فحص الجهات المانحة. الاختبارات المعملية المناعية للدم المستضدات (Ag) من كريات الدم الحمراء

المجموعبروتين الدم 60-80 جم/لتر. هناك العديد من أجزاء البروتين التي تؤدي وظائف محددة.

1. الألبومين (40-60 جم/لتر) له نشاط غرواني تناضحي عالي.

2. يتم تكوين الجلوبيولينات أ، ب، ز (20-40 جم/لتر). الحصانة الخلطية، وتشكيل أجسام مضادة مختلفة تسمى الغلوبولين المناعي (IgM، IgG).

3. الفيبرينوجين (2-4 جم/لتر) هو العامل الرئيسي في آلية تخثر الدم.

المستضدات(باليونانية ànti - ضد، genos - يخلق) - مواد لها القدرة على التسبب في تكوين الأجسام المضادة في الجسم والتفاعل معها. يتم بناء عدد من السكريات المحددة - مجمعات الأحماض الأمينية ذات الخصائص المستضدية - في غشاء كرات الدم الحمراء. وتسمى هذه المجمعات agglutinogens.

حتى الآن، تم اكتشاف أكثر من 400 مستضد موضعي في غشاء كريات الدم الحمراء في كريات الدم الحمراء البشرية، تم دمج 140 منها في 20 نظامًا يتم التحكم فيه وراثيًا. المستضدات المتبقية شائعة أو فردية. ل الممارسة السريريةوأهمها نظام ABO ونظام Rh (نظام Rh). وتتميز أيضًا مجموعات Kell-Celano، وKidd، وLutheran، وDuffy، وDiego، وما إلى ذلك، وهذه الأخيرة مهمة فقط مع عمليات نقل الدم المتكررة أو أثناء الحمل غير المتوافق مع أحد هذه الراصات. ولذلك، لا ينصح بعمليات نقل الدم المتكررة من نفس المتبرع.

تظهر مستضدات خلايا الدم الحمراء في الشهر الثاني التطور الجنينيومع ذلك، بحلول وقت ولادة الطفل، يكون نشاطه المتراص منخفضًا ويصل إلى 1/5 من نشاط البالغين.

الأجسام المضادة- المواد التي تتفاعل مع المستضد. الأجسام المضادة الطبيعية موجودة دائمًا في بلازما الدم وتنتمي إلى جزء غاما الجلوبيولين. وتشمل هذه الأجسام المضادة لنظام ABO - a و b agglutinins، والتي تظهر عند الإنسان في الأشهر الأولى بعد الولادة وتصل إلى الحد الأقصى للكميةبعمر 5-10 سنوات.

رد فعل التراص- لصق وترسيب خلايا الدم الحمراء تحت تأثير أجسام مضادة معينة - الراصات. ويعتقد أن جزيء الجسم المضاد الذي يحتوي على مركزين مرتبطين يشكل جسرا بين خليتين من خلايا الدم الحمراء. وتتواصل كل خلية من خلايا الدم الحمراء هذه بدورها مع خلايا الدم الحمراء الأخرى ونتيجة لذلك تلتصق ببعضها البعض. عند نقل الدم دم غير متوافقيؤدي التراص إلى انحلال خلايا الدم الحمراء وإطلاق عوامل التخثر. الجلطات الناتجة تسد الأوعية الصغيرة وبالتالي تعطل الدورة الدموية الشعرية.

يحدث التلصيق عندما تلتقي الراصات التي تحمل نفس الاسم من المتبرع والرصاصات من المتلقي.

اختبارات توافق الدم المنقول

يلتزم الطبيب الذي ينقل الدم بمنع عدم التوافق المحتمل مع دم المريض عن طريق إجراء دراسات المراقبة، بما في ذلك اختبارات التوافق لفصائل الدم ABO وعامل Rh.

يتم إجراء اختبارات التوافق مباشرة قبل نقل الدم. للقيام بذلك، استخدم مصل دم المريض ودم المتبرع من قارورة معدة لنقل الدم.

"أنظمة المجموعة من دم الإنسان و
مضاعفات نقل الدم"، ماجستير أومنوفا

يتم تحديد فصائل الدم باستخدام تفاعل التراص في درجة حرارة الغرفة على الخزف أو أي طبق أبيض آخر بسطح مبلل. هناك طريقتان لتحديد فصيلة الدم: استخدام الأمصال القياسية، مما يجعل من الممكن تحديد مجموعة الراصات (A أو B) الموجودة في خلايا الدم الحمراء في الدم الذي يتم اختباره؛ في وقت واحد باستخدام الأمصال القياسية وكريات الدم الحمراء القياسية (طريقة التقاطع). حيث…

يتم وضع قطرتين من مصل المريض، وقطرة واحدة من دم المتبرع، وقطرة واحدة من محلول بوليجلوسين 33٪، المعد خصيصًا للأغراض المخبرية، في أنبوب اختبار. يتم رج أنبوب الاختبار لخلط المحتويات، ثم إمالته تقريبًا إلى الأسفل الوضع الأفقيبحيث تتسرب محتوياته على جدرانه، ويقلب ببطء لمدة 5 دقائق محور رأسي، ملامسة خليط مصل المريض...

يمكن أن يكون رد فعل تراص الدم في كل قطرة إيجابيا أو سلبيا. إذا كان التفاعل إيجابيًا، فعادةً خلال أول 10 إلى 30 ثانية من بداية الخلط، تظهر في الخليط حبيبات حمراء صغيرة (متراصة) تتكون من خلايا دم حمراء ملتصقة، يمكن رؤيتها بالعين المجردة. تندمج التجمعات الصغيرة تدريجيًا في كتل أكبر، وأحيانًا في شكل رقائق ذو شكل غير منتظم. وفي الوقت نفسه، المصل تماما...

يجب غسل دم المتبرع مرتين في أنبوب اختبار حجمه 8 – 10 أضعاف حجمه محلول متساوي التوتركلوريد الصوديوم عن طريق الطرد المركزي، ثم إزالته واستخدام رواسب كريات الدم الحمراء المغسولة للبحث. يتم نقل قطرة صغيرة (0.01 مل) من خلايا الدم الحمراء المغسولة إلى أنبوب اختبار آخر، ويضاف إليها 3 قطرات من مصل المريض، وتخلط مع خلايا الدم الحمراء للمتبرع ويوضع أنبوب الاختبار في...

I. تحت التعيينات المعدة مسبقًا، يتم تطبيق قطرة واحدة كبيرة (0.1 مل) من الأمصال القياسية للمجموعات 0αβ(I)، Aβ(II) وBα(III) على اللوحة. نظرًا لاستخدام الأمصال القياسية من سلسلتين مختلفتين من كل مجموعة، يتم الحصول على إجمالي 6 قطرات، والتي تشكل صفين من 3 قطرات بالترتيب التالي من اليسار إلى اليمين: 0αβ(I)، Aβ(II) وBα(III) ). ثانيا. في أسفل السجل...

يتم تفسير النتائج من خلال تقييم ومقارنة النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام الأمصال القياسية (الصفين العلويين) واستخدام كريات الدم الحمراء القياسية (الصف السفلي). يجب أن تتطابق نتائج التفاعل التي تم الحصول عليها باستخدام الأمصال القياسية لكرات الدم الحمراء القياسية II، أي تشير إلى محتوى الراصات والراصات المقابلة لنفس فصيلة الدم. ويمكن التعبير عن هذه النتائج...

لتحديد حالة Rh، أي للكشف عن وجود أو عدم وجود مستضدات نظام Rh في دم الأشخاص، يتم استخدام الأمصال المضادة لـ Rh (الكواشف) القياسية، والتي تختلف في الخصوصية، أي تحتوي على أجسام مضادة لمستضدات مختلفة لهذا النظام. لتحديد مستضد Rh0(D)، غالبًا ما يتم استخدام مصل مضاد للريسوس مع إضافة محلول جيلاتين 10٪، أو يتم استخدام كاشف قياسي مضاد للريسوس تم إعداده مسبقًا.

1. قطرة واحدة (0.05 مل) من خلايا الدم الحمراء التي يتم اختبارها وقطرتين من محلول الجيلاتين 10%، يتم تسخينهما لتسييلهما. ماء دافئ(46 - 48 درجة مئوية). ثانيا. في أحد أنابيب الاختبار هذه، أضف قطرتين من مصل مضاد للـ Rh إلى خليط من خلايا الدم الحمراء والجيلاتين. ولا يتم إضافة هذا المصل إلى أنبوب اختبار آخر، بل يعمل كعنصر تحكم...

يتم فحص الأنابيب بالعين المجردة أو من خلال عدسة مكبرة تكبير 2x. يتم تفسير النتيجة اعتمادًا على وجود أو عدم وجود تراص خلايا الدم الحمراء. إذا كانت النتيجة إيجابية، فيمكن تمييزها بسهولة على شكل حبيبات أو رقائق حمراء على خلفية سائلة شفافة ومتغيرة اللون تقريبًا. إذا كانت النتيجة سلبية، يظهر أنبوب الاختبار ذو لون موحد اللون الوردي، سائل براق قليلاً. عينات...

1. يتم إدخال قطرة واحدة (0.05 مل) من دم الاختبار أو كريات الدم الحمراء في أنبوب الاختبار (لا تحتاج إلى غسلها من المادة الحافظة)، أضف 1-2 قطرات من الكاشف العالمي القياسي المضاد للريسوس واخلط كريات الدم الحمراء. مع الكاشف عن طريق هز أنبوب الاختبار. ثانيا. تتم إمالة أنبوب الاختبار تقريبًا إلى الوضع الأفقي بحيث تنتشر محتوياته على جدرانه، ثم يتم تدويره ببطء في هذا الوضع...

ويتم اختيار المتبرعين وفق معايير طبية موحدة تضمن سلامة الدم ومكوناته ونشاطه العالي وفعاليته.

قبل التبرع بالدم، يخضع كل متبرع لفحص: يتم أخذ التاريخ الطبي وإجراء فحص طبي شامل و فحص خاصلتحديد موانع التبرع بالدم واستبعاد إمكانية نقل مسببات الأمراض المعدية بالدم. إجراء الفحوصات المصلية والفيروسية والبكتريولوجية لدم المتبرع.

إن التقدم في مجال نقل الدم السريري يقلل من خطر انتقال مسببات الأمراض من الأمراض المعدية (عدوى فيروس نقص المناعة البشرية، والتهاب الكبد B وC، والزهري، وعدوى الفيروس المضخم للخلايا، وما إلى ذلك) عن طريق الدم ومكوناته.

أنظمة الدم المستضدية الرئيسية

لقد ثبت أن التركيب المستضدي لدم الإنسان معقد، حيث تختلف جميع العناصر المكونة لبروتينات الدم والبلازما لدى الأشخاص المختلفين في المستضدات. هناك حوالي 500 مستضد دم معروف بالفعل، وتشكل أكثر من 40 نظامًا مستضديًا مختلفًا.

يُفهم النظام المستضدي على أنه مجموعة من مستضدات الدم الموروثة (المتحكم فيها) بواسطة الجينات الأليلية.

وتنقسم جميع مستضدات الدم إلى الخلوية والبلازما. المستضدات الخلوية لها أهمية أساسية في علم نقل الدم.

المستضدات الخلوية

المستضدات الخلوية عبارة عن مجمعات معقدة من الكربوهيدرات والبروتين (جليكوببتيدات)، والمكونات الهيكلية لغشاء خلايا الدم. من المكونات الأخرى غشاء الخليةفهي تتميز بالمناعة والنشاط المصلي.

المناعة -قدرة المستضدات على تحفيز تخليق الأجسام المضادة إذا دخلت إلى كائن حي لا يحتوي على هذه المستضدات.

النشاط المصلي -قدرة المستضدات على الاتحاد مع الأجسام المضادة التي تحمل الاسم نفسه.

يتكون جزيء المستضد الخلوي من عنصرين:

شليبر (الجزء البروتيني من المستضد الموجود في الطبقات الداخلية للغشاء)، والذي يحدد القدرة المناعية؛

هابتن (جزء السكاريد من المستضد الموجود في الطبقات السطحية لغشاء الخلية)، والذي يحدد النشاط المصلي.

توجد على سطح الناشب محددات مستضدية (حواتم) - جزيئات الكربوهيدرات التي ترتبط بها الأجسام المضادة. تختلف مستضدات الدم المعروفة عن بعضها البعض في الحواتم.

على سبيل المثال، حاتمة المستضدات في النظام AB0 تحتوي على المجموعة التالية من الكربوهيدرات: حاتمة المستضد 0 هي فوكوز، حاتمة المستضد A هي N-acetylgalactosamine، وحاتمة المستضد B هي الجالاكتوز. ترتبط الأجسام المضادة الجماعية بهم.

هناك ثلاثة أنواع من المستضدات الخلوية:

كريات الدم الحمراء.

خلايا الدم البيضاء؛

صفيحة دموية.

مستضدات خلايا الدم الحمراء

يوجد أكثر من 250 مستضدًا معروفًا لكرات الدم الحمراء، وتشكل أكثر من 20 نظامًا مستضديًا. 11 نظامًا لها أهمية سريرية: AB0، Rhesus (Rh-Hr)، MNSs، Kell، Lutheran، Kidd، Diego، Duffy، Dombrock، مجموعات إنزيمات كريات الدم الحمراء.

في البشر، توجد مستضدات العديد من الأنظمة المستضدية في وقت واحد في خلايا الدم الحمراء.

يتم التعرف على أنظمة المستضد AB0 وRhesus باعتبارها الأنظمة الرئيسية في علم نقل الدم. الأنظمة المستضدية الأخرى لكرات الدم الحمراء ليست في الوقت الحالي ذات أهمية كبيرة في علم نقل الدم السريري.

النظام المستضدي AB0

نظام AB0 هو النظام المصلي الرئيسي الذي يحدد مدى توافق أو عدم توافق الدم المنقول. وهو يتألف من اثنين من الراصات المحددة وراثيا (المستضدات A و B) واثنين من الراصات (الأجسام المضادة α و β).

توجد الراصات A وB في سدى كريات الدم الحمراء، وتوجد الراصات α وβ في مصل الدم. Agglutinin α هو جسم مضاد ضد aglutinogen A، و agglutinin β ضد aglutinogen B. لا يمكن أن يكون هناك agglutinogens و agglutinins بنفس الاسم في خلايا الدم الحمراء ومصل الدم لشخص واحد. عندما تلتقي المستضدات والأجسام المضادة التي تحمل نفس الاسم، يحدث تفاعل التراص المتماثل. وهذا التفاعل هو الذي يسبب عدم توافق الدم أثناء نقل الدم.

اعتمادًا على مزيج المستضدات A و B في كريات الدم الحمراء (وبالتالي الأجسام المضادة α و β في المصل)، يتم تقسيم جميع الأشخاص إلى أربع مجموعات.

نظام مستضد الريسوس

عامل Rh (عامل Rh)، سمي بهذا الاسم لأنه تم اكتشافه لأول مرة في قرود الريسوس، موجود في 85% من الناس ويغيب في 15%.

من المعروف حاليًا أن نظام الريسوس معقد جدًا ويمثله خمسة مستضدات. إن دور عامل Rh أثناء نقل الدم، وكذلك أثناء الحمل، مهم للغاية. الأخطاء التي تؤدي إلى تطور سبب الصراع Rh مضاعفات شديدة، وفي بعض الأحيان وفاة المريض.

أنظمة المستضدات البسيطة

يتم تمثيل أنظمة مجموعة كرات الدم الحمراء الصغيرة بعدد كبير من المستضدات. تعد معرفة هذا التنوع في الأنظمة أمرًا مهمًا لحل بعض المشكلات في الأنثروبولوجيا وأبحاث الطب الشرعي، وكذلك لمنع تطور مضاعفات ما بعد نقل الدم وبعض الأمراض عند الأطفال حديثي الولادة.

نظام MNSيشمل العوامل M، N، S، s. تم إثبات وجود موقعين جينيين مرتبطين ارتباطًا وثيقًا، MN وSs. وفي وقت لاحق، تم تحديد متغيرات أخرى متنوعة من مستضدات نظام MNS. وفقا للتركيب الكيميائي، MNSs هي بروتينات سكرية.

نظام ر.نظام المستضد P له أهمية سريرية معينة. كانت هناك حالات إجهاض مبكر ومتأخر ناجمة عن الأجسام المضادة المتساوية مكافحة ر.تم وصف العديد من حالات مضاعفات ما بعد نقل الدم المرتبطة بعدم توافق المتبرع والمتلقي وفقًا لنظام المستضد P.

نظام كيلويمثلها ثلاثة أزواج من المستضدات. المستضدات Kell (K) و Cellano (k) لها أكبر نشاط مناعي. يمكن أن تسبب مستضدات نظام كيل حساسية الجسم أثناء الحمل وأثناء نقل الدم، وتسبب مضاعفات نقل الدم وتطور مرض الانحلالي عند الوليد.

النظام اللوثري.أحد المتبرعين، ويدعى لوثران، كان لديه مستضد غير معروف سابقًا في خلايا دمه الحمراء، مما أدى إلى تحصين المتلقي. تم تحديد المستضد بالحروف Lu a. وبعد سنوات قليلة، تم اكتشاف المستضد الثاني لهذا النظام، لو ب. ترددها: لو أ - 0.1%، لو ب - 99.9%. تعتبر الأجسام المضادة لـ Lu b ذات مناعة متساوية، وهو ما تؤكده التقارير التي تفيد بأهمية هذه الأجسام المضادة في أصل مرض الانحلال الدموي عند الأطفال حديثي الولادة. الأهمية السريرية لمستضدات النظام اللوثري صغيرة.

نظام كيد.المستضدات والأجسام المضادة لنظام كيد لديها معينة أهمية عملية. يمكن أن تسبب تطور مرض انحلالي عند الأطفال حديثي الولادة ومضاعفات ما بعد نقل الدم مع عمليات نقل الدم المتعددة التي لا تتوافق مع مستضدات هذا النظام. تواتر المستضدات حوالي 75٪.

نظام دييغو.في عام 1953، في فنزويلا، ولد طفل في عائلة دييغو مع علامات مرض الانحلالي. عند تحديد سبب هذا المرض، تم اكتشاف مستضد غير معروف سابقًا لدى الطفل، وهو عامل دييغو المعين (Di). في عام 1955، كشفت الأبحاث أن مستضد دييغو هو سمة عنصرية مميزة لشعوب العرق المنغولي.

نظام دافييتكون من مستضدين رئيسيين - Fy a و Fy b. الأجسام المضادة لـ Fy a هي أجسام مضادة غير كاملة، وتظهر تأثيرها فقط في اختبار كومبس المضاد للجلوبيولين غير المباشر. وفي وقت لاحق، تم اكتشاف المستضدات Fy x، Fy 3، Fy 4، Fy 5. يعتمد التردد على عرق الشخص الذي لديه أهمية عظيمةلعلماء الأنثروبولوجيا. في السكان الزنوج، يبلغ تواتر العامل Fy 25٪، بين السكان الصينيين والإسكيمو والسكان الأصليين الأستراليين - ما يقرب من 100٪، بين القوقازيين - 60-82٪.

نظام دومبروك.وفي عام 1973، تم التعرف على مستضدات Do a و Do b. يوجد العامل Do a في 55-60% من الحالات، والعامل Do b - في 85-90%. هذا التردد يضع نظام الدم المصلي هذا في المركز الخامس من حيث محتوى المعلومات في جانب تحديد الأبوة الشرعي (نظام ريسوس، MNSs، AB0 ودافي).

مجموعات إنزيمات كريات الدم الحمراء.منذ عام 1963، أصبح عدد كبير من أنظمة الإنزيمات متعددة الأشكال وراثيًا لكريات الدم الحمراء البشرية معروفًا. لعبت هذه الاكتشافات دورًا مهمًا في تطوير الأمصال العامة لفصائل الدم البشرية، وكذلك في جانب فحص الطب الشرعي للأبوة المتنازع عليها. تشتمل أنظمة إنزيمات كريات الدم الحمراء على فوسفات جلوكوموتاز، وأدينوزين دياميناز، وترانساميناز الغلوتامات-بيروفات، وإستراز-د، وما إلى ذلك.

وفي المرحلة الحالية، أصبح من الممكن إثبات ذلك مرض الانحلاليالجنين والمولود هو نوع من نقص الكريات المناعي الخيفي الناجم عن تحصين الأم بخلايا دم جنينية تحمل مستضدات على أغشيتها والتي تكون غائبة عند المرأة الحامل. يمكن أن يكون سبب هذه العملية مستضدات مختلفة موجودة على غشاء كريات الدم الحمراء وخلايا الدم الأخرى (الصفائح الدموية والعدلات) للجنين، والتي تدخل عبر المشيمة إلى مجرى دم الأم وتتسبب في تكوين الأجسام المضادة فيها. يحدث نقص الكريات الحمر المناعي الخيفي الأكثر شيوعًا بسبب عدم توافق دم الجنين والأم فيما يتعلق بمستضدات نظام ABO وRhesus.

تعتمد طبيعة فقر الدم الذي يتطور عند الجنين (الانحلالي، اللاتنسجي) على المستضد أو المستضدات المسببة له. وعلاوة على ذلك، في الأجنة مع قلة الكريات الحمر من أصول مختلفة، مشابه الاعراض المتلازمةالأمراض التي يمكن الوصول إليها عن طريق طرق التحقق الغازية وغير الغازية.

قلة الكريات الحمر المناعية، بما في ذلك مرض انحلال الدم لدى الجنين / الوليد (HDFN) هو مرض يتميز بانحلال الدم في كريات الدم الحمراء و/أو تثبيط تكوين الدم تحت تأثير الأجسام المضادة المتكونة في الأم لمستضدات كريات الدم الحمراء الجنينية، التي تخترق حاجز المشيمة بشكل متبادل، كما يتجلى في الجنين/الوليد بسبب فقر الدم، زيادة في أشكال انفجار خلايا الدم الحمراء، وفي كثير من الأحيان البيليروبين في الدم.

نظرًا لأن الاختلافات في مستضدات دم الأم والجنين في مستضدات كريات الدم الحمراء لها أهمية أساسية في التسبب في المرض، فمن الضروري مراعاة خصائصها المناعية الدموية.

في المرحلة الحالية من تطور أمراض الدم المناعية، هناك أكثر من 250 مستضدًا معروفًا لكريات الدم الحمراء، والتي يتم توزيعها عادةً إلى 29 مستضدًا وراثيًا أنظمة مستقلة. يتم تشفير كل نظام بواسطة جين واحد أو أكثر. مستضدات خلايا الدم الحمراء هي بروتينات (على سبيل المثال، نظام ريسوس)، أو بروتينات سكرية أو شحميات سكرية (نظام ABO).

منذ عام 1980 وحتى يومنا هذا، تواصل الجمعية الدولية لنقل الدم (ISBT) العمل على تصنيف الأمراض المعروفة. علم الطبمستضدات كريات الدم الحمراء. وفقا للتسميات المستخدمة حاليا، يتم تقسيم جميع مستضدات كريات الدم الحمراء إلى أنظمة ومجموعات وسلسلة.

يعرض الجدول 1 قائمة بأنظمة مستضدات كريات الدم الحمراء المعروفة البالغ عددها 29 نظامًا، متحدة فيها وفقًا لمبدأ وجود جينات مشتركة تشفر منتجاتها. يتم تحديد أنظمة المستضد عادةً حسب ترتيب اكتشافها بأرقام مكونة من ثلاثة أرقام بترتيب تصاعدي، بدءًا من 001. داخل النظام، يحتوي كل مستضد أيضًا على رقم مكون من ثلاثة أرقام. وبالتالي، عادة ما يتم تحديد كل مستضد برقم مكون من ستة أرقام.

المجموعاتتجمع المستضدات التي ترتبط كيميائيًا حيويًا ومصليًا على المستوى المظهري، ولكن ليس لديها جينات مشتركة تشفر منتجاتها، وبالتالي لا تلبي متطلبات أنظمة المستضدات.

يتم دمج المستضدات التي لم تتم دراسة الجينات التي تشفرها بعد مسلسلمن مجموعتين - مع انخفاض و تردد عاليحادثة.

مستضدات خلايا الدم الحمراءتقليديا تنقسم إلى المستضدات المشتركةالمستضدات متوسط ​​تكرار الحدوثو نادرالمستضدات. توجد المستضدات الشائعة في جميع الأشخاص تقريبًا، لذلك نادرًا ما يتم تكوين الأجسام المضادة لهذه المستضدات. ومع ذلك، إذا كان من الضروري إجراء نقل الدم في المرضى الذين لديهم أجسام مضادة لمستضدات شائعة، كقاعدة عامة، تنشأ صعوبات في اختيار الجهات المانحة. إذا كان المستضد شائعًا بتردد أقل من 1%، فسيتم تصنيفه على أنه مستضد نادر.

الجدول 1

أنظمة مستضدات خلايا الدم الحمراء

في المرضى الذين يعانون من التحصين المتساوي للمستضدات النادرة، في معظم الحالات، تنشأ صعوبات عند إجراء فحص الدم المناعي للتحقق من الأجسام المضادة، لأن هذه العملية تتطلب دراسة طويلة ومكلفة باستخدام عدد كبير من العينات وأنظمة الاختبار.

لأنه سريريا أشكال ذات معنىيحدث مرض انحلال الدم بشكل رئيسي بسبب الأجسام المضادة المتكونة لمستضدات نظام الريسوس، ويجب أن نركز على التصنيفات المقترحة لمستضدات هذا النظام. هناك العديد من هذه التصنيفات. واحد منهم هو تصنيف وينر لمستضدات Rh.يعتمد هذا على افتراض أن هناك مكانًا واحدًا فقط على كروموسوم Rh يمكن أن يشغله واحد من ثمانية جينات أليلومورفية. يقوم كل جين بتشفير إنتاج الراصات، وهو عبارة عن مجموعة معقدة من المستضدات. إن تسمية وينر للمستضدات معقدة ولا تستخدم حاليًا على نطاق واسع في أمراض الدم المناعية. ومع ذلك، فمن المعتاد تحديد خصوصية الأجسام المضادة في الغلوبولين المناعي المضاد للريسوس - "Rho (D)".

يوصى باستخدامه من قبل لجنة الخبراء المعنية بالمعايير البيولوجية التابعة لمنظمة الصحة العالمية تصنيف فيشر ريس لمستضدات Rh.يعتمد ذلك على افتراض وجود ثلاثة مواقع لثلاثة جينات على كروموسوم Rh. علاوة على ذلك، يتكون كل مجمع جيني من ثلاثة محددات مستضدية: D أو غيابه - d أو C أو c أو E أو e في مجموعات مختلفة.

في مجال البحوث السنوات الأخيرةلقد ثبت أن هناك جينتين فقط (ردو RHCE) ، المسؤول عن إنتاج مستضدات كريات الدم الحمراء لنظام Rh. وبالتالي، يتم التحكم في إنتاج المستضد D بواسطة الجين R. H.D.بينما المستضدات C، c، E، e – الجينوم RHCE.حيث عدد كبير منيتم تفسير المستضدات التي يتكون منها نظام الريسوس (48 مستضد) عن طريق الطفرات في هذين الجينين. لا توجد بيانات عن وجود المستضد d، حيث لا يوجد جين مسؤول عن تخليق هذا المستضد.

يمكن أن يحدث مرض انحلالي الجنين وحديثي الولادة بسبب مستضدات نظام الريسوس بخلاف D، بالإضافة إلى مستضدات أخرى تسمى "غير منتظمة" لأنظمة أخرى أو مزيج من عدة مستضدات لنظام واحد. في هذه الحالة، غالبًا ما يستخدم مصطلح "التمنيع الخيفي لكرات الدم الحمراء" في الأدبيات لوصف عملية المناعة الخيفي.

إن التحصين المضاد لمستضدات كريات الدم الحمراء هو السبب الرئيسي لتطور متلازمة فقر الدم لدى الجنين. وهكذا، وفقًا للمركز الأمريكي لمكافحة الأمراض والوقاية منها (السنة)، على الرغم من برنامج الوقاية المناعي المطبق، يحدث تحسس العامل الريسوسي في 6.7 حالة لكل 1000 ولادة حية. إذا أضفنا إلى هذه الحالات تطور التمنيع الخيفي تحت تأثير مستضدات كريات الدم الحمراء من المجموعات الأخرى (كيل، كيد، دافي)، فإنه يتم تسجيل أكثر من 30 ألف جنين سنويًا في الولايات المتحدة معرضين لخطر الإصابة بفقر الدم المناعي الخيفي. لسوء الحظ، مثل هذه الإحصاءات واسعة النطاق على الاتحاد الروسيغير متاح بعد بسبب عدم كفاية تنفيذ الاختبارات المناعية التفصيلية للمرضى المعرضين للخطر.

وبالتالي، لتقييم وجود التحصين المتساوي بشكل مناسب، من الضروري، أولا وقبل كل شيء، البحث عن الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء المنتشرة في دم المرأة الحامل وتحديدها.

يختلف دور مستضدات كريات الدم الحمراء في حدوث مرض انحلالي للجنين وحديثي الولادة ويتم تحديده من خلال قدرة الأجسام المضادة المتكونة لفئة معينة من المستضدات على تدمير كريات الدم الحمراء أو تعطيل عمليات تكوينها في الجنين. تعتمد عملية تكوين الأجسام المضادة المناعية لمستضدات كريات الدم الحمراء الجنينية على وجود مستضد غائب في الأم، وقدرته المناعية، وكذلك عدد كريات الدم الحمراء الجنينية التي تدخل مجرى دم المرأة الحامل.

الأجسام المضادة لمستضدات كريات الدم الحمراء (الأجسام المضادة) طبيعية (منتظمة) ومناعية (غير منتظمة). وهكذا، في مصل الدم للأشخاص (باستثناء الأفراد ذوي فصيلة الدم AB)، توجد باستمرار الأجسام المضادة الطبيعية الفطرية للمستضدات A و/أو B لنظام ABO، والتي تتكون من أربعة مستضدات.

يحدث المرض عند الجنين، وبعد ذلك عند الوليد، بسبب عدم توافق خلايا الدم الحمراء للأم والجنين وفقًا لنظام مستضد ABO في 10-20٪ من جميع الحالات. علاوة على ذلك، فإن مرض انحلال الدم لدى الجنين/الوليد يتطور بمعدل 40 مرة أكثر عند النساء ذوات فصيلة الدم 0 (I) والزوج ذو فصيلة دم مختلفة. ومع ذلك، عندما يحدث هذا النوع من التحصين isoimmunization أشكال حادةيتم ملاحظة الأمراض لدى الجنين وحديثي الولادة فقط في حالات معزولة - 1: 3000 ولادة.

طريقة التراص الهلامي لتحديد مستضدات كريات الدم الحمراء والأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء

مقدمة

تم اقتراح تقنية الجل في الأنابيب الدقيقة (GTM) بواسطة Y. Lapierre في عام 1989. وتعتمد الطريقة على تراص خلايا الدم الحمراء في هلام أجار سيفاديكس الموضوع في الأنابيب الدقيقة. عادةً، يتكون النظام من بطاقات بلاستيكية تحتوي على أنابيب دقيقة مملوءة بالهلام (براءة الاختراع DiaMed AG، سويسرا). عادة ما يتم إجراء الدراسات المناعية الدموية المبنية على تفاعل التراص الدموي في أنظمة الطور السائل.

واحدة من أكثر شروط مهمةالحصول على البيانات الصحيحة لتفاعل التراص هو تقييم النتيجة. قد يتم إساءة تفسير الاستجابة الضعيفة، خاصة من قبل الموظفين عديمي الخبرة. يمكن أن تحدث نتائج ضعيفة أو سلبية كاذبة لاختبار مضاد الجلوبيولين غير المباشر بسبب تحييد كاشف مضاد الجلوبيولين بواسطة آثار المصل بسبب عدم كفاية غسل خلايا الدم الحمراء. يمكن أن يؤدي الخلط غير الكافي لخلايا الدم الحمراء وشطف الأجسام المضادة الضعيفة أثناء عملية الغسيل إلى حدوث أخطاء عند إجراء اختبار مضاد الجلوبيولين غير المباشر.

تم تطوير تقنية تراص الهلام لتوحيد تفاعلات تراص الدم والحصول عليها نتائج موثوقة. تتضمن تقنية الجل فصل خلايا الدم الحمراء عن طريق الطرد المركزي، حيث تمر خلايا الدم الحمراء غير المتلاصقة عبر الجل وتستقر في قاع الأنابيب ( نتيجة سلبية)، بينما تبقى تلك المتراصة على السطح أو في سمك الجل ( نتيجة ايجابية). يمكن أن يكون الطرد المركزي الهلامي هو المرحلة النهائية لأي اختبار مصلي يعتمد على تفاعل التراص الدموي، باستثناء الطرق التي تتطلب التشتت لتقييم النتيجة.

يشمل نطاق الاختبارات التي يتم إجراؤها تحديد النمط الظاهري لخلايا الدم الحمراء (بما في ذلك متغيرات المستضد الضعيفة)، واختبار مضاد الجلوبيولين، وفحص الأجسام المضادة وتحديد هويتها، واختبارات التوافق والعديد من الاختبارات الأخرى.

مبدأ اختبار هلام

يمكن أن يكون جل ديكستران المخزن المؤقت Sephadex TM G 100 إما محايدًا أو يحتوي على أمصال مضادة معينة أو كاشف مضاد الجلوبيولين على مصفوفة الهلام. يتم وضع خلايا الدم الحمراء أو خليط من خلايا الدم الحمراء والمصل على الجل. تتم دائمًا إضافة الخلايا قبل الأمصال - على عكس التقنيات المصلية القياسية - بحيث لا تتلامس أمصال الاختبار مع الهلام، وهو أمر مهم بشكل خاص عند إجراء اختبار مضاد الجلوبيولين. بعد الحضانة، يتبع الطرد المركزي في وضع محدد بدقة. إذا لم يتم استيفاء شروط الطرد المركزي (الطرد المركزي ليس طويلا بما فيه الكفاية أو لطيف جدا)، قد تحدث نتائج إيجابية كاذبة. يمكن أن تحدث نتائج سلبية كاذبة أيضًا في حالة انتهاك شروط الطرد المركزي (القسري). يؤدي استخدام جهاز طرد مركزي للمعرف التلقائي (DiaMed) إلى التخلص من هذه المشكلات. تُستخدم عادةً ثلاثة أنواع من الجل للاختبار:

1. محايد، لا يحتوي على أجسام مضادة محددة (يستخدم للبحث عن الأجسام المضادة وتحديدها باستخدام الطرق الملحية والأنزيمية، المرحلة الباردة من اختبار توافق دم المتبرع والمتلقي)؛
2. محددة، تحتوي على أجسام مضادة (وحيدة النسيلة أو متعددة النسيلة) لمستضدات كريات الدم الحمراء البشرية (تستخدم لكتابة مستضدات كريات الدم الحمراء لأنظمة ABO، وRhesus، وKell، وما إلى ذلك)
3. مضاد الجلوبيولين، يحتوي على أجسام مضادة (متعددة النوعية أو أحادية النوعية) للجلوبيولين المناعي البشري ومكونات النظام المكمل (يستخدم لاختبار مضاد الجلوبيولين المباشر وغير المباشر (اختبار كومبس) في البحث والتعرف على الأجسام المضادة الذاتية والأجسام المضادة المناعية، واختبار توافق دم الدم المانح والمتلقي).

يتم إضافة الدم المراد فحصه إليه الجزء العلويالأنابيب الدقيقة لبطاقات التشخيص، وأثناء الطرد المركزي، يتم فصل كريات الدم الحمراء المتراصة وغير الملتصقة على النحو التالي: كريات الدم الحمراء غير الملتصقة لها حجم مماثل لحجم جزيئات الهلام وتمر عبرها بحرية تحت تأثير قوة الطرد المركزي، وتشكل كرة حمراء مدمجة. الرواسب في الجزء السفلي من microtube - نتيجة سلبية؛ نظرًا لحجمها الكبير، يتم الاحتفاظ بخلايا الدم الحمراء المتراصة على سطح الجل أو في سمكها - وهي نتيجة إيجابية.

التراص الثابت في الجل يجعل من السهل تقييم نتيجة التفاعل، كما أن وجود أنبوب تحكم صغير في بطاقة التشخيص يؤكد موثوقية البيانات التي تم الحصول عليها.

اعتمادًا على قوة تفاعل التراص في وسط الهلام، يتم قبول التقييم التالي للنتائج التي تم الحصول عليها:

• إيجابي بقوة (++++) - تتراكم كريات الدم الحمراء المتكونة على سطح الجل ؛
• موجب (+++) - توجد المواد المتراكمة في الثلث العلوي من عمود الهلام؛
• موجب ضعيف (++) - يتم تثبيت المواد المتراكمة في الثلثين العلويين من الجل؛
• إيجابية ضعيفة للغاية (+) - توجد المواد المتراكمة في الثلث السفلي من الجل؛
• سلبي (-) - تشكل خلايا الدم الحمراء رواسب مدمجة في قاع الأنبوب الصغير.

المعدات والكواشف

• بطاقات الهوية لتحديد مستضدات كريات الدم الحمراء والأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء؛
• معرف الطرد المركزي لبطاقات الطرد المركزي.
• ترموستات عند +37 درجة مئوية؛
• رف لأنابيب الاختبار والبطاقات؛
• أنابيب اختبار بسعة 5 و 10 مل؛
• ماصات أحادية القناة شبه أوتوماتيكية (10، 25، 50 ميكرولتر)؛
• القفازات الجراحية المطاطية؛
• محلول التخفيف 1 (محلول بروميلين)؛
• محلول التخفيف 2 (محلول القوة الأيونية المنخفضة - LISS، RNIS)؛
• 0.9% محلول كلوريد الصوديوم؛
• خلايا الدم الحمراء البشرية القياسية المكتوبة للكشف عن الأجسام المضادة والتفاعل المتبادل.

خصائص بطاقات الهوية

بطاقات تعريف Dia-Med (بطاقات الهوية) هي بطاقات بلاستيكية تحتوي على ستة أنابيب دقيقة مدمجة فيها. تحتوي خمسة أنابيب على خليط من الجل والأمصال المضادة. تحتوي كل بطاقة على أنبوب تحكم سادس يحتوي على هلام محايد بدون أجسام مضادة (ctl). يتم وضع العلامات على الأنابيب في بطاقة الهوية وفقًا للمستضدات القابلة للاكتشاف، على سبيل المثال: A-B-AB-D-CDE-ctl أو C-c-E-e-K-ctl. تحتوي بطاقات التعريف الخاصة باكتشاف الأجسام المضادة لمستضدات كريات الدم الحمراء على بعض الاختلافات، على سبيل المثال، بطاقات "اختبار كومبس / الإنزيم": ثلاثة أنابيب موجودة على اليسار تحتوي على هلام يحتوي على أجسام مضادة للجلوبيولين البشري (أحادي النوع مضاد IgD أو متعدد الخصوصية - للجلوبيولين المناعي من فئات مختلفة ) - رد فعل كومبس. تحتوي الأنابيب الثلاثة التالية فقط على هلام محايد مصمم للكشف عن الأجسام المضادة لمستضدات خلايا الدم الحمراء في بيئة مالحة.

القواعد العامة لاستخدام بطاقات الهوية

1. يجب تخزين بطاقات الهوية في مكان جاف، محمي من الضوء، عند درجة حرارة 18-25 درجة مئوية. يُشار إلى تاريخ انتهاء الصلاحية في جزء جواز السفر من كل بطاقة وعلى صناديق التغليف.
2. يجب تخزين محاليل تحضير معلقات خلايا الدم الحمراء، وكذلك الأمصال القياسية وخلايا الدم الحمراء المعيارية المستخدمة في الدراسات الفردية، في مكان جاف، محمي من الضوء، عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. يُشار إلى تاريخ انتهاء الصلاحية على الملصق الموجود على كل زجاجة وعلبة تعبئة.
3. لتجنب الاستلام نتائج كاذبةبحثاً، يمنع استخدام أي كواشف وبطاقات منتهية الصلاحية، وكذلك تلك التي جفت أو تحتوي على فقاعات غازية، أو بها قذائف تالفة.
4. يتم جمع الدم باستخدام تقنيات سحب الدم الحديثة، كما أن دم الشرايين والشعيرات الدموية والحبل السري (بدون غسل) مناسب أيضًا. تعد عينات الدم الكاملة (التي يتم أخذها في أنبوب نظيف وجاف) وعينات الدم المأخوذة مع المواد الحافظة والمثبتات مناسبة للبحث.

كتابة مستضدات كريات الدم الحمراء

تم تصميم بطاقات الهوية DiaMed لتحديد فصيلة الدم في وقت واحد وفقًا لنظام ABO وانتماء Rh لكريات الدم الحمراء للمانحين والمتلقين (بما في ذلك المتغيرات الضعيفة من المستضدات)، وكذلك لكتابة مستضدات كريات الدم الحمراء الأخرى. يمكن استخدام بطاقات هوية DiaMed بدلاً من أو بالتوازي مع الأمصال المتساوية التجلط، والكواشف المضادة لـ D، والكواشف المضادة لـ DCE، والمضادة A، والمضادة B، والمضادة D، والمضادة D Super coliclones.

• [يعرض] .

  يتم تنفيذ المرحلة الأولية بشكل مختلف، اعتمادًا على نوع بطاقات الهوية المستخدمة، والتي تحتوي على أجسام مضادة متعددة النسيلة (انظر النقطة 1أ أدناه) أو أحادية النسيلة (انظر النقطة 16):

  1أ)قم بإعداد تعليق اختبار خلايا الدم الحمراء في محلول لتخفيف بطاقات ICID التي تحتوي على أجسام مضادة متعددة النسيلة) والتي من أجلها:

  • احتفظ بمحلول التخفيف 1 حتى يصل إلى درجة حرارة الغرفة؛
  • تحضير تعليق 5% من خلايا الدم الحمراء للاختبار في محلول التخفيف 1 عن طريق وضع 0.5 مل من محلول التخفيف 1 و50 ميكرولتر من الدم الكامل للاختبار أو 25 ميكرولتر من خلايا الدم الحمراء في أنبوب اختبار؛
  • مزيج بلطف واحتضان لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة؛
  • استخدم في موعد لا يتجاوز 15 دقيقة بعد الحضانة.

  16) قم بإعداد تعليق اختبار خلايا الدم الحمراء في Dilution Solution 2 (بطاقات الهوية التي تحتوي على أجسام مضادة وحيدة النسيلة) والتي من أجلها:

  • احتفظ بمحلول التخفيف 2 حتى يصل إلى درجة حرارة الغرفة؛
  • تسمية أنابيب الاختبار النظيفة؛
  • قم بإعداد تعليق 5% من خلايا الدم الحمراء للاختبار في محلول التخفيف 2 عن طريق وضع 0.5 مل من محلول التخفيف 1 و50 ميكرولتر من الدم الكامل للاختبار أو 25 ميكرولتر من خلايا الدم الحمراء في أنبوب اختبار.
• مزيد من الإجراءات [يعرض] .
  1. ضع علامة على بطاقة الهوية (رقم عينة المصل التي يتم اختبارها أو الاسم الكامل للمريض).
  2. قم بإزالة الرقاقة الواقية من أنابيب بطاقة الهوية.
  3. أضف 10 ميكرولتر من خلايا الدم الحمراء الاختبارية، المعدة وفقًا للبند 1أ، أو 50 ميكرولتر من خلايا الدم الحمراء الاختبارية، المعدة وفقًا للبند 16، في كل أنبوب بطاقة الهوية.
  4. قم بتركيب بطاقات الهوية في دوار جهاز الطرد المركزي للهوية (مع الموازنة الإلزامية مع بطاقات الهوية الأخرى، وربما البطاقات غير المستخدمة).
  5. بطاقات هوية الطرد المركزي (وقت وسرعة الطرد المركزي ثابتان ويتم ضبطهما تلقائيًا).
  6. تقييم نتيجة الدراسة: يجب أن تكون النتيجة في أنبوب التحكم الدقيق - "ctl" - سلبية دائمًا. قد يكون سبب التفاعل الإيجابي في "التحكم" هو وجود الأجسام المضادة الذاتية وبروتينات البلازما غير المحددة. إذا كانت "التحكم" إيجابية، فإن التحديد غير موثوق؛ ويجب تكراره بعد غسل عينة خلايا الدم الحمراء مرة واحدة بمحلول كلوريد الصوديوم 0.9% أو محلول التخفيف 2.
  7. أدخل نتائج تحديد كل مستضد في العمود المناسب لبطاقة الهوية (في الحقل الأبيض أسفل كل مستضد).
  8. حدد النتيجة حسب المخطط التالي (الجدول 18.7-18.9)

  الجدول 18.7. نتائج دراسة مستضدات فصيلة الدم ABO وRh في بطاقة هوية ABO/Rh
  المستضدات القابلة للكشف					خاتمة
  أ	في	أ.ب	د	CDE
  +	+	+	+	+	أب ر +
  +	+	+	-	-	أب ر-
  +	-	+	+	+	أ ر +
  +	-	+	-	-	أ-
  -	+	+	+	+	ب ر +
  -	+	+	-	-	في ر-
  -	-	-	+	+	0 ر +
  -	-	-	-	-	0 ر-
  ملحوظة: يتم تأكيد خصوصية الاختبار من خلال نتيجة سلبية في أنبوب اختبار مزود ببطاقة الهوية.

  الجدول 18.8 تحديد مستضدات كريات الدم الحمراء لنظام ABO
  فصيلة الدم
  	مكافحة أ	مضاد ب	مكافحة AV
  0(1)	-	-	-
  A1(II)	++++	-	++++
  أ2(ثانيا)	++++	-	++++
  أ3(ثانيا)	++/+++	-	++/++++
  أ س (ثانيا)*	-/++	-	+/++
  ب(ثانيا)	-	++++	++++
  ب3(ثالثا)	-	+/+++	+/+++
  ب × (ثالثا)*	-	-/++	-/++
  أ1ب(رابعا)	++++	++++	++++
  أ2ب(رابعا)	+++/++++	++++	++++
  ملحوظة: * - تحديد المتغيرات الضعيفة جدًا للمستضدات A وB يتطلب المزيد من البحث.

  الجدول 18.9 تحديد حالة Rh (D، CDE)
  الانتماء الريسوسي	نتائج الدراسة مع الأمصال
  	مكافحة د	مكافحة CDE
  د-إيجابي	++++	++++
  د- سلبي	-	-
  د- سلبي، ج	إيجابي إلكتروني*	-
  إيجابية ضعيفة (د ش)	من ± إلى +++	من +++ إلى ++++
  ملحوظة: * - تفاعل إيجابي مع المصل المضاد لـ CDE عند رد فعل سلبيمع مصل مضاد D يشير إلى وجود المستضدات C وE ويتطلب المزيد من الكتابة باستخدام بطاقات الهوية: C-c-E-e-K-stl أو C-C w -c-E-e-K

بطاقات الهوية المستخدمة

عند تحديد فصائل الدم وانتماء الريسوس، يتم استخدام فصائل متعددة النسيلة (الجدول 18.10 [يعرض] ) وحيدة النسيلة (الجدول 18.11 [يعرض] ) الكواشف. الاستخدام الأكثر شيوعا في الممارسة العملية بسبب الجدوى الاقتصاديةالعثور على الأمصال وحيدة النسيلة.

بواسطة التصنيف الحديثالأفراد الذين لديهم متغير ضعيف من المستضد D القادرين على إنتاج الأجسام المضادة لـ D ينقسمون إلى سبع فئات. أعلى تكرار لحدوث وأهمية عملية هو الفئة السادسة، حيث تحمل كريات الدم الحمراء فقط الحلقة Z للمستضد D. يمكن للأشخاص من الفئة السادسة (المتلقون سلبيو عامل Rh، ولكن المتبرعون إيجابيو عامل Rh!) إنتاج أجسام مضادة لـ D غير متغير وجزئي. د من جميع الفئات الأخرى. لتأكيد فصيلة الدم، يتم استخدام بطاقات هوية مختلفة: D(IV -) - للمستلمين، D(IV +) - للمتبرعين.

يتم تحديد فصيلة الدم ABO وانتماء عامل Rh عن طريق تحديد مستضدات وأجسام مضادة محددة (تفاعل مزدوج أو متقاطع) (الجدول 18.12 [يعرض] ).

لإجراء فحص متعمق، يتم استخدام خرائط أخرى (الجداول 18.13-18.14 [يعرض] ).

الكشف عن الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء

مبدأ الطريقة

تتم إضافة أمصال الاختبار وخلايا الدم الحمراء القياسية للكشف عن الأجسام المضادة إلى الجزء العلوي من الأنابيب الدقيقة. بعد الحضانة والطرد المركزي، تبقى خلايا الدم الحمراء المتراصة في الجزء العلوي من الأنبوب، لأنها لا تمر عبر الجل بسبب حجم كبيرتتراكم (نتيجة إيجابية). في غياب الأجسام المضادة لاختبار مستضدات كريات الدم الحمراء، لا يتم تشكيل الراصات. تمر خلايا الدم الحمراء غير الملتصقة بسهولة عبر الجل وتستقر في قاع الأنبوب (نتيجة سلبية). تعتمد طبيعة التراص عند اكتشاف الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء على عيار الأجسام المضادة ونشاطها ويتم تقييمها من ++++ إلى +.

• خوارزمية البحث [يعرض] .

  قبل إجراء الاختبار، يجب أولاً غسل خلايا الدم الحمراء المكتوبة مرتين من المادة الحافظة بمحلول كلوريد الصوديوم 0.9%، ثم القيام بالخطوات التالية:

  • احتفظ بمحلول التخفيف 2 حتى تصل إلى درجة حرارة الغرفة؛
  • تسمية الأنابيب.
  • تحضير تعليق 0.8% من كريات الدم الحمراء المكتوبة في محلول التخفيف 2، ووضع 1.0 مل من محلول التخفيف 2 و10 ميكرولتر من الدم في أنبوب اختبار؛
  • إزالة الرقاقة الواقية من بطاقة الهوية؛
  • وضع علامة على بطاقة الهوية (رقم عينة المصل قيد الدراسة أو اسم المريض الكامل)؛
  • إضافة 50 ميكرولتر من خلايا الدم الحمراء القياسية إلى الأنابيب الدقيقة؛
  • إضافة 25 ميكرولتر من المصل أو البلازما من عينة الاختبار إلى كل أنبوب صغير؛
  • احتضان لمدة 15 دقيقة عند درجة حرارة +37 درجة مئوية؛
  • بطاقات هوية الطرد المركزي في جهاز طرد مركزي للمعرف (وقت وسرعة الطرد المركزي ثابتان ويتم ضبطهما تلقائيًا).

  ملحوظة: خلايا الدم الحمراء القياسية للوحات ID-DiaCell I-II-III وID-DiaCell I-Ii-III P من DiaMed جاهزة للاستخدام دون الغسيل والمعالجة المسبقة باستخدام Dilution Solution 2.

• تفسير النتائج [يعرض] .

  التفاعل الإيجابي يعني وجود أجسام مضادة مناعية في عينة الاختبار.

  إذا كان هناك رد فعل إيجابيمع جميع خلايا الدم الحمراء في لوحة ID-DiaCell، يوصى بإجراء تحكم تلقائي لاستبعاد الأجسام المضادة الذاتية في عينة الاختبار.

  إذا ظل التفاعل سلبيًا مع نوع واحد أو أكثر من خلايا الدم الحمراء على لوحة ID-DiaCell، فيمكن تحديد خصوصية الأجسام المضادة باستخدام الورقة المصاحبة - جدول ملفات تعريف المستضد المضمنة في جميع حزم ID-DiaCell. في هذه الحالة، يجب عليك التأكد من تطابق أرقام لوحة ID-DiaCell1 مع الورقة المصاحبة لها.

  إذا لم تحدد هذه اللوحة خصوصية الجسم المضاد، فمن المستحسن مواصلة تحديد الهوية باستخدام لوحة خلايا الدم الحمراء المحسنة ID-DiaPanel و/أو ID-DiaPanel P (اعتمادًا على التقنية المستخدمة في البداية).

فحص وتحديد الأجسام المضادة

يتم إجراء فحص الأجسام المضادة في هلام محايد وفي هلام يحتوي على كاشف مضاد الجلوبيولين (الجدول 18.15-18.16) [يعرض] ). في الحالة الأولى، يتم استخدام كريات الدم الحمراء المعالجة بالإنزيم للبحث، وفي الحالة الثانية، يتم استخدام تعليق كريات الدم الحمراء في محلول ذو قوة أيونية منخفضة. يتم فحص الأجسام المضادة وتحديدها باستخدام لوحة خلايا الدم الحمراء القياسية. عند تقييم فعالية اختبار الجل لفحص وتحديد الأجسام المضادة، تم إثبات حساسيته العالية مقارنة بالطرق التقليدية.

طرق دراسة الأجسام المضادة لمستضدات كريات الدم الحمراء

• اختبار مضاد الغلوبولين (اختبار كومبس غير المباشر) [يعرض] .

  يستخدم اختبار مضاد الجلوبيولين غير المباشر (IAT) للكشف عن الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء. عادةً ما يتم تنفيذ NAT على مرحلتين:

  1. حضانة كريات الدم الحمراء والمصل (تثبيت الأجسام المضادة) يليها الغسيل لإزالة الجلوبيولين غير المرتبط؛ إجراء اختبار مضاد الجلوبيولين غير المباشر في اختبار هلامي لا يتطلب غسل خلايا الدم الحمراء!
  2. حضانة كريات الدم الحمراء المغسولة بالجلوبيولين المضاد للإنسان (ACG). يشير التراص إلى وجود أجسام مضادة في مصل الدم مرتبطة بمستضدات كريات الدم الحمراء في المختبر.

  يستخدم NAT من أجل:

  1. تحديد الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء المانحة في مصل المتلقي - عند إجراء اختبار التوافق؛
  2. عند فحص الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء "غير المتوقعة"؛
  3. عند دراسة الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء لدى النساء الحوامل؛
  4. عند دراسة الأجسام المضادة في مصل المرضى الذين يعانون من فقر الدم الانحلالي المناعي الذاتي.

  تقدم التحديد:

  • أضف 50 ميكرولتر من معلق كريات الدم الحمراء المكتوبة إلى أنابيب بطاقة الهوية الثلاثة الموجودة على اليسار؛
  • أضف 25 ميكرولتر من مصل الاختبار إلى أنابيب الاختبار؛
  • بطاقات هوية الطرد المركزي لمدة 10 دقائق؛
  • تقييم نتيجة الدراسة. أدخل النتيجة في بطاقة الهوية الخاصة بك.

  نتائج التحديد:

  • تشير النتيجة الإيجابية إلى وجود أجسام مضادة مناعية (Allo) في مصل الاختبار أو البلازما (لتحديد خصوصية الأجسام المضادة، استخدم الجدول المرفق بخلايا الدم الحمراء القياسية)؛
  • النتيجة السلبية تشير إلى عدم وجود الأجسام المضادة المناعية في مصل الاختبار أو البلازما.
• طريقة الانزيم [يعرض] .

  العلاج بالإنزيمات المحللة للبروتين يزيد من تراص كريات الدم الحمراء.

  تقدم التحديد:

  • أضف 50 ميكرولتر من معلق كريات الدم الحمراء القياسية إلى ثلاثة أنابيب لبطاقة الهوية تقع على اليمين؛
  • أضف 25 ميكرولتر من محلول التخفيف 1 إلى أنابيب الاختبار؛
  • أضف 25 ميكرولتر من مصل الاختبار إلى أنابيب الاختبار.

  ملاحظة: لا يتم إضافة محلول التخفيف 1 إذا تم استخدام خلايا الدم الحمراء المكتوبة القياسية المعالجة مسبقًا بالإنزيم المحلل للبروتين للدراسة (على سبيل المثال، ID-DiaCell I-II-III P من DiaMed).

  • احتضان لمدة 15 دقيقة عند +37 درجة مئوية؛
  • بطاقات هوية الطرد المركزي في جهاز الطرد المركزي Sh لمدة 10 دقائق (يتم ضبط المعلمات تلقائيًا)؛
  • أدخل النتيجة في بطاقة الهوية.

  نتائج البحث:

  • تشير النتيجة الإيجابية إلى وجود الأجسام المضادة في مصل الاختبار أو البلازما (لتحديد خصوصية الأجسام المضادة، استخدم الجدول المرفق بخلايا الدم الحمراء القياسية)؛
  • تشير النتيجة السلبية إلى عدم وجود الأجسام المضادة في مصل الاختبار أو البلازما.
• طريقة التجميع البارد [يعرض] .

  تقدم التحديد:

  • احتضان محلول التخفيف 2، وخلايا الدم الحمراء المكتوبة وبطاقات الهوية لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية؛
  • علاج خلايا الدم الحمراء المكتوبة باستخدام محلول التخفيف 2، والذي من أجله:
    • تسمية أنبوب الاختبار.
    • قم بإعداد تعليق 0.8% من كريات الدم الحمراء المكتوبة في محلول التخفيف 2 عن طريق وضع 1.0 مل من محلول التخفيف 2 و10 ميكرولتر من الدم في أنبوب اختبار.

  ملاحظة: خلايا الدم الحمراء ID-DiaCell القياسية (من DiaMed) جاهزة للاستخدام ولا تحتاج إلى تخفيف؛

  • أضف 50 ميكرولتر من معلق كريات الدم الحمراء المكتوبة المعالجة بمحلول التخفيف 2 في أنابيب بطاقة الهوية الثلاثة الموجودة على اليمين؛
  • أضف 25 ميكرولتر من مصل الاختبار إلى هذه الأنابيب؛
  • احتضان لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية؛
  • بطاقات هوية الطرد المركزي في جهاز طرد مركزي معرف لمدة 10 دقائق (يتم تعيين المعلمات تلقائيا)؛
  • تقييم نتيجة الدراسة.
  • أدخل النتيجة في بطاقة الهوية. نتائج البحث:
  • تشير النتيجة الإيجابية إلى وجود أجسام مضادة باردة في مصل الاختبار أو البلازما (لتحديد نوعية الأجسام المضادة، استخدم الجدول المرفق بخلايا الدم الحمراء القياسية)؛
  • النتيجة السلبية تشير إلى عدم وجود أجسام مضادة للبرد في مصل الاختبار أو البلازما.

  في حالة وجود أجسام مضادة باردة أو دافئة في مصل الاختبار، نتائج إيجابية كاذبة. لاستبعادهم، من الضروري تثبيت التحكم التلقائي:

  • تحضير تعليق 0.8% من خلايا الدم الحمراء من دم الاختبار في محلول التخفيف 2، وإضافة 10 ميكرولتر من الدم الكامل إلى 1.0 مل من محلول التخفيف 2؛
  • أضف 50 ميكرولتر من معلق كريات الدم الحمراء المُجهز في أنبوب بطاقة الهوية الموجود على اليسار (لتفاعل كومبس) أو في أنبوب بطاقة الهوية الموجود على اليمين (للطريقة الأنزيمية والتراص البارد)؛
  • أضف 25 ميكرولتر من مصل الاختبار في أنابيب بطاقة الهوية (بالنسبة لطريقة الإنزيم، تحتاج إلى إضافة 25 ميكرولتر أخرى من محلول التخفيف 1 في أنابيب الاختبار)؛
  • قم باحتضان البطاقات لمدة 15 دقيقة عند درجة حرارة +37 درجة مئوية (لتفاعل كومبس والطريقة الأنزيمية) أو عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية (لإعداد التحكم التلقائي في التراص البارد).

  تشير النتيجة الإيجابية في التحكم الذاتي إلى وجود الأجسام المضادة في مصل الاختبار.

تحديد مدى توافق دم المتبرع والمتلقي

الغرض من الاختبار هو التوافق الفرديهو منع عمليات نقل مكونات الدم غير المتوافقة مع مستضدات كريات الدم الحمراء. اختبار مصل المتلقي مع خلايا الدم الحمراء للمتبرع المقصود هو الأكثر طريقة موثوقةتحديد الأجسام المضادة التي يمكن أن تسبب ضررًا لخلايا الدم الحمراء المنقولة، وتفاعلات ما بعد نقل الدم، ومضاعفات انحلال الدم. يتيح لك إجراء مثل هذا الاختبار ما يلي:

1. تأكيد توافق ABO بين المتبرع والمتلقي؛
2. تحديد الأجسام المضادة في مصل المتلقي الموجهة ضد مستضدات كريات الدم الحمراء للمتبرع.

اختبار التوافق الفردي لدم المتبرع والمتلقي باستخدام مستضدات كريات الدم الحمراء (الجدول 18.17 [يعرض] ) لا يحل محل الدراسة المناعية الإلزامية (كتابة مستضدات كريات الدم الحمراء لأنظمة ABO و Rhesus و Kell والكشف عن الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء والبحث عن الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء وتحديدها) ، ولكنه يكملها فقط.

نظرًا لحقيقة أن التحسس يمكن أن يحدث حتى بعد عمليات نقل مكونات الدم المختارة بشكل فردي، فمن الضروري لاختبار التوافق استخدام مصل المريض الجديد الذي تم الحصول عليه بعد آخر عملية نقل لمكونات الدم في كل مرة.

يجب إجراء اختبار التوافق لكل عينة دم من المتبرع!

• تقدم العزم [يعرض]
  • احتفظ بمحلول التخفيف 2 حتى تصل إلى درجة حرارة الغرفة (20-24 درجة مئوية)؛
  • بطاقات الهوية وأنابيب الاختبار (الاسم الكامل للمتبرع والمتلقي)؛
  • قم بإعداد تعليق 0.8٪ من كريات الدم الحمراء المانحة والمتلقية في محلول التخفيف 2، والذي أضف إليه 1 مل من محلول التخفيف 2 في أنبوبي اختبار موسومين، وأضف 10 ميكرولتر من دم المتبرع والمتلقي، على التوالي؛
  • مزج؛
  • إزالة الرقاقة الواقية من بطاقة الهوية المقابلة؛
  • إضافة 50 ميكرولتر من تعليق كريات الدم الحمراء المحضرة في الأنابيب الدقيقة لبطاقة الهوية 1، 2، 3، 4، 5؛
  • إضافة 50 ميكرولتر من المعلق المُجهز لكرات الدم الحمراء المتلقية إلى الأنابيب الدقيقة لبطاقة الهوية 4، 5، 6؛
  • أضف 25 ميكرولتر من المصل أو البلازما المتلقية إلى الأنابيب الدقيقة لبطاقة الهوية 1، 2، 3، 6؛
  • إضافة 25 ميكرولتر من محلول التخفيف 1 إلى الأنبوب الصغير لبطاقة الهوية 4 (اختبار الإنزيم)؛
  • احتضان لمدة 15 دقيقة عند +37 درجة مئوية؛
  • جهاز الطرد المركزي (وقت وسرعة الطرد المركزي ثابتان ويتم ضبطهما تلقائيًا) ؛
  • تقييم نتيجة الدراسة. التوافق مع المستضدات A، B، D (1، 2، 3 أنابيب دقيقة):
  • تشير النتيجة الإيجابية أو السلبية الواضحة إلى توافق المستضدات A، B، O في خلايا الدم الحمراء للمتبرع والمتلقي؛
  • إذا لوحظ وجود عدد مزدوج من خلايا الدم الحمراء (في أحد الأنابيب الدقيقة هناك نتيجة إيجابية وسلبية)، فإن المستضدات A، B، D الخاصة بالمتبرع والمتلقي ليست متطابقة!
  • تحديد التوافق بواسطة المستضدات A، B، D صالح فقط مع التفاعل السلبي في الأنبوب الصغير السادس (التحكم الذاتي).
• نتائج اختبار التوافق (4، 5 أنابيب دقيقة) [يعرض]
  • تشير النتيجة الإيجابية في الأنابيب الدقيقة لبطاقة الهوية 4، 5 مع التحكم السلبي (الأنبوب الصغير 6) إلى عدم توافق دم المتبرع والمتلقي من حيث مستضدات كريات الدم الحمراء؛
  • تشير النتيجة السلبية في الأنابيب الدقيقة لبطاقات الهوية 4، 5، 6 إلى توافق دم المتبرع والمتلقي فيما يتعلق بمستضدات كريات الدم الحمراء؛
  • يتطلب التفاعل الإيجابي في بطاقة هوية الأنبوب الصغير 6 (التحكم التلقائي) تحديدًا إضافيًا للأجسام المضادة الذاتية والأجسام المضادة في مصل المستلم (البلازما).
• قيود [يعرض]
  • تأكيد الأدويةيمكن أن يسبب رد فعل إيجابي كاذبكومز.
  • مع بعض الحالات المرضيةقد يعاني المرضى من تفاعل كومبس إيجابي؛
  • قد يؤدي التلوث البكتيري أو غيره من المواد المستخدمة إلى نتيجة إيجابية أو سلبية كاذبة؛
  • يمكن لبقايا الفيبرين في عينات الاختبار أن تربط الخلايا غير المتلاصقة، وبعد الطرد المركزي، تشكل خطًا ورديًا رفيعًا على سطح الجل، بينما سيتم تحديد غالبية الخلايا في الجزء السفلي من الأنبوب الصغير؛
  • قد تسبب معلقات خلايا الدم الحمراء شديدة التركيز تفاعلات إيجابية كاذبة.
• ظروف التخزين والتشغيل [يعرض]

  يجب تخزين بطاقات هوية DiaMed في درجة حرارة الغرفة (+18-25 درجة مئوية) في مكان جاف طوال تاريخ انتهاء الصلاحية.

  تاريخ انتهاء البطاقة هو 18 شهرا. العمر الافتراضي للكواشف هو 2 سنة.

  يتم حفظ نتائج البحث على الخريطة دون تغيير:

  • 48 ساعة في درجة حرارة الغرفة؛
  • لمدة ثلاثة أسابيع في الثلاجة (عند +2-8 درجة مئوية) مع إغلاق الجزء العلوي من بطاقة الهوية بشريط لاصق.

  يمكن نزع أو قطع الحقل السفلي لبطاقة الهوية واستخدامه كوثيقة في السجل الطبي أو خزانة الملفات.

  لا ينبغي استخدام بطاقات الهوية التي تحتوي على علامات جفاف الجل أو فقاعات في سمكه أو تلف الرقاقة الواقية.

  يجب إحضار العينات والكواشف إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.

خاتمة

يعد اختبار الهلام طريقة بسيطة وقابلة للتكرار وسريعة وحساسة للغاية تسمح بالكشف الفوري عن المتغيرات الضعيفة لمستضدات خلايا الدم الحمراء. يتم تقييم الاختبار بشكل مجهري فقط. بعد تدريب قصير للموظفين اللازمين التنفيذ الصحيحالاختبار، يتم تقليل تكاليف وقت العمل والأخطاء التي تحدث عند استخدام الطرق التقليدية.

يسمح لك اختبار الهلام بتوحيد تقنيات المختبر وتقديم تقييم موضوعي لنتائج تفاعل التراص الدموي. يتيح لك استقرار نتائج الاختبار التحقق مرة أخرى من البيانات التي تم الحصول عليها، وهو أمر ضروري للتحكم. يمكن تصوير نتائج الاختبار لأغراض الأرشفة أو للأغراض التعليمية في الحالات التي يصعب تشخيصها. يستخدم الاختبار كمية صغيرة من خلايا الدم الحمراء أو المصل، وهو أمر مهم للغاية لعيادات الأطفال.

إن استخدام نظام الهلام يقلل من خطر تلوث الموظفين حتى عند العمل مع عينات يحتمل أن تكون مصابة. يمكن استخدام اختبار الهلام لإجراء اختبارات التوافق لمستضدات خلايا الدم الحمراء قبل نقل الدم. ولهذا الغرض، يتم استخدام اختبار مضاد الجلوبيولين غير المباشر وطريقة إنزيم الخطوة الواحدة.

يتم إجراء اختبار الهلام وتقييمه وفقًا للقواعد المذكورة أعلاه. إن عدم وجود مراحل لغسل خلايا الدم الحمراء عند إجراء اختبار مضاد الجلوبيولين غير المباشر يسمح باستخدام أكثر فعالية وقت العملوأيضًا بفضل ثبات نتائج الاختبار التحكم في جميع النتائج التي تم الحصول عليها.

مصدر: طبي التشخيص المختبريوالبرامج والخوارزميات. إد. البروفيسور كاربيشتشينكو إيه آي، سانت بطرسبرغ، إنترميديكا، 2001