PCR-analyse bij katten. Analyse voor opisthorchiasis: algemeen, ifa, ontlasting, waar en hoe te gebruiken, interpretatie van resultaten

Coronavirusinfecties bij katten en honden worden veroorzaakt door leden van het geslacht Coronavirus (familie Coronaviridae). De belangrijkste manifestatie van een coronavirusinfectie bij honden is diarree. V-katachtige coronavirussen veroorzaken enteritis en infectieuze peritonitis, die wijdverspreid zijn onder wilde katten en huiskatten.

De veroorzaker van coronavirusinfectie bij honden is het Canine-coronavirus, dat acute coronavirus-enteritis veroorzaakt. De ziekte wordt overgedragen door direct contact met een drager van het virus (via speeksel en ontlasting). Honden van elke leeftijd zijn vatbaar voor deze infectie, maar puppy's en verzwakte dieren die al aan een andere ziekte hebben geleden, zoals een parvovirusinfectie, worden het vaakst getroffen.

De belangrijkste symptomen van de ziekte zijn braken en diarree, soms vermengd met bloed, uitdroging, gewichtsverlies en apathie. 3-4 weken na herstel kan een herhaling van de ziekte optreden. Bij de diagnose moet onderscheid worden gemaakt tussen coronavirus-enteritis bij honden en parvovirus-enteritis, intestinale adenovirus-infectie en hondenziekte.

Er zijn twee biotypes van coronavirussen die katten treffen: FECV, of feline enteritis coronavirus, en FIPV, feline infectieus peritonitis virus (2, 3). FECV wordt overgedragen door 16-50% van de huiskatten, waarbij het virus zich in de dunne darm bevindt zonder ziekte of milde diarree te veroorzaken. Tegelijkertijd kan 5-12% van de dragers een mutatie ervaren van de opportunistische darmvorm van FECV naar een pathogene vorm (FIPV), wat leidt tot de ontwikkeling van de ziekte (2).

Infectieuze peritonitis (IP, FIP) bij katten, die meestal met de dood eindigt, komt in twee vormen voor: nat en droog. De natte (exsudatieve) vorm van IP wordt gekenmerkt door schade aan de bloedvaten van de buik- of borstholte, vergezeld van het lekken van plasma in deze holtes (figuur 1). Bij zieke dieren ontwikkelt zich ascites (Fig. 2), en in het geval van vochtophoping treedt ademhalingsdisfunctie op. Er vormen zich fibrineuze afzettingen op de sereuze omhulsels van de buikorganen (fig. 3) en vervolgens kunnen verklevingen ontstaan. Als gevolg van een verminderde leverfunctie wordt ectericiteit van de sclera en de huid waargenomen.

De droge (niet-exudatieve) vorm van IP treedt op zonder ophoping van vocht in de buik- en borstholte. In dit geval worden interne organen aangetast - de hersenen (Fig. 4), lever, nieren, pancreas, en in 25% van de gevallen wordt oogbeschadiging waargenomen (Fig. 5) (5).

Omdat er nog geen effectief behandelingsregime voor PV is ontwikkeld, zijn preventieve maatregelen gericht op vroege detectie van virusdragers van het allergrootste belang (1, 3).

De diagnose van infectieuze peritonitis bij katten vormt ook een ernstig probleem. Traditionele methoden voor het identificeren van de ziekteverwekker, gebaseerd op de detectie van antilichamen tegen coronavirussen (RNGA en ELISA), geven tot 60% van de vals-positieve resultaten. Dit komt door de aanwezigheid van opportunistische ziekteverwekkerstammen in de darmen van katten (2, 3). Een aantal buitenlandse laboratoria gebruiken een alomvattende methodologie voor het diagnosticeren van intellectuele eigendom, waaronder het bepalen van:
- antilichaamtiter tegen coronavirus;
- albumine/globuline-verhouding in transsudaat of bloedplasma;
- niveau van a-1 zuurglycoproteïne (AGP);
- cytologische en hematologische parameters (4).

materialen en methodes
Bij het onderzoek werd gebruik gemaakt van de Bagheera-coronavirusstam (5 1og TCD50/ml) in verdunningen, 8 isolaten van kattencoronavirussen (FCoV), 2 isolaten van hondencoronavirus (CCV) en suspensies van kattenpanleukopenievirus en kattencalicivirus.
Bij het testen van het PCR-testsysteem werd biologisch materiaal gebruikt van gezonde katten, dieren met klinische tekenen van IP en katten met niet-specifieke symptomen. Onder de onderzochte dieren bevonden zich zowel dieren die in kinderdagverblijven werden gehouden als dieren die individueel werden gehouden.
Het biologische materiaal werd parallel bestudeerd met behulp van PCR- en RIGA-methoden. Het PCR-systeem werd gebruikt om ontlasting, bloedplasma en transudaat te onderzoeken op specifieke ascites, en de RIGA-methode werd gebruikt om bloedserum en transudaat te onderzoeken.

Serologische tests werden uitgevoerd met behulp van een kit voor het detecteren van antilichamen tegen carnivore coronavirussen in RIGA (TU 9388-025-00494189-01). Het biologische materiaal van de honden werd bestudeerd met PCR.

Dit onderzoek vergt echter een aanzienlijke investering in tijd en geld. In dit opzicht kan een effectieve methode voor het diagnosticeren van IP de polymerasekettingreactie (PCR) zijn, die het niet alleen mogelijk maakt om kattencoronavirussen te detecteren, maar ook om opportunistische en pathogene stammen te differentiëren op basis van hun verschillende lokalisatie in het lichaam. Tegelijkertijd wijst de detectie van het virus in de ontlasting van katten op het vervoer van opportunistische stammen (FECV), en in het bloedplasma of de ascitesvloeistof op de circulatie van pathogene stammen (FIPV) in het lichaam van het dier en dus op de ziekte.

Het doel van dit onderzoek is het testen van een testsysteem voor het diagnosticeren van een coronavirusinfectie bij katten en honden op basis van PCR.

RNA-isolatie werd uitgevoerd met behulp van de RNA-sorb-kit (TsNIIE), die is gebaseerd op de methode van sorptie op silicagel. PCR werd uitgevoerd met behulp van een TERCIK-versterker (“DNA-technologie”) volgens standaardmethoden. De resulterende PCR-producten werden zichtbaar gemaakt door elektroforese in een 1,5% agarosegel die ethidiumbromide bevatte.

resultaten en discussie
Tijdens het onderzoek analyseerden we informatie over de nucleotidesequenties van vertegenwoordigers van de Coronaviridae-familie, in het bijzonder verschillende isolaten van katten- en hondencoronavirussen gepubliceerd in de Entrez-, GeneBank-, EMBL- en DDBJ-databases. Daarnaast werd de literatuur bestudeerd die de structuur van de genomen van FCoV, CCV en hun genetische relatie met andere leden van de familie karakteriseert.

Twee geconserveerde sequenties in het nucleocapside-eiwitgen werden gekozen als doelwitten voor specifieke primers. De specificiteit van de voorgestelde primers werd bestudeerd met behulp van de computerprogramma's FASTA en BLASTA. Als resultaat van het werk werd homologie van de geselecteerde oligonucleotiden alleen onthuld met de nucleocapside-eiwitgenen van FCoV en CCV en werd er geen significante homologie gevonden met de nucleotidesequenties van andere soorten van de Coronaviridae-familie, evenals met andere virussen, bacteriën of eukaryoten. De voorgestelde primers, gebaseerd op theoretische berekeningen, zouden dus 100% specificiteit moeten hebben.

In de volgende fase van het onderzoek werden de omstandigheden voor het isoleren van viraal RNA en het uitvoeren van reverse transcriptie en PCR-reacties geoptimaliseerd, en werden de specificiteit en gevoeligheid van de PCR-analyse bepaald. De grootte van het PCR-product was 350 basenparen. De methode vertoonde 100% specificiteit en hoge gevoeligheid. De detectie van het coronavirus in kattenuitwerpselen duidde op het vervoer van de opportunistische stammen ervan in de darmen, en de detectie van FECV in transsudaat en bloedplasma duidde op de ontwikkeling van de ziekte.

Bij testen met de RNGA-methode werd als positief resultaat beschouwd de detectie van een antilichaamtiter > 1:128 bij een dier. Dit kan echter duiden op zowel virusdragerschap als een manifeste vorm van infectie. Bovendien kan een positieve titer te wijten zijn aan eerdere blootstelling aan het coronavirus. Uitwerpselen van honden werden getest en de detectie van coronavirus-RNA daarin duidde op de ziekte veroorzaakt door CCV.

Tijdens het experiment werd biologisch materiaal van 193 katten onderzocht (tabel). Met behulp van de RNGA-methode werd bij 131 dieren een positief resultaat geregistreerd (antilichaamtiters > 1:128). Bij het testen van “seropositieve” katten met behulp van PCR werd coronavirus-RNA gedetecteerd in het plasma en de ascitesvloeistof van 12 dieren (9%), alleen in de ontlasting - bij 68 (52%) en helemaal niet gedetecteerd bij 51 (39%). Zo was 52% van de katten met een seropositief resultaat drager van opportunistische stammen van het coronavirus, en was 39% gezond. Het is duidelijk dat het onderzoek met de RNGA-methode 63% van de vals-positieve resultaten opleverde (in termen van het totale aantal onderzochte dieren).

Conclusie
De verkregen resultaten geven aan dat de diagnose van een kattencoronavirusinfectie met behulp van de traditionele serologische methode (TSM) meer dan 60% vals-positieve resultaten oplevert, omdat het niet mogelijk is de dragerschap te onderscheiden van de werkelijke ziekte. Bovendien werden dieren die eerder contact hadden gehad met het coronavirus als ‘seropositief’ beschouwd.

Het gebruik van de PCR-methode maakte het mogelijk om opportunistische en pathogene stammen te onderscheiden vanwege hun verschillende lokalisatie in het lichaam en om de dragerschap van de ziekte te onderscheiden. De gegevens uit het onderzoek geven dus aan dat het raadzaam is de PCR-methode te gebruiken om coronavirussen bij katten en honden op te sporen en een definitieve diagnose te stellen.

In overeenstemming met besluit nr. 45 van de veterinaire afdeling van het ministerie van Landbouw van de Russische Federatie, in de periode van 08/03/2004 tot 08/06/2004, het laten testen van een testsysteem voor het diagnosticeren van infectieuze peritonitis bij katten met behulp van de PCR-methode werd uitgevoerd. Het testsysteem heeft de tests door de commissie met succes doorstaan, waarbij 100% specificiteit en hoge gevoeligheid binnen het voorgestelde panel werden aangetoond. Momenteel wordt het coronavirus-testsysteem voor de detectie en identificatie van coronavirussen bij katten en honden, gebaseerd op PCR, met succes gebruikt in de veterinaire praktijk (TU 9388-142-00494189-05; RU nr. R077-1-3.5-0813 geregistreerd in de Russische Federatie voor nr. PVR-1-3.5/01556 gedateerd 30 juni 2006 voor een periode van 5 jaar).

LITERATUUR
1, Addie, D, D. Jarrett, 0. Gebruik van een reverse-transcriptase-polymerasekettingreactie voor het monitoren van de uitscheiding van kattencoronavirus door gezonde katten, Vet. Rec, 2001, 26 mei; 148 (21): 649-53,
2, Vennema, H, atal. Katachtige infectieuze peritonitisvirussen ontstaan ​​door mutatie van endemische katachtige enterische coronavirussen, Virology, 1998: 150-157.
3, Herrewegh, A.A., Mahler, M. Hedrich, H.J., Haagmans, B.L. Egberink, H.F., Horzinek, M.C., Rottier, P.J., de Groot, R.J., Persistence and evolution of feline coronavirus in a closed cat-breeding colony Virology 1997, 4 augustus; 234 (2): 349-363,
4. Vergelijking van verschillende tests om infectieuze peritonitis bij katten te diagnosticeren; Katrin Hartmann in 2003.
5, katachtige infectieuze peritonitis; Stacy E, Andrew, Dierenklinieken van Noord-Amerika: kleine dieren; vol. 30, nummer 5, september 2000

E.A. YARALOVA, I.L. OBUKHOV, MM RAKHMANINA, E.I. ELIZBARASHVILI, VIULASOV,
All-Russisch Staatscentrum voor kwaliteit en standaardisatie van diergeneesmiddelen en diervoeders, Moskou

PCR is een polymerasekettingreactie gebaseerd op het principe van het kopiëren van een specifiek gedeelte van een DNA-streng. Door de meervoudige toename van het volume DNA-materiaal wordt het mogelijk om de gewenste bacteriën in een microscoop te detecteren. Het voordeel van PCR is:

• hoge gevoeligheid;
• hoge specificiteit;
• detectie van acute en latente infecties;
• het vermogen om een ​​van de momenteel bekende pathogenen te identificeren.

PCR in de diergeneeskunde

Momenteel heeft de PCR-diagnostische methode brede toepassing gevonden in de diergeneeskunde. Met deze onderzoeksmethode kunt u in korte tijd een betrouwbaar antwoord krijgen. Bovendien is er een zeer kleine hoeveelheid biologisch materiaal nodig, in tegenstelling tot bijvoorbeeld een algemene bloedtest, wat het werk van dierenartsen enorm vereenvoudigt. Bij zowel mensen als dieren kan het materiaal voor PCR zijn:

• bloed en zijn componenten;
• urine;
• maagbiopsie;
• speeksel;
• epitheelcelafkrabsels.

Het uitvoeren van PCR-diagnostiek bij katten

Tijdens het onderzoek van een kat door een dierenarts kan het nodig zijn om de kat te testen op PCR om de vermoedelijke diagnose te bevestigen of te weerleggen. De reden voor het voorschrijven van een dergelijk onderzoek kan de meest voorkomende en tegelijkertijd moeilijk te diagnosticeren ziekten zijn, zoals peritonitis, rhinotracheïtis, coronavirus, toxoplasmose, enz.

Een bijzonder ernstige ziekte waarvoor de PCR-methode vereist is, is virale immunodeficiëntie bij katten. Dit virus tast niet alleen het immuunsysteem aan, maar ook het zenuwstelsel van het dier. Het lichaam van de kat wordt verzwakt en weerloos tegen bacteriën en virussen, waardoor het dier sterft aan secundaire infecties. En om de aanwezigheid van dit virus uit te sluiten, raadt de dierenarts aan een polymerasekettingreactie op de kat uit te voeren.

Deze methode heeft, naast de vele voordelen, een aantal nadelen. Alle PCR-diagnostische apparaten zijn zeer gevoelig en daarom kan de geringste besmetting een vals-positief antwoord geven. De hoge kosten van apparatuur en reagentia worden ook als belangrijk beschouwd, dus niet elke dierenkliniek in Moskou kan deze kopen. Het diagnosticeren van ziekten zonder deze methode wordt echter steeds moeilijker, dus PCR-testen bij katten in Moskou kunnen in onze kliniek worden gedaan door onze contactnummers te bellen of een verzoek achter te laten op de website.

Dierenarts, IVC MBA

In de moderne wereld geven veel mensen hun voorkeur aan katten vanwege hun grotere onafhankelijkheid van mensen, in tegenstelling tot honden, die tijd nodig hebben; aanpassing aan een eenzame levensstijl, gratie en vermogen om de eigenaar te verwarmen op koude winterdagen. Een liefdevolle en zorgzame eigenaar probeert zijn huisdier te beschermen tegen problemen in de vorm van verschillende ziekten waar katten last van hebben.

Deze zorg komt tot uiting in hoogwaardige voeding en tijdige preventie van virusziekten. Helaas zijn er een aantal soorten ongeneeslijke virusinfecties waarvoor katten vatbaar zijn. Bij afwezigheid van ziektesymptomen en specifieke diagnostiek kunt u lange tijd met het dier leven zonder de aanwezigheid van een chronische virusinfectie (hierna CVI genoemd) bij uw huisdier te vermoeden. In dit artikel wil ik het gevaar van CVI gedetailleerd onthullen en proberen dit probleem te vermijden bij de aanschaf van het gewenste kitten.

Wat zijn chronische virusinfecties en welk gevaar vormen ze voor onze huisdieren? CVI is een virusziekte met een lange incubatietijd, die enkele weken tot meerdere jaren kan duren. Infectie kan zowel in de baarmoeder plaatsvinden als door contact van gezonde katten met zieke dieren, evenals dragers.

Coronavirussen - dit is RNA - die virussen bevatten . Deze virussen hebben deze naam gekregen vanwege de gelijkenis van de knotsvormige processen met corona spinarum. De oorzaak van de infectie is een virus uit de familie van het coronavirus. Er zijn 2 pathogene stammen - de nauwste verwanten van hetzelfde micro-organisme. De één veroorzaakt peritonitis, de ander enteritis.

Coronavirussen zijn onderverdeeld in 3 vormen:

Asymptomatische vorm - het dier kan drager zijn van het virus en kan andere katten infecteren, terwijl niets het leven bedreigt.

De milde vorm is niet gevaarlijk en kan tamelijk milde ziekten veroorzaken: enteritis (feline intestinale coronavirussen - FECV).

Een zeer pathogene vorm is het feliene infectieuze peritonitisvirus (FIPV). Het lichaam ondergaat destructieve veranderingen in alle systemen en organen, wat tot de dood leidt.

Coronavirus-enteritis (FECV) is relatief onschadelijk en komt al op jonge leeftijd voor bij dieren; de symptomen zijn gebaseerd op dunne ontlasting, die zelden tot de dood leidt; Maar virale peritonitis bij katten is uiterst gevaarlijk omdat het een hoog sterftecijfer kent. FIPV en FECV zijn behoorlijk met elkaar verbonden; deze micro-organismen worden beschouwd als een enkele populatie virussen, maar met verschillende gradaties van pathogene veranderingen. Studies hebben aangetoond dat coronavirus-enteritis tijdens het mutatieproces verandert in virale peritonitis.

De overdracht van infecties vindt oronasaal plaats, d.w.z. infectie vindt plaats via de luchtwegen door druppeltjes in de lucht, via uitwerpselen, het voeden van kittens en tijdens het paren. Bij alleen levende katten komt deze ziekte minder vaak voor; een hoger percentage van deze ziekte komt voor bij showkatten, maar ook bij katten die in grote groepen leven.

Symptomen

Er zijn 2 vormen van HIPC:

1. Exudatief (met “effusie”)

"Natte" peritonitis gaat gepaard met een duidelijk teken van de aanwezigheid van vocht in de borst- of buikholte. De vloeistof heeft voornamelijk een lichtgele tint en is enigszins stroperig.

Wanneer biologisch vocht zich ophoopt in de borstholte, ervaart het dier ademhalingsmoeilijkheden als gevolg van uitstroming en neemt de kat een geforceerde houding aan. De ademhaling is vaak van het thoraco-abdominale type.

Wanneer vocht zich ophoopt in de buikholte, letten eigenaren vaak op de vergrote buik van hun huisdier.

U kunt ook last krijgen van:

• verhoogde temperatuur (niet altijd);
• gewichtsverlies;
• algemene zwakte, depressie;
• vergrote lymfeklieren;
• verminderde of verlies van eetlust.

2. Niet-exudatief (“droog”)

Bij deze vorm zijn de klachten vaak mild. Deze vorm is moeilijk te diagnosticeren. De karakteristieke symptomen zijn gewichtsverlies en gebrek aan eetlust.

Diagnostiek. Het gebeurt op een complexe manier. Om te beginnen worden klinische en biochemische bloedtesten bij het dier afgenomen; een echografie van de buikholte uitvoeren; serologische onderzoeksmethoden (ELISA - bepaling van de hoeveelheid antilichamen tegen een bepaalde ziekte; of ICA - snelle test), onderzoeken ook effusievloeistof.

Voorspelling. Nadelig. Soms ontwikkelt zich bij de exsudatieve vorm van VIP, na verwijdering van het vocht en symptomatische behandeling, een "droge" vorm van de ziekte. Katten met “droge” FIP kunnen een jaar oud worden.

Behandeling. Helaas is er geen remedie voor deze ziekte; er wordt alleen symptomatische therapie uitgevoerd om de levenskwaliteit van het huisdier te verbeteren.

Preventie. Gericht op het verminderen van het aantal katten dat in één kamer wordt gehouden (maximaal 6-10 katten). Netheid en tijdige desinfectie van gebruikte trays en een voldoende aantal, frequente vervanging van vulmiddel.

Dit is een chronische virusziekte die wordt gekenmerkt door een verzwakking van het immuunsysteem, de ontwikkeling van bloedarmoede en lymfosarcoom. Jonge dieren zijn zeer vatbaar voor deze infectie. FLV wordt in alle landen van de wereld gediagnosticeerd; de ziekte treft katten van verschillende leeftijdsgroepen en rassen.

Paden overdrachten. Fecaal-oraal (speeksel, uitwerpselen, afscheiding uit de neusholte), via de melk van geïnfecteerde katten, beten, door contact met een ziek dier van kat op kat, overdracht door vlooien is mogelijk, evenals als de regels van asepsis en antisepsis worden niet waargenomen tijdens injecties en bloedafname.

Pathogenese. VLK wordt veroorzaakt door een genetische aanleg, evenals door immunologische tekortkomingen van dieren. Zieke katten met een antilichaamtiter van 1:32 hebben mogelijk geen ziektebeeld, maar dergelijke dieren worden als virusdragers beschouwd. Bij klinisch zieke katten worden mogelijk geen antilichamen gedetecteerd. VLK remt de activiteit van rood beenmerg, wat leidt tot bloedarmoede, vermindert de immuniteit en draagt ​​bij aan de ontwikkeling van andere ziekten.

Klinisch beeld Er zijn drie vormen van de ziekte:

1. Stabiel of aanhoudend. De immuniteit van zo'n dier is sterk verzwakt, de ziekte vordert vrij snel en de behandeling is meestal niet effectief.
2. Verborgen of latent. Het dier heeft een stoornis in de bloedsomloop. Het virus dringt het lymfestelsel en het rode beenmerg binnen. Het dier begint vaker ziek te worden en er verschijnen tumoren.
3. Transitioneel of van voorbijgaande aard. Dankzij de sterke immuniteit herstelt het dier 3 maanden na infectie.

Meestal vertonen dergelijke dieren ernstige bloedarmoede, immunosuppressie (gevoeligheid voor andere infecties of de aanwezigheid ervan) en lymfosarcoom - meervoudig of atypisch. De incubatietijd is 60-80 dagen, soms van 2 tot 6 jaar. VLK komt voor in een latente vorm zonder de manifestatie van klinische symptomen van infectie en manifesteert zich mogelijk lange tijd niet. Onder invloed van negatieve factoren (veranderingen in de voedingsomstandigheden, onderkoeling, stress) wordt het virus geactiveerd en ontwikkelt de ziekte zich. Helemaal aan het begin kunnen veranderingen in het bloed worden opgemerkt (leukocytose, lymfocytose, het verschijnen van atypische bloedcellen); bleekheid/icterus van de slijmvliezen, vergrote lymfeklieren, gewichtsverlies, verminderde eetlust, indigestie.

Diagnostiek

Komt voor op basis van klinische, hematologische, serologische en virologische onderzoeken. De belangrijkste diagnostische methoden zijn onder meer:

• Enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA), immunochromatografische test (ICA). Vals-negatieve resultaten komen vaak voor.
• Klinische bloedtest.
• Biochemie van bloed.
• Echografie van de buikholte.
• Biopsie en histologie.

Behandeling. Er is geen medicijn. Het is gericht op het bieden van symptomatische therapie en het verbeteren van de levenskwaliteit van het dier. Bij ernstige bloedarmoede wordt bijvoorbeeld een bloedtransfusie voorgeschreven, evenals het gebruik van medicijnen die de aanmaak van rode bloedcellen in het rode beenmerg stimuleren. Er worden medicijnen voorgeschreven die het immuunsysteem stimuleren. Als lymfomen worden gedetecteerd, wordt chemotherapie voorgeschreven.

Preventie. Het virus is zeer onstabiel in de externe omgeving; buiten een levend organisme sterft het binnen twee dagen. Om dit virus te vernietigen, volstaat het om de lokalen en dierenverzorgingsartikelen, kommen, enz. grondig te desinfecteren. Het schoonhouden en voedzaam eten van uw huisdier en het beperken van contact met zwerfdieren zijn de sleutel tot de gezondheid van uw huisdier.

Deze ziekte is alleen gevaarlijk voor katten en vormt geen enkel risico voor mensen en andere diersoorten.

De belangrijkste methode om deze ziekte te voorkomen is vaccinatie. Voor dergelijke doeleinden worden de Purevax FeLV- en Leukocel-vaccins gebruikt. Vaccinatie wordt uitgevoerd vanaf de leeftijd van negen weken. De immunisatie wordt tweemaal uitgevoerd, met een interval van 21 dagen. Dan moeten katten één keer per jaar worden gevaccineerd.

Virale immuundeficiëntie (FIV, FIV)

Een infectieziekte bij katten, gekenmerkt door een chronisch beloop, gepaard gaande met schade aan het immuunsysteem en hoge sterfte.

Deze ziekte is endemisch geworden bij katten over de hele wereld.

Het virus blijft bij kamertemperatuur ongeveer 4 dagen bestaan. Bij verhitting tot 60 graden sterft het virus binnen een half uur; bij koken sterft het af. Bij behandeling met alcoholhoudende preparaten wordt het virus binnen 5-10 minuten geïnactiveerd. VIC is behoorlijk resistent tegen ultraviolette straling.

FIV komt vaker voor bij zwerfkatten; de geschatte leeftijd van de dieren is 5-10 jaar.

Paden overdrachten. De belangrijkste route bestaat uit beten van zieke dieren; katten zonder stamboom lopen een grotere kans besmet te raken; De infectie komt ook veel voor bij dieren die vrije toegang hebben tot de buitenlucht. Besmetting is mogelijk door wederzijds likken. Het virus wordt aangetroffen in speeksel, bloed en andere vloeistoffen.

Klinisch beeld. Klinische symptomen zijn vrij aspecifiek en behoorlijk gevarieerd. Ze weerspiegelen gelijktijdige infecties die zich ontwikkelen tegen de achtergrond van een verzwakt immuunsysteem. Dieren verschijnen:

• Zwakheid;
• Verlies van eetlust;
• Gingivitis;
• Chronische diarree;
• Gewichtsverlies, enz.

Vanwege het feit dat het immuunsysteem van het dier niet goed functioneert, kunnen verschillende infecties zich bij FIV aansluiten: calcivirose, chlamydia, virale leukemie, enz., die de algemene toestand verergeren.

Katten met FIV lopen een verhoogd risico op het ontwikkelen van lymfoom en de klinische symptomen kunnen vergelijkbaar zijn met die van FLV.

Diagnostiek. Er wordt gebruik gemaakt van klinische laboratoriumtests: bloedonderzoek (neutropenie, lymfopenie, bloedarmoede, monocytose kunnen worden waargenomen). Een biochemische bloedtest onthult een grote hoeveelheid eiwit, verhoogde activiteit van leverenzymen, azotemie en hyperglykemie.

Er zijn verschillende specifieke onderzoeken naar deze ziekte:

Enzymimmunoassaymethode (ELISA); IHA.

Als serologische tests een negatief resultaat opleveren, kan het virus met PCR worden vastgesteld.

Behandeling. Er bestaat momenteel geen specifieke behandeling.

Er is opgemerkt dat bij behandeling met zidovudine de klinische toestand en het functioneren van het immuunsysteem bij veel katten verbetert. Deze medicijnen zijn duur en kunnen aanzienlijke bijwerkingen veroorzaken, zoals bloedarmoede. Er worden ook immunomodulatoren gebruikt, die een gunstig effect hebben op het lichaam.

Klinisch ongezonde katten en katten met een verzwakt immuunsysteem mogen niet worden gevaccineerd.

Preventie. Er zijn geen vaccins. Minimaliseren van contact met katten buitenshuis. Naleven van dieet, dieren schoonhouden, desinfectie van verzorgingsartikelen en tijdige vervanging van kattenbakvulling in bakken. Wanneer er nieuwe dieren verschijnen, zijn verplichte quarantaine en medisch onderzoek van het nieuwe huisdier vereist.

Houd van je huisdieren!

Bibliografie:

• Gaskell, Bennett: Handboek van infectieziekten bij honden en katten, Aquarium Print, 2015.
• Diverse bronnen van internet

Om te beginnen zou ik graag willen bepalen wat de betekenis van de polymerasekettingreactie (PCR)-methode is vanuit praktisch oogpunt, vanuit het oogpunt van een dierenarts. Wat moet een arts precies een PCR-test voorschrijven? Ik zal niet ingaan op puur professionele details van de moleculaire mechanismen die betrokken zijn bij PCR. Ik wil alleen dat de dierenarts het duidelijk begrijpt: de PCR-methode is direct, en bij het uitvoeren van een dergelijk onderzoek wordt aangenomen dat het mogelijk is om het nucleïnezuur (DNA of RNA) van de vermoedelijke ziekteverwekker te isoleren uit het klinische materiaal dat naar de dierenarts wordt gestuurd. laboratorium. Dit is het belangrijkste postulaat. Maar ondanks dit postulaat kom ik heel vaak een mening tegen die ik zal noemen Mythe 1 , dat elk pathogeen van welke ziekte dan ook kan worden gedetecteerd door PCR in het bloed. Strikt genomen verschijnt bloed in dit geval als een soort collectief beeld van een universeel materiaal voor onderzoek. Vaak willen ze dat we ‘met alles en voor alles’ werken. Dit is helaas onmogelijk. Hoe bepaal je welke ziekteverwekker met PCR kan worden gevonden en welke niet? Bij het selecteren van materiaal voor onderzoek met behulp van de PCR-methode moet de arts allereerst de pathogenese begrijpen van de ziekte of ziekten waarvan hij de veroorzakers wil detecteren. Als intravitale verzameling van het benodigde materiaal van een dier onmogelijk is, mag een dergelijke diagnostiek niet worden voorgeschreven. Momenteel beschikken laboratoria over veel beschikbare diagnostische methoden, bijvoorbeeld de enzymimmunoassay-methode. Met deze methode kunt u de aanwezigheid van antilichamen tegen de ziekteverwekker, hun hoeveelheid en, volgens bepaalde criteria, met een hoge mate van betrouwbaarheid, de status van de ziekte bepalen. Voor meer duidelijkheid kunnen we naar specifieke voorbeelden kijken. Laten we ons nogmaals concentreren op het kattencoronavirus en specifiek op infectieuze peritonitis. Wanneer het virus in de darmen van de kat muteert, krijgt het affiniteit voor monocyten. Door een monocyt te infecteren, komt het virus in de bloedbaan van de kat terecht. Dit is een onbetwistbaar feit, maar de monocyt blijft slechts een korte tijd in de bloedbaan, normaal gesproken ongeveer 3 dagen, en moet daarna zijn definitieve differentiatie ondergaan tot een weefselmacrofaag. Daarom verlaat de monocyt, samen met het coronavirus, de bloedbaan via de wanden van bloedvaten naar het weefsel, waar het een macrofaag wordt. Er zijn aanwijzingen dat het coronavirus ook een versnelde differentiatie van monocyten stimuleert. Hieruit volgt dat het coronavirus ongetwijfeld zeer korte tijd in het perifere bloed van het dier verblijft en daar uiteraard kan worden gedetecteerd, maar dit is een zeer zeldzame vondst en de diagnostische waarde van het testen van bloed op de aanwezigheid van coronavirus met behulp van de PCR-methode is nul, aangezien een negatief resultaat van een dergelijk onderzoek helaas de aanwezigheid van een coronavirusinfectie niet uitsluit. Soms wil de arts ook het parvovirus van honden en katten in het bloed vinden met behulp van PCR. Ik kan aannemen dat een dergelijk verlangen gebaseerd is op leukopenie, die wordt waargenomen bij panleukopenie of parvovirus-enteritis. Waarschijnlijk gelooft iemand dat deze leukopenie het gevolg is van de vernietiging van leukocyten door het virus direct in de bloedbaan. Laten we logisch nadenken: parvovirus is een DNA-bevattend virus, en voor een succesvolle voortplanting en verspreiding moet een DNA-bevattend virus integreren in het genoom van de gastheer, en in cellen die zich actief delen. Hoe zal het virus zich anders vermenigvuldigen? Iedereen weet dat leukocyten zich normaal gesproken niet in het bloed delen. En hun voorgangers verdelen zich in het beenmerg. Parvovirus valt het beenmerg aan en leukopenie is het gevolg van de vernietiging van voorlopercellen in het beenmerg. Ook actief delende cellen zijn de cellen van de darmvlokken, waar het parvovirus zich met succes repliceert, en het beste materiaal voor het testen op parvovirusinfectie is dierlijke uitwerpselen, waardoor het virus zich in de externe omgeving verspreidt. Over het algemeen gebruiken het coronavirus en het parvovirus bloed relatief gezien alleen als transportmedium om de uiteindelijke lokalisatie te bereiken en vrij snel de bloedbaan te verlaten. Er zijn virussen die helemaal niet in de bloedbaan terechtkomen. Voorbeelden hiervan zijn het calicivirus en het kattenherpesvirus. Replicatie van deze virussen is meestal beperkt tot het lymfoïde weefsel van de orofarynx en nasopharynx. Calicivirusinfectie kan systemisch voorkomen, maar dit zijn vrij zeldzame en ernstige gevallen.

Omdat we het over virale infecties hebben, zou ik willen opmerken dat de PCR-methode zeer nauwkeurig en zeer specifiek is, maar deze specificiteit en labiliteit van het genoom van virussen, vooral die die RNA bevatten, kan er in werkelijkheid toe leiden dat een Een specifiek testsysteem voor onderzoek met de PCR-methode kan slechts één specifieke stam of meerdere stammen van een specifiek virus detecteren. Neem als voorbeeld opnieuw het feline calicivirus, dat een groot aantal zeer verschillende stammen kent, en dat er voortdurend nieuwe isolaten worden ontdekt. Daarom geeft PCR-diagnostiek van calicivirus helaas veel vals-negatieve resultaten.

Mythe 2

Prioritair belang van kwantitatieve PCR vergeleken met niet-kwantitatieve

Mythe 3

De betekenis van het resultaat verkregen in een ‘menselijk’ laboratorium

Mythe 4

Commerciële laboratoria werken niet met RNA

Mythe 5

PCR kan en moet goedkoop zijn

Mythe 6

Het laboratorium moet een diagnose stellen

Mythe 7

Als de PCR-methode geen van de differentiële diagnoses bevestigt, is het laboratorium slecht

Tot slot zou ik willen schrijven dat ik helaas vaak de indruk krijg van een soort confrontatie tussen artsen en het laboratorium, althans in Rusland. Artsen vertrouwen laboratoria niet, laboratoria beschouwen artsen als incompetent, enz. Het lijkt mij dat een dergelijke confrontatie niet mag bestaan: het laboratorium moet de arts altijd helpen, en daarvoor moet de arts volledige informatie delen met zijn medewerkers. Ik kan met zekerheid zeggen dat ons laboratorium elk probleem dat zich voordoet probeert op te lossen, en dat we altijd bereid zijn om eventuele onduidelijke punten en misverstanden die zich hebben voorgedaan te bespreken.

Polymerasekettingreactie (PCR) is een moleculaire diagnostische methode die voor veel infecties de ‘gouden standaard’ is geworden, beproefd en grondig klinisch getest. De hoge gevoeligheid en specificiteit van de methode maken het mogelijk om op betrouwbare wijze afzonderlijke ziekteverwekkers in biologisch materiaal te detecteren op basis van hun genetische informatie. De analytische gevoeligheid van PCR voor de meeste virussen en bacteriën bedraagt ​​1000 micro-organismen per 1 ml monster. De specificiteit van PCR voor virale, chlamydiale, mycoplasma en de meeste andere bacteriële infecties bereikt 100%.

De PCR-methode is relatief recent ontwikkeld, maar heeft inmiddels een leidende positie ingenomen in zowel de medische als de veterinaire laboratoriumdiagnostiek van infectie- en invasieve ziekten. De basisprincipes van PCR werden in 1983 ontdekt door de Amerikaanse chemicus Carey B. Mullis, waarvoor hij de Nobelprijs kreeg.

PCR-analyse bestaat uit verschillende fasen. De eerste fase - monstervoorbereiding - bestaat uit de verwerking van het onderzochte materiaal (bereiding van een suspensie, centrifugeren). In de tweede fase wordt het erfelijke materiaal – DNA of RNA – uit de cellen geïsoleerd. In dit geval wordt, na cellyse en vernietiging van het DNA-eiwitcomplex, DNA of RNA op het sorptiemiddel afgezet en vervolgens overgebracht naar de elutiebuffer. In de derde fase wordt amplificatie uitgevoerd, dat wil zeggen dat het aantal specifieke DNA-secties wordt vermenigvuldigd. Voor dit doel worden testsystemen gebruikt, waaronder primers - oligonucleotiden die specifiek zijn voor elke ziekteverwekker. Monsters en controles worden toegevoegd aan het PCR-mengsel dat in microbuisjes wordt gegoten, die in een thermische cycler of thermische cycler worden geplaatst - een programmeerbare thermostaat met hoge snelheid en nauwkeurigheid van de ingestelde temperatuur. Het amplificatieproces bestaat uit drie fasen: denaturatie, annealing en verlenging. Wanneer RNA-virussen worden gedetecteerd in klinische monsters, wordt de amplificatie voorafgegaan door een omgekeerde transcriptiestap waarin het RNA wordt omgezet in DNA met behulp van het enzym reverse transcriptase of reversetase. De vierde fase van PCR-diagnostiek bestaat uit elektroforetische detectie van PCR-producten - amplicons. In dit geval worden PCR-producten in de putjes van een agarosegel geplaatst en onderworpen aan een constante elektrische stroom, waardoor het negatief geladen DNA-molecuul naar de positieve elektrode beweegt. De gel bevat ethidiumbromide, dat, door een stabiel complex met DNA te vormen, deze banden duidelijk zichtbaar maakt wanneer ze worden bekeken onder ultraviolette straling (Fig. 1).

Rijst. 1. PCR-stadia

Opgemerkt moet worden dat om een ​​betrouwbaar resultaat van een PCR-analyse te verkrijgen, een noodzakelijke voorwaarde het naleven van de regels voor de selectie, opslag en transport van klinisch materiaal is. Ondanks het feit dat PCR een zeer gevoelige methode is, is het wenselijk om een ​​bepaalde hoeveelheid van de ziekteverwekker in het monster te hebben.

Materiaal afnemen voor PCR-onderzoek moet worden uitgevoerd met wegwerphandschoenen zonder talkpoeder (aangezien talk de PCR remt). Bij het nemen van schraapsels en spoelingen moet u steriele wegwerpsondes gebruiken met een verhoogde adsorptie (met een borstel aan het uiteinde), omdat deze de optimale hoeveelheid materiaal selecteren.

Schrapen en wassen uit de slijmvliezen van de neus, mondholte, vagina, conjunctiva worden ze verzameld in wegwerpbare plastic microbuisjes - Eppendorf-buisjes - met een volume van 1,5 ml, waarin 0,5 ml steriele zoutoplossing wordt gegoten. Het is raadzaam om geen sondes met wattenstaafjes te gebruiken. U moet ook voorkomen dat u de punt van de sonde in de zoutoplossingbuis afbreekt, omdat dit de verdere verwerking bemoeilijkt en het risico op kruisbesmetting van monsters vergroot. Om de benodigde hoeveelheid materiaal te verkrijgen, volstaat het om de sonde gedurende 1-2 minuten in de reageerbuis te draaien, waarbij spatten van de vloeistof wordt vermeden. Het monster moet er troebel uitzien en bij bezinking moet zich daarin een klein neerslag vormen.

Bloed verzameling uitgevoerd met een wegwerpnaald in een wegwerpspuit of in een glazen reageerbuis zonder antistollingsmiddel. Wanneer het bloed in een injectiespuit wordt opgezogen, wordt het voorzichtig (zonder schuimen) overgebracht in een glazen wegwerpbuisje. Voor bloedafname is het mogelijk om vacuümsystemen (“Vacuette”) te gebruiken. U kunt voor het onderzoek bloedserum ter beschikking stellen: buisjes met bloed worden gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur bewaard totdat er een volledig stolsel is gevormd, vervolgens gedurende 10 minuten bij 3.000 rpm gecentrifugeerd en in een hoeveelheid van minimaal 1 ml overgebracht in steriele Eppendorf-buisjes van 1,5 ml.

sperma verzameld in steriele wegwerpbuizen of injectieflacons.

Urine. Neem de eerste portie ochtendurine in een hoeveelheid van minimaal 20-40 ml in een steriel droog flesje of reageerbuisje.

Ontlasting. Monsters met een gewicht van 1-3 gram worden uit een vooraf gedesinfecteerde en gewassen bak genomen en met wegwerpspatels in een steriele fles overgebracht.

Stukken van aangetaste organen van dode dieren worden verzameld in steriele wegwerpcontainers of schone glazen of plastic containers.

De temperatuuromstandigheden voor opslag en transport van het geselecteerde materiaal moeten strikt in acht worden genomen. Het transport vindt plaats in een thermische container met koelelementen of in een thermoskan met ijs. Als het materiaal langer dan een dag wordt bewaard, moet het worden ingevroren bij T minus 20°C.

De meest voorkomende ziekten bij katten en honden zijn conjunctivitis, rhinotracheïtis en enteritis. Om de etiologie van de ziekte te achterhalen, is het noodzakelijk om hoogwaardige laboratoriumdiagnostiek uit te voeren.

Conjunctivitis of infecties van de bovenste luchtwegen bij katten kunnen worden veroorzaakt door infectie met de volgende micro-organismen: herpesvirus type 1 (FHV1), feline calicivirus, Chlamediapcittaci. Mycoplasma felis, Bordetella bronchiseptica, Feline reovirus, Staphylococcus aureus, Brohaemolytische streptokokken en Salmonella tephimurium.

De meest voorkomende oorzaak zijn volgens verschillende auteurs en onderzoeksmethoden het herpesvirus type FHY1 (van 10% naar 34%) en het feline calicivirus (van 20% naar 53%). Chlamydia pcittaci (10% tot 35%).

Herpes-virusinfectie, wordt geassocieerd met abortussen, hoge neonatale sterfte (infectie in bijna 60% van de gevallen) met tekenen van interstitiële pneumonie.
Calicivirus is ernstig bij kittens, terwijl 25-80% van de teruggevonden volwassen dieren drager worden en een bron van infectie zijn, waarbij het virus via speeksel wordt overgedragen.

Panleukopenie- een besmettelijke virusziekte bij katten, gekenmerkt door een scherpe daling van het aantal leukocyten, gastro-enteritis, rhinitis met conjunctivitis, hoge mortaliteit (30-90% van de zieke kittens).

Een echte plaag voor kinderdagverblijven is infectieuze peritonitis bij katten- een ernstige ziekte veroorzaakt door een hoogpathogeen RNA-virus. Het virus vermenigvuldigt zich in de amandelen en enterocyten van de dunne darm en verspreidt zich door het lichaam via macrofagen en monocyten. Coronavirussen met een lage virulentie veroorzaken matige enteritis, meestal bij kittens na het spenen. Het zeer virulente coronavirus kan leiden tot de ontwikkeling van droge peritonitis of effusie-peritonitis. Peritonitis gaat vaak gepaard met nierfalen, lever- en neurologische symptomen.

Wanneer geïnfecteerd adenovirussen zowel typen als virussen hondenplaag honden vertonen een algemeen complex van symptomen: koorts, conjunctivitis en rhinotracheïtis, maag-darmkanaalaandoeningen en schade aan het zenuwstelsel.

Bij carnivoorplaag Klinische symptomen kunnen bestaan ​​uit seromuceuze neus- en conjunctivale afscheiding, hoesten, kortademigheid, longontsteking, braken en diarree, evenals koorts en hyperkeratose.

Carnivoor adenovirus. De veroorzaker is een DNA-bevattend carnivooradenovirus van type 1 (veroorzaakt infectieuze hepatitis van carnivoren) en type 2 (veroorzaakt canine-adenovirus). Koorts, apathie, anorexia, dorst, braken en diarree en gevoeligheid van de buikwand bij palpatie worden waargenomen. Soms ontwikkelen zich conjunctivitis, keratitis en fotofobie. Er kunnen puntvormige bloedingen op het slijmvlies en de huid optreden. Neurologische aandoeningen worden zelden waargenomen.

Al deze ziekten hebben een hoge besmettelijkheidsindex en gaan gepaard met een hoge sterfte onder puppy's; 10-50% van de zieke puppy's sterft aan parvovirus-enteritis; wanneer niet-gevaccineerde puppy's besmet zijn met het hondenziektevirus, bereikt het sterftecijfer 100%.

Toxoplasmose. De veroorzaker is de protozoa Toxoplasma gondii. De ziekteverwekker vermenigvuldigt zich bij katten op de darmwanden. Ze laten oöcysten met uitwerpselen in de externe omgeving vrijkomen.

Weefselcysten kunnen anorexia, depressie, keratitis, geelzucht, braken, diarree en neurologische symptomen veroorzaken, afhankelijk van de aangetaste organen. Bij honden zijn de klinische symptomen afhankelijk van de aangetaste organen: neurologische aandoeningen (tremor, ataxie, verlamming) of toxoplasmose-myositis (loopstoornis, spieratrofie, stijfheid), evenals myocarditis en hepatitis, kunnen worden waargenomen.

Chlamydia en psittacose. Ziekteverwekkers bij katten - Chlamydophila vilt, bij honden - Chlamydophila abortus, Ch. pecorum, in beide gevallen kan de ziekte veroorzaakt worden door Ch. psittaci. Bij vogels - Ch. psittaci.
Bij katten manifesteert de ziekte zich voornamelijk in de vorm van etterende en niet-etterende conjunctivitis en keratitis; rhinitis, longontsteking, vaginitis, abortus en onvruchtbaarheid kunnen ook worden waargenomen. Neonatale chlamydia conjunctivitis komt voor bij kittens. Bij honden zijn de symptomen gevarieerd en omvatten ontstekingsziekten van het bindvlies, geslachtsorganen, gastritis, artritis, abortus en onvruchtbaarheid. Er zijn aanwijzingen voor de rol van chlamydia in de pathogenese van atherosclerose bij honden.

Mycoplasmose. Ziekteverwekkers zijn micro-organismen van het geslacht Mycoplasma. Het treedt op met tekenen van bronchopneumonie, keratoconjunctevitis en keratitis.

Viru slaperige immuundeficiëntie bij katten. Feline immunodeficiëntie is een ernstige ziekte die wordt veroorzaakt door een virus uit de familie Retrovoridae, geslacht Lentivirus. Het virus tast het immuunsysteem en het zenuwstelsel aan. Heeft tropisme voor T-lymfocyten. Als gevolg van immunosuppressie wordt het lichaam weerloos tegen bacteriën, schimmels, virussen en sterft het aan een secundaire infectie.
Klinische symptomen ontwikkelen zich langzaam en de ziekte wordt het vaakst gerapporteerd bij katten van 6 tot 10 jaar oud.

Ziekten zoals leptospirose bij honden, listeriose bij katten en honden, yersiniose bij puppy's, brucellose, rotavirus-enteritis en hondsdolheid worden ook aangetroffen bij huisdieren.

De juistheid van de PCR-analyse en de hoogwaardige isolatie van infecties hangt in de eerste plaats af van de juiste verzameling van het materiaal en ten tweede van het naleven van de temperatuuromstandigheden voor het opslaan en transporteren van monsters. Een door het laboratorium ontvangen monster wordt geregistreerd, doorloopt alle stadia van de PCR, wordt onderworpen aan elektroforetische detectie en levert vervolgens het eindresultaat op.

De hoge gevoeligheid en specificiteit van de PCR-methode maakt het dus mogelijk om in korte tijd op betrouwbare wijze afzonderlijke pathogenen in biologisch materiaal te detecteren, wat het mogelijk maakt een nauwkeurige diagnose te stellen, een adequate behandeling voor te schrijven en preventieve maatregelen te ontwikkelen.

HEN. Donnik, corresponderend lid van de Russische Academie voor Landbouwwetenschappen, doctor in de biologische wetenschappen, professor, N.A. Pelevina, junior onderzoeker, O.G. Bodrova, junioronderzoeker,
Staatswetenschappelijk instituut Ural State Research Veterinair Instituut van de Russische Academie voor Landbouwwetenschappen