Donor screening. Immunohematologische laboratoriumtests Antigenen (Ag) van erytrocyten

Totaal bloedeiwit 60-80 g/l. Er zijn verschillende eiwitfracties die specifieke functies vervullen.

1. Albuminen (40-60 g/l) hebben een hoge colloïd-osmotische activiteit.

2. Globulinen a, b, g (20-40 g/l) maken humorale immuniteit, vormen verschillende antilichamen die immunoglobulinen (IgM, IgG) worden genoemd.

3. Fibrinogeen (2-4 g/l) is de belangrijkste factor in het mechanisme van bloedstolling.

ANTIGENEN(Grieks àanti - tegen, genos - creëren) - stoffen die het vermogen hebben om de vorming van antilichamen in het lichaam te veroorzaken en daarmee te reageren. Een aantal specifieke polysachariden zijn ingebouwd in het erytrocytmembraan - aminozuurcomplexen met antigene eigenschappen. Deze complexen worden agglutinogenen genoemd.

Tot op heden zijn meer dan 400 antigenen gelokaliseerd in het erytrocytenmembraan gevonden in menselijke erytrocyten, waarvan 140 gecombineerd in 20 genetisch gecontroleerde systemen. De overige antigenen zijn algemeen of individueel. Voor klinische praktijk de belangrijkste zijn het ABO-systeem en het Rh-systeem (Rh-systeem). Er zijn ook groepen van Kell-Chelano, Kidd, Lutheran, Duffy, Diego, enz. De laatste zijn alleen van belang bij frequente bloedtransfusies of tijdens de zwangerschap die onverenigbaar zijn met een van deze agglutinogenen. Het wordt daarom niet aanbevolen om herhaaldelijk bloed van dezelfde donor te transfunderen.

RBC-antigenen verschijnen in de tweede maand embryonale ontwikkeling tegen de tijd van de geboorte van het kind is hun agglutineerbare activiteit echter laag en bedraagt ​​1/5 van de activiteit van volwassenen.

ANTILICHAMEN Stoffen die reageren met een antigeen. Natuurlijke antistoffen zijn altijd aanwezig in bloedplasma en behoren tot de gammaglobulinefractie. Deze omvatten antilichamen van het ABO-systeem - a- en b-agglutinines, die in de eerste maanden na de geboorte bij de mens verschijnen en Maximaal nummer op de leeftijd van 5-10 jaar.

AGGLUTINATIE REACTIE- lijmen en neerslaan van erytrocyten onder invloed van specifieke antilichamen - agglutinines. Er wordt aangenomen dat het antilichaammolecuul een brug vormt tussen twee erytrocyten met twee bindingsplaatsen. Elk van deze erytrocyten bindt zich op hun beurt aan andere erytrocyten en als resultaat blijven ze aan elkaar plakken. bij transfusie onverenigbaar bloed agglutinatie leidt tot hemolyse van erytrocyten en het vrijkomen van stollingsfactoren. De resulterende stolsels verstoppen kleine bloedvaten en verstoren daardoor de capillaire circulatie.

Agglutinatie treedt op wanneer de agglutinogenen van de donor met dezelfde naam en de agglutinines van de ontvanger elkaar ontmoeten.

Tests voor compatibiliteit van getransfundeerd bloed

De arts die bloed transfundeert, is verplicht om mogelijke onverenigbaarheid met het bloed van de patiënt te voorkomen door controleonderzoeken uit te voeren, waaronder tests op compatibiliteit door AB0-bloedgroepen en door de Rh-factor.

Compatibiliteitstesten worden vlak voor transfusie uitgevoerd. Gebruik hiervoor het bloedserum van de patiënt en het bloed van de donor uit een injectieflacon die is voorbereid voor transfusie.

"Menselijke bloedgroepsystemen en
bloedtransfusiecomplicaties”, M.A. Umnova

Bloedgroepen worden bepaald door een agglutinatietest bij kamertemperatuur op een porseleinen of andere witte plaat met een bevochtigbaar oppervlak. Er zijn twee manieren om de bloedgroep te bepalen: met behulp van standaardsera om te bepalen welke groep agglutinogenen (A of B) zich in de erytrocyten van het onderzochte bloed bevinden; gelijktijdig gebruik van standaard sera en standaard erytrocyten (kruismethode). Waarin…

2 druppels serum van de patiënt, 1 druppel donorbloed en 1 druppel van een 33% oplossing van polyglucine, speciaal bereid voor laboratoriumdoeleinden, worden in een reageerbuis gedaan. De buis wordt geschud om de inhoud te mengen en vervolgens bijna tot gekanteld horizontale positie zodat de inhoud over de muren loopt en langzaam 5 minuten ronddraait verticale as, contact maken met een mengsel van het serum van de patiënt ...

De hemagglutinatiereactie in elke druppel kan positief of negatief zijn. Bij een positieve reactie, meestal binnen de eerste 10-30 seconden vanaf het begin van het mengen, verschijnen er kleine rode korrels (agglutinaten) die met het blote oog zichtbaar zijn in het mengsel, bestaande uit gelijmde rode bloedcellen. Kleine agglutinaten gaan geleidelijk over in grotere en soms in vlokken. onregelmatige vorm. Tegelijkertijd is het serum volledig ...

Het bloed van de donor moet twee keer worden gewassen in een reageerbuis met 8 - 10 keer het volume Isotone oplossing natriumchloride door centrifugeren, verwijder dan de doek en gebruik het sediment van gewassen erytrocyten voor onderzoek. Een kleine (0,01 ml) druppel gewassen erytrocyten wordt overgebracht naar een andere reageerbuis, er worden 3 druppels van het serum van de patiënt aan toegevoegd, gemengd met de erytrocyten van de donor en de reageerbuis wordt in ...

I. Onder vooraf gemaakte aanduidingen wordt één grote druppel (0,1 ml) standaardsera van de groepen 0αβ (I), Aβ (II) en Bα (III) op de plaat aangebracht. Aangezien standaardsera van twee verschillende partijen van elke groep worden gebruikt, worden in totaal 6 druppels verkregen, die twee rijen van 3 druppels vormen in de volgende volgorde van links naar rechts: 0αβ(I), Aβ(II) en Bα(III) ). II. Op de bodem van het bord...

De resultaten worden geïnterpreteerd door evaluatie en vergelijking van de resultaten die zijn verkregen met standaardsera (bovenste twee rijen) en met standaard erytrocyten (onderste rij). De resultaten van reacties verkregen met standaard sera II van standaard erytrocyten moeten overeenkomen, d.w.z. het gehalte aan agglutinogenen en agglutininen aangeven die overeenkomen met dezelfde bloedgroep. Deze resultaten kunnen worden uitgedrukt...

Om de Rh-affiliatie te bepalen, d.w.z. om de aan- of afwezigheid van antigenen van het Rh-systeem in het bloed van mensen te detecteren, worden standaard anti-Rhesus-sera (reagentia) gebruikt, die verschillen in specificiteit, d.w.z. die antilichamen bevatten in relatie tot verschillende antigenen van dit systeem. Om het Rh0 (D)-antigeen te bepalen, wordt meestal anti-rhesus-serum gebruikt met toevoeging van een 10% gelatine-oplossing of een standaard anti-rhesus-reagens dat vooraf is bereid ...

I. In 2 buisjes, één druppel (0,05 ml) van de bestudeerde erytrocyten en 2 druppels van een 10% gelatine-oplossing verwarmd tot vloeibaar in warm water(46 - 48°C). II. In een van deze buisjes worden 2 druppels anti-Rh-serum toegevoegd aan het mengsel van erytrocyten en gelatine. Dit serum wordt niet aan een andere buis toegevoegd, het dient als controle ...

De reageerbuisjes worden bekeken tegen het licht in met het blote oog of door een loep met dubbele vergroting. Het resultaat wordt geïnterpreteerd afhankelijk van de aanwezigheid of afwezigheid van erytrocytagglutinatie. Met een positief resultaat zijn agglutinaten gemakkelijk te onderscheiden in de vorm van rode korrels of vlokken tegen een transparante, bijna verkleurde achtergrond van de vloeistof. Als het resultaat negatief is in de reageerbuis, een gelijkmatig gekleurd roze kleur, licht opaalachtige vloeistof. Monsters…

I. Eén druppel (0,05 ml) van het testbloed of de erytrocyten wordt in de reageerbuis gebracht (het is mogelijk om het conserveermiddel niet af te wassen), voeg 1-2 druppels van het standaard universele anti-rhesusreagens toe en meng de erytrocyten met het reagens door de buis te schudden. II. De reageerbuis wordt bijna horizontaal gekanteld zodat de inhoud zich over de wanden verspreidt en vervolgens langzaam in deze positie gedraaid ...

De selectie van donoren wordt uitgevoerd volgens uniforme medische criteria, die de veiligheid, hoge activiteit en effectiviteit van bloed en zijn componenten garanderen.

Elke donor ondergaat een onderzoek alvorens bloed te doneren: ze verzamelen een anamnese, voeren een grondig medisch onderzoek uit en speciaal examen om contra-indicaties voor bloeddonatie te identificeren en de mogelijkheid van overdracht van pathogenen van infectieziekten met bloed uit te sluiten. Er wordt serologisch, virologisch en bacteriologisch onderzoek van donorbloed uitgevoerd.

Vooruitgang in klinische transfusiologie vermindert het risico van overdracht met bloed en zijn componenten van pathogenen van infectieziekten (hiv-infectie, hepatitis B en C, syfilis, cytomegalovirusinfectie, enz.).

De belangrijkste antigene systemen van het bloed

Er is vastgesteld dat de antigene structuur van menselijk bloed complex is, alle bloedcellen en plasma-eiwitten van verschillende mensen verschillen in antigenen. Er zijn al ongeveer 500 bloedantigenen bekend, die meer dan 40 verschillende antigene systemen vormen.

Een antigeen systeem wordt opgevat als een reeks bloedantigenen die wordt geërfd (gecontroleerd) door allelische genen.

Alle bloedantigenen zijn onderverdeeld in cellulair en plasma. Cellulaire antigenen zijn van primair belang in de transfusiologie.

celantigenen

Cellulaire antigenen zijn complexe koolhydraat-eiwitcomplexen (glycopeptiden), structurele componenten van het bloedcelmembraan. Van andere componenten celmembraan ze verschillen in immunogeniciteit en serologische activiteit.

immunogeniciteit - het vermogen van antigenen om de synthese van antilichamen te induceren als ze een organisme binnendringen dat deze antigenen niet heeft.

Serologische activiteit - het vermogen van antigenen om te binden aan antilichamen met dezelfde naam.

Het cellulaire antigeenmolecuul bestaat uit twee componenten:

Schlepper (het eiwitgedeelte van het antigeen dat zich in de binnenste lagen van het membraan bevindt), dat de immunogeniciteit bepaalt;

Hapten (polysacharidedeel van het antigeen, gelegen in de oppervlaktelagen van het celmembraan), dat de serologische activiteit bepaalt.

Op het oppervlak van het hapteen bevinden zich antigene determinanten (epitopen) - koolhydraatmoleculen waaraan antilichamen zijn gehecht. Bekende bloedantigenen verschillen van elkaar door epitopen.

Haptenen van antigenen van het AB0-systeem hebben bijvoorbeeld de volgende set koolhydraten: het epitoop van antigeen 0 is fucose, antigeen A is N-acetylgalactosamine en antigeen B is galactose. Groepsantilichamen zijn ermee verbonden.

Er zijn drie soorten cellulaire antigenen:

erytrocyt;

Leukocyt;

Bloedplaatjes.

RBC-antigenen

Er zijn meer dan 250 erytrocytantigenen bekend, die meer dan 20 antigene systemen vormen. 11 systemen zijn van klinisch belang: AB0, Rh-Hr, MNSs, Kell, Lutheran, Kidd, Diego, Duffy, Dombrock, enzymatische groepen van erytrocyten.

Bij mensen zijn antigenen van verschillende antigene systemen gelijktijdig aanwezig in erytrocyten.

De belangrijkste antigene systemen in de transfusiologie zijn AB0 en Rhesus. Andere antigene systemen van erytrocyten zijn momenteel niet van significant belang in de klinische transfusiologie.

Antigeen systeem AB0

Het AB0-systeem is het belangrijkste serologische systeem dat de compatibiliteit of incompatibiliteit van getransfundeerd bloed bepaalt. Het bestaat uit twee genetisch bepaalde agglutinogenen (antigenen A en B) en twee agglutinines (antilichamen α en β).

Agglutinogenen A en B bevinden zich in het stroma van erytrocyten en agglutinines α en β worden aangetroffen in het bloedserum. Agglutinine α is een antilichaam tegen agglutinogeen A en agglutinine β is tegen agglutinogeen B. In de erytrocyten en het bloedserum van één persoon kunnen geen agglutinogenen en agglutinines met dezelfde naam voorkomen. Wanneer antigenen en antilichamen met dezelfde naam elkaar ontmoeten, treedt een isohemagglutinatiereactie op. Het is deze reactie die de oorzaak is van bloedincompatibiliteit tijdens bloedtransfusie.

Afhankelijk van de combinatie van antigenen A en B in erytrocyten (en dienovereenkomstig in het serum van antilichamen α en β), worden alle mensen verdeeld in vier groepen.

Rhesus antigeen systeem

Rh-factor (Rh-factor), zo genoemd omdat het voor het eerst werd ontdekt bij resusapen, is aanwezig bij 85% van de mensen en 15% is afwezig.

Het is nu bekend dat het Rhesus-systeem behoorlijk complex is en wordt weergegeven door vijf antigenen. De rol van de Rh-factor bij bloedtransfusie, evenals tijdens de zwangerschap, is extreem hoog. Fouten die leiden tot de ontwikkeling van Rhesus-conflictoorzaak ernstige complicaties en soms overlijden van de patiënt.

Kleine antigene systemen

Secundaire erytrocytgroepsystemen worden vertegenwoordigd door een groot aantal antigenen. Kennis van deze set van systemen is belangrijk voor het oplossen van sommige problemen in de antropologie, forensisch onderzoek, maar ook voor het voorkomen van het ontstaan ​​van posttransfusiecomplicaties en bepaalde ziekten bij pasgeborenen.

MNS-systeem omvat factoren M, N, S, s. De aanwezigheid van twee nauw met elkaar verbonden genloci MN en Ss is bewezen. Vervolgens werden andere diverse varianten van antigenen van het MNS-systeem geïdentificeerd. Volgens de chemische structuur zijn MNS's glycoproteïnen.

R-systeem. Het P-antigeensysteem heeft enige klinische betekenis. Er zijn gevallen geweest van vroege en late miskramen veroorzaakt door iso-antilichamen. anti-R. Er zijn verschillende gevallen beschreven van posttransfusiecomplicaties die verband houden met de onverenigbaarheid van donor en ontvanger volgens het P-antigeensysteem.

Kell-systeem vertegenwoordigd door drie paren antigenen. De Kell (K) en Cellano (k) antigenen hebben de hoogste immunogene activiteit. Antigenen van het Kell-systeem kunnen sensibilisatie van het lichaam veroorzaken tijdens de zwangerschap en tijdens bloedtransfusie, bloedtransfusiecomplicaties en de ontwikkeling van hemolytische ziekte van de pasgeborene veroorzaken.

Luthers systeem. Een van de donoren, Lutheraan genaamd, had een voorheen onbekend antigeen in de erytrocyten van het bloed, wat leidde tot de immunisatie van de ontvanger. Het antigeen werd Lu a genoemd. Een paar jaar later werd het tweede antigeen van dit systeem, Lu b, ontdekt. Hun frequentie: Lu a - 0,1%, Lu b - 99,9%. Anti-Lub-antilichamen zijn iso-immuun, wat ook wordt bevestigd door rapporten over het belang van deze antilichamen bij het ontstaan ​​van hemolytische ziekte van de pasgeborene. De klinische betekenis van antigenen van het lutherse systeem is klein.

Kidd-systeem. Antigenen en antilichamen van het Kidd-systeem hebben een specifieke praktische waarde. Ze kunnen de oorzaak zijn van de ontwikkeling van hemolytische ziekte van de pasgeborene en complicaties na transfusie met herhaalde bloedtransfusies die onverenigbaar zijn met de antigenen van dit systeem. De frequentie van antigenen is ongeveer 75%.

Diego systeem. In 1953 werd in Venezuela een kind geboren in de familie van Diego met tekenen van hemolytische ziekte. Bij het bepalen van de oorzaak van deze ziekte werd een voorheen onbekend antigeen, aangeduid met de Diego-factor (Di), bij het kind gedetecteerd. In 1955 toonden studies aan dat het Diego-antigeen een raciale eigenschap is die kenmerkend is voor de volkeren van het Mongoloïde ras.

Duffy-systeem bestaat uit twee hoofdantigenen - Fy a en Fy b. Anti-Fy a-antilichamen zijn onvolledige antilichamen, ze tonen hun effect alleen in de indirecte antiglobuline Coombs-test. Later werden de antigenen Fy x, Fy 3 , Fy 4 , Fy 5 ontdekt. De frequentie hangt af van het ras van de persoon, die heeft groot belang voor antropologen. In negroïde populaties is de frequentie van de Fy a-factor 25%, onder de Chinese bevolking, Eskimo's en Australische Aboriginals - bijna 100%, onder blanke mensen - 60-82%.

Dombrock-systeem. In 1973 werden Do a- en Do b-antigenen geïdentificeerd. Factor Do a wordt gevonden in 55-60% van de gevallen, en factor Do b - in 85-90%. Door deze frequentie komt dit serologische bloedsysteem op de vijfde plaats qua informatiefheid voor wat betreft forensische vaderschapsbepaling (Rhesussysteem, MNSs, AB0 en Duffy).

Enzymatische groepen erytrocyten. Sinds 1963 is een aanzienlijk aantal genetisch polymorfe enzymsystemen van menselijke erytrocyten bekend geworden. Deze ontdekkingen speelden een belangrijke rol in de ontwikkeling van de algemene serologie van menselijke bloedgroepen, evenals in het aspect van forensisch medisch onderzoek van betwist vaderschap. De enzymsystemen van erytrocyten omvatten fosfaatglucomutase, adenosinedeaminase, glutamaat-pyruvaattransaminase, esterase-D, enz.

In het huidige stadium is bewezen dat hemolytische ziekte foetus en pasgeborene is een type allo-immune cytopenie die wordt veroorzaakt door immunisatie van de moeder met foetale bloedcellen die antigenen op de membranen dragen die afwezig zijn bij de zwangere vrouw. Dit proces kan te wijten zijn aan verschillende antigenen die zich op het membraan van erytrocyten en andere bloedcellen (bloedplaatjes, neutrofielen) van de foetus bevinden, die de bloedbaan van de moeder transplacentair binnendringen en de vorming van antilichamen in haar veroorzaken. Allo-immune erytropenieën worden het vaakst waargenomen vanwege de onverenigbaarheid van het bloed van de foetus en de moeder voor antigenen van de ABO- en Rhesus-systemen.

De aard van de ontwikkeling van bloedarmoede bij de foetus (hemolytisch, aplastisch) hangt af van het antigeen of de antigenen die het veroorzaken. Tegelijkertijd, bij foetussen met erytropenie verschillende genese, vergelijkbaar klinische verschijnselen ziekten toegankelijk voor niet-invasieve en invasieve verificatiemethoden.

Allo-immune erytropenie, inclusief hemolytische ziekte, van de foetus/pasgeborene (HFPN) is een ziekte die wordt gekenmerkt door hemolyse van erytrocyten en/of onderdrukking van hematopoëse onder invloed van antilichamen die in de moeder worden gevormd tegen antigenen van foetale erytrocyten, die wederzijds de placentabarrière penetreren, manifesteert zich bij de foetus/pasgeborene door bloedarmoede, een toename van bloedblasten van erytrocyten en, vaak, bilirubine.

Aangezien verschillen in het bloed van de moeder en de foetus in termen van erytrocytantigenen van primair belang zijn bij de pathogenese van de ziekte, is het noodzakelijk om hun immunohematologische kenmerken in overweging te nemen.

In het huidige ontwikkelingsstadium van de immunohematologie zijn meer dan 250 erytrocytantigenen bekend, die gewoonlijk in 29 genetisch onafhankelijke systemen. Elk systeem wordt gecodeerd door een of meer genen. RBC-antigenen zijn eiwitten (bijv. Rhesus-systeem), glycoproteïnen of glycolipiden (ABO-systeem).

Van 1980 tot heden is de International Society for Blood Transfusion (ISBT) blijven werken aan de classificatie van bekende medische wetenschap erytrocyten antigenen. Volgens de huidige nomenclatuur zijn alle erytrocytenantigenen onderverdeeld in systemen, verzamelingen en reeksen.

Tabel 1 geeft een lijst weer van de bekende 29 systemen van erytrocytantigenen, daarin gecombineerd volgens het principe van de aanwezigheid van gemeenschappelijke genen die coderen voor hun producten. Het is gebruikelijk om systemen van antigenen in de volgorde van hun ontdekking aan te duiden met driecijferige getallen in oplopende volgorde, beginnend bij 001. Binnen het systeem heeft elk antigeen ook een driecijferig getal. Elk antigeen wordt dus gewoonlijk aangeduid met een getal van zes cijfers.

Collecties combineren antigenen die biochemisch en serologisch verwant zijn op fenotypeniveau, maar geen gemeenschappelijke genen hebben die coderen voor hun producten, en daarom niet voldoen aan de vereisten voor antigeensystemen.

Antigenen waarvoor de genen die ervoor coderen nog niet zijn onderzocht, zijn gegroepeerd in: serie uit twee groepen - met lage en hoge frequentie voorkomen.

RBC alloantigenen conventioneel gedeeld door gemeenschappelijke antigenen, antigenen gemiddelde frequentie van voorkomen en bijzonder antigenen. Gemeenschappelijke antigenen worden bij bijna alle mensen gevonden, dus antilichamen tegen dergelijke antigenen worden zelden gevormd. Als het echter nodig is om een ​​bloedtransfusie uit te voeren bij patiënten met de aanwezigheid van antilichamen tegen veel voorkomende antigenen, ontstaan ​​er in de regel moeilijkheden bij de selectie van donoren. In het geval dat een antigeen wordt verspreid met een frequentie van minder dan 1%, wordt het geclassificeerd als een groep zeldzame antigenen.

tafel 1

RBC-antigeensystemen

Bij patiënten met iso-immunisatie tegen zeldzame antigenen is het in de meeste gevallen moeilijk om een ​​immunohematologisch onderzoek uit te voeren voor verificatie van antilichamen, aangezien dit proces een lange, dure studie vereist met een groot aantal monsters en testsystemen.

sinds klinisch significante vormen hemolytische ziekten worden voornamelijk veroorzaakt door antilichamen die worden gevormd tegen de antigenen van het Rhesus-systeem, het is noodzakelijk om stil te staan ​​​​bij de classificaties die worden voorgesteld voor de antigenen van dit systeem. Er zijn verschillende van dergelijke classificaties. Een van hen is Rhesus-classificatie van Wiener-antigenen. Het is gebaseerd op de veronderstelling dat er slechts één plaats op het Rh-chromosoom is die kan worden ingenomen door een van de acht allelomorfe genen. Elk gen codeert voor de productie van een agglutinogeen, een complex van antigenen. De aanduiding van antigenen volgens Wiener is complex en wordt momenteel niet veel gebruikt in de immunohematologie. Het is echter gebruikelijk dat ze de specificiteit van antilichamen in anti-rhesus-immunoglobuline - "Rho (D)" aanduiden.

Aanbevolen door de WHO Biological Standards Expert Committee voor gebruik Fisher-Reis-classificatie van Rhesus-antigenen. Het is gebaseerd op de veronderstelling dat er drie plaatsen op het Rh-chromosoom zijn voor drie genen. Bovendien bestaat elk gencomplex uit drie antigene determinanten: D of de afwezigheid ervan - d, C of c, E of e in verschillende combinaties.

In onderzoek recente jaren er zijn slechts twee genen aangetoond (RHD en RHCE), verantwoordelijk voor de productie van antigenen van erytrocyten van het Rhesus-systeem. De productie van antigeen D wordt dus gecontroleerd door het gen rechts, terwijl antigenen C, c, E, e - het genoom RHCE. Waarin een groot aantal van antigenen die deel uitmaken van het Rhesus-systeem (48 antigenen) wordt verklaard door mutaties in deze twee genen. Er zijn geen gegevens over de aanwezigheid van antigeen d, aangezien er geen gen is dat verantwoordelijk is voor de synthese van dit antigeen.

Hemolytische ziekte van de foetus en pasgeboren kan ook worden veroorzaakt door andere antigenen van het Rhesus-systeem dan D, evenals andere zogenaamde "onregelmatige" antigenen van andere systemen of een combinatie van verschillende antigenen van één systeem. In dit geval wordt de term "erytrocyt-alloimmunisatie" in de literatuur het vaakst gebruikt om het allo-immuunproces te karakteriseren.

Het is alloimmunisatie voor erytrocytantigenen die de belangrijkste oorzaak is van de ontwikkeling van anemisch syndroom bij de foetus. Dus, volgens het Amerikaanse Center for Disease Control and Prevention (jaar), ondanks het geïmplementeerde programma van immunoprofylaxe, treedt Rh-sensibilisatie op in 6,7 gevallen per 1000 levendgeborenen. Als we daar gevallen van ontwikkeling van alloimmunisatie onder invloed van antigenen van erytrocyten van andere groepen (Kell, Kidd, Duffy) aan toevoegen, dan worden in de Verenigde Staten jaarlijks meer dan 30.000 foetussen met een risico op het ontwikkelen van allo-immuunanemie geregistreerd. Helaas zijn dergelijke volledige statistieken over Russische Federatie is nog niet beschikbaar vanwege de onvoldoende implementatie van gedetailleerde immunohematologische tests van risicopatiënten.

Voor een adequate beoordeling van de aanwezigheid van iso-immunisatie is het dus allereerst noodzakelijk om erytrocytenantilichamen die in het bloed van een zwangere vrouw circuleren, te zoeken en te identificeren.

De rol van erytrocytantigenen bij het optreden van hemolytische ziekte van de foetus en pasgeborene is anders en wordt bepaald door het vermogen van alloantilichamen gevormd tegen een bepaalde klasse van antigenen om erytrocyten te vernietigen of de processen van hun vorming in de foetus te verstoren. Het proces van vorming van immuunantilichamen tegen foetale erytrocytantigenen hangt af van de aanwezigheid van een antigeen dat afwezig is bij de moeder, de immunogeniciteit ervan en het aantal foetale erytrocyten dat de bloedbaan van de zwangere vrouw binnenkomt.

Antilichamen tegen erytrocytantigenen (alloantilichamen) zijn natuurlijk (regulier) en immuun (onregelmatig). Dus in het bloedserum van mensen (behalve individuen met bloedgroep AB) zijn congenitale natuurlijke antilichamen tegen antigenen A en / of B van het ABO-systeem, bestaande uit vier antigenen, constant aanwezig.

De ziekte bij de foetus en vervolgens bij de pasgeborene is te wijten aan de onverenigbaarheid van de erytrocyten van de moeder en de foetus volgens het ABO-antigeensysteem in 10-20% van alle gevallen. Tegelijkertijd ontwikkelt de hemolytische ziekte van de foetus / pasgeborene zich 40 keer vaker bij vrouwen met bloedgroep 0 (I) en een echtgenoot met een andere bloedgroep. Wanneer dit type isoimmunisatie echter optreedt ernstige vormen ziekten bij de foetus en pasgeboren worden alleen in geïsoleerde gevallen waargenomen - 1:3000 geboorten.

Gelagglutinatiemethode voor de bepaling van erytrocytantigenen en anti-erytrocytantilichamen

Invoering

Geltechnologie in microbuisjes (GTM) werd in 1989 voorgesteld door Y. Lapierre. De methode is gebaseerd op de agglutinatie van erytrocyten in Sephadex-agargel die in microbuisjes wordt geplaatst. Meestal is het systeem een ​​plastic kaart die microbuisjes bevat die zijn gevuld met gel (patent DiaMed AG, Zwitserland). Immunohematologische studies op basis van de hemagglutinatiereactie worden gewoonlijk uitgevoerd in vloeistoffasesystemen.

Een van de meest belangrijke voorwaarden het verkrijgen van correcte gegevens van de agglutinatiereactie is de evaluatie van het resultaat. Een zwakke reactie kan verkeerd worden geïnterpreteerd, vooral door onervaren personeel. Vals-zwakke of negatieve resultaten van een indirecte antiglobulinetest kunnen optreden als gevolg van de neutralisatie van het antiglobulinereagens door serumsporen als gevolg van onvoldoende effectieve wassing van rode bloedcellen. Onvoldoende vermenging van rode bloedcellen en de elutie van zwak gefixeerde antilichamen tijdens het wasproces kunnen fouten veroorzaken in de indirecte antiglobulinetest.

De gelagglutinatietechniek is ontwikkeld om hemagglutinatiereacties te standaardiseren en betrouwbare resultaten. De geltechnologie zorgt voor de scheiding van erytrocyten tijdens het centrifugeren, terwijl niet-geagglutineerde erytrocyten door de gel gaan en zich op de bodem van de buisjes nestelen ( negatief resultaat), terwijl de geagglutineerde worden vastgehouden op het oppervlak of in de dikte van de gel ( positief resultaat). Gelcentrifugeren kan de laatste fase zijn van elke op hemagglutinatie gebaseerde serologische test, behalve voor methoden die dispersie vereisen om het resultaat te evalueren.

Het scala aan uitgevoerde tests omvat fenotypering van erytrocyten (inclusief zwakke antigeenvarianten), antiglobulinetesten, screening en identificatie van antilichamen, compatibiliteitstests en enkele andere.

Principe van de geltest

Gebufferde dextrangel Sephadex TM G 100 superline kan neutraal zijn of specifieke antisera of een antiglobulinereagens op een gelmatrix bevatten. Rode bloedcellen of een mengsel van rode bloedcellen en serum worden op de gel aangebracht. Cellen worden altijd vóór sera aangebracht - in tegenstelling tot standaard serologische technieken - zodat de geteste sera niet in contact komen met de gel, wat vooral belangrijk is bij het uitvoeren van een antiglobulinetest. Na incubatie volgt centrifugeren in een strikt gedefinieerde modus. Als niet aan de centrifugatievoorwaarden wordt voldaan (de centrifugatie is niet lang genoeg of te zacht), kunnen fout-positieve resultaten optreden. Vals-negatieve resultaten kunnen ook optreden als de voorwaarden (forcering) van centrifugeren worden geschonden. Het gebruik van een automatische ID-centrifuge (Diamed) elimineert deze problemen. Drie soorten gel worden vaak gebruikt voor het testen:

1. neutraal, zonder specifieke antilichamen (gebruikt voor het zoeken en identificeren van antilichamen met zoutoplossing en enzymatische methoden, de koude fase van de test voor compatibiliteit van het bloed van de donor en de ontvanger);
2. specifiek, bevattende antilichamen (monoklonaal of polyklonaal) tegen menselijke erytrocytantigenen (gebruikt voor het typeren van erytrocytantigenen van de ABO-, Rhesus-, Kell-systemen, enz.)
3. antiglobuline, dat (polyspecifieke of monospecifieke) antilichamen bevat tegen humane immunoglobulinen en componenten van het complementsysteem (gebruikt voor directe en indirecte antiglobulinetest (Coombs-reactie) bij het zoeken en identificeren van auto- en allo-immune antilichamen, een test voor de compatibiliteit van donor en ontvanger bloed).

Getest bloed wordt toegevoegd aan: bovenste deel microbuisjes van diagnostische kaarten, en tijdens centrifugatie worden geagglutineerde en niet-geagglutineerde erytrocyten als volgt gescheiden: niet-geagglutineerde erytrocyten hebben een grootte die vergelijkbaar is met de grootte van geldeeltjes en gaan er vrij doorheen onder invloed van centrifugale kracht, vormen een compacte rode neerslaan op de bodem van de microbuis - een negatief resultaat; geagglutineerde erytrocyten, vanwege hun grote omvang, blijven hangen op het oppervlak van de gel of in de dikte ervan - een positief resultaat.

Vaste agglutinatie in de gel maakt het gemakkelijk om het resultaat van de reactie te evalueren, en de aanwezigheid van een controlemicrobuisje in de diagnostische kaart bevestigt de betrouwbaarheid van de verkregen gegevens.

Afhankelijk van de sterkte van de agglutinatiereactie in het gelmedium werd de volgende beoordeling van de verkregen resultaten aanvaard:

• sterk positief (++++) - de gevormde erytrocytagglutinaten bleven op het geloppervlak hangen;
• positieve (+++) - agglutinaten bevinden zich in het bovenste derde deel van de gelkolom;
• zwak positief (++) - agglutinaten worden gefixeerd in de bovenste tweederde van de gel;
• zeer zwak positieve (+) - agglutinaten bevinden zich in het onderste derde deel van de gel;
• negatieve (-) - erytrocyten vormen een compact sediment op de bodem van de microbuis.

Apparatuur en reagentia

• ID-kaarten voor de bepaling van erytrocytantigenen en anti-erytrocytantilichamen;
• ID-centrifuge voor kaartcentrifugeren;
• thermostaat op +37°С;
• standaard voor reageerbuizen en kaarten;
• reageerbuisjes met een inhoud van 5 en 10 ml;
• halfautomatische eenkanaalspipetten (10, 25, 50 µl);
• rubberen chirurgische handschoenen;
• verdunningsoplossing 1 (bromelaïne-oplossing);
• verdunningsoplossing 2 (oplossing met lage ionsterkte - LISS, RNIS);
• 0,9% natriumchloride-oplossing;
• standaard getypeerde menselijke erytrocyten voor detectie van antilichamen en kruisreacties.

Kenmerken van identificatiekaarten

Identificatiekaarten (ID-kaarten) Dia-Med zijn plastic kaarten waarin zes microbuisjes zijn ingebouwd. Vijf buisjes bevatten een mengsel van gel en antisera. Elke kaart heeft een zesde controlebuisje met een neutrale gel zonder antilichamen (ctl). Buisjes zijn op de ID-kaart gelabeld volgens de gedetecteerde antigenen, bijvoorbeeld: A-B-AB-D-CDE-ctl of C-c-E-e-K-ctl. Identificatiekaarten voor het detecteren van antilichamen tegen erytrocytantigenen hebben enkele verschillen, bijvoorbeeld "Coombs / Enzyme Test" -kaarten: drie reageerbuisjes aan de linkerkant bevatten een gel die antilichamen bevat tegen menselijke globulinen (monospecifieke anti-IgD of polyspecifieke - tegen immunoglobulinen van verschillende klassen) - Coombs-reactie. De volgende drie buizen bevatten alleen een neutrale gel die is ontworpen om antilichamen tegen erytrocytantigenen in een zout medium te detecteren.

Algemene regels voor het gebruik van identiteitskaarten

1. Identificatiekaarten dienen op een droge, donkere plaats bij een temperatuur van 18-25°C te worden bewaard. De vervaldatum staat vermeld in het paspoortgedeelte van elke kaart en op de verpakkingsdozen.
2. Oplossingen voor de bereiding van een suspensie van erytrocyten, evenals standaardsera en standaard ID-erytrocyten die in individuele onderzoeken worden gebruikt, moeten worden bewaard op een droge, donkere plaats bij een temperatuur van 2-8°C. De vervaldatum staat vermeld op het etiket van elke injectieflacon en op de verpakking.
3. Om te voorkomen dat je valse resultaten onderzoek, gebruik geen reagentia en kaarten waarvan de houdbaarheidsdatum is verstreken of die zijn gedroogd, die gasbellen bevatten of als de schaal is beschadigd.
4. Bloed wordt geoogst met behulp van moderne flebotomietechnieken, en arterieel, capillair en navelstrengbloed (zonder wassen) is ook geschikt. Zowel volbloedmonsters (afgenomen in een schone, droge reageerbuis) als bloedmonsters met conserveringsmiddelen en stabilisatoren zijn geschikt voor onderzoek.

Typering van erytrocytantigenen

DiaMed ID-kaarten zijn ontworpen voor gelijktijdige bepaling van de ABO-bloedgroep en Rh-affiliatie van donor- en ontvangererytrocyten (inclusief hun zwakke antigeenvarianten), evenals voor het typeren van andere erytrocytantigenen. DiaMed ID-kaarten kunnen worden gebruikt in plaats van of parallel met isohemagglutinerende sera, anti-D, anti-DCE-reagentia, anti-A, anti-B, anti-D en anti-D Super coliklonen.

• [show] .

  De beginfase wordt op verschillende manieren uitgevoerd, afhankelijk van het type gebruikte identiteitskaarten, die polyklonale (zie paragraaf 1a hieronder) of monoklonale (zie paragraaf 16) antilichamen bevatten:

  1a) Maak een suspensie van de bestudeerde erytrocyten in de oplossing voor het verdunnen van ICID-kaarten die polyklonale antilichamen bevatten) waarvoor:

  • bewaar Verdunningsoplossing 1 totdat deze op kamertemperatuur is;
  • bereid een 5% suspensie van testerytrocyten in verdunningsoplossing 1 door 0,5 ml verdunningsoplossing 1 en 50 µl van het te testen volbloed of 25 µl erytrocytenmassa in een reageerbuis te doen;
  • meng voorzichtig en incubeer 10 min bij kamertemperatuur;
  • gebruik niet later dan 15 minuten na incubatie.

  16) Bereid een suspensie van testerytrocyten in verdunningsoplossing 2 (ID-kaarten met monoclinale antilichamen) waarvoor:

  • bewaar Verdunningsoplossing 2 totdat deze op kamertemperatuur is;
  • label schone reageerbuizen;
  • bereid een 5% suspensie van testerytrocyten in verdunningsoplossing 2 door 0,5 ml verdunningsoplossing 1 en 50 µl van het te testen volbloed of 25 µl erytrocytenmassa in een reageerbuis te doen.
• Verdere acties [show] .
  1. Markeer de ID-kaart (N van het testserummonster of volledige naam van de patiënt).
  2. Verwijder de beschermfolie van de kokers van de ID-kaart.
  3. Voeg 10 µl testerytrocyten, bereid volgens punt 1a, of 50 µl testerytrocyten, bereid volgens punt 16, toe aan elk reageerbuisje van de ID-kaart.
  4. Installeer de ID-kaarten in de ID-centrifugerotor (met verplichte balancering met andere ID-kaarten, mogelijk ongebruikt).
  5. Centrifugeer ID-kaarten (tijd en snelheid van centrifugeren zijn constant en worden automatisch ingesteld).
  6. Evalueer het testresultaat: Het resultaat in het controlemicrobuisje - "ctl" - moet altijd negatief zijn. Een positieve reactie in de "controle" kan te wijten zijn aan de aanwezigheid van auto-antilichamen en niet-specifieke plasma-eiwitten. Als de "controle" positief is - de bepaling is onbetrouwbaar, moet deze worden herhaald na een enkele wasbeurt van het erytrocytenmonster met 0,9% natriumchloride-oplossing of verdunningsoplossing 2.
  7. Voer de resultaten van de bepaling van elk antigeen in de juiste kolom van de ID-kaart in (op het witte veld onder elk antigeen).
  8. Identificeer het resultaat volgens het volgende schema (Tabel 18.7-18.9)

  Tabel 18.7. De resultaten van het onderzoek naar ABO-bloedgroepantigenen en Rh-affiliatie in de ABO/Rh ID-kaart
  Detecteerbare antigenen					Conclusie
  MAAR	BIJ	AB	D	CDE
  +	+	+	+	+	AB Rh+
  +	+	+	-	-	AB Rh-
  +	-	+	+	+	Een Rh+
  +	-	+	-	-	En Rh-
  -	+	+	+	+	In Rh+
  -	+	+	-	-	in Rh-
  -	-	-	+	+	0 Rh+
  -	-	-	-	-	0 Rh-
  Opmerking: De specificiteit van het onderzoek wordt bevestigd door een negatief resultaat in het controlebuisje van de ID-kaart.

  Tabel 18.8 Bepaling van antigenen van erytrocyten van het ABO-systeem
  Bloedtype
  	anti-A	anti-B	anti-AB
  0(1)	-	-	-
  A1(II)	++++	-	++++
  А2(II)	++++	-	++++
  А3(II)	++/+++	-	++/++++
  Ax(II)*	-/++	-	+/++
  B(II)	-	++++	++++
  В3(III)	-	+/+++	+/+++
  Bx (III)*	-	-/++	-/++
  A1B(IV)	++++	++++	++++
  A2B(IV)	+++/++++	++++	++++
  Opmerking: * - bepaling van zeer zwakke varianten van antigenen A en B vereist nader onderzoek.

  Tabel 18.9 Definitie Rh-affiliatie (D, CDE)
  rhesus aansluiting	Resultaten van serumonderzoek
  	Anti-D	Anti-CDE
  D-positief	++++	++++
  D-negatief	-	-
  D-negatief, C	E-positief*	-
  Zwak positief (D u)	van ± tot +++	van +++ tot ++++
  Opmerking: * - Positieve reactie met anti-CDE serum at terugslag met anti-D-serum duidt op de aanwezigheid van C-, E-antigenen en vereist verder typen met behulp van ID-kaarten: C-c-E-e-K-stl of C-Cw -c-E-e-K

Gebruikte ID-kaarten

Bij het bepalen van bloedgroepen en Rh-affiliatie worden polyklonale groepen gebruikt (tabel 18.10 [show] ) en monoklonaal (tabel 18.11 [show] ) reagentia. De meest voorkomende toepassing in de praktijk vanwege: economische haalbaarheid vind monoklonale sera.

Door moderne classificatie individuen met een verzwakte variant van het D-antigeen die anti-D-antilichamen kan produceren, vallen in zeven categorieën. Categorie VI heeft de hoogste frequentie van voorkomen en praktische betekenis, waarvan de erytrocyten alleen het Z-epitoop van het antigeen D dragen.Personen van categorie VI (Rh-negatieve ontvangers, maar Rh-positieve donoren!) Kunnen antilichamen produceren tegen onveranderde D en gedeeltelijke D van alle andere categorieën. Om de bloedgroep te bevestigen, worden verschillende ID-kaarten gebruikt: D (IV -) - voor ontvangers, D (IV +) - voor donoren.

Bepaling van de ABO-bloedgroep en Rh-accessoires wordt uitgevoerd door het identificeren van specifieke antigenen en antilichamen (dubbele of kruisreactie) (Tabel 18.12 [show] ).

Voor een diepgaand onderzoek worden andere kaarten gebruikt (Tabel 18.13-18.14 [show] ).

Detectie van anti-erytrocytenantilichamen

methode principe:

De testsera en standaard erytrocyten voor antilichaamdetectie worden aan de bovenkant van de microbuisjes toegevoegd. Na incubatie en centrifugatie blijven geagglutineerde erytrocyten in het bovenste deel van de buis, omdat ze niet door de gel gaan vanwege grote maat agglutinaten (positief resultaat). Bij afwezigheid van antilichamen tegen antigenen van testerytrocyten worden geen agglutinaten gevormd. Niet-geagglutineerde rode bloedcellen gaan gemakkelijk door de gel en bezinken op de bodem van de buis (negatief resultaat). De aard van agglutinatie bij de detectie van antilichamen tegen erytrocyten hangt af van de titer van antilichamen, hun activiteit en wordt geschat van ++++ tot +.

• Onderzoeksalgoritme [show] .

  Getypte erytrocyten vóór het onderzoek moeten eerst tweemaal uit het conserveermiddel worden gewassen met 0,9% natriumchloride-oplossing en vervolgens de volgende stappen uitvoeren:

  • bewaar Diluent 2 tot kamertemperatuur is bereikt;
  • label buizen;
  • bereid een 0,8% suspensie van getypeerde erytrocyten in verdunningsoplossing 2 door 1,0 ml verdunningsoplossing 2 en 10 µl bloed in een reageerbuis te plaatsen;
  • verwijder de beschermfolie van de ID-kaart;
  • markeer de ID-kaart (nummer van het testserummonster of volledige naam van de patiënt);
  • voeg 50 µl standaard erytrocyten toe aan microbuisjes;
  • voeg 25 µl serum of plasma van het testmonster toe aan elk microbuisje;
  • incubeer gedurende 15 minuten bij een temperatuur van +37 "C;
  • centrifugeer ID-kaarten in de ID-centrifuge (tijd en snelheid van centrifugeren zijn constant en worden automatisch ingesteld).

  Opmerking: standaard erytrocyten van het paneel ID-DiaCell I-II-III en ID-DiaCell I-Ii-III P van DiaMed zijn klaar voor gebruik zonder voorafgaande wassen en behandeling met verdunningsoplossing 2.

• interpretatie van resultaten [show] .

  Een positieve reactie betekent de aanwezigheid van immuunantilichamen in het testmonster.

  Als er is positieve reactie bij alle erytrocyten van het ID-DiaCell-paneel wordt aanbevolen een autocontrole uit te voeren om auto-antilichamen in het testmonster uit te sluiten.

  Als de reactie negatief blijft bij een of meer RBC's van het ID-DiaCell-panel, kan de specificiteit van de antilichamen worden bepaald met behulp van het bijbehorende antigeenprofileringsblad dat bij alle ID-DiaCell-verpakkingen wordt geleverd. Zorg er daarbij voor dat de nummers van het ID-DiaCell1-paneel en het bijbehorende blad overeenkomen.

  Als met dit panel de antilichaamspecificiteit niet kan worden bepaald, wordt aanbevolen om door te gaan met identificatie met behulp van het ID-DiaPanel en/of ID-DiaPanel P geavanceerde erytrocytenpanel (afhankelijk van de oorspronkelijk gebruikte methode).

Screening en identificatie van antilichamen

Antilichaamscreening wordt zowel in een neutrale gel als in een gel met een antiglobulinereagens uitgevoerd (Tabel 18.15-18.16 [show] ). In het eerste geval worden met enzym behandelde erytrocyten voor het onderzoek gebruikt, in het tweede geval wordt een suspensie van erytrocyten in een oplossing met lage ionsterkte gebruikt. Screening en identificatie van antilichamen worden uitgevoerd met behulp van een standaard panel van erytrocyten. Bij het evalueren van de effectiviteit van de geltest voor screening en identificatie van antilichamen, werd de hogere gevoeligheid gevonden in vergelijking met traditionele methoden.

Methoden voor de studie van antilichamen tegen erytrocytantigenen

• Antiglobulinetest (indirecte Coombs-reactie) [show] .

  De indirecte antiglobulinetest (NAT) wordt gebruikt om anti-RBC-antilichamen te detecteren. Normaal gesproken wordt NAT in twee stappen uitgevoerd:

  1. incubatie van erytrocyten en serum (fixatie van antilichamen) gevolgd door wassen om ongebonden globulinen te verwijderen; het uitvoeren van een indirecte antiglobulinetest in een geltest vereist geen wassen van erytrocyten!
  2. incubatie van gewassen erytrocyten met anti-humaan globuline (AHG). Agglutinatie duidt op de aanwezigheid in het serum van antilichamen die in vitro aan erytrocytantigenen hebben gebonden.

  NAT wordt gebruikt voor:

  1. bepaling in het serum van de ontvanger van antilichamen tegen de erytrocyten van de donor - bij het opzetten van een test op compatibiliteit;
  2. bij het screenen van "onverwachte" anti-erytrocyt-antilichamen;
  3. in de studie van anti-erytrocyt-antilichamen bij zwangere vrouwen;
  4. in de studie van antilichamen in het serum van patiënten met auto-immuun hemolytische anemie.

  Definitie voortgang:

  • voeg 50 µl suspensie van getypte erytrocyten toe aan drie reageerbuisjes van de ID-kaart die zich aan de linkerkant bevindt;
  • voeg 25 µl van het testserum toe aan de reageerbuisjes;
  • centrifugeer ID-kaarten gedurende 10 minuten;
  • het resultaat van het onderzoek evalueren. Vul het resultaat in op de ID-kaart.

  Definitie resultaten:

  • een positief resultaat duidt op de aanwezigheid van immuun (allo) antilichamen in het testserum of plasma (gebruik de tabel bij standaard erytrocyten om de specificiteit van antilichamen te bepalen);
  • een negatief resultaat wijst op de afwezigheid van immuunantilichamen in het testserum of plasma.
• enzymatische methode: [show] .

  Behandeling met proteolytische enzymen verhoogt de agglutineerbaarheid van rode bloedcellen.

  Definitie voortgang:

  • voeg 50 µl van een suspensie van standaard getypeerde erytrocyten toe aan de drie buisjes van de ID-kaart aan de rechterkant;
  • voeg 25 µl verdunningsoplossing 1 toe aan de buisjes;
  • voeg 25 µl van het testserum toe aan de reageerbuisjes.

  Opmerking: Verdunningsoplossing 1 wordt niet toegevoegd als erytrocyten van het standaardtype die zijn voorbehandeld met een proteolytisch enzym (bijv. ID-DiaCell I-II-III P van DiaMed) worden gebruikt voor het testen.

  • incubeer gedurende 15 minuten bij +37°C;
  • centrifugeer ID-kaarten in een W-centrifuge gedurende 10 min (parameters worden automatisch ingesteld);
  • vul het resultaat in op de ID-kaart.

  Onderzoeksresultaten:

  • een positief resultaat wijst op de aanwezigheid van allo-antilichamen in het testserum of plasma (om de specificiteit van antilichamen te bepalen, gebruikt u de tabel bij standaarderytrocyten);
  • een negatief resultaat wijst op de afwezigheid van allo-antilichamen in het testserum of plasma.
• Koude agglutinatiemethode [show] .

  Definitie voortgang:

  • incubeer verdunningsoplossing 2, getypte erytrocyten en ID-kaarten gedurende 30 minuten bij een temperatuur van 2-8°C;
  • behandel getypeerde erytrocyten met verdunningsoplossing 2, waarvoor:
    • markeer de reageerbuis;
    • bereid een 0,8% suspensie van getypeerde erytrocyten in verdunningsmiddel 2 door 1,0 ml verdunningsmiddel 2 en 10 µl bloed in een reageerbuis te doen.

  Opmerking: Standaard ID-DiaCell RBC's (DiaMed) zijn klaar voor gebruik en hoeven niet te worden verdund;

  • voeg 50 µl van een suspensie van getypeerde erytrocyten behandeld met verdunningsoplossing 2 toe aan drie reageerbuisjes van de ID-kaart die zich aan de rechterkant bevindt;
  • voeg 25 µl van het testserum toe aan deze buisjes;
  • incubeer gedurende 30 minuten bij een temperatuur van 2-8 C;
  • centrifugeer de ID-kaarten in de ID-centrifuge gedurende 10 minuten (de parameters worden automatisch ingesteld);
  • het resultaat van het onderzoek evalueren;
  • vul het resultaat in op de ID-kaart. Onderzoeksresultaten:
  • een positief resultaat duidt op de aanwezigheid van koude antilichamen in het testserum of plasma (om de specificiteit van antilichamen te bepalen, gebruikt u de tabel bij standaard erytrocyten);
  • een negatief resultaat wijst op de afwezigheid van koude antilichamen in het testserum of plasma.

  In aanwezigheid van koude of warme auto-antilichamen in het testserum, vals positieve resultaten. Om ze uit te sluiten, moet u autocontrol instellen:

  • bereid een 0,8% suspensie van testbloederytrocyten in verdunningsoplossing 2 door 10 µl volbloed toe te voegen aan 1,0 ml verdunningsoplossing 2;
  • voeg 50 µl van de bereide erytrocytensuspensie toe aan het ID-kaartbuisje aan de linkerkant (voor de Coombs-reactie), of aan het ID-kaartbuisje aan de rechterkant (voor de enzymmethode en koude agglutinatie);
  • voeg 25 µl van het testserum toe aan de reageerbuisjes van de ID-kaart (voor de enzymatische methode is het noodzakelijk om nog eens 25 µl verdunningsoplossing 1 aan de buisjes toe te voegen);
  • Incubeer de kaarten gedurende 15 minuten bij +37°C (voor de Coombs-reactie en de enzymatische methode) of bij 2-8°C (voor autocontrole door koude agglutinatie).

  Een positief resultaat in de autocontrole wijst op de aanwezigheid van auto-antilichamen in het testserum.

De compatibiliteit van donor- en ontvangerbloed bepalen

Het doel van de test voor individuele compatibiliteit is om transfusies van hemocomponenten die onverenigbaar zijn met erytrocytantigenen te voorkomen. Het testen van het serum van de ontvanger met de RBC's van de beoogde donor is het meest betrouwbare manier detectie van antilichamen die schade kunnen veroorzaken aan getransfundeerde erytrocyten, posttransfusiereacties en complicaties van het hemolytische type. Met deze test kunt u:

1. bevestig de ABO-compatibiliteit van de donor en ontvanger;
2. detectie van antilichamen in het serum van de ontvanger gericht tegen de erytrocytantigenen van de donor.

Testen op individuele compatibiliteit van het bloed van donor en ontvanger door erytrocytantigenen (Tabel 18.17 [show] ) vervangt niet het verplichte immunohematologische onderzoek (typering van erytrocytantigenen van de ABO-, Rhesus-, Kell-systemen, detectie van anti-erytrocyt-antilichamen, zoeken en identificeren van allo-anti-erytrocyt-antilichamen), maar vult het alleen aan.

Omdat sensibilisatie zelfs kan optreden na transfusies van individueel geselecteerde hemocomponenten, is het voor het testen op compatibiliteit noodzakelijk om elke keer vers patiëntenserum te gebruiken dat is verkregen na de laatste transfusie van hemocomponenten.

Voor elk donorbloedmonster moet een compatibiliteitstest worden uitgevoerd!

• Definitie vooruitgang [show]
  • bewaar Diluent 2 tot kamertemperatuur (20-24°C);
  • merk ID-kaarten en reageerbuisjes (volledige naam van de donor en ontvanger);
  • bereid een 0,8% suspensie van donor- en ontvangererytrocyten in verdunningsoplossing 2, waarvoor voeg 1 ml verdunningsoplossing 2 toe aan twee gelabelde buisjes, voeg respectievelijk 10 µl donor- en ontvangerbloed toe;
  • mengen;
  • verwijder de beschermfolie van de bijbehorende ID-kaart;
  • voeg 50 µl van de bereide suspensie van donorerytrocyten toe aan microbuisjes van ID-kaarten 1, 2, 3, 4, 5;
  • voeg 50 µl van de bereide suspensie van erytrocyten van de ontvanger toe aan microbuisjes van ID-kaarten 4, 5, 6;
  • voeg 25 µl van het serum of plasma van de ontvanger toe aan microbuisjes van ID-kaarten 1, 2, 3, 6;
  • voeg 25 µl verdunningsmiddel 1 toe aan microbuisje 4 op ID-kaart (enzymtest);
  • incubeer gedurende 15 minuten bij een temperatuur van +37°C;
  • centrifuge (tijd en snelheid van centrifugeren zijn constant en worden automatisch ingesteld);
  • het resultaat van het onderzoek evalueren. Compatibiliteit voor antigenen A, B, D (1, 2, 3 microbuisjes):
  • een duidelijk positief of negatief resultaat geeft de overeenstemming aan van de A, B, O-antigenen van de bloederytrocyten van de donor en ontvanger;
  • als een dubbele populatie erytrocyten wordt waargenomen (positief en negatief resultaat in één microbuisje), zijn de antigenen A, B, D van de donor en ontvanger niet identiek!
  • bepaling van compatibiliteit voor antigenen A, B, D is alleen geldig bij een negatieve reactie in het 6e microbuisje (autocontrole).
• Compatibiliteitstestresultaten (4,5 microbuisjes) [show]
  • een positief resultaat in microbuisjes van ID-kaarten 4, 5 met een negatieve controle (microbuisje 6) duidt op onverenigbaarheid van het bloed van donor en ontvanger in termen van erytrocytantigenen;
  • een negatief resultaat in microbuisjes van ID-kaarten 4, 5, 6 geeft de verenigbaarheid van het bloed van de donor en de ontvanger in termen van erytrocytantigenen aan;
  • een positieve reactie in de microtube ID-kaart 6 (autocontrole) vereist verdere bepaling van auto- en allo-antilichamen in het serum (plasma) van de ontvanger.
• Beperkingen [show]
  • zeker geneesmiddelen kan veroorzaken vals positieve reactie Coombs;
  • met wat pathologische aandoeningen patiënten kunnen een positieve Coombs-reactie hebben;
  • bacteriële of andere verontreiniging van het gebruikte materiaal kan een vals-positieve of vals-negatieve uitslag veroorzaken;
  • fibrineresten in de testmonsters kunnen niet-geagglutineerde cellen binden en, na centrifugeren, een dunne roze lijn vormen op het oppervlak van de gel, terwijl de meeste cellen zich op de bodem van de microbuis zullen bevinden;
  • suspensies van rode bloedcellen die overmatig geconcentreerd zijn, kunnen vals-positieve reacties veroorzaken.
• Opslag- en gebruiksomstandigheden [show]

  DiaMed ID-kaarten dienen gedurende de gehele houdbaarheidsperiode op kamertemperatuur (+18-25°C) op een droge plaats te worden bewaard.

  Kaarten zijn 18 maanden geldig. De houdbaarheid van de reagentia is 2 jaar.

  De resultaten van het onderzoek op de kaart worden ongewijzigd opgeslagen:

  • 48 uur bij kamertemperatuur;
  • drie weken in de koelkast (bij +2-8°C) met het bovenste deel van de ID-kaart verzegeld met plakband.

  Het onderste veld van de ID-kaart kan worden verwijderd of afgesneden en worden gebruikt als document in een medische anamnese- of dossierkast.

  Het is niet toegestaan ​​om ID-kaarten te gebruiken met tekenen van uitdroging van de gel, bubbels in de dikte of beschadiging van de beschermfolie.

  Monsters en reagentia moeten voor gebruik op kamertemperatuur worden gebracht.

Conclusie

De geltest is een eenvoudige, reproduceerbare, snelle en zeer gevoelige methode die de onmiddellijke detectie van zwakke varianten van erytrocytantigenen mogelijk maakt. De test wordt alleen macroscopisch geëvalueerd. Na een korte training van het personeel dat nodig is om: correcte uitvoering test, minimaliseert de tijd die wordt besteed en de fouten die optreden bij het gebruik van traditionele methoden.

Met de geltest kunt u laboratoriummethoden standaardiseren om een ​​objectieve beoordeling te geven van de resultaten van de hemagglutinatiereactie. De stabiliteit van de testresultaten stelt u in staat om de verkregen gegevens dubbel te controleren, wat nodig is voor controle. Testresultaten kunnen worden gekopieerd voor archivering of voor educatieve doeleinden in moeilijk te diagnosticeren gevallen. De test gebruikt een kleine hoeveelheid serum of rode bloedcellen, wat uiterst belangrijk is voor pediatrische klinieken.

Het gebruik van het gelsysteem vermindert het risico op infectie van het personeel, zelfs bij het hanteren van mogelijk geïnfecteerde monsters. De geltest kan worden gebruikt om de compatibiliteit van erytrocytenantigenen voorafgaand aan bloedtransfusie te testen. Hiervoor wordt gebruik gemaakt van een indirecte antiglobulinetest en een eenstaps enzymatische methode.

De geltest wordt uitgevoerd en geëvalueerd volgens de bovenstaande regels. De afwezigheid van erytrocytenwasstappen bij het uitvoeren van een indirecte antiglobulinetest maakt een efficiënter gebruik mogelijk werktijd, en ook vanwege de stabiliteit van de testresultaten om alle verkregen resultaten te controleren.

Bron: Medisch laboratorium diagnostiek, programma's en algoritmen. Ed. prof. Karpishchenko AI, St. Petersburg, Intermedica, 2001