FISH là một nghiên cứu để chẩn đoán phân biệt. Lai huỳnh quang tại chỗ Các phương pháp chẩn đoán mới nhất

Phương pháp này hiện được sử dụng để chẩn đoán một số loại khối u ung thư, vì sự biến đổi ác tính của tế bào là do những thay đổi trong bộ gen của nó. Theo đó, sau khi tìm thấy các rối loạn đặc trưng trong gen, tế bào này có thể được phân loại chắc chắn là ung thư. Ngoài ra, xét nghiệm FISH cũng được sử dụng để xác nhận chẩn đoán đã được thiết lập, cũng như thu thập thêm dữ liệu về khả năng sử dụng các loại thuốc hóa trị cụ thể cho mục đích hóa trị ung thư vú và làm rõ tiên lượng của bệnh.

Một ví dụ điển hình về việc sử dụng xét nghiệm FISH là ở bệnh nhân ung thư vú. Với kỹ thuật này, mô sinh thiết được kiểm tra các bản sao của gen gọi là HER-2. Nếu gen này có mặt, điều đó có nghĩa là một số lượng lớn các thụ thể HER2 nằm trên bề mặt tế bào. Chúng nhạy cảm với các tín hiệu kích thích sự phát triển và sinh sản của các phần tử khối u. Trong trường hợp này, cơ hội mở ra cho việc sử dụng hiệu quả trastuzumab - loại thuốc này ngăn chặn hoạt động của các thụ thể HER2, có nghĩa là nó ức chế sự phát triển của khối u.

Bài kiểm tra FISH được thực hiện như thế nào?

Những sai lệch trong cấu trúc của nhiễm sắc thể thuộc một số dạng:
chuyển vị - sự di chuyển của một đoạn vật chất nhiễm sắc thể đến một vị trí mới trong cùng một nhiễm sắc thể hoặc một nhiễm sắc thể khác;
đảo ngược - sự quay một phần của nhiễm sắc thể thêm 1800 mà không tách khỏi cơ thể chính của nó;
xóa - mất bất kỳ vùng nhiễm sắc thể nào;
nhân đôi - sao chép một phần của nhiễm sắc thể, dẫn đến tăng số lượng bản sao của cùng một gen chứa trong tế bào.

Mỗi rối loạn này mang những dấu hiệu và thông tin chẩn đoán nhất định. Ví dụ, chuyển vị trí có thể cho thấy sự hiện diện của bệnh bạch cầu, u lympho hoặc sarcoma và sự hiện diện của các bản sao gen giúp chỉ định liệu pháp hiệu quả nhất.

Ưu điểm của bài kiểm tra FISH là gì?

Một ưu điểm khác của xét nghiệm FISH là nó có thể được sử dụng trên vật liệu gần đây được lấy từ một bệnh nhân. Để phân tích di truyền tế bào tiêu chuẩn, trước tiên cần phải nuôi cấy tế bào, nghĩa là cho phép các tế bào của bệnh nhân nhân lên trong phòng thí nghiệm. Quá trình này mất khoảng 2 tuần, và phải mất một tuần nữa để thực hiện một nghiên cứu định kỳ, trong khi kết quả của bài kiểm tra FISH sẽ nhận được chỉ sau vài ngày.

Sự phát triển ổn định của khoa học y tế đang dần dẫn đến việc giảm chi phí của xét nghiệm FISH và sự gia nhập rộng rãi hơn bao giờ hết vào thực hành hàng ngày của các bác sĩ chuyên khoa ung thư.

Ung thư vú là căn bệnh nguy hiểm mà theo thống kê nó chiếm vị trí đầu tiên trong các bệnh ung thư ở phụ nữ. Nguy cơ phát triển bệnh này tăng lên ở tất cả phụ nữ trên 40 tuổi và có thể do một số yếu tố khác. Trong số các nguyên nhân có khả năng gây ung thư vú bao gồm béo phì, khuynh hướng di truyền hoặc di truyền, bắt đầu có kinh sớm và kết thúc muộn, điều trị bằng nội tiết tố hoặc xạ trị.

Ngoài ra, nguy cơ mắc bệnh tăng lên ở những phụ nữ chưa có thai và những phụ nữ đã mắc bệnh ung thư. Đàn ông cũng có thể phát triển ung thư vú.

Các loại và phương pháp chẩn đoán

Bước đầu tiên để chẩn đoán ung thư vú là khám định kỳ bởi bác sĩ chuyên khoa vú. Phụ nữ trên 40 tuổi nên kiểm tra sức khỏe này ít nhất hai năm một lần. Bác sĩ thực hiện kiểm tra trực quan, sờ nắn và chụp X-quang tuyến vú. Các dấu hiệu trực quan về sự phát triển của bệnh có thể là:

thông tin chung

Chụp X-quang vú (chụp nhũ ảnh) cho phép bạn xác định sự hiện diện, kích thước và vị trí của khối u. Để cải thiện độ chính xác của kết quả thu được, công nghệ đưa chất cản quang vào được sử dụng. Nếu khối u đã được phát hiện, thì phương pháp đo khí cầu được sử dụng - loại bỏ dịch khối u và đưa không khí vào khoang. Nếu sự hiện diện của khối u không được xác định, thì phương pháp chụp ống dẫn sữa được sử dụng - đưa chất cản quang vào ống dẫn sữa.

Những phương pháp này cho phép bạn hình dung sự hiện diện của sự hình thành trong các mô của tuyến vú.

Nếu sự hiện diện của khối u cũng trở nên rõ ràng trên chụp nhũ ảnh, bệnh nhân sẽ được chuyển đến một loạt các biện pháp chẩn đoán:

Trên siêu âm, bác sĩ có thể phân biệt khối u với u nang và làm rõ bản địa hóa của sự hình thành. Sau đó, một mẫu mô được lấy từ nó để sinh thiết. Sinh thiết cho phép bạn tìm ra loại hình thành: lành tính hay ác tính, và cũng để xác định xem khối u có phụ thuộc vào hormone hay không. Thông tin này cho phép bác sĩ quyết định chiến lược điều trị, nhưng không phải lúc nào cũng có thể xác định được giai đoạn. Thông thường, ngay cả với tất cả các biện pháp chẩn đoán cần thiết, chỉ có thể xác định nó sau khi hoạt động.

Cơ chế nghiên cứu mô học

Sinh thiết mô được thực hiện cả trước và sau khi phẫu thuật. Thủ tục được thực hiện sau khi làm rõ nội địa hóa giáo dục.

Sinh thiết là quá trình loại bỏ một phần mô, và nghiên cứu của nó được gọi là "kiểm tra mô học" hoặc đơn giản là "mô học".

Một nhân viên y tế, sử dụng một cây kim đặc biệt, lấy một lượng nhỏ mô từ khối u hoặc khối u đã được lấy ra khỏi cơ thể bệnh nhân để gửi đi kiểm tra mô học. Sau đó, mảnh mô được nhuộm màu và xử lý theo cách đặc biệt để tăng độ tương phản và dễ nghiên cứu hơn. Lát cắt được bác sĩ chuyên khoa kiểm tra bằng kính hiển vi và đưa ra kết luận về chất lượng hình thành khối u. Phần lớn trong nghiên cứu này phụ thuộc vào sự chú ý và trình độ của trợ lý phòng thí nghiệm đưa ra kết luận.

Một nghiên cứu liên quan là hóa mô miễn dịch. Nói chung, nó cũng có thể được gọi là "mô học", bởi vì. phương pháp này dựa trên việc nghiên cứu các mô, nhưng hóa mô miễn dịch là một phương pháp phân tích tiên tiến hơn. Mô trong nghiên cứu này cũng được nhuộm bằng thuốc thử đặc biệt, không chỉ tăng cường độ tương phản trực quan, mà còn kết hợp (“nhãn”) với các kháng thể theo cách đặc biệt, giúp xác định thêm các đặc điểm của ung thư. Phản ứng trong trường hợp này xảy ra nhanh hơn nhiều, điều này cho phép bạn nhanh chóng nhận được kết quả phân tích.

Hóa mô miễn dịch không chỉ cho phép làm rõ loại ung thư mà còn lập kế hoạch chiến lược điều trị bệnh nhân dựa trên việc phát hiện mức độ nhạy cảm của mô khối u với các loại tác dụng điều trị khác nhau. Ngoài ra, việc tiến hành nghiên cứu này được tự động hóa hết mức có thể, giúp giảm thiểu khả năng xảy ra sai sót chẩn đoán do yếu tố con người.

Ngoài ra còn có các biện pháp chẩn đoán hiện đại để phát hiện sự hiện diện của khối u trong cơ thể: đây là phân tích quang phổ của máu, phân tích miễn dịch (sinh hóa), xét nghiệm FISH của mô khối u. Xét nghiệm máu di truyền cho phép bất kỳ phụ nữ nào xác minh sự hiện diện hay vắng mặt của các điều kiện tiên quyết đối với sự xuất hiện của ung thư vú. CT và MRI cho phép bạn xác định chính xác vị trí của khối u và theo dõi động lực phát triển của nó, đánh giá cấu trúc của khối u.

Làm thế nào để phát hiện ung thư bằng xét nghiệm máu?

Xét nghiệm máu chủ yếu do bác sĩ chỉ định sau khi siêu âm. Có những tình huống khi bệnh nhân tự ý hiến máu để lấy dấu hiệu cửa sổ hoặc phân tích gen để xác định xem liệu anh ta có khuynh hướng mắc bệnh ung thư vú hay không. Trong một số trường hợp, xét nghiệm máu tổng quát có thể là lý do để liên hệ với một trạm y tế ung thư (cùng với việc sờ thấy niêm phong hoặc các dấu hiệu trực quan của bệnh ung thư).

Phân tích sinh hóa

Máu làm nguyên liệu nghiên cứu cho phép thực hiện các biện pháp chẩn đoán sau:

Đồng thời, chỉ có hai phân tích đầu tiên có thể được gọi là các phương pháp chuyên biệt để xác định ung thư, phân tích thứ hai là một biện pháp phòng ngừa hơn là một biện pháp hoạt động. Hai xét nghiệm máu khác được thực hiện chủ yếu trước khi phẫu thuật để xác định tình trạng của cơ thể và mức độ của quá trình. Tuy nhiên, như đã đề cập, nếu cảm thấy có dấu hiệu ở ngực và đồng thời xét nghiệm máu tổng quát cho thấy hơn hai hệ số chẩn đoán âm tính, đây là lý do để liên hệ với bác sĩ chuyên khoa. Hệ số âm là chỉ số nằm ngoài định mức trong một số thông số nhất định của thành phần máu.

Xét nghiệm máu sinh hóa cho thấy sự hiện diện của các kháng thể đối với tế bào khối u. Các cơ quan như vậy được gọi là dấu ấn khối u. Số lượng và loại dấu ấn khối u phụ thuộc vào các chi tiết cụ thể (bản địa hóa) của khối u ung thư và giai đoạn phát triển của nó. Dấu hiệu khối u bao gồm:

Trong trường hợp ung thư vú, bác sĩ chăm sóc chủ yếu quan tâm đến sự hiện diện của chất chỉ điểm khối u CA-15-3, vì sự hiện diện của nó trong máu rõ ràng chỉ ra một bệnh ung thư vú. Việc giải mã kết quả mất trung bình một ngày. Phân tích sinh hóa được thực hiện nhiều lần trong suốt quá trình của bệnh. Máu cho anh ta được lấy từ tĩnh mạch vào buổi sáng khi bụng đói. Hai tuần trước khi thử nghiệm, bệnh nhân ngừng dùng tất cả các loại thuốc (để được kiểm tra với bác sĩ chăm sóc). Trước khi hiến máu 2 ngày không được uống rượu bia, đồ ăn nhiều dầu mỡ, đồ chiên rán.

Một giờ trước khi làm thủ thuật, bạn không được hút thuốc và điều đó là mong muốn để giảm bớt căng thẳng về cảm xúc. Máu để phân tích sinh hóa thường không được lấy ngay sau khi xạ trị và vật lý trị liệu.

Định nghĩa các yếu tố di truyền

Trước khi nói về xét nghiệm máu di truyền, cần nhấn mạnh sự khác biệt giữa các khái niệm "di truyền" và "di truyền". Yếu tố di truyền trong sự xuất hiện của bệnh ung thư là một khái niệm rộng hơn, hàm ý không chỉ sự hiện diện của người thân mắc bệnh ung thư vú, mà còn là một đột biến gen cụ thể, do đó nguy cơ mắc bệnh này tăng lên.

Yếu tố di truyền ám chỉ nguy cơ tiềm ẩn ung thư vú dựa trên tiền sử gia đình. Đồng thời, không chỉ phụ nữ mà nam giới cũng có thể mang gen đột biến nhưng người mang gen bệnh không nhất thiết sẽ bị bệnh.

Bất kỳ phụ nữ nào cũng có thể trải qua một cuộc phân tích gen. Điều này đặc biệt được khuyến khích cho những người có họ hàng trực tiếp bị ung thư vú. Trước khi làm thủ tục hiến máu để phân tích, một chuyên gia trong lĩnh vực di truyền học nên nói chuyện với bệnh nhân, người sẽ giải thích các sắc thái của việc giải mã kết quả. Bệnh nhân không cần chuẩn bị gì đặc biệt trước khi hiến máu.

Nếu bạn nhận được kết quả dương tính với đột biến gen BRCA, nhưng không có các triệu chứng đáng báo động khác, bạn không nên hoảng sợ. Đối với những phụ nữ có đột biến trong các gen này, có thể khuyến cáo tự khám và kiểm tra sức khỏe thường xuyên như một biện pháp phòng ngừa. Sau 40 năm, thật hợp lý khi nghĩ đến việc cắt bỏ buồng trứng và vú; những phụ nữ trẻ hơn chưa có kế hoạch sinh con trong tương lai đôi khi được khuyến nghị sử dụng các biện pháp tránh thai. Quyết định về các biện pháp này hoàn toàn nằm ở vai người phụ nữ và cần có sự tiếp cận và tư vấn chu đáo của các bác sĩ.

Các phương pháp chẩn đoán mới nhất

Một phân tích quang phổ của máu cho thấy sự hiện diện của khối u trong cơ thể với xác suất lên đến 93%. Đây là một phương pháp chẩn đoán tương đối rẻ dựa trên việc chiếu tia hồng ngoại vào huyết thanh máu và phân tích thành phần phân tử của nó.

Kết luận về phân tích quang phổ của máu được đưa ra theo nguyên tắc "hiện diện-không có" và nhằm xác định hầu hết các loại khối u ác tính. Ngoài ra, nghiên cứu này có thể xác định giai đoạn phát triển của ung thư vú. Việc giải thích kết quả diễn ra trong phòng thí nghiệm và không cần thêm ý kiến ​​của bác sĩ.

Để hiến máu phân tích quang phổ, cần phải hoàn thành việc uống thuốc trước khi làm thủ thuật 2 tháng. Kể từ thời điểm chụp X-quang hoặc tiếp xúc khác, cũng như hóa trị, ít nhất 3 tháng phải trôi qua. Ngoài ra, người phụ nữ không được mang thai hoặc đang hành kinh tại thời điểm lấy mẫu máu. Việc lấy mẫu máu diễn ra khi bụng đói vào buổi sáng. Quá trình phân tích quang phổ của máu mất trung bình 12 ngày làm việc.

Một trong những phương pháp mới nhất để chẩn đoán ung thư là cái gọi là "xét nghiệm cá" (FISH, lai huỳnh quang). Hiệu quả của nó vẫn còn đang được thảo luận, câu hỏi chính về tính khả thi của nó là quy trình nghiên cứu tốn kém. Bản chất của phương pháp này bao gồm việc gắn nhãn các mảnh tế bào với thành phần huỳnh quang và kiểm tra thêm tế bào bằng kính hiển vi. Dựa trên phần nào của vật liệu di truyền mà các đoạn được đánh dấu có liên quan đến, có thể hiểu được liệu bệnh nhân có khuynh hướng mắc bệnh ung thư hay không và phương pháp điều trị nào sẽ phù hợp trong một trường hợp cụ thể.

Thử nghiệm FISH không yêu cầu các tế bào trưởng thành hoàn toàn, do đó, phân tích này nhanh hơn nhiều so với các thử nghiệm khác trong phòng thí nghiệm. Ngoài ra, phương pháp FISH cho phép bạn quan sát rõ ràng hơn tổn thương di truyền, điều này không thể thực hiện được với các loại phân tích khác. Xét nghiệm FISH thường được sử dụng đặc biệt để phát hiện ung thư vú, nhưng nó cũng có tác dụng phát hiện một số loại ung thư khác.

Những nhược điểm của xét nghiệm FISH bao gồm, ngoài chi phí cao, nó không thể hoạt động trên một số bộ phận của nhiễm sắc thể do tính đặc hiệu của các dấu hiệu. Ngoài ra, xét nghiệm FISH bỏ qua một số loại đột biến và phá vỡ mã di truyền, đây có thể là một thiếu sót quan trọng trong chẩn đoán. Các nghiên cứu so sánh FISH với xét nghiệm IHC rẻ hơn không cho thấy lợi thế đáng kể trong việc xác định tính nhạy cảm với Herceptin của tế bào ung thư. Tuy nhiên, xét nghiệm FISH hiện là phương pháp nhanh nhất trong số các phương pháp chẩn đoán ung thư có độ chính xác cao.

Kỹ thuật FISH, lai huỳnh quang tại chỗ, được phát triển vào giữa những năm 1980 và được sử dụng để phát hiện sự hiện diện hoặc không có của chuỗi DNA cụ thể trên nhiễm sắc thể, cũng như vệ tinh DNA alpha nằm trên tâm động của nhiễm sắc thể số 6, CEP6 (6p11 .1-q11. Một).

Điều này đã tạo ra một sự thay đổi đáng kể trong việc chẩn đoán các bệnh ung thư có nguồn gốc tế bào hắc tố do việc phát hiện các kháng nguyên khối u. Dựa trên nền tảng của bệnh ác tính, một đột biến ở ba kháng nguyên được xác định: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) và CMM1 (1p). Về vấn đề này, khả năng chẩn đoán phân biệt khách quan, dựa trên việc xác định các đặc điểm di truyền của các khối u da tế bào hắc tố, có tầm quan trọng lớn trong việc chẩn đoán sớm ung thư hắc tố và các tiền chất của nó trong nhân với một tập hợp bình thường của các gen được nghiên cứu và nhiễm sắc thể số 6, hai gen RREB1 được nhuộm màu đỏ, hai gen MYB được quan sát thấy màu vàng, hai gen CCND1 màu xanh lục và hai tâm động của nhiễm sắc thể số 6 màu xanh lam. Đối với mục đích chẩn đoán, các mẫu huỳnh quang được sử dụng.

Đánh giá kết quả của phản ứng: đếm số lượng tín hiệu đỏ, vàng, lục và lam trong 30 hạt nhân của mỗi mẫu, xác định 4 thông số của các biến thể rối loạn di truyền khác nhau, trong đó mẫu phù hợp về mặt di truyền với u ác tính. Ví dụ, một mẫu tương ứng với u ác tính nếu số lượng trung bình của gen CCND1 trên mỗi nhân là ≥ 2,5. Số lượng bản sao của các gen khác được ước tính theo nguyên tắc tương tự. Thuốc được coi là dương tính với FISH nếu đáp ứng ít nhất một trong bốn điều kiện. Các mẫu có tất cả bốn tham số nằm dưới điểm ngắt được coi là âm tính FISH.

Việc xác định trình tự DNA cụ thể trên nhiễm sắc thể được thực hiện trên các phần của bệnh phẩm sinh thiết hoặc vật liệu phẫu thuật. Trong thực tế, phản ứng FISH như sau: vật liệu thử nghiệm có chứa DNA trong nhân của tế bào hắc tố được xử lý để phá hủy một phần phân tử của nó nhằm phá vỡ cấu trúc sợi đôi và do đó tạo điều kiện tiếp cận vùng gen mong muốn. Các mẫu được phân loại theo vị trí gắn vào phân tử DNA. Vật liệu cho phản ứng FISH trong thực hành lâm sàng là các phần mô parafin, vết bôi và bản in.

Phản ứng FISH cho phép bạn tìm những thay đổi đã xảy ra trong phân tử DNA do tăng số lượng bản sao của gen, mất gen, thay đổi số lượng nhiễm sắc thể và những thay đổi về chất - sự di chuyển của gen. các locus cả trong cùng một nhiễm sắc thể và giữa hai nhiễm sắc thể.

Để xử lý dữ liệu thu được bằng phản ứng FISH và nghiên cứu mối quan hệ giữa số lượng bản sao của các gen của ba nhóm được nghiên cứu, hệ số tương quan Spearman được sử dụng.

Ung thư tế bào hắc tố được đặc trưng bởi sự gia tăng số lượng bản sao so với khối u tân sinh và khối u loạn sản.

Nevus đơn giản, so với nevus loạn sản, có ít bất thường về số lượng bản sao hơn (tức là nhiều bản sao bình thường hơn).

Để xây dựng các quy tắc quyết định nhằm dự đoán liệu một mẫu có thuộc một lớp cụ thể hay không (chẩn đoán phân biệt giữa nevi đơn giản và loạn sản), bộ máy toán học của “cây quyết định” được sử dụng. Cách tiếp cận này đã được chứng minh trong thực tế và kết quả của việc áp dụng phương pháp này (không giống như nhiều phương pháp khác, chẳng hạn như mạng nơron) có thể được giải thích rõ ràng để xây dựng các quy tắc quyết định để phân biệt khối u ác tính đơn giản, loạn sản và u ác tính. Dữ liệu ban đầu trong tất cả các trường hợp là số bản sao của bốn gen.

Nhiệm vụ xây dựng quy tắc quyết định cho chẩn đoán vi phân được chia thành nhiều giai đoạn. Ở giai đoạn đầu, u ác tính và u ác tính được phân biệt, không tính đến loại u. Ở giai đoạn tiếp theo, một quy tắc quyết định được xây dựng để tách các nevi đơn giản và không linh hoạt. Cuối cùng, ở giai đoạn cuối, có thể xây dựng “cây quyết định” để xác định mức độ loạn sản nevus loạn sản.

Việc phân chia nhiệm vụ phân loại nevi thành các nhiệm vụ con như vậy giúp cho việc đạt được độ chính xác cao của các dự đoán ở mỗi giai đoạn. Dữ liệu đầu vào để xây dựng cây quyết định là dữ liệu về số lượng bản sao của bốn gen cho bệnh nhân được chẩn đoán mắc ung thư tế bào hắc tố và bệnh nhân được chẩn đoán mắc bệnh u ác tính không (bệnh nhân có các loại u khác nhau - đơn giản và loạn sản). Đối với mỗi bệnh nhân, số lượng bản sao gen có sẵn cho 30 tế bào.

Do đó, việc chia nhiệm vụ dự đoán chẩn đoán thành nhiều giai đoạn cho phép chúng tôi xây dựng các quy tắc quyết định có độ chính xác cao không chỉ để phân biệt giữa u ác tính và u nevi, mà còn để xác định loại u ác tính và dự đoán mức độ loạn sản đối với khối u loạn sản. Các "cây quyết định" được xây dựng là một cách rõ ràng để dự đoán chẩn đoán dựa trên số lượng bản sao gen và có thể dễ dàng sử dụng trong thực hành lâm sàng để phân biệt các khối u tế bào hắc tố lành tính, tiền ác tính và ác tính. Phương pháp chẩn đoán phân biệt bổ sung được đề xuất đặc biệt quan trọng trong việc loại bỏ khối u sắc tố bẩm sinh khổng lồ và khối u loạn sản ở bệnh nhi, vì tỷ lệ sai sót chẩn đoán cao được ghi nhận khi những bệnh nhân này đến khám tại các cơ sở y tế. Kết quả của việc sử dụng phương pháp được mô tả là có hiệu quả cao, nên sử dụng nó trong chẩn đoán các khối u sắc tố da, đặc biệt là ở những bệnh nhân có hội chứng FAMM.

Các phương pháp chẩn đoán trước sinh xâm lấn không chỉ cho phép nhìn vào tương lai và dự đoán một cách đáng tin cậy liệu thai nhi có còn mắc các bệnh liên quan đến dị tật trong tử cung hay không mà còn tìm ra bản chất và nguyên nhân của các bệnh lý bẩm sinh.

Tuy nhiên, bất kỳ thông tin nào cũng chỉ có giá trị khi nó kịp thời. Khi nói đến tình trạng phát triển của thai nhi, tốc độ lấy kết quả xét nghiệm có ý nghĩa sống còn.

Do đó, phương pháp FISH, giúp đánh giá sự hiện diện của các dị tật phát triển phổ biến nhất trong phôi thai càng sớm càng tốt, đang có nhu cầu lớn trong chẩn đoán di truyền.

FISH là tên viết tắt giải mã thực chất của công nghệ phát hiện bất thường nhiễm sắc thể - lai huỳnh quang tại chỗ - lai huỳnh quang trong môi trường “gia đình”.

Kỹ thuật này, được đề xuất vào cuối những năm 70 của thế kỷ trước bởi J. Goll và M.-L. Pardew dựa trên khả năng khôi phục trình tự của các đoạn axit nucleic (DNA hoặc RNA) sau khi chúng bị biến tính.

Các tác giả đã phát triển một phương pháp cho phép, sử dụng lai tại chỗ các mẫu dò DNA được đánh dấu được tạo nhân tạo (mẫu dò) và vật liệu di truyền tế bào được lấy để phân tích, để xác định các sai lệch về số lượng và chất lượng của các nhiễm sắc thể quan tâm.

Vào cuối thế kỷ trước, sau khi sử dụng thành công thuốc nhuộm huỳnh quang để nhuộm mẫu dò DNA, phương pháp FISH đã có tên gọi như vậy và kể từ đó đã được cải tiến mạnh mẽ và đa dạng.

Các phương pháp phân tích FISH hiện đại cố gắng cung cấp khả năng thu được thông tin đầy đủ nhất để phân tích vật liệu di truyền đã thu thập được trong một quy trình lai đơn.

Thực tế là chỉ có một số nhiễm sắc thể giới hạn của cùng một vật liệu di truyền tế bào có thể được đánh giá một lần sau khi lai. Khả năng tái lai các chuỗi DNA giảm dần theo thời gian.

Vì vậy, hiện nay trong chẩn đoán di truyền, phương pháp lai tại chỗ thường được sử dụng nhiều nhất để trả lời nhanh các câu hỏi về thể dị bội phổ biến nhất đối với các nhiễm sắc thể 21, 13, 18, cũng như nhiễm sắc thể giới tính X, Y.

Bất kỳ mẫu mô hoặc tế bào nào đều thích hợp để phân tích FISH.

Trong chẩn đoán trước khi sinh, đây có thể là mẫu máu, xuất tinh hoặc.

Tốc độ thu được kết quả được đảm bảo bởi thực tế là các tế bào thu được từ vật liệu được lấy để phân tích không cần phải nuôi cấy trong môi trường dinh dưỡng, đạt được sự phân chia của chúng đến số lượng mong muốn, như trong phương pháp karyotyping cổ điển.

Nguyên liệu đã chọn được chuẩn bị đặc biệt để thu được huyền phù tế bào tinh khiết đậm đặc. Tiếp theo, quá trình biến tính của đầu dò DNA và DNA bản địa của mẫu thử nghiệm về trạng thái sợi đơn và quá trình lai được thực hiện, trong đó các đầu dò DNA đã nhuộm màu được ủ với DNA của mẫu thử.

Do đó, các nhiễm sắc thể mong muốn (nhuộm màu) trong tế bào được hình dung, số lượng của chúng, cấu trúc của cấu trúc di truyền, v.v. được ước tính. Thị kính của một kính hiển vi huỳnh quang đặc biệt cho phép bạn xem xét các chuỗi DNA phát sáng.

Hiện nay, phương pháp FISH được sử dụng rộng rãi cho mục đích chẩn đoán để phát hiện các bệnh di truyền, sai lệch nhiễm sắc thể trong y học sinh sản, ung thư học, huyết học, đo liều lượng sinh học, v.v.

FISH-chẩn đoán thai nhi được sử dụng như thế nào?

Trong lĩnh vực y học sinh sản, phương pháp FISH, là một trong những phương pháp chẩn đoán di truyền tế bào phân tử, được sử dụng ở tất cả các giai đoạn.

• cặp đôi.

Để xác định karyotype của cha mẹ tương lai, nó được thực hiện một lần, vì bộ gen của con người không thay đổi trong suốt cuộc đời.

Karyotyping của một cặp vợ chồng trước khi thụ thai sẽ giúp xác định xem cha mẹ có phải là người mang mầm bệnh di truyền hay không, bao gồm cả những bệnh ẩn. Cũng như tình trạng chung của bộ gen của các ông bố bà mẹ tương lai, có thể ảnh hưởng đến sự thành công của việc thụ thai và mang thai.

Trong trường hợp này, chẩn đoán FISH thường hoạt động như một cuộc kiểm tra bổ sung cho karyotyping cổ điển, khi các bệnh lý nhiễm sắc thể được phát hiện trong vật liệu xét nghiệm (máu tĩnh mạch của bố mẹ), nếu nghi ngờ bệnh khảm.

Một cuộc kiểm tra bổ sung bằng phương pháp FISH sẽ xác nhận hoặc bác bỏ một cách đáng tin cậy sự hiện diện của một dị thường nghi ngờ trong tế bào của cá bố mẹ tương lai.

• Nghiên cứu xuất tinh.

Nó được chỉ định cho những khó khăn trong sinh sản ở một cặp vợ chồng do “yếu tố nam giới”. Phân tích tinh trùng theo phương pháp FISH sẽ cho phép bạn đánh giá mức độ bất thường của tinh trùng về bộ nhiễm sắc thể, cũng như xác định xem một người đàn ông có phải là người mang bệnh di truyền liên quan đến giới tính hay không.

Nếu sau này hai vợ chồng sử dụng phương pháp thụ thai thông qua IVF, phân tích FISH về xuất tinh sẽ cho phép bạn chọn tinh trùng chất lượng cao nhất để thụ tinh với trứng.

• Với IVF.

Để chẩn đoán di truyền trước khi cấy ghép (PGD). Theo kết quả của các nghiên cứu về karyotype của cha mẹ, các sai lệch về nhiễm sắc thể và di truyền có thể được chuyển sang phôi được xác định.

Nhờ khả năng chẩn đoán của FISH, việc nghiên cứu sức khỏe di truyền của các phôi kết quả có thể được thực hiện trong vài giờ trước khi chuyển vào buồng tử cung để đảm bảo sự khởi đầu của thai kỳ với một thai nhi khỏe mạnh đã biết.

Ngoài ra, khả năng của PGD cho phép xác định giới tính của phôi, và do đó, "đặt hàng" giới tính của thai nhi, nếu cần.

• Trong thời kỳ mang thai.

Trong chẩn đoán trước sinh: phân tích tế bào thai nhi thu được bằng sinh thiết nhung mao màng đệm, chọc dò màng ối hoặc chọc dò tủy sống bằng phương pháp FISH, các trung tâm y tế thường cung cấp thêm nghiên cứu di truyền cổ điển của tế bào thai nhi (karyotyping).

Phương pháp này là không thể thiếu khi cần nhanh chóng có được câu trả lời về sự hiện diện của các dị tật nhiễm sắc thể thường gặp nhất ở thai nhi: thể tam nhiễm trên nhiễm sắc thể 21, 18, 13, dị bội trên nhiễm sắc thể X và Y, đôi khi cũng có thể dị bội trên nhiễm sắc thể 14 (hoặc 17), 15, 16.

Ưu điểm của phân tích FISH

Thực hiện phân tích gen bằng phương pháp FISH, mặc dù ngày nay nó vẫn là một phương pháp bổ trợ để chẩn đoán các bệnh lý nhiễm sắc thể, tuy nhiên, hiệu quả của việc thực hiện nó được xác định bởi những ưu điểm không thể phủ nhận:

• tốc độ thu được kết quả liên quan đến các nhiễm sắc thể được kiểm tra - trong vòng vài giờ - không quá 72.

Điều này có thể quan trọng nếu số phận của thai phụ thuộc vào chẩn đoán của các nhà di truyền học;

• độ nhạy và độ tin cậy cao của phương pháp FISH - có thể phân tích thành công trên một lượng nhỏ vật liệu sinh học - chỉ cần một ô là đủ, sai số của kết quả không quá 0,5%.

Điều này có thể quan trọng khi số lượng tế bào trong mẫu ban đầu bị hạn chế, ví dụ, khi sự phân chia của chúng kém.

• Khả năng chẩn đoán FISH ở bất kỳ giai đoạn nào của thai kỳ (từ tuần thứ 7) và trên bất kỳ mẫu sinh học nào: mảnh màng đệm, nước ối, máu thai nhi, v.v.

Tôi có thể nhận chẩn đoán FISH ở đâu?

Tại Moscow, phương pháp FISH để chẩn đoán trước sinh về các bất thường nhiễm sắc thể của thai nhi được sử dụng tại các trung tâm y tế sau:

Theo quy định, các phòng khám cung cấp dịch vụ chẩn đoán FISH như một phần của quá trình tạo mẫu thai nhi hoàn chỉnh bằng can thiệp xâm lấn với một khoản phí bổ sung. Và, như một quy luật, các bậc cha mẹ tương lai đồng ý trả thêm tiền, bởi vì nhờ phương pháp FISH, trong một vài ngày, bạn có thể tìm ra điều quan trọng nhất về con mình.

Không thể coi thường ung thư vú. Nó hoàn toàn có thể ảnh hưởng đến tất cả mọi người - già và trẻ, phụ nữ và nam giới. Việc điều trị vô cùng phức tạp, tỷ lệ tử vong cao và sự gia tăng của bệnh tật là lý do khiến y học ngày càng chú ý đến vấn đề này.

Cho đến nay, không có phương pháp điều trị nào đảm bảo kết quả khỏi bệnh hoàn toàn khả quan 100%. Các phương pháp hiện tại tốn nhiều thời gian, tốn kém và có thể gây ra những thiệt hại lớn cho cơ thể.

Đây là một trong những căn bệnh mà chúng ta có thể nói rằng cách điều trị tốt nhất là loại trừ các yếu tố nguy cơ và chẩn đoán kịp thời.

khuynh hướng ung thư vú

Mặc dù thực tế là bệnh ung thư được mô tả lần đầu tiên vào thế kỷ 15 trước Công nguyên và các nhà khoa học có một lượng thông tin khổng lồ, nhưng vẫn chưa đủ để mô tả đầy đủ căn nguyên của bệnh ung thư vú.

Các yếu tố môi trường ảnh hưởng đến sự khởi phát hoặc phát triển của ung thư vẫn chưa được tìm thấy với độ tin cậy đầy đủ. Các nghiên cứu cá nhân chỉ ra một chất gây ung thư cụ thể không nhận được sự công nhận đầy đủ từ toàn bộ cộng đồng y tế. Tuy nhiên, có một số mối quan hệ giữa ung thư vú và những điều sau đây:

Một trong những yếu tố quan trọng nhất được liệt kê ở trên là yếu tố tuổi tác: theo năm tháng, khả năng phát triển ung thư vú tăng lên theo thứ tự mức độ. Nhìn chung, sự phức tạp của vấn đề căn nguyên ung thư vú là do bản chất di truyền của nó. Không biết tại sao đột ngột xảy ra hỏng hóc và các mô vú bắt đầu phân chia không kiểm soát, ảnh hưởng đến các mô lân cận và dẫn đến di căn khắp cơ thể.

Nhưng các nhà khoa học đồng ý một điều: cuộc sống hiện đại có lợi cho bệnh ung thư hơn trước rất nhiều.

Vì vậy, không thể bỏ qua liều lượng bức xạ điện từ cao, sinh thái kém, hàm lượng ôxy thấp ở các thành phố, lười vận động, căng thẳng… Không thể bỏ qua tuổi thọ đáng kể, vì ung thư là căn bệnh thường xảy ra ở tuổi trưởng thành.

Các bài kiểm tra bắt buộc

Khả năng kết quả dương tính của bệnh ung thư liên quan trực tiếp đến thời điểm bắt đầu điều trị, vì vậy thái độ chẩn đoán cần được coi trọng nhất.

Vì các phương pháp chẩn đoán được yêu cầu:

• tự kiểm tra hàng tháng (kiểm tra sờ nắn);
• kiểm tra sức khỏe với bác sĩ mỗi quý một lần;
• Siêu âm sáu tháng một lần;
• MRI hàng năm.

Chụp X quang tuyến vú không được khuyến khích trước 30 tuổi, vì tốt nhất nên tránh tiếp xúc với bức xạ khi còn trẻ. Nếu nghi ngờ mắc bệnh ung thư vú, bạn sẽ cần phải trải qua các xét nghiệm sau:

Phương pháp nghiên cứu FISH

Nghiên cứu FISH (phân tích FISH) là một phương pháp di truyền tế bào được sử dụng để nghiên cứu protein màng HER2 (Human Estrogen Receptor2). Khi tiến hành nghiên cứu FISH, các đầu dò DNA được đánh dấu bằng thuốc nhuộm huỳnh quang được sử dụng. Các đầu dò này được đưa vào các vùng DNA cần thiết và có thể định lượng mức độ khuếch đại HER2. Khi nghiên cứu được tiến hành theo thời gian và các gen tiếp tục phân chia, có thể ước tính tỷ lệ giữa số bản sao của gen HER2 với số bản sao của vùng phân chia bình thường. Nếu nó lớn hơn hoặc bằng 2, kết quả được coi là HER2 dương tính.

Phân tích FISH đóng một vai trò quan trọng trong dự đoán ung thư và lựa chọn điều trị. Do đó, sự khuếch đại hoặc tăng hoạt động của protein này xảy ra trong 30% các trường hợp ung thư và cần các phương pháp điều trị đặc biệt nhằm mục đích ức chế chức năng của nó. Thông thường, HER2 kiểm soát sự phát triển, phân chia và tự sửa chữa của các tế bào. Trong trường hợp ung thư, protein này tạo ra quá nhiều thụ thể màng và ra lệnh cho các tế bào phân chia không kiểm soát được. Đây là cách tế bào trở thành ung thư.

Nếu xét nghiệm FISH là dương tính, việc điều trị sẽ được áp dụng để ngăn chặn HER2. Loại thuốc chính hiện nay là Herceptin. Nếu xét nghiệm này không được thực hiện hoặc kết quả của nó bị bỏ qua, việc lựa chọn phương pháp điều trị sẽ sai lầm và ung thư sẽ chuyển sang giai đoạn cuối. Ngoài ra, những loại ung thư như vậy thường mạnh hơn những loại ung thư âm tính với HER2.

Cùng với phân tích FISH, một phân tích hóa mô miễn dịch được thực hiện. Đây cũng là một phương pháp gen để nghiên cứu protein HER2, nhưng trong trường hợp phân tích hóa mô miễn dịch, lượng protein HER2 được phát hiện không phải trong tế bào, mà là trong một mẫu cụ thể được lấy.

Nó khác với phương pháp cá về chi phí, nhưng điều này dẫn đến kết quả ít thông tin hơn, phụ thuộc vào nhà nghiên cứu, phòng thí nghiệm và tiêu chí được sử dụng. Lượng protein HER2 được xác định bằng màu sắc của mẫu thử và được cho điểm trên thang điểm từ 0 đến 3. Hai phương pháp này kết hợp với nhau là tiêu chuẩn vàng để kiểm tra tình trạng HER2 của bệnh nhân.

Vì vậy, mặc dù hình ảnh của nó, ung thư vú vẫn có thể điều trị thành công. Trong kho vũ khí của các bác sĩ ung thư - tất cả những thành tựu tiên tiến của y học. Tất cả những khoản tiền này khá dễ tiếp cận đối với những công dân bình thường nhất.

Điều quan trọng trong kết quả thành công của bệnh là việc cung cấp các xét nghiệm ung thư vú kịp thời, lựa chọn phương pháp điều trị chính xác và bắt đầu sớm. Đừng tuyệt vọng nếu không có kết quả, vì nền tảng cảm xúc tích cực cũng tác động không nhỏ đến diễn biến của bệnh.