Pagsusuri ng donor. Immunohematological laboratory tests Antigens (Ag) ng mga erythrocytes

Kabuuan protina ng dugo 60-80 g/l. Mayroong ilang mga fraction ng protina na gumaganap ng mga partikular na function.

1. Ang mga albumin (40-60 g/l) ay may mataas na aktibidad ng colloid-osmotic.

2. Lumilikha ang mga globulin a, b, g (20-40 g/l). humoral na kaligtasan sa sakit, na bumubuo ng iba't ibang antibodies na tinatawag na immunoglobulins (IgM, IgG).

3. Ang fibrinogen (2-4 g/l) ay ang pangunahing salik sa mekanismo ng pamumuo ng dugo.

MGA ANTIGEN(Greek ànti - laban, genos - lumikha) - mga sangkap na may kakayahang maging sanhi ng pagbuo ng mga antibodies sa katawan at tumugon sa kanila. Ang isang bilang ng mga tiyak na polysaccharides - mga amino acid complex na may mga antigenic na katangian - ay binuo sa erythrocyte membrane. Ang mga complex na ito ay tinatawag na agglutinogens.

Sa ngayon, higit sa 400 antigens na naisalokal sa erythrocyte membrane ang natuklasan sa mga erythrocytes ng tao, 140 sa mga ito ay pinagsama sa 20 genetically controlled system. Ang natitirang mga antigen ay karaniwan o indibidwal. Para sa klinikal na kasanayan ang pinakamahalaga ay ang ABO system at ang Rh system (Rh system). Ang mga pangkat na Kell-Celano, Kidd, Lutheran, Duffy, Diego, atbp. ay nakikilala rin. Ang huli ay mahalaga lamang sa madalas na pagsasalin ng dugo o sa panahon ng pagbubuntis na hindi tugma para sa isa sa mga agglutinogens na ito. Samakatuwid, ang paulit-ulit na pagsasalin ng dugo mula sa parehong donor ay hindi inirerekomenda.

Lumilitaw ang mga antigen ng pulang selula ng dugo sa ikalawang buwan pag-unlad ng embryonic, gayunpaman, sa oras na ang bata ay ipinanganak, ang kanilang agglutinable na aktibidad ay mababa at katumbas ng 1/5 ng aktibidad ng mga nasa hustong gulang.

ANTIBODIYA- mga sangkap na tumutugon sa antigen. Ang mga likas na antibodies ay laging naroroon sa plasma ng dugo at nabibilang sa bahagi ng gamma globulin. Kabilang dito ang mga antibodies ng ABO system - a at b agglutinins, na lumilitaw sa mga tao sa mga unang buwan pagkatapos ng kapanganakan at pag-abot. maximum na dami sa edad na 5-10 taon.

AGLUTINATION REACTION- gluing at sedimentation ng mga pulang selula ng dugo sa ilalim ng impluwensya ng mga tiyak na antibodies - agglutinins. Ito ay pinaniniwalaan na ang molekula ng antibody na may dalawang sentrong nagbubuklod ay bumubuo ng tulay sa pagitan ng dalawang pulang selula ng dugo. Ang bawat isa sa mga pulang selula ng dugo ay nakikipag-ugnayan naman sa iba pang mga pulang selula ng dugo at bilang isang resulta, sila ay magkakadikit. Kapag nagsasalin ng dugo hindi tugmang dugo Ang aglutinasyon ay humahantong sa hemolysis ng mga pulang selula ng dugo at pagpapalabas ng mga clotting factor. Ang mga nagresultang clots ay bumabara sa maliliit na sisidlan at sa gayon ay nakakagambala sa sirkulasyon ng capillary.

Ang aglutinasyon ay nangyayari kapag ang mga agglutinogen na may parehong pangalan mula sa donor at agglutinin mula sa tatanggap ay nagtagpo.

Mga pagsusuri para sa pagiging tugma ng isinalin na dugo

Ang doktor na nagsasalin ng dugo ay obligado na pigilan ang posibleng hindi pagkakatugma sa dugo ng pasyente sa pamamagitan ng pagsasagawa ng mga control study, kabilang ang mga compatibility test para sa ABO blood groups at Rh factor.

Ang mga pagsusulit sa pagiging tugma ay isinasagawa kaagad bago ang pagsasalin ng dugo. Upang gawin ito, gamitin ang serum ng dugo ng pasyente at dugo ng donor mula sa isang vial na inihanda para sa pagsasalin ng dugo.

"Mga sistema ng pangkat ng dugo ng tao at
mga komplikasyon ng pagsasalin ng dugo", M.A. Umnova

Ang mga pangkat ng dugo ay tinutukoy gamit ang isang agglutination reaksyon sa temperatura ng silid sa isang porselana o iba pang puting plato na may basang ibabaw. Mayroong dalawang paraan upang matukoy ang pangkat ng dugo: gamit ang karaniwang sera, na ginagawang posible upang matukoy kung aling grupo ang mga agglutinogens (A o B) ang nasa mga pulang selula ng dugo ng dugo na sinusuri; sabay-sabay gamit ang standard sera at standard erythrocytes (crossover method). kung saan…

2 patak ng serum ng pasyente, 1 patak ng dugo ng donor at 1 patak ng 33% polyglucin solution, na espesyal na inihanda para sa mga layunin ng laboratoryo, ay inilalagay sa isang test tube. Ang test tube ay inalog upang paghaluin ang mga nilalaman, pagkatapos ay ikiling halos sa pahalang na posisyon upang ang mga nilalaman ay tumapon sa mga dingding nito, at dahan-dahang umikot sa loob ng 5 minuto patayong axis, na nakikipag-ugnayan sa pinaghalong serum ng pasyente...

Ang reaksyon ng hemagglutination sa bawat patak ay maaaring maging positibo o negatibo. Kung positibo ang reaksyon, kadalasan sa loob ng unang 10 - 30 s mula sa simula ng paghahalo, lumilitaw sa pinaghalong maliliit na pulang butil (agglutinates) na binubuo ng mga nakadikit na pulang selula ng dugo, na nakikita ng mata. Ang mga maliliit na agglutinate ay unti-unting nagsasama sa mas malaki, at kung minsan sa mga natuklap hindi regular na hugis. Kasabay nito, ang serum ay ganap na...

Ang dugo ng donor ay dapat hugasan ng dalawang beses sa isang test tube na may 8 - 10 beses ang volume isotonic na solusyon sodium chloride sa pamamagitan ng centrifugation, pagkatapos ay alisin ito at gamitin ang sediment ng mga hugasan na erythrocytes para sa pananaliksik. Ang isang maliit (0.01 ml) na patak ng nahugasang pulang selula ng dugo ay inilipat sa isa pang test tube, 3 patak ng serum ng pasyente ay idinagdag dito, hinaluan ng mga pulang selula ng dugo ng donor at ang test tube ay inilalagay sa...

I. Sa ilalim ng mga paunang ginawang pagtatalaga, isang malaking patak (0.1 ml) ng karaniwang sera ng mga pangkat na 0αβ(I), Aβ(II) at Bα(III) ang inilalapat sa plato. Dahil ginagamit ang karaniwang sera mula sa dalawang magkaibang serye ng bawat grupo, kabuuang 6 na patak ang nakuha, na bumubuo ng dalawang hanay ng 3 patak sa sumusunod na pagkakasunud-sunod mula kaliwa hanggang kanan: 0αβ(I), Aβ(II) at Bα(III ). II. Sa ilalim ng record...

Ang interpretasyon ng mga resulta ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagsusuri at paghahambing ng mga resulta na nakuha gamit ang karaniwang sera (nangungunang dalawang hanay) at paggamit ng karaniwang mga erythrocytes (ibaba na hilera). Ang mga resulta ng reaksyon na nakuha gamit ang standard sera ng II standard erythrocytes ay dapat tumugma, ibig sabihin, ipahiwatig ang nilalaman ng agglutinogens at agglutinins na naaayon sa parehong pangkat ng dugo. Ang mga resultang ito ay maaaring ipahayag...

Upang matukoy ang katayuan ng Rh, ibig sabihin, upang makita ang pagkakaroon o kawalan ng mga antigen ng Rh system sa dugo ng mga tao, ginagamit ang karaniwang anti-Rh sera (reagents), na nag-iiba sa pagtitiyak, ibig sabihin, naglalaman ng mga antibodies sa iba't ibang antigen ng sistemang ito. Upang matukoy ang Rh0(D) antigen, ang anti-Rhesus serum ay kadalasang ginagamit sa pagdaragdag ng 10% gelatin solution, o ginagamit ang isang karaniwang anti-Rhesus reagent na inihanda nang maaga...

I. Isang patak (0.05 ml) ng mga pulang selula ng dugo na sinusuri at 2 patak ng 10% gelatin solution, pinainit upang matunaw sa maligamgam na tubig(46 - 48 °C). II. Sa isa sa mga test tube na ito, magdagdag ng 2 patak ng anti-Rh serum sa pinaghalong pulang selula ng dugo at gelatin. Ang serum na ito ay hindi idinagdag sa isa pang test tube; ito ay nagsisilbing kontrol...

Ang mga tubo ay sinusuri sa mata o sa pamamagitan ng magnifying glass na may 2x magnification. Ang resulta ay binibigyang kahulugan depende sa pagkakaroon o kawalan ng pagsasama-sama ng pulang selula ng dugo. Kung ang resulta ay positibo, ang mga agglutinate ay madaling makilala sa anyo ng mga pulang butil o mga natuklap sa isang transparent, halos kupas na background ng likido. Kung negatibo ang resulta, ang test tube ay nagpapakita ng pantay na kulay kulay rosas, bahagyang opalescent na likido. Mga sample...

I. Isang patak (0.05 ml) ng test blood o erythrocytes ang ipinapasok sa test tube (hindi mo kailangang hugasan ito sa preservative), magdagdag ng 1 - 2 patak ng standard universal anti-Rhesus reagent at ihalo ang mga erythrocytes kasama ang reagent sa pamamagitan ng pag-alog ng tubo. II. Ang test tube ay ikiling halos sa isang pahalang na posisyon upang ang mga nilalaman ay kumalat sa mga dingding nito, at pagkatapos ay dahan-dahang umiikot sa posisyong ito...

Ang pagpili ng mga donor ay isinasagawa ayon sa pare-parehong pamantayang medikal, na nagsisiguro sa hindi nakakapinsala, mataas na aktibidad at pagiging epektibo ng dugo at mga bahagi nito.

Bago mag-donate ng dugo, ang bawat donor ay sumasailalim sa isang pagsusuri: isang anamnesis ay kinuha, isang masusing medikal na pagsusuri ay isinasagawa at espesyal na pagsusuri upang matukoy ang mga kontraindiksyon sa donasyon ng dugo at ibukod ang posibilidad ng pagpapadala ng mga pathogens ng mga nakakahawang sakit na may dugo. Magsagawa ng serological, virological at bacteriological na pagsusuri ng dugo ng donor.

Ang mga pag-unlad sa klinikal na transfusiology ay nagbabawas sa panganib ng paghahatid ng mga pathogen ng mga nakakahawang sakit (HIV infection, hepatitis B at C, syphilis, cytomegalovirus infection, atbp.) na may dugo at mga bahagi nito.

Pangunahing antigenic na sistema ng dugo

Ito ay itinatag na ang antigenic na istraktura ng dugo ng tao ay kumplikado; lahat ng nabuong elemento ng dugo at mga protina ng plasma ng iba't ibang tao ay naiiba sa mga antigen. Mga 500 na antigen ng dugo ang kilala na, na bumubuo ng higit sa 40 iba't ibang antigenic system.

Ang antigenic system ay nauunawaan bilang isang set ng mga antigen ng dugo na minana (kinokontrol) ng mga allelic genes.

Ang lahat ng mga antigen ng dugo ay nahahati sa cellular at plasma. Ang mga cellular antigen ay pangunahing kahalagahan sa transfusiology.

Mga cellular antigens

Ang mga cellular antigen ay kumplikadong carbohydrate-protein complex (glycopeptides), mga istrukturang bahagi ng lamad ng selula ng dugo. Mula sa iba pang mga sangkap lamad ng cell sila ay nakikilala sa pamamagitan ng kanilang immunogenicity at serological na aktibidad.

Immunogenicity - ang kakayahan ng mga antigen na mag-udyok ng synthesis ng mga antibodies kung sila ay pumasok sa isang organismo na walang mga antigen na ito.

Serological na aktibidad - ang kakayahan ng mga antigen na pagsamahin sa mga antibodies ng parehong pangalan.

Ang molekula ng cellular antigen ay binubuo ng dalawang bahagi:

Schlepper (ang bahagi ng protina ng antigen na matatagpuan sa mga panloob na layer ng lamad), na tumutukoy sa immunogenicity;

Hapten (ang polysaccharide na bahagi ng antigen na matatagpuan sa mga layer ng ibabaw ng lamad ng cell), na tumutukoy sa aktibidad ng serological.

Sa ibabaw ng hapten mayroong mga antigenic determinants (epitopes) - mga molekula ng karbohidrat kung saan nakakabit ang mga antibodies. Ang mga kilalang antigen ng dugo ay naiiba sa bawat isa sa mga epitope.

Halimbawa, ang mga haptens ng antigens ng AB0 system ay may mga sumusunod na set ng carbohydrates: ang epitope ng antigen 0 ay fucose, ang epitope ng antigen A ay N-acetylgalactosamine, at ang epitope ng antigen B ay galactose. Ang mga antibodies ng grupo ay nagbubuklod sa kanila.

May tatlong uri ng cellular antigens:

Erythrocyte;

leukocyte;

Platelet.

Mga antigen ng pulang selula ng dugo

Mahigit sa 250 erythrocyte antigens ang kilala, na bumubuo ng higit sa 20 antigenic system. 11 mga sistema ay may klinikal na kahalagahan: AB0, Rhesus (Rh-Hr), MNSs, Kell, Lutheran, Kidd, Diego, Duffy, Dombrock, enzyme group ng erythrocytes .

Sa mga tao, ang mga antigen ng ilang mga antigenic system ay naroroon nang sabay-sabay sa mga pulang selula ng dugo.

Ang AB0 at Rhesus antigen system ay kinikilala bilang ang mga pangunahing sa transfusiology. Ang iba pang mga antigenic system ng erythrocytes ay kasalukuyang hindi mahalaga sa klinikal na transfusiology.

AB0 antigenic system

Ang AB0 system ay ang pangunahing serological system na tumutukoy sa compatibility o incompatibility ng transfused blood. Binubuo ito ng dalawang genetically determined agglutinogens (antigens A at B) at dalawang agglutinins (antibodies α at β).

Ang mga aglutinogens A at B ay matatagpuan sa stroma ng mga erythrocytes, at ang agglutinins α at β ay matatagpuan sa serum ng dugo. Ang aglutinin α ay isang antibody laban sa agglutinogen A, at ang agglutinin β laban sa agglutinogen B. Hindi maaaring magkaroon ng mga agglutinogen at agglutinin ng parehong pangalan sa mga pulang selula ng dugo at serum ng dugo ng isang tao. Kapag nagtagpo ang mga antigen at antibodies ng parehong pangalan, nangyayari ang isang reaksyon ng isohemagglutination. Ang reaksyong ito ang nagiging sanhi ng hindi pagkakatugma ng dugo sa panahon ng pagsasalin ng dugo.

Depende sa kumbinasyon ng mga antigens A at B sa erythrocytes (at, nang naaayon, antibodies α at β sa suwero), ang lahat ng tao ay nahahati sa apat na grupo.

Rhesus antigen system

Ang Rh factor (Rh factor), kaya pinangalanan dahil ito ay unang natuklasan sa rhesus monkeys, ay naroroon sa 85% ng mga tao at wala sa 15%.

Sa kasalukuyan ay kilala na ang sistema ng Rhesus ay medyo kumplikado at kinakatawan ng limang antigens. Ang papel ng Rh factor sa panahon ng pagsasalin ng dugo, gayundin sa panahon ng pagbubuntis, ay napakahalaga. Mga error na humahantong sa pagbuo ng Rh conflict sanhi malubhang komplikasyon, at kung minsan ang pagkamatay ng pasyente.

Mga menor de edad na antigenic system

Ang mga menor de edad na erythrocyte group system ay kinakatawan ng isang malaking bilang ng mga antigens. Ang kaalaman sa iba't ibang sistemang ito ay mahalaga para sa paglutas ng ilang mga isyu sa antropolohiya, forensic na pananaliksik, gayundin sa pagpigil sa pag-unlad ng mga komplikasyon pagkatapos ng pagsasalin ng dugo at ilang mga sakit sa mga bagong silang.

Sistema ng MNS kasama ang mga salik M, N, S, s. Ang pagkakaroon ng dalawang malapit na nauugnay na gene loci, MN at Ss, ay napatunayan. Kasunod nito, ang iba pang magkakaibang mga variant ng MNS system antigens ay nakilala. Ayon sa istrukturang kemikal, ang mga MNS ay glycoproteins.

System R. Ang P antigen system ay may tiyak na klinikal na kahalagahan. May mga kaso ng maaga at huli na pagkakuha na sanhi ng mga isoantibodies anti-R. Ang ilang mga kaso ng mga komplikasyon sa post-transfusion na nauugnay sa hindi pagkakatugma ng donor at tatanggap ayon sa P antigen system ay inilarawan.

Sistema ng Kell kinakatawan ng tatlong pares ng antigens. Ang antigens na Kell (K) at Cellano (k) ay may pinakamalaking immunogenic na aktibidad. Ang mga antigen ng Kell system ay maaaring maging sanhi ng sensitization ng katawan sa panahon ng pagbubuntis at sa panahon ng pagsasalin ng dugo, maging sanhi ng mga komplikasyon ng pagsasalin ng dugo at pag-unlad ng hemolytic disease ng bagong panganak.

Sistemang Lutheran. Ang isa sa mga donor, na pinangalanang Lutheran, ay mayroong ilang hindi kilalang antigen sa kanyang mga pulang selula ng dugo, na humantong sa pagbabakuna ng tatanggap. Ang antigen ay itinalaga ng mga titik na Lu a. Pagkalipas ng ilang taon, natuklasan ang pangalawang antigen ng sistemang ito, ang Lu b. Ang kanilang dalas: Lu a - 0.1%, Lu b - 99.9%. Ang mga anti-Lu b antibodies ay isoimmune, na kinumpirma ng mga ulat ng kahalagahan ng mga antibodies na ito sa pinagmulan ng hemolytic disease ng mga bagong silang. Ang klinikal na kahalagahan ng Lutheran system antigens ay maliit.

Sistema ng bata. Ang mga antigen at antibodies ng Kidd system ay may tiyak praktikal na kahalagahan. Maaari silang maging sanhi ng pag-unlad ng hemolytic disease ng mga bagong silang at mga komplikasyon pagkatapos ng pagsasalin ng dugo na may maraming pagsasalin ng dugo na hindi tugma sa mga antigen ng sistemang ito. Ang dalas ng antigens ay tungkol sa 75%.

Sistema ng Diego. Noong 1953, sa Venezuela, isang bata ang ipinanganak sa pamilya Diego na may mga palatandaan ng hemolytic disease. Kapag tinutukoy ang sanhi ng sakit na ito, isang hindi kilalang antigen, na itinalagang Diego factor (Di), ang natuklasan sa bata. Noong 1955, isiniwalat ng pananaliksik na ang Diego antigen ay isang katangian ng lahi na katangian ng mga tao ng lahi ng Mongoloid.

Duffy system binubuo ng dalawang pangunahing antigens - Fy a at Fy b. Ang mga anti-Fy a antibodies ay mga hindi kumpletong antibodies; ipinapakita lamang nila ang kanilang epekto sa hindi direktang pagsubok na antiglobulin Coombs. Nang maglaon, natuklasan ang mga antigen na Fy x, Fy 3, Fy 4, Fy 5. Ang dalas ay depende sa lahi ng tao, na mayroon pinakamahalaga para sa mga antropologo. Sa populasyon ng Negroid, ang dalas ng Fy a factor ay 25%, sa populasyon ng Intsik, Eskimo at Australian aborigines - halos 100%, sa mga Caucasians - 60-82%.

Sistema ng Dombrok. Noong 1973, nakilala ang Do a at Do b antigens. Ang Factor Do a ay matatagpuan sa 55-60% ng mga kaso, at factor Do b - sa 85-90%. Inilalagay ng dalas na ito ang serological blood system na ito sa ikalimang lugar sa mga tuntunin ng nilalaman ng impormasyon sa aspeto ng forensic determination ng paternity (Rhesus system, MNSs, AB0 at Duffy).

Mga pangkat ng enzyme ng erythrocytes. Mula noong 1963, ang isang makabuluhang bilang ng mga genetically polymorphic enzyme system ng mga erythrocyte ng tao ay nakilala. Ang mga pagtuklas na ito ay may mahalagang papel sa pagbuo ng pangkalahatang serolohiya ng mga pangkat ng dugo ng tao, pati na rin sa aspeto ng forensic na pagsusuri ng pinagtatalunang pagka-ama. Ang mga sistema ng enzyme ng erythrocytes ay kinabibilangan ng phosphate glucomutase, adenosine deaminase, glutamate-pyruvate transaminase, esterase-D, atbp.

Sa kasalukuyang yugto, posibleng patunayan iyon sakit na hemolytic Ang fetus at bagong panganak ay isang uri ng alloimmune cytopenia na sanhi ng pagbabakuna ng ina na may mga selula ng dugo ng pangsanggol na nagdadala ng mga antigens sa kanilang mga lamad na wala sa buntis. Ang prosesong ito ay maaaring sanhi ng iba't ibang mga antigen na matatagpuan sa lamad ng mga erythrocytes at iba pang mga selula ng dugo (mga platelet, neutrophils) ng fetus, na pumapasok sa transplacentally sa daluyan ng dugo ng ina at nagiging sanhi ng pagbuo ng mga antibodies sa kanya. Ang pinaka-karaniwang sinusunod na alloimmune erythropenia ay sanhi ng hindi pagkakatugma ng dugo ng fetus at ina na may paggalang sa mga antigen ng ABO at Rhesus system.

Ang likas na katangian ng anemia na nabubuo sa fetus (hemolytic, aplastic) ay nakasalalay sa antigen o antigens na sanhi nito. Bukod dito, sa mga fetus na may erythropenia ng iba't ibang pinagmulan, katulad mga klinikal na pagpapakita mga sakit na naa-access sa mga non-invasive at invasive na paraan ng pag-verify.

Ang alloimmune erythropenia, kabilang ang hemolytic disease ng fetus/newborn (HDFN) ay isang sakit na nailalarawan sa pamamagitan ng hemolysis ng mga erythrocytes at/o pagsugpo ng hematopoiesis sa ilalim ng impluwensya ng mga antibodies na nabuo sa ina sa mga antigen ng fetal erythrocytes, na magkaparehong tumagos sa placental barrier, na ipinakita. sa fetus/bagong panganak sa pamamagitan ng anemia , isang pagtaas sa mga uri ng pagsabog ng mga pulang selula ng dugo at, kadalasan, bilirubin sa dugo.

Dahil ang mga pagkakaiba sa dugo ng ina at pangsanggol sa erythrocyte antigens ay pangunahing kahalagahan sa pathogenesis ng sakit, kinakailangang isaalang-alang ang kanilang mga immunohematological na katangian.

Sa kasalukuyang yugto ng pag-unlad ng immunohematology, higit sa 250 erythrocyte antigens ang kilala, na karaniwang ipinamamahagi sa 29 genetically. mga independiyenteng sistema. Ang bawat sistema ay naka-encode ng isa o higit pang mga gene. Ang mga antigen ng pulang selula ng dugo ay mga protina (halimbawa, ang Rhesus system), glycoproteins o glycolipids (ABO system).

Mula 1980 hanggang sa kasalukuyan, ang International Society of Blood Transfusion (ISBT) ay patuloy na gumagawa sa pag-uuri ng mga kilalang agham medikal erythrocyte antigens. Ayon sa kasalukuyang ginagamit na nomenclature, ang lahat ng erythrocyte antigens ay nahahati sa mga sistema, koleksyon at serye.

Ang talahanayan 1 ay nagpapakita ng isang listahan ng mga kilalang 29 erythrocyte antigen system, na nagkakaisa sa mga ito ayon sa prinsipyo ng pagkakaroon ng mga karaniwang gene na naka-encode ng kanilang mga produkto. Ang mga sistema ng antigen ay karaniwang itinalaga sa pagkakasunud-sunod ng kanilang pagtuklas sa pamamagitan ng tatlong-digit na mga numero sa pataas na pagkakasunud-sunod, simula sa 001. Sa loob ng system, ang bawat antigen ay mayroon ding tatlong-digit na numero. Kaya, ang bawat antigen ay karaniwang itinalaga ng isang anim na digit na numero.

Mga koleksyon pagsamahin ang mga antigen na nauugnay sa biochemically at serologically sa antas ng phenotypic, ngunit walang mga karaniwang gene na naka-encode ng kanilang mga produkto, at samakatuwid ay hindi nakakatugon sa mga kinakailangan para sa mga antigen system.

Ang mga antigen kung saan ang mga gene na naka-encode sa kanila ay hindi pa napag-aaralan ay pinagsama-sama serye mula sa dalawang pangkat – may mababa at mataas na dalas pangyayari.

Mga alloantigen ng pulang selula ng dugo conventionally nahahati sa karaniwang antigens antigens average na dalas ng paglitaw At bihira antigens. Ang mga karaniwang nagaganap na antigen ay matatagpuan sa halos lahat ng tao, kaya ang mga antibodies sa naturang mga antigen ay bihirang nabuo. Gayunpaman, kung kinakailangan na magsagawa ng pagsasalin ng dugo sa mga pasyente na may mga antibodies sa mga karaniwang nakakaharap na antigens, bilang panuntunan, ang mga paghihirap ay lumitaw sa pagpili ng mga donor. Kung ang isang antigen ay karaniwan na may dalas na mas mababa sa 1%, kung gayon ito ay inuri bilang isang bihirang antigen.

Talahanayan 1

Mga sistema ng antigen ng pulang selula ng dugo

Sa mga pasyente na may isoimmunization sa mga bihirang antigens, sa karamihan ng mga kaso, ang mga paghihirap ay lumitaw kapag nagsasagawa ng isang immunohematological na pagsusuri upang i-verify ang mga antibodies, dahil ang prosesong ito ay nangangailangan ng isang mahaba, mahal na pag-aaral gamit ang isang malaking bilang ng mga sample at mga sistema ng pagsubok.

Dahil clinically makabuluhang mga anyo Ang hemolytic disease ay pangunahing sanhi ng mga antibodies na nabuo sa mga antigen ng Rhesus system, dapat tayong tumuon sa mga klasipikasyon na iminungkahi para sa mga antigen ng sistemang ito. Mayroong ilang mga naturang klasipikasyon. Ang isa sa kanila ay Pag-uuri ng Wiener ng Rh antigens. Ito ay batay sa palagay na mayroon lamang isang lugar sa Rh chromosome na maaaring sakupin ng isa sa walong allelomorphic genes. Ang bawat gene ay nag-encode sa paggawa ng isang agglutinogen, na isang kumplikadong mga antigen. Ang pagtatalaga ng Wiener ng mga antigen ay kumplikado at kasalukuyang hindi malawakang ginagamit sa immunohematology. Gayunpaman, kaugalian na italaga ang pagtitiyak ng mga antibodies sa anti-Rhesus immunoglobulin - "Rho (D)".

Inirerekomenda para sa paggamit ng WHO Expert Committee on Biological Standards Pag-uuri ng Fischer-Reiss ng Rh antigens. Ito ay batay sa pagpapalagay na mayroong tatlong mga site para sa tatlong mga gene sa Rh chromosome. Bukod dito, ang bawat gene complex ay binubuo ng tatlong antigenic determinants: D o ang kawalan nito - d, C o c, E o e sa iba't ibang kumbinasyon.

Sa pagsasaliksik mga nakaraang taon Ipinakita na mayroon lamang dalawang gene (RHD At RHCE), responsable para sa paggawa ng mga erythrocyte antigens ng Rh system. Kaya, ang produksyon ng antigen D ay kinokontrol ng gene R.H.D. habang ang antigens C, c, E, e - genome RHCE. Kung saan malaking bilang ng ang mga antigen na bumubuo sa Rhesus system (48 antigens) ay ipinaliwanag sa pamamagitan ng mga mutasyon sa dalawang gene na ito. Walang data sa pagkakaroon ng d antigen, dahil walang gene na responsable para sa synthesis ng antigen na ito.

Ang hemolytic disease ng fetus at bagong panganak ay maaaring sanhi ng mga antigen ng Rhesus system maliban sa D, pati na rin ang iba pang tinatawag na "irregular" na antigens ng iba pang mga system o isang kumbinasyon ng ilang antigens ng isang system. Sa kasong ito, ang terminong "erythrocyte alloimmunization" ay kadalasang ginagamit sa panitikan upang makilala ang proseso ng alloimmune.

Ito ay alloimmunization ng erythrocyte antigens na siyang pangunahing sanhi ng pagbuo ng anemic syndrome sa fetus. Kaya, ayon sa US Center for Disease Control and Prevention (taon), sa kabila ng ipinatupad na immunoprophylaxis program, ang Rh sensitization ay nangyayari sa 6.7 kaso sa bawat 1000 live na panganganak. Kung idaragdag natin sa mga kasong ito ang pag-unlad ng alloimmunization sa ilalim ng impluwensya ng erythrocyte antigens ng iba pang mga grupo (Kell, Kidd, Duffy), pagkatapos ay higit sa 30,000 mga fetus ang nakarehistro taun-taon sa Estados Unidos na may panganib na magkaroon ng alloimmune anemia. Sa kasamaang palad, tulad ng buong-scale na istatistika sa Pederasyon ng Russia ay hindi pa magagamit dahil sa hindi sapat na pagpapatupad ng detalyadong immunohematological na pagsusuri ng mga pasyenteng nasa panganib.

Kaya, upang sapat na masuri ang pagkakaroon ng isoimmunization, kinakailangan, una sa lahat, upang maghanap at makilala ang mga erythrocyte antibodies na nagpapalipat-lipat sa dugo ng isang buntis.

Ang papel na ginagampanan ng mga erythrocyte antigens sa paglitaw ng hemolytic disease ng fetus at bagong panganak ay naiiba at natutukoy ng kakayahan ng mga alloantibodies na nabuo sa isang tiyak na klase ng antigens upang sirain ang mga erythrocytes o guluhin ang mga proseso ng kanilang pagbuo sa fetus. Ang proseso ng pagbuo ng immune antibodies sa fetal red blood cell antigens ay nakasalalay sa pagkakaroon ng antigen na wala sa ina, ang immunogenicity nito, pati na rin ang bilang ng fetal red blood cell na pumapasok sa bloodstream ng buntis.

Ang mga antibodies sa erythrocyte antigens (alloantibodies) ay natural (regular) at immune (irregular). Kaya, sa serum ng dugo ng mga tao (maliban sa mga indibidwal na may pangkat ng dugo AB), ang mga likas na natural na antibodies sa antigens A at/o B ng sistema ng ABO, na binubuo ng apat na antigens, ay patuloy na naroroon.

Ang sakit sa fetus at, pagkatapos, sa bagong panganak ay sanhi ng hindi pagkakatugma ng mga pulang selula ng dugo ng ina at fetus ayon sa ABO antigen system sa 10-20% ng lahat ng mga kaso. Bukod dito, ang hemolytic disease ng fetus/newborn ay nagkakaroon ng 40 beses na mas madalas sa mga babaeng may pangkat ng dugo 0 (I) at isang asawa na may ibang pangkat ng dugo. Gayunpaman, kapag nangyari ang ganitong uri ng isoimmunization malubhang anyo Ang mga sakit sa fetus at bagong panganak ay sinusunod lamang sa mga nakahiwalay na kaso - 1:3000 kapanganakan.

Paraan ng agglutination ng gel para sa pagtukoy ng mga erythrocyte antigens at anti-erythrocyte antibodies

Panimula

Ang teknolohiya ng gel sa microtubes (GTM) ay iminungkahi ni Y. Lapierre noong 1989. Ang pamamaraan ay batay sa agglutination ng mga pulang selula ng dugo sa Sephadex agar gel na inilagay sa microtubes. Karaniwan, ang sistema ay binubuo ng mga plastic card na naglalaman ng mga microtube na puno ng gel (patent DiaMed AG, Switzerland). Ang mga immunohematological na pag-aaral batay sa reaksyon ng hemagglutination ay karaniwang isinasagawa sa mga sistema ng likido-phase.

Isa sa pinaka mahahalagang kondisyon Ang pagkuha ng tamang data para sa agglutination reaction ay upang suriin ang resulta. Ang mahinang tugon ay maaaring ma-misinterpret, lalo na ng mga walang karanasan na tauhan. Ang mga maling mahina o negatibong resulta ng hindi direktang pagsusuri sa antiglobulin ay maaaring mangyari dahil sa neutralisasyon ng antiglobulin reagent sa pamamagitan ng mga bakas ng serum dahil sa hindi sapat na paghuhugas ng mga pulang selula ng dugo. Ang hindi sapat na paghahalo ng mga pulang selula ng dugo at elution ng mga mahinang naayos na antibodies sa panahon ng proseso ng paghuhugas ay maaaring magdulot ng mga error kapag nagsasagawa ng hindi direktang pagsusuri sa antiglobulin.

Ang pamamaraan ng gel agglutination ay binuo upang i-standardize ang mga reaksyon ng hemagglutination at makuha maaasahang resulta. Ang teknolohiya ng gel ay nagsasangkot ng paghihiwalay ng mga pulang selula ng dugo sa pamamagitan ng sentripugasyon, na may hindi pinagsama-samang mga pulang selula ng dugo na dumadaan sa gel at naninirahan sa ilalim ng mga tubo ( negatibong resulta), habang ang mga agglutinated ay nananatili sa ibabaw o sa kapal ng gel ( positibong resulta). Ang gel centrifugation ay maaaring ang huling yugto ng anumang serological test batay sa hemagglutination reaction, maliban sa mga pamamaraan na nangangailangan ng dispersion upang masuri ang resulta.

Kasama sa hanay ng mga pagsusuring isinagawa ang pagtukoy ng red blood cell phenotype (kabilang ang mahinang antigen variant), antiglobulin test, antibody screening at identification, compatibility test at marami pang iba.

Prinsipyo ng pagsubok ng gel

Ang buffered dextran gel na Sephadex TM G 100 superline ay maaaring neutral o naglalaman ng partikular na antisera o isang antiglobulin reagent sa gel matrix. Ang mga pulang selula ng dugo o pinaghalong pulang selula ng dugo at serum ay inilalapat sa gel. Ang mga cell ay palaging idinagdag bago ang sera - hindi tulad ng karaniwang mga serological na pamamaraan - upang ang pagsubok na sera ay hindi madikit sa gel, na lalong mahalaga kapag nagsasagawa ng isang antiglobulin test. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog, ang centrifugation ay sumusunod sa isang mahigpit na tinukoy na mode. Kung hindi natutugunan ang mga kundisyon ng centrifugation (hindi sapat ang tagal ng centrifugation o masyadong banayad), maaaring mangyari ang mga maling positibong resulta. Ang mga maling negatibong resulta ay maaari ding mangyari kung ang mga kondisyon ng centrifugation ay nilabag (sapilitan). Ang paggamit ng isang awtomatikong ID centrifuge (DiaMed) ay nag-aalis ng mga problemang ito. Tatlong uri ng gel ang karaniwang ginagamit para sa pagsubok:

1. neutral, hindi naglalaman ng mga tiyak na antibodies (ginagamit upang maghanap at makilala ang mga antibodies gamit ang mga pamamaraan ng asin at enzymatic, malamig na yugto ng pagsubok para sa pagiging tugma ng dugo ng donor at tatanggap);
2. tiyak, na naglalaman ng mga antibodies (monoclonal o polyclonal) sa mga erythrocyte antigens ng tao (ginagamit para sa pag-type ng mga erythrocyte antigens ng ABO, Rhesus, Kell system, atbp.)
3. antiglobulin, na naglalaman ng mga antibodies (polyspecific o monospecific) sa mga immunoglobulin ng tao at mga bahagi ng complement system (ginagamit para sa direkta at hindi direktang antiglobulin test (Coombs test) sa paghahanap at pagkilala ng mga auto- at alloimmune antibodies, pagsubok para sa pagiging tugma ng dugo ng ang donor at tatanggap).

Ang dugong susuriin ay idinagdag sa itaas na bahagi microtubes ng diagnostic card, at sa panahon ng centrifugation, agglutinated at non-agglutinated erythrocytes ay pinaghihiwalay tulad ng sumusunod: non-agglutinated erythrocytes ay may sukat na maihahambing sa laki ng mga particle ng gel at malayang dumaan sa kanila sa ilalim ng impluwensya ng centrifugal force, na bumubuo ng isang compact na pula. sediment sa ilalim ng microtube - isang negatibong resulta; dahil sa kanilang malaking sukat, ang mga agglutinated na pulang selula ng dugo ay nananatili sa ibabaw ng gel o sa kapal nito - isang positibong resulta.

Ang naayos na agglutination sa gel ay ginagawang madali upang suriin ang resulta ng reaksyon, at ang pagkakaroon ng isang control microtube sa diagnostic card ay nagpapatunay sa pagiging maaasahan ng data na nakuha.

Depende sa lakas ng reaksyon ng agglutination sa medium ng gel, tinatanggap ang sumusunod na pagtatasa ng mga resulta na nakuha:

• malakas na positibo (++++) - ang nabuo na erythrocyte agglutinates ay nananatili sa ibabaw ng gel;
• positibo (+++) - ang mga agglutinate ay matatagpuan sa itaas na ikatlong bahagi ng haligi ng gel;
• mahinang positibo (++) - ang mga agglutinate ay naayos sa itaas na dalawang-katlo ng gel;
• napaka mahina positibo (+) - ang mga agglutinate ay matatagpuan sa mas mababang ikatlong bahagi ng gel;
• negatibo (-) - ang mga pulang selula ng dugo ay bumubuo ng isang compact sediment sa ilalim ng microtube.

Kagamitan at reagents

• ID card para sa pagtukoy ng erythrocyte antigens at anti-erythrocyte antibodies;
• ID centrifuge para sa centrifuging card;
• termostat sa +37°C;
• rack para sa mga test tube at card;
• mga test tube na may kapasidad na 5 at 10 ml;
• semi-awtomatikong single-channel pipettes (10, 25, 50 µl);
• guwantes na pang-opera ng goma;
• solusyon sa pagbabanto 1 (solusyon ng bromelain);
• solusyon sa pagbabanto 2 (mababang solusyon sa lakas ng ionic - LISS, RNIS);
• 0.9% solusyon ng sodium chloride;
• karaniwang na-type na mga pulang selula ng dugo ng tao para sa pagtuklas ng antibody at cross-reaksyon.

Mga katangian ng mga kard ng pagkakakilanlan

Ang Dia-Med identification card (ID card) ay mga plastic card na may anim na microtube na nakapaloob sa mga ito. Ang limang tubo ay naglalaman ng pinaghalong gel at antisera. Ang bawat card ay may ikaanim na control tube na naglalaman ng neutral na gel na walang antibodies (ctl). Ang pag-label ng mga tubo sa ID card ay isinasagawa ayon sa mga nakikitang antigen, halimbawa: A-B-AB-D-CDE-ctl o C-c-E-e-K-ctl. Ang mga kard ng pagkakakilanlan para sa pag-detect ng mga antibodies sa mga erythrocyte antigens ay may ilang pagkakaiba, halimbawa, mga card na "Coombs / Enzyme Test": tatlong tubo na matatagpuan sa kaliwa ay naglalaman ng isang gel na naglalaman ng mga antibodies sa mga globulin ng tao (monospecific anti-IgD o polyspecific - sa mga immunoglobulin ng iba't ibang klase ) - Reaksyon ng Coombs. Ang susunod na tatlong tubo ay naglalaman lamang ng isang neutral na gel na idinisenyo upang makita ang mga antibodies sa mga antigen ng pulang selula ng dugo sa isang saline na kapaligiran.

Pangkalahatang tuntunin para sa paggamit ng mga kard ng pagkakakilanlan

1. Ang mga ID card ay dapat na nakaimbak sa isang tuyo na lugar, protektado mula sa liwanag, sa temperatura na 18-25°C. Ang petsa ng pag-expire ay ipinahiwatig sa bahagi ng pasaporte ng bawat card at sa mga kahon ng packaging.
2. Ang mga solusyon para sa paghahanda ng mga pagsususpinde ng pulang selula ng dugo, pati na rin ang karaniwang sera at karaniwang ID na mga pulang selula ng dugo na ginagamit sa mga indibidwal na pag-aaral, ay dapat na nakaimbak sa isang tuyo na lugar, protektado mula sa liwanag, sa temperatura na 2-8°C. Ang petsa ng pag-expire ay ipinahiwatig sa label ng bawat bote at packaging box.
3. Upang maiwasan ang pagtanggap maling resulta pananaliksik, ipinagbabawal na gumamit ng anumang reagents at card na nag-expire na, pati na rin ang mga natuyo, naglalaman ng mga bula ng gas, o may mga napinsalang shell.
4. Ang pagkolekta ng dugo ay isinasagawa gamit ang mga modernong pamamaraan ng phlebotomy, at angkop din ang arterial, capillary at umbilical cord (nang walang paghuhugas). Ang parehong mga sample ng buong dugo (kinuha sa isang malinis, tuyo na tubo) at mga sample ng dugo na kinuha gamit ang mga preservative at stabilizer ay angkop para sa pananaliksik.

Pag-type ng mga erythrocyte antigens

Ang mga DiaMed ID card ay inilaan para sa sabay-sabay na pagtukoy ng pangkat ng dugo ayon sa ABO system at ang Rh affiliation ng mga erythrocytes ng mga donor at recipient (kabilang ang kanilang mga mahihinang variant ng antigens), pati na rin para sa pag-type ng iba pang erythrocyte antigens. Maaaring gamitin ang mga DiaMed ID card sa halip na o kahanay ng isohemagglutinating sera, anti-D, anti-DCE reagents, anti-A, anti-B, anti-D at anti-D Super coliclones.

• [ipakita] .

  Ang paunang yugto ay isinasagawa nang iba, depende sa uri ng mga ID card na ginamit, na naglalaman ng polyclonal (tingnan ang punto 1a sa ibaba) o monoclonal (tingnan ang punto 16) na mga antibodies:

  1a) Maghanda ng pagsususpinde ng pagsusuri ng mga pulang selula ng dugo sa isang solusyon para sa pagtunaw ng mga ICID card na naglalaman ng polyclonal antibodies) kung saan:

  • panatilihin ang Dilution Solution 1 hanggang umabot sa temperatura ng silid;
  • maghanda ng 5% suspension ng test red blood cell sa Dilution Solution 1 sa pamamagitan ng paglalagay ng 0.5 ml ng Dilution Solution 1 at 50 μl ng test whole blood o 25 μl ng red blood cell sa isang test tube;
  • ihalo malumanay at incubate para sa 10 minuto sa temperatura ng kuwarto;
  • Gamitin nang hindi lalampas sa 15 minuto pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog.

  16) Maghanda ng pagsususpinde ng pagsusuri ng mga pulang selula ng dugo sa Dilution Solution 2 (mga ID card na naglalaman ng mga monoclonal antibodies) kung saan:

  • panatilihin ang Dilution Solution 2 hanggang umabot sa temperatura ng silid;
  • lagyan ng label ang malinis na test tubes;
  • maghanda ng 5% suspension ng test red blood cells sa Dilution Solution 2 sa pamamagitan ng paglalagay ng 0.5 ml ng Dilution Solution 1 at 50 μl ng test whole blood o 25 μl ng red blood cell sa isang test tube.
• Mga karagdagang aksyon [ipakita] .
  1. Lagyan ng label ang ID card (N ng sample ng serum na sinusuri o buong pangalan ng pasyente).
  2. Alisin ang proteksiyon na foil mula sa mga tubo ng ID card.
  3. Magdagdag ng 10 μl ng test red blood cell, na inihanda alinsunod sa clause 1a, o 50 μl ng test red blood cell, na inihanda alinsunod sa clause 16, sa bawat ID-card tube.
  4. Mag-install ng mga ID card sa rotor ng ID centrifuge (na may obligadong pagbabalanse sa iba pang mga ID card, posibleng hindi nagamit).
  5. Centrifuge ID card (ang oras at bilis ng centrifugation ay pare-pareho at awtomatikong nakatakda).
  6. Suriin ang resulta ng pag-aaral: Ang resulta sa control microtube - "ctl" - ay dapat palaging negatibo. Ang isang positibong reaksyon sa "kontrol" ay maaaring sanhi ng pagkakaroon ng mga autoantibodies at hindi tiyak na mga protina ng plasma. Kung ang "kontrol" ay positibo, ang pagpapasiya ay hindi mapagkakatiwalaan; dapat itong ulitin pagkatapos hugasan ang sample ng pulang selula ng dugo nang isang beses gamit ang isang 0.9% sodium chloride solution o Dilution Solution 2.
  7. Ilagay ang mga resulta ng pagtukoy sa bawat antigen sa naaangkop na column ng ID card (sa puting field sa ibaba ng bawat antigen).
  8. Tukuyin ang resulta ayon sa sumusunod na pamamaraan (Talahanayan 18.7-18.9)

  Talahanayan 18.7. Mga resulta ng pag-aaral ng ABO at Rh blood group antigens sa ABO/Rh ID card
  Nakikitang mga antigen					Konklusyon
  A	SA	AB	D	CDE
  +	+	+	+	+	AB Rh+
  +	+	+	-	-	AB Rh-
  +	-	+	+	+	Isang Rh+
  +	-	+	-	-	Isang Rh-
  -	+	+	+	+	B Rh+
  -	+	+	-	-	sa Rh-
  -	-	-	+	+	0 Rh+
  -	-	-	-	-	0 Rh-
  Tandaan: Ang pagtitiyak ng pagsubok ay kinumpirma ng isang negatibong resulta sa isang test tube na may kontrol ng ID-card.

  Talahanayan 18.8 Pagpapasiya ng erythrocyte antigens ng ABO system
  Uri ng dugo
  	anti-A	anti-B	anti-AV
  0(1)	-	-	-
  A1(II)	++++	-	++++
  A2(II)	++++	-	++++
  A3(II)	++/+++	-	++/++++
  A x (II)*	-/++	-	+/++
  B(II)	-	++++	++++
  B3(III)	-	+/+++	+/+++
  B x (III)*	-	-/++	-/++
  A1B(IV)	++++	++++	++++
  A2B(IV)	+++/++++	++++	++++
  Tandaan: * - Ang pagpapasiya ng napakahinang mga variant ng antigens A at B ay nangangailangan ng karagdagang pananaliksik.

  Talahanayan 18.9 Pagpapasiya ng katayuan ng Rh (D, CDE)
  Rhesus na kaakibat	Mga resulta ng pag-aaral na may mga serum
  	Anti-D	Anti-CDE
  D-positibo	++++	++++
  D-negatibo	-	-
  D-negatibo, C	E-positive*	-
  Mahina ang positibo (D u)	mula ± hanggang +++	mula +++ hanggang ++++
  Tandaan: * - Positibong reaksyon sa anti-CDE serum sa negatibong reaksyon na may anti-D serum ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng antigens C, E at nangangailangan ng karagdagang pag-type gamit ang mga ID card: C-c-E-e-K-stl o C-C w -c-E-e-K

Ginamit ang mga ID card

Kapag tinutukoy ang mga pangkat ng dugo at kaakibat ng Rhesus, ginagamit ang mga polyclonal (Talahanayan 18.10 [ipakita] ) at monoclonal (Talahanayan 18.11 [ipakita] ) reagents. Ang pinakakaraniwang paggamit sa pagsasanay dahil sa pagiging posible sa ekonomiya maghanap ng monoclonal sera.

Sa pamamagitan ng modernong klasipikasyon Ang mga indibidwal na may mahinang variant ng D antigen na nakakagawa ng anti-D antibodies ay nabibilang sa pitong kategorya. Ang pinakamataas na dalas ng paglitaw at praktikal na kahalagahan ay ang kategorya VI, ang mga erythrocyte na kung saan ay nagdadala lamang ng Z epitope ng antigen D. Ang mga tao sa kategoryang VI (mga Rh-negatibong tatanggap, ngunit Rh-positive na mga donor!) ay maaaring makagawa ng mga antibodies sa hindi nagbabagong D at bahagyang D ng lahat ng iba pang kategorya. Upang kumpirmahin ang pangkat ng dugo, iba't ibang mga ID card ang ginagamit: D(IV -) - para sa mga tatanggap, D(IV +) - para sa mga donor.

Ang pagpapasiya ng pangkat ng dugo ng ABO at Rh affiliation ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagtukoy ng mga partikular na antigen at antibodies (doble o cross reaction) (Talahanayan 18.12 [ipakita] ).

Para sa isang malalim na pagsusuri, ginagamit ang iba pang mga mapa (Mga Talahanayan 18.13-18.14 [ipakita] ).

Pagtuklas ng mga anti-erythrocyte antibodies

Prinsipyo ng pamamaraan

Ang test sera at karaniwang mga pulang selula ng dugo para sa pagtuklas ng antibody ay idinaragdag sa tuktok ng microtubes. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog at centrifugation, ang mga agglutinated na pulang selula ng dugo ay nananatili sa itaas na bahagi ng tubo, dahil hindi sila dumaan sa gel dahil sa Malaki agglutinates (positibong resulta). Sa kawalan ng mga antibodies upang subukan ang mga erythrocyte antigens, ang mga agglutinate ay hindi nabuo. Ang di-agglutinated na mga pulang selula ng dugo ay madaling dumaan sa gel at tumira sa ilalim ng tubo (negatibong resulta). Ang likas na katangian ng agglutination kapag nakita ang mga antibodies sa erythrocytes ay nakasalalay sa titer ng mga antibodies, ang kanilang aktibidad at tinasa mula ++++ hanggang +.

• Algoritmo ng pananaliksik [ipakita] .

  Bago ang pagsubok, ang mga na-type na pulang selula ng dugo ay dapat munang hugasan ng dalawang beses mula sa pang-imbak na may 0.9% na solusyon ng sodium chloride, at pagkatapos ay gawin ang mga sumusunod na hakbang:

  • panatilihin ang Dilution Solution 2 hanggang sa maabot ang temperatura ng silid;
  • lagyan ng label ang mga tubo;
  • maghanda ng 0.8% na suspensyon ng mga na-type na erythrocytes sa Solution para sa dilution 2, paglalagay ng 1.0 ml ng Solution para sa dilution 2 at 10 μl ng dugo sa isang test tube;
  • alisin ang proteksiyon na foil mula sa ID card;
  • markahan ang ID card (ang bilang ng sample ng serum na pinag-aaralan o buong pangalan ng pasyente);
  • magdagdag ng 50 μl ng karaniwang pulang selula ng dugo sa microtubes;
  • magdagdag ng 25 μl ng serum o plasma ng sample ng pagsubok sa bawat microtube;
  • incubate para sa 15 minuto sa temperatura ng +37"C;
  • centrifuge ID card sa isang ID centrifuge (ang centrifugation time at speed ay pare-pareho at awtomatikong nakatakda).

  Tandaan: ang karaniwang mga pulang selula ng dugo ng mga panel ng ID-DiaCell I-II-III at ID-DiaCell I-Ii-III P mula sa DiaMed ay handa nang gamitin nang walang paunang paghuhugas at paggamot gamit ang Dilution Solution 2.

• Interpretasyon ng mga resulta [ipakita] .

  Ang isang positibong reaksyon ay nangangahulugan ng pagkakaroon ng immune antibodies sa sample ng pagsubok.

  Kung meron positibong reaksyon Sa lahat ng panel ng ID-DiaCell na mga pulang selula ng dugo, inirerekumenda na magsagawa ng autocontrol upang ibukod ang mga autoantibodies sa sample ng pagsubok.

  Kung ang reaksyon ay nananatiling negatibo sa isa o higit pang mga uri ng mga pulang selula ng dugo sa panel ng ID-DiaCell, ang pagiging tiyak ng mga antibodies ay maaaring itatag gamit ang kasamang sheet - isang talahanayan ng mga profile ng antigen na kasama sa lahat ng mga pakete ng ID-DiaCell. Sa kasong ito, dapat mong tiyakin na ang mga numero ng panel ng ID-DiaCell1 at ang kasamang sheet ay tumutugma.

  Kung ang panel na ito ay hindi nagtatag ng antibody specificity, inirerekumenda na ipagpatuloy ang pagkakakilanlan gamit ang ID-DiaPanel at/o ID-DiaPanel P na pinahusay na red blood cell panel (depende sa technique na unang ginamit).

Screening at pagkilala ng mga antibodies

Ang pag-screen ng antibody ay isinasagawa kapwa sa neutral na gel at sa isang gel na naglalaman ng antiglobulin reagent (Talahanayan 18.15-18.16 [ipakita] ). Sa unang kaso, ang mga erythrocyte na ginagamot ng enzyme ay ginagamit para sa pananaliksik; sa pangalawa, ang isang suspensyon ng mga erythrocytes sa isang solusyon ng mababang lakas ng ionic ay ginagamit. Ginagawa ang pagsusuri at pagkilala sa antibody gamit ang isang karaniwang panel ng pulang selula ng dugo. Kapag sinusuri ang pagiging epektibo ng gel test para sa screening at pagkilala ng mga antibodies, ang mas mataas na sensitivity nito ay itinatag kumpara sa mga tradisyonal na pamamaraan.

Mga pamamaraan para sa pag-aaral ng mga antibodies sa erythrocyte antigens

• Antiglobulin test (indirect Coombs test) [ipakita] .

  Ang indirect antiglobulin test (IAT) ay ginagamit upang makita ang mga anti-erythrocyte antibodies. Karaniwang ginaganap ang NAT sa dalawang yugto:

  1. incubation ng erythrocytes at serum (fixation ng antibodies) na sinusundan ng paghuhugas upang alisin ang mga hindi nakatali na globulin; ang pagsasagawa ng hindi direktang antiglobulin test sa isang gel test ay hindi nangangailangan ng paghuhugas ng mga pulang selula ng dugo!
  2. pagpapapisa ng itlog ng mga hugasan na erythrocytes na may anti-human globulin (ACG). Ang aglutinasyon ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon sa serum ng mga antibodies na nakatali sa mga erythrocyte antigens sa vitro.

  Ginagamit ang NAT para sa:

  1. pagpapasiya ng mga antibodies sa donor erythrocytes sa serum ng tatanggap - kapag nagsasagawa ng pagsubok sa pagiging tugma;
  2. kapag nag-screen para sa "hindi inaasahang" anti-erythrocyte antibodies;
  3. kapag nag-aaral ng anti-erythrocyte antibodies sa mga buntis na kababaihan;
  4. kapag nag-aaral ng mga antibodies sa serum ng mga pasyente na may autoimmune hemolytic anemia.

  Pag-unlad ng pagpapasiya:

  • magdagdag ng 50 μl ng isang suspensyon ng mga na-type na erythrocytes sa tatlong ID-card tubes na matatagpuan sa kaliwa;
  • magdagdag ng 25 μl ng test serum sa mga test tubes;
  • centrifuge ID card sa loob ng 10 minuto;
  • suriin ang resulta ng pag-aaral. Ilagay ang resulta sa iyong ID card.

  Mga resulta ng pagpapasiya:

  • ang isang positibong resulta ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng immune (allo) antibodies sa serum o plasma ng pagsubok (upang matukoy ang pagtitiyak ng mga antibodies, gamitin ang talahanayan na nakalakip sa karaniwang mga pulang selula ng dugo);
  • ang negatibong resulta ay nagpapahiwatig ng kawalan ng immune antibodies sa test serum o plasma.
• Paraan ng enzyme [ipakita] .

  Ang paggamot na may proteolytic enzymes ay nagpapataas ng agglutinability ng mga erythrocytes.

  Pag-unlad ng pagpapasiya:

  • magdagdag ng 50 μl ng isang suspensyon ng standard typed erythrocytes sa tatlong ID-card tubes na matatagpuan sa kanan;
  • magdagdag ng 25 μl ng Dilution Solution 1 sa mga test tubes;
  • magdagdag ng 25 μl ng test serum sa mga test tube.

  Tandaan: Ang dilution solution 1 ay hindi idinagdag kung ang karaniwang type na red blood cell na paunang ginagamot ng isang proteolytic enzyme ay ginagamit para sa pag-aaral (halimbawa, ID-DiaCell I-II-III P mula sa DiaMed).

  • incubate para sa 15 minuto sa +37 ° C;
  • centrifuge ID card sa isang Sh-centrifuge sa loob ng 10 minuto (awtomatikong itinatakda ang mga parameter);
  • ipasok ang resulta sa ID-card.

  Mga resulta ng pananaliksik:

  • ang isang positibong resulta ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng mga alloantibodies sa serum o plasma ng pagsubok (upang matukoy ang pagtitiyak ng mga antibodies, gamitin ang talahanayan na nakalakip sa karaniwang mga pulang selula ng dugo);
  • ang negatibong resulta ay nagpapahiwatig ng kawalan ng alloantibodies sa serum o plasma ng pagsubok.
• Paraan ng malamig na agglutination [ipakita] .

  Pag-unlad ng pagpapasiya:

  • incubate ang Dilution Solution 2, nag-type ng red blood cell at ID card sa loob ng 30 minuto sa temperaturang 2-8°C;
  • gamutin ang mga naka-type na pulang selula ng dugo gamit ang Dilution Solution 2, kung saan:
    • lagyan ng label ang test tube;
    • maghanda ng 0.8% na suspensyon ng mga type na erythrocytes sa Dilution Solution 2 sa pamamagitan ng paglalagay ng 1.0 ml ng Dilution Solution 2 at 10 µl ng dugo sa isang test tube.

  Tandaan: Ang karaniwang ID-DiaCell na mga pulang selula ng dugo (mula sa DiaMed) ay handa nang gamitin at hindi nangangailangan ng pagbabanto;

  • magdagdag ng 50 μl ng isang suspensyon ng mga na-type na erythrocytes na ginagamot sa Dilution Solution 2 sa tatlong ID-card tubes na matatagpuan sa kanan;
  • magdagdag ng 25 μl ng test serum sa mga tubo na ito;
  • incubate para sa 30 minuto sa isang temperatura ng 2-8 C;
  • centrifuge ID card sa isang ID centrifuge sa loob ng 10 minuto (awtomatikong itinatakda ang mga parameter);
  • suriin ang resulta ng pag-aaral;
  • ipasok ang resulta sa ID-card. Mga resulta ng pananaliksik:
  • ang isang positibong resulta ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng mga malamig na antibodies sa serum o plasma ng pagsubok (upang matukoy ang pagtitiyak ng mga antibodies, gamitin ang talahanayan na nakalakip sa karaniwang mga pulang selula ng dugo);
  • ang isang negatibong resulta ay nagpapahiwatig ng kawalan ng malamig na antibodies sa serum o plasma ng pagsubok.

  Kung mayroong malamig o mainit na autoantibodies sa test serum, maling positibo. Upang ibukod ang mga ito, kinakailangang mag-install ng autocontrol:

  • maghanda ng 0.8% na pagsususpinde ng mga pulang selula ng dugo ng pagsusuri ng dugo sa Dilution Solution 2, pagdaragdag ng 10 μl ng buong dugo sa 1.0 ml ng Dilution Solution 2;
  • magdagdag ng 50 μl ng inihandang erythrocyte suspension sa ID-card tube na matatagpuan sa kaliwa (para sa Coombs reaction) o sa ID-card tube na matatagpuan sa kanan (para sa enzymatic method at cold agglutination);
  • magdagdag ng 25 μl ng test serum sa mga tubong ID-card (para sa paraan ng enzyme, kailangan mong magdagdag ng isa pang 25 μl ng Dilution Solution 1 sa mga test tubes);
  • incubate ang mga card sa loob ng 15 minuto sa temperatura na +37°C (para sa reaksyon ng Coombs at sa enzymatic na paraan) o sa temperatura na 2-8°C (para sa pag-set up ng autocontrol ng cold aglutination).

  Ang isang positibong resulta sa autocontrol ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng mga autoantibodies sa test serum.

Pagtukoy sa pagkakatugma ng dugo ng donor at tatanggap

Ang layunin ng pagsusulit ay upang indibidwal na pagkakatugma ay upang maiwasan ang mga pagsasalin ng hemocomponents na hindi tugma sa erythrocyte antigens. Ang pagsubok sa serum ng tatanggap gamit ang mga pulang selula ng dugo ng nilalayong donor ay ang pinaka maaasahang paraan pagtukoy ng mga antibodies na maaaring magdulot ng pinsala sa mga naisalin na pulang selula ng dugo, mga reaksyon pagkatapos ng pagsasalin at mga komplikasyon ng hemolytic. Ang pagsasagawa ng naturang pagsubok ay nagpapahintulot sa iyo na:

1. kumpirmahin ang pagiging tugma ng ABO ng donor at tatanggap;
2. tukuyin ang mga antibodies sa serum ng tatanggap na nakadirekta laban sa mga erythrocyte antigens ng donor.

Pagsubok para sa indibidwal na pagkakatugma ng dugo ng donor at tatanggap gamit ang erythrocyte antigens (Talahanayan 18.17 [ipakita] ) ay hindi pinapalitan ang ipinag-uutos na immunohematological na pag-aaral (pag-type ng mga erythrocyte antigens ng ABO, Rhesus, Kell system, pagtuklas ng mga anti-erythrocyte antibodies, paghahanap at pagkilala ng allo-anti-erythrocyte antibodies), ngunit pinupunan lamang ito.

Dahil sa ang katunayan na ang sensitization ay maaaring mangyari kahit na pagkatapos ng pagsasalin ng mga indibidwal na piniling hemocomponents, para sa compatibility testing ito ay kinakailangan upang gamitin sa bawat oras na sariwang pasyente serum nakuha pagkatapos ng huling pagsasalin ng hemocomponents.

Dapat magsagawa ng compatibility test para sa bawat sample ng dugo ng donor!

• Pag-unlad ng pagpapasiya [ipakita]
  • panatilihin ang Dilution Solution 2 hanggang sa maabot ang temperatura ng silid (20-24°C);
  • lagyan ng label ang mga ID card at test tubes (buong pangalan ng donor at tatanggap);
  • maghanda ng 0.8% suspension ng donor at recipient erythrocytes sa Dilution Solution 2, kung saan magdagdag ng 1 ml ng Dilution Solution 2 sa dalawang may label na test tubes, magdagdag ng 10 μl ng donor at recipient na dugo, ayon sa pagkakabanggit;
  • paghaluin;
  • alisin ang proteksiyon na foil mula sa kaukulang ID card;
  • magdagdag ng 50 μl ng inihandang donor erythrocyte suspension sa ID-card microtubes 1, 2, 3, 4, 5;
  • magdagdag ng 50 μl ng inihandang suspensyon ng recipient erythrocytes sa ID-card microtubes 4, 5, 6;
  • magdagdag ng 25 μl ng recipient serum o plasma sa ID-card microtubes 1, 2, 3, 6;
  • magdagdag ng 25 µl ng Dilution Solution 1 sa ID-card microtube 4 (enzyme test);
  • incubate para sa 15 minuto sa +37 ° C;
  • centrifuge (ang oras at bilis ng centrifugation ay pare-pareho at awtomatikong itinakda);
  • suriin ang resulta ng pag-aaral. Pagkakatugma para sa mga antigens A, B, D (1, 2, 3 microtubes):
  • ang isang malinaw na positibo o negatibong resulta ay nagpapahiwatig ng pagsusulatan ng mga antigens A, B, O ng mga pulang selula ng dugo ng donor at tatanggap;
  • kung ang isang dobleng populasyon ng mga pulang selula ng dugo ay naobserbahan (sa isang microtube ay may positibo at negatibong resulta), ang A, B, D antigens ng donor at tatanggap ay hindi magkapareho!
  • ang pagpapasiya ng pagiging tugma ng antigens A, B, D ay may bisa lamang sa isang negatibong reaksyon sa ika-6 na microtube (autocontrol).
• Mga resulta ng pagsubok sa pagiging tugma (4, 5 microtubes) [ipakita]
  • ang isang positibong resulta sa ID-card microtubes 4, 5 na may negatibong kontrol (microtube 6) ay nagpapahiwatig ng hindi pagkakatugma ng dugo ng donor at tatanggap sa mga tuntunin ng erythrocyte antigens;
  • ang isang negatibong resulta sa microtubes ng mga ID card 4, 5, 6 ay nagpapahiwatig ng pagiging tugma ng dugo ng donor at tatanggap na may paggalang sa mga erythrocyte antigens;
  • Ang isang positibong reaksyon sa microtube ID card 6 (autocontrol) ay nangangailangan ng karagdagang pagtukoy ng mga auto- at alloantibodies sa serum ng tatanggap (plasma).
• Mga paghihigpit [ipakita]
  • tiyak mga gamot maaaring magdulot maling positibong reaksyon Coombs;
  • kasama ang ilan mga kondisyon ng pathological ang mga pasyente ay maaaring makaranas ng positibong reaksyon ng Coombs;
  • ang bacterial o iba pang kontaminasyon ng materyal na ginamit ay maaaring magdulot ng maling positibo o maling negatibong resulta;
  • Ang mga residue ng fibrin sa mga sample ng pagsubok ay maaaring magbigkis ng mga di-agglutinated na mga cell at, pagkatapos ng centrifugation, bumuo ng isang manipis na pink na linya sa ibabaw ng gel, habang ang karamihan ng mga cell ay naisalokal sa ilalim ng microtube;
  • ang mga pagsususpinde ng red blood cell na labis na puro ay maaaring magdulot ng mga false-positive na reaksyon.
• Mga kondisyon ng imbakan at pagpapatakbo [ipakita]

  Ang mga DiaMed ID card ay dapat na nakaimbak sa temperatura ng silid (+18-25°C) sa isang tuyo na lugar sa buong petsa ng pag-expire.

  Ang petsa ng pag-expire ng card ay 18 buwan. Ang buhay ng istante ng mga reagents ay 2 taon.

  Ang mga resulta ng pananaliksik sa mapa ay nai-save nang hindi nagbabago:

  • 48 oras sa temperatura ng silid;
  • tatlong linggo sa refrigerator (sa +2-8°C) na ang tuktok ng ID card ay selyadong may adhesive tape.

  Ang ilalim na field ng ID card ay maaaring i-peel off o putulin at gamitin bilang isang dokumento sa isang medikal na kasaysayan o filing cabinet.

  Ang mga ID card na may mga palatandaan ng pagkatuyo ng gel, mga bula sa kapal nito o pinsala sa proteksiyon na foil ay hindi dapat gamitin.

  Ang mga sample at reagents ay dapat dalhin sa temperatura ng silid bago gamitin.

Konklusyon

Ang gel test ay isang simple, nagagawa, mabilis at napakasensitibong paraan na nagbibigay-daan sa agarang pagtuklas ng mga mahihinang variant ng mga antigen ng pulang selula ng dugo. Ang pagsusuri ay tinasa lamang sa macroscopically. Pagkatapos ng maikling pagsasanay ng mga tauhan na kailangan para sa tamang execution pagsubok, ang mga gastos sa oras ng pagtatrabaho at mga error na nakatagpo kapag gumagamit ng mga tradisyonal na pamamaraan ay pinaliit.

Pinapayagan ka ng gel test na i-standardize ang mga diskarte sa laboratoryo at magbigay ng isang layunin na pagtatasa ng mga resulta ng reaksyon ng hemagglutination. Ang katatagan ng mga resulta ng pagsubok ay nagbibigay-daan sa iyo upang i-double-check ang data na nakuha, na kinakailangan para sa kontrol. Maaaring kopyahin ang mga resulta ng pagsusulit para sa mga layunin ng archival o para sa mga layuning pang-edukasyon sa mga kaso na mahirap i-diagnose. Gumagamit ang pagsusuri ng kaunting serum o pulang selula ng dugo, na lubhang mahalaga para sa mga klinikang pediatric.

Ang paggamit ng isang sistema ng gel ay binabawasan ang panganib ng kontaminasyon ng mga tauhan kahit na nagtatrabaho sa mga potensyal na nahawaang sample. Maaaring gamitin ang gel test upang magsagawa ng mga compatibility test para sa mga red blood cell antigens bago ang pagsasalin ng dugo. Para sa layuning ito, ginagamit ang isang hindi direktang pagsusuri sa antiglobulin at isang one-step na paraan ng enzyme.

Ang pagsusuri sa gel ay isinasagawa at sinusuri ayon sa mga panuntunan sa itaas. Ang kawalan ng mga yugto ng paghuhugas ng mga pulang selula ng dugo kapag nagsasagawa ng hindi direktang pagsusuri sa antiglobulin ay nagbibigay-daan para sa mas epektibong paggamit oras ng pagtatrabaho, at gayundin, salamat sa katatagan ng mga resulta ng pagsubok, kontrolin ang lahat ng mga resultang nakuha.

Pinagmulan: Medikal mga diagnostic sa laboratoryo, mga programa at algorithm. Ed. ang prof. Karpishchenko A.I., St. Petersburg, Intermedica, 2001