Bagaimanakah enzim immunoassay dilakukan dan apakah yang ditunjukkan? Apa itu ELISA? Kaedah immunoassay enzim: intipati, prinsip, keburukan Apakah maksud kaedah Ifa?

Senarai kaedah diagnostik yang tersedia telah berkembang pesat dalam beberapa dekad kebelakangan ini; pakar diagnostik cuba menggabungkan kelebihan semua ujian sebelumnya dalam kaedah baharu, menyingkirkan semua kelemahan sebelumnya.

Baru-baru ini, senarai prosedur diagnostik semakin banyak termasuk ujian imunosorben berkaitan enzim - ujian moden dan agak baru, yang kurang diketahui oleh orang biasa yang tidak terlibat dalam perubatan. Namun begitu, teknik ini semakin pantas mendapat pangkat penganutnya di kalangan kakitangan perubatan yang berkelayakan. Anda boleh cuba mencari tahu apa itu dan dalam kes apa ia harus digunakan dengan membiasakan diri dengan ciri dan ciri utamanya.

Enzim immunoassay ialah teknik makmal instrumental berdasarkan tindak balas "antigen-antibodi" molekul, yang membolehkan pengesanan protein tertentu dalam bahan biologi (sampel untuk penyelidikan). Protein sedemikian boleh menjadi enzim, pelbagai mikroorganisma (virus, bakteria, kulat), protozoa, dll.

Selepas penemuan kaedah itu, ia diberi nama ujian ELISA, yang tiada kaitan dengan nama penemu, tetapi merupakan singkatan nama penuh dalam bahasa Inggeris - ujian imunosorben berkaitan enzim. Doktor di seluruh dunia menggunakan nama ini; sesetengah doktor di negara berbahasa Rusia juga memanggil jenis penyelidikan ini dengan cara ini.

Prinsip utama kaedah ini ialah tindak balas molekul "antigen-antibodi".

Antigen ialah sebarang molekul asing yang memasuki tubuh manusia sebagai sebahagian daripada mikrob yang menyebabkan penyakit ini. Antigen biasanya molekul protein. Sebagai tambahan kepada mikroorganisma, "orang asing" sedemikian boleh menjadi sel darah asing yang tidak sepadan dengan kumpulan atau faktor Rh.

Sebagai tindak balas kepada kemasukan antigen sedemikian ke dalam badan, tindak balas imun dilancarkan, yang bertujuan untuk melindungi daripada sebarang molekul asing. Ini berlaku kerana sintesis agen khas sistem imun - antibodi (imunoglobulin). Setiap antibodi hanya sesuai untuk antigen tertentu dan meneutralkan "orang asing" patogen dengan mengikatnya menjadi satu kompleks. Ia adalah proses pengikatan sedemikian yang dipanggil tindak balas "antigen-antibodi".

Jenis-jenis antibodi

Semua antibodi (imunoglobulin) dibahagikan kepada 5 jenis bergantung pada tahap tindak balas imun yang muncul:

Untuk diagnostik ELISA, tahap imunoglobulin IgG, IgM dan IgA paling kerap penting. Dengan titer mereka, anda boleh mengetahui sama ada seseorang pernah menghidap penyakit itu sebelum ini atau dijangkiti baru-baru ini, sama ada dia telah mengembangkan imuniti atau sama ada tubuhnya tidak berdaya melawan patologi.

Kebaikan dan keburukan enzim immunoassay

Pada masa ini, ELISA adalah salah satu kaedah yang paling tepat dan sensitif. Ia telah diterima pakai oleh pakar dalam pelbagai bidang perubatan dan terus meluaskan skop penggunaannya.

Kelebihan kaedah

• Ketepatan tinggi data yang diperolehi.
• Sensitiviti (membolehkan anda mengesan bahan yang diperlukan walaupun dengan kehadiran minimum patogen dalam sampel).
• Kemungkinan diagnosis pada hari pertama penyakit atau dalam tempoh inkubasi.
• Kelajuan pemerolehan data berbanding kaedah lain yang mempunyai ketepatan yang sama.
• Automasi tinggi proses dan penyertaan manusia yang minimum, yang mengurangkan ralat pelaku.
• Mendapatkan data mengenai peringkat proses patologi dan keberkesanan terapi yang dipilih.
• Tidak menyakitkan dan invasif minimum apabila mengumpul bahan.

Kelemahan kaedah

• Dalam kebanyakan kes, ia membolehkan anda menentukan tindak balas badan kepada agen patogenik, dan bukan patogen itu sendiri.
• Sebelum ujian, penyakit yang disyaki mesti diketahui dengan tepat, kerana ujian itu sangat spesifik.
• Kemungkinan penunjuk palsu yang disebabkan oleh isu teknikal, mengambil ubat-ubatan, kehadiran serentak beberapa penyakit kronik atau gangguan metabolik dalam badan pesakit.
• Tafsiran keputusan hanya boleh dilakukan oleh pakar yang berkelayakan tinggi, kerana untuk mentafsir data yang diperolehi perlu mempunyai latihan khas dan bekalan besar pengetahuan perubatan di kawasan tertentu.
• ELISA adalah ujian yang agak jarang berlaku, jadi ia tidak dilakukan di semua makmal diagnostik.
• Kaedah ini agak mahal, kerana sebagai tambahan kepada reagen, makmal mesti mempunyai banyak peralatan mahal dan sampel antigen yang dihasilkan di institut khas.

Dalam kes apakah enzim immunoassay digunakan?

Senarai penuh petunjuk untuk immunoassay enzim sangat luas; ia merangkumi hampir semua cabang perubatan.

Selalunya, ELISA digunakan untuk tujuan berikut:

• pengesanan penyakit berjangkit;
• diagnosis penyakit kelamin;
• penentuan status imun atau penyakit autoimun individu;
• pengenalpastian penanda tumor;
• penentuan hormon.

Dalam kes penyakit berjangkit dan virus, teknik ini membolehkan kita mengenal pasti patologi berikut:

Di samping itu, ELISA membolehkan anda dengan cepat dan berkesan menentukan keadaan infarksi, menilai potensi pembiakan badan, mengenal pasti alahan, sumbernya, dll.

Teknik imunoenzim digunakan untuk menjalankan kajian klinikal semasa pembangunan ubat baru dan dalam menilai kesannya terhadap tubuh manusia.

Jenis sampel dan kaedah pemilihan mereka untuk penyelidikan

Selalunya, bahan ujian untuk immunoassay enzim adalah darah, yang diambil dari urat antekubital pesakit. Pengumpulan sampel dijalankan pada perut kosong, terutamanya pada waktu pagi. Selepas pensampelan, sel-sel yang terbentuk yang mengganggu penyelidikan dipisahkan dan dikeluarkan daripada darah, hanya meninggalkan serum.

Apabila mendiagnosis jangkitan genitouriner, bahan sering menjadi sapuan dari tisu mukus organ kemaluan, lendir dari uretra atau serviks, sampel dari rektum, pengikisan daripada hakisan atau ulser di kawasan pangkal paha dan dari bahagian lain badan. Swab boleh diambil dari rongga mulut, dan juga dari nasofaring.

Kadangkala enzim immunoassay digunakan dalam amalan obstetrik dan ginekologi semasa kehamilan untuk menentukan keadaan cecair amniotik. Dalam kes ini, cecair amniotik menjadi sampel. Untuk melakukan ini, sedikit cecair diambil dengan menusuk kantung amniotik dengan jarum panjang. Semua manipulasi dijalankan dengan instrumen steril untuk meminimumkan kemungkinan risiko.

Selalunya bahan menjadi cecair serebrospinal atau serous. Ini berlaku dengan anestesia tempatan, yang diberikan melalui suntikan.

Pakar yang menghantar untuk kajian itu harus menjelaskan jenis bahan yang diperlukan untuk immunoassay enzim. Selalunya sampel beberapa jenis atau dari tempat yang berbeza diambil sekaligus. Doktor yang mengeluarkan rujukan untuk pemeriksaan jenis ini juga harus memberitahu pesakit tentang persediaan untuk menderma biomaterial.

Persediaan untuk immunoassay enzim

Untuk meningkatkan ketepatan data yang diperoleh selepas immunoassay enzim, penyediaan untuk pemilihan bahan hendaklah seperti berikut:

• 10 hari sebelum kajian, tidak termasuk antibiotik, ubat antivirus dan antimikotik;
• selama sehari adalah perlu untuk mengecualikan alkohol, merokok dan mengambil bahan narkotik;
• dalam tempoh yang sama, adalah perlu untuk mengelakkan keletihan fizikal;
• Beri amaran kepada prescriber tentang semua ubat yang diambil oleh pesakit;
• Beritahu doktor anda jika anda hamil atau mengesyaki anda hamil.

Adalah lebih baik jika bahan ujian dikumpulkan pada waktu pagi semasa perut kosong.

Jika diagnosis bertujuan untuk menentukan keadaan tahap hormon, maka adalah penting untuk memastikan anda berada dalam keadaan tenang sehari sebelumnya dan mengelakkan ketegangan saraf. Bagi wanita, menderma darah untuk hormon jelas ditentukan oleh tempoh kitaran bulanan, yang akan dibincangkan oleh doktor pada masa pelantikan.

2-3 hari sebelum pensampelan, anda perlu mengecualikan makanan goreng dan berlemak dari menu, dan sebelum ujian hepatitis, jangan makan buah sitrus atau buah-buahan dan sayur-sayuran oren atau kuning yang lain.

Tafsiran keputusan immunoassay enzim

Hasil kajian kualitatif biasanya ditunjukkan oleh tanda "+" (dikesan) atau "-" (tidak dijumpai).

Berdasarkan kehadiran atau ketiadaan kumpulan imunoglobulin tertentu, kesimpulan berikut boleh dibuat:

• JgM (-), JgG (-), JgA (-) - imuniti terhadap penyakit tidak hadir sepenuhnya (badan belum pernah menemui antigen jenis ini);
• JgM (-), JgG (+), JgA (-) - terdapat perlanggaran sebelumnya dengan antigen atau vaksin ini;
• JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - proses patologi akut (kemungkinan utama);
• JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - proses kronik;
• JgM (+), JgG (+), JgA (+) - berulang;
• JgM (-) - peringkat pemulihan.

Nilai kuantitatif membawa beban maklumat yang besar, tetapi hanya doktor yang hadir boleh mentafsirnya, berdasarkan petunjuk sebelumnya, umur pesakit, dan norma untuk setiap penyakit tertentu. Atas sebab ini anda tidak boleh menilai sendiri hasilnya.

Berapa lama anda perlu menunggu keputusan?

Teknik ini mempunyai banyak jenis, bergantung pada tempoh untuk mendapatkan data di tangan ditentukan. Tempoh purata diagnostik ELISA ialah 4-6 jam, yang membolehkan anda memberikan hasil pada hari berikutnya.

Kaedah paling lama mengambil masa sehingga 10 hari, sebagai contoh, dalam kes jangkitan HIV.

Dalam kes keperluan mendesak, adalah mungkin untuk menggunakan kaedah ekspres, di mana jawapannya diperoleh dalam masa 1-2 jam.

Di manakah saya boleh mendapatkan ujian ELISA?

Memandangkan peralatan untuk jenis diagnostik ini agak mahal, tidak semua makmal boleh membelinya. Di samping itu, ujian yang mengandungi antigen tertentu mempunyai jangka hayat yang terhad (biasanya kira-kira 1 tahun) dan oleh itu memerlukan pengemaskinian yang berterusan.

Atas sebab ini, institusi perubatan awam tidak selalu mempunyai makmal ELISA. Selalunya adalah perlu untuk menghubungi pusat perubatan swasta atau pusat diagnostik yang besar.

Untuk menjalankan ujian ELISA, makmal mesti mempunyai lesen khas, dan kakitangan dan pembantu makmal mesti menjalani latihan khas.

Selalunya, pusat diagnostik atau makmal tertentu disyorkan oleh doktor yang merujuk pesakit untuk pemeriksaan.

Kos enzim immunoassay

Harga untuk kajian ini bergantung pada wilayah negara dan pada tahap klinik yang menyediakan perkhidmatan tersebut. Di Moscow, harga minimum untuk menentukan satu antigen bermula dari 700 rubel. Jika perlu untuk mengenal pasti beberapa imunoglobulin sekaligus, harga akan ditambah.

Dalam kes analisis segera, kos meningkat sebanyak 150-200 rubel. bagi setiap antigen.

Walaupun kos yang agak tinggi, immunoassay enzim memungkinkan untuk membuat pemeriksaan pesakit sebagai bermaklumat dan secepat mungkin, yang mengurangkan masa sebelum permulaan rawatan dan membolehkan penstabilan keadaan seseorang yang lebih cepat.

Video ini membentangkan filem "Asas immunoassay enzim".

Dari semasa ke semasa, doktor menetapkan ujian ELISA; tidak semua orang tahu apa ini. ELISA mempunyai penyahkodan berikut - enzim immunoassay darah. Ujian darah sedemikian membantu memahami bagaimana tubuh melawan penyakit berjangkit dan menunjukkan fasa penyakit. Enzim immunoassay membantu dalam menilai aktiviti perlindungan darah, mengenal pasti kekurangan imun dalam patologi yang berkaitan dengan jangkitan, masalah hormon, dll.

Ujian darah ELISA berfungsi dengan bahan yang diambil dari vena. Di samping itu, kandungan badan vitreous, cecair dari saraf tunjang, dan smear dari uretra atau saluran serviks tersedia untuk pemeriksaan. Untuk enzim immunoassay ELISA, cecair yang mengelilingi janin boleh diambil daripada wanita hamil.

Dalam kes ini, darah boleh diuji secara langsung untuk ELISA menggunakan teknik yang berbeza. Terdapat secara langsung, tidak langsung, persaingan dan sekatan. Apabila badan dijangkiti dengan beberapa agen patogen, yang dipanggil antigen, sistem imun mula menghasilkan antibodi khusus, contohnya, kepada hepatitis. Antibodi ini bertujuan untuk "berurusan" dengan agen asing. Apakah antibodi? Ini adalah protein khas yang boleh berinteraksi dengan antigen dan membentuk kompleks imunologi yang dipanggil antigen-antibodi. Diagnostik ELISA bertanggungjawab untuk pengesanan kompleks ini. Untuk mengesan antigen, antibodi ditambah kepada sampel darah yang terhasil atau prosedur sebaliknya dilakukan.

Keputusan ELISA yang positif adalah berdasarkan tindak balas sistem imun dan enzim. Di bawah pengaruh yang pertama, agen berjangkit dan unsur selular mengikat, yang kedua membantu untuk menggambarkan hasil yang pertama. Reaksi imun melibatkan gabungan antibodi dan antigen. Hasil daripada proses ini, kompleks imun terbentuk. Semua sel mempunyai antigen pada permukaannya. Sel imun menangkap yang mencurigakan, dan antigen, yang dipasang pada permukaan, menjalani prosedur perbandingan dengan maklumat yang "dimuatkan" ke dalam ingatan. Sekiranya terdapat padanan dalam huraian, maka sel pulang ke rumah, tetapi jika tidak, maka sambungan berlaku, penciptaan yang bertanggungjawab untuk antibodi yang melekat pada permukaan.

Sementara itu, tindak balas enzimatik membolehkan bahan diubah menjadi bahan baharu. Bahan terdedah kepada enzim. Dalam kes ini, perbezaan enzimatik dipastikan oleh substrat yang berbeza. Produk yang terhasil daripada tindak balas ini dihantar untuk penentuan jumlah patogen, yang penentuannya adalah berdasarkan kepadatan warna larutan.

Ciri-ciri kaedah

Ujian darah immunoassay enzim ditetapkan apabila perlu untuk mendiagnosis alahan dan penyakit asal virus. Terdapat juga ujian ELISA untuk sifilis dan beberapa jangkitan lain yang disebarkan melalui hubungan seksual tanpa perlindungan. Diagnosis ini menjadi semakin popular berbanding dengan PCR. Hakikatnya ialah PCR melibatkan kerja dengan smear. Tidak seperti PCR, keputusan ELISA boleh didapati daripada ujian darah.

Di samping itu, ujian darah menggunakan kaedah ELISA boleh ditetapkan apabila perlu untuk mewujudkan kehadiran kekurangan imun, mendiagnosis onkologi, menilai keberkesanan rawatan, menentukan tahap hormon dan menjalani pemeriksaan praoperasi secara keseluruhan.

Jika anda membandingkan kajian ELISA, contohnya, dengan PCR, anda boleh menemui beberapa kelebihan. Perkara utama ialah kemungkinan diagnosis lengkap walaupun pada peringkat awal perkembangan. Di samping itu, keputusan ELISA membantu dalam menentukan peringkat khusus penyakit dan tahap perkembangannya.

Ujian ELISA mempunyai kecekapan yang lebih tinggi berbanding dengan PCR; sebagai tambahan, ia boleh diambil semasa kehamilan untuk mengesan STD. Sesiapa yang telah mengambil ujian ini boleh mengetahui kepekatan TSH dalam serum darah. Ini sangat penting untuk memeriksa apakah tindak balas kelenjar tiroid, sama ada terdapat sebarang kerosakan dalam fungsinya.

Kelebihan tambahan, bagaimanapun, tindak balas rantai polimerase juga mempunyai, adalah kelajuan kajian, yang bermaksud keputusan yang cepat. Doktor juga menghargai ketepatan keputusan. Jika kita bercakap tentang STD, maka tahapnya mencapai 98 peratus, seperti halnya dengan kepekatan TSH.

Sudah tentu, terdapat beberapa kelemahan. Walau bagaimanapun, dalam kes ini kita bercakap tentang ciri tidak langsung ujian. Khususnya, kita bercakap tentang hakikat bahawa mustahil untuk mengecualikan kemungkinan kesilapan dalam menentukan piawaian. Kadangkala ujian yang diambil oleh seorang gadis yang benar-benar sihat boleh menunjukkan keputusan positif palsu, atau keputusan negatif dalam kes yang bertentangan. Walau bagaimanapun, klasifikasi kaedah penyelidikan psikologi dalam kebanyakan kes mengaitkan kekurangan tersebut dengan penyediaan yang tidak betul atau pelanggaran teknik yang digunakan untuk mengumpulkan bahan.

Ciri-ciri Pelaksanaan

Untuk analisis ELISA, dalam kebanyakan kes, darah didermakan. Sebelum menderma darah, adalah penting untuk berpuasa sekurang-kurangnya lapan jam dan mengelakkan mengambil beberapa ubat yang menjejaskan keputusan ujian. Kami bercakap tentang antihistamin dan ubat hormon yang menjejaskan fungsi kelenjar tiroid. Di samping itu, alkohol harus dikecualikan selama sekurang-kurangnya 24 jam. Pastikan anda tidak merokok sekurang-kurangnya satu jam sebelum menderma darah. Herotan keputusan juga mungkin berlaku apabila mengambil bahan narkotik.

Sebelum beralih ke transkrip, perlu disebutkan kaedah pengukuran yang digunakan untuk ujian sedemikian. Keputusan ujian akan menunjukkan antibodi atau immunoglobulin Ig. Mereka bermaksud protein yang sangat spesifik yang telah dibincangkan sebelum ini. Limfosit B bertanggungjawab untuk pengeluarannya sebaik sahaja virus, bakteria atau kulat memasuki badan. Terdapat lima jenis imunoglobulin, yang ditetapkan oleh abjad Latin.

Perbezaan mereka dikaitkan dengan bentuk dan jisim molekul yang berbeza. Mereka mempunyai separuh hayat yang berbeza dan terlibat atau tidak terlibat dalam proses berjangkit dengan cara yang berbeza. Jangka masa di mana ia boleh dikesan dari saat jangkitan berlaku juga berbeza-beza.

Jika anda mengelaskan imunoglobulin menggunakan berat molekul sebagai asas, maka IgM mempunyai penunjuk tertinggi. Ciri imunoglobulin jenis ini ialah ketidakupayaan untuk melepasi halangan plasenta. Jika IgM dikesan dalam ujian pada bayi yang baru lahir, kita bercakap tentang kehadiran jangkitan pada janin.

Sebahagian besar darah manusia mengandungi imunoglobulin IgG, yang paling sedikit ialah IgE. Bercakap tentang kerja dalam rangka proses berjangkit, perhatian khusus harus diberikan kepada pilihan A, M, G. IgE bertindak sebagai penanda tindak balas alahan. IgD hanya terdapat dalam tisu nodus limfa dan tonsil. Ini penting dari sudut pandangan mewujudkan imuniti tempatan.

Di samping itu, analisis menentukan antigen. Ia difahami sebagai bahan dengan berat molekul tinggi, yang terkenal dengan asal usul organiknya. Khususnya, kita bercakap tentang patogen penyakit berjangkit dan spektrum lain. Selain itu, kami juga bermaksud bahan yang memberi isyarat kepada pelbagai perubahan sel yang tidak dapat dielakkan dalam beberapa penyakit. Kompleks imun juga ditunjukkan, yang menunjukkan kompleks antigen-antibodi yang mengambil bahagian dalam proses imun.

Biasanya, masa pengeluaran bergantung pada makmal khusus yang anda hubungi. Sesetengah makmal dapat memberikan keputusan dalam satu atau dua hari, yang lain mengambil masa seminggu. Kelewatan mungkin disebabkan oleh keperluan untuk mengumpul sejumlah serum.

Kesan ke atas keputusan dan tafsiran

Walaupun fakta bahawa ELISA dianggap sebagai salah satu kaedah ujian yang paling tepat, ralat masih berlaku. Prosedur untuk mengambil bahan, pengangkutan yang tidak betul dan penyimpanan bahan boleh menjejaskan ketepatan keputusan. Mengambil ubat-ubatan, seperti yang disebutkan di atas, kehadiran penyakit tersembunyi. Gangguan metabolik atau kekurangan imun juga tidak akan membenarkan anda mendapatkan penunjuk yang betul. Sepanjang tempoh hayat sehingga satu tahun, bayi yang baru lahir juga mungkin mempunyai penunjuk yang tidak tepat. Ini disebabkan oleh fakta bahawa antibodi ibu terdapat di dalam badan.

Bercakap tentang penyahkodan, borang analisis menggunakan tanda positif atau negatif untuk menunjukkan hasil pengiraan bagi setiap kelas imunoglobulin. Berikut adalah pilihan yang mungkin.

Ketiadaan IgG, IgA dan IgM yang dikesan menunjukkan pemulihan lengkap. Keputusan negatif untuk komponen seperti IgM, IgA, IgG bermakna kekurangan imuniti terhadap jangkitan.

Gabungan keputusan positif dan negatif untuk IgG, IgA dalam kombinasi dengan IgM positif menunjukkan kehadiran jangkitan akut dalam badan. Keputusan IgG positif digabungkan dengan penunjuk negatif untuk IgA dan IgM sepadan dengan tempoh selepas vaksinasi atau pemerolehan imuniti akibat jangkitan.

Gabungan keputusan positif atau negatif untuk IgG, IgA dan keputusan negatif untuk IgM menunjukkan kehadiran jangkitan dalam perjalanan kroniknya. Keputusan positif untuk tiga komponen: IgG, IgM, IgA menunjukkan keterukan jangkitan yang berada dalam bentuk kronik. Selain menjelaskan secara langsung kelas antibodi, sebagai sebahagian daripada mentafsir analisis ELISA, doktor menerima maklumat tentang penunjuk kuantitatif mereka. Adalah penting untuk menekankan bahawa doktor yang merawat harus bertanggungjawab untuk penyahkodan. Hakikatnya ialah gabungan beberapa komponen boleh menyebabkan dia berfikir tentang keputusan palsu yang diperoleh, yang akan membawa kepada ujian semula. Penyahsulitan bebas dalam kes ini tidak berguna.

Tujuan ujian darah untuk sifilis adalah untuk mengenal pasti antibodi yang boleh dihasilkan oleh badan untuk melawan agen penyebabnya, Treponema pallidum.

Ujian positif palsu untuk sifilis boleh berlaku dalam kes di mana pengeluaran antigen berlaku atas sebab lain.

Sifilis positif palsu didiagnosis dalam 10% kes.

Oleh kerana ujian untuk sifilis ditetapkan bukan sahaja apabila pesakit mempunyai aduan, tetapi semasa pemeriksaan perubatan, sebelum bekerja, semasa mengandung, sebelum dimasukkan ke hospital, terdapat peratusan jangkitan yang tinggi pada orang yang tidak mengesyaki kehadiran penyakit sedemikian. .

Untuk menghapuskan kesilapan, adalah perlu untuk memastikan kebolehpercayaan keputusan yang diperolehi.

Keputusan positif untuk sifilis dibahagikan kepada dua kumpulan: akut dan kronik. Keputusan positif palsu akut berlaku dalam tempoh 6 bulan ujian biasa.

• gangguan berjangkit akut;
• kecederaan;
• sebarang vaksinasi 1-7 hari sebelum mengambil sampel;
• keracunan akut.

Dengan kehadiran mana-mana faktor dalam badan, proses pengeluaran antibodi diaktifkan, yang ditunjukkan dalam keputusan ujian.

Sekiranya terdapat masalah kronik, ujian mungkin menunjukkan keputusan yang salah selama 6 bulan atau lebih.

• gangguan tisu penghubung;
• sebarang bentuk tuberkulosis;
• gangguan hati kronik;
• HIV, hepatitis B, C, D, dan penyakit virus lain;
• proses autoimun dalam badan.

Hasilnya menjadi salah kerana pengeluaran antibodi tidak spesifik yang sistematik sebagai tindak balas kepada salah satu gangguan yang disenaraikan.

Apa yang perlu dilakukan jika sifilis palsu dikesan

Untuk menentukan sama ada ujian untuk sifilis mungkin salah, anda perlu menilai kehadiran faktor lain dalam manifestasi penyakit dan kemungkinan jangkitan.

Treponema pallidum adalah patogen yang disebarkan secara seksual melalui membran mukus alat kelamin, mulut dan rektum apabila bersentuhan dengan orang yang dijangkiti. Transmisi daripada ibu yang dijangkiti kepada anaknya juga mungkin.

Tempoh inkubasi di mana penyakit itu tidak dirasai adalah 2-6 minggu. Selepas ini, ulser sifilis dengan asas padat terbentuk di tapak jangkitan yang mungkin.

Selepas 1-2 minggu, nodus limfa yang paling dekat dengan tapak lesi membesar dan menjadi menyakitkan.

Apabila mendiagnosis sifilis positif palsu, anda mesti kembali ke kemudahan perubatan. Pada masa yang sama, maklumkan tentang semua ubat yang anda ambil sebelum ujian, penyakit kronik dan akut.

Jika anda melakukan hubungan seks tanpa perlindungan dengan pasangan yang belum diuji atau anda mendapati tanda-tanda awal penyakit, anda harus memberitahu doktor anda mengenainya.

Selepas mengumpul anamnesis dan menjalankan pemeriksaan, doktor akan menetapkan anda satu siri ujian yang akan membolehkan anda menentukan keputusan yang tepat dengan ralat kurang daripada 1%.

Jenis ujian untuk sifilis

Terdapat dua jenis ujian: bukan treponemal dan treponemal. Pilihan pertama melibatkan penggunaan analog tiruan Treponema pallidum; dalam kes kedua, treponema sebenar digunakan.

Kaedah bukan treponemal

Teknik sedemikian adalah meluas dan paling kerap digunakan dalam pemeriksaan perubatan rutin.

Kelebihannya ialah kos rendah, keputusan cepat, dan keupayaan untuk menjalankan penyelidikan menggunakan peralatan makmal standard.

Analisis ke atas RW

Untuk menjalankannya, darah diambil dari pesakit, dan kurang kerap, cecair serebrospinal. Darah boleh diambil dari jari atau urat. Kesilapan dalam menjalankan kajian sedemikian boleh sehingga 7%.

Reaksi mikro pemendakan (MR atau RMP)

Mungkin termasuk dua jenis ujian sifilis RPR dan VDRL. Akibat pecahan sel di bawah pengaruh treponema, antibodi antilipid terbentuk.

Lipid boleh dimusnahkan di bawah pengaruh gangguan lain, jadi tahap kesilapan semasa melakukan VDRL dan RPR adalah 1-3%.

Ujian treponemal

Kajian sedemikian tidak dijalankan di semua klinik dan memerlukan peralatan yang mahal.

Oleh itu, ia digunakan apabila kehadiran penyakit itu disyaki berdasarkan keputusan ujian bukan treponemal. Kesilapan kajian sedemikian adalah kurang daripada 1%.

Membolehkan anda menentukan antigen dan antibodi. Untuk menentukan hasilnya, pesakit menderma darah dari jari atau urat. Akibatnya, ujian juga membantu menentukan peringkat penyakit.

Ujian RPGA untuk sifilis membolehkan anda menentukan peratusan lekatan sel darah merah. Keputusan tepat tindak balas hemagglutinasi pasif boleh diperolehi pada hari ke-28 selepas jangkitan.

Enzim immunoassay menentukan kehadiran dan peringkat penyakit berdasarkan tahap imunoglobulin pelbagai jenis.

Ujian paling tepat untuk mengesan DNA patogen. Ia digunakan dalam kes yang jarang berlaku, kerana ia memerlukan reagen kompleks.

Kebarangkalian ralat ujian RIF, RPGA, ELISA adalah kurang daripada 1%. Dengan PCR, ralat boleh menjadi 0-1%.

Keputusan positif untuk sifilis pada wanita hamil

Pada wanita hamil, hasil yang salah boleh diperhatikan dalam 1.5% kes apabila melakukan ujian bukan treponemal. Analisis untuk jenis penyakit ini adalah wajib sepanjang kehamilan.

Ujian pertama untuk sifilis dijalankan pada 12 minggu, kemudian pada 30 minggu dan sebelum kelahiran. Hasilnya mungkin palsu kerana perubahan semula jadi dalam badan, dan khususnya, imuniti untuk melindungi janin yang sedang membesar.

Oleh itu, semasa kehamilan, ujian ulangan mungkin ditetapkan; ia sering ditetapkan walaupun keputusan pertama negatif, jika terdapat faktor risiko.

Ujian treponemal juga boleh ditetapkan, kerana kesan penyakit pada badan kanak-kanak lebih merosakkan daripada rawatan antibiotik jika diagnosis disahkan.

Ujian positif yang lemah

Jika borang keputusan yang anda terima mengandungi 1-2 tambah, ini mungkin menunjukkan kehadiran sejumlah kecil antibodi. Keputusan ini boleh berlaku dalam beberapa kes:

• tempoh inkubasi yang belum selesai;
• bentuk lewat, selepas 2-4 tahun;
• antibodi sisa selepas rawatan penyakit.

Dalam kes ini, pemeriksaan ulangan diperlukan selepas 2 minggu.

Bagaimana untuk membuat persediaan yang betul untuk ujian

Jika ujian sifilis yang salah dilakukan, anda akan diberi ujian ulangan. Agar keputusannya setepat mungkin, perlu disediakan dengan betul.

• Sebelum analisis, anda dibenarkan minum hanya air, makan adalah dilarang;
• berhenti alkohol dan merokok 1 jam sebelum 24 jam;
• jika anda menderma darah daripada urat, luangkan masa 10 minit berehat sebelum berbuat demikian;
• Sekiranya penyakit berjangkit bertambah teruk, haid berlaku, atau pesakit terdedah kepada x-ray sehari sebelumnya, ujian darah untuk sifilis tidak dilakukan.

Terdapat juga beberapa ubat dalam senarai kontraindikasi, jadi jika anda sedang menjalani rawatan, beritahu doktor tentang ubat yang anda ambil.

Sekiranya penyakit itu disahkan

Jika, selepas menjalankan beberapa pemeriksaan, termasuk ujian treponemal, hasilnya positif, perlu mengambil beberapa langkah:

• memaklumkan pasangan seksual anda tentang perkara ini, adalah perlu bahawa dia juga menjalani pemeriksaan;
• saudara terdekat mesti menjalani peperiksaan;
• adalah perlu untuk menjalankan rawatan pencegahan orang tersayang;
• Semasa keseluruhan rawatan, adalah perlu untuk mengeluarkan sijil cuti sakit dan mengelakkan hubungan rapat dengan orang lain untuk mengelakkan penularan jangkitan;
• Pada akhir rawatan, sijil dikeluarkan, yang mesti dilampirkan pada rekod perubatan dan disediakan semasa menjalankan ujian untuk antibodi, supaya ahli diagnostik tidak mempunyai soalan tentang penampilan antigen dalam keputusan.

Semasa membuat diagnosis, maklumat adalah sulit. Ia tidak didedahkan semasa mengambil cuti sakit; dalam semua dokumen yang dikeluarkan oleh hospital, nama penyakit itu disulitkan; orang yang tidak mempunyai hubungan rapat dengan pesakit tidak dimaklumkan tentang diagnosis ini.

Selepas rawatan, pesakit benar-benar selamat; menghidap sifilis pada masa lalu tidak boleh menjadi alasan untuk penafian pekerjaan atau pelaksanaan hak asasi manusia yang lain.

Sekiranya diagnosis disahkan pada peringkat awal, maka kebarangkalian penyembuhan lengkap adalah 100%. Treponema pallidum adalah salah satu daripada segelintir, selama bertahun-tahun merawat pesakit dengan penisilin, yang tidak membangunkan perlindungan terhadapnya.

Oleh itu, pesakit dirawat dengan ubat berdasarkan derivatif penisilin. Sekiranya bentuk utama penyakit ini berlaku, adalah perlu untuk mendiagnosis dan merawat semua pasangan seksual yang dijangkiti orang yang dijangkiti dalam tempoh 3 bulan.

Sifilis selepas rawatan peringkat awal tidak meninggalkan komplikasi. Penyakit ini boleh menyebabkan kecacatan jika ia kronik atau jika terdapat jangkitan dalam rahim.

positif sifilis

Soal jawab tentang: ifa positif sifilis

Soalan kepada Dr Sukhov Yu.A.
Hello. Saya telah bertanyakan soalan kepada anda di laman web Health of Ukraine secara ringkas. Saya akan menulis sepenuhnya kisah saya. Sila rujuk. Apakah ujian lain yang perlu diambil?
2 tahun lalu terdapat hubungan seksual kasual terbuka.
Selepas 1.5 bulan, beberapa jenis seram bermula: demam yang berpanjangan, di kawasan tiroid seolah-olah ada kerja yang sedang berlaku, sesuatu berdengung, kemudian sakit kepala, sakit tekak, sakit teruk pada tulang dan otot, mula-mula menikam. secara semula jadi, kemudian seperti air mendidih yang mengalir melalui otot, loya, ruam sekali, jangkitan virus pernafasan akut yang kerap yang tidak bertindak balas terhadap rawatan untuk jangka masa yang lama, sesak nafas, kesukaran bernafas, nafas berbau, neuralgia, berpeluh malam, kelemahan teruk, prestasi menurun. Saya hampir bertukar menjadi mayat. Sebelum itu, saya seorang gadis yang sihat dan berkembang maju, saya menari secara profesional. Saya secara fizikal agak tabah dan aktif. Saya hampir tidak pernah mengalami selsema sama sekali. Saya boleh dikatakan sihat.
1 tahun dan 10 bulan selepas hubungan seksual tanpa perlindungan, saya diuji negatif untuk HIV di 2 makmal ELISA yang berbeza.
Hepatitis B dan C negatif.
EBV PCR negatif
CMV PCR negatif
Virus herpes jenis 6 negatif
Toxoplasmosis PCR negatif
Sifilis negatif
STI negatif.

Ujian darah am: ESR 30; selebihnya adalah perkara biasa.
Biokimia adalah CRP positif, selebihnya adalah normal.

Apa patut saya buat? Saya berputus asa. Saya telah menguji untuk segala-galanya, untuk semua jangkitan, tetapi sebabnya tidak dijumpai. Perlukah saya menguji HIV semula? 2 tahun sudah berlalu sejak kenalan. Sesetengah simptom telah hilang, tetapi saya berasa sangat teruk, lemah teruk, neuralgia berterusan, berpeluh di bahagian dada pada waktu malam. Saya tidak faham apa yang saya sakit. Mungkin saya perlu mengambil beberapa ujian lagi dan datang untuk melihat awak?Saya pasti lelaki muda ini menjangkiti saya, saya tidak pernah melihatnya lagi. Tolong. Tolong nasihatkan apa yang perlu dilakukan?

helo!
Saya berumur 31 tahun dan mengandung 35 minggu. 2 bulan yang lalu saya menderma darah untuk jangkitan menggunakan kaedah ELISA (kerana saya berakhir dengan muntah di bahagian penyakit berjangkit, di mana mereka melakukan ujian), pakar sakit puan saya tidak mengarahkan saya untuk menderma darah untuk jangkitan pada peringkat awal kehamilan (yang nampak pelik bagi saya, walaupun darah diuji untuk AIDS dan sifilis diambil tiga kali semasa mengandung, semuanya negatif). Sekarang saya telah dimaklumkan mengenai keputusannya. Tolong komen ya. Sesetengah penunjuk membimbangkan, seperti virus campak, CMV, herpes HSV 1/2, jangkitan virus Epstein-Barr (EBV):

Rubella Ig G K=2.0
CMV Ig G K=4.1
Herpes HSV Ig G jenis 1 K=3.4, jenis 2 negatif.
Epstein-Barr VCA K=4.7 NA —
klamidia dan mycoplasma - negatif.

Arahan saya menyatakan perkara berikut:
Pekali positif K = ketumpatan optik sampel. Jika K kurang daripada 0.9, hasilnya adalah negatif, jika K adalah dari 0.9 hingga 1.1, ia diragui, jika K lebih daripada 1.1, ia adalah positif.
Nilai Ig G, EBV, NA sehingga 55 unit/ml mungkin normal, di atas nilai ini hasilnya positif.
Sila komen! Terima kasih atas perhatian!

Menyahkod keputusan ujian untuk sifilis

Sifilis adalah penyakit yang serius dan sangat berjangkit. Untuk mengenal pasti penyakit, ujian darah (vena dan kapilari) digunakan, dan dalam beberapa kes, cecair serebrospinal diperiksa. Tafsiran ujian sifilis dijalankan oleh doktor yang hadir. Pesakit secara bebas boleh melihat dan memahami beberapa simbol dalam analisis, tetapi kesimpulan akhir tentang kehadiran atau ketiadaan penyakit mesti dibuat oleh doktor yang berkelayakan. Ujian positif palsu atau negatif palsu untuk sifilis adalah mungkin.

Bila jumpa doktor

Untuk masa yang lama, sifilis adalah penyakit berbahaya yang tidak dapat diubati. Perubatan moden mempunyai semua cara untuk menyembuhkan sepenuhnya penyakit ini. Lebih awal diagnosis dibuat dan penyakit itu dikesan, lebih mudah untuk dirawat. Jangkitan sifilis berlaku bukan sahaja melalui hubungan seksual, tetapi juga melalui perkongsian barangan rumah yang sama dengan pesakit (berus gigi, tuala, peralatan dapur, dll.). Oleh itu, ujian darah ekspres berkala untuk sifilis disyorkan untuk setiap orang.

Apabila dijangkiti, nodus limfa di kawasan pangkal paha menjadi bengkak, ulser dan ruam kulit muncul di mulut dan kawasan kemaluan. Sekiranya anda melihat gejala pertama penyakit, anda perlu segera berjumpa doktor. Peperiksaan boleh tanpa nama dengan rujukan daripada pakar sakit puan, pakar urologi, pakar proktologi, pakar venereologi atau ahli terapi biasa. Selepas lulus ujian, anda harus menghubungi doktor anda untuk mendapatkan transkrip ujian sifilis.

Tujuan peperiksaan

Selalunya semasa pemeriksaan perubatan, doktor mungkin memerintahkan banyak ujian makmal, termasuk ujian untuk sifilis. Rujukan ini tidak boleh dianggap sebagai syak wasangka penyakit. Dalam banyak bidang kehidupan awam, sijil ketiadaan penyakit diperlukan.

• Perancangan Keluarga
• Pendaftaran asrama
• Akses ke tempat kerja untuk pekerja penjagaan kesihatan, kakitangan katering, dsb.
• Menderma organ atau darah
• Pesakit yang aktif secara seksual
• Kehadiran gejala klinikal
• Tamat rawatan untuk sifilis

Sebagai peraturan, salah satu ujian tidak spesifik (bukan treponemal) ditetapkan sebagai kajian utama. Kebolehpercayaan ujian sedemikian agak rendah dan pesakit mungkin menerima keputusan positif palsu. Dalam kes ini, kajian ulangan akan ditetapkan menggunakan ujian khusus (treponemal). Ujian positif atau negatif mesti disemak oleh doktor yang hadir.

Bersedia untuk ujian

Sebelum menderma darah dari jari atau urat untuk ujian makmal, anda mesti mematuhi beberapa peraturan supaya analisis boleh dipercayai yang mungkin. 8-12 jam sebelum pensampelan darah anda tidak boleh mengambil makanan, teh atau kopi. Pada siang hari sebelum melawat makmal, tidak digalakkan untuk makan makanan pedas, berlemak, goreng, masin atau asap. Antibiotik dan ubat lain juga boleh mengganggu ujian. Semua bahan yang diambil hendaklah dilaporkan kepada doktor anda. Dia mungkin mengesyorkan agar anda menahan diri daripada mengambil ujian selama 1 atau beberapa minggu. Sampel darah boleh diambil di makmal swasta, klinik daerah, atau anda boleh menghubungi pakar kesihatan ke rumah anda.

Walau apa pun, peralatan steril dan sarung tangan pakai buang digunakan.

Ujian pantas untuk sifilis boleh dilakukan secara bebas di rumah. Farmasi menawarkan ujian khas dengan arahan terperinci dalam bahasa Rusia. Keputusan ujian diketahui dalam masa 10 minit. Satu jalur merah pada penunjuk adalah ujian negatif untuk sifilis, dua jalur adalah positif. Kebolehpercayaan ujian sedemikian tidak cukup tinggi dan tidak boleh berfungsi sebagai pengesahan diagnosis.

Bagaimana untuk memahami keputusan peperiksaan tidak spesifik

Pesakit sering berasa tidak pasti selepas ujian. Menderma darah dan tidak dapat menguraikan ujian sifilis sendiri, tentu saja, tidak menyenangkan. Mentafsir ujian darah memerlukan pendidikan perubatan dan kelayakan doktor yang sesuai, serta mengambil kira semua faktor yang mempengaruhi keputusan. Bolehkah pesakit membaca keputusan ujian sifilis mereka sendiri? Selepas melihat laporan makmal, anda boleh membuat kesimpulan mudah, tetapi doktor mesti mengesahkan atau menafikan diagnosis.

Ujian merah toluidine tidak ditetapkan untuk diagnosis, tetapi untuk memeriksa keberkesanan rawatan penyakit. kajian menunjukkan berapa banyak bilangan antibodi telah berubah berbanding dengan analisis sebelumnya. Sekiranya bilangannya telah berkurangan, maka rawatan itu berjaya. Analisis dijalankan beberapa kali semasa rawatan seperti yang ditetapkan oleh doktor. 3 bulan selepas selesai prosedur, ujian kawalan dijalankan.

Ujian bukan treponemal (RSKk, RMP dan RPR) selalunya ditetapkan semasa pemeriksaan perubatan dan sebagai diagnosis pantas. Terdapat beberapa pilihan notasi hasil penyelidikan. Mentafsir mereka agak mudah:

• "-" keputusan negatif
• “+”, “1+”) atau “++”, “2+” analisis lemah positif
• “+++”, “3+” atau “++++”, “4+” ujian positif untuk sifilis

Sama ada keputusan boleh menjadi positif palsu atau negatif palsu untuk sifilis. Sekiranya tiada gejala klinikal dan hubungan seksual kasual, keputusan negatif boleh diterima oleh doktor sebagai betul. Reaksi positif biasanya diperiksa menggunakan ujian treponemal.

Keputusan Kajian Khusus

Ujian treponemal adalah kompleks dan mahal berbanding ujian bukan treponemal. Terdapat beberapa jenis ujian yang digunakan untuk mendiagnosis sifilis: RSCT, RIBT, RIF, RPGA, ELISA dan immunoblotting). Salah satu kajian khusus yang tepat ialah analisis RIBT. Keputusan ujian mungkin dilaporkan oleh makmal sebagai peratusan.

• 20% sepadan dengan keputusan negatif (“–”)
• 21-30% analisis boleh dipersoalkan (“++” atau “2+”)
• 31-50% positif lemah (“+++”, “3+”)
• 51% atau lebih sepadan dengan keputusan positif

Immunoblotting adalah salah satu cara moden dan tepat untuk mendiagnosis penyakit ini. Biasanya ditetapkan untuk mengesahkan atau menyangkal keputusan kajian pertama. Pengesanan antibodi IgG dan IgM dalam darah ditunjukkan dengan jalur. Keputusan ujian ditafsirkan berbanding dengan ujian bukan treponemal.

Jika kedua-dua keputusan negatif, pesakit sihat atau jangkitan pada minggu pertama perkembangan. Kedua-dua keputusan positif menunjukkan kehadiran sifilis atau yang lain, mungkin penyakit autoimun.

Ujian imunoblot positif selepas kajian nonntreponemal negatif menunjukkan kehadiran sifilis, penyakit autoimun, atau kanser.

Mungkin terdapat tindak balas positif pada wanita hamil. Ujian imunoblot negatif selepas kajian nonntreponemal positif bermakna ketiadaan penyakit.

Kebolehpercayaan analisis

Selalu ada kemungkinan keputusan ujian tidak betul. Apabila mentafsir ujian untuk sifilis, perhatian khusus harus diberikan kepada faktor luaran di luar kawalan pesakit. Juruteknik makmal yang menjalankan penyelidikan atau pesakit juga boleh membuat kesilapan apabila mereka salah menyediakan untuk pensampelan darah atau tidak memberikan doktor maklumat yang benar tentang diri mereka. Keputusan positif palsu adalah mungkin di bawah pengaruh faktor berikut:

• Diabetes apa-apa jenis
• Kehadiran dadah dalam darah
• Keracunan alkohol
• Penyakit berjangkit (campak, hepatitis, mononukleosis, dll.)
• Neoplasma jinak atau malignan
• Penyakit jantung
• Mengambil antibiotik atau vaksinasi baru-baru ini
• Penyakit autoimun (lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, dll.)
• Kehamilan
• Makan makanan berlemak, pedas atau masin pada siang hari sebelum pensampelan darah

Bergantung pada peringkat penyakit, beberapa ujian mungkin tidak mengesan penyakit. Oleh itu, tindak balas Wasserman (RSKt, dan RSKk) dijalankan hanya 3-4 minggu selepas kemungkinan jangkitan dengan kebarangkalian 100%; dengan kehadiran sifilis tertier, kebolehpercayaan hanya 75%. Untuk mendiagnosis peringkat awal penyakit, adalah dinasihatkan untuk menggunakan ujian ELISA. Ujian adalah immunoassay enzim dengan kepekaan tinggi terhadap antibodi. Kebolehpercayaan hasilnya hampir 100%; keputusan positif palsu dengan kehadiran penyakit lain dikecualikan.

Keputusan ujian negatif untuk penyakit kelamin bermakna orang itu sihat. Ujian yang boleh dipersoalkan untuk sifilis akan membawa kepada pemeriksaan semula. Sekiranya terdapat faktor yang boleh menjejaskan kesimpulan akhir, contohnya, kehadiran penyakit lain, doktor akan mengubah parameter ujian. Keputusan ujian positif untuk sifilis bukanlah hukuman mati atau sebab untuk panik. Dengan bantuan ubat, penyakit ini boleh sembuh sepenuhnya. Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa penyakit pada peringkat awal adalah lebih mudah dirawat.

ELISA untuk sifilis: kaedah analisis, tafsiran, sebab untuk keputusan positif palsu

Senarai langkah diagnostik standard yang digunakan untuk penyakit berjangkit termasuk immunoassay enzim. Jika ELISA positif sifilis, jangan segera panik.

Mari kita lihat dengan lebih dekat ciri-ciri teknik penyelidikan ini dan prinsip untuk mentafsir keputusan yang diperoleh dalam kategori pesakit yang berbeza.

Intipati kajian

Enzim immunoassay adalah salah satu kaedah yang paling biasa untuk mendiagnosis penyakit berjangkit. Ia tergolong dalam kategori ujian treponemal, iaitu, ia boleh digunakan untuk menentukan kehadiran agen penyebab sifilis - treponema pallidum - dalam badan pesakit.

Menggunakan kaedah ELISA, sifilis dikesan dengan mengesan antibodi kepada treponema. Mereka terkandung dalam darah pesakit, dan jenis dan kuantitinya bergantung pada peringkat dan bentuk penyakit, yang membolehkan seseorang mendapatkan maklumat penting tentang keadaan semasa kesihatan manusia.

Kelebihan dan kekurangan

ELISA sangat kerap ditetapkan untuk sifilis yang disyaki atau penyakit berjangkit lain. Ini disebabkan oleh fakta bahawa analisis membolehkan kita mengenal pasti jenis dan peringkat penyakit yang tepat, dan kebolehpercayaannya kekal pada tahap yang tinggi - kebarangkalian ralat berdasarkan hasil beberapa kajian hanya 1%, ELISA utama mempunyai ketepatan kira-kira 90%.

Penggunaan reagen berkualiti tinggi dan peralatan moden membolehkan kami memaksimumkan ketepatan penunjuk.

Secara umum, kelebihan kaedah adalah:

1. Ketepatan keputusan yang tinggi. Kemungkinan menerima data palsu adalah sangat rendah.
2. Meminimumkan faktor pengaruh manusia. Peralatan moden untuk menjalankan ELISA menghapuskan pengaruh manusia terhadap hasil kajian kerana automasi proses.
3. Pengenalpastian antibodi khusus. Tidak mustahil untuk mengelirukan antigen satu jenis dengan yang lain, jadi analisis menunjukkan hasil yang tepat untuk diagnosis tertentu.
4. Merekodkan sedikit penyelewengan dari norma. Malah kepekatan terkecil agen patologi tidak akan disedari.

Kita tidak seharusnya melupakan kelemahan kaedah ini. ELISA mempunyai kelemahan berikut:

1. Harga tinggi. Kos yang tinggi adalah disebabkan oleh banyak faktor, khususnya, keperluan untuk peralatan yang baik, reagen berkualiti tinggi dan pakar dengan tahap latihan yang mencukupi.
2. Keperluan untuk diagnosis awal. Anda perlu tahu antigen mana yang perlu dicari, kerana tanpa data tambahan adalah mustahil untuk membuat diagnosis yang tepat.
3. Kebarangkalian keputusan positif palsu. Keadaan badan tertentu dan faktor lain mungkin memesongkan data akhir.

Petunjuk untuk digunakan

Seorang doktor mungkin menetapkan enzim immunoassay untuk mendiagnosis bukan sahaja sifilis, tetapi juga beberapa penyakit berjangkit lain.

Jika kita mempertimbangkan keadaan secara langsung dengan jangkitan treponema, sebab pemeriksaan mungkin:

• penampilan gejala luar penyakit (chancres, ruam sifilis, gusi, dll.);
• penurunan ketara dalam imuniti;
• pengesanan atau kecurigaan sifilis dalam pasangan seksual, orang tersayang dan ahli keluarga;
• tindak balas positif semasa ujian lain;
• mengenal pasti penyakit lain yang mungkin dikaitkan dengan sifilis;
• keinginan peribadi seseorang untuk menjalani peperiksaan.

Kaedah melaksanakan

ELISA boleh dijalankan dengan cara yang berbeza. Dalam setiap kes tertentu, pilihan yang paling sesuai dipilih.

Pertama sekali, terdapat pembahagian kaedah kepada:

1. Kualitatif. Kehadiran jangkitan atau virus dalam badan pesakit dikesan.
2. Kuantitatif. Menentukan kepekatan antibodi kepada agen patogen dalam tubuh manusia, yang menunjukkan peringkat dan intensiti perkembangan penyakit.

Terdapat juga klasifikasi kaedah untuk menjalankan ELISA berdasarkan prinsip menghasilkan semula tindak balas yang diperlukan.

Terdapat 3 pilihan:

1. Lurus. Antibodi berlabel disuntik ke dalam sampel darah yang disediakan.
2. Tidak langsung dengan antigen. Antigen yang diserap pertama kali diletakkan di dalam sel plat polistirena yang dimaksudkan untuk ELISA. Kemudian antibodi virus ditambah kepada mereka, yang mencetuskan pembentukan kompleks imun yang diperlukan untuk penilaian lanjut keputusan.
3. Tidak langsung dengan antibodi. Kaedah ini sering digunakan untuk penyakit kelamin. Ia melibatkan penyerapan awal antibodi, barulah antigen ditambahkan pada tablet.

Peraturan pengumpulan bahan

Untuk mengurangkan risiko menerima keputusan yang tidak boleh dipercayai, adalah perlu untuk menderma darah dengan betul untuk analisis.

Sebelum mengambil ujian ELISA, anda mesti mematuhi beberapa sekatan:

• elakkan tekanan fizikal dan emosi yang kuat;
• berhenti merokok dan minum alkohol sekurang-kurangnya 1-3 hari;
• selama beberapa hari anda perlu beralih kepada pemakanan yang betul;
• Adalah dinasihatkan untuk wanita mengawal fasa kitaran haid, kerana hormon boleh memesongkan keputusan;
• hidangan terakhir hendaklah 8 - 10 jam sebelum menderma darah;
• 10 hari sebelum mengambil ubat yang boleh menjejaskan keputusan kajian dikecualikan.

Untuk ELISA, darah vena diambil dari vena ulnar; ia mesti didermakan pada waktu pagi semasa perut kosong. Secara umum, peraturan standard untuk penyediaan pengumpulan darah vena terpakai. Bergantung pada kehadiran penyakit mana yang sedang diuji, keperluan tambahan untuk penyediaan awal pesakit boleh diperkenalkan.

Metodologi

Arahan untuk melaksanakan ELISA agak mudah:

1. Darah pesakit diambil dari vena.
2. Bahan yang diambil disediakan dan dibahagikan kepada sampel pada palet jaring halus khas.
3. Antigen dicampur dengan antibodi mengikut kaedah yang dipilih.
4. Reaksi dinilai. Sampel dibandingkan dengan sampel kawalan, dan hasilnya dinilai secara kualitatif dan kuantitatif.
5. Data dimasukkan ke dalam jadual khas dengan penunjuk kuantitatif dilampirkan (jumlah antibodi).
6. Doktor yang merawat menafsirkan hasilnya. Sekiranya perlu, rawatan yang sesuai ditetapkan.

Selepas peperiksaan, pesakit diberikan dokumen dengan keputusan. Ia kelihatan seperti jadual dengan simbol yang sepadan bertentangan dengan setiap jenis imunoglobulin di persimpangan dengan nama penyakit berjangkit.

Penyahkodan

Hanya pakar yang akan dapat menguraikan keputusan ujian dengan betul. Sukar untuk memikirkan sendiri, sebagai contoh, apakah maksud keputusan ELISA k = 1 4. Sifilis juga boleh berlaku dalam bentuk yang berbeza, yang juga ditunjukkan dalam data akhir.

Keputusan menunjukkan 3 jenis imunoglobulin:

1. IgM. Membolehkan anda menentukan tempoh jangkitan dengan sifilis. Keputusan positif menunjukkan pemburukan penyakit. Ketiadaan mereka mungkin menunjukkan remisi patologi kronik atau bentuk laten penyakit.
2. IgA. Menunjukkan penyakit yang telah lebih daripada sebulan sejak jangkitan. Ia juga merupakan tanda fasa akut penyakit ini, baik dalam patologi biasa dan dalam kronik yang lebih maju.
3. IgG. Ia adalah tanda tempoh puncak penyakit, iaitu, pemburukan. Dengan sifilis, tindak balas positif muncul beberapa lama selepas rawatan. Dalam beberapa jenis penyakit ia mungkin merupakan tanda imuniti yang dibangunkan.

Bahan-bahan ini dihasilkan oleh badan dalam urutan tertentu, yang merupakan tanda tambahan penyakit. Ujian kualitatif hanya menentukan kehadiran imunoglobulin dalam darah setiap jenis.

Ini dicerminkan dalam perubahan warna bahan yang terlibat dalam analisis. Penunjuk kuantitatif adalah tambahan; ia menggambarkan keadaan dengan lebih tepat. Nisbah antigen dan antibodi menunjukkan keterukan penyakit dan keamatan tindak balas badan.

Apa nak buat

Sekiranya pesakit benar-benar menghidap sifilis, ELISA positif sentiasa dikesan; adalah mustahil untuk tidak menyedari kehadiran treponemes semasa kajian sedemikian. Jangan putus asa, penyakit ini sangat boleh dirawat, terutamanya pada peringkat awal.

Apa yang perlu dilakukan jika keputusan ujian adalah positif:

• mengikut petunjuk doktor, menjalani pemeriksaan tambahan;
• melengkapkan kursus terapi antibiotik mengikut rejimen yang dipilih;
• tumpukan usaha anda untuk menguatkan sistem imun anda;
• memaklumkan pasangan seksual anda tentang penyakit ini;
• pada masa hadapan, kerap menjalani diagnostik pencegahan sehingga pembatalan pendaftaran di dispensari (selepas 5 tahun jika tiada keputusan ujian positif).

Tidak perlu menangguhkan cuti sakit dan takut menghebahkan keputusan. Diagnosis disulitkan dan kekal rahsia; hanya jika terdapat ancaman jangkitan kepada orang lain, adalah perlu untuk memaklumkan saudara-mara dan pasangan seksual tentang masalah itu supaya mereka menjalani pemeriksaan yang diperlukan.

Hasil positif palsu dan puncanya

Kadangkala keputusan ujian lain dan ELISA direkodkan sebagai positif palsu untuk sifilis. Itulah sebabnya disyorkan untuk menjalankan 2 - 3 kaedah tambahan dan ulangi enzim immunoassay selepas beberapa ketika.

Ketidaktepatan sedemikian jarang berlaku; ia disebabkan terutamanya oleh faktor berikut:

• kehamilan;
• penyakit kronik;
• vaksinasi baru-baru ini;
• kecederaan.

Keputusan positif palsu dibahagikan kepada akut dan kronik, bergantung pada sifat faktor yang menimbulkannya.

Tafsiran lengkap ujian sifilis

Ujian untuk sifilis: jenis ujian, tafsiran keputusan, sebab keputusan peperiksaan positif palsu dan negatif palsu.

Sifilis adalah penyakit kelamin yang disebabkan oleh bakteria Treponema pallidum (treponema pallidum). Baca lebih lanjut mengenai laluan penularan sifilis, simptomnya dan kemungkinan komplikasi dalam artikel Semua tentang sifilis. Gejala dan rawatan.

Pengesanan sifilis tepat pada masanya (menggunakan ujian khas) membolehkan doktor memulakan rawatan tepat pada masanya dan mencegah perkembangan komplikasi berbahaya penyakit ini.

Ujian untuk sifilis semasa mengandung membantu mencegah kelahiran kanak-kanak dengan sifilis kongenital. Maklumat lanjut tentang ujian untuk sifilis semasa kehamilan diterangkan dalam artikel Semua tentang diagnosis dan rawatan sifilis semasa kehamilan.

Mengapa saya ditetapkan ujian untuk sifilis?

Dalam kebanyakan kes, doktor tidak mempunyai peluang untuk mendapatkan data yang tepat tentang kehidupan seks pesakit (sesetengah orang menyembunyikan butiran kehidupan seks mereka atau memandang rendah risiko dijangkiti penyakit kelamin). Oleh itu, untuk melindungi orang ramai daripada kemungkinan akibat daripada kecuaian mereka sendiri atau kekurangan pengetahuan perubatan, dalam beberapa kes doktor menetapkan apa yang dipanggil ujian saringan sifilis (iaitu, ujian yang diambil oleh sejumlah besar orang).

Doktor anda mungkin memerintahkan ujian untuk sifilis walaupun anda tidak mempunyai simptom penyakit dan yakin anda tidak mungkin dijangkiti.

Keperluan untuk ujian ini adalah disebabkan oleh fakta bahawa sifilis kadang-kadang ditularkan melalui hubungan harian (bukan melalui hubungan seksual) dan berlaku dalam bentuk terpendam (iaitu, tanpa gejala).

Sebagai peraturan, pemeriksaan saringan ditetapkan dalam situasi berikut:

1. Apabila memohon pekerjaan (pekerja penjagaan kesihatan, pekerja katering, anggota tentera, dsb.)
2. Semasa mendaftar untuk kehamilan.
3. Semasa kemasukan ke hospital, sebagai persediaan untuk pembedahan.
4. Penderma darah.
5. Orang yang dipenjarakan di tempat-tempat perampasan kebebasan.

Doktor anda juga boleh memerintahkan ujian untuk sifilis:

1. Apabila gejala penyakit dikesan (biasanya ruam di kawasan kemaluan).
2. Setelah menerima keputusan positif ujian saringan untuk sifilis.
3. Jika anda pernah melakukan hubungan seksual dengan seseorang yang telah didiagnosis dengan sifilis.
4. Kanak-kanak yang baru lahir yang ibunya menghidap sifilis.

Di samping itu, ujian untuk sifilis dijalankan secara berkala semasa rawatan (untuk memastikan rawatan itu berkesan) dan walaupun selepas tamat rawatan, untuk memantau penyembuhan.

Apakah ujian yang digunakan untuk mendiagnosis sifilis?

Pakar dermatovenerologi terlibat dalam diagnosis dan rawatan sifilis. Ujian berikut boleh digunakan untuk mendiagnosis penyakit:

Pemeriksaan kulit, organ genital luaran dan dalaman dijalankan untuk mengenal pasti simptom utama sifilis: chancre, nodus limfa bengkak, ruam kulit, dsb. (lihat Gejala sifilis)

Untuk mengesan Treponema pallidum, doktor memeriksa calitan (atau kikisan) yang diperoleh daripada ulser, nodus limfa, cecair amniotik pada wanita hamil, dll di bawah mikroskop. Darah tidak diperiksa di bawah mikroskop.

Penting: Jika Treponema pallidum dikesan dalam ujian anda di bawah mikroskop, ini bermakna anda pasti menghidap sifilis. Tetapi jika ujian menunjukkan bahawa agen penyebab sifilis tidak dikesan, anda tidak boleh pasti sepenuhnya bahawa tidak ada sifilis. Untuk memastikan anda tidak sakit, anda perlu mengambil ujian tambahan, yang diterangkan di bawah.

PCR (tindak balas rantai polimerase) adalah kaedah yang kompleks dan mahal untuk mendiagnosis sifilis, yang memungkinkan untuk mengesan DNA Treponema pallidum dalam darah atau bahan ujian lain (cecair amniotik, cecair serebrospinal). Sekiranya ujian PCR memberikan keputusan negatif, kemungkinan besar anda tidak mempunyai sifilis. Walau bagaimanapun, jika anda menerima keputusan positif (iaitu, jika PCR mengesan DNA Treponema pallidum dalam darah), tidak ada jaminan 100% bahawa anda sakit. Ini disebabkan oleh fakta bahawa PCR kadang-kadang memberikan hasil positif palsu (memberi hasil positif jika tiada penyakit). Oleh itu, jika PCR memberikan keputusan yang positif, adalah disyorkan untuk tambahan menjalani kaedah pemeriksaan lain untuk sifilis (contohnya, tindak balas imunofluoresensi (RIF) dan ujian hemagglutinasi pasif (RPHA)).

Apakah ujian serologi untuk sifilis?

Analisis serologi ialah pengesanan dalam darah protein khas (antibodi) yang dihasilkan dalam tubuh manusia sebagai tindak balas kepada jangkitan. Tidak seperti kaedah diagnostik sebelumnya, ujian serologi tidak mengesan Treponema pallidum itu sendiri, tetapi hanya "jejak"nya di dalam badan.

Jika antibodi kepada Treponema pallidum dikesan dalam darah anda, ini menunjukkan bahawa anda sedang dijangkiti sifilis atau pernah menghidapnya sebelum ini.

Apakah ujian yang menunjukkan seseorang itu menghidap sifilis?

Ujian serologi untuk sifilis dibahagikan kepada 2 kumpulan besar: ujian tidak spesifik dan khusus. Perbezaan utama antara ujian ini ialah ujian tidak spesifik menunjukkan keputusan yang positif hanya jika seseorang pada masa ini menghidap sifilis dan menjadi negatif selepas rawatan, manakala ujian khusus kekal positif walaupun selepas penyakit itu sembuh.

Dalam erti kata lain, keputusan ujian tidak spesifik negatif adalah beberapa jaminan bahawa anda sihat.

Apakah ujian untuk sifilis yang tidak spesifik (bukan treponemal)?

Ujian tidak spesifik termasuk tindak balas pemendakan mikro (MR) dan tindak balas Wasserman (RW). Ujian ini digunakan untuk menyaring sifilis. Selepas sifilis sembuh, ujian ini menjadi negatif dalam 90% orang.

Cara ujian ini berfungsi: Akibat aktiviti penting Treponema pallidum (dengan sifilis), sel-sel dalam badan mati. Sebagai tindak balas kepada pemusnahan sel, sistem imun menghasilkan protein khas (antibodi, atau imunoglobulin). Ujian tidak spesifik bertujuan untuk mengenal pasti antibodi ini, serta mengira kepekatannya (menentukan titer antibodi).

Tindak balas mikro pemendakan (MR) dan analognya di beberapa negara: ujian reagin pantas (RPR, Rapid Plasma Reagins) Dan Ujian VDRL (Makmal Penyelidikan Penyakit Kelamin) adalah ujian bukan treponemal yang ditetapkan untuk menyaring sifilis.

Apa yang akan diperiksa:

biasanya 4-5 minggu selepas jangkitan.

jika ujian menunjukkan keputusan positif, maka ada kemungkinan anda mempunyai sifilis. Oleh kerana ujian ini mungkin memberikan keputusan positif secara palsu, anda disyorkan supaya menjalani ujian tambahan menggunakan ujian khusus yang diterangkan di bawah. Keputusan negatif menunjukkan ketiadaan sifilis, atau peringkat awal penyakit (sebelum penampilan antibodi dalam darah).

jika antibodi ditemui dalam darah dalam titer 1:2 hingga 1:320 atau lebih tinggi, ini bermakna anda dijangkiti sifilis. Dengan sifilis lewat, titer antibodi mungkin rendah (yang dinilai sebagai hasil yang boleh dipersoalkan).

Keputusan MR positif palsu berlaku dalam kira-kira 2-5% kes, berikut adalah kemungkinan penyebabnya:

1. Penyakit tisu penghubung sistemik (systemic lupus erythematosus, scleroderma, rheumatoid arthritis, dermatomyositis, vasculitis, dll.)
2. Penyakit berjangkit: hepatitis virus, mononukleosis berjangkit, batuk kering, beberapa jangkitan usus, dll.
3. Penyakit jantung radang (endokarditis, miokarditis).
4. kencing manis.
5. Kehamilan.
6. Vaksinasi terkini (vaksinasi).
7. Penggunaan alkohol, dadah, dsb.
8. Sifilis yang dihidapi dan sembuh sebelum ini (dalam kira-kira 10% orang yang telah menjalani rawatan, ujian MR mungkin kekal positif seumur hidup).

Apakah yang boleh menjadi sebab untuk keputusan negatif palsu: ujian mungkin tersilap menunjukkan keputusan negatif jika darah mengandungi banyak antibodi, jika ujian diambil pada peringkat awal penyakit sebelum antibodi muncul, atau dengan sifilis lewat, apabila terdapat sedikit antibodi yang tinggal dalam darah.

Reaksi Wasserman (RW, RW) ialah ujian bukan treponemal yang digunakan untuk menyaring sifilis di negara-negara CIS.

Apa yang akan diperiksa: darah (dari jari atau dari urat), cecair serebrospinal.

Berapa lama selepas jangkitan ujian menjadi positif? biasanya 6-8 minggu selepas jangkitan.

Cara menilai keputusan analisis:“-” ialah tindak balas negatif, “+” atau “++” ialah tindak balas positif lemah, “+++” ialah tindak balas positif, “++++” ialah tindak balas positif kuat. Sekiranya tindak balas Wasserman menunjukkan sekurang-kurangnya satu tambah, maka anda perlu mengambil ujian tambahan untuk sifilis. Reaksi negatif bukanlah jaminan bahawa anda sihat.

Cara menilai titer antibodi yang terhasil: Titer antibodi dari 1:2 hingga 1:800 menunjukkan kehadiran sifilis.

Apakah yang boleh menjadi sebab untuk keputusan positif palsu: Reaksi Wasserman boleh tersilap memberikan hasil positif atas sebab yang sama seperti tindak balas pemendakan mikro (MR), dan juga jika, sejurus sebelum menderma darah untuk analisis, anda minum alkohol atau makan makanan berlemak.

Disebabkan oleh bilangan besar hasil yang salah, tindak balas Wasserman (RW, RW) digunakan semakin kurang dan digantikan dengan kaedah diagnostik lain yang lebih dipercayai.

Ujian tidak spesifik (tindak balas mikro pemendakan (MR) dan tindak balas Wasserman (RW, RW)) adalah kaedah yang baik untuk mendiagnosis sifilis. Keputusan ujian negatif kemungkinan besar menunjukkan bahawa anda sihat. Tetapi jika keputusan positif ujian ini diperolehi, pemeriksaan tambahan diperlukan menggunakan ujian khusus (treponemal).

Apakah ujian untuk sifilis yang khusus (treponemal)?

Ujian Treponemal termasuk ujian berikut: tindak balas imunofluoresensi (RIF), immunoblotting, tindak balas aglutinasi pasif (RPGA), tindak balas imobilisasi pallidum pallidum (TPI), ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA).

Ujian khusus ditetapkan untuk orang yang mempunyai keputusan tindak balas pemendakan mikro (MR) atau reaksi Wasserman (WR) positif. Ujian khusus kekal positif lama selepas sifilis telah sembuh.

Cara ujian ini berfungsi: Apabila patogen sifilis memasuki badan, sistem imun menghasilkan antibodi yang bertujuan untuk memerangi treponema pallidum. Antibodi ini tidak muncul dalam darah sejurus selepas jangkitan, tetapi hanya beberapa minggu kemudian. Sekitar akhir minggu kedua selepas jangkitan, antibodi IgM muncul dalam darah. Antibodi kelas ini menunjukkan jangkitan baru-baru ini dengan sifilis, tetapi tanpa rawatan mereka kekal dalam darah selama beberapa bulan dan bahkan tahun (sementara bilangannya secara beransur-ansur berkurangan). 4-5 minggu selepas jangkitan dengan sifilis, antibodi kelas lain, IgG, mula dikesan dalam darah. Antibodi jenis ini kekal dalam darah selama bertahun-tahun (kadang-kadang sepanjang hayat). Ujian Treponema boleh mengesan kehadiran antibodi (IgM dan IgG) dalam darah yang bertujuan untuk memerangi Treponema pallidum.

Tindak balas imunofluoresensi (RIF) atau Antibodi Treponemal Pendarfluor (FTA, dan varian FTA-ABS) ialah ujian treponemal yang digunakan untuk mengesahkan diagnosis sifilis pada peringkat terawal (walaupun sebelum gejala pertama muncul).

Apa yang akan diperiksa: darah dari urat atau jari.

Berapa lama selepas jangkitan ujian menjadi positif?: biasanya selepas 6-9 minggu.

Cara menilai keputusan analisis: Keputusan analisis dibentangkan dalam bentuk tolak atau tambah (dari satu hingga empat). Jika ujian menunjukkan tanda tolak, bermakna tiada antibodi dikesan dan anda sihat. Kehadiran satu tambah atau lebih menunjukkan kehadiran sifilis.

Apakah yang boleh menjadi sebab untuk keputusan positif palsu: Keputusan positif palsu jarang berlaku, tetapi kesilapan mungkin berlaku pada orang yang mempunyai penyakit tisu penghubung (lupus erythematosus sistemik, dermatomyositis, dll.), Pada wanita hamil, dsb.

Tindak balas aglutinasi pasif (RPGA), atau Treponema pallidum hemagglution assay (TPHA) adalah ujian khusus yang digunakan untuk mengesahkan diagnosis sifilis pada hampir mana-mana peringkat.

Apakah yang sedang diperiksa?: darah dari urat atau jari.

Berapa lama selepas jangkitan ujian menjadi positif? selalunya dalam masa 4 minggu.

Cara menilai keputusan analisis: keputusan RPGA yang positif menunjukkan bahawa anda menghidap sifilis, atau sihat, tetapi pernah menghidap penyakit ini pada masa lalu.

Cara menilai titer antibodi yang terhasil: Bergantung pada titer antibodi, seseorang secara kasar boleh mengandaikan tempoh jangkitan dengan sifilis. Tidak lama selepas kemasukan pertama treponema ke dalam badan, titer antibodi biasanya kurang daripada 1:320. Semakin tinggi titer antibodi, semakin banyak masa telah berlalu sejak jangkitan.

Ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA), atau Enzim ImmunoAssay (EIA), atau ELISA (Ujian ImunoSorbent Berkaitan Enzim) adalah ujian treponemal yang digunakan untuk mengesahkan diagnosis dan menentukan peringkat sifilis.

Apa yang akan diperiksa: darah dari urat atau jari.

Berapa lama selepas jangkitan ujian menjadi positif? sudah 3 minggu selepas jangkitan.

Cara menilai keputusan analisis: keputusan ELISA yang positif menunjukkan anda menghidap sifilis atau pernah menghidap penyakit ini sebelum ini. Ujian ini mungkin kekal positif walaupun selepas rawatan.

Menentukan tempoh jangkitan sifilis menggunakan ELISA: Bergantung pada kelas antibodi (IgA, IgM, IgG) yang terdapat dalam darah, kita boleh mengandaikan berapa lama dahulu jangkitan itu.

Artikel itu ditulis berdasarkan bahan dari tapak: sifilis24.ru, www.health-ua.org, krov.expert, zppp.su, polismed.ru.

Sehubungan dengan perkembangan teknologi selular, biologi molekul, genetik, fizik, kimia dan beberapa disiplin teknologi tinggi yang lain, kaedah ketepatan tinggi dan teknologi tinggi baharu sedang diperkenalkan ke dalam amalan harian. Aliran antara disiplin ini mempengaruhi kedua-dua bidang pengetahuan perubatan dan bidang berkaitan masalah biologi dan biokimia. Sepanjang sepuluh tahun yang lalu, kaedah diagnostik makmal klinikal yang dipanggil immunoassay enzim telah meluas dan diperkenalkan ke dalam amalan massa.

Secara amnya, teknologi tindak balas enzimatik dan radiologi imunologi telah digunakan secara meluas dalam menaip sel, kultur sel, dan pelbagai tisu sejak awal 80-an abad ke-20. Walau bagaimanapun, kaedah ini sangat intensif buruh, tidak bersatu, tidak piawai, yang menghalang penggunaannya untuk tujuan diagnostik dan rawatan secara besar-besaran. Kaedah sedemikian hanya digunakan oleh makmal yang sempit, berintensif pengetahuan dan sangat khusus.

Walau bagaimanapun, dengan perkembangan teknologi, mikroteknologi, dan pengeluaran pelbagai bahan biopolimer, telah menjadi mungkin untuk menghasilkan kit diagnostik imunosorben berkaitan enzim siap pakai yang boleh digunakan oleh makmal institusi perubatan am. ELISA digunakan secara meluas untuk mendiagnosis semua jenis jangkitan (klamidia, sifilis, sitomegalovirus, toksoplasmosis, herpes, dll.), baik akut dan kronik, serta bentuk terpendam yang berlaku tanpa gejala klinikal. Kaedah ini juga digunakan untuk mengawal penyakit kronik . Mari cuba fikirkan apakah jenis kaedah ini dan apakah prinsip yang mendasarinya?

Komponen immunoassay enzim - tindak balas imun dan tindak balas enzim

Reaksi imun, apakah itu? Apakah antibodi atau antigen?

Apakah tindak balas imun? Apakah antigen?

Antigen individu dan spesies - apakah itu? Mengapa antigen ini diperlukan?

Tersedia antigen individu, iaitu, hanya wujud pada organisma tertentu ini. Antigen individu ini berbeza untuk semua orang; terdapat beberapa yang serupa antara satu sama lain, tetapi masih berbeza. Tiada dua salinan antigen individu yang serupa dalam alam semula jadi!

Jenis utama kedua antigen ialah antigen spesies, iaitu, wujud dalam mana-mana jenis makhluk hidup tertentu. Sebagai contoh, manusia mempunyai antigen spesies mereka sendiri, biasa kepada semua orang, tikus mempunyai antigen spesies tikus mereka sendiri, dsb. Pada permukaan setiap sel, antigen khusus dan individu semestinya ada.

Antigen spesies digunakan oleh sel-sel sistem imun untuk mengenali "kawan atau musuh".

Bagaimanakah pengecaman antigen berlaku?

Sel imun menghubungi sel yang mencurigakan dan membuat pengenalan berdasarkan antigen individu. Dalam ingatan sel imun, ia "merekodkan" rupa "antigennya". Oleh itu, jika antigen sel yang mencurigakan sepadan dengan perihalan "antigen diri", maka sel badan sendiri ini tidak menimbulkan bahaya. Kemudian sel imun "mengikat" dan pergi. Dan jika antigen tidak sepadan dengan perihalan "diri", maka sel imun mengenal pasti sel ini sebagai "asing," dan oleh itu berpotensi berbahaya kepada seluruh organisma. Dalam kes ini, sel imun tidak "longgar", tetapi mula memusnahkan objek berbahaya. Ketepatan pengiktirafan imunologi sedemikian adalah menakjubkan - 99.97%. Hampir tidak ada kesilapan!

Apakah antibodi, kompleks imun?
Apakah antibodi?

Antibodi ialah molekul khas yang terletak pada permukaan sel imun. Ia adalah antibodi yang mengikat antigen sel yang mencurigakan. Seterusnya, antibodi menghantar maklumat di dalam sel, di mana pengecaman berlaku, dan menerima isyarat pemulangan dua jenis, "diri" atau "asing." Apabila menerima isyarat "diri", antibodi memutuskan ikatan dengan antigen dan melepaskan sel.

Apakah kompleks imun?
Apabila isyarat adalah "orang yang tidak dikenali," keadaan berlaku secara berbeza. Antibodi tidak memutuskan sambungan dengan antigen, tetapi, sebaliknya, dengan menghantar isyarat tertentu, menyebabkan "tetulang". Secara biologi, ini bermakna antibodi lain yang terletak di bahagian lain sel mula bergerak ke tapak di mana isyarat bahaya datang dan juga membentuk ikatan antara mereka dan antigen yang ditangkap. Pada akhirnya, antigen ternyata dikelilingi pada semua sisi dan melekat kuat. Kompleks antigen + antibodi ini dipanggil kompleks imun. Dari saat ini, penggunaan antigen bermula. Tetapi sekarang kami tidak berminat dengan butiran proses peneutralan antigen.

Jenis antibodi (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Antibodi ialah struktur protein yang, oleh itu, mempunyai nama kimia, yang digunakan sebagai sinonim untuk perkataan antibodi. Jadi, antibodi = immunoglobulin.

Terdapat 5 jenis imunoglobulin (Ig), yang mengikat pelbagai jenis antigen di tempat yang berbeza pada tubuh manusia (contohnya, pada kulit, pada membran mukus, dalam darah, dll.). Iaitu, antibodi mempunyai pembahagian kerja. Imunoglobulin ini dipanggil dengan huruf abjad Latin - A, M, G, D, E dan ditetapkan seperti berikut - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Dalam diagnosis, hanya satu jenis antibodi digunakan, iaitu yang paling spesifik untuk mikrob yang dikesan. Iaitu, pengikatan antibodi jenis ini kepada antigen yang dikesan sentiasa berlaku. Yang paling biasa digunakan ialah IgG dan IgM.

Prinsip tindak balas imun inilah (ketepatan unik dan kekhususan pengecaman objek biologi yang ditentukan) yang mendasari immunoassay enzim. Oleh kerana ketepatan tinggi antibodi dalam mengecam antigen, ketepatan keseluruhan kaedah immunoassay enzim juga tertinggi.

Reaksi enzimatik

Apakah tindak balas enzimatik?

Tindak balas enzimatik ialah tindak balas kimia di mana satu bahan ditukar kepada bahan lain melalui tindakan enzim. Bahan di mana enzim bertindak dipanggil substrat. Dan bahan yang diperoleh hasil daripada tindakan enzim dipanggil hasil tindak balas. Selain itu, keanehan tindak balas enzim adalah sedemikian rupa sehingga enzim tertentu bertindak hanya pada substrat tertentu. Sifat enzim untuk mengenali substrat "nya" dipanggil pertalian.

Oleh itu, setiap enzim hanya menjalankan satu tindak balas khusus untuknya. Terdapat banyak enzim yang diketahui dalam dunia biologi, serta tindak balas enzim. Dalam diagnostik imunosorben berkaitan enzim, hanya beberapa tindak balas enzim yang digunakan - tidak lebih daripada 10. Pada masa yang sama, tindak balas enzim seperti itu dipilih, produknya adalah bahan berwarna. Mengapakah hasil tindak balas enzim harus diwarnakan? Kerana untuk mengira kepekatan bahan daripada larutan berwarna, terdapat kaedah kimia yang mudah - kolorimetri.

Kaedah kolorimetri - intipati dan prinsip

Kolorimetri

Seterusnya, ketumpatan warna larutan, kepekatannya ditentukan, diukur, dan daripada graf penentukuran, nilai kepekatan yang sepadan dengan tahap ketumpatan warna yang diukur larutan didapati. Dalam colorimeter automatik moden, penentukuran ialah dijalankan sekali sahaja, maka peranti itu sendiri membina lengkung penentukuran, yang kekal dalam ingatan peranti, dan pengukuran berlaku secara automatik.

Enzim berikut paling kerap digunakan dalam immunoassay enzim: peroksidase, alkali fosfatase, avidin.

Bagaimanakah tindak balas imunologi dan enzimatik digabungkan dalam immunoassay enzim? Sekarang kita akan meneruskan untuk mempertimbangkan immunoassay enzim itu sendiri. Apakah peringkat yang disertakan dan apa yang berlaku semasa tindak balas ini? Enzim immunoassay boleh langsung dan tidak langsung.

Enzim immunoassay langsung - peringkat pelaksanaan

Lekatan antigen pada permukaan telaga dan gabungan antigen dengan antibodi

Bagaimanakah immunoassay enzim langsung dilakukan? Bahan biologi diambil (darah, pengikisan dari membran mukus, smear) dan diletakkan di dalam lubang khas. Bahan biologi dibiarkan di dalam telaga selama 15-30 minit supaya antigen dapat melekat pada permukaan telaga. Seterusnya, antibodi kepada antigen yang dikesan ditambah kepada telaga ini. Ini bermakna apabila mengesan antigen, contohnya, sifilis, antibodi terhadap antigen sifilis ditambah. Antibodi ini diperoleh secara industri, dan makmal membeli kit siap sedia.Campuran bahan ujian dan antibodi ini dibiarkan selama beberapa lama (dari 30 minit hingga 4-5 jam) supaya antibodi dapat mencari dan menghubungi antigen "mereka". Lebih banyak dalam sampel biologi antigen, lebih banyak antibodi akan mengikatnya.

Mengeluarkan antibodi "tambahan".

Seperti yang ditunjukkan, antibodi juga dikaitkan dengan label tertentu. Memandangkan antibodi ditambah secara berlebihan, tidak semuanya akan mengikat antigen, dan jika tiada antigen dalam sampel, maka, dengan itu, tiada satu antibodi pun akan mengikat kepada antigen. antigen yang dikehendaki. Untuk mengeluarkan antibodi "tambahan", kandungan dari telaga hanya dicurahkan. Akibatnya, semua antibodi "tambahan" dikeluarkan, dan antibodi yang terikat pada antigen kekal, kerana antigen "dilekatkan" pada permukaan telaga. Telaga dibilas beberapa kali dengan penyelesaian khas, yang membolehkan anda membasuh semua antibodi "tambahan".

Seterusnya, peringkat kedua bermula - tindak balas enzimatik. Larutan dengan enzim ditambah ke dalam telaga yang telah dibasuh dan dibiarkan selama 30-60 minit. Enzim ini mempunyai pertalian untuk bahan (label khusus) yang mengikat antibodi. Enzim menjalankan tindak balas yang menukar tanda khusus ini (substrat) kepada bahan berwarna (produk). Kemudian, menggunakan kolorimetri, kepekatan bahan berwarna ini dijumpai. Oleh kerana label khusus ini dikaitkan dengan antibodi, ini bermakna kepekatan produk tindak balas berwarna adalah sama dengan kepekatan antibodi. Dan kepekatan antibodi adalah sama dengan kepekatan antigen. Oleh itu, sebagai hasil analisis, kami menerima jawapan tentang kepekatan mikrob atau hormon yang dikesan.

Beginilah cara immunoassay enzim langsung berfungsi. Walau bagaimanapun, hari ini enzim immunoassay tidak langsung lebih kerap digunakan, kerana sensitiviti dan ketepatan tidak langsung adalah lebih tinggi daripada langsung. Jadi, mari kita beralih kepada immunoassay enzim tidak langsung.

Enzim immunoassay tidak langsung - peringkat pelaksanaan

Penetapan antigen pada permukaan telaga dan pengikatan antigen kepada antibodi yang tidak berlabel
Sama seperti immunoassay enzim langsung, bahan biologi dikumpulkan - darah, pengikisan, calitan. Bahan biologi yang dikaji dimasukkan ke dalam telaga dan dibiarkan selama 15-30 minit untuk antigen melekat pada permukaan telaga. Kemudian antibodi yang tidak berlabel kepada antigen dimasukkan ke dalam telaga dan dibiarkan untuk tempoh masa (1-5 jam) supaya antibodi mengikat antigen "mereka" dan membentuk kompleks imun ( Langkah pertama). Selepas itu, antibodi tidak terikat "tambahan" dikeluarkan dengan menuangkan kandungan telaga. Basuh dengan larutan khas untuk membuang sepenuhnya semua antibodi yang tidak terikat.

Pengikatan antibodi berlabel kepada antigen + kompleks antibodi tidak berlabel
Selepas itu mereka mengambil antibodi berlabel kedua, tambahkannya ke telaga dan sekali lagi biarkan seketika - 15-30 minit ( fasa kedua). Pada masa ini, antibodi berlabel mengikat kepada yang pertama - tidak berlabel - dan membentuk kompleks - antibodi + antibodi + antigen. Walau bagaimanapun, kedua-dua antibodi berlabel dan tidak berlabel ditambah kepada telaga secara berlebihan. Oleh itu, adalah perlu sekali lagi mengeluarkan antibodi "tambahan" yang telah berlabel yang tidak terikat kepada antibodi yang tidak berlabel. Untuk melakukan ini, ulangi prosedur menuangkan kandungan telaga dan basuh dengan penyelesaian khas.

Tindak balas enzimatik - pembentukan sebatian berwarna
Selepas itu, enzim ditambah yang menjalankan tindak balas menukar "label" kepada bahan berwarna. Warna berkembang dalam masa 5-30 minit. Kemudian kolorimetri dijalankan dan kepekatan bahan berwarna dikira. Oleh kerana kepekatan bahan berwarna adalah sama dengan kepekatan antibodi berlabel, dan kepekatan antibodi berlabel adalah sama dengan kepekatan antibodi tidak berlabel, yang seterusnya, adalah sama dengan kepekatan antigen. Oleh itu, kita memperoleh kepekatan antigen yang dikesan.
Kawalan berganda ini dalam bentuk penggunaan dua jenis antibodi memungkinkan untuk meningkatkan sensitiviti dan kekhususan kaedah immunoassay enzim. Walaupun pemanjangan masa analisis dan kemasukan peringkat tambahan, kerugian ini dikompensasikan oleh ketepatan keputusan. Itulah sebabnya pada masa ini sebahagian besar kaedah immunoassay enzim adalah immunoassay enzim tidak langsung.

Apakah penyakit yang dikesan oleh enzim immunoassay?