Donorscreening. Immunhematologiske laboratorietester Antigener (Ag) av erytrocytter

Total blodprotein 60-80 g/l. Det er flere proteinfraksjoner som utfører spesifikke funksjoner.

1. Albuminer (40-60 g/l) har høy kolloid osmotisk aktivitet.

2. Globuliner a, b, g (20-40 g/l) skaper humoral immunitet, danner forskjellige antistoffer kalt immunglobuliner (IgM, IgG).

3. Fibrinogen (2-4 g/l) er hovedfaktoren i mekanismen for blodkoagulasjon.

ANTIGENER(gresk àanti - mot, genos - skape) - stoffer som har evnen til å forårsake dannelse av antistoffer i kroppen og reagere med dem. En rekke spesifikke polysakkarider er bygget inn i erytrocyttmembranen - aminosyrekomplekser med antigene egenskaper. Disse kompleksene kalles agglutinogener.

Til dags dato har mer enn 400 antigener lokalisert i erytrocyttmembranen blitt funnet i humane erytrocytter, hvorav 140 er kombinert til 20 genetisk kontrollerte systemer. De resterende antigenene er vanlige eller individuelle. Til klinisk praksis de viktigste er ABO-systemet og Rh-systemet (Rh-systemet). Det finnes også grupper av Kell-Chelano, Kidd, Lutheran, Duffy, Diego, etc. Sistnevnte betyr bare ved hyppige blodoverføringer eller under graviditet uforenlig med noen av disse agglutinogener. Derfor anbefales det ikke å transfusere blod gjentatte ganger fra samme giver.

RBC-antigener vises i den andre måneden embryonal utvikling Men ved tidspunktet for fødselen av barnet er deres agglutinerbare aktivitet lav og utgjør 1/5 av aktiviteten til voksne.

ANTESTOFFER Stoffer som reagerer med et antigen. Naturlige antistoffer er alltid tilstede i blodplasma og tilhører gammaglobulinfraksjonen. Disse inkluderer antistoffer fra ABO-systemet - a- og b-agglutininer, som vises hos mennesker i de første månedene etter fødselen og rekkevidde maksimalt antall ved 5-10 års alder.

AGGLUTINASJONSREAKSJON- liming og utfelling av erytrocytter under påvirkning av spesifikke antistoffer - agglutininer. Det antas at antistoffmolekylet danner en bro mellom to erytrocytter med to bindingssteder. Hver av disse erytrocyttene binder seg på sin side til andre erytrocytter, og som et resultat holder de seg sammen. Ved transfusjon uforenlig blod agglutinasjon fører til hemolyse av erytrocytter og frigjøring av koagulasjonsfaktorer. De resulterende klumpene tetter små kar og forstyrrer derved kapillærsirkulasjonen.

Agglutinasjon oppstår når donorens agglutinogener med samme navn og mottakerens agglutininer møtes.

Tester for kompatibilitet av transfundert blod

Legen som transfunderer blod er forpliktet til å forhindre mulig uforlikelighet med pasientens blod ved å gjennomføre kontrollundersøkelser, inkludert tester for forenlighet med AB0-blodgrupper og med Rh-faktor.

Kompatibilitetstester utføres rett før transfusjon. For å gjøre dette, bruk pasientens blodserum og giverens blod fra et hetteglass klargjort for transfusjon.

"Menneskelige blodgruppesystemer og
blodoverføringskomplikasjoner", M.A. Umnova

Blodgruppene bestemmes ved en agglutinasjonstest ved romtemperatur på en porselen eller annen hvit plate med fuktbar overflate. Det er to måter å bestemme blodgruppen på: ved å bruke standard sera for å bestemme hvilken gruppe agglutinogener (A eller B) som er i erytrocyttene i blodet som studeres; samtidig ved bruk av standard sera og standard erytrocytter (kryssmetode). Hvori …

2 dråper av pasientens serum, 1 dråpe donors blod og 1 dråpe av en 33 % løsning av polyglucin, spesielt tilberedt for laboratorieformål, legges i et reagensglass. Røret ristes for å blande innholdet, og vippes deretter nesten til horisontal posisjon slik at innholdet renner over veggene, og snu sakte rundt i 5 minutter vertikal akse, komme i kontakt med en blanding av pasientens serum ...

Hemagglutinasjonsreaksjonen i hver dråpe kan være positiv eller negativ. Med en positiv reaksjon, vanligvis innen de første 10-30 sekundene fra starten av blandingen, vises små røde korn (agglutinater) synlige for det blotte øye i blandingen, bestående av limte erytrocytter. Små agglutinater smelter gradvis sammen til større, og noen ganger til flak. uregelmessig form. Samtidig er serumet helt ...

Giverens blod skal vaskes to ganger i et reagensglass med 8 - 10 ganger volumet isotonisk løsning natriumklorid ved sentrifugering, fjern deretter kluten og bruk sedimentet av vaskede erytrocytter til forskning. En liten (0,01 ml) dråpe vaskede erytrocytter overføres til et annet reagensglass, 3 dråper av pasientens serum tilsettes, blandes med donorens erytrocytter og reagensglasset plasseres i ...

I. Under forhåndsdefinerte betegnelser påføres en stor dråpe (0,1 ml) standardsera fra gruppene 0αβ (I), Aβ (II) og Bα (III) på platen. Siden det brukes standard sera av to forskjellige partier av hver gruppe, oppnås totalt 6 dråper, som danner to rader med 3 dråper i følgende rekkefølge fra venstre mot høyre: 0αβ(I), Aβ(II) og Bα(III) ). II. På bunnen av tallerkenen...

Resultatene tolkes ved å evaluere og sammenligne resultatene oppnådd med standard sera (øvre to rader) og med standard erytrocytter (nedre rad). Resultatene av reaksjoner oppnådd ved bruk av standard sera II av standard erytrocytter bør samsvare, dvs. indikere innholdet av agglutinogener og agglutininer som tilsvarer samme blodgruppe. Disse resultatene kan uttrykkes...

For å bestemme Rh-tilhørigheten, dvs. for å påvise tilstedeværelse eller fravær av antigener fra Rh-systemet i blodet til mennesker, brukes standard anti-Rhesus-sera (reagenser), som er forskjellige i spesifisitet, dvs. inneholder antistoffer ift. ulike antigener i dette systemet. For å bestemme Rh0 (D)-antigenet, brukes anti-Rhesus-serum oftest med tilsetning av en 10% gelatinløsning eller et standard anti-Rhesus-reagens som er forberedt på forhånd, brukes ...

I. I 2 rør, en dråpe (0,05 ml) av de studerte erytrocyttene og 2 dråper av en 10 % gelatinløsning oppvarmet til flytende varmt vann(46-48°C). II. I ett av disse rørene tilsettes 2 dråper anti-Rh-serum til blandingen av erytrocytter og gelatin. Dette serumet legges ikke til et annet rør, det fungerer som en kontroll ...

Reagensrørene sees mot lyset med det blotte øye eller gjennom en lupe med dobbel forstørrelse. Resultatet tolkes avhengig av tilstedeværelse eller fravær av erytrocyttagglutinasjon. Med et positivt resultat er agglutinater lett å skille i form av røde korn eller flak mot en gjennomsiktig, nesten misfarget bakgrunn av væsken. Hvis resultatet er negativt i reagensrøret, en jevn farge rosa farge, lett opaliserende væske. Prøver…

I. En dråpe (0,05 ml) av testblodet eller erytrocyttene injiseres i reagensrøret (du kan ikke vaske det fra konserveringsmidlet), tilsett 1-2 dråper standard universal anti-Rhesus-reagens og bland erytrocyttene med reagens ved å riste røret. II. Reagensrøret vippes nesten til en horisontal posisjon slik at innholdet sprer seg over veggene, og snus deretter sakte i denne posisjonen ...

Utvelgelsen av givere utføres i henhold til ensartede medisinske kriterier, som sikrer sikkerhet, høy aktivitet og effektivitet av blod og dets komponenter.

Hver giver gjennomgår en undersøkelse før de donerer blod: de samler en anamnese, gjennomfører en grundig medisinsk undersøkelse og spesiell eksamenå identifisere kontraindikasjoner for bloddonasjon og utelukke muligheten for overføring av patogener av smittsomme sykdommer med blod. Serologiske, virologiske og bakteriologiske undersøkelser av donorblod utføres.

Fremskritt innen klinisk transfusiologi reduserer risikoen for overføring av patogener fra infeksjonssykdommer (HIV-infeksjon, hepatitt B og C, syfilis, cytomegalovirusinfeksjon, etc.) med blod og dets komponenter.

De viktigste antigene systemene i blodet

Det har blitt fastslått at den antigene strukturen til menneskelig blod er kompleks, alle blodceller og plasmaproteiner fra forskjellige mennesker er forskjellige i antigener. Rundt 500 blodantigener er allerede kjent, og danner mer enn 40 forskjellige antigene systemer.

Et antigent system forstås som et sett med blodantigener arvet (kontrollert) av alleliske gener.

Alle blodantigener er delt inn i cellulære og plasma. Cellulære antigener er av primær betydning i transfusiologi.

Celleantigener

Cellulære antigener er komplekse karbohydrat-proteinkomplekser (glykopeptider), strukturelle komponenter i blodcellemembranen. Fra andre komponenter cellemembran de er forskjellige i immunogenisitet og serologisk aktivitet.

Immunogenisitet - antigeners evne til å indusere syntesen av antistoffer hvis de kommer inn i en organisme som ikke har disse antigenene.

Serologisk aktivitet - antigeners evne til å binde seg til antistoffer med samme navn.

Det cellulære antigenmolekylet består av to komponenter:

Schlepper (proteindelen av antigenet som ligger i de indre lagene av membranen), som bestemmer immunogenisitet;

Hapten (polysakkarid del av antigenet, lokalisert i overflatelagene av cellemembranen), som bestemmer serologisk aktivitet.

På overflaten av haptenet er antigene determinanter (epitoper) - karbohydratmolekyler som antistoffer er festet til. Kjente blodantigener skiller seg fra hverandre ved epitoper.

For eksempel har haptener av antigener i AB0-systemet følgende sett med karbohydrater: epitopen til antigen 0 er fukose, antigen A er N-acetylgalaktosamin, og antigen B er galaktose. Gruppeantistoffer er koblet til dem.

Det er tre typer cellulære antigener:

erytrocytt;

Leukocytt;

Blodplater.

RBC antigener

Mer enn 250 erytrocyttantigener er kjent, og danner over 20 antigene systemer. 11 systemer er av klinisk betydning: AB0, Rh-Hr, MNSs, Kell, Lutheran, Kidd, Diego, Duffy, Dombrock, enzymatiske grupper av erytrocytter.

Hos mennesker er antigener fra flere antigene systemer samtidig tilstede i erytrocytter.

De viktigste antigene systemene i transfusiologi er AB0 og Rhesus. Andre antigene systemer av erytrocytter er for tiden ikke av vesentlig betydning i klinisk transfusiologi.

Antigent system AB0

AB0-systemet er det serologiske hovedsystemet som bestemmer kompatibiliteten eller inkompatibiliteten til transfundert blod. Den består av to genetisk bestemte agglutinogener (antigener A og B) og to agglutininer (antistoffer α og β).

Agglutinogener A og B finnes i stroma av erytrocytter, og agglutininer α og β finnes i blodserum. Agglutinin α er et antistoff mot agglutinogen A, og agglutinin β er mot agglutinogen B. I erytrocyttene og blodserumet til én person kan det ikke være agglutinogener og agglutininer med samme navn. Når antigener og antistoffer med samme navn møtes, oppstår en isohemagglutinasjonsreaksjon. Det er denne reaksjonen som er årsaken til blodinkompatibilitet under blodoverføring.

Avhengig av kombinasjonen av antigen A og B i erytrocytter (og følgelig i serum av antistoffer α og β), er alle mennesker delt inn i fire grupper.

Rhesus antigent system

Rh-faktor (Rh-faktor), så kalt fordi den først ble oppdaget hos Rhesus-aper, er tilstede hos 85 % av menneskene, og 15 % er fraværende.

Det er nå kjent at Rhesus-systemet er ganske komplekst og representeres av fem antigener. Rollen til Rh-faktoren i blodtransfusjon, så vel som under graviditet, er ekstremt høy. Feil som fører til utvikling av Rhesus-konflikt forårsaker alvorlige komplikasjoner og noen ganger pasientens død.

Mindre antigene systemer

Sekundære erytrocyttgruppesystemer er representert av et stort antall antigener. Kunnskap om dette mangfoldet av systemer er viktig for å løse noen problemer innen antropologi, rettsmedisinsk forskning, samt for å forhindre utvikling av post-transfusjonskomplikasjoner og visse sykdommer hos nyfødte.

MNS system inkluderer faktorene M, N, S, s. Tilstedeværelsen av to nært koblede gen-loci MN og Ss er bevist. Deretter ble andre forskjellige varianter av antigener av MNSs-systemet identifisert. I henhold til den kjemiske strukturen er MNS-er glykoproteiner.

R system. P-antigensystemet har en viss klinisk betydning. Det har vært tilfeller av tidlige og sene spontanaborter forårsaket av isoantistoffer. anti-R. Det er beskrevet flere tilfeller av post-transfusjonskomplikasjoner assosiert med inkompatibilitet mellom giver og mottaker i henhold til P-antigensystemet.

Kell system representert av tre par antigener. Kell (K) og Cellano (k) antigenene har den høyeste immunogene aktiviteten. Kell-systemantigener kan forårsake sensibilisering av kroppen under graviditet og under blodoverføring, forårsake blodtransfusjonskomplikasjoner og utvikling av hemolytisk sykdom hos nyfødte.

Luthersk system. En av giverne, ved navn Lutheran, hadde et tidligere ukjent antigen i erytrocyttene i blodet, noe som førte til immunisering av mottakeren. Antigenet ble betegnet Lu a. Noen år senere ble det andre antigenet til dette systemet, Lu b, oppdaget. Deres frekvens: Lu a - 0,1 %, Lu b - 99,9 %. Anti-Lu b-antistoffer er isoimmune, noe som også bekreftes av rapporter om betydningen av disse antistoffene i opprinnelsen til hemolytisk sykdom hos nyfødte. Den kliniske betydningen av antigener i det lutherske systemet er liten.

Kidd system. Antigener og antistoffer i Kidd-systemet har en spesifikk praktisk verdi. De kan være årsaken til utviklingen av hemolytisk sykdom hos nyfødte og post-transfusjonskomplikasjoner med gjentatte blodtransfusjoner som er uforenlige med antigenene til dette systemet. Hyppigheten av antigener er omtrent 75 %.

Diego system. I 1953, i Venezuela, ble et barn født i Diegos familie med tegn på hemolytisk sykdom. Ved bestemmelse av årsaken til denne sykdommen ble et tidligere ukjent antigen, utpekt av Diego-faktoren (Di), oppdaget i barnet. I 1955 avslørte studier utført at Diego-antigenet er et rasetrekk som er karakteristisk for folkene i den mongoloide rasen.

Duffy system består av to hovedantigener - Fy a og Fy b. Anti-Fy a antistoffer er ufullstendige antistoffer, de viser sin effekt kun i den indirekte antiglobulin Coombs testen. Senere ble antigenene Fy x, Fy 3 , Fy 4 , Fy 5 oppdaget. Frekvensen avhenger av rasen til personen, som har veldig viktig for antropologer. I negroide populasjoner er frekvensen av Fy en faktor 25%, blant den kinesiske befolkningen, eskimoer og australske aboriginer - nesten 100%, blant kaukasiske mennesker - 60-82%.

Dombrock system. I 1973 ble Do a og Do b antigener identifisert. Faktor Do a finnes i 55-60% av tilfellene, og faktor Do b - i 85-90%. Denne frekvensen setter dette serologiske blodsystemet på en femteplass når det gjelder informativitet når det gjelder rettsmedisinsk farskapsbestemmelse (Rhesus-systemet, MNSs, AB0 og Duffy).

Enzymatiske grupper av erytrocytter. Siden 1963 har et betydelig antall genetisk polymorfe enzymsystemer av humane erytrocytter blitt kjent. Disse funnene spilte en betydelig rolle i utviklingen av den generelle serologien til menneskelige blodgrupper, så vel som i aspektet av rettsmedisinsk undersøkelse av omstridt farskap. Enzymsystemene til erytrocytter inkluderer fosfatglukomutase, adenosindeaminase, glutamat-pyruvattransaminase, esterase-D, etc.

På nåværende stadium er det bevist at hemolytisk sykdom foster og nyfødt er en type alloimmun cytopeni forårsaket av immunisering av moren med føtale blodceller som bærer antigener på membranene som er fraværende hos den gravide kvinnen. Denne prosessen kan skyldes forskjellige antigener lokalisert på membranen til erytrocytter og andre blodceller (blodplater, nøytrofiler) hos fosteret, som går inn i mors blodstrøm transplacentalt og forårsaker dannelse av antistoffer i henne. Alloimmune erytropenier observeres oftest på grunn av inkompatibiliteten til blodet til fosteret og moren for antigener i ABO- og Rhesus-systemene.

Naturen til anemi som utvikler seg i fosteret (hemolytisk, aplastisk) avhenger av antigenet eller antigenene som forårsaker det. Samtidig hos fostre med erytropeni ulike tilblivelser, lignende kliniske manifestasjoner sykdommer tilgjengelig for ikke-invasive og invasive verifiseringsmetoder.

Alloimmun erytropeni, inkludert hemolytisk sykdom, hos fosteret/nyfødt (HDFN) er en sykdom karakterisert ved hemolyse av erytrocytter og/eller hemming av hematopoiesis under påvirkning av antistoffer dannet i moren mot antigener fra føtale erytrocytter, gjensidig penetrerende gjennom placentabarrieren , manifestert i fosteret/nyfødt ved anemi, en økning i blodeksplosjonsformer av erytrocytter og ofte bilirubin.

Siden forskjeller i blodet til moren og fosteret når det gjelder erytrocytantigener er av primær betydning for sykdommens patogenes, er det nødvendig å vurdere deres immunhematologiske egenskaper.

På det nåværende utviklingsstadiet av immunhematologi er mer enn 250 erytrocyttantigener kjent, som vanligvis er fordelt i 29 genetisk uavhengige systemer. Hvert system er kodet av ett eller flere gener. RBC-antigener er proteiner (f.eks. Rhesus-systemet), glykoproteiner eller glykolipider (ABO-systemet).

Fra 1980 til i dag har International Society for Blood Transfusion (ISBT) fortsatt arbeidet med klassifisering av kjente medisinsk vitenskap erytrocyttantigener. I henhold til gjeldende nomenklatur er alle erytrocyttantigener delt inn i systemer, samlinger og serier.

Tabell 1 viser en liste over de kjente 29 systemene av erytrocyttantigener, kombinert i dem i henhold til prinsippet om tilstedeværelsen av vanlige gener som koder for produktene deres. Det er vanlig å utpeke antigenersystemer i rekkefølgen de oppdages med tresifrede tall i stigende rekkefølge, fra 001. Innenfor systemet har hvert antigen også et tresifret tall. Dermed er hvert antigen vanligvis betegnet med et sekssifret tall.

Samlinger kombinere antigener som er beslektet biokjemisk og serologisk på fenotypenivå, men som ikke har felles gener som koder for produktene deres, og som derfor ikke oppfyller kravene til antigensystemer.

Antigener som genene som koder for dem ennå ikke er studert er gruppert i serie fra to grupper - med lav og høy frekvens hendelse.

RBC alloantigener konvensjonelt delt på vanlige antigener, antigener gjennomsnittlig frekvens av forekomst og sjelden antigener. Vanlige antigener finnes hos nesten alle mennesker, så antistoffer mot slike antigener dannes sjelden. Men hvis det er nødvendig å utføre en blodoverføring hos pasienter med tilstedeværelse av antistoffer mot hyppig forekommende antigener, oppstår det som regel vanskeligheter med valg av donorer. I tilfelle et antigen distribueres med en frekvens på mindre enn 1 %, klassifiseres det som en gruppe sjeldne antigener.

Tabell 1

RBC-antigensystemer

Hos pasienter med isoimmunisering mot sjeldne antigener er det i de fleste tilfeller vanskelig å gjennomføre en immunhematologisk undersøkelse for antistoffverifisering, siden denne prosessen krever en lang, kostbar studie med et stort antall prøver og testsystemer.

Siden klinisk betydelige former hemolytiske sykdommer er hovedsakelig forårsaket av antistoffer dannet mot antigenene til Rhesus-systemet, det er nødvendig å dvele ved klassifiseringene som er foreslått for antigenene til dette systemet. Det finnes flere slike klassifiseringer. En av dem er Rhesus-klassifisering av Wiener-antigener. Den er basert på antakelsen om at det bare er ett sted på Rh-kromosomet som kan okkuperes av ett av de åtte allelomorfe genene. Hvert gen koder for produksjonen av et agglutinogen, som er et kompleks av antigener. Betegnelsen av antigener ifølge Wiener er kompleks, og for tiden er den ikke mye brukt i immunhematologi. Imidlertid er det vanlig for dem å angi spesifisiteten til antistoffer i anti-Rhesus immunoglobulin - "Rho (D)".

Anbefalt av WHO Biological Standards Expert Committee for bruk Fisher-Reis klassifisering av Rhesus antigener. Den er basert på antakelsen om at det er tre steder på Rh-kromosomet for tre gener. Dessuten består hvert genkompleks av tre antigene determinanter: D eller dets fravær - d, C eller c, E eller e i forskjellige kombinasjoner.

I forskning senere år bare to gener er vist (RHD og RHCE), ansvarlig for produksjonen av antigener av erytrocytter i Rhesus-systemet. Dermed styres produksjonen av antigen D av genet rhd, mens antigener C, c, E, e - genomet RHCE. Hvori et stort nummer av antigener som utgjør Rhesus-systemet (48 antigener) forklares med mutasjoner i disse to genene. Det er ingen data om tilstedeværelsen av antigen d, siden det ikke er noe gen som er ansvarlig for syntesen av dette antigenet.

Hemolytisk sykdom hos foster og nyfødte kan også være forårsaket av andre antigener i Rhesus-systemet enn D, samt andre såkalte "irregulære" antigener fra andre systemer eller en kombinasjon av flere antigener i ett system. I dette tilfellet er begrepet "erytrocytt-alloimmunisering" oftest brukt i litteraturen for å karakterisere alloimmunprosessen.

Det er alloimmunisering for erytrocyttantigener som er hovedårsaken til utviklingen av anemisk syndrom hos fosteret. Så, ifølge US Center for Disease Control and Prevention (år), til tross for det implementerte programmet for immunprofylakse, forekommer Rh-sensibilisering i 6,7 tilfeller per 1000 levendefødte. Hvis vi legger til dem tilfeller av utvikling av alloimmunisering under påvirkning av antigener av erytrocytter fra andre grupper (Kell, Kidd, Duffy), registreres mer enn 30 000 fostre med risiko for å utvikle alloimmun anemi årlig i USA. Dessverre, slik fullskala statistikk på Den russiske føderasjonen er ennå ikke tilgjengelig på grunn av utilstrekkelig implementering av detaljert immunhematologisk testing av pasienter i risiko.

For en tilstrekkelig vurdering av tilstedeværelsen av isoimmunisering er det derfor først og fremst nødvendig å søke etter og identifisere erytrocyttantistoffer som sirkulerer i blodet til en gravid kvinne.

Rollen til erytrocyttantigener i forekomsten av hemolytisk sykdom hos fosteret og nyfødte er forskjellig og bestemmes av evnen til alloantistoffer dannet mot en viss klasse antigener til å ødelegge erytrocytter eller forstyrre prosessene for deres dannelse i fosteret. Prosessen med dannelse av immunantistoffer mot føtale erytrocyttantigener avhenger av tilstedeværelsen av et antigen som er fraværende i moren, dets immunogenisitet, samt antall føtale erytrocytter som kommer inn i den gravide kvinnens blodomløp.

Antistoffer mot erytrocyttantigener (alloantistoffer) er naturlige (vanlige) og immune (irregulære). Så i blodserumet til mennesker (bortsett fra individer med blodgruppe AB), er medfødte naturlige antistoffer mot antigen A og / eller B i ABO-systemet, bestående av fire antigener, konstant tilstede.

Sykdommen hos fosteret, og deretter hos det nyfødte, skyldes uforlikeligheten av erytrocyttene til moren og fosteret i henhold til ABO-antigensystemet i 10–20 % av alle tilfellene. Samtidig utvikles hemolytisk sykdom hos fosteret/nyfødt 40 ganger oftere hos kvinner med blodtype 0 (I) og en ektefelle med en annen blodgruppe. Men når denne typen isoimmunisering oppstår alvorlige former sykdommer hos fosteret og nyfødte observeres bare i isolerte tilfeller - 1:3000 fødsler.

Gelagglutinasjonsmetode for bestemmelse av erytrocyttantigener og antierytrocyttantistoffer

Introduksjon

Gelteknologi i mikrorør (GTM) ble foreslått av Y. Lapierre i 1989. Metoden er basert på agglutinering av erytrocytter i Sephadex agargel plassert i mikrorør. Systemet er vanligvis et plastkort som inneholder mikrorør fylt med gel (patent DiaMed AG, Sveits). Immunhematologiske studier basert på hemagglutinasjonsreaksjonen utføres vanligvis i væskefasesystemer.

En av de mest viktige forhold innhenting av korrekte data for agglutinasjonsreaksjonen er evalueringen av resultatet. En svak respons kan feiltolkes, spesielt av uerfarent personell. Falske svake eller negative resultater av en indirekte antiglobulintest kan oppstå på grunn av nøytralisering av antiglobulinreagenset med spor av serum på grunn av utilstrekkelig effektiv vasking av røde blodlegemer. Utilstrekkelig blanding av RBC og eluering av svakt fikserte antistoffer under vaskeprosessen kan forårsake feil i den indirekte antiglobulintesten.

Gelagglutinasjonsteknikken ble utviklet for å standardisere hemagglutinasjonsreaksjoner og oppnå pålitelige resultater. Gelteknologien sørger for separasjon av erytrocytter under sentrifugering, mens ikke-agglutinerte erytrocytter passerer gjennom gelen og legger seg i bunnen av rørene ( negativt resultat), mens de agglutinerte beholdes på overflaten eller i tykkelsen av gelen ( positivt resultat). Gelsentrifugering kan være den siste fasen av enhver hemagglutinasjonsbasert serologisk test, bortsett fra metoder som krever dispersjon for å evaluere resultatet.

Utvalget av tester som utføres inkluderer RBC-fenotyping (inkludert svake antigenvarianter), antiglobulintesting, antistoffscreening og identifikasjon, kompatibilitetstester og noen få andre.

Prinsippet for geltesten

Bufret dekstrangel Sephadex TM G 100 superline kan enten være nøytral eller inneholde spesifikke antisera eller et antiglobulinreagens på en gelmatrise. Røde blodlegemer eller en blanding av røde blodlegemer og serum påføres gelen. Celler påføres alltid før sera – i motsetning til standard serologiske teknikker – slik at seraene som testes ikke kommer i kontakt med gelen, noe som er spesielt viktig når man utfører en antiglobulintest. Etter inkubering følger sentrifugering i en strengt definert modus. Hvis sentrifugeringsbetingelsene ikke er oppfylt (sentrifugeringen er ikke lang nok eller for myk), kan det oppstå falske positive resultater. Falsk-negative resultater kan også oppstå hvis betingelsene (forsering) for sentrifugering brytes. Bruken av en automatisk ID-sentrifuge (Diamed) eliminerer disse problemene. Tre typer gel brukes vanligvis til testing:

1. nøytrale, som ikke inneholder spesifikke antistoffer (brukes til søk og identifisering av antistoffer ved saltvann og enzymatiske metoder, det kalde stadiet av testen for kompatibilitet av blodet til giveren og mottakeren);
2. spesifikke, som inneholder antistoffer (monoklonale eller polyklonale) mot humane erytrocytt-antigener (brukes til å typebestemme erytrocytt-antigener i ABO-, Rhesus-, Kell-systemene, etc.)
3. antiglobulin, som inneholder antistoffer (polyspesifikke eller monospesifikke) mot humane immunglobuliner og komponenter i komplementsystemet (brukes til direkte og indirekte antiglobulintest (Coombs-reaksjon) i søk og identifisering av auto- og alloimmune antistoffer, en test for kompatibilitet mellom giver og mottaker blod).

Testet blod tilsettes øvre del mikrorør av diagnostiske kort, og under sentrifugering separeres agglutinerte og ikke-agglutinerte erytrocytter som følger: ikke-agglutinerte erytrocytter har en størrelse som kan sammenlignes med størrelsen på gelpartikler og passerer fritt gjennom dem under påvirkning av sentrifugalkraft, og danner en kompakt rød utfelling i bunnen av mikrorøret - et negativt resultat; agglutinerte erytrocytter, på grunn av deres store størrelse, henger på overflaten av gelen eller i dens tykkelse - et positivt resultat.

Fast agglutinasjon i gelen gjør det enkelt å evaluere resultatet av reaksjonen, og tilstedeværelsen av et kontrollmikrorør i diagnoseskjemaet bekrefter påliteligheten til dataene som er oppnådd.

Avhengig av styrken til agglutinasjonsreaksjonen i gelmediet, ble følgende vurdering av de oppnådde resultatene akseptert:

• sterkt positiv (++++) - de dannede erytrocyttagglutinatene holdt seg på geloverflaten;
• positiv (+++) - agglutinater er lokalisert i den øvre tredjedelen av gelkolonnen;
• svakt positive (++) - agglutinater fikseres i de øvre to tredjedeler av gelen;
• svært svakt positive (+) - agglutinater er lokalisert i den nedre tredjedelen av gelen;
• negativ (-) - erytrocytter danner et kompakt sediment i bunnen av mikrorøret.

Utstyr og reagenser

• ID-kort for bestemmelse av erytrocyttantigener og antierytrocyttantistoffer;
• ID-sentrifuge for kortsentrifugering;
• termostat ved +37°С;
• stativ for prøverør og kort;
• reagensrør med en kapasitet på 5 og 10 ml;
• halvautomatiske enkanalspipetter (10, 25, 50 µl);
• gummi kirurgiske hansker;
• fortynningsløsning 1 (bromelainløsning);
• fortynningsløsning 2 (oppløsning med lav ionstyrke - LISS, RNIS);
• 0,9 % natriumkloridløsning;
• standardtypede humane erytrocytter for påvisning av antistoffer og kryssreaksjon.

Kjennetegn på identifikasjonskort

Identifikasjonskort (ID-kort) Dia-Med er plastkort med seks mikrorør innebygd i dem. Fem rør inneholder en blanding av gel og antisera. Hvert kort har et sjette kontrollrør som inneholder en nøytral gel uten antistoffer (ctl). Rørene er merket i ID-kortet i henhold til de påviste antigenene, for eksempel: A-B-AB-D-CDE-ctl eller C-c-E-e-K-ctl. Identifikasjonskort for påvisning av antistoffer mot erytrocyttantigener har noen forskjeller, for eksempel "Coombs / Enzyme Test"-kort: tre rør plassert til venstre inneholder en gel som inneholder antistoffer mot humane globuliner (monospesifikke anti-IgD eller polyspesifikke - mot immunglobuliner av forskjellige klasser ) - Coombs-reaksjon. De neste tre rørene inneholder kun en nøytral gel designet for å oppdage antistoffer mot erytrocyttantigener i et saltvannsmedium.

Generelle regler for bruk av ID-kort

1. Identifikasjonskort bør oppbevares på et tørt, mørkt sted ved en temperatur på 18-25°C. Utløpsdatoen er angitt i passdelen av hvert kort og på pakkene.
2. Løsninger for fremstilling av en suspensjon av erytrocytter, samt standard sera og standard ID-erytrocytter brukt i individuelle studier, bør oppbevares på et tørt, mørkt sted ved en temperatur på 2-8°C. Utløpsdatoen er angitt på etiketten på hvert hetteglass og på emballasjeboksen.
3. For å unngå å få falske resultater studier, ikke bruk reagenser og kort som har utløpt, samt tørkede, som inneholder gassbobler, eller hvis skallet er skadet.
4. Blod høstes ved hjelp av moderne flebotomiteknikker, og arterielt, kapillært og navlestrengsblod (uten å vaske) er også egnet. Både fullblodsprøver (tatt i et rent, tørt rør) og blodprøver tatt på konserveringsmidler og stabilisatorer egner seg for forskning.

Typing av erytrocyttantigener

DiaMed ID-kort er beregnet for samtidig bestemmelse av ABO-blodtype og Rh-tilknytning til donor- og mottakererytrocytter (inkludert deres svake varianter av antigener), samt for typeing av andre erytrocyttantigener. DiaMed ID-kort kan brukes i stedet for eller parallelt med isohemagglutinerende sera, anti-D, anti-DCE reagenser, anti-A, anti-B, anti-D og anti-D Super coliclones.

• [forestilling] .

  Den innledende fasen utføres på forskjellige måter, avhengig av typen ID-kort som brukes, som inneholder polyklonale (se avsnitt 1a nedenfor) eller monoklonale (se avsnitt 16) antistoffer:

  1a) Forbered en suspensjon av de studerte erytrocyttene i løsningen for fortynning av ICID-kort som inneholder polyklonale antistoffer) som:

  • behold fortynningsløsning 1 til den når romtemperatur;
  • klargjør en 5 % suspensjon av testerytrocytter i fortynningsløsning 1 ved å plassere 0,5 ml fortynningsløsning 1 og 50 µl av helblodet som skal testes eller 25 µl erytrocyttmasse i et reagensrør;
  • bland forsiktig og inkuber i 10 minutter ved romtemperatur;
  • bruk senest 15 minutter etter inkubering.

  16) Forbered en suspensjon av testerytrocytter i fortynningsløsning 2 (ID-kort som inneholder monoklinale antistoffer) som:

  • behold fortynningsløsning 2 til den når romtemperatur;
  • merke rene reagensrør;
  • klargjør en 5 % suspensjon av testerytrocytter i fortynningsløsning 2 ved å plassere 0,5 ml fortynningsløsning 1 og 50 µl av helblodet som skal testes eller 25 µl erytrocyttmasse i et reagensrør.
• Neste skritt [forestilling] .
  1. Merk ID-kortet (N for testserumprøven eller fullt navn på pasienten).
  2. Fjern beskyttelsesfolien fra ID-kortrørene.
  3. Tilsett 10 µl testerytrocytter, tilberedt i henhold til punkt 1a, eller 50 µl testerytrocytter, preparert i henhold til punkt 16, til hvert reagensrør på ID-kortet.
  4. Monter ID-kortene i ID-sentrifugerotoren (med obligatorisk balansering med andre ID-kort, evt. ubrukte).
  5. Sentrifuger ID-kort (tid og hastighet for sentrifugering er konstant og innstilt automatisk).
  6. Vurder testresultatet: Resultatet i kontrollmikrorøret - "ctl" - skal alltid være negativt. En positiv reaksjon i "kontrollen" kan skyldes tilstedeværelsen av autoantistoffer og uspesifikke plasmaproteiner. Hvis "kontrollen" er positiv - bestemmelsen er upålitelig, må den gjentas etter en enkelt vask av erytrocyttprøven med 0,9 % natriumkloridløsning eller fortynningsløsning 2.
  7. Skriv inn resultatene av bestemmelsen av hvert antigen i den aktuelle kolonnen på ID-kortet (i det hvite feltet under hvert antigen).
  8. Identifiser resultatet i henhold til følgende skjema (tabell 18.7-18.9)

  Tabell 18.7. Resultatene av studien av ABO-blodgruppeantigener og Rh-tilknytning i ABO/Rh ID-kortet
  Detekterbare antigener					Konklusjon
  EN	V	AB	D	CDE
  +	+	+	+	+	AB Rh+
  +	+	+	-	-	AB Rh-
  +	-	+	+	+	En Rh+
  +	-	+	-	-	Og Rh-
  -	+	+	+	+	I Rh+
  -	+	+	-	-	I Rh-
  -	-	-	+	+	0 Rh+
  -	-	-	-	-	0 Rh-
  Merk: Studiens spesifisitet bekreftes av et negativt resultat i ID-kortkontrollrøret.

  Tabell 18.8 Bestemmelse av antigener av erytrocytter i ABO-systemet
  Blodtype
  	anti-A	anti-B	anti-AB
  0(1)	-	-	-
  A1(II)	++++	-	++++
  А2(II)	++++	-	++++
  А3(II)	++/+++	-	++/++++
  A x (II)*	-/++	-	+/++
  B(II)	-	++++	++++
  В3(III)	-	+/+++	+/+++
  B x (III)*	-	-/++	-/++
  A1B(IV)	++++	++++	++++
  A2B(IV)	+++/++++	++++	++++
  Merk: * - bestemmelse av svært svake varianter av antigen A og B krever videre forskning.

  Tabell 18.9 Definisjon av Rh-tilknytning (D, CDE)
  Rhesus-tilhørighet	Resultater av serumstudier
  	Anti-D	Anti-CDE
  D-positiv	++++	++++
  D-negativ	-	-
  D-negativ, C	E-positiv*	-
  Svak positiv (D u)	fra ± til +++	fra +++ til ++++
  Merk: * - Positiv reaksjon med anti-CDE serum kl tilbakeslag med anti-D-serum indikerer tilstedeværelsen av antigener C, E og krever ytterligere typing ved bruk av ID-kort: C-c-E-e-K-stl eller C-C w -c-E-e-K

Brukte ID-kort

Ved bestemmelse av blodgrupper og Rh-tilhørighet brukes polyklonale (tabell 18.10) [forestilling] ) og monoklonal (tabell 18.11 [forestilling] ) reagenser. Den vanligste applikasjonen i praksis pga økonomisk gjennomførbarhet finne monoklonale sera.

Av moderne klassifisering individer med en svekket variant av D-antigenet som er i stand til å produsere anti-D-antistoffer, faller inn i syv kategorier. Kategori VI har høyest forekomstfrekvens og praktisk betydning, og erytrocyttene av disse bærer kun Z-epitopen til D-antigenet Personer i kategori VI (Rh-negative mottakere, men Rh-positive givere!) Kan produsere antistoffer mot uendret D og delvis D av alle andre kategorier. For å bekrefte blodtypen brukes ulike ID-kort: D (IV -) - for mottakere, D (IV +) - for givere.

Bestemmelse av ABO-blodgruppe og Rh-tilbehør utføres ved å identifisere spesifikke antigener og antistoffer (dobbelt- eller kryssreaksjon) (tabell 18.12) [forestilling] ).

For en dybdeundersøkelse benyttes andre kart (tabell 18.13-18.14 [forestilling] ).

Påvisning av anti-erytrocyttantistoffer

Metodeprinsipp

Testsera og standard erytrocytter for antistoffdeteksjon legges til toppen av mikrorørene. Etter inkubering og sentrifugering forblir agglutinerte erytrocytter i den øvre delen av røret, da de ikke går gjennom gelen pga. stor størrelse agglutinerer (positivt resultat). I fravær av antistoffer mot antigener fra testerytrocytter, dannes ikke agglutinater. Ikke-agglutinerte RBC passerer lett gjennom gelen og legger seg i bunnen av røret (negativt resultat). Arten av agglutinasjon ved påvisning av antistoffer mot erytrocytter avhenger av titeren av antistoffer, deres aktivitet og estimeres fra ++++ til +.

• Forskningsalgoritme [forestilling] .

  Typede erytrocytter før studien må først vaskes to ganger fra konserveringsmidlet med 0,9 % natriumkloridløsning, og deretter utføre følgende trinn:

  • behold Diluent 2 til romtemperatur er nådd;
  • etikett rør;
  • klargjør en 0,8 % suspensjon av type erytrocytter i fortynningsløsning 2 ved å plassere 1,0 ml fortynningsløsning 2 og 10 µl blod i et reagensrør;
  • fjern beskyttelsesfolien fra ID-kortet;
  • merk ID-kortet (nummer på testserumprøven eller fullt navn på pasienten);
  • tilsett 50 µl standard erytrocytter til mikrorør;
  • tilsett 25 µl serum eller plasma av testprøven til hvert mikrorør;
  • inkuber i 15 minutter ved en temperatur på +37 "C;
  • sentrifuge ID-kort i ID-sentrifugen (tid og hastighet for sentrifugering er konstant og innstilt automatisk).

  Merk: standard erytrocytter av panelet ID-DiaCell I-II-III og ID-DiaCell I-Ii-III P fra DiaMed er klare til bruk uten forutgående vask og behandling med fortynningsløsning 2.

• Tolking av resultater [forestilling] .

  En positiv reaksjon betyr tilstedeværelsen av immunantistoffer i testprøven.

  Hvis det er positiv reaksjon med alle erytrocytter i ID-DiaCell-panelet, anbefales det å utføre en autokontroll for å utelukke autoantistoffer i testprøven.

  Hvis reaksjonen forblir negativ med en eller flere røde blodlegemer i ID-DiaCell-panelet, kan spesifisiteten til antistoffene bestemmes ved å bruke det medfølgende antigene profileringsarket som følger med alle ID-DiaCell-pakkene. Når du gjør dette, sørg for at numrene til ID-DiaCell1-panelet og det medfølgende arket stemmer overens.

  Hvis dette panelet ikke tillater bestemmelse av antistoffspesifisitet, anbefales det å fortsette med identifisering ved hjelp av ID-DiaPanel og/eller ID-DiaPanel P avansert erytrocyttpanel (avhengig av metoden som opprinnelig ble brukt).

Screening og identifisering av antistoffer

Antistoffscreening utføres både i en nøytral gel og i en gel som inneholder et antiglobulinreagens (tabell 18.15-18.16) [forestilling] ). I det første tilfellet brukes enzymbehandlede erytrocytter til studien, i det andre tilfellet brukes en suspensjon av erytrocytter i en løsning med lav ionestyrke. Screening og identifisering av antistoffer utføres ved hjelp av et standard panel av erytrocytter. Ved evaluering av effektiviteten av geltesten for screening og identifisering av antistoffer, ble dens høyere sensitivitet funnet sammenlignet med tradisjonelle metoder.

Metoder for studie av antistoffer mot erytrocyttantigener

• Antiglobulintest (indirekte Coombs-reaksjon) [forestilling] .

  Den indirekte antiglobulintesten (NAT) brukes til å påvise anti-RBC-antistoffer. Vanligvis utføres NAT i to trinn:

  1. inkubering av erytrocytter og serum (fiksering av antistoffer) etterfulgt av vasking for å fjerne ubundne globuliner; å iscenesette en indirekte antiglobulintest i en geltest krever ikke vask av erytrocytter!
  2. inkubering av vaskede erytrocytter med anti-humant globulin (AHG). Agglutinasjon indikerer tilstedeværelsen i serum av antistoffer som har bundet seg til erytrocyttantigener in vitro.

  NAT brukes til:

  1. bestemmelse i serumet til mottakeren av antistoffer mot erytrocyttene til giveren - når du setter opp en test for kompatibilitet;
  2. ved screening av "uventede" anti-erytrocyttantistoffer;
  3. i studiet av anti-erytrocyttantistoffer hos gravide kvinner;
  4. i studiet av antistoffer i serumet til pasienter med autoimmun hemolytisk anemi.

  Definisjonsfremgang:

  • tilsett 50 µl suspensjon av type erytrocytter i tre reagensrør på ID-kortet plassert til venstre;
  • tilsett 25 µl av testserumet til reagensrørene;
  • sentrifuger ID-kort i 10 min;
  • vurdere resultatet av studien. Skriv inn resultatet i ID-kortet.

  Definisjonsresultater:

  • et positivt resultat indikerer tilstedeværelsen av immune (allo) antistoffer i testserum eller plasma (for å bestemme spesifisiteten til antistoffer, bruk tabellen vedlagt standard erytrocytter);
  • et negativt resultat indikerer fravær av immunantistoffer i testserumet eller plasmaet.
• enzymatisk metode [forestilling] .

  Behandling med proteolytiske enzymer øker agglutinabiliteten til røde blodceller.

  Definisjonsfremgang:

  • tilsett 50 µl av en suspensjon av standardtype erytrocytter til de tre rørene på ID-kortet plassert til høyre;
  • tilsett 25 µl fortynningsløsning 1 til rørene;
  • tilsett 25 µl av testserumet til reagensrørene.

  Merk: Fortynningsløsning 1 tilsettes ikke hvis standardtype erytrocytter forhåndsbehandlet med et proteolytisk enzym (f.eks. ID-DiaCell I-II-III P fra DiaMed) brukes til testing.

  • inkuber i 15 minutter ved +37°C;
  • sentrifuger ID-kort i en W-sentrifuge i 10 min (parametrene stilles inn automatisk);
  • skriv inn resultatet i ID-kortet.

  Forskningsresultater:

  • et positivt resultat indikerer tilstedeværelsen av alloantistoffer i testserumet eller plasmaet (for å bestemme spesifisiteten til antistoffer, bruk tabellen vedlagt standard erytrocytter);
  • et negativt resultat indikerer fravær av alloantistoffer i testserum eller plasma.
• Kald agglutinasjonsmetode [forestilling] .

  Definisjonsfremgang:

  • inkuber fortynningsløsning 2, type erytrocytter og ID-kort i 30 minutter ved en temperatur på 2-8°C;
  • behandle type erytrocytter med fortynningsløsning 2, for hvilke:
    • merk reagensrøret;
    • klargjør en 0,8 % suspensjon av type erytrocytter i fortynningsmiddel 2 ved å plassere 1,0 ml fortynningsmiddel 2 og 10 µl blod i et reagensrør.

  Merk: Standard ID-DiaCell RBC (DiaMed) er klare til bruk og trenger ikke å fortynnes;

  • tilsett 50 µl av en suspensjon av type erytrocytter behandlet med fortynningsløsning 2 i tre reagensrør på ID-kortet plassert til høyre;
  • tilsett 25 µl av testserumet til disse rørene;
  • inkuber i 30 minutter ved en temperatur på 2-8 C;
  • sentrifuger ID-kortene i ID-sentrifugen i 10 minutter (parameterne stilles inn automatisk);
  • evaluere resultatet av studien;
  • skriv inn resultatet i ID-kortet. Forskningsresultater:
  • et positivt resultat indikerer tilstedeværelsen av kalde antistoffer i testserumet eller plasmaet (for å bestemme spesifisiteten til antistoffer, bruk tabellen vedlagt standard erytrocytter);
  • et negativt resultat indikerer fravær av kalde antistoffer i testserumet eller plasmaet.

  I nærvær av kalde eller varme autoantistoffer i testserumet, falske positive resultater. For å ekskludere dem må du angi autokontroll:

  • klargjør en 0,8 % suspensjon av testbloderytrocytter i fortynningsløsning 2 ved å tilsette 10 µl fullblod til 1,0 ml fortynningsløsning 2;
  • tilsett 50 µl av den tilberedte erytrocyttsuspensjonen til ID-kortrøret plassert til venstre (for Coombs-reaksjonen), eller til ID-kortrøret plassert til høyre (for enzymmetoden og kaldagglutinering);
  • tilsett 25 µl av testserumet i reagensrørene på ID-kortet (for den enzymatiske metoden er det nødvendig å tilsette ytterligere 25 µl fortynningsløsning 1 i rørene);
  • inkuber kortene i 15 minutter ved +37°C (for Coombs-reaksjonen og den enzymatiske metoden) eller ved 2-8°C (for kaldagglutinasjonsautokontroll).

  Et positivt resultat i autokontrollen indikerer tilstedeværelsen av autoantistoffer i testserumet.

Bestemme kompatibiliteten til donor- og mottakerblod

Formålet med testen for individuell kompatibilitet er å forhindre transfusjoner av hemokomponenter som er uforenlige med erytrocyttantigener. Testing av mottakerens serum med RBC-ene til den tiltenkte donoren er mest pålitelig måte påvisning av antistoffer som kan forårsake skade på transfunderte erytrocytter, posttransfusjonsreaksjoner og komplikasjoner av hemolytisk type. Denne testen lar deg:

1. bekrefte ABO-kompatibiliteten til giveren og mottakeren;
2. oppdage antistoffer i mottakerens serum rettet mot donorens erytrocyttantigener.

Testing for individuell kompatibilitet av blodet til giveren og mottakeren med erytrocyttantigener (tabell 18.17 [forestilling] ) erstatter ikke den obligatoriske immunhematologiske undersøkelsen (typing av erytrocyttantigener i ABO-, Rhesus-, Kell-systemene, påvisning av anti-erytrocyttantistoffer, søk og identifisering av alloanti-erytrocyttantistoffer), men supplerer den bare.

På grunn av det faktum at sensibilisering kan oppstå selv etter transfusjoner av individuelt utvalgte hemokomponenter, for testing for kompatibilitet, er det nødvendig å bruke ferskt pasientserum oppnådd etter siste transfusjon av hemokomponenter hver gang.

En kompatibilitetstest må utføres for hver donorblodprøve!

• Definisjon fremgang [forestilling]
  • oppbevar fortynningsmiddel 2 til det når romtemperatur (20-24°C);
  • merk ID-kort og reagensglass (fullt navn på giver og mottaker);
  • klargjør en 0,8 % suspensjon av donor- og mottakererytrocytter i fortynningsløsning 2, som tilsett 1 ml fortynningsløsning 2 i to merkede rør, tilsett 10 µl henholdsvis donor- og mottakerblod;
  • blande;
  • fjern beskyttelsesfolien fra det tilsvarende ID-kortet;
  • tilsett 50 µl av den tilberedte donorerytrocyttsuspensjonen til mikrorør med ID-kort 1, 2, 3, 4, 5;
  • tilsett 50 µl av den forberedte mottakererytrocyttsuspensjonen til mikrorør med ID-kort 4, 5, 6;
  • tilsett 25 µl av mottakerens serum eller plasma til mikrorør med ID-kort 1, 2, 3, 6;
  • tilsett 25 µl fortynningsmiddel 1 til ID-kort mikrorør 4 (enzymtest);
  • inkuber i 15 minutter ved en temperatur på +37°C;
  • sentrifuge (tid og hastighet på sentrifugering er konstant og innstilt automatisk);
  • vurdere resultatet av studien. Kompatibilitet for antigener A, B, D (1, 2, 3 mikrorør):
  • et klart positivt eller negativt resultat indikerer korrespondansen mellom A-, B-, O-antigenene til bloderytrocyttene til giveren og mottakeren;
  • hvis en dobbel populasjon av erytrocytter observeres (positivt og negativt resultat i ett mikrorør), er ikke antigenene A, B, D til donor og mottaker identiske!
  • bestemmelse av kompatibilitet for antigener A, B, D er kun gyldig med en negativ reaksjon i 6. mikrorør (autokontroll).
• Kompatibilitetstestresultater (4, 5 mikrorør) [forestilling]
  • et positivt resultat i mikrorør av ID-kort 4, 5 med negativ kontroll (mikrorør 6) indikerer inkompatibilitet av blodet til giveren og mottakeren når det gjelder erytrocyttantigener;
  • et negativt resultat i mikrorør av ID-kort 4, 5, 6 indikerer kompatibiliteten til blodet til giveren og mottakeren når det gjelder erytrocyttantigener;
  • en positiv reaksjon i mikrorørets ID-kort 6 (autokontroll) krever ytterligere bestemmelse av auto- og alloantistoffer i serum (plasma) til mottakeren.
• Begrensninger [forestilling]
  • sikker medisiner kan føre til falsk positiv reaksjon Coombs;
  • med noe patologiske forhold pasienter kan ha en positiv Coombs-reaksjon;
  • bakteriell eller annen forurensning av materialet som brukes kan forårsake et falskt positivt eller falskt negativt resultat;
  • fibrinrester i testprøvene kan binde ikke-agglutinerte celler og etter sentrifugering danne en tynn rosa linje på overflaten av gelen, mens de fleste cellene vil være lokalisert i bunnen av mikrorøret;
  • suspensjoner av røde blodlegemer som er for konsentrerte kan forårsake falske positive reaksjoner.
• Lagrings- og driftsforhold [forestilling]

  DiaMed ID-kort bør oppbevares i romtemperatur (+18-25°C) på et tørt sted under hele holdbarheten.

  Kortene er gyldige i 18 måneder. Holdbarheten til reagensene er 2 år.

  Resultatene av studien på kartet lagres uendret:

  • 48 timer ved romtemperatur;
  • tre uker i kjøleskapet (ved +2-8°C) med den øvre delen av ID-kortet forseglet med teip.

  Det nederste feltet på ID-kortet kan skrelles av eller kuttes av og brukes som et dokument i en sykehistorie eller arkivskap.

  Det er ikke tillatt å bruke ID-kort med tegn på uttørking av gelen, bobler i tykkelsen eller skade på beskyttelsesfolien.

  Prøver og reagenser må bringes til romtemperatur før bruk.

Konklusjon

Geltesten er en enkel, reproduserbar, rask og svært sensitiv metode som tillater umiddelbar påvisning av svake varianter av erytrocyttantigener. Testen vurderes kun makroskopisk. Etter en kort opplæring av personalet som kreves for å riktig utførelse test, minimerer tidsbruken og feilene som oppstår ved bruk av tradisjonelle metoder.

Geltesten lar deg standardisere laboratoriemetoder, for å gi en objektiv vurdering av resultatene av hemagglutinasjonsreaksjonen. Stabiliteten til testresultatene lar deg dobbeltsjekke dataene som er oppnådd, noe som er nødvendig for kontroll. Testresultater kan fotokopieres for arkivering eller for pedagogiske formål i vanskelig diagnostiserte tilfeller. Testen bruker en liten mengde serum eller røde blodceller, noe som er ekstremt viktig for barneklinikker.

Bruk av gelsystemet reduserer risikoen for personinfeksjon selv ved håndtering av potensielt infiserte prøver. Geltesten kan brukes til å teste erytrocyttantigenkompatibilitet før blodtransfusjon. For dette brukes en indirekte antiglobulintest og en en-trinns enzymatisk metode.

Geltesten utføres og evalueres i henhold til reglene ovenfor. Fraværet av erytrocyttvasketrinn ved utføring av en indirekte antiglobulintest muliggjør mer effektiv bruk arbeidstid, og også på grunn av stabiliteten til testresultatene for å kontrollere alle oppnådde resultater.

En kilde: Medisinsk laboratoriediagnostikk, programmer og algoritmer. Ed. prof. Karpishchenko A.I., St. Petersburg, Intermedica, 2001