Badanie przesiewowe dawców. Immunohematologiczne testy laboratoryjne Antygeny (Ag) erytrocytów

Całkowity białko krwi 60-80 g/l. Istnieje kilka frakcji białek, które pełnią określone funkcje.

1. Albuminy (40-60 g/l) mają wysoką aktywność koloidalno-osmotyczną.

2. Globuliny a, b, g (20-40 g/l) tworzą Odporność humoralna, tworząc różne przeciwciała zwane immunoglobulinami (IgM, IgG).

3. Fibrynogen (2-4 g/l) jest głównym czynnikiem mechanizmu krzepnięcia krwi.

ANTYGENY(gr. ànti – przeciw, genos – twórz) – substancje, które mają zdolność wywoływania powstawania przeciwciał w organizmie i reagowania z nimi. W błonę erytrocytów wbudowanych jest szereg specyficznych polisacharydów – kompleksów aminokwasowych o właściwościach antygenowych. Te kompleksy nazywane są aglutynogenami.

Do chwili obecnej w ludzkich erytrocytach znaleziono ponad 400 antygenów zlokalizowanych w błonie erytrocytów, z których 140 połączono w 20 genetycznie kontrolowanych układów. Pozostałe antygeny są wspólne lub indywidualne. Do praktyka kliniczna najważniejsze to system ABO i system Rh (system Rh). Istnieją również grupy Kell-Chelano, Kidd, Lutheran, Duffy, Diego itp. Te ostatnie mają znaczenie tylko przy częstych transfuzjach krwi lub w czasie ciąży niekompatybilnych z żadnym z tych aglutynogenów. Dlatego nie zaleca się wielokrotnego przetaczania krwi od tego samego dawcy.

Antygeny RBC pojawiają się w drugim miesiącu rozwój zarodkowy jednak do czasu narodzin dziecka ich aktywność aglutynacyjna jest niska i wynosi 1/5 aktywności dorosłych.

PRZECIWCIAŁA Substancje reagujące z antygenem. Naturalne przeciwciała są zawsze obecne w osoczu krwi i należą do frakcji gamma globulin. Należą do nich przeciwciała układu ABO – aglutyniny a i b, które pojawiają się u ludzi w pierwszych miesiącach po urodzeniu i dotarciu maksymalny numer do 5-10 roku życia.

REAKCJA AGLUTYNACJI- sklejanie i wytrącanie erytrocytów pod działaniem swoistych przeciwciał - aglutynin. Uważa się, że cząsteczka przeciwciała tworzy mostek między dwoma erytrocytami z dwoma miejscami wiązania. Każdy z tych erytrocytów z kolei wiąże się z innymi erytrocytami i w rezultacie sklejają się. Po przetoczeniu niezgodna krew aglutynacja prowadzi do hemolizy erytrocytów i uwolnienia czynników krzepnięcia. Powstałe skrzepy zatykają małe naczynia i tym samym zakłócają krążenie kapilarne.

Aglutynacja występuje, gdy spotykają się aglutynogeny dawcy o tej samej nazwie i aglutyniny biorcy.

Testy zgodności przetoczonej krwi

Lekarz przetaczający krew jest zobowiązany zapobiegać jej ewentualnej niezgodności z krwią pacjenta, przeprowadzając badania kontrolne, w tym testy zgodności według grup krwi AB0 i czynnika Rh.

Testy zgodności wykonuje się bezpośrednio przed transfuzją. Aby to zrobić, użyj surowicy krwi pacjenta i krwi dawcy z fiolki przygotowanej do transfuzji.

„Układy ludzkich grup krwi i
powikłania po przetoczeniu krwi”, M.A. Umnova

Grupy krwi określa się za pomocą testu aglutynacji w temperaturze pokojowej na porcelanowej lub innej białej płytce o zwilżalnej powierzchni. Istnieją dwa sposoby określenia grupy krwi: użycie standardowych surowic w celu określenia, która grupa aglutynogenów (A lub B) znajduje się w erytrocytach badanej krwi; jednocześnie stosując standardowe surowice i standardowe erytrocyty (metoda krzyżowa). W którym…

W probówce umieszcza się 2 krople surowicy pacjenta, 1 kroplę krwi dawcy i 1 kroplę 33% roztworu poliglucyny, specjalnie przygotowanego do celów laboratoryjnych. Rurka jest wstrząsana, aby wymieszać zawartość, a następnie przechylana prawie do pozycja pozioma by zawartość rozlała się po ściankach i powoli obracała się przez 5 minut Oś pionowa, nawiązując kontakt z mieszaniną surowicy pacjenta ...

Reakcja hemaglutynacji w każdej kropli może być dodatnia lub ujemna. Przy pozytywnej reakcji, zwykle w ciągu pierwszych 10-30 sekund od rozpoczęcia mieszania, w mieszaninie, składającej się ze sklejonych erytrocytów, pojawiają się widoczne gołym okiem małe czerwone ziarna (aglutynaty). Małe aglutynaty stopniowo łączą się w większe, a czasem w płatki. nieregularny kształt. Jednocześnie serum jest całkowicie...

Krew dawcy musi być dwukrotnie przepłukana w probówce o objętości 8–10 razy większej roztwór izotoniczny chlorek sodu przez odwirowanie, następnie zdjąć szmatkę i wykorzystać do badań osad przemytych erytrocytów. Jedną małą (0,01 ml) kroplę przemytych erytrocytów przenosi się do innej probówki, dodaje się do niej 3 krople surowicy pacjenta, miesza się z erytrocytami dawcy i probówkę umieszcza się w ...

I. Zgodnie z wcześniej przygotowanymi oznaczeniami, jedną dużą kroplę (0,1 ml) standardowych surowic z grup 0αβ (I), Aβ (II) i Bα (III) nakłada się na płytkę. Ponieważ stosuje się standardowe surowice z dwóch różnych partii z każdej grupy, otrzymuje się w sumie 6 kropli, które tworzą dwa rzędy po 3 krople w następującej kolejności od lewej do prawej: 0αβ(I), Aβ(II) i Bα(III ). II. Na spodzie talerza...

Wyniki są interpretowane przez ocenę i porównanie wyników otrzymanych ze standardowymi surowicami (dwa górne rzędy) oraz ze standardowymi erytrocytami (dolny rząd). Wyniki reakcji uzyskane przy użyciu standardowych surowic II standardowych erytrocytów powinny być zgodne, tj. wskazywać zawartość aglutynogenów i aglutynin odpowiadających tej samej grupie krwi. Wyniki te można wyrazić...

Do określenia przynależności Rh, tj. do wykrycia obecności lub braku antygenów układu Rh we krwi ludzi, stosuje się standardowe surowice (odczynniki) anty-Rhesus, które różnią się specyficznością, tj. zawierają przeciwciała w stosunku do różne antygeny tego systemu. Do oznaczenia antygenu Rh0 (D) najczęściej stosuje się surowicę anty-Rhesus z dodatkiem 10% roztworu żelatyny lub stosuje się standardowy odczynnik anty-Rhesus przygotowany wcześniej ...

I. W 2 probówkach jedna kropla (0,05 ml) badanych erytrocytów i 2 krople 10% roztworu żelatyny podgrzanych do upłynnienia w ciepła woda(46 - 48°C). II. W jednej z tych probówek do mieszaniny erytrocytów i żelatyny dodaje się 2 krople surowicy anty-Rh. To serum nie jest dodawane do innej probówki, służy jako kontrola...

Probówki są oglądane pod światło gołym okiem lub przez lupę z podwójnym powiększeniem. Wynik jest interpretowany w zależności od obecności lub braku aglutynacji erytrocytów. Z wynikiem pozytywnym aglutynaty są łatwo rozróżnialne w postaci czerwonych ziaren lub płatków na przezroczystym, prawie odbarwionym tle cieczy. Jeśli wynik w probówce jest ujemny, jednolicie zabarwiony kolor różowy, lekko opalizująca ciecz. Próbki…

I. Jedną kroplę (0,05 ml) badanej krwi lub erytrocytów wstrzykuje się do probówki (nie można jej wypłukać ze środka konserwującego), dodać 1-2 krople standardowego uniwersalnego odczynnika anty-Rhesus i wymieszać erytrocyty z odczynnika przez potrząsanie probówką. II. Probówkę przechyla się prawie do pozycji poziomej, aby zawartość rozłożyła się po jej ściankach, a następnie powoli obraca się w tej pozycji...

Dobór dawców odbywa się według jednolitych kryteriów medycznych, co zapewnia bezpieczeństwo, wysoką aktywność i skuteczność krwi i jej składników.

Każdy dawca przed oddaniem krwi przechodzi badanie: zbiera wywiad, przeprowadza dokładne badanie lekarskie i badanie specjalne zidentyfikować przeciwwskazania do oddawania krwi i wykluczyć możliwość przenoszenia patogenów chorób zakaźnych z krwią. Przeprowadzane są badania serologiczne, wirusologiczne i bakteriologiczne krwi dawcy.

Postępy w transfuzjologii klinicznej zmniejszają ryzyko przenoszenia z krwią i jej składnikami patogenów chorób zakaźnych (zakażenie HIV, zapalenie wątroby typu B i C, kiła, zakażenie wirusem cytomegalii itp.).

Główne układy antygenowe krwi

Ustalono, że struktura antygenowa ludzkiej krwi jest złożona, wszystkie komórki krwi i białka osocza różnych ludzi różnią się antygenami. Znanych jest już około 500 antygenów krwi, tworzących ponad 40 różnych układów antygenowych.

Przez układ antygenowy rozumie się zestaw antygenów krwi odziedziczonych (kontrolowanych) przez geny alleliczne.

Wszystkie antygeny krwi są podzielone na komórkowe i osocze. Antygeny komórkowe mają pierwszorzędne znaczenie w transfuzjologii.

Antygeny komórkowe

Antygeny komórkowe to złożone kompleksy węglowodanowo-białkowe (glikopeptydy), strukturalne składniki błony komórkowej krwi. Z innych komponentów Błona komórkowa różnią się immunogennością i aktywnością serologiczną.

Immunogenność - zdolność antygenów do indukowania syntezy przeciwciał, jeśli dostaną się do organizmu, który nie ma tych antygenów.

Aktywność serologiczna - zdolność antygenów do wiązania się z przeciwciałami o tej samej nazwie.

Cząsteczka antygenu komórkowego składa się z dwóch składników:

Schlepper (białkowa część antygenu znajdująca się w wewnętrznych warstwach błony), która określa immunogenność;

Hapten (polisacharydowa część antygenu, znajdująca się w powierzchniowych warstwach błony komórkowej), która determinuje aktywność serologiczną.

Na powierzchni haptenu znajdują się determinanty antygenowe (epitopy) - cząsteczki węglowodanów, do których przyłączone są przeciwciała. Znane antygeny krwi różnią się od siebie epitopami.

Na przykład hapteny antygenów układu AB0 mają następujący zestaw węglowodanów: epitopem antygenu 0 jest fukoza, antygenem A jest N-acetylogalaktozamina, a antygenem B jest galaktoza. Połączone są z nimi przeciwciała grupowe.

Istnieją trzy rodzaje antygenów komórkowych:

erytrocyt;

Leukocyt;

Płytka krwi.

Antygeny RBC

Znanych jest ponad 250 antygenów erytrocytów, tworzących ponad 20 układów antygenowych. 11 układów ma znaczenie kliniczne: AB0, Rh-Hr, MNSs, Kell, Lutheran, Kidd, Diego, Duffy, Dombrock, enzymatyczne grupy erytrocytów.

U ludzi antygeny kilku układów antygenowych są jednocześnie obecne w erytrocytach.

Głównymi układami antygenowymi w transfuzjologii są AB0 i Rhesus. Inne układy antygenowe erytrocytów nie mają obecnie istotnego znaczenia w transfuzjologii klinicznej.

Układ antygenowy AB0

System AB0 jest głównym systemem serologicznym, który określa zgodność lub niezgodność przetoczonej krwi. Składa się z dwóch genetycznie zdeterminowanych aglutynogenów (antygenów A i B) oraz dwóch aglutynin (przeciwciała α i β).

Aglutynogeny A i B znajdują się w zrębie erytrocytów, a aglutyniny α i β znajdują się w surowicy krwi. Aglutynina α jest przeciwciałem przeciw aglutynogenowi A, a aglutynina β jest przeciw aglutynogenowi B. W erytrocytach i surowicy krwi jednej osoby nie mogą występować aglutynogeny i aglutyniny o tej samej nazwie. Kiedy spotykają się antygeny i przeciwciała o tej samej nazwie, dochodzi do reakcji izohemaglutynacji. To właśnie ta reakcja jest przyczyną niezgodności krwi podczas transfuzji krwi.

W zależności od kombinacji antygenów A i B w erytrocytach (i odpowiednio w surowicy przeciwciał α i β) wszyscy ludzie są podzieleni na cztery grupy.

Układ antygenowy Rhesus

Czynnik Rh (czynnik Rh), nazwany tak, ponieważ został odkryty u małp Rhesus, występuje u 85% ludzi, a 15% nie występuje.

Obecnie wiadomo, że układ Rhesus jest dość złożony i jest reprezentowany przez pięć antygenów. Rola czynnika Rh w transfuzji krwi, a także w czasie ciąży, jest niezwykle wysoka. Błędy prowadzące do rozwoju konfliktu Rhesus powodują poważne powikłania a czasem śmierć pacjenta.

Drobne systemy antygenowe

Układy drugorzędowych grup erytrocytów są reprezentowane przez dużą liczbę antygenów. Znajomość tej mnogości systemów jest ważna dla rozwiązywania niektórych problemów antropologii, badań sądowych, a także zapobiegania rozwojowi powikłań poprzetoczeniowych i niektórych chorób u noworodków.

System MNS obejmuje czynniki M, N, S, s. Udowodniono obecność dwóch blisko powiązanych loci genów MN i Ss. Następnie zidentyfikowano inne zróżnicowane warianty antygenów układu MNSs. Zgodnie ze strukturą chemiczną MNS są glikoproteinami.

System R. Układ antygenu P ma pewne znaczenie kliniczne. Zdarzały się przypadki wczesnych i późnych poronień spowodowanych przez izoprzeciwciała. anty-R. Opisano kilka przypadków powikłań poprzetoczeniowych związanych z niezgodnością dawcy i biorcy w układzie antygenu P.

System Kella reprezentowane przez trzy pary antygenów. Największą aktywność immunogenną mają antygeny Kell (K) i Cellano (k). Antygeny układu Kell mogą powodować uczulenie organizmu w czasie ciąży i transfuzji krwi, powodować powikłania transfuzji krwi oraz rozwój choroby hemolitycznej noworodka.

System luterański. Jeden z dawców, o imieniu Luteran, miał w erytrocytach krwi nieznany wcześniej antygen, co doprowadziło do uodpornienia biorcy. Antygen oznaczono Lua. Kilka lat później odkryto drugi antygen tego układu, Lub. Ich częstotliwość: Lu a - 0,1%, Lu b - 99,9%. Przeciwciała anty-Lub są izoimmunologiczne, co potwierdzają również doniesienia o znaczeniu tych przeciwciał w powstawaniu choroby hemolitycznej noworodków. Kliniczne znaczenie antygenów układu luterańskiego jest niewielkie.

System dla dzieci. Antygeny i przeciwciała układu Kidd mają specyficzny wartość praktyczna. Mogą być przyczyną rozwoju choroby hemolitycznej noworodka i powikłań poprzetoczeniowych przy wielokrotnych transfuzjach krwi niezgodnych z antygenami tego układu. Częstość występowania antygenów wynosi około 75%.

System Diego. W 1953 roku w Wenezueli w rodzinie Diego urodziło się dziecko z objawami choroby hemolitycznej. Przy ustalaniu przyczyny tej choroby u dziecka wykryto nieznany wcześniej antygen, oznaczony przez czynnik Diego (Di). W 1955 roku przeprowadzone badania wykazały, że antygen Diego jest cechą rasową charakterystyczną dla ludów rasy mongoloidalnej.

System Duffy'ego składa się z dwóch głównych antygenów - Fy a i Fy b. Przeciwciała anty-Fy a są przeciwciałami niekompletnymi, swoje działanie wykazują jedynie w pośrednim teście antyglobulinowym Coombsa. Później odkryto antygeny Fy x, Fy 3 , Fy 4 , Fy 5 . Częstotliwość zależy od rasy osoby, która ma bardzo ważne dla antropologów. W populacjach Negroidów częstość współczynnika Fy wynosi 25%, wśród populacji chińskiej, Eskimosów i australijskich Aborygenów - prawie 100%, wśród ludzi rasy kaukaskiej - 60-82%.

System Dombrocka. W 1973 zidentyfikowano antygeny Do a i Do b. Czynnik Do a występuje w 55-60% przypadków, a czynnik Do b w 85-90%. Ta częstotliwość stawia ten serologiczny układ krwi na piątym miejscu pod względem informacyjności w zakresie sądowego ustalania ojcostwa (układ Rhesus, MNS, AB0 i Duffy).

Enzymatyczne grupy erytrocytów. Od 1963 r. poznano znaczną liczbę genetycznie polimorficznych układów enzymatycznych ludzkich erytrocytów. Odkrycia te odegrały znaczącą rolę w rozwoju ogólnej serologii grup krwi ludzkiej, a także w aspekcie badań sądowo-lekarskich spornego ojcostwa. Układy enzymatyczne erytrocytów obejmują glukomutazę fosforanową, deaminazę adenozynową, transaminazę glutaminianowo-pirogronianową, esterazę-D itp.

Na obecnym etapie udowodniono, że: choroba hemolityczna płód i noworodek to rodzaj cytopenii alloimmunologicznej spowodowanej immunizacją matki komórkami krwi płodu, które niosą na błonach antygeny nieobecne u ciężarnej kobiety. Proces ten może być spowodowany różnymi antygenami znajdującymi się na błonie erytrocytów i innych komórek krwi (płytek krwi, neutrofili) płodu, które dostają się do krwiobiegu matki przezłożyskowo i powodują powstawanie w niej przeciwciał. Najczęściej obserwuje się erytropenie alloimmunologiczne ze względu na niezgodność krwi płodu i matki z antygenami układu ABO i Rhesus.

Charakter rozwijającej się u płodu anemii (hemolitycznej, aplastycznej) zależy od antygenu lub antygenów ją wywołujących. Jednocześnie u płodów z erytropenią różne genezy, podobny objawy kliniczne choroby dostępne dla nieinwazyjnych i inwazyjnych metod weryfikacji.

Erytropenia alloimmunologiczna, w tym choroba hemolityczna płodu/noworodka (HDFN) jest chorobą charakteryzującą się hemolizą erytrocytów i/lub zahamowaniem hematopoezy pod wpływem powstających u matki przeciwciał przeciwko antygenom erytrocytów płodowych, wzajemnie przenikających przez barierę łożyskową , objawiająca się u płodu/noworodka niedokrwistością , zwiększenie liczby erytrocytów w krwinkach blastycznych i często bilirubiny.

Ponieważ różnice we krwi matki i płodu pod względem antygenów erytrocytów mają pierwszorzędne znaczenie w patogenezie choroby, należy wziąć pod uwagę ich cechy immunohematologiczne.

Na obecnym etapie rozwoju immunohematologii znanych jest ponad 250 antygenów erytrocytów, które są zwykle rozmieszczone w 29 genetycznie niezależne systemy. Każdy system jest kodowany przez jeden lub więcej genów. Antygeny RBC to białka (np. układ Rhesus), glikoproteiny lub glikolipidy (układ ABO).

Od 1980 roku do dnia dzisiejszego Międzynarodowe Towarzystwo Transfuzji Krwi (ISBT) kontynuuje prace nad klasyfikacją znanych nauki medyczne antygeny erytrocytów. Zgodnie z obecnie stosowaną nomenklaturą wszystkie antygeny erytrocytów są podzielone na systemy, kolekcje i serie.

W tabeli 1 przedstawiono listę znanych 29 układów antygenów erytrocytów, połączonych w nich zgodnie z zasadą obecności wspólnych genów kodujących ich produkty. Przyjęło się oznaczać systemy antygenów w kolejności ich wykrywania za pomocą liczb trzycyfrowych w porządku rosnącym, zaczynając od 001. W systemie każdy antygen ma również trzycyfrową liczbę. Tak więc każdy antygen jest zwykle oznaczony sześciocyfrową liczbą.

Kolekcjełączą antygeny, które są pokrewne biochemicznie i serologicznie na poziomie fenotypu, ale nie mają wspólnych genów kodujących ich produkty, a zatem nie spełniają wymagań dla układów antygenowych.

Antygeny, dla których kodujące je geny nie zostały jeszcze zbadane, są pogrupowane w seria z dwóch grup - z niskimi i Wysoka częstotliwość występowanie.

Alloantygeny RBC umownie podzielone przez wspólne antygeny, antygeny średnia częstotliwość występowania oraz rzadki antygeny. Powszechne antygeny występują u prawie wszystkich ludzi, dlatego rzadko powstają przeciwciała przeciwko takim antygenom. Jeśli jednak konieczne jest wykonanie transfuzji krwi u pacjentów z obecnością przeciwciał przeciwko często występującym antygenom, z reguły pojawiają się trudności z doborem dawców. W przypadku dystrybucji antygenu z częstotliwością mniejszą niż 1%, jest on klasyfikowany jako grupa antygenów rzadkich.

Tabela 1

Systemy antygenów RBC

U pacjentów z izoimmunizacją na rzadkie antygeny w większości przypadków trudno jest przeprowadzić badanie immunohematologiczne w celu weryfikacji przeciwciał, ponieważ proces ten wymaga długich, kosztownych badań z wykorzystaniem dużej liczby próbek i systemów testowych.

Ponieważ klinicznie znaczące formy choroby hemolityczne są spowodowane głównie przez przeciwciała utworzone na antygeny układu Rhesus, konieczne jest rozpatrzenie klasyfikacji zaproponowanych dla antygenów tego układu. Istnieje kilka takich klasyfikacji. Jeden z nich jest Klasyfikacja Rhesus antygenów Wienera. Opiera się na założeniu, że na chromosomie Rh jest tylko jedno miejsce, które może zajmować jeden z ośmiu genów allelomorficznych. Każdy gen koduje produkcję aglutynogenu, który jest kompleksem antygenów. Oznaczenie antygenów według Wienera jest złożone i obecnie nie jest szeroko stosowane w immunohematologii. Jednak zwyczajowo określają swoistość przeciwciał w immunoglobulinie anty-Rhesus - „Rho (D)”.

Zalecany przez Komitet Ekspertów ds. Standardów Biologicznych WHO do stosowania Klasyfikacja Fishera-Reisa antygenów Rhesus. Opiera się na założeniu, że na chromosomie Rh znajdują się trzy miejsca na trzy geny. Ponadto każdy kompleks genów składa się z trzech determinant antygenowych: D lub jej brak - d, C lub c, E lub e w różnych kombinacjach.

W badaniach ostatnie lata pokazano tylko dwa geny (RHD oraz RHCE), odpowiedzialny za produkcję antygenów erytrocytów układu Rhesus. Tak więc wytwarzanie antygenu D jest kontrolowane przez gen po prawej stronie, natomiast antygeny C, c, E, e - genom RHCE. W którym duża liczba antygeny tworzące układ Rhesus (48 antygenów) tłumaczy się mutacjami w tych dwóch genach. Brak jest danych na temat obecności antygenu d, ponieważ nie ma genu odpowiedzialnego za syntezę tego antygenu.

Chorobę hemolityczną płodu i noworodka mogą wywołać również antygeny układu Rh inne niż D, a także inne tzw. „nieregularne” antygeny innych układów lub kombinacja kilku antygenów jednego układu. W tym przypadku termin „alloimmunizacja erytrocytów” jest najczęściej używany w literaturze do scharakteryzowania procesu alloimmunologicznego.

To właśnie alloimmunizacja na antygeny erytrocytów jest główną przyczyną rozwoju zespołu anemicznego u płodu. Tak więc, według amerykańskiego Centrum Kontroli i Prewencji Chorób (rok), pomimo wdrożonego programu immunoprofilaktyki, uczulenie na Rh występuje w 6,7 przypadków na 1000 żywych urodzeń. Jeśli dodamy do tego przypadki rozwoju alloimmunizacji pod wpływem antygenów erytrocytów innych grup (Kell, Kidd, Duffy), to w Stanach Zjednoczonych rocznie rejestruje się ponad 30 000 płodów zagrożonych rozwojem anemii alloimmunologicznej. Niestety, takie pełnowymiarowe statystyki dotyczące Federacja Rosyjska nie jest jeszcze dostępny ze względu na niewystarczające wdrożenie szczegółowych badań immunohematologicznych u pacjentów z grupy ryzyka.

Dlatego w celu odpowiedniej oceny obecności izoimmunizacji konieczne jest przede wszystkim poszukiwanie i identyfikacja przeciwciał przeciwko erytrocytom krążących we krwi kobiety w ciąży.

Rola antygenów erytrocytów w występowaniu choroby hemolitycznej płodu i noworodka jest różna i zależy od zdolności alloprzeciwciał utworzonych do pewnej klasy antygenów do niszczenia erytrocytów lub zakłócania procesów ich powstawania u płodu. Proces powstawania przeciwciał immunologicznych przeciwko antygenom erytrocytów płodowych zależy od obecności antygenu nieobecnego u matki, jego immunogenności, a także liczby erytrocytów płodowych dostających się do krwiobiegu ciężarnej.

Przeciwciała przeciwko antygenom erytrocytów (aloprzeciwciała) są naturalne (regularne) i immunologiczne (nieregularne). Tak więc w surowicy krwi ludzi (z wyjątkiem osób z grupą krwi AB) stale obecne są wrodzone naturalne przeciwciała przeciwko antygenom A i / lub B układu ABO, składające się z czterech antygenów.

Choroba u płodu, a następnie u noworodka, jest spowodowana niezgodnością erytrocytów matki i płodu w układzie antygenowym ABO w 10-20% wszystkich przypadków. Jednocześnie choroba hemolityczna płodu/noworodka rozwija się 40 razy częściej u kobiet z grupą krwi 0 (I) i współmałżonka z inną grupą krwi. Jednak, gdy wystąpi ten rodzaj izoimmunizacji ciężkie formy choroby płodu i noworodka obserwuje się tylko w pojedynczych przypadkach - 1:3000 urodzeń.

Metoda aglutynacji żelowej do oznaczania antygenów erytrocytów i przeciwciał antyerytrocytowych

Wstęp

Technologia żelowa w mikroprobówkach (GTM) została zaproponowana przez Y. Lapierre'a w 1989 roku. Metoda opiera się na aglutynacji erytrocytów w żelu agarowym Sephadex umieszczonym w mikroprobówkach. Zazwyczaj system to plastikowa karta zawierająca mikroprobówki wypełnione żelem (patent DiaMed AG, Szwajcaria). Badania immunohematologiczne oparte na reakcji hemaglutynacji zwykle prowadzi się w układach fazy ciekłej.

Jeden z najbardziej ważne warunki uzyskanie prawidłowych danych o reakcji aglutynacji jest oceną wyniku. Słaba odpowiedź może zostać źle zinterpretowana, zwłaszcza przez niedoświadczony personel. Fałszywe słabe lub ujemne wyniki pośredniego testu antyglobulinowego mogą wystąpić z powodu neutralizacji odczynnika antyglobulinowego przez śladowe ilości surowicy z powodu niewystarczająco skutecznego płukania krwinek czerwonych. Nieodpowiednie mieszanie krwinek czerwonych i elucja słabo utrwalonych przeciwciał podczas procesu płukania może powodować błędy w pośrednim teście antyglobulinowym.

Technika aglutynacji żelowej została opracowana w celu standaryzacji reakcji hemaglutynacji i uzyskania wiarygodne wyniki. Technologia żelowa zapewnia separację erytrocytów podczas wirowania, podczas gdy nieaglutynowane erytrocyty przechodzą przez żel i osadzają się na dnie probówek ( wynik negatywny), natomiast aglutynowane zatrzymywane są na powierzchni lub w grubości żelu ( wynik pozytywny). Wirowanie w żelu może być ostatnią fazą każdego testu serologicznego opartego na hemaglutynacji, z wyjątkiem metod wymagających dyspersji do oceny wyniku.

Zakres wykonywanych testów obejmuje fenotypowanie RBC (w tym słabe warianty antygenu), testy antyglobulinowe, badania przesiewowe i identyfikację przeciwciał, testy zgodności i kilka innych.

Zasada testu żelowego

Buforowany żel dekstranowy Superlinia Sephadex TM G 100 może być obojętna lub zawierać specyficzne surowice odpornościowe lub odczynnik antyglobulinowy na matrycy żelowej. Na żel nakłada się czerwone krwinki lub mieszaninę czerwonych krwinek i surowicy. Komórki są zawsze nakładane przed surowicą – w przeciwieństwie do standardowych technik serologicznych – aby badana surowica nie wchodziła w kontakt z żelem, co jest szczególnie ważne przy wykonywaniu testu antyglobulinowego. Po inkubacji następuje wirowanie w ściśle określonym trybie. Jeśli warunki wirowania nie są spełnione (wirowanie nie jest wystarczająco długie lub zbyt miękkie), mogą wystąpić fałszywie dodatnie wyniki. Wyniki fałszywie ujemne mogą również wystąpić w przypadku naruszenia warunków (wymuszania) wirowania. Zastosowanie automatycznej wirówki ID (Diamed) eliminuje te problemy. Do testowania powszechnie stosuje się trzy rodzaje żelu:

1. neutralny, nie zawierający swoistych przeciwciał (stosowany do wyszukiwania i identyfikacji przeciwciał metodami solankowymi i enzymatycznymi, zimny etap testu zgodności krwi dawcy i biorcy);
2. specyficzne, zawierające przeciwciała (monoklonalne lub poliklonalne) przeciwko ludzkim antygenom erytrocytów (stosowane do typowania antygenów erytrocytów układów ABO, Rhesus, Kell itp.)
3. antyglobulinowe, zawierające przeciwciała (poliswoiste lub monoswoiste) przeciwko ludzkim immunoglobulinom oraz składniki układu dopełniacza (stosowane do bezpośredniego i pośredniego testu antyglobulinowego (reakcja Coombsa) w poszukiwaniu i identyfikacji przeciwciał auto- i alloimmunologicznych, test zgodności dawcy i biorcy krew).

Badana krew jest dodawana do Górna część mikroprobówki kart diagnostycznych, a podczas wirowania erytrocyty aglutynowane i nieaglutynowane oddziela się w następujący sposób: erytrocyty nieaglutynowane mają wielkość porównywalną do wielkości cząstek żelu i swobodnie przechodzą przez nie pod działaniem siły odśrodkowej, tworząc zwartą czerwień osad na dnie mikroprobówki - wynik ujemny; aglutynowane erytrocyty, ze względu na swój duży rozmiar, utrzymują się na powierzchni żelu lub w jego grubości - wynik dodatni.

Stała aglutynacja w żelu ułatwia ocenę wyniku reakcji, a obecność mikroprobówki kontrolnej na karcie diagnostycznej potwierdza wiarygodność uzyskanych danych.

W zależności od siły reakcji aglutynacji w ośrodku żelowym przyjęto następującą ocenę otrzymanych wyników:

• silnie dodatni (++++) - powstałe aglutynaty erytrocytów utrzymywały się na powierzchni żelu;
• dodatni (+++) - aglutyniany znajdują się w górnej jednej trzeciej kolumny żelowej;
• słabo dodatnie (++) - aglutynaty są utrwalane w górnych dwóch trzecich żelu;
• bardzo słabo dodatni (+) - aglutynaty znajdują się w dolnej jednej trzeciej żelu;
• ujemny (-) - erytrocyty tworzą zwarty osad na dnie mikroprobówki.

Sprzęt i odczynniki

• Karty identyfikacyjne do oznaczania antygenów erytrocytów i przeciwciał przeciw erytrocytom;
• Wirówka ID do wirowania kart;
• termostat w temperaturze +37°С;
• stojak na probówki i karty;
• probówki o pojemności 5 i 10 ml;
• półautomatyczne pipety jednokanałowe (10, 25, 50 µl);
• gumowe rękawiczki chirurgiczne;
• roztwór rozcieńczający 1 (roztwór bromelainy);
• roztwór rozcieńczający 2 (roztwór o niskiej sile jonowej - LISS, RNIS);
• 0,9% roztwór chlorku sodu;
• standardowe typowane ludzkie erytrocyty do wykrywania przeciwciał i reakcji krzyżowych.

Charakterystyka kart identyfikacyjnych

Karty identyfikacyjne (ID-cards) Dia-Med to plastikowe karty z wbudowanymi sześcioma mikroprobówkami. Pięć tub zawiera mieszankę żelu i antysurowicy. Każda karta ma szóstą probówkę kontrolną zawierającą neutralny żel bez przeciwciał (ctl). Probówki są oznakowane na karcie identyfikacyjnej zgodnie z wykrytymi antygenami, na przykład: A-B-AB-D-CDE-ctl lub C-c-E-e-K-ctl. Karty identyfikacyjne do wykrywania przeciwciał przeciwko antygenom erytrocytów mają pewne różnice, na przykład karty „Coombs/Enzyme Test”: trzy probówki znajdujące się po lewej stronie zawierają żel zawierający przeciwciała przeciwko ludzkim globulinom (monospecyficzne anty-IgD lub polispecyficzne - do immunoglobulin różnych zajęciach) - reakcja Coombsa. Kolejne trzy probówki zawierają wyłącznie żel obojętny przeznaczony do wykrywania przeciwciał przeciwko antygenom erytrocytów w pożywce z solą fizjologiczną.

Ogólne zasady posługiwania się dowodami osobistymi

1. Karty identyfikacyjne należy przechowywać w suchym, ciemnym miejscu w temperaturze 18-25°C. Data ważności jest podana w części paszportowej każdej karty oraz na pudełkach do pakowania.
2. Roztwory do przygotowania zawiesiny erytrocytów, jak również surowice standardowe i erytrocyty standardowe ID stosowane w poszczególnych badaniach, należy przechowywać w suchym, ciemnym miejscu w temperaturze 2-8°C. Data ważności jest podana na etykiecie każdej fiolki i na opakowaniu.
3. Aby uniknąć dostania fałszywe wyniki badań, nie używaj żadnych odczynników i kart, które przeterminowały się, a także wyschły, zawierają pęcherzyki gazu lub jeśli obudowa jest uszkodzona.
4. Krew pobierana jest przy użyciu nowoczesnych technik upuszczania krwi. Odpowiednia jest również krew tętnicza, włośniczkowa i pępowinowa (bez płukania). Do badań nadają się zarówno próbki krwi pełnej (pobrane w czystej, suchej probówce), jak i próbki krwi pobrane na konserwantach i stabilizatorach.

Typowanie antygenów erytrocytów

Karty ID DiaMed są przeznaczone do równoczesnego oznaczania grupy krwi ABO i przynależności Rh erytrocytów dawcy i biorcy (w tym ich słabych wariantów antygenów), a także typowania innych antygenów erytrocytowych. Karty ID DiaMed mogą być używane zamiast lub równolegle z surowicami izohemaglutynującymi, odczynnikami anty-D, anty-DCE, kolilonami anty-A, anty-B, anty-D i anty-D Super.

• [pokazać] .

  Etap początkowy przeprowadza się na różne sposoby, w zależności od rodzaju używanych dowodów osobistych, zawierających przeciwciała poliklonalne (zob. pkt 1a poniżej) lub monoklonalne (zob. pkt 16):

  1a) Przygotuj zawiesinę badanych erytrocytów w roztworze do rozcieńczania kart ICID zawierających przeciwciała poliklonalne), dla której:

  • przechowywać roztwór rozcieńczający 1, aż osiągnie temperaturę pokojową;
  • przygotować 5% zawiesinę badanych erytrocytów w roztworze rozcieńczającym 1 umieszczając 0,5 ml roztworu rozcieńczającego 1 i 50 µl pełnej krwi przeznaczonej do badania lub 25 µl masy erytrocytów w probówce;
  • delikatnie wymieszać i inkubować 10 min w temperaturze pokojowej;
  • użyć nie później niż 15 minut po inkubacji.

  16) Przygotuj zawiesinę testowanych erytrocytów w roztworze rozcieńczającym 2 (karty identyfikacyjne zawierające przeciwciała monoklinalne), dla której:

  • przechowywać roztwór rozcieńczający 2, aż osiągnie temperaturę pokojową;
  • oznakować czyste probówki;
  • przygotować 5% zawiesinę badanych erytrocytów w roztworze rozcieńczającym 2 umieszczając 0,5 ml roztworu rozcieńczającego 1 i 50 µl pełnej krwi do badania lub 25 µl masy erytrocytów w probówce.
• Dalsze działania [pokazać] .
  1. Zaznacz kartę identyfikacyjną (nr próbki surowicy testowej lub imię i nazwisko pacjenta).
  2. Usuń folię ochronną z tub na karty identyfikacyjne.
  3. Do każdej probówki karty identyfikacyjnej dodać 10 µl testowanych erytrocytów, przygotowanych zgodnie z pkt. 1a lub 50 µl testowych erytrocytów, przygotowanych zgodnie z pkt. 16.
  4. Zainstalować karty identyfikacyjne w wirniku wirówki identyfikacyjnej (z obowiązkowym wyważeniem innymi kartami identyfikacyjnymi, ewentualnie nieużywanymi).
  5. Karty identyfikacyjne wirówki (czas i prędkość wirowania są stałe i ustawiane automatycznie).
  6. Oceń wynik testu: Wynik w mikroprobówce kontrolnej – „ctl” – musi być zawsze ujemny. Reakcja dodatnia w „kontroli” może być spowodowana obecnością autoprzeciwciał i nieswoistych białek osocza. Jeżeli „kontrola” jest pozytywna – oznaczanie jest niewiarygodne, należy je powtórzyć po jednokrotnym przemyciu próbki erytrocytów 0,9% roztworem chlorku sodu lub roztworem rozcieńczającym 2.
  7. Wpisać wyniki oznaczenia każdego antygenu w odpowiedniej kolumnie dowodu osobistego (w białym polu pod każdym antygenem).
  8. Zidentyfikuj wynik zgodnie z następującym schematem (tabela 18.7-18.9)

  Tabela 18.7. Wyniki badania antygenów grup krwi ABO i afiliacji Rh w karcie ABO/Rh ID
  Wykrywalne antygeny					Wniosek
  ALE	W	AB	D	CDE
  +	+	+	+	+	AB Rh+
  +	+	+	-	-	AB Rh-
  +	-	+	+	+	A Rh+
  +	-	+	-	-	i Rh-
  -	+	+	+	+	W Rh+
  -	+	+	-	-	W Rh-
  -	-	-	+	+	0 RH+
  -	-	-	-	-	0 RH-
  Uwaga: Swoistość badania potwierdza ujemny wynik w probówce kontrolnej z kartą identyfikacyjną.

  Tabela 18.8 Oznaczanie antygenów erytrocytów układu ABO
  Grupa krwi
  	anty-A	anty-B	anty-AB
  0(1)	-	-	-
  A1(II)	++++	-	++++
  А2(II)	++++	-	++++
  3(II)	++/+++	-	++/++++
  Ax(II)*	-/++	-	+/++
  B(II)	-	++++	++++
  В3(III)	-	+/+++	+/+++
  Bx(III)*	-	-/++	-/++
  A1B(IV)	++++	++++	++++
  A2B(IV)	+++/++++	++++	++++
  Notatka: * - określenie bardzo słabych wariantów antygenów A i B wymaga dalszych badań.

  Tabela 18.9 Definicja afiliacji Rh (D, CDE)
  Przynależność do Rhesusa	Wyniki badania surowicy
  	Anty-D	Anty-CDE
  D-dodatni	++++	++++
  D-ujemny	-	-
  D-ujemny, C	E-pozytywny*	-
  Słaby dodatni (D u)	od ± do +++	od +++ do ++++
  Notatka: * - Pozytywna reakcja z surowicą anty-CDE w reakcja z surowicą anty-D wskazuje na obecność antygenów C, E i wymaga dalszego wpisywania za pomocą legitymacji: C-c-E-e-K-stl lub C-C w -c-E-e-K

Używane dowody osobiste

Przy określaniu grup krwi i afiliacji Rh stosuje się grupy poliklonalne (tab. 18.10 [pokazać] ) i monoklonalne (tabela 18.11 [pokazać] ) odczynniki. Najczęstsze zastosowanie w praktyce ze względu na: wykonalność ekonomiczna znajdź surowice monoklonalne.

Za pomocą współczesna klasyfikacja osoby z osłabionym wariantem antygenu D zdolnym do wytwarzania przeciwciał anty-D dzielą się na siedem kategorii. Kategoria VI ma najwyższą częstość występowania i znaczenie praktyczne, których erytrocyty niosą tylko epitop Z antygenu D. Osoby z kategorii VI (biorcy Rh-ujemni, ale dawcy Rh-dodatni!) Mogą wytwarzać przeciwciała dla niezmienionego D i częściowe D wszystkich pozostałych kategorii. Do potwierdzenia grupy krwi stosuje się różne karty identyfikacyjne: D (IV -) - dla biorców, D (IV +) - dla dawców.

Oznaczanie grupy krwi ABO i akcesoriów Rh odbywa się poprzez identyfikację specyficznych antygenów i przeciwciał (reakcja podwójna lub krzyżowa) (tabela 18.12 [pokazać] ).

Do dogłębnego zbadania wykorzystuje się inne mapy (tab. 18.13-18.14). [pokazać] ).

Wykrywanie przeciwciał przeciwko erytrocytom

Zasada metody

Surowice testowe i standardowe erytrocyty do wykrywania przeciwciał są dodawane na górze mikroprobówek. Po inkubacji i odwirowaniu zlepione erytrocyty pozostają w górnej części probówki, ponieważ nie przechodzą przez żel z powodu duży rozmiar aglutynaty (wynik pozytywny). W przypadku braku przeciwciał przeciwko antygenom testowanych erytrocytów aglutynaty nie powstają. Nieaglutynowane krwinki czerwone łatwo przechodzą przez żel i osadzają się na dnie probówki (wynik negatywny). Charakter aglutynacji w wykrywaniu przeciwciał przeciwko erytrocytom zależy od miana przeciwciał, ich aktywności i szacuje się od ++++ do +.

• Algorytm badawczy [pokazać] .

  Typowane erytrocyty przed badaniem należy najpierw dwukrotnie wypłukać z konserwantu 0,9% roztworem chlorku sodu, a następnie wykonać następujące czynności:

  • przechowywać Rozcieńczalnik 2 aż do osiągnięcia temperatury pokojowej;
  • tubki do etykietowania;
  • przygotować 0,8% zawiesinę typowanych erytrocytów w roztworze rozcieńczającym 2, umieszczając 1,0 ml roztworu rozcieńczającego 2 i 10 µl krwi w probówce;
  • zdjąć folię ochronną z dowodu osobistego;
  • oznaczyć dowód osobisty (numer próbki surowicy testowej lub imię i nazwisko pacjenta);
  • dodać 50 µl standardowych erytrocytów do mikroprobówek;
  • dodać 25 µl surowicy lub osocza próbki testowej do każdej mikroprobówki;
  • inkubować przez 15 minut w temperaturze +37 "C;
  • wiruj karty identyfikacyjne w wirówce ID (czas i prędkość wirowania są stałe i ustawiane automatycznie).

  Uwaga: standardowe erytrocyty panelu ID-DiaCell I-II-III oraz ID-DiaCell I-Ii-III P firmy DiaMed są gotowe do użycia bez uprzedniego płukania i leczenia roztworem Rozcieńczającym 2.

• Interpretacja wyników [pokazać] .

  Reakcja dodatnia oznacza obecność przeciwciał odpornościowych w badanej próbce.

  Jeśli jest pozytywna reakcja w przypadku wszystkich erytrocytów panelu ID-DiaCell zaleca się przeprowadzenie autokontroli w celu wykluczenia autoprzeciwciał w badanej próbce.

  Jeśli reakcja pozostaje negatywna z jednym lub większą liczbą RBC panelu ID-DiaCell, swoistość przeciwciał można określić przy użyciu dołączonego arkusza profilowania antygenowego dostarczanego ze wszystkimi pakietami ID-DiaCell. Robiąc to, upewnij się, że numery panelu ID-DiaCell1 i dołączonego arkusza pasują do siebie.

  Jeśli ten panel nie pozwala na określenie swoistości przeciwciał, zaleca się kontynuowanie identyfikacji przy użyciu zaawansowanego panelu erytrocytów ID-DiaPanel i/lub ID-DiaPanel P (w zależności od pierwotnie zastosowanej metody).

Badanie przesiewowe i identyfikacja przeciwciał

Badanie przesiewowe przeciwciał przeprowadza się zarówno w żelu obojętnym, jak i żelu zawierającym odczynnik antyglobulinowy (Tabela 18.15-18.16 [pokazać] ). W pierwszym przypadku do badań stosuje się erytrocyty poddane działaniu enzymu, w drugim przypadku stosuje się zawiesinę erytrocytów w roztworze o niskiej sile jonowej. Badania przesiewowe i identyfikację przeciwciał przeprowadza się przy użyciu standardowego panelu erytrocytów. Oceniając skuteczność testu żelowego do badań przesiewowych i identyfikacji przeciwciał, stwierdzono jego wyższą czułość w porównaniu z metodami tradycyjnymi.

Metody badania przeciwciał przeciwko antygenom erytrocytów

• Test antyglobulinowy (pośredni test Coombsa) [pokazać] .

  Pośredni test antyglobulinowy (NAT) służy do wykrywania przeciwciał anty-RBC. Zazwyczaj NAT jest wykonywany w dwóch krokach:

  1. inkubacja erytrocytów i surowicy (utrwalanie przeciwciał), a następnie płukanie w celu usunięcia niezwiązanych globulin; zaawansowanie pośredniego testu antyglobulinowego w teście żelowym nie wymaga płukania erytrocytów!
  2. inkubacja wypłukanych erytrocytów z antyludzką globuliną (AHG). Aglutynacja wskazuje na obecność w surowicy przeciwciał, które związały się z antygenami erytrocytów in vitro.

  NAT służy do:

  1. oznaczenie w surowicy biorcy przeciwciał przeciwko erytrocytom dawcy - przy ustalaniu testu zgodności;
  2. podczas badania przesiewowego „nieoczekiwanych” przeciwciał przeciw erytrocytom;
  3. w badaniu przeciwciał przeciw erytrocytom u kobiet w ciąży;
  4. w badaniu przeciwciał w surowicy pacjentów z autoimmunologiczną niedokrwistością hemolityczną.

  Postęp definicji:

  • dodać 50 µl zawiesiny typowanych erytrocytów do trzech probówek znajdujących się po lewej stronie karty identyfikacyjnej;
  • do probówek dodać 25 µl surowicy testowej;
  • wirować karty identyfikacyjne przez 10 min;
  • ocenić wynik badania. Wpisz wynik do dowodu osobistego.

  Wyniki definicji:

  • wynik dodatni wskazuje na obecność przeciwciał immunologicznych (allo) w badanej surowicy lub osoczu (w celu określenia swoistości przeciwciał należy skorzystać z tabeli dołączonej do standardowych erytrocytów);
  • wynik ujemny wskazuje na brak przeciwciał immunologicznych w badanej surowicy lub osoczu.
• metoda enzymatyczna [pokazać] .

  Leczenie enzymami proteolitycznymi zwiększa aglutynację czerwonych krwinek.

  Postęp definicji:

  • dodać 50 µl zawiesiny standardowych erytrocytów do trzech probówek znajdujących się po prawej stronie karty identyfikacyjnej;
  • dodać do probówek 25 µl roztworu rozcieńczającego 1;
  • do probówek dodać 25 µl surowicy testowej.

  Uwaga: Roztwór rozcieńczający 1 nie jest dodawany, jeśli do badania stosuje się standardowe erytrocyty poddane działaniu enzymu proteolitycznego (np. ID-DiaCell I-II-III P firmy DiaMed).

  • inkubować przez 15 minut w +37°C;
  • wirować karty identyfikacyjne w wirówce W przez 10 min (parametry ustawiane są automatycznie);
  • wpisz wynik do dowodu osobistego.

  Winiki wyszukiwania:

  • wynik dodatni wskazuje na obecność alloprzeciwciał w badanej surowicy lub osoczu (w celu określenia swoistości przeciwciał należy skorzystać z tabeli dołączonej do standardowych erytrocytów);
  • wynik ujemny wskazuje na brak alloprzeciwciał w badanej surowicy lub osoczu.
• Metoda aglutynacji na zimno [pokazać] .

  Postęp definicji:

  • inkubować roztwór rozcieńczający 2, typowane erytrocyty i karty identyfikacyjne przez 30 minut w temperaturze 2-8°C;
  • traktować typowane erytrocyty roztworem rozcieńczającym 2, dla którego:
    • zaznacz probówkę;
    • przygotować 0,8% zawiesinę typowanych erytrocytów w rozcieńczalniku 2 umieszczając 1,0 ml rozcieńczalnika 2 i 10 µl krwi w probówce.

  Uwaga: standardowe ID-DiaCell RBCs (DiaMed) są gotowe do użycia i nie wymagają rozcieńczania;

  • dodać 50 µl zawiesiny typowanych erytrocytów potraktowanych roztworem rozcieńczającym 2 do trzech probówek znajdujących się po prawej stronie karty identyfikacyjnej;
  • do tych probówek dodać 25 µl surowicy testowej;
  • inkubować przez 30 minut w temperaturze 2-8 C;
  • wirować karty identyfikacyjne w wirówce identyfikacyjnej przez 10 minut (parametry ustawiane są automatycznie);
  • ocenić wynik badania;
  • wpisz wynik do dowodu osobistego. Winiki wyszukiwania:
  • wynik dodatni wskazuje na obecność zimnych przeciwciał w badanej surowicy lub osoczu (w celu określenia swoistości przeciwciał należy skorzystać z tabeli dołączonej do standardowych erytrocytów);
  • wynik ujemny wskazuje na brak zimnych przeciwciał w badanej surowicy lub osoczu.

  W obecności zimnych lub ciepłych autoprzeciwciał w badanej surowicy można zaobserwować wyniki fałszywie pozytywne. Aby je wykluczyć, musisz ustawić autokontrolę:

  • przygotować 0,8% zawiesinę badanych erytrocytów krwi w roztworze rozcieńczającym 2, dodając 10 µl krwi pełnej do 1,0 ml roztworu rozcieńczającego 2;
  • dodać 50 µl przygotowanej zawiesiny erytrocytów do probówki ID-card znajdującej się po lewej stronie (dla reakcji Coombsa) lub do probówki ID-card umieszczonej po prawej (dla metody enzymatycznej i zimnej aglutynacji);
  • do probówek z karty identyfikacyjnej dodać 25 µl surowicy testowej (w przypadku metody enzymatycznej konieczne jest dodanie do probówek kolejnych 25 µl roztworu rozcieńczającego 1);
  • inkubować karty przez 15 minut w temperaturze +37°C (w przypadku reakcji Coombsa i metody enzymatycznej) lub w temperaturze 2-8°C (w przypadku autokontroli zimnej aglutynacji).

  Dodatni wynik autokontroli wskazuje na obecność autoprzeciwciał w badanej surowicy.

Określanie zgodności krwi dawcy i biorcy

Cel testu dla indywidualna kompatybilność jest zapobieganie transfuzji hemokomponentów niezgodnych z antygenami erytrocytów. Badanie surowicy biorcy za pomocą erytrocytów docelowego dawcy jest najbardziej niezawodny sposób wykrywanie przeciwciał, które mogą powodować uszkodzenie przetoczonych erytrocytów, reakcje poprzetoczeniowe i powikłania typu hemolitycznego. Ten test pozwala:

1. potwierdzić zgodność ABO dawcy i biorcy;
2. wykryć przeciwciała w surowicy biorcy skierowane przeciwko antygenom erytrocytów dawcy.

Badanie indywidualnej zgodności krwi dawcy i biorcy przez antygeny erytrocytów (Tabela 18.17 [pokazać] ) nie zastępuje obowiązkowego badania immunohematologicznego (typowanie antygenów erytrocytów układu ABO, Rhesus, Kell, wykrywanie przeciwciał antyerytrocytowych, wyszukiwanie i identyfikacja przeciwciał alloanty-erytrocytowych), a jedynie je uzupełnia.

Ze względu na to, że uczulenie może wystąpić nawet po przetoczeniach indywidualnie dobranych hemokomponentów, do badania zgodności konieczne jest każdorazowe użycie świeżej surowicy pacjenta, otrzymanej po ostatniej transfuzji hemokomponentów.

Dla każdej próbki krwi dawcy należy przeprowadzić test zgodności!

• Postęp definicji [pokazać]
  • przechowywać Rozcieńczalnik 2 aż do osiągnięcia temperatury pokojowej (20-24°C);
  • oznaczyć karty identyfikacyjne i probówki (pełna nazwa dawcy i biorcy);
  • przygotować 0,8% zawiesinę erytrocytów dawcy i biorcy w roztworze rozcieńczającym 2, dla którego dodać 1 ml roztworu rozcieńczającego 2 do dwóch oznakowanych probówek, dodać odpowiednio 10 µl krwi dawcy i biorcy;
  • mieszać;
  • zdjąć folię ochronną z odpowiedniego dowodu osobistego;
  • dodać 50 µl przygotowanej zawiesiny erytrocytów dawcy do mikroprobówek kart identyfikacyjnych 1, 2, 3, 4, 5;
  • dodać 50 µl przygotowanej zawiesiny erytrocytów biorcy do mikroprobówek kart identyfikacyjnych 4, 5, 6;
  • dodać 25 µl surowicy lub osocza biorcy do mikroprobówek kart identyfikacyjnych 1, 2, 3, 6;
  • dodać 25 µl rozcieńczalnika 1 do mikroprobówki 4 na kartę identyfikacyjną (test enzymatyczny);
  • inkubować przez 15 minut w temperaturze +37°C;
  • wirówka (czas i prędkość wirowania są stałe i ustawiane automatycznie);
  • ocenić wynik badania. Kompatybilność dla antygenów A, B, D (1, 2, 3 mikroprobówki):
  • wyraźny wynik dodatni lub ujemny wskazuje na zgodność antygenów A, B, O erytrocytów krwi dawcy i biorcy;
  • jeśli obserwuje się podwójną populację erytrocytów (wynik dodatni i ujemny w jednej mikroprobówce), antygeny A, B, D dawcy i biorcy nie są identyczne!
  • określenie zgodności dla antygenów A, B, D jest ważne tylko z ujemną reakcją w szóstej mikroprobówce (autokontrola).
• Wyniki testu zgodności (4,5 mikroprobówki) [pokazać]
  • dodatni wynik w mikroprobówkach kart identyfikacyjnych 4, 5 z kontrolą ujemną (mikroprobówka 6) wskazuje na niezgodność krwi dawcy i biorcy pod względem antygenów erytrocytów;
  • ujemny wynik w mikroprobówkach kart identyfikacyjnych 4, 5, 6 wskazuje na zgodność krwi dawcy i biorcy pod względem antygenów erytrocytów;
  • dodatnia reakcja w mikroprobówkowej karcie identyfikacyjnej 6 (autokontrola) wymaga dalszego oznaczenia auto- i alloprzeciwciał w surowicy (osoczu) biorcy.
• Ograniczenia [pokazać]
  • pewny leki może powodować fałszywie pozytywna reakcja Coombs;
  • z odrobiną stany patologiczne pacjenci mogą mieć pozytywną reakcję Coombsa;
  • zanieczyszczenie bakteryjne lub inne użytego materiału może spowodować fałszywie dodatni lub fałszywie ujemny wynik;
  • pozostałości fibryny w badanych próbkach mogą wiązać nieaglutynowane komórki i po odwirowaniu tworzyć cienką różową linię na powierzchni żelu, podczas gdy większość komórek będzie zlokalizowana na dnie mikroprobówki;
  • Nadmiernie stężone zawiesiny RBC mogą powodować reakcje fałszywie dodatnie.
• Warunki przechowywania i eksploatacji [pokazać]

  Karty DiaMed ID należy przechowywać w temperaturze pokojowej (+18-25°C) w suchym miejscu przez cały okres ważności.

  Karty są ważne 18 miesięcy. Okres przechowywania odczynników wynosi 2 lata.

  Wyniki badania na mapie są zapisywane bez zmian:

  • 48 godzin w temperaturze pokojowej;
  • trzy tygodnie w lodówce (w temperaturze +2-8°C) z górną częścią dowodu osobistego zaklejoną taśmą samoprzylepną.

  Dolne pole dowodu osobistego można odkleić lub odciąć i wykorzystać jako dokument w historii choroby lub szafce na akta.

  Niedopuszczalne jest używanie dowodów osobistych ze śladami zaschnięcia żelu, bąbelkami na jego grubości lub uszkodzeniem folii ochronnej.

  Próbki i odczynniki należy przed użyciem doprowadzić do temperatury pokojowej.

Wniosek

Test żelowy to prosta, powtarzalna, szybka i bardzo czuła metoda pozwalająca na natychmiastowe wykrycie słabych wariantów antygenów erytrocytów. Test oceniany jest tylko makroskopowo. Po krótkim szkoleniu personelu wymaganego do: prawidłowe wykonanie test, minimalizuje czas spędzony i błędy napotykane podczas korzystania z tradycyjnych metod.

Test żelowy pozwala na standaryzację metod laboratoryjnych, dając obiektywną ocenę wyników reakcji hemaglutynacji. Stabilność wyników testu pozwala na dwukrotne sprawdzenie uzyskanych danych, które są niezbędne do kontroli. Wyniki badań mogą być kserowane w celu archiwizacji lub w celach edukacyjnych w przypadkach trudnych do zdiagnozowania. W badaniu wykorzystuje się niewielką ilość surowicy lub czerwonych krwinek, co jest niezwykle ważne w klinikach pediatrycznych.

Zastosowanie systemu żelowego zmniejsza ryzyko infekcji personelu nawet podczas pracy z potencjalnie zainfekowanymi próbkami. Test żelowy można wykorzystać do sprawdzenia zgodności antygenu erytrocytów przed transfuzją krwi. W tym celu stosuje się pośredni test antyglobulinowy i jednoetapową metodę enzymatyczną.

Test żelowy przeprowadza się i ocenia zgodnie z powyższymi zasadami. Brak etapów płukania erytrocytów podczas wykonywania pośredniego testu antyglobulinowego pozwala na bardziej efektywne wykorzystanie czas pracy, a także ze względu na stabilność wyników badań, aby kontrolować wszystkie uzyskane wyniki.

Źródło: Medyczny diagnostyka laboratoryjna, programy i algorytmy. Wyd. prof. Karpiszczenko A.I., Petersburg, Intermedica, 2001