FISH diferensial diaqnostika üçün tədqiqatdır. Floresan in situ hibridizasiyası Ən son diaqnostik üsullar

Hüceyrənin bədxassəli degenerasiyası onun genomunda baş verən dəyişikliklərdən qaynaqlandığı üçün bu üsul bu gün xərçəng şişlərinin müəyyən növlərinin diaqnostikasında istifadə olunur. Müvafiq olaraq, genlərdə xarakterik anormallıqlar aşkar edərək, bu hüceyrəni yüksək dəqiqliklə xərçəngli kimi təsnif etmək mümkündür. Bundan əlavə, FISH testi artıq müəyyən edilmiş diaqnozu təsdiqləmək, həmçinin döş xərçəngi üçün kemoterapi aparmaq və xəstəliyin proqnozunu aydınlaşdırmaq üçün xüsusi kimyaterapiya dərmanlarının istifadəsinin mümkünlüyü barədə əlavə məlumat əldə etmək üçün istifadə olunur.

FISH testinin istifadəsinə yaxşı bir nümunə, döş xərçəngi olan xəstələrdə istifadə edildiyi zamandır. Bu texnika ilə biopsiya toxuması HER-2 adlı genin nüsxələri üçün araşdırılır. Əgər bu gen varsa, bu, hüceyrələrin səthində çoxlu sayda HER2 reseptorunun olması deməkdir. Onlar şiş elementlərinin inkişafını və yayılmasını stimullaşdıran siqnallara həssasdırlar. Bu vəziyyətdə trastuzumabın effektiv istifadəsi üçün fürsət açılır - bu dərman HER2 reseptorlarının fəaliyyətini bloklayır və buna görə də şiş böyüməsini maneə törədir.

FISH testi necə aparılır?

Xromosomların strukturunda bu sapmalar bir neçə növdə olur:
translokasiya - xromosom materialının bir hissəsinin eyni və ya digər xromosom daxilində yeni mövqeyə köçürülməsi;
inversiya – xromosomun bir hissəsinin əsas gövdəsindən ayrılmadan 1800-ə qədər fırlanması;
silinmə - hər hansı bir xromosom bölgəsinin itirilməsi;
duplikasiya, bir hüceyrədə olan eyni genin nüsxələrinin sayının artmasına səbəb olan bir xromosomun bir hissəsinin kopyalanmasıdır.

Bu pozğunluqların hər biri müəyyən diaqnostik əlamətlər və məlumatlar daşıyır. Məsələn, translokasiyalar lösemi, lenfoma və ya sarkomaların mövcudluğunu göstərə bilər və genlərin təkrarlanması ən təsirli terapiyanın təyin edilməsinə kömək edir.

FISH testinin üstünlüyü nədir?

FISH testinin başqa bir üstünlüyü ondan ibarətdir ki, bu, xəstədən bu yaxınlarda alınan materialda istifadə oluna bilər. Standart sitogenetik analiz üçün əvvəlcə hüceyrə mədəniyyətini yetişdirmək, yəni xəstənin hüceyrələrinin laboratoriyada çoxalmasına icazə vermək lazımdır. Bu proses təxminən 2 həftə çəkir və daha bir həftə müntəzəm testin keçirilməsinə sərf olunur, FISH testinin nəticəsi isə bir neçə gün ərzində əldə ediləcək.

Tibb elminin davamlı inkişafı tədricən FISH testinin qiymətinin azalmasına və onun onkoloqların gündəlik təcrübəsinə getdikcə daha geniş şəkildə daxil edilməsinə səbəb olur.

Döş xərçəngi təhlükəli bir xəstəlikdir və statistik olaraq qadınlarda xərçəng xəstəlikləri arasında birinci yerdədir. Bu xəstəliyin inkişaf riski 40 yaşdan yuxarı bütün qadınlarda artır və bir sıra digər amillərlə bağlı ola bilər. Döş xərçənginin ən çox ehtimal olunan səbəbləri arasında piylənmə, genetik və ya irsi meyl, menstruasiyanın erkən başlaması və gec başa çatması, hormonal və ya radiasiya terapiyası daxildir.

Bundan əlavə, artıq xərçəngə yoluxmuş qadınlarda və dul qadınlarda xəstələnmə riski artır. Kişilər də döş xərçənginə tutula bilər.

Diaqnozun növləri və üsulları

Döş xərçəngi diaqnozunun ilk mərhələsi bir mammoloqun müntəzəm müayinəsidir. 40 yaşdan yuxarı qadınlar ən azı iki ildə bir dəfə belə müayinələrdən keçməlidirlər. Həkim süd vəzilərinin vizual müayinəsini, palpasiyasını və mamoqrafiyasını həyata keçirir. Xəstəliyin inkişafının vizual əlamətləri ola bilər:

ümumi məlumat

Döşün rentgenoqrafiyası (mamografi) şişin varlığını, ölçüsünü və yerini müəyyən etməyə imkan verir. Alınan nəticələrin dəqiqliyini artırmaq üçün kontrast agentin tətbiqi texnologiyasından istifadə olunur. Bir şiş artıq aşkar edilmişdirsə, o zaman pnevmosistoqrafiya üsulu istifadə olunur - şiş mayesinin çıxarılması və boşluğa hava daxil edilməsi. Bir şişin olması göstərilmirsə, o zaman dukoqrafiya istifadə olunur - süd kanallarına kontrast agentin daxil edilməsi.

Bu üsullar döş toxumasında formalaşmaların varlığını vizuallaşdırmağa imkan verir.

Bir şişin olması mamoqrafiyada da aydın olarsa, xəstəyə bir sıra diaqnostik tədbirlər üçün göndəriş verilir:

Bir ultrasəs istifadə edərək, həkim bir şişi kistdən ayırd edə və formalaşmanın yerini aydınlaşdıra bilər. Bundan sonra biopsiya üçün ondan toxuma nümunəsi götürülür. Biyopsiya, şişin növünü öyrənməyə imkan verir: yaxşı və ya bədxassəli, həmçinin şişin hormondan asılı olub olmadığını müəyyən edir. Bu məlumat həkimə müalicə strategiyası barədə qərar verməyə imkan verir, lakin həmişə mərhələni müəyyən etməyə imkan vermir. Tez-tez, bütün lazımi diaqnostik tədbirlərlə belə, yalnız əməliyyatdan sonra müəyyən edilə bilər.

Histoloji tədqiqatların mexanizmi

Həm əməliyyatdan əvvəl, həm də əməliyyatdan sonra toxuma biopsiyası aparılır. Prosedura formalaşmanın lokalizasiyası dəqiqləşdirildikdən sonra həyata keçirilir.

Biopsiya bir toxuma parçasının çıxarılması prosesidir və onun öyrənilməsi "histoloji müayinə" və ya sadəcə "histologiya" adlanır.

Tibb işçisi şişdən az miqdarda toxuma çıxarmaq üçün xüsusi iynədən istifadə edir və ya xəstənin bədənindən artıq çıxarılan şiş histoloji müayinəyə göndərilir. Sonra kontrastı artırmaq və öyrənilməsini asanlaşdırmaq üçün toxuma parçası xüsusi olaraq boyanır və işlənir. Mütəxəssis mikroskopdan istifadə edərək bölməni araşdırır və şiş meydana gəlməsinin keyfiyyətinə dair rəy verir. Bu işdə çox şey nəticə verən laboratoriya texnikinin diqqətliliyindən və ixtisasından asılıdır.

Bənzər bir araşdırma immunohistokimyadır. Ümumiyyətlə, onu "histologiya" da adlandırmaq olar, çünki metod toxumaların öyrənilməsinə əsaslanır, lakin immunohistokimya daha təkmil analiz üsuludur. Bu tədqiqatda toxuma həm də xüsusi reagentlərlə boyanır ki, bu da yalnız vizual kontrastı artırmır, həm də antikorlarla (“etiket”) xüsusi bir şəkildə birləşdirir ki, bu da şişin daha çox xüsusiyyətlərini aydınlaşdırmağa imkan verir. Bu vəziyyətdə reaksiya daha sürətli baş verir, bu da analiz nəticələrini tez əldə etməyə imkan verir.

İmmunohistokimya təkcə şişin növünü aydınlaşdırmağa deyil, həm də şiş toxumasının müxtəlif növ terapevtik təsirlərə həssaslığını müəyyən etməyə əsaslanan xəstənin müalicəsi strategiyasını planlaşdırmağa imkan verir. Bundan əlavə, bu tədqiqat mümkün qədər avtomatlaşdırılmışdır ki, bu da insan faktoru səbəbindən diaqnostik səhv ehtimalını minimuma endirməyə imkan verir.

Bədəndə bir şişin varlığını aşkar etməyə imkan verən müasir diaqnostik tədbirlər də var: bu, spektral qan testi, immunoloji (biokimyəvi) analiz, şiş toxumasının FISH testidir. Genetik qan testi istənilən qadına döş xərçəngi üçün ilkin şərtlərin olub-olmadığını yoxlamağa imkan verir. CT və MRT şişin strukturunu qiymətləndirərək şişin yerini dəqiq müəyyən etməyə və onun inkişaf dinamikasına nəzarət etməyə imkan verir.

Qan testindən istifadə edərək xərçəngi necə aşkar etmək olar?

Qan testi adətən ultrasəs müayinəsindən sonra həkim tərəfindən təyin edilir. Xəstənin öz təşəbbüsü ilə döş xərçənginə meylini müəyyən etmək üçün pəncərə markerləri və ya genetik analiz üçün qan bağışladığı vəziyyətlər var. Bəzi hallarda ümumi qan testi bir onkoloji klinikaya müraciət etmək üçün bir səbəb ola bilər (bir şişin palpasiyası və ya xərçəngin vizual əlamətləri ilə birlikdə).

Biokimyəvi analiz

Tədqiqat üçün material kimi qan aşağıdakı diaqnostik tədbirləri həyata keçirməyə imkan verir:

Eyni zamanda, yalnız ilk iki təhlili xərçəngin müəyyən edilməsi üçün xüsusi üsullar adlandırmaq olar, ikincisi əməliyyatdan daha çox profilaktik tədbirdir. Bədənin vəziyyətini və prosesin miqyasını müəyyən etmək üçün əsasən əməliyyatdan əvvəl iki digər qan testi aparılır. Lakin, artıq qeyd edildiyi kimi, sinə içində bir şiş hiss olunarsa və ümumi qan testi ikidən çox mənfi diaqnostik əmsal göstərirsə, bu, bir mütəxəssislə məsləhətləşmək üçün bir səbəbdir. Mənfi əmsallar qan tərkibinin müəyyən parametrlərində normadan kənar göstəricilərdir.

Biyokimyəvi qan testi şiş hüceyrələrinə antikorların mövcudluğunu aşkar edə bilər. Belə orqanlara şiş markerləri deyilir. Şiş markerlərinin sayı və növü xərçəng şişinin xüsusiyyətlərindən (lokalizasiyasından) və onun inkişaf mərhələsindən asılıdır. Şiş markerlərinə aşağıdakılar daxildir:

Döş xərçəngi vəziyyətində, iştirak edən həkim ilk növbədə CA-15-3 şiş markerinin olması ilə maraqlanacaq, çünki qanda olması döş xərçəngini açıq şəkildə göstərir. Nəticənin dekodlanması orta hesabla bir gün çəkir. Xəstəliyin gedişində bir neçə dəfə biokimyəvi analiz aparılır. Bunun üçün qan günün birinci yarısında acqarına damardan alınır. Testdən iki həftə əvvəl xəstə bütün dərmanları qəbul etməyi dayandırır (iştirak edən həkimlə təsdiqlənməlidir). Qan vermədən iki gün əvvəl spirt, yağlı və qızardılmış qidalar qəbul edilməməlidir.

Prosedurdan bir saat əvvəl siqaret çəkməməlisiniz və emosional stressi azaltmaq məsləhətdir. Qan adətən radiasiya və fizioterapevtik müalicədən dərhal sonra biokimyəvi analiz üçün verilmir.

Genetik faktorların təyini

Genetik qan testi haqqında danışmazdan əvvəl "genetik" və "irsi" anlayışları arasındakı fərqi vurğulamağa dəyər. Xərçəngin genetik faktoru daha geniş anlayışdır və yalnız döş xərçəngi olan qohumların varlığını deyil, həm də bu xəstəliyin riskini artıran spesifik gen mutasiyasını nəzərdə tutur.

İrsiyyət, ailə tarixinə əsaslanaraq, döş xərçənginin potensial riskini nəzərdə tutur. Eyni zamanda, yalnız qadınlar deyil, kişilər də mutant geni qəbul edə bilər, lakin onun daşıyıcısı mütləq xəstələnməyəcəkdir.

İstənilən qadın genetik testdən keçə bilər. Bu xüsusilə birbaşa qohumlarında döş xərçəngi olanlar üçün tövsiyə olunur. Analiz üçün qan verməzdən əvvəl xəstə genetika sahəsində bir mütəxəssislə danışmalıdır, o, nəticələrin deşifr edilməsinin nüanslarını izah edəcəkdir. Qan verməzdən əvvəl xəstədən xüsusi hazırlıq tələb olunmur.

Əgər BRCA gen mutasiyası üçün müsbət nəticə əldə edirsinizsə, lakin digər narahatedici simptomlar yoxdursa, panikaya ehtiyac yoxdur. Bu genlərdə mutasiya olan qadınlara profilaktik tədbirlər kimi mütəmadi olaraq özünü müayinə və fiziki müayinədən keçmək tövsiyə oluna bilər. 40 ildən sonra yumurtalıqları və döşləri çıxarmaq barədə düşünmək mənasızdır, gələcəkdə uşaq sahibi olmağı planlaşdırmayan gənc qadınlara bəzən kontraseptivlər qəbul etmək tövsiyə olunur. Bu tədbirlərlə bağlı qərar tamamilə qadının çiyinlərindədir və düşünülmüş bir yanaşma və həkimlərlə məsləhətləşmə tələb edir.

Ən son diaqnostik üsullar

Spektral qan testi bədəndə 93% -ə qədər bir ehtimalla şişlərin olduğunu göstərir. Bu, qan serumunun infraqırmızı spektrlə şüalanmasına və onun molekulyar tərkibinin təhlilinə əsaslanan nisbətən ucuz diaqnostik üsuldur.

Spektral qan testi ilə bağlı nəticə "mövcudluq-yoxluq" prinsipinə uyğun olaraq verilir və bədxassəli şişlərin əksər növlərini müəyyən etməyə yönəldilmişdir. Bu test həm də döş xərçənginin inkişaf mərhələsini müəyyən edə bilər. Nəticələr laboratoriyada deşifrə edilir və əlavə həkim rəyi tələb olunmur.

Spektral analiz üçün qan vermək üçün prosedurdan 2 ay əvvəl dərman qəbul etməyi dayandırmaq lazımdır. Rentgen və ya digər şüalanma, həmçinin kimyaterapiya anından ən azı 3 ay keçməlidir. Bundan əlavə, qan götürülərkən qadın hamilə qalmamalı və ya menstruasiya olmamalıdır. Qan nümunəsi günün ilk yarısında boş bir mədədə baş verir. Spektral qan testi orta hesabla 12 iş günü çəkir.

Xərçəngin diaqnostikasının ən yeni üsullarından biri sözdə “balıq testi”dir (FISH, flüoresan hibridizasiya). Onun effektivliyi hələ də müzakirə olunur, onun həyata keçirilməsinin əsas məsələsi bahalı tədqiqat prosedurudur. Metodun mahiyyəti hüceyrə fraqmentlərinin flüoresan tərkibi ilə etiketlənməsi və hüceyrələrin sonrakı mikroskopik müayinəsidir. Etiketlənmiş fraqmentlərin genetik materialın hansı hissələri ilə əlaqəli olduğuna əsaslanaraq, xəstənin xərçəngə meylinin olub olmadığını və müəyyən bir vəziyyətdə hansı müalicə üsullarının aktual olacağını başa düşmək olar.

FISH testi tam yetkin hüceyrələrə ehtiyac duymur, ona görə də digər laboratoriya testlərinə nisbətən daha sürətli həyata keçirilir. Bundan əlavə, FISH metodu, digər analiz növləri ilə etmək mümkün olmayan genetik ziyanı daha aydın şəkildə müşahidə etməyə imkan verir. FISH testi ən çox döş xərçəngini aşkar etmək üçün istifadə olunur, lakin bir neçə digər xərçəng növünü aşkar etmək üçün də işləyir.

FISH testinin çatışmazlıqlarına yüksək qiymətə əlavə olaraq, etiketlərin spesifikliyinə görə bəzi xromosom bölgələrində işləyə bilməməsi daxildir. Bundan əlavə, FISH testi bəzi mutasiya növlərini və genetik kodun pozulmasını nəzərə almır ki, bu da diaqnozda əhəmiyyətli bir nöqsan ola bilər. FISH-in daha ucuz IHC testi ilə müqayisəli tədqiqatları xərçəng hüceyrələrinin Herceptin-ə həssaslığının müəyyən edilməsində heç bir əhəmiyyətli üstünlük göstərməmişdir. Bununla belə, FISH testi hazırda xərçəng diaqnozu üçün yüksək dəqiqlikli üsullar arasında ən sürətlisidir.

FISH - Floresan in situ hibridləşdirmə texnikası 1980-ci illərin ortalarında işlənib hazırlanmışdır və xromosomlarda xüsusi DNT ardıcıllığının, həmçinin 6-cı xromosomun sentromerində yerləşən alfa peyk DNT-nin, CEP6(6p11. 1-q11. 1).

Bu, şiş antigenlərinin aşkarlanması səbəbindən melanositik mənşəli onkoloji xəstəliklərin diaqnozunda əhəmiyyətli bir dəyişiklik etdi. Bədxassəli bir fonda üç antigendə mutasiya müəyyən edilir: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) və CMM1 (1p). Bu baxımdan, melanoma və onun prekursorlarının erkən diaqnostikasında melanositar dəri şişlərinin genetik xüsusiyyətlərinin müəyyən edilməsinə əsaslanan obyektiv differensial diaqnostikanın mümkünlüyü böyük əhəmiyyət kəsb edir.Normal nüvədə tədqiq olunan genlər və 6-cı xromosomlar. , iki RREB1 geni müşahidə olunur, qırmızı rəngli, iki MYB geni sarı rəngdə, iki CCND1 geni yaşıl və 6-cı xromosomun iki sentromeri mavidir. Diaqnostik məqsədlər üçün flüoresan testlər istifadə olunur.

Reaksiya nəticələrinin qiymətləndirilməsi: hər bir nümunənin 30 nüvəsindəki qırmızı, sarı, yaşıl və mavi siqnalların sayı sayılır, genetik pozğunluqların müxtəlif variantlarının dörd parametri müəyyən edilir, burada nümunə genetik olaraq melanoma uyğun gəlir. Məsələn, bir nüvədə CCND1 geninin orta sayı ≥2,5 olarsa, nümunə melanoma ilə uyğun gəlir. Digər genlərin nüsxə sayı eyni prinsiplə qiymətləndirilir. Dörd şərtdən ən azı biri yerinə yetirilərsə, dərman FISH müsbət sayılır. Bütün dörd parametrin kəsmə dəyərlərindən aşağı olduğu nümunələr FISH mənfi hesab olunur.

Xromosomlarda xüsusi DNT ardıcıllığının təyini biopsiya və ya cərrahi materialın bölmələrində aparılır. Praktik tətbiqdə FISH reaksiyası belə görünür: melanositlərin nüvələrində DNT olan tədqiq olunan material, ikiqat zəncirli quruluşu qırmaq və bununla da hüceyrənin istənilən bölgəsinə girişi asanlaşdırmaq üçün molekulunu qismən məhv etmək üçün işlənir. gen. Nümunələr DNT molekuluna bağlandıqları yerə görə təsnif edilir. Klinik praktikada FISH reaksiyası üçün material parafin toxuma kəsikləri, ləkələr və izlərdir.

FISH reaksiyası, gen nüsxələrinin sayının artması, gen itkisi, xromosomların sayında dəyişiklik və keyfiyyət dəyişiklikləri nəticəsində DNT molekulunda baş verən dəyişiklikləri - hər iki gen lokusunun eyni yerdə hərəkətini aşkar etməyə imkan verir. xromosom və iki xromosom arasında.

FISH reaksiyasından istifadə edərkən əldə edilən məlumatları emal etmək və üç tədqiqat qrupunun genlərinin surət nömrələri arasındakı əlaqəni öyrənmək üçün Spearman korrelyasiya əmsalı istifadə olunur.

Melanoma, nevus və displastik nevus ilə müqayisədə surət sayının artması ilə xarakterizə olunur.

Sadə bir nevus, displastik bir nevusla müqayisədə, nüsxə sayında daha az anormalliklərə malikdir (yəni, daha normal surət nömrələri).

Nümunənin bu və ya digər sinfə aid olub-olmamasını proqnozlaşdırmağa imkan verən qərar qaydalarını qurmaq üçün (sadə və displastik nevusların differensial diaqnozu) “qərar ağaclarının” riyazi aparatından istifadə olunur. Bu yanaşma praktikada özünü yaxşı sübut etdi və bu metoddan istifadənin nəticələri (neyroşəbəkələr kimi bir çox digər üsullardan fərqli olaraq) sadə, displastik nevus və melanomanın fərqləndirilməsi üçün qərar qaydalarının qurulması üçün aydın şəkildə şərh edilə bilər. Bütün hallarda ilkin məlumatlar dörd genin surət nömrələri idi.

Diferensial diaqnoz üçün qərar qaydasının qurulması vəzifəsi bir neçə mərhələyə bölünür. Birinci mərhələdə melanoma və nevus nevus növü nəzərə alınmadan fərqləndirilir. Növbəti mərhələdə sadə və displastik nevusları ayırmaq üçün qərar qaydası qurulur. Nəhayət, son mərhələdə displastik nevusun displaziya dərəcəsini təyin etmək üçün "qərar ağacı" qurmaq mümkündür.

Nevusları alt vəzifələrə təsnif etmək vəzifəsinin bu şəkildə bölünməsi hər mərhələdə proqnozların yüksək dəqiqliyinə nail olmağa imkan verir. "Qərar ağacı" qurmaq üçün giriş məlumatları melanoma diaqnozu qoyulmuş xəstələr və qeyri-melanoma diaqnozu qoyulmuş xəstələr (müxtəlif növ nevusları olan xəstələr - sadə və displastik) üçün dörd genin surətinin sayına dair məlumatlardır. Hər bir xəstə üçün 30 hüceyrə üçün gen surəti nömrələri haqqında məlumat var.

Beləliklə, diaqnozun proqnozlaşdırılması probleminin bir neçə mərhələyə bölünməsi yalnız melanoma və nevusları fərqləndirmək üçün deyil, həm də nevus növünü təyin etmək və displastik nevus üçün displaziyanın dərəcəsini proqnozlaşdırmaq üçün yüksək dəqiqlikli qərar qaydaları qurmağa imkan verir. Quraşdırılmış "qərar ağacları" gen nüsxələrinin nömrələri haqqında məlumat əsasında diaqnozu proqnozlaşdırmaq üçün vizual üsuldur və dərinin xoşxassəli, bədxassəli və bədxassəli melanositik neoplazmalarını fərqləndirmək üçün klinik praktikada asanlıqla istifadə edilə bilər. Təklif olunan əlavə differensial diaqnostika üsulu, uşaq xəstələrində nəhəng anadangəlmə piqmentli nevusların və displastik nevusların kəsilməsi zamanı xüsusilə vacibdir, çünki belə xəstələr tibb müəssisələrinə müraciət edərkən diaqnostik səhvlərin yüksək faizi müşahidə olunur. Təsvir edilən metoddan istifadənin nəticələri yüksək effektivdir, piqmentli dəri şişlərinin diaqnostikasında, xüsusən də FAMM sindromu olan xəstələrdə istifadə etmək məsləhətdir.

Prenatal diaqnostikanın invaziv üsulları nəinki gələcəyə baxmağa və doğmamış körpənin intrauterin malformasiyalarla əlaqəli xəstəliklərlə üzləşəcəyini etibarlı şəkildə proqnozlaşdırmağa deyil, həm də anadangəlmə patologiyaların təbiətini və səbəblərini öyrənməyə imkan verir.

Bununla belə, istənilən məlumat yalnız vaxtında olarsa dəyərlidir. Dölün inkişafı vəziyyətinə gəldikdə, test nəticələrinin əldə edilməsi sürəti həyati əhəmiyyət kəsb edir.

Buna görə də, bir embrionda ən çox rast gəlinən inkişaf anomaliyalarının mövcudluğunu ən qısa müddətdə qiymətləndirməyə imkan verən FISH metoduna genetik diaqnostikada böyük tələbat var.

FISH, xromosom anomaliyalarının aşkarlanması texnologiyasının mahiyyətini deşifrə edən bir abbreviaturadır - flüoresan in situ hibridləşmə - "ev" mühitində flüoresan hibridləşmə.

Ötən əsrin 70-ci illərinin sonlarında J. Goll və M.-L tərəfindən təklif edilən bu texnika. Pardew, denaturasiyadan sonra nuklein turşusu fraqmentlərinin (DNT və ya RNT) ardıcıllığını bərpa etmək imkanına əsaslanır.

Müəlliflər süni şəkildə yaradılmış etiketli DNT zondlarının (zondlarının) və təhlil üçün götürülmüş sitogenetik materialın in situ hibridləşdirilməsindən istifadə edərək maraq doğuran xromosomların kəmiyyət və keyfiyyət sapmalarını müəyyən etməyə imkan verən bir üsul işləyib hazırlayıblar.

Keçən əsrin sonlarında, DNT zondlarının rənglənməsi üçün flüoresan boyalardan uğurla istifadə edildikdən sonra, FISH metodu öz adını aldı və o vaxtdan bəri intensiv şəkildə təkmilləşdirildi və dəyişdi.

Müasir FISH analiz üsulları bir hibridləşdirmə prosedurunda seçilmiş genetik materialın təhlili üçün ən dolğun məlumatın əldə edilməsini təmin etməyə çalışır.

Fakt budur ki, hibridləşmədən sonra bir dəfə eyni sitogenetik materialın yalnız məhdud sayda xromosomları qiymətləndirilə bilər. DNT zəncirlərini yenidən hibridləşdirmək qabiliyyəti zaman zaman azalır.

Buna görə də, hazırda genetik diaqnostikada 21, 13, 18-ci xromosomlarda, eləcə də X, Y cinsi xromosomlarda mövcud, ən çox rast gəlinən anevloidiyalar haqqında suallara tez cavab vermək üçün in situ hibridləşdirmə üsulu ən çox istifadə olunur.

İstənilən toxuma və ya hüceyrə nümunələri FISH analizi üçün uyğundur.

Prenatal diaqnozda bunlar qan nümunələri, boşalma və ya ola bilər.

Nəticələrin əldə edilməsinin sürəti, analiz üçün götürülən materialdan alınan hüceyrələrin klassik karyotipləşdirmə metodunda olduğu kimi, lazımi sayda bölünməsinə nail olaraq qida mühitində becərilməsinə ehtiyac olmaması ilə təmin edilir.

Seçilmiş material konsentratlaşdırılmış təmiz hüceyrə süspansiyonu əldə etmək üçün xüsusi hazırlıqdan keçir. Sonra, DNT nümunəsinin və tədqiq olunan nümunənin yerli DNT-nin denatürasiyası prosesi tək zəncirli vəziyyətə və hibridləşmə prosesi həyata keçirilir, bu müddət ərzində rəngli DNT zondları nümunənin DNT-si ilə inkubasiya edilir.

Beləliklə, hüceyrədə arzu olunan (rəngli) xromosomlar vizuallaşdırılır, onların sayı, genetik strukturların strukturu və s. Xüsusi flüoresan mikroskopun göz qapağı parlayan DNT zəncirlərini tədqiq etməyə imkan verir.

Hal-hazırda FISH metodu diaqnostik məqsədlərlə gen xəstəliklərin, reproduktiv təbabətdə, onkologiyada, hematologiyada, bioloji dozimetriyada və s.-də xromosom aberrasiyalarını müəyyən etmək üçün geniş istifadə olunur.

Dölün FISH diaqnostikasından necə istifadə olunur?

Reproduktiv tibb sahəsində molekulyar sitogenetik diaqnostika üsullarından biri kimi FISH metodu bütün mərhələlərdə istifadə olunur.

• cütlük.

Gələcək valideynlərin karyotipini müəyyən etmək üçün bir dəfə aparılır, çünki insan genomu həyat boyu dəyişməz qalır.

Uşağı düşünmədən əvvəl cütlüyün karyotiplənməsi valideynlərin irsi, o cümlədən gizli olan genetik patologiyaların daşıyıcısı olub olmadığını müəyyən etməyə kömək edəcəkdir. Həm də gələcək ana və atanın genomunun ümumi vəziyyəti, körpənin doğulmasının və hamiləliyin müddətinə qədər aparılmasının müvəffəqiyyətinə təsir göstərə bilər.

Bu vəziyyətdə FISH metodundan istifadə edən diaqnostika, mozaika şübhəsi varsa, test materialında (valideynlərin venoz qanı) xromosom patologiyalarını müəyyən edərkən klassik karyotipləşdirmə üçün əlavə müayinə rolunu oynayır.

FISH metodundan istifadə edərək əlavə müayinə gələcək valideynin hüceyrələrində şübhəli anomaliyaların mövcudluğunu etibarlı şəkildə təsdiqləyəcək və ya təkzib edəcəkdir.

• Eyakulyasiyanın öyrənilməsi.

"Kişi faktoru" səbəbindən cütlükdə çoxalma ilə bağlı çətinliklər üçün göstərilir. FISH metodundan istifadə edərək sperma analizi xromosom dəstində anormal sperma səviyyəsini qiymətləndirməyə, həmçinin kişinin cinsiyyətlə əlaqəli genetik xəstəliklərin daşıyıcısı olub-olmadığını müəyyən etməyə imkan verəcək.

Cütlük sonradan IVF-dən istifadə edərək konsepsiyaya müraciət edərsə, eyakulyasiyanın FISH analizi yumurtanı dölləmək üçün ən yüksək keyfiyyətli sperma seçməyə imkan verəcəkdir.

• IVF ilə.

Preimplantasiya genetik diaqnostika (PGD) üçün. Valideynlərin karyotipinin tədqiqatlarının nəticələrinə əsasən, embriona ötürülə bilən mümkün xromosom və genetik aberrasiyalar müəyyən edilir.

FISH diaqnostikasının imkanları sayəsində məlum sağlam döllə hamiləliyin təmin edilməsi üçün uşaqlıq boşluğuna köçürülməzdən bir neçə saat əvvəl yaranan embrionların genetik sağlamlığının öyrənilməsi həyata keçirilə bilər.

Bundan əlavə, PGD-nin imkanları embrionların cinsini təyin etməyə və buna görə də zəruri hallarda doğmamış uşağın cinsini "sifariş etməyə" imkan verir.

• Hamiləlik zamanı.

Prenatal diaqnostikada: xorion villus nümunəsi, amniosentez və ya FISH metodundan istifadə edərək kordosentez istifadə edərək əldə edilən fetal hüceyrələrin təhlili, adətən, fetal hüceyrələrin klassik genetik öyrənilməsinə (karyotipləşdirmə) əlavə olaraq tibb mərkəzləri tərəfindən təklif olunur.

Bu üsul döldə ən çox rast gəlinən xromosom qüsurlarının olub-olmaması barədə tez bir zamanda cavab almaq lazım olduqda zəruridir: 21, 18, 13-cü xromosomlarda trisomiya, X və Y xromosomlarında aberrasiyalar, bəzən də 14-cü xromosomlarda anevloidiyalar (və ya 17), 15, 16.

FISH analizinin üstünlükləri

FISH metodundan istifadə edərək genetik analizin aparılması, bu gün xromosom patologiyalarının diaqnozu üçün köməkçi bir üsul olaraq qalmasına baxmayaraq, onun həyata keçirilməsinin mümkünlüyü danılmaz üstünlüklərlə müəyyən edilir:

• test edilmiş xromosomlarla bağlı nəticələrin əldə edilmə sürəti bir neçə saat ərzində - 72-dən çox deyil.

Hamiləliyin taleyi genetiklərin diaqnozundan asılıdırsa, bu vacib ola bilər;

• FISH metodunun yüksək həssaslığı və etibarlılığı - cüzi miqdarda biomaterialın uğurlu təhlili mümkündür - bir hüceyrə kifayətdir, nəticələrin səhvi 0,5% -dən çox deyil.

Bu, orijinal nümunədəki hüceyrələrin sayı məhdud olduqda, məsələn, onların bölünməsi zəif olduqda vacib ola bilər.

• hamiləliyin istənilən mərhələsində (7-ci həftədən) və hər hansı bioloji nümunədən istifadə edərək FISH metodundan istifadə edərək diaqnostika aparmaq imkanı: xorion parçaları, amniotik maye, fetal qan və s.

FISH metodundan istifadə edərək harada diaqnoz qoya bilərəm?

Moskvada dölün xromosom anomaliyalarının prenatal diaqnostikası üçün FISH metodu aşağıdakı tibb mərkəzlərində istifadə olunur:

Bir qayda olaraq, klinikalar əlavə ödəniş üçün invaziv müdaxilə yolu ilə tam fetal karyotipləşdirmənin bir hissəsi kimi FISH diaqnostikası xidmətlərini təklif edir. Və bir qayda olaraq, gələcək valideynlər əlavə pul ödəməyə razıdırlar, çünki FISH metodu sayəsində bir neçə gün ərzində körpəniz haqqında ən vacib şeyləri öyrənə bilərsiniz.

Döş xərçəngi qiymətləndirilməməlidir. Bu, tamamilə hər kəsə təsir edə bilər - gənc və yaşlı, qadınlar və kişilər. Müalicənin həddindən artıq mürəkkəbliyi, yüksək ölüm və xəstələnmənin artan dinamikası tibb tərəfindən bu problemə diqqətin artmasının səbəbidir.

Bu günə qədər xəstəliyin müsbət nəticəsini 100% təmin edən heç bir müalicə üsulu yoxdur. Mövcud üsullar zəhmət tələb edir, bahalıdır və bədənə böyük girov zərər verə bilər.

Bu, ən yaxşı müalicənin risk faktorlarının aradan qaldırılması və vaxtında diaqnozun qoyulması olduğunu deyə biləcəyimiz xəstəliklərdən biridir.

Döş xərçənginə meyl

Xərçəngin ilk dəfə eramızdan əvvəl 15-ci əsrdə təsvir edilməsinə və alimlərin çoxlu məlumatlara malik olmasına baxmayaraq, döş xərçənginin etiologiyasını tam təsvir etmək hələ də kifayət deyil.

Xərçəngin yaranmasına və ya inkişafına təsir edən ətraf mühit faktorları kifayət qədər etibarlılıqla tapılmamışdır. Müəyyən bir kanserogeni göstərən fərdi tədqiqatlar bütün tibb ictimaiyyəti tərəfindən tam tanınmır. Bununla belə, döş xərçəngi ilə aşağıdakılar arasında müəyyən bir əlaqə var:

Yuxarıda sadalanan ən vacib amillərdən biri yaşdır: illər keçdikcə döş xərçənginin inkişaf ehtimalı böyük ölçüdə artır. Ümumiyyətlə, döş xərçəngi etiologiyası məsələsinin mürəkkəbliyi onun genetik təbiəti ilə bağlıdır. Niyə bir nasazlığın birdən meydana gəldiyi və döş toxumasının nəzarətsiz şəkildə bölünməyə başladığı, qonşu toxumalara təsir etdiyi və bütün bədəndə metastazlara səbəb olduğu bilinmir.

Lakin alimlər bir məsələdə həmfikirdirlər: müasir həyat xərçəngə əvvəlkindən qat-qat daha əlverişlidir.

Belə ki, yüksək dozada elektromaqnit şüalanması, pis ekologiya, şəhərlərdə oksigen səviyyəsinin aşağı olması, fiziki hərəkətsizlik, stress və s. göstərilir.Həyat yaşının xeyli artdığını nəzərə almamaq olmaz, çünki xərçəng adətən daxil olan bir xəstəlikdir. yetkinlik.

Lazımi testlər

Xərçəngin müsbət nəticəsinin mümkünlüyü birbaşa müalicənin başlama vaxtı ilə bağlıdır, buna görə də diaqnoza münasibət ən ciddi olmalıdır.

Aşağıdakı diaqnostik üsullar tələb olunur:

• aylıq özünü yoxlama (palpasiya testi);
• rübdə bir dəfə həkimə müraciət edin;
• altı ayda bir ultrasəs;
• Hər il MRT.

30 yaşından əvvəl mammoqramma (rentgen) tövsiyə edilmir, çünki radiasiyaya məruz qalmaqdan ən yaxşı şəkildə gənc yaşda çəkinmək olar. Döş xərçəngindən şübhələnirsinizsə, aşağıdakı testlərdən keçməlisiniz:

FISH tədqiqat metodu

FISH tədqiqatı (FISH analizi) membran zülalı HER2 (Human Estrogen Receptor2) öyrənmək üçün istifadə edilən sitogenetik üsuldur. FISH tədqiqatı apararkən, floresan boya ilə etiketlənmiş DNT zondlarından istifadə olunur. Bu zondlar istənilən DNT bölgələrinə daxil edilir və HER2 gücləndirmə dərəcəsini ölçə bilir. Tədqiqat zamanla aparıldığından və genlər bölünməyə davam etdiyindən, HER2 geninin nüsxələrinin sayının normal bölünən bölgənin nüsxələrinin sayına nisbətini qiymətləndirmək mümkündür. 2-dən böyük və ya bərabərdirsə, nəticə HER2 müsbət hesab olunur.

FISH analizi xərçəngin proqnozunda və müalicə prinsiplərinin seçilməsində mühüm rol oynayır. Beləliklə, bu zülalın gücləndirilməsi və ya aktivliyinin artması xərçəng hallarının 30% -ində baş verir və onun funksiyasını maneə törətməyə yönəlmiş xüsusi müalicə üsullarını tələb edir. Normal şəraitdə HER2 hüceyrə böyüməsini, bölünməsini və özünü təmirini idarə edir. Xərçəng vəziyyətində bu zülal həddən artıq çox membran reseptorları istehsal edir və hüceyrələrə nəzarətsiz şəkildə bölünməyə göstəriş verir. Hüceyrə beləcə xərçəngə çevrilir.

FISH testinin nəticəsi müsbət olarsa, HER2-ni basdırmağa yönəlmiş müalicə təyin edilir. Bu gün əsas dərman Herceptindir. Əgər bu test aparılmazsa və ya onun nəticələrinə məhəl qoyulmazsa, müalicə seçimi yanlış olacaq və xərçəng terminal mərhələsinə keçir. Bundan əlavə, belə xərçəng inkişafda HER2-mənfi xərçəngdən daha aqressivdir.

İmmunohistokimyəvi analiz FISH analizi ilə birlikdə aparılır. Bu həm də HER2 zülalını öyrənmək üçün gen üsuludur, lakin immunohistokimyəvi analiz zamanı HER2 zülalının miqdarı hüceyrədə deyil, konkret nümunədə aşkar edilir.

Balıq üsulundan maya dəyərinə görə fərqlənir, lakin məhsul daha az informativ nəticələr verir, bu da tədqiqatçıdan, laboratoriyadan və istifadə olunan meyarlardan asılıdır. HER2 zülalının miqdarı test nümunəsinin rəngi ilə müəyyən edilir və sıfırdan üçə qədər miqyasda qiymətləndirilir. Bu iki üsul birlikdə xəstənin HER2 statusunu öyrənmək üçün qızıl standartdır.

Beləliklə, görünüşünə baxmayaraq, döş xərçəngi kifayət qədər müalicə olunur. Onkoloqların arsenalında təbabətin bütün qabaqcıl nailiyyətləri var. Bütün bu vasitələr ən adi vətəndaş üçün olduqca əlçatandır.

Xəstəliyin uğurlu nəticəsi üçün əsas şey döş xərçəngi üçün vaxtında müayinə, düzgün müalicə metodunu seçmək və daha erkən başlamaqdır. Nəticə olmadıqda ümidsiz olmayın, çünki müsbət emosional fon da xəstəliyin gedişatına əhəmiyyətli təsir göstərir.