PCR-analyse hos katter. Analyse for opisthorchiasis: generelt, ifa, avføring, hvor og hvordan du tar det, tolkning av resultater

Koronavirusinfeksjoner hos katter og hunder er forårsaket av medlemmer av slekten Coronavirus (familien Coronaviridae). Den viktigste manifestasjonen av koronavirusinfeksjon hos hunder er diaré. V kattekoronavirus forårsaker enteritt og infeksiøs bukhinnebetennelse, som er utbredt blant ville og tamkatter.

Årsaken til koronavirusinfeksjon hos hunder er Canine coronavirus, som forårsaker akutt koronavirus enteritt. Sykdommen overføres ved direkte kontakt med en bærer av viruset (gjennom spytt og avføring). Hunder i alle aldre er mottakelige for denne infeksjonen, men valper og svekkede dyr som allerede har lidd av en annen sykdom, for eksempel parvovirusinfeksjon, er oftest rammet.

De viktigste symptomene på sykdommen er oppkast og diaré, noen ganger blandet med blod, dehydrering, vekttap og apati. 3-4 uker etter bedring kan det utvikles tilbakefall av sykdommen. Ved diagnostisering må koronavirus enteritt hos hunder skilles fra parvovirus enteritt, intestinal adenovirusinfeksjon og hundevalpe.

Koronavirus som påvirker katter kommer i to biotyper: FECV, eller feline enteritis coronavirus, og FIPV, feline infeksiøs peritonittvirus (2, 3). FECV bæres av 16-50 % av huskattene, hvor viruset er lokalisert i tynntarmen uten å forårsake sykdom eller forårsake mild diaré. Samtidig kan 5-12 % av bærerne oppleve en mutasjon fra den opportunistiske tarmformen av FECV til en patogen (FIPV), som fører til utvikling av sykdommen (2).

Infeksiøs peritonitt (IP, FIP) hos katter, som vanligvis ender i døden, forekommer i to former - våt og tørr. Den våte (eksudative) formen for IP er preget av skade på blodårene i buk- eller brysthulene, ledsaget av lekkasje av plasma inn i disse hulrommene (fig. 1). Hos syke dyr utvikles ascites (fig. 2), og ved væskeansamling oppstår respirasjonsdysfunksjon. Fibrinøse avleiringer dannes på de serøse dekkene av bukorganene (fig. 3), og adhesjoner kan etterpå dannes. På grunn av nedsatt leverfunksjon observeres ekterisitet av sclera og hud.

Den tørre (ikke-ekssudative) formen for IP oppstår uten akkumulering av væske i buk- og thoraxhulene. I dette tilfellet påvirkes indre organer - hjernen (fig. 4), lever, nyrer, bukspyttkjertel, og i 25 % av tilfellene observeres øyeskade (fig. 5) (5).

Siden et effektivt behandlingsregime for PV ennå ikke er utviklet, er forebyggende tiltak rettet mot tidlig påvisning av virusbærer av største betydning (1, 3).

Diagnose av infeksiøs peritonitt hos katter utgjør også et alvorlig problem. Tradisjonelle metoder for å identifisere patogenet, basert på påvisning av antistoffer mot koronavirus (RNGA og ELISA), gir opptil 60 % av falske positive resultater. Dette skyldes tilstedeværelsen av opportunistiske patogenstammer i tarmen til katter (2, 3). En rekke utenlandske laboratorier bruker en omfattende metodikk for å diagnostisere IP, inkludert å bestemme:
- antistofftiter mot koronavirus;
- albumin/globulin-forhold i transudat eller blodplasma;
- nivå av a-1 surt glykoprotein (AGP);
- cytologiske og hematologiske parametere (4).

Materialer og metoder
Studien brukte Bagheera-koronavirus-stammen (5 1og TCD50/ml) i fortynninger, 8 isolater av kattekoronavirus (FCoV), 2 isolater av hundekoronavirus (CCV) og suspensjoner av kattepanleukopenivirus og felint calicivirus.
Ved testing av PCR-testsystemet ble det brukt biologisk materiale fra friske katter, dyr med kliniske tegn på IP og katter med uspesifikke symptomer. Blant dyrene som ble studert var både de som ble holdt i barnehager og de som ble holdt individuelt.
Det biologiske materialet ble studert parallelt ved bruk av PCR- og RIGA-metoder. PCR-systemet ble brukt til å studere avføring, blodplasma og transudat for spesifikk ascites, og RIGA-metoden ble brukt til å studere blodserum og transudat.

Serologiske tester ble utført ved bruk av et sett for påvisning av antistoffer mot kjøttetende koronavirus i RIGA (TU 9388-025-00494189-01). Det biologiske materialet til hundene ble studert ved PCR.

Denne forskningen krever imidlertid en betydelig investering av tid og penger. I denne forbindelse kan en effektiv metode for å diagnostisere IP være polymerasekjedereaksjonen (PCR), som ikke bare gjør det mulig å oppdage kattekoronavirus, men også å skille opportunistiske og patogene stammer basert på deres forskjellige lokalisering i kroppen. Samtidig indikerer påvisning av viruset i katteavføring transport av opportunistiske stammer (FECV), og i blodplasma eller ascitesvæske indikerer sirkulasjonen av patogene stammer (FIPV) i dyrets kropp og dermed sykdommen.

Formålet med denne studien er å teste et testsystem for diagnostisering av koronavirusinfeksjon hos katter og hunder basert på PCR.

RNA-isolering ble utført ved å bruke RNA-sorb-settet (TsNIIE), som er basert på metoden for sorpsjon på silikagel. PCR ble utført ved bruk av en TERCIK-forsterker ("DNA-teknologi") i henhold til standardmetoder. De resulterende PCR-produktene ble visualisert ved elektroforese i en 1,5 % agarosegel inneholdende etidiumbromid.

Resultater og diskusjon
Under studien analyserte vi informasjon om nukleotidsekvensene til representanter for Coronaviridae-familien, spesielt forskjellige isolater av katte- og hundekoronavirus publisert i Entrez, GeneBank, EMBL og DDBJ-databasene. I tillegg ble litteraturen som karakteriserer strukturen til genomene til FCoV, CCV og deres genetiske forhold til andre medlemmer av familien studert.

To konserverte sekvenser i nukleokapsidproteingenet ble valgt som mål for spesifikke primere. Spesifisiteten til de foreslåtte primerne ble studert ved bruk av dataprogrammene FASTA og BLASTA. Som et resultat av arbeidet ble homologien til de utvalgte oligonukleotidene bare avslørt med nukleokapsidproteingenene til FCoV og CCV, og ingen signifikant homologi ble funnet med nukleotidsekvensene til andre arter av Coronaviridae-familien, så vel som andre virus, bakterier eller eukaryoter. Derfor bør de foreslåtte primerne, basert på teoretiske beregninger, ha 100 % spesifisitet.

På neste trinn av studien ble betingelsene for å isolere viralt RNA og utføre revers transkripsjon og PCR-reaksjoner optimalisert, og spesifisiteten og sensitiviteten til PCR-analysen ble bestemt. Størrelsen på PCR-produktet var 350 basepar. Metoden viste 100 % spesifisitet og høy sensitivitet. Påvisningen av koronavirus i katteavføring indikerte transport av dens opportunistiske stammer i tarmene, og påvisning av FECV i transudat og blodplasma indikerte utviklingen av sykdommen.

Ved testing med RNGA-metoden ble et positivt resultat ansett å være påvisning av en antistofftiter > 1:128 i et dyr. Dette kan imidlertid indikere både virusoverføring og en åpenbar form for infeksjon. I tillegg kan en positiv titer skyldes tidligere eksponering for koronavirus. Avføring fra hunder ble testet, og påvisning av koronavirus-RNA i dem indikerte sykdommen forårsaket av CCV.

Under forsøket ble biologisk materiale tatt fra 193 katter undersøkt (tabell). Ved bruk av RNGA-metoden ble et positivt resultat registrert i 131 dyr (antistofftitere > 1:128). Ved testing av "seropositive" katter ved bruk av PCR, ble koronavirus-RNA påvist i plasma og ascitesvæske fra 12 dyr (9%), bare i avføring - hos 68 (52%) og ikke påvist i det hele tatt hos 51 (39%). Dermed var 52 % av kattene med et seropositivt resultat bærere av opportunistiske stammer av koronavirus, og 39 % var friske. Det er åpenbart at studien med RNGA-metoden ga 63 % av falske positive resultater (i form av det totale antallet dyr som ble studert).

Konklusjon
Resultatene som er oppnådd indikerer at diagnostisering av kattevirusinfeksjon ved bruk av den tradisjonelle serologiske metoden (TSM) gir mer enn 60 % falske positive resultater, siden den ikke tillater å skille bærertilstanden fra den sanne sykdommen. I tillegg ble dyr som hadde tidligere kontakt med koronaviruset ansett som «seropositive».

Bruken av PCR-metoden gjorde det mulig å skille opportunistiske og patogene stammer på grunn av deres ulike lokalisering i kroppen og å skille bærertilstanden fra sykdommen. Dataene fra studien indikerer derfor at det er tilrådelig å bruke PCR-metoden for å oppdage koronavirus hos katter og hunder og stille en endelig diagnose.

I samsvar med ordre nr. 45 fra Veterinæravdelingen i Landbruksdepartementet i Den russiske føderasjonen, i perioden fra 08/03/2004 til 08/06/2004, tester tester av et testsystem for diagnostisering av infeksiøs peritonitt hos katter ved hjelp av PCR-metoden ble utført. Testsystemet besto kommisjonstesting, og viste 100 % spesifisitet og høy sensitivitet i det foreslåtte panelet. For tiden er koronavirustestsystemet for påvisning og identifisering av koronavirus hos katter og hunder, basert på PCR, brukt i veterinærpraksis (TU 9388-142-00494189-05; RU nr. R077-1-3.5-0813 registrert i den russiske føderasjonen for nr. PVR-1-3.5/01556 datert 30. juni 2006 for en periode på 5 år).

LITTERATUR
1, Addie, D, D„ Jarrett, 0. Bruk av en revers-transkriptase-polymerasekjedereaksjon for å overvåke utskillelsen av kattekoronavirus hos friske katter, Vet. Rec, 2001, 26. mai; 148 (21): 649-53,
2, Vennema, H, atal. Feline Infeksiøs Peritonitt-virus oppstår ved mutasjon fra Endemiske Feline Enteric Coronaviruses, Virology, 1998:150-157.
3, Herrewegh, A.A., Mahler, M. Hedrich, H.J., Haagmans, B.L. Egberink, H.F., Horzinek, M.C., Rottier, P.J., de Groot, R.J., Persistence and evolution of feline in a closed cat-breeding colony Virology 1997 4. august; 234 (2): 349-363,
4, Sammenligning av forskjellige tester for å diagnostisere smittsom peritonitt hos katter; Katrin Hartmann i 2003.
5, Feline smittsom peritonitt; Stacy E, Andrew, veterinærklinikker i Nord-Amerika: lite dyr; vol. 30, nummer 5, september 2000

E.A. YARALOVA, I.L. OBUKHOV, MM RAKHMANINA, E.I. ELIZBARASHVILI, V.I.ULASOV,
All-russisk statlig senter for kvalitet og standardisering av dyremedisiner og -fôr, Moskva

PCR er en polymerasekjedereaksjon basert på prinsippet om å kopiere en spesifikk del av en DNA-streng. På grunn av den multiple økningen i volumet av DNA-materiale, blir det mulig å oppdage de ønskede bakteriene i et mikroskop. Fordelen med PCR er:

• høy følsomhet;
• høy spesifisitet;
• påvisning av akutte og latente infeksjoner;
• evnen til å identifisere noen av de for tiden kjente patogenene.

PCR i veterinærmedisin

For tiden har PCR-diagnosemetoden funnet bred anvendelse i veterinærmedisin. Denne forskningsmetoden lar deg få et pålitelig svar på kort tid. I tillegg krever det en svært liten mengde biologisk materiale, i motsetning til for eksempel en generell blodprøve, noe som i stor grad forenkler veterinærens arbeid. Hos både mennesker og dyr kan materialet for PCR være:

• blod og dets komponenter;
• urin;
• magebiopsi;
• spytt;
• utskraping av epitelceller.

Utføre PCR-diagnostikk for katter

Under en katteundersøkelse hos veterinær, for å bekrefte eller avkrefte den mistenkte diagnosen, kan det være nødvendig å teste katten for PCR. Årsaken til å foreskrive en slik studie kan være de vanligste og samtidig vanskelige å diagnostisere sykdommer, som bukhinnebetennelse, rhinotracheitt, koronavirus, toksoplasmose, etc.

En spesielt alvorlig sykdom som krever PCR-metoden er felin viral immunsvikt. Dette viruset påvirker ikke bare immunsystemet, men også nervesystemet til dyret. Kattens kropp blir svekket og forsvarsløs mot bakterier og virus, som et resultat av at dyret dør av sekundære infeksjoner. Og for å utelukke tilstedeværelsen av dette viruset, anbefaler veterinæren å utføre en polymerasekjedereaksjon på katten.

Denne metoden har i tillegg til sine mange fordeler en rekke ulemper. Alle PCR diagnostiske enheter er svært følsomme, og derfor kan den minste forurensning gi et falskt positivt svar. De høye kostnadene for utstyr og reagenser anses også som viktige, så ikke alle veterinærklinikker i Moskva kan kjøpe det. Diagnostisering av sykdommer uten denne metoden blir imidlertid stadig vanskeligere, så PCR-testing hos katter i Moskva kan gjøres i vår klinikk ved å ringe våre kontaktnumre eller legge igjen en forespørsel på nettstedet.

Veterinærterapeut, IVC MBA

I den moderne verden er det mange som foretrekker katter for deres større uavhengighet fra mennesker, i motsetning til hunder, som trenger å få tid; tilpasning til en ensom livsstil, ynde og evne til å varme sin eier på kalde vinterdager. En kjærlig og omsorgsfull eier prøver å beskytte kjæledyret sitt mot problemer i form av ulike sykdommer som katter lider av.

Denne bekymringen manifesteres i kvalitetsernæring og rettidig forebygging av virussykdommer. Dessverre finnes det en rekke arter av uhelbredelige virusinfeksjoner som katter er mottakelige for. I fravær av symptomer på sykdommen og spesifikk diagnostikk, kan du leve med dyret i lang tid uten å mistenke tilstedeværelsen av en kronisk virusinfeksjon (heretter kalt CVI) hos kjæledyret ditt. I denne artikkelen vil jeg avsløre i detalj faren for CVI og prøve å unngå dette problemet når du kjøper den ønskede kattungen.

Så, hva er kroniske virusinfeksjoner og hvilken fare utgjør de for kjæledyrene våre? CVI er en virussykdom med lang inkubasjonstid, som kan vare fra flere uker og vare opptil flere år. Infeksjon kan skje både in utero og ved kontakt av friske katter med syke dyr, samt bærere.

Koronavirus - dette er RNA - som inneholder virus . Disse virusene fikk dette navnet på grunn av likheten mellom de kølleformede prosessene med corona spinarum. Årsaken til infeksjonen er et virus fra Coronavirus-familien. Det er 2 patogene stammer - de nærmeste slektningene til samme mikroorganisme. Den ene forårsaker peritonitt, den andre enteritt.

Koronavirus er delt inn i 3 former:

Asymptomatisk form - dyret kan være bærer av viruset og kan infisere andre katter, mens ingenting truer livet.

Den milde formen er ikke farlig og kan forårsake ganske milde sykdommer - enteritt (feline intestinale koronavirus - FECV).

En høypatogen form er feline infeksiøs peritonittvirus (FIPV). Kroppen gjennomgår destruktive endringer i alle systemer og organer, noe som fører til døden.

Koronavirus enteritt (FECV) er relativt ufarlig og forekommer hos dyr i ung alder, grunnlaget for symptomene er løs avføring, som sjelden fører til døden; Men viral peritonitt hos katter er ekstremt farlig fordi den har høy dødelighet. FIPV og FECV er ganske beslektet; disse mikroorganismene regnes som en enkelt populasjon av virus, men med varierende grad av patogene endringer. Studier har vist at koronavirus enteritt under mutasjonsprosessen blir til viral peritonitt.

Smitteoverføring er oronasal, dvs. infeksjon skjer gjennom luftveiene av luftbårne dråper, gjennom avføring, mating av kattunger og under parring. Hos katter som lever alene er denne sykdommen mindre vanlig; en høyere prosentandel av denne sykdommen forekommer hos utstillingskatter, så vel som hos katter som lever i store grupper.

Symptomer

Det er 2 former for HIPC:

1. Eksudativ (med "effusjon")

"Våt" peritonitt er ledsaget av et tydelig tegn på tilstedeværelse av væske i brystet eller bukhulene. Væsken har hovedsakelig en lys gul fargetone og er noe tyktflytende.

Når biologisk væske samler seg i brysthulen, opplever dyret pustevansker som følge av effusjon, og katten inntar en tvungen stilling. Pusten er ofte av typen thoraco-abdominal.

Når væske samler seg i bukhulen, tar eiere ofte hensyn til kjæledyrets forstørrede mage.

Du kan også oppleve:

• forhøyet temperatur (ikke alltid);
• vekttap;
• generell svakhet, depresjon;
• forstørrede lymfeknuter;
• redusert eller tap av appetitt.

2. Ikke-ekssudativ ("tørr")

Med denne formen er symptomene ofte milde. Denne formen er vanskelig å diagnostisere. Dens karakteristiske symptomer er vekttap og mangel på matlyst.

Diagnostikk. Det skjer på en kompleks måte. Til å begynne med tas kliniske og biokjemiske blodprøver fra dyret; utføre en ultralyd av bukhulen; serologiske forskningsmetoder (ELISA - bestemmelse av mengden antistoffer mot en gitt sykdom; eller ICA - hurtigtest), undersøker også effusjonsvæske.

Prognose. Uheldig. Noen ganger, med den ekssudative formen av VIP, etter fjerning av væsken og symptomatisk behandling, utvikles en "tørr" form av sykdommen. Katter med "tørr" FIP kan leve opptil ett år.

Behandling. Dessverre er det ingen kur for denne sykdommen; bare symptomatisk terapi utføres med sikte på å forbedre kjæledyrets livskvalitet.

Forebygging. Tar sikte på å redusere antall katter som holdes i ett rom (maksimalt 6-10 katter). Renslighet og rettidig desinfeksjon av brukte skuffer og et tilstrekkelig antall av dem, hyppig skifte av fyllstoff.

Dette er en kronisk virussykdom preget av svekkelse av immunsystemet, utvikling av anemi og lymfosarkom. Unge dyr er svært utsatt for denne infeksjonen. FLV er diagnostisert i alle land i verden; sykdommen rammer katter i forskjellige aldersgrupper og raser.

stier overføringer. Fekal-oral (spytt, avføring, utslipp fra nesehulen), gjennom melken fra infiserte katter, bitt, gjennom kontakt med et sykt dyr fra katt til katt, overføring av lopper er mulig, så vel som hvis reglene for asepsis og antisepsis er ikke observert under injeksjoner og blodinnsamling.

Patogenese. VLK er forårsaket av en genetisk disposisjon, samt immunologisk mangel hos dyr. Syke katter med en antistofftiter på 1:32 har kanskje ikke et klinisk bilde av sykdommen, men slike dyr regnes som virusbærere. Antistoffer kan ikke påvises hos klinisk syke katter. VLK hemmer aktiviteten til rød benmarg, noe som fører til anemi, reduserer immunitet og bidrar til utvikling av andre sykdommer.

Klinisk bilde Det er tre former for sykdommen:

1. Jevn eller vedvarende. Immuniteten til et slikt dyr er sterkt svekket, sykdommen utvikler seg ganske raskt og behandlingen er oftest ineffektiv.
2. Skjult eller latent. Dyret har en sirkulasjonsforstyrrelse. Viruset trenger inn i lymfesystemet og rød benmarg. Dyret begynner å bli syk oftere og svulster vises.
3. Overgangs eller forbigående. Takket være sin sterke immunitet, kommer dyret 3 måneder etter infeksjon.

Oftest viser slike dyr alvorlig anemi, immunsuppresjon (mottakelighet for andre infeksjoner eller dens tilstedeværelse), og lymfosarkom - flere eller atypiske. Inkubasjonstiden er 60-80 dager, noen ganger fra 2 til 6 år. VLK forekommer i en latent form uten manifestasjon av kliniske symptomer på infeksjon og kan ikke manifestere seg i lang tid. Under påvirkning av negative faktorer (endringer i fôringsforhold, hypotermi, stress), aktiveres viruset og sykdommen utvikler seg. Helt i begynnelsen kan endringer i blodet noteres (leukocytose, lymfocytose, utseendet til atypiske blodceller); blekhet/ikterus i slimhinner, forstørrede lymfeknuter, vekttap, nedsatt appetitt, fordøyelsesbesvær.

Diagnostikk

Oppstår på grunnlag av kliniske, hematologiske, serologiske og virologiske studier. De viktigste diagnostiske metodene inkluderer:

• Enzym-linked immunosorbent assay (ELISA), immunokromatografisk assay (ICA). Falske negative resultater er vanlige.
• Klinisk blodprøve.
• Biokjemi av blod.
• Ultralyd av bukhulen.
• Biopsi og histologi.

Behandling. Det finnes ingen kur. Det er rettet mot å gi symptomatisk terapi og forbedre dyrets livskvalitet. For eksempel, med alvorlig anemi, er en blodoverføring foreskrevet, samt bruk av medisiner som stimulerer produksjonen av røde blodlegemer i den røde benmargen. Legemidler er foreskrevet som stimulerer immunforsvaret. Hvis lymfomer oppdages, er kjemoterapi foreskrevet.

Forebygging. Viruset er svært ustabilt i det ytre miljøet; utenfor en levende organisme dør det innen to dager. For å ødelegge dette viruset er det nok å desinfisere lokaler og dyrepleieartikler, boller, etc. Å holde kjæledyret ditt rent, næringsrik mat og begrense kontakt med herreløse dyr er nøkkelen til kjæledyrets helse.

Denne sykdommen er kun farlig for katter, den utgjør ingen risiko for mennesker og andre dyrearter.

Den viktigste metoden for å forhindre denne sykdommen er vaksinasjon. Til slike formål brukes vaksinene Purevax FeLV og Leukocel. Vaksinasjon utføres fra ni ukers alder. Vaksinasjon utføres to ganger, med et intervall på 21 dager. Da bør katter vaksineres en gang i året.

Viral immunsvikt (FIV, FIV)

En smittsom sykdom hos katter, preget av et kronisk forløp, ledsaget av skade på immunsystemet og høy dødelighet.

Denne sykdommen har blitt endemisk hos katter over hele verden.

Viruset vedvarer ved romtemperatur i ca. 4 dager. Når det varmes opp til 60 grader, dør viruset innen en halv time; når det kokes, dør det. Ved behandling med alkoholholdige preparater inaktiveres viruset i løpet av 5-10 minutter. VIC er ganske motstandsdyktig mot ultrafiolett stråling.

FIV er mer vanlig hos herreløse katter; den omtrentlige alderen på dyrene er 5-10 år.

stier overføringer. Hovedveien er bitt fra syke dyr, katter uten stamtavle er mer sannsynlig å bli smittet; Smitten er også vanlig blant dyr som har fri tilgang til friluftsliv. Infeksjon er mulig gjennom gjensidig slikking. Viruset finnes i spytt, blod og andre væsker.

Klinisk bilde. Kliniske tegn er ganske uspesifikke og ganske varierte. De gjenspeiler samtidige infeksjoner som utvikler seg mot bakgrunnen av et svekket immunsystem. Dyr dukker opp:

• Svakhet;
• Tap av Appetit;
• Gingivitt;
• Kronisk diaré;
• Vekttap osv.

På grunn av det faktum at dyrets immunsystem svikter, kan ulike infeksjoner slutte seg til FIV: kalcivirose, klamydia, viral leukemi, etc., som forverrer allmenntilstanden.

Katter med FIV har økt risiko for å utvikle lymfom, og kliniske tegn kan ligne på FLV.

Diagnostikk. Kliniske laboratorietester brukes: blodprøve (nøytropeni, lymfopeni, anemi, monocytose kan observeres). En biokjemisk blodprøve avslører en stor mengde protein, økt aktivitet av leverenzymer, azotemi og hyperglykemi.

Det er flere spesifikke studier av denne sykdommen:

Enzyme immunoassay metode (ELISA); IHA.

Viruset kan påvises ved PCR dersom serologiske tester gir negativt resultat.

Behandling. Det er foreløpig ingen spesifikk behandling.

Det har blitt lagt merke til at når den behandles med Zidovudin, forbedres den kliniske tilstanden og funksjonen til immunsystemet hos mange katter. Disse stoffene er dyre og kan forårsake betydelige bivirkninger, for eksempel anemi. Immunmodulatorer brukes også, som har en gunstig effekt på kroppen.

Klinisk usunne katter og katter med svekket immunforsvar bør ikke vaksineres.

Forebygging. Det finnes ingen vaksiner. Minimere kontakt med katter utenfor hjemmet. Overholdelse av kosthold, holde dyrene rene, desinfeksjon av pleieartikler og rettidig utskifting av søppel i brett. Når nye dyr dukker opp, kreves obligatorisk karantene og medisinsk undersøkelse av det nye kjæledyret.

Elsk kjæledyrene dine!

Bibliografi:

• Gaskell, Bennett: Håndbok for infeksjonssykdommer hos hunder og katter, akvarietrykk, 2015.
• Ulike kilder fra Internett

Til å begynne med vil jeg finne ut hva meningen med polymerasekjedereaksjonsmetoden (PCR) er fra et praktisk synspunkt, fra en veterinærs synspunkt. Nøyaktig hva skal en lege foreskrive en PCR-test forstå... Jeg vil ikke gå inn på noen rent faglige detaljer om de molekylære mekanismene som er involvert i PCR. Jeg vil bare at veterinæren skal forstå tydelig: PCR-metoden er direkte, og når man utfører en slik studie, antas det at det er mulig å isolere nukleinsyren (DNA eller RNA) til det mistenkte patogenet fra det kliniske materialet som sendes til laboratorium. Dette er hovedpostulatet. Men til tross for dette postulatet, kommer jeg veldig ofte over en mening som jeg vil ringe Myte 1 , at ethvert patogen av enhver sykdom kan påvises ved PCR i blodet. Strengt tatt fremstår blod i dette tilfellet som et slags kollektivt bilde av et universelt materiale for forskning. Ofte vil de at vi skal jobbe «med alt og for alt». Dette er umulig, dessverre. Hvordan bestemme hvilket patogen som kan finnes ved hjelp av PCR og hvilket ikke? Ved valg av materiale for forskning ved bruk av PCR-metoden, må legen først og fremst forstå patogenesen til sykdommen eller sykdommene hvis årsaksmidler han ønsker å oppdage. Hvis intravital innsamling av nødvendig materiale fra et dyr er umulig, bør slik diagnostikk ikke foreskrives. For tiden har laboratorier mange tilgjengelige diagnostiske metoder, for eksempel enzymimmunoanalysemetoden. Denne metoden lar deg bestemme tilstedeværelsen av antistoffer mot patogenet, deres mengde og, i henhold til visse kriterier med høy grad av pålitelighet, tilstanden til sykdommen. For større klarhet kan vi se på spesifikke eksempler. Nok en gang, la oss fokusere på kattekoronavirus og spesifikt smittsom peritonitt. Når viruset i kattens tarm muterer, får det en affinitet for monocytter. Ved å infisere en monocytt kommer viruset inn i kattens blodstrøm, dette er et ubestridelig faktum, men monocytten forblir i blodet i bare en kort periode, normalt ca. 3 dager, og deretter må den gjennomgå sin endelige differensiering til en vevsmakrofag. Derfor forlater monocytten, sammen med koronaviruset, blodstrømmen gjennom veggene i blodårene inn i vevet, hvor den blir en makrofag. Det er bevis på at koronavirus også stimulerer akselerert monocyttdifferensiering. Det følger av dette at koronaviruset utvilsomt befinner seg i dyrets perifere blod i svært kort tid, og det kan selvfølgelig oppdages der, men dette er et svært sjeldent funn, og den diagnostiske verdien av å teste blod for tilstedeværelse av koronavirus ved bruk av PCR-metoden er null, siden et negativt resultat av en slik studie, dessverre, ikke utelukker tilstedeværelsen av koronavirusinfeksjon. Noen ganger vil legen også finne hunde- og katteparvovirus i blodet ved hjelp av PCR. Jeg kan anta at et slikt ønske er basert på leukopeni, som observeres med panleukopeni eller parvovirus enteritt. Sannsynligvis tror noen at denne leukopenien er et resultat av ødeleggelsen av leukocytter av viruset direkte i blodet. La oss tenke logisk: parvovirus er et DNA-holdig virus, og for vellykket reproduksjon og spredning må et DNA-holdig virus integreres i vertens genom, og i celler som aktivt deler seg, ellers hvordan vil viruset formere seg? Alle vet at leukocytter normalt ikke deler seg i blodet. Og deres forgjengere deler seg i benmargen. Parvovirus angriper benmargen, og leukopeni skyldes ødeleggelse av stamceller i benmargen. Aktivt delende celler er også cellene i tarmvilli, hvor parvoviruset vellykket replikerer, og det beste materialet for å teste for parvovirusinfeksjon er dyreekskrement, som viruset sprer seg gjennom i det ytre miljøet. Generelt bruker koronavirus og parvovirus blod kun som relativt sett et transportmedium for å oppnå endelig lokalisering og forlate blodstrømmen ganske raskt. Det er virus som ikke kommer inn i blodet i det hele tatt. Eksempler inkluderer calicivirus og felint herpesvirus. Replikasjon av disse virusene er oftest begrenset til lymfoidvevet i orofarynx og nasopharynx. Calicivirusinfeksjon kan oppstå systemisk, men dette er ganske sjeldne og alvorlige tilfeller.

Siden vi snakker om virusinfeksjoner, vil jeg bemerke at PCR-metoden er veldig nøyaktig og veldig spesifikk, men denne spesifisiteten og labiliteten til genomet til virus, spesielt RNA-holdige, kan i realiteten føre til at en spesifikt testsystem for forskning ved bruk av PCR-metoden kan kun oppdage en spesifikk stamme eller flere stammer av et spesifikt virus. Som et eksempel, tenk igjen på feline calicivirus, som har et stort antall svært forskjellige stammer, samt nye isolater som stadig oppdages. Derfor gir dessverre PCR-diagnostikk av calicivirus mange falske negative resultater.

Myte 2

Prioritert betydning av kvantitativ PCR sammenlignet med ikke-kvantitativ

Myte 3

Betydningen av resultatet oppnådd i et "menneskelig" laboratorium

Myte 4

Kommersielle laboratorier jobber ikke med RNA

Myte 5

PCR kan og bør være billig

Myte 6

Laboratoriet må stille en diagnose

Myte 7

Hvis PCR-metoden ikke bekrefter noen av differensialdiagnosene, er laboratoriet dårlig

Avslutningsvis vil jeg skrive at jeg dessverre ofte får inntrykk av en slags konfrontasjon mellom leger og laboratoriet, i hvert fall i Russland. Leger stoler ikke på laboratorier, laboratorier anser leger som inkompetente osv. Det virker for meg som om en slik konfrontasjon ikke bør eksistere: laboratoriet skal alltid hjelpe legen, og for dette må legen dele fullstendig informasjon med sine ansatte. Jeg kan med sikkerhet si at laboratoriet vårt prøver å hjelpe til med å løse ethvert problem som oppstår, og vi er alltid klare til å diskutere eventuelle uklare punkter og misforståelser som har oppstått.

Polymerasekjedereaksjon (PCR) er en molekylær diagnostisk metode som har blitt "gullstandarden" for mange infeksjoner, tidstestet og grundig klinisk testet. Metodens høye sensitivitet og spesifisitet gjør det mulig å pålitelig oppdage enkeltpatogener i biologisk materiale basert på deres genetiske informasjon. Den analytiske sensitiviteten til PCR for de fleste virus og bakterier er 1000 mikroorganismer per 1 ml prøve. Spesifisiteten til PCR for virus-, klamydia-, mykoplasma- og de fleste andre bakterielle infeksjoner når 100 %.

PCR-metoden ble utviklet relativt nylig, men har nå tatt en ledende posisjon innen både medisinsk og veterinær laboratoriediagnostikk av infeksjonssykdommer og invasive sykdommer. Grunnprinsippene for PCR ble oppdaget i 1983 av den amerikanske kjemikeren Carey B. Mullis, som han ble tildelt Nobelprisen for.

PCR-analyse består av flere stadier. Det første trinnet - prøveforberedelse - består av å behandle materialet som studeres (fremstilling av en suspensjon, sentrifugering). På det andre trinnet isoleres arvematerialet - DNA eller RNA - fra cellene. I dette tilfellet, etter cellelyse og ødeleggelse av DNA-proteinkomplekset, blir DNA eller RNA avsatt på sorbenten og deretter overført til elueringsbufferen. På det tredje trinnet utføres amplifikasjon, det vil si at antallet spesifikke DNA-seksjoner multipliseres. Til dette formål brukes testsystemer, som inkluderer primere - oligonukleotider som er spesifikke for hvert patogen. Prøver og kontroller legges til PCR-blandingen helles i mikrorør, som plasseres i en termisk syklus eller termisk syklus - en programmerbar termostat med høy hastighet og nøyaktighet av den innstilte temperaturen. Amplifikasjonsprosessen består av tre stadier: denaturering, annealing og forlengelse. Når RNA-virus påvises i kliniske prøver, innledes amplifisering av et revers transkripsjonstrinn der RNA omdannes til DNA ved hjelp av enzymet revers transkriptase, eller reversetase. Den fjerde fasen av PCR-diagnostikk består av elektroforetisk påvisning av PCR-produkter - amplikoner. I dette tilfellet plasseres PCR-produkter i brønnene til en agarosegel og utsettes for en konstant elektrisk strøm, noe som får det negativt ladede DNA-molekylet til å bevege seg mot den positive elektroden. Gelen inneholder etidiumbromid, som danner et stabilt kompleks med DNA, gjør disse båndene godt synlige når de sees under ultrafiolett bestråling (fig. 1).

Ris. 1. PCR-stadier

Det skal bemerkes at for å oppnå et pålitelig resultat av en PCR-analyse, er en nødvendig betingelse overholdelse av reglene for valg, lagring og transport av klinisk materiale. Til tross for at PCR er en svært sensitiv metode, er det ønskelig å ha en viss mengde av patogenet i prøven.

Tar materiale til PCR-forskning bør utføres med engangshansker uten talkum (siden talkum hemmer PCR). Når du tar skrap og vask, bør du bruke sterile engangsprober med økt adsorpsjon (med en børste på enden), da de velger den optimale mengden materiale.

Skraping og vask fra slimhinnene i nesen, munnhulen, skjeden, konjunktiva, samles de i engangsplastmikrorør - Eppendorf-rør - med et volum på 1,5 ml, hvori 0,5 ml steril saltvannsløsning helles. Det anbefales ikke å bruke prober med bomullspiss. Du bør også unngå å bryte av tuppen av sonden inn i saltvannsrøret, da dette kompliserer videre bearbeiding og øker risikoen for krysskontaminering av prøver. For å oppnå den nødvendige mengden materiale er det nok å rotere sonden i reagensrøret i 1-2 minutter, for å unngå sprut av væske. Prøven skal være uklar i utseende, og ved bunnfelling skal det dannes et lite bunnfall i den.

Blodsamling utføres med en engangsnål inn i en engangssprøyte eller inn i et glassreagensrør uten antikoagulant. Når den trekkes inn i en sprøyte, overføres blodet fra den forsiktig (uten å skumme) til et engangsglassrør. Det er mulig å bruke vakuumsystemer (“Vacuette”) for blodprøvetaking. Du kan gi blodserum til studien: rør med blod får stå i romtemperatur i 30 minutter til en koagel er fullstendig dannet, deretter sentrifugeres ved 3 tusen rpm i 10 minutter og overføres i en mengde på minst 1 ml til sterile Eppendorf-rør på 1,5 ml.

sperm samles i sterile engangsrør eller hetteglass.

Urin. Ta den første porsjonen morgenurin i en mengde på minst 20-40 ml i en steril tørr flaske eller reagensrør.

Avføring. Prøver som veier 1-3 gram tas fra et forhåndsdesinfisert og vasket brett og overføres til en steril flaske med engangsspatel.

Biter av berørte organer fra døde dyr samles i sterile engangsbeholdere eller rene glass- eller plastbeholdere.

Temperaturforholdene for lagring og transport av det valgte materialet må overholdes strengt. Transporten utføres i en termisk beholder med kjøleelementer eller i en termos med is. Dersom materialet oppbevares i mer enn et døgn, skal det fryses ved T minus 20°C.

De vanligste sykdommene hos katter og hunder er konjunktivitt, rhinotracheitt og enteritt. For å finne ut etiologien til sykdommen, er det nødvendig å utføre laboratoriediagnostikk av høy kvalitet.

Konjunktivitt eller øvre luftveisinfeksjoner hos katter kan være forårsaket av infeksjon med følgende mikroorganismer: herpesvirus type 1 (FHV1), feline calicivirus, Chlamediapcittaci. Mycoplasma felis, Bordetella bronchiseptica, Feline reovirus, Staphylococcus aureus, Brohaemolytic streptococcic og Salmonella tephimurium.

Den vanligste årsaken, ifølge ulike forfattere og forskningsmetoder, er herpesvirus type FHY1 (fra 10 % til 34 %) og feline calicivirus (fra 20 % til 53 %). Chlamydia pcittaci (10 % til 35 %).

Herpesvirusinfeksjon, er assosiert med aborter, høy neonatal dødelighet (infeksjon i nesten 60 % av tilfellene) med tegn på interstitiell pneumoni.
Calicivirus er alvorlig hos kattunger, mens 25-80 % av friske voksne dyr blir bærere og er en kilde til infeksjon, og overfører viruset gjennom spytt.

Panleukopeni- en smittsom virussykdom hos katter, preget av et kraftig fall i nivået av leukocytter, gastroenteritt, rhinitt med konjunktivitt, høy dødelighet (30-90% av syke kattunger).

En skikkelig plage for barnehager er felin smittsom peritonitt- en alvorlig sykdom forårsaket av et høypatogent RNA-virus. Viruset replikerer seg i mandlene og enterocyttene i tynntarmen, og spres i hele kroppen gjennom makrofager og monocytter. Koronavirus med lav virulens forårsaker moderat enteritt, oftest hos kattunger etter avvenning. Svært virulent koronavirus kan føre til utvikling av tørr eller effusjonsperitonitt. Peritonitt er ofte ledsaget av nyresvikt, lever- og nevrologiske symptomer.

Når smittet adenovirus både typer og virus hundepest hunder viser et generelt kompleks av symptomer: feber, konjunktivitt og rhinotracheitis, mage-tarmkanalen lidelse og skade på nervesystemet.

På rovdyrpest Kliniske tegn kan omfatte seromukøs nese- og konjunktival utflod, hoste, dyspné, lungebetennelse, oppkast og diaré, samt feber og hyperkeratose.

Carnivore adenovirus. Årsaken er et DNA-holdig rovdyradenovirus av type 1 (forårsaker smittsom hepatitt hos rovdyr) og type 2 (forårsaker hundeadenovirus). Feber, apati, anoreksi, tørste, oppkast og diaré, og ømhet i bukveggen ved palpasjon observeres. Noen ganger utvikles konjunktivitt, keratitt og fotofobi. Det kan være skarpe blødninger på slimhinnen og huden. Nevrologiske lidelser er sjelden observert.

Alle disse sykdommene har en høy smitteindeks og er assosiert med høy dødelighet blant valper; 10-50% av syke valper dør av parvovirus enteritt; når uvaksinerte valper er infisert med hundevalpevirus, når dødeligheten 100%.

Toxoplasmose. Årsaken er protozoen Toxoplasma gondii. Patogenet formerer seg hos katter på tarmveggene. De frigjør oocyster i det ytre miljøet med avføring.

Vevscyster kan forårsake anoreksi, depresjon, keratitt, gulsott, oppkast, diaré og nevrologiske symptomer avhengig av de berørte organene. Hos hunder avhenger kliniske symptomer av organene som påvirkes: nevrologiske lidelser (tremor, ataksi, lammelse) eller toksoplasmose myositt (gangforstyrrelse, muskelatrofi, stivhet), samt myokarditt og hepatitt, kan observeres.

Klamydia og psittacose. Patogener hos katter - Chlamydophila filt, hos hunder - Chlamydophila abortus, Ch. pecorum, i begge tilfeller kan sykdommen være forårsaket av Ch. psittaci. Hos fugler - Ch. psittaci.
Hos katter manifesterer sykdommen seg hovedsakelig i form av purulent og ikke-purulent konjunktivitt og keratitt; rhinitt, lungebetennelse, vaginitt, abort og infertilitet kan også observeres. Neonatal klamydial konjunktivitt forekommer hos kattunger. Hos hunder er symptomene varierte og inkluderer betennelsessykdommer i konjunktiva, kjønnsorganer, gastritt, leddgikt, abort og infertilitet. Det er bevis på rollen som klamydia i patogenesen av aterosklerose hos hunder.

Mykoplasmose. Patogener er mikroorganismer av slekten Mycoplasma. Det oppstår med tegn på bronkopneumoni, keratokonjunktevitt og keratitt.

Viru søvnig immunsvikt hos katter. Feline immunsvikt er en alvorlig sykdom forårsaket av et virus fra familien Retrovoridae, slekten Lentivirus. Viruset angriper immun- og nervesystemet. Har tropisme for T-lymfocytter. Som følge av immunsuppresjon blir kroppen forsvarsløs mot bakterier, sopp, virus og dør av en sekundær infeksjon.
Kliniske tegn utvikler seg sakte, og sykdommen rapporteres oftest hos katter i alderen 6-10 år.

Sykdommer som leptospirose hos hund, listeriose hos katter og hunder, yersiniose hos valper, brucellose, rotavirus enteritt og rabies finnes også hos husdyr.

Riktigheten av PCR-analysen og høykvalitets isolasjon av infeksjon avhenger først og fremst av riktig innsamling av materialet, og for det andre av overholdelse av temperaturforholdene for lagring og transport av prøver. En prøve mottatt av laboratoriet blir registrert, går gjennom alle stadier av PCR, blir utsatt for elektroforetisk deteksjon, og produserer deretter det endelige resultatet.

Dermed gjør PCR-metodens høye sensitivitet og spesifisitet det mulig å pålitelig oppdage enkeltpatogener i biologisk materiale på kort tid, noe som gjør det mulig å stille en nøyaktig diagnose, foreskrive adekvat behandling og utvikle forebyggende tiltak.

DEM. Donnik, korresponderende medlem av det russiske akademiet for landbruksvitenskap, doktor i biologiske vitenskaper, professor, N.A. Pelevina, juniorforsker, O.G. Bodrova, juniorforsker,
Statens vitenskapelige institusjon Ural State Research Veterinary Institute of the Russian Academy of Agricultural Sciences