (manuel og automatiseret), kromatografiske, fluorimetriske og nogle andre.

Et af de vigtige subjektive tegn på en krænkelse af pigmentmetabolisme er udseendet af gulsot, som normalt bemærkes, når niveauet af bilirubin i blodet er 27-34 μmol / l eller mere. Årsagerne til hyperbilirubinæmi kan være: 1) øget hæmolyse af erytrocytter (mere end 80% af total bilirubin er repræsenteret af ukonjugeret pigment); 2) krænkelse af levercellernes funktion og 3) en forsinkelse i udstrømningen af ​​galde (hyperbilirubinæmi er af leveroprindelse, hvis mere end 80% af total bilirubin er konjugeret bilirubin). I det første tilfælde taler de om den såkaldte hæmolytiske gulsot, i det andet - om parenkym (kan være forårsaget af arvelige defekter i processerne med bilirubintransport og dets glucuronidering), i det tredje - om mekanisk (eller obstruktiv, kongestiv) ) gulsot.

Med parenkymal gulsot der er destruktiv-dystrofiske ændringer i leverens parenkymceller og infiltrative ændringer i stroma, hvilket fører til en stigning i trykket i galdegangene. Stagnation af bilirubin i leveren lettes også af en kraftig svækkelse af metaboliske processer i de berørte hepatocytter, som mister evnen til normalt at udføre forskellige biokemiske og fysiologiske processer, især overføre bundet bilirubin fra celler til galde mod en koncentrationsgradient. En stigning i koncentrationen af ​​konjugeret bilirubin i blodet fører til dets udseende i urinen.

Det mest "subtile" tegn på leverskade ved hepatitis er udseendet mesobilinogen(urobilinogen) i urinen.

Med parenkymal gulsot stiger koncentrationen af ​​konjugeret (konjugeret) bilirubin i blodet hovedsageligt. Indholdet af fri bilirubin stiger, men i mindre grad.

I hjertet af patogenesen af ​​obstruktiv gulsot er ophøret af strømmen af ​​galde ind i tarmen, hvilket fører til forsvinden af ​​stercobilinogen fra urinen. Ved kongestiv gulsot øges hovedsageligt indholdet af konjugeret bilirubin i blodet. Ekstrahepatisk kolestatisk gulsot er ledsaget af en triade af kliniske tegn: misfarvet afføring, mørk urin og kløende hud. Intrahepatisk kolestase manifesteres klinisk ved hudkløe og gulsot. I en laboratorieundersøgelse noteres hyperbilirubinæmi (på grund af associeret), bilirubinuri, en stigning i alkalisk fosfatase med normale værdier af transaminaser i blodserum.

Hæmolytisk gulsot på grund af hæmolyse af erytrocytter og som følge heraf øget dannelse af bilirubin. En stigning i indholdet af fri bilirubin er et af hovedtegnene på hæmolytisk gulsot.

I klinisk praksis skelnes medfødte og erhvervede funktionelle hyperbilirubinæmier forårsaget af en krænkelse af elimineringen af ​​bilirubin fra kroppen (tilstedeværelsen af ​​defekter i enzymatiske og andre systemer til overførsel af bilirubin gennem cellemembraner og dets glucuronidering i dem). Gilberts syndrom er en arvelig benign kronisk sygdom, der opstår med moderat svær ikke-hæmolytisk ukonjugeret hyperbilirubinæmi. Posthepatitisk hyperbilirubinæmi Kalka - en erhvervet enzymdefekt, der fører til en stigning i niveauet af fri bilirubin i blodet, medfødt familiær ikke-hæmolytisk Crigler-Najjar gulsot (fravær af glucuronyltransferase i hepatocytter), gulsot i medfødt hypothyroidisme (thyroxincuronylenzymet stimulerer enzymet transferasesystem), fysiologisk neonatal gulsot, lægemiddelgulsot osv.

Forstyrrelser i pigmentmetabolisme kan være forårsaget af ændringer ikke kun i processerne med hæmnedbrydning, men også i dannelsen af ​​dets forstadier - porphyriner (cykliske organiske forbindelser baseret på porfinringen, bestående af 4 pyrroler forbundet med methinbroer). Porfyrier er en gruppe af arvelige sygdomme ledsaget af en genetisk mangel i aktiviteten af ​​enzymer involveret i biosyntesen af ​​hæm, hvor en stigning i indholdet af porphyriner eller deres forstadier findes i kroppen, hvilket forårsager en række kliniske tegn ( overdreven dannelse af metaboliske produkter, forårsager udvikling af neurologiske symptomer og (eller) en stigning i hudens lysfølsomhed).

De mest udbredte metoder til bestemmelse af bilirubin er baseret på dets interaktion med et diazo-reagens (Ehrlichs reagens). Jendrassik-Grof-metoden er blevet udbredt. I denne metode bruges en blanding af koffein og natriumbenzoat i acetatbuffer som en "frigører" af bilirubin. Den enzymatiske bestemmelse af bilirubin er baseret på dets oxidation af bilirubinoxidase. Det er muligt at bestemme ukonjugeret bilirubin ved andre metoder til enzymatisk oxidation.

I øjeblikket er bestemmelsen af ​​bilirubin ved metoderne "tørkemi" ved at blive mere udbredt, især i ekspresdiagnostik.

Vitaminer.

Vitaminer kaldes uerstattelige stoffer med lav molekylvægt, der kommer ind i kroppen med mad udefra og er involveret i reguleringen af ​​biokemiske processer på enzymniveau.

Ligheder og forskelle mellem vitaminer og hormoner.

lighed- regulere stofskiftet i den menneskelige krop gennem enzymer:

· vitaminer er en del af enzymer og er coenzymer eller cofaktorer;

· Hormoner eller regulerer aktiviteten af ​​allerede eksisterende enzymer i cellen, eller er induktorer eller repressorer i biosyntesen af ​​de nødvendige enzymer.

Forskel:

· vitaminer- lavmolekylære organiske forbindelser, eksogene faktorer til regulering af stofskiftet og kommer med mad udefra.

· Hormoner- højmolekylære organiske forbindelser, endogene faktorer syntetiseret i kroppens endokrine kirtler som reaktion på ændringer i det ydre eller indre miljø af den menneskelige krop, og regulerer også stofskiftet.

Vitaminer er klassificeret i:

1. Fedtopløselige: A, D, E, K, A.

2. Vandopløseligt: ​​gruppe B, PP, H, C, THFA (tetrahydrofolsyre), pantothensyre (B 3), P (rutin).

Vitamin A (retinol, antixerophthalmic) - den kemiske struktur er repræsenteret af en β-iononring og 2 isoprenrester; behovet i kroppen er 2,5-30 mg pr.

Det tidligste og specifikke tegn på hypovitaminose A er hæmeralopi (natteblindhed) - en krænkelse af tusmørkesyn. Det opstår på grund af mangel på visuelt pigment - rhodopsin. Rhodopsin indeholder retinal (A-vitamin aldehyd) som en aktiv gruppe - det findes i nethindestænger. Disse celler (stænger) opfatter lyssignaler med lav intensitet.

Rhodopsin = opsin (protein) + cis-retinal.

Når rhodopsin exciteres af lys, passerer cis-retinal, som et resultat af enzymatiske omlejringer inde i molekylet, over i transretinal (i lyset). Dette fører til en konformationel omlejring af hele rhodopsin-molekylet. Rhodopsin dissocieres i opsin og trans-retinal, som er en trigger, der exciterer en impuls i de optiske nerveender, som derefter overføres til hjernen.

I mørke, som et resultat af enzymatiske reaktioner, omdannes trans-retinal igen til cis-retinal og danner i kombination med opsin rhodopsin.

Vitamin A påvirker også væksten og udviklingen af ​​det integumentære epitel. Derfor observeres med beriberi skader på huden, slimhinderne og øjnene, hvilket manifesterer sig i patologisk keratinisering af huden og slimhinderne. Patienter udvikler xerophthalmia - tørhed af hornhinden i øjet, da tårekanalen er blokeret som følge af keratinisering af epitelet. Da øjet ophører med at blive vasket med en tåre, som har en bakteriedræbende virkning, udvikler konjunktivitis sig, sårdannelse og blødgøring af hornhinden - keratomalaci. Med beriberi A kan der også være skader på slimhinden i mave-tarmkanalen, luftvejene og genitourinary kanalen. Krænket modstand af alt væv mod infektioner. Med udviklingen af ​​beriberi i barndommen - væksthæmning.

På nuværende tidspunkt er A-vitamins deltagelse i beskyttelsen af ​​cellemembraner fra oxidationsmidler vist - det vil sige, at A-vitamin har en antioxidantfunktion.

Forskellig tæthed og er indikatorer for lipidmetabolisme. Der er forskellige metoder til kvantitativ bestemmelse af totale lipider: kolorimetrisk, nefelometrisk.

Metodens princip. Hydrolyseprodukterne af umættede lipider danner en rød forbindelse med phosphovanilin-reagenset, hvis farveintensitet er direkte proportional med indholdet af totale lipider.

De fleste lipider findes i blodet ikke i fri tilstand, men som en del af protein-lipidkomplekser: chylomikroner, α-lipoproteiner, β-lipoproteiner. Lipoproteiner kan adskilles ved forskellige metoder: centrifugering i saltvandsopløsninger af forskellige densiteter, elektroforese, tyndtlagskromatografi. Under ultracentrifugering isoleres chylomikroner og lipoproteiner af forskellig densitet: høj (HDL - α-lipoproteiner), lav (LDL - β-lipoproteiner), meget lav (VLDL - præ-β-lipoproteiner) osv.

Fraktioner af lipoproteiner adskiller sig i mængden af ​​protein, den relative molekylvægt af lipoproteiner og procentdelen af ​​individuelle lipidkomponenter. Således har α-lipoproteiner indeholdende en stor mængde protein (50-60%) en højere relativ tæthed (1,063-1,21), mens β-lipoproteiner og præ-β-lipoproteiner indeholder mindre protein og en betydelig mængde lipider - op til 95 % af den totale relative molekylvægt og lav relativ densitet (1,01-1,063).

Metodeprincip. Når LDL af blodserum interagerer med et heparinreagens, opstår der turbiditet, hvis intensitet bestemmes fotometrisk. Heparinreagenset er en blanding af heparin og calciumchlorid.

Materiale under undersøgelse: blodserum.

Reagenser: 0,27% CaCl2-opløsning, 1% heparinopløsning.

Udstyr: mikropipette, FEK, kuvette med en optisk vejlængde på 5 mm, reagensglas.

ARBEJDSPROCES. 2 ml af en 0,27 % opløsning af CaCl 2 og 0,2 ml blodserum tilsættes til reagensglasset, blandet. Bestem den optiske densitet af opløsningen (E 1) mod en 0,27 % CaCl 2 opløsning i kuvetter med et rødt lys filter (630 nm). Opløsningen fra kuvetten hældes i et reagensglas, 0,04 ml af en 1% heparinopløsning tilsættes med en mikropipette, blandes, og nøjagtigt efter 4 minutter bestemmes opløsningens optiske densitet (E 2) igen under samme betingelser. .

Forskellen i optisk tæthed beregnes og ganges med 1000 - den empiriske koefficient foreslået af Ledvina, da konstruktionen af ​​en kalibreringskurve er forbundet med en række vanskeligheder. Svaret er udtrykt i g/l.

x (g/l) \u003d (E 2 - E 1) 1000.

. Indholdet af LDL (b-lipoproteiner) i blodet varierer afhængig af alder, køn og er normalt 3,0-4,5 g/l. En stigning i koncentrationen af ​​LDL observeres ved åreforkalkning, obstruktiv gulsot, akut hepatitis, kroniske leversygdomme, diabetes, glykogenose, xanthomatosis og fedme, et fald i b-plasmocytom. Det gennemsnitlige kolesterolindhold i LDL er omkring 47%.

Bestemmelse af total kolesterol i blodserum baseret på Liebermann-Burchard-reaktionen (Ilk-metoden)

Eksogent kolesterol i mængden af ​​0,3-0,5 g følger med maden, og endogent kolesterol syntetiseres i kroppen i mængden af ​​0,8-2 g pr. dag. Især meget kolesterol syntetiseres i leveren, nyrerne, binyrerne, arterievæggen. Kolesterol syntetiseres fra 18 molekyler acetyl-CoA, 14 molekyler NADPH, 18 molekyler ATP.

Når eddikesyreanhydrid og koncentreret svovlsyre tilsættes blodserumet, bliver væsken rød, blå og til sidst grøn. Reaktionen skyldes dannelsen af ​​grøn sulfonsyrecholesterylen.

Reagenser: Liebermann-Burchard reagens (en blanding af iseddikesyre, eddikesyreanhydrid og koncentreret svovlsyre i forholdet 1:5:1), standard (1,8 g/l) kolesterolopløsning.

Udstyr: tørre reagensglas, tørre pipetter, FEK, kuvetter med en optisk vejlængde på 5 mm, en termostat.

ARBEJDSPROCES. Alle reagensglas, pipetter, kuvetter skal være tørre. Det er nødvendigt at arbejde med Liebermann-Burchard-reagenset meget omhyggeligt. 2,1 ml af Liebermann-Burchard-reagenset anbringes i et tørt rør, 0,1 ml ikke-hæmolyseret blodserum tilsættes meget langsomt langs væggen af ​​røret, røret rystes kraftigt og termostateres derefter i 20 minutter ved 37ºС. Der udvikles en smaragdgrøn farve, som er kolorimetrisk på FEC med et rødt lysfilter (630-690 nm) mod Liebermann-Burchard-reagenset. Den optiske densitet opnået på FEC'en bruges til at bestemme koncentrationen af ​​kolesterol i henhold til kalibreringskurven. Den fundne koncentration af kolesterol ganges med 1000, da der tages 0,1 ml serum i forsøget. Omregningsfaktoren til SI-enheder (mmol/l) er 0,0258. Det normale indhold af total kolesterol (frit og esterificeret) i blodserum er 2,97-8,79 mmol/l (115-340 mg%).

Konstruktion af en kalibreringsgraf. Fra en standardopløsning af kolesterol, hvor 1 ml indeholder 1,8 mg kolesterol, tages 0,05; 0,1; 0,15; 0,2; 0,25 ml og justeret til et volumen på 2,2 ml med Liebermann-Burchard-reagenset (henholdsvis 2,15; 2,1; 2,05; 2,0; 1,95 ml). Mængden af ​​kolesterol i prøven er 0,09; 0,18; 0,27; 0,36; 0,45 mg. De opnåede standardopløsninger af kolesterol, samt eksperimentelle reagensglas, rystes kraftigt og placeres i en termostat i 20 minutter, hvorefter de fotometeres. Kalibreringsgrafen er bygget i henhold til ekstinktionsværdierne opnået som et resultat af fotometri af standardløsninger.

Klinisk og diagnostisk værdi. I strid med fedtstofskiftet kan kolesterol ophobes i blodet. En stigning i blodkolesterol (hyperkolesterolæmi) observeres ved åreforkalkning, diabetes mellitus, obstruktiv gulsot, nefritis, nefrose (især lipoid nefrose) og hypothyroidisme. Et fald i blodkolesterol (hypokolesterolæmi) observeres med anæmi, sult, tuberkulose, hyperthyroidisme, kræftkakeksi, parenkymal gulsot, CNS-skader, febertilstande, med introduktionen

Til den kvantitative bestemmelse af totale lipider i blodserum anvendes den kolorimetriske metode med et phosphovanilin-reagens oftest. Totale lipider reagerer efter hydrolyse med svovlsyre med phosphovanilin-reagens for at danne en rød farve. Farveintensiteten er proportional med indholdet af totale lipider i blodserumet.

1. Indfør reagenser i tre reagensglas i henhold til følgende skema:

2. Bland indholdet af rørene, lad stå i mørke i 40-60 minutter. (farven på opløsningen skifter fra gul til pink).

3. Bland igen og mål absorbansen ved 500-560 nm (grønt filter) mod en blindprøve i en 5 mm kuvette.

4. Beregn mængden af ​​totale lipider ved hjælp af formlen:

D 2 - ekstinktion af kalibreringsopløsningen af ​​lipider i kuvetten;

X er koncentrationen af ​​totale lipider i standardopløsningen.

Definer udtrykket "totale lipider". Sammenlign den værdi, du har modtaget, med normale værdier. Hvilke biokemiske processer kan bedømmes af denne indikator?

Erfaring 4. Bestemmelse af indholdet af b- og præ-b-lipoproteiner i blodserum.

2. Et sæt pipetter.

3. Glasstang.

5. Kuvetter, 0,5 cm.

Reagenser. 1. Blodserum.

2. Calciumchlorid, 0,025 M opløsning.

3. Heparin, 1 % opløsning.

4. Destilleret vand.

1. Hæld 2 ml 0,025 M calciumchlorid i et reagensglas og tilsæt 0,2 ml blodserum.

2. Bland og mål den optiske densitet af prøven (D 1) på FEK-e ved en bølgelængde på 630-690 nm (rødt lysfilter) i en kuvette med en lagtykkelse på 0,5 cm mod destilleret vand. Skriv værdien af ​​den optiske tæthed D 1 ned.

3. Tilsæt derefter 0,04 ml af en 1 % heparinopløsning (1000 IE i 1 ml) til kuvetten og mål den optiske tæthed D 2 nøjagtigt efter 4 minutter.

Forskellen i værdier (D 2 - D 1) svarer til den optiske tæthed på grund af sedimentet af b-lipoproteiner.

Beregn indholdet af b- og præ-b-lipoproteiner ved hjælp af formlen:

hvor 12 er koefficienten, for omregninger i g/l.

Angiv stedet for biosyntese af b-lipoproteiner. Hvilken funktion udfører de i menneske- og dyrekroppen? Sammenlign den værdi, du har modtaget, med normale værdier. I hvilke tilfælde observeres afvigelser fra normale værdier?

Lektion nummer 16. "Lipidmetabolisme (del 2)"

Formålet med lektionen: at studere processerne af katabolisme og anabolisme af fedtsyrer.

SPØRGSMÅL TIL STYRING AF ARBEJDE:

1. Biokemisk mekanisme for fedtsyreoxidation.

2. Udveksling af ketonstoffer: uddannelse, biokemiske formål. Hvilke faktorer disponerer dyr for ketose?

3. Biokemisk mekanisme for fedtsyresyntese.

4. Biosyntese af triacylglyceroler. Biokemisk rolle af denne proces.

5. Biosyntese af fosfolipider. Biokemisk rolle af denne proces.

Afslutningsdato ________ Score ____ Instruktørens underskrift ____________

Eksperimentelt arbejde.

Erfaring 1. Ekspresmetode til bestemmelse af ketonstoffer i urin, mælk, blodserum (Lestrade test).

Enheder. 1. Stativ med reagensglas.

2. Et sæt pipetter.

3. Glasstang.

4. Filterpapir.

Reagenser. 1. Reagenspulver.

3. Blodserum.

4. Mælk.

1. Anbring en lille mængde (0,1-0,2 g) reagenspulver på filterpapiret ved spidsen af ​​skalpellen.

2. Overfør et par dråber blodserum til reagenspulveret.

Minimumsniveauet af ketonstoffer i blodet, der giver en positiv reaktion, er 10 mg / 100 ml (10 mg%). Farveudviklingshastigheden og dens intensitet er proportional med koncentrationen af ​​ketonstoffer i testprøven: hvis lilla farve opstår med det samme, er indholdet 50-80 mg% eller mere; hvis det vises efter 1 minut, indeholder prøven 30-50 mg%; udviklingen af ​​en svag farve efter 3 minutter indikerer tilstedeværelsen af ​​10-30 mg% ketonstoffer.

Det skal huskes, at testen er mere end 3 gange mere følsom til at bestemme acetoeddikesyre end acetone. Af alle ketonstoffer i humant blodserum er acetoeddikesyre fremherskende, men i blodet hos raske køer er 70-90% af ketonstofferne b-hydroxysmørsyre, i mælk udgør det 87-92%.

Lav en konklusion baseret på resultaterne af din forskning. Forklar hvorfor den overdrevne dannelse af ketonstoffer i kroppen hos mennesker og dyr er farlig?