FS.3.2.0003.15 Salik ng pamumuo ng dugo ng tao VIII. Coagulation factor VIII

Ang antas ng blood coagulation factor VIII mula 0 hanggang 1% ay nagdudulot ng matinding anyo ng sakit, mula 1 hanggang 2% - malubha, mula 2 hanggang 5% - katamtaman, higit sa 5% - magaan na anyo, ngunit may panganib ng malubha at kahit nakamamatay na pagdurugo sa panahon ng mga pinsala at mga interbensyon sa operasyon.

Sa lahat posibleng mga pagpapakita Ang hemophilia sa unang lugar ay mga pagdurugo sa malalaking joints ng mga paa't kamay (hip, tuhod, bukung-bukong, balikat at siko), malalim na subcutaneous, intermuscular at intramuscular hemorrhages, sagana at matagal na pagdurugo sa kaso ng pinsala, lumilitaw ang dugo sa ihi. Ang iba pang mga pagdurugo ay medyo mas madalas, kabilang ang mga malala at mapanganib tulad ng retroperitoneal hemorrhages, hemorrhages sa mga organo ng tiyan, gastrointestinal bleeding, intracranial hemorrhages (stroke).

Sa hemophilia, maaari mong malinaw na masubaybayan ang pag-unlad ng lahat ng mga pagpapakita ng sakit habang lumalaki ang bata, at pagkatapos ay ang may sapat na gulang. Sa kapanganakan, mas marami o hindi gaanong malawak na pagdurugo sa ilalim ng periosteum ng mga buto ng bungo, subcutaneous at intradermal hemorrhages, late na dumudugo mula sa pusod. Minsan ang sakit ay napansin sa unang intramuscular injection, na maaaring magdulot ng malaki, nakamamatay na intermuscular hematoma. Ang pagngingipin ay madalas na sinamahan ng hindi masyadong mabigat na pagdurugo. Sa mga unang taon ng buhay, madalas na may pagdurugo mula sa oral mucosa na nauugnay sa pinsala mula sa iba't ibang matutulis na bagay. Kapag natutong lumakad ang isang bata, ang pagkahulog at mga pasa ay kadalasang may kasamang mabigat na pagdurugo ng ilong at mga pasa sa ulo. Ang mga pagdurugo sa orbit, pati na rin ang postorbital hematomas, ay maaaring humantong sa pagkawala ng paningin. Sa isang bata na nagsimulang gumapang, ang mga pagdurugo sa lugar ng puwit ay karaniwan. Pagkatapos ang mga pagdurugo sa malalaking kasukasuan ng mga paa ay nauuna. Lumilitaw ang mga ito nang mas maaga, mas malala ang hemophilia. Ang mga unang pagdurugo ay nagdudulot ng paulit-ulit na pagdurugo sa parehong mga kasukasuan. Lahat meron nito indibidwal na tao naghihirap mula sa hemophilia, na may partikular na pagtitiyaga at dalas ng pagdurugo, 1-3 joints ang apektado. Ang pinakakaraniwang apektadong mga kasukasuan ay ang mga tuhod, na sinusundan ng mga bukung-bukong, siko at balakang. Ang mga pagdurugo sa maliliit na kasukasuan ng mga kamay at paa (mas mababa sa 1% ng lahat ng mga sugat) at mga kasukasuan sa pagitan ng vertebrae ay medyo bihira. Sa bawat tao, depende sa edad at kalubhaan ng sakit, mula 1-2 hanggang 8-12 joints ay apektado.

Kinakailangang makilala sa pagitan ng talamak na hemarthrosis (pangunahin at paulit-ulit), talamak na hemorrhagic-destructive osteoarthrosis (arthropathy), at pangalawang immune rheumatoid syndrome bilang isang komplikasyon ng pangunahing proseso.

Ang talamak na hemarthrosis ay nagpapakita ng sarili bilang biglaang hitsura(madalas pagkatapos ng isang maliit na pinsala) o isang matalim na pagtaas sa sakit sa kasukasuan. Ang kasukasuan ay madalas na pinalaki, ang balat sa ibabaw nito ay pula at mainit sa pagpindot. Matapos ang unang pagsasalin ng mga bahagi ng dugo, ang sakit ay mabilis (sa loob ng ilang oras) ay humina, at sa sabay-sabay na pag-alis ng dugo mula sa kasukasuan, halos agad itong nawala.

Ang mga yugto ng IV ng joint damage ay nakikilala. Sa yugto I, o maagang yugto, ang dami ng kasukasuan ay maaaring tumaas bilang resulta ng pagdurugo. Sa panahon ng "malamig", ang pag-andar ng kasukasuan ay hindi napinsala, ngunit ang pagsusuri sa X-ray ay nagpapakita ng mga katangian ng palatandaan ng sugat. Sa yugto II, mayroong isang pag-unlad ng proseso, na ipinahayag ng data x-ray. Sa yugto III, ang magkasanib na kasukasuan ay tumataas nang husto sa laki, nagiging deformed, madalas na hindi pantay at bukol sa pagpindot, at ang binibigkas na pag-aaksaya ng mga kalamnan ng apektadong binti ay tinutukoy. Ang kadaliang mapakilos ng mga apektadong kasukasuan ay higit pa o hindi gaanong limitado, na nauugnay kapwa sa pinsala sa mismong kasukasuan at sa mga pagbabago sa mga kalamnan at litid. Sa yugtong ito, ang malubhang osteoporosis ay bubuo, at ang mga bali ay madaling mangyari sa loob ng mga kasukasuan. Sa femur, ang pagkasira ng buto ng buto, na tipikal ng hemophilia, ay nabanggit. Ang patella ay bahagyang nawasak. Ang mga intra-articular cartilage ay nawasak, at ang mga movable fragment ng mga cartilage na ito ay matatagpuan sa joint cavity. Posible ang iba't ibang uri ng subluxations at bone displacements. Sa yugto IV, ang pag-andar ng joint ay halos ganap na nawala. Ang mga bali sa loob ng mga kasukasuan ay posible. Sa edad, ang kalubhaan at pagkalat ng pinsala sa articular apparatus ay umuusad at nagiging mas malala kapag ang mga hematoma ay nangyayari sa paligid ng mga pathologically altered joints.

Ang pangalawang rheumatoid syndrome (Barkagan-Egorova syndrome) ay isang karaniwang anyo ng joint damage sa mga pasyenteng may hemophilia. Ang sindrom na ito ay unang inilarawan noong 1969. Sa maraming mga kaso, ito ay hindi pinapansin ng mga doktor, dahil ito ay nangyayari laban sa background ng umiiral na hemarthrosis at mga mapanirang proseso sa mga joints na katangian ng hemophilia. Ang pangalawang rheumatoid syndrome ay sinamahan ng isang talamak na proseso ng pamamaga (madalas na simetriko) sa maliliit na kasukasuan ng mga kamay at paa, na hindi dati naapektuhan ng mga pagdurugo. Kasunod nito, habang ang proseso ay umuunlad, ang mga joints na ito ay sumasailalim sa tipikal na pagpapapangit. SA malalaking kasukasuan Ang matinding sakit ay lilitaw nang pana-panahon, at ang matinding paninigas ng umaga sa mga kasukasuan ay maaaring mapansin. Anuman ang hitsura ng mga bagong pagdurugo, ang proseso ng articular ay patuloy na umuunlad. Sa sandaling ito, ang isang pagsusuri sa dugo ay nagpapakita ng hitsura o matalim na pagtaas sa mga umiiral na mga palatandaan sa laboratoryo nagpapasiklab na proseso, kabilang ang mga immunological.

Sa karamihan ng mga taong may hemophilia, lumilitaw ang sindrom sa edad na 10-14 na taon. Sa edad na 20, ang dalas nito ay umabot sa 5.9%, at sa pamamagitan ng 30 - hanggang 13% ng lahat ng mga kaso ng sakit. Sa edad, ang paglaganap at kalubhaan ng lahat ng magkasanib na sugat ay patuloy na umuunlad, na humahantong sa kapansanan at pinipilit ang paggamit ng mga saklay, wheelchair at iba pang mga aparato. Ang pag-unlad ng magkasanib na pinsala ay nakasalalay sa dalas ng talamak na pagdurugo, ang pagiging maagap at pagkakumpleto ng kanilang paggamot (ang maagang pagsasalin ng dugo at mga bahagi nito ay napakahalaga), ang kalidad ng pangangalaga sa orthopaedic, tamang aplikasyon physical therapy, physiotherapeutic at balneological effect, pagpili ng propesyon at ilang iba pang mga pangyayari. Sa kasalukuyan, ang lahat ng mga tanong na ito ay lubos na nauugnay, dahil ang pag-asa sa buhay para sa hemophilia ay tumaas nang husto dahil sa tagumpay ng pagwawasto ng paggamot.

Ang malawak at matinding subcutaneous, intermuscular, subfascial at retroperitoneal hematomas ay napakaseryoso at mapanganib. Unti-unting tumataas, maaari silang maabot ang napakalaking sukat, naglalaman ng 0.5 hanggang 3 litro ng dugo o higit pa, humantong sa pag-unlad ng anemia, maging sanhi ng compression at pagkasira ng mga nakapaligid na tisyu at ang mga sisidlan na nagpapakain sa kanila, nekrosis. Halimbawa, ang mga retroperitoneal hematoma ay kadalasang ganap na sumisira sa malalaking lugar pelvic bones(ang diameter ng destruction zone ay maaaring umabot ng 15 cm o higit pa), ang mga hematoma sa mga binti at braso ay sumisira sa mga tubular bone at ang takong ng buto. Ang pagkamatay ng tissue ng buto ay humahantong sa pagbuo ng mga hemorrhages sa ilalim ng periosteum. Ang proseso ng naturang pagkasira ng buto sa mga radiograph ay kadalasang napagkakamalang proseso ng tumor. Kadalasan ang mga kaltsyum na asin ay idineposito sa mga hematoma, na kung minsan ay humahantong sa pagbuo ng mga bagong buto na maaaring magsara ng mga kasukasuan at ganap na i-immobilize ang mga ito.

Maraming hematoma, na naglalagay ng presyon sa mga nerve trunks o mga kalamnan, na nagdudulot ng paralisis, mga pagkagambala sa pandama, at mabilis na progresibong pagkasayang ng kalamnan. Lalo na mapanganib ang malawak na pagdurugo sa malambot na mga tisyu ng submandibular na rehiyon, leeg, pharynx at pharynx. Ang mga pagdurugo na ito ay nagdudulot ng pagpapaliit ng upper respiratory tract at pagka-suffocation.

Seryosong problema sa hemophilia, lumilikha sila ng mabigat at patuloy na pagdurugo ng bato, na sinusunod sa 14-30% ng mga taong may ganitong sakit sa dugo. Ang mga pagdurugo na ito ay maaaring mangyari sa parehong spontaneously at may kaugnayan sa mga pinsala sa rehiyon ng lumbar, concomitant pyelonephritis. Bilang karagdagan, ang pagdurugo ng bato ay maaaring mangyari dahil sa pagtaas ng paglabas ng calcium sa ihi dahil sa pagkasira ng buto sa hemophilia. Ang hitsura o pagtindi ng naturang pagdurugo ay maaaring mapadali sa pamamagitan ng paggamit ng analgesics (acetylsalicylic acid, atbp.), Napakalaking pagsasalin ng dugo at plasma, na humahantong sa karagdagang pinsala sa mga bato. Ang pagdurugo ng bato ay madalas na nauuna sa matagal na paglabas ng mga particle ng dugo sa ihi, na makikita lamang sa pamamagitan ng pagsubok sa laboratoryo.

Ang hitsura ng dugo sa ihi ay madalas na sinamahan ng malubhang mga karamdaman sa pag-ihi, pati na rin ang pagbabago sa dami ng ihi na pinalabas (maaaring may pagtaas o pagbaba sa pang-araw-araw na dami nito), mga pag-atake ng renal colic na sanhi ng pagbuo ng dugo. namumuo daluyan ng ihi. Ang mga phenomena na ito ay lalong matindi at binibigkas sa panahon ng paggamot, kapag ang normal na estado ng dugo ay pansamantalang naibalik. Ang pagtigil ng paglabas ng dugo sa ihi ay madalas na nauuna sa renal colic, at madalas na isang pansamantalang kawalan ng paglabas ng ihi na may hitsura ng mga palatandaan ng pagkalasing ng katawan na may nakakalason na mga produktong metabolic.

Pana-panahong umuulit ang pagdurugo sa bato, na sa paglipas ng mga taon ay maaaring humantong sa malubhang dystrophic-mapanirang pagbabago sa organ na ito, pangalawang impeksiyon at kamatayan mula sa pag-unlad. pagkabigo sa bato.

Gastrointestinal dumudugo sa hemophilia maaari silang maging spontaneous, ngunit mas madalas ang mga ito ay sanhi ng pagkuha ng acetylsalicylic acid (aspirin), butadione at iba pang mga gamot. Ang pangalawang pinagmumulan ng pagdurugo ay halata o nakatagong mga ulser ng tiyan o duodenum, gayundin erosive gastritis ng iba't ibang pinagmulan. Gayunpaman, ang nagkakalat na pagdurugo ng capillary ay minsan ay sinusunod nang walang anumang mapanirang pagbabago sa mauhog lamad. Ang mga pagdurugo na ito ay tinatawag na diapedetic. Kapag lumitaw ang mga ito, ang dingding ng bituka ay puspos ng dugo sa isang malaking lugar, na mabilis na humahantong sa pagkawala ng malay bilang isang resulta ng malubhang anemia, nanghihina na may kaugnayan sa matalim na pagbaba presyon ng dugo at kamatayan. Ang mekanismo ng pag-unlad ng naturang pagdurugo ay nananatiling hindi maliwanag hanggang sa araw na ito.

Ang mga pagdurugo sa mga organo ng tiyan ay ginagaya ang iba't ibang talamak mga sakit sa operasyon - talamak na apendisitis, sagabal sa bituka at iba pa.

Pagdurugo sa ulo at spinal cord at ang kanilang mga lamad sa hemophilia ay halos palaging nauugnay alinman sa pinsala o sa paggamit ng mga gamot na pumipinsala sa paggana ng mga platelet, na direktang kasangkot sa pamumuo ng dugo. Sa pagitan ng sandali ng pinsala at pag-unlad ng pagdurugo, maaaring mayroong isang magaan na agwat na tumatagal mula 1 hanggang 2 oras hanggang isang araw.

Katangian na tampok Ang hemophilia ay matagal na pagdurugo sa panahon ng mga pinsala at operasyon. Lacerations mas mapanganib kaysa sa mga linear break. Ang pagdurugo ay madalas na hindi nangyayari kaagad pagkatapos ng pinsala, ngunit pagkatapos ng 1-5 na oras.

Ang pag-alis ng tonsil para sa hemophilia ay mas mapanganib kaysa sa operasyon sa tiyan mga interbensyon sa kirurhiko.

Ang pag-alis ng mga ngipin, lalo na ang mga molar, ay madalas na sinamahan ng maraming araw ng pagdurugo hindi lamang mula sa mga socket ng ngipin, kundi pati na rin mula sa mga hematoma na nabuo sa site ng tissue infiltration na may novocaine, na humahantong sa pagbuo ng anemia. Ang mga hematoma na ito ay nagdudulot ng pagkasira ng panga. Sa hemophilia, ang mga ngipin ay tinanggal dahil sa pagkilos ng mga antihemophilic na gamot sa ilalim pangkalahatang kawalan ng pakiramdam. Mas mainam na tanggalin ang ilang mga ngipin nang sabay-sabay.

Ang ilang mga komplikasyon sa hemophilia ay sanhi ng pagkawala ng dugo, compression at pagkasira ng tissue sa pamamagitan ng hematomas, at impeksyon ng hematomas. Ang isang malaking grupo ng mga komplikasyon ay nauugnay din sa mga sakit sa immune. Ang pinaka-mapanganib sa kanila ay ang paglitaw sa dugo ng malalaking dami ng immune inhibitors ("blockers") ng blood coagulation factor VIII (o IX), na binabago ang hemophilia sa tinatawag na inhibitory form, kung saan ang pangunahing paraan ng paggamot ay transfusion therapy (pagsasalin ng dugo o mga bahagi nito) - halos ganap na nawawala ang bisa nito. Bukod dito, ang paulit-ulit na pangangasiwa ng mga antihemophilic na gamot ay kadalasang nagiging sanhi ng mabilis na pagtaas ng dami ng inhibitor sa dugo, bilang isang resulta kung saan ang mga pagsasalin ng dugo at mga bahagi nito, na sa simula ay nagbigay ng ilang epekto, sa lalong madaling panahon ay nagiging walang silbi. Ang dalas ng pagbabawal na anyo ng hemophilia, ayon sa data iba't ibang mga may-akda, mula 1 hanggang 20%, mas madalas mula 5 hanggang 15%. Sa mga anyo ng pagbabawal, ang paggana ng platelet ay kapansin-pansing may kapansanan, ang mga pagdurugo sa mga kasukasuan at paglabas ng dugo sa ihi ay nagiging mas madalas, at ang pinsala sa magkasanib na bahagi ay mas mataas.

Ang pangunahing paraan ng paggamot at pag-iwas sa pagdurugo at pagdurugo ng anumang lokasyon at anumang pinagmulan sa hemophilia ay ang intravenous administration ng sapat na dosis ng mga produkto ng dugo na naglalaman ng factor VIII. Ang Factor VIII ay variable at halos hindi napanatili sa de-latang dugo, natural at pinatuyong plasma. Para sa kapalit na paggamot, ang mga direktang pagsasalin ng dugo mula sa isang donor at mga produkto ng dugo na may napreserbang coagulation factor VIII ay angkop. Ang mga direktang pagsasalin ng dugo mula sa isang donor ay ginagamit lamang kapag ang doktor ay walang anumang iba pang mga antihemophilic na gamot. Isang malaking pagkakamali ang pagsasalin ng dugo mula sa ina, dahil siya ay isang transmiter ng sakit, at ang antas ng factor VIII sa kanyang dugo ay nabawasan nang husto. Sa pananaw ng maikling panahon Ang buhay ng factor VIII sa dugo ng tatanggap (mga 6-8 na oras), pagsasalin ng dugo, pati na rin ang mga pagsasalin ng antihemophilic plasma, ay dapat na ulitin nang hindi bababa sa 3 beses sa isang araw. Ang ganitong mga pagsasalin ng dugo at plasma ay hindi angkop para sa paghinto ng napakalaking pagdurugo at mapagkakatiwalaang sumasaklaw sa iba't ibang mga interbensyon sa operasyon.

Ang pantay na dami ng antihemophilic plasma ay humigit-kumulang 3-4 beses na mas epektibo kaysa sa sariwang de-latang dugo. Ang pang-araw-araw na dosis na 30-50 ml/kg body weight ng antihemophilic plasma ay nagbibigay-daan sa pagpapanatili ng 10-15% na antas ng factor VIII sa loob ng ilang panahon. Ang pangunahing panganib ang ganitong paggamot ay isang labis na karga ng sirkulasyon ng dugo na may dami, na maaaring humantong sa pag-unlad pulmonary edema. Ang paggamit ng antihemophilic plasma sa concentrated form ay hindi nagbabago sa sitwasyon, dahil ang mataas na konsentrasyon ng injected protein ay nagiging sanhi ng masinsinang paggalaw ng likido mula sa mga tisyu papunta sa dugo, bilang isang resulta kung saan ang dami ng nagpapalipat-lipat na dugo ay tumataas sa parehong paraan tulad ng na may pagbubuhos ng plasma sa normal na pagbabanto. Ang concentrated dry antihemophilic plasma ay may kalamangan lamang na naglalaman ito ng mas puro factor VIII ng blood clotting, at sa isang maliit na volume ay mas mabilis itong ipinapasok sa bloodstream. Ang dry antihemophilic plasma ay diluted na may distilled water bago gamitin. Ang paggamot na may antihemophilic plasma ay sapat na upang ihinto ang karamihan sa mga talamak na pagdurugo sa mga kasukasuan (maliban sa pinakamalubhang), pati na rin para sa pag-iwas at paggamot ng menor de edad na pagdurugo.

Ang pinaka maaasahan at epektibo para sa hemophilia ay ang blood clotting factor VIII concentrates. Ang pinaka-accessible sa kanila ay cryoprecipitate. Ito ay isang concentrate ng protina na nakahiwalay sa plasma sa pamamagitan ng paglamig (cryoprecipitation) na naglalaman ng sapat na dami ng mga clotting factor ngunit maliit na protina. Mababang nilalaman pinahihintulutan ng mga protina ang gamot na maibigay sa daluyan ng dugo sa isang napaka malalaking dami at dagdagan ang konsentrasyon ng factor VIII sa 100% o higit pa, nang walang takot sa circulatory overload at pulmonary edema. Ang cryoprecipitate ay dapat na nakaimbak sa -20 °C, na nagpapahirap sa transportasyon nito. Kapag natunaw, mabilis na nawawala ang aktibidad ng gamot. Ang dry cryoprecipitate at modernong concentrates ng blood coagulation factor VIII ay walang mga disadvantages na ito. Maaari silang maiimbak sa isang regular na refrigerator. Ang labis na pangangasiwa ng cryoprecipitate ay hindi kanais-nais, dahil lumilikha ito ng isang mataas na konsentrasyon ng mga kadahilanan ng coagulation sa dugo, bilang isang resulta kung saan ang microcirculation sa mga organo ay nagambala at may panganib ng mga clots ng dugo at ang pagbuo ng disseminated intravascular coagulation syndrome.

Ang lahat ng mga antihemophilic na gamot ay ibinibigay sa intravenously lamang sa isang stream, sa pinaka-puro na anyo na posible at sa lalong madaling panahon pagkatapos ng mga ito ay muling mapangalagaan nang walang paghahalo sa iba pang mga solusyon para sa intravenous administration. Isa sa mga pangunahing dahilan ng pagkabigo kapalit na therapy ay binubuo ng drip administration ng mga produkto ng dugo, na hindi humantong sa isang pagtaas sa antas ng coagulation factor VIII sa plasma. Hanggang sa tuluyang tumigil ang pagdurugo, hindi dapat gamitin ang anumang mga pamalit sa dugo at mga produkto ng dugo na hindi naglalaman ng mga antihemophilic factor, dahil humahantong ito sa pagbabanto ng factor VIII at pagbaba sa konsentrasyon nito sa serum.

Sa kaso ng talamak na pagdurugo sa mga kasukasuan, pansamantalang (hindi hihigit sa 3-5 araw) immobilization (immobilization) ng apektadong paa sa isang physiological na posisyon, pag-init ng apektadong joint (compresses), ngunit hindi paglamig ay kinakailangan. Maagang pagtanggal ang dugo na dumadaloy sa kasukasuan ay hindi lamang agad nag-aalis ng sakit, pinipigilan ang karagdagang pamumuo ng dugo sa kasukasuan, ngunit binabawasan din ang banta ng pag-unlad at mabilis na pag-unlad ng osteoarthritis. Upang maiwasan at gamutin ang mga pangalawang nagpapasiklab na pagbabago pagkatapos ng pag-alis ng dugo, 40-60 mg ng hydrocortisone ay iniksyon sa joint cavity. Ang pagpapanatili ng transfusion therapy, na isinasagawa sa unang 3-6 na araw, ay pumipigil sa karagdagang pagdurugo at nagbibigay-daan sa iyo upang simulan ang mga ehersisyo sa pisikal na therapy nang maaga, na nag-aambag sa isang mas mabilis at mas kumpletong pagpapanumbalik ng pag-andar ng apektadong paa at pinipigilan ang pagkasayang ng kalamnan. Mas mainam na bumuo ng mga paggalaw sa apektadong joint sa mga yugto. Sa unang 5-7 araw pagkatapos alisin ang bendahe, ang mga aktibong paggalaw ay isinasagawa kapwa sa apektadong kasukasuan at sa iba pang mga kasukasuan ng paa, unti-unting pinapataas ang dalas at tagal ng mga ehersisyo. Mula sa ika-6-9 na araw ay lumipat sila sa mga pagsasanay na "pagkarga", gamit ang mga ergometer ng bisikleta, mga pedal gate para sa mga braso, at nababanat na traksyon. Mula ika-11 hanggang ika-13 araw, upang maalis ang natitirang paninigas at mga paghihigpit sa maximum flexion o extension, ang mga passive load exercise ay isinasagawa nang may pag-iingat. Kasabay nito, mula sa ika-5-7 araw, ang physiotherapeutic na paggamot ay inireseta - hydrocortisone electrophoresis, anodic galvanization.

Para sa mga pagdurugo sa malambot na mga tisyu, ang paggamot na may mga antihemophilic na gamot ay mas masinsinang kaysa sa mga pagdurugo sa mga kasukasuan. Kung ang anemia ay bubuo, ang mga intravenous infusions ng mga pulang selula ng dugo ay karagdagang inireseta. Kung may mga palatandaan ng impeksyon sa hematoma, ang mga antibiotic na malawak na spectrum ay inireseta kaagad. Anuman intramuscular injection sa hemophilia sila ay kontraindikado, dahil maaari silang maging sanhi ng malawak na hematoma at pseudotumor. Ang penicillin at ang mga semisynthetic analogue nito ay hindi rin kanais-nais, dahil sa malalaking dosis ay pinapataas nila ang pagdurugo.

Ang maaga at masinsinang paggamot na may mga antihemophilic na gamot ay nag-aambag sa mabilis na reverse development ng hematomas. Ang mga sumunod na hematoma ay tinanggal, kung maaari, sa pamamagitan ng operasyon kasama ang kapsula.

Ang panlabas na pagdurugo mula sa napinsalang balat, pagdurugo ng ilong at pagdurugo mula sa mga sugat sa oral cavity ay hinihinto kapwa sa pamamagitan ng transfusion therapy at ng mga lokal na impluwensya - paggagamot sa lugar ng pagdurugo ng mga gamot na nagtataguyod ng pamumuo ng dugo. Bilang karagdagan, ang mga gamot na ito ay maaari ding inumin nang pasalita. Ang mga pressure bandage o tahi ay inilalapat sa mga sugat. Ang pagdurugo pagkatapos ng pagbunot ng ngipin ay hihinto sa parehong paraan. Kapag tinatanggal ngumunguya ng ngipin Ang bahagyang mas masinsinang transfusion therapy ay isinasagawa, at ang sabay-sabay na pagtanggal ng ilang ngipin (3-5 o higit pa) ay nangangailangan ng pangangasiwa ng mga antihemophilic na gamot sa unang 3 araw.

Sa kaso ng pagdurugo ng ilong, dapat na iwasan ang masikip na tamponade, dahil pagkatapos alisin ang mga tampon, ang pagdurugo ay madalas na nagpapatuloy nang mas malakas. Ang mabilis na paghinto ng pagdurugo ng ilong ay kadalasang tinitiyak ng antihemophilic plasma at antihemophilic na gamot at sabay-sabay na patubig ng nasal mucosa na may mga solusyon na nagtataguyod ng pamumuo ng dugo.

Ang pagdurugo ng bato ay nagdudulot ng malubhang panganib, kung saan ang mga intravenous infusions ng antihemophilic plasma at cryoprecipitate ay hindi epektibo.

Ang pagdurugo ng gastrointestinal ay huminto sa malalaking dosis ng mga clotting factor concentrates. Dapat tandaan na ang pagdurugo ng o ukol sa sikmura ay kadalasang pinupukaw ng pag-inom ng aspirin, brufen, o indomethacin na may kaugnayan sa pananakit ng kasukasuan, sakit ng ngipin o sakit ng ulo. Kahit na sa mga pasyente na may hemophilia solong dosis Ang aspirin ay maaaring maging sanhi ng pagdurugo ng tiyan.

Sa pag-iwas at paggamot ng talamak na osteoarthritis at iba pang mga sugat ng musculoskeletal system, kinakailangang isama iba't-ibang paraan pagprotekta sa mga kasukasuan at pag-iwas sa mga pinsala sa paa. Upang gawin ito, ang mga kalasag ng bula ay natahi sa damit sa paligid ng mga tuhod, bukung-bukong at kasukasuan ng siko, iwasan ang mga sports na may kasamang pagtalon, pagkahulog at pasa (kabilang ang pagbibisikleta at pagsakay sa motorsiklo). Mahalagang magkaroon ng pinakamaagang posible buong paggamot talamak na pagdurugo sa mga kasukasuan at kalamnan, matinding buong taon pisikal na therapy. Para sa layuning ito, mayroong mga espesyal na complex ng atraumatic na pagsasanay sa tubig, sa malambot na mga banig at mga aparatong naglo-load - mga ergometer ng bisikleta, mga manu-manong gate. Dapat magsimula ang mga klase sa preschool o junior high. edad ng paaralan, ibig sabihin, bago umunlad ang mga malubhang karamdaman ng musculoskeletal system. Kumplikadong therapy pupunan ng physiotherapy (currents mataas na dalas, electrophoresis ng glucocorticosteroids) at mga pamamaraan ng paggamot sa balneological, pangunahin ang mud therapy, brine at radon bath. Para sa madalas at paulit-ulit na pagdurugo sa parehong mga kasukasuan, isinasagawa ang radiotherapy at operasyon.

Sa pag-iwas sa pagdurugo, mahalagang bawasan ang panganib ng mga pinsala at hiwa mula sa maagang pagkabata. Ang mga laruang madaling masira (kabilang ang metal at plastik), gayundin ang hindi matatag at mabibigat na bagay, ay hindi kasama sa pang-araw-araw na paggamit. Ang mga muwebles ay dapat na bilugan ang mga gilid, ang mga nakausli na gilid ay dapat na balot ng cotton wool o foam rubber, at ang sahig ay dapat na sakop ng isang pile carpet. Mas mainam para sa mga pasyente na makipag-usap at makipaglaro sa mga babae kaysa sa mga lalaki. Mahalaga para sa pasyente tamang pagpili propesyon at lugar ng trabaho.

Ang pag-iwas sa hemophilia ay hindi pa nabubuo. Pagtukoy sa kasarian ng hindi pa isinisilang na bata sa pamamagitan ng genetic na pananaliksik Ang mga cell na nakuha mula sa amniotic fluid ay nagbibigay-daan para sa napapanahong pagwawakas ng pagbubuntis, ngunit hindi nagpapahiwatig kung ang fetus ay isang carrier ng hemophilia gene. Ang pagbubuntis ay pinananatili kung ang fetus ay lalaki, dahil ang lahat ng mga anak na lalaki ng mga pasyente ay ipinanganak na malusog. Ang pagbubuntis ay tinapos kung ang fetus ay babae, dahil ang lahat ng mga anak na babae ng mga hemophiliac ay mga carrier ng sakit.

Sa mga kababaihang nagdadala ng hemophilia, na may 50% na posibilidad na manganak ng isang maysakit na bata (kung ang fetus ay lalaki), o kung sino ang mga transmiter ng hemophilia (kung ang fetus ay babae), ang kapanganakan ng mga batang babae lamang ay naglilipat ng panganib na magkaroon ng mga pasyente ng hemophilia sa pamilya mula sa unang henerasyon hanggang sa pangalawa, kasabay ng pagtaas ng kabuuang bilang ng mga nagpapadala ng sakit.

Mababang hemoglobin. Cholelithiasis. Walang pag-atake Walang tamang iniresetang paggamot Humihingi talaga ako ng tulong. Mayroon akong cholelithiasis. Maliit na pebbles at hindi marami. Mababaw na kabag. Hindi pagsasara ng cardia at apdo reflux. Dati meron ding Helicobacter ++. Ginamot ko siya. Natatakot akong tanggalin ang apdo dahil mananatili ang mga problema sa reflux at maaagnas ang esophagus. Lately naging matamlay ako. Igsi sa paghinga at tachycardia. Ang presyon ng dugo ay 100/60 at ang pulso ay 95. Malutong na buhok at pako. Nagpa-blood test ako. Hemoglobin at serum na bakal at ilang iba pang mga tagapagpahiwatig ng bakal ay mas mababa sa pamantayan. Kumuha ako ng omez. Wala pa kaming konsultasyon sa isang hematologist. Malaki ang recording. Gusto ko talagang maunawaan kung ano ang gagawin at kung paano gamutin ang tama. Tulungan mo ako please. Wala akong lakas para malagay sa ganitong estado. Ngayon hindi ko alam kung anong mga eksaminasyon ang sasailalim sa at paggamot, maaaring makapinsala ang isa sa isa pa. Ayon sa ultrasound ng cavity ng tiyan, normal ang lahat maliban sa bile duct. Ang mga tagapagpahiwatig ng asat at alat ay tila normal, bagama't maaari silang tumaas. Paano ako magkakaroon ng isang bagay na sisimulan?

pangalang Ruso

Latin na pangalan ng mga sangkap: Blood coagulation factor VIII + von Willebrand factor

Pharmacological group of substances Blood coagulation factor VIII + von Willebrand factor

Karaniwang klinikal at parmasyutiko na artikulo 1

Katangian. Salik na kahusayan coagulation VIII ay tinutukoy batay sa International Standard for concentrate (FVIII:C), ang pagiging epektibo ng von Willebrand factor ay tinutukoy batay sa pagtukoy ng pagiging epektibo ng ristocetin cofactor (VW:RK), batay sa International Standard para sa concentrate alinsunod sa kasama ang European Pharmacopoeia. Ang partikular na aktibidad ng gamot ay hindi bababa sa 60 IU FVIII:C/mg at hindi bababa sa 53 IU VWF:PK/mg ng kabuuang protina. Ang bilang ng mga yunit ng coagulation factor VIII ay ipinahayag sa IU, na naaayon sa mga pamantayan ng WHO para sa mga gamot na ito. Ang aktibidad ay ipinahayag alinman bilang isang porsyento (na may kaugnayan sa mga normal na antas ng plasma factor) o sa International Units (na may kaugnayan sa International Standard para sa plasma coagulation factor VIII). Ang 1 IU ng coagulation factor VIII ay katumbas ng halaga ng coagulation factor VIII sa 1 ml ng normal na plasma ng tao.

Pagkilos sa parmasyutiko. Ang blood coagulation factor VIII ay nagbubuklod sa von Willebrand factor; ang activated factor VIII ay isang cofactor para sa activated factor IX, na nagpapabilis sa paglipat ng coagulation factor X sa aktibong anyo; Ang activated factor X ay nagpapagana ng paglipat ng prothrombin sa thrombin, ang thrombin naman, ay nagpapagana ng paglipat ng fibrinogen sa fibrin, na sinusundan ng pagbuo ng isang namuong dugo. Ang gamot ay naglalaman ng von Willebrand factor, na isang normal na bahagi ng plasma ng tao at kumikilos sa parehong paraan tulad ng endogenous, at itinatama ang mga hemostatic disorder sa mga pasyente na may sakit na von Willebrand: nagpapanumbalik ng platelet adhesion sa vascular subendothelium sa lugar ng pinsala sa daluyan (nakakabit sa vascular subendothelium at sa platelet membrane, nagbibigay ng pangunahing hemostasis, binabawasan ang oras ng coagulation, habang ang epekto ay lilitaw kaagad at depende sa antas ng polymerization ng protina); normalizes concomitant kakulangan ng factor VIII (kapag pinangangasiwaan ng intravenously, ito ay nagbubuklod sa endogenous factor VIII at nagpapatatag nito, nagpapabagal sa mabilis na pagkasira nito), ibinabalik ang antas ng factor VIII:C sa normal. Ang kapalit na therapy sa gamot sa mga pasyente na may hemophilia A ay nagpapataas ng nilalaman ng blood coagulation factor VIII, na nagbibigay ng pansamantalang pagwawasto ng factor deficiency at binabawasan ang panganib ng pagdurugo. Bilang karagdagan, ang kadahilanan ng von Willebrand ay nagtataguyod ng pagdirikit ng platelet sa lugar ng pinsala sa vascular at gumaganap ng isang papel. malaki ang bahagi sa panahon ng pagsasama-sama ng platelet.

Pharmacokinetics. Uri 3 ng sakit na Von Willebrand: ang average na paggaling ng VWF:RK at VWF:Ag ay 68-99%, ayon sa pagkakabanggit, na tumutugma sa isang average na pagtaas sa mga konsentrasyon ng plasma na 1.5 at 2.1% bawat pinalitan na IU/kg na timbang ng katawan. T1/2 FV:RK - 17.5 oras, clearance - 3.9 ml/h/kg. Ang Hemophilia A: factor VIII:C na konsentrasyon ay 80-120% ng inaasahan. T1/2 VIII:C - 14.8 na oras, na tumutugma sa biological T1/2, clearance - 2.9 ml/h/kg.

Mga indikasyon. Paggamot at pag-iwas sa pagdurugo sa mga pasyenteng may sakit na von Willebrand (na may quantitative at/o qualitative deficiency ng von Willebrand factor), congenital hemophilia A o nakuha na kakulangan ng coagulation factor VIII.

Contraindications. Ang pagiging hypersensitive, edad hanggang 6 na taon (ang pagiging epektibo at kaligtasan ay hindi naitatag).

Maingat. Pagbubuntis, panahon ng paggagatas.

Dosing. IV, pagkatapos matunaw sa ibinigay na solvent; ang resultang solusyon ay naglalaman ng 90 IU ng blood coagulation factor VIII at 80 IU ng von Willebrand factor sa 1 ml.

Von Willebrand's disease: depende sa dosis at tagal ng replacement therapy klinikal na kondisyon pasyente, uri at kalubhaan ng pagdurugo, mga antas ng FVIII:C at VWF:RK.

Ang ratio sa pagitan ng FVIII:S at VWF:RK ay 1:1, sa average na 1 IU/kg. Ang FVIII:S at VWF:RK ay nagpapataas ng mga antas ng plasma ng 1.5-2% ng normal na aktibidad ng kaukulang protina. Karaniwang dosis ng gamot na 20-50 IU/kg, na nagpapataas ng antas ng FVIII:C at VWF:RK hanggang 30-100%. Ang paunang dosis ay maaaring tumaas sa 50-80 IU/kg, lalo na sa mga pasyente na may von Willebrand disease type 3 na may gastrointestinal bleeding.

Upang maiwasan ang pagdurugo, kinakailangan upang simulan ang pagbibigay ng gamot 30 minuto bago magsimula ang operasyon. Sa kaso ng nakaplanong operasyon, ang gamot ay ibinibigay 12-24 na oras at 1 oras bago magsimula ang operasyon, na may inaasahang konsentrasyon ng VWF:RK 60 IU/dL o higit pa (60% o higit pa) at FVIII:C 50 IU/ dL o higit pa (50% o higit pa). Ang dosis ay ibinibigay tuwing 12-24 na oras. Ang pangmatagalang paggamot ay maaaring magdulot ng labis na pagtaas sa mga antas ng FVIII:C. Pagkatapos ng 24-48 na oras ng paggamot, upang maiwasan ang labis na pagtaas sa mga antas ng FVIII:C, kinakailangan na bawasan ang dosis o dagdagan ang agwat sa pagitan ng mga dosis.

Hemophilia A: 1 IU ng coagulation factor VIII:C/kg ay nagpapataas ng factor sa plasma ng 1.5-2% ng normal na nilalaman. Pagpapasiya ng kinakailangang dosis: timbang ng katawan (kg) × nais na pagtaas sa antas ng coagulation factor VIII (%) × 0.5 IU/kg.

Para sa mga kaganapan sa pagdurugo na inilalarawan sa ibaba, ang antas ng aktibidad ng FVIII:C ay hindi dapat bumaba sa baseline na antas ng plasma (% ng mga normal na antas) sa naaangkop na yugto ng panahon.

Katamtamang pagdurugo (maagang hemarthrosis, intramuscular bleeding, nosebleeds, oral bleeding at iba pang menor de edad na pinsala) - ang kinakailangang konsentrasyon ng coagulation factor VIII ay 20-40 IU/dl (20-40%), ang pangangasiwa ay paulit-ulit tuwing 12-24 na oras, para sa hindi bababa sa 1 araw, hanggang sa humupa ang sakit o ang pinagmulan ng pagdurugo ay gumaling.

Mas malawak na pagdurugo (imm bleeding o hematoma) - ang kinakailangang konsentrasyon ng coagulation factor VIII ay 30-60 IU/dl (30-60%) tuwing 12-24 na oras sa loob ng 3-4 na araw, hanggang sa humupa ang sakit at ang kakayahang magtrabaho ay naibalik.

Pagdurugo na nagbabanta sa buhay (intracranial, intraperitoneal, sa leeg, mapurol na trauma, nang walang nakikitang pinagmumulan ng pagdurugo) - ang kinakailangang konsentrasyon ng coagulation factor VIII ay 60-100 IU/dl (60-100%) bawat 8-24 na oras, hanggang sa ganap na mawala ang banta.

Minor surgical interventions (kabilang ang tooth extraction) - ang kinakailangang konsentrasyon ng coagulation factor VIII ay 30-60 IU/dl (30-60%) tuwing 24 na oras, hindi bababa sa 1 araw, hanggang sa gumaling.

Mga pangunahing pamamaraan ng operasyon - ang kinakailangang antas ng factor VIII (bago at pagkatapos ng operasyon) ay 80-100 IU/dL (80-100%) bawat 8-24 na oras hanggang sa sapat na paggaling ng sugat, pagkatapos ay hindi bababa sa 7 araw upang mapanatili ang aktibidad ng factor VIII sa antas ng 30-60%.

Para sa pangmatagalang pag-iwas sa pagdurugo sa mga pasyente na may malubhang hemophilia A, kinakailangan na magbigay ng 20-40 IU/kg tuwing 2-3 araw. Sa ilang mga kaso, lalo na sa mga batang pasyente, maaaring kailanganin na bawasan ang pagitan ng mga dosis o dagdagan ang dosis.

Kung walang epekto mula sa isang sapat na dosis o kung imposibleng makamit ang nais na konsentrasyon ng coagulation factor VIII sa plasma na may sapat na pangangasiwa, kinakailangan na magsagawa ng Bethesda test para sa pagkakaroon ng mga inhibitory antibodies sa coagulation factor VIII. Sa mga pasyenteng may mataas na lebel mga inhibitor, ang paggamot na may coagulation factor VIII ay maaaring hindi epektibo at nangangailangan ng iba pang mga therapeutic measure.

Side effect. Mga reaksiyong alerdyi(urticaria, pantal sa balat, panginginig, pakiramdam ng paninikip sa dibdib, igsi ng paghinga, pagbaba ng presyon ng dugo, bihira - anaphylactic shock), nasusunog sa lugar ng iniksyon, hyperthermia, "hot flashes" sakit ng ulo, antok, kawalang-interes, pagduduwal, pagsusuka, pagkabalisa. Pag-unlad ng mga inhibitory antibodies sa von Willebrand factor - sa von Willebrand disease, sa hemophilia A - sa blood coagulation factor VIII (karaniwan ay IgG), na humahantong sa isang hindi sapat na klinikal na tugon sa gamot; Ang mga inhibitory antibodies ay maaaring maging sanhi ng pag-ulan at mag-ambag sa pagbuo ng mga reaksyon ng anaphylactic.

Sa mga pasyente na tumatanggap ng von Willebrand factor na paghahanda na naglalaman ng coagulation factor VIII, ang matagal na pagtaas sa plasma level ng factor VIII:C ay nagpapataas ng panganib ng thrombosis (kailangan ang pagsubaybay sa mga pasyenteng nasa panganib).

Sa mga pasyente na may hemophilia A, ang mga inhibitory antibodies ay maaaring bumuo, at isang hindi sapat na klinikal na tugon sa gamot ay nabanggit.

Pakikipag-ugnayan. Hindi ito dapat ihalo sa iba pang mga gamot o ibibigay nang sabay-sabay gamit ang parehong set ng pagbubuhos.

mga espesyal na tagubilin. Kapag nagbibigay ng gamot, ang kondisyon ng pasyente ay dapat na maingat na subaybayan. Ang mga unang palatandaan ng hypersensitivity reaction ay kinabibilangan ng urticaria, isang pangkalahatang pantal, paninikip ng dibdib, igsi ng paghinga, pagbaba ng presyon ng dugo, at anaphylaxis. Kung mangyari ang mga sintomas na ito, dapat mong ihinto kaagad ang pagbibigay ng gamot. Kung ang mga reaksyon ng anaphylactic ay nabuo, ang mga pasyente ay dapat suriin para sa pagkakaroon ng mga inhibitory antibodies.

Kapag gumagamit ng mga gamot na nakuha mula sa dugo ng tao o plasma, ang posibilidad ng paghahatid ng mga nakakahawang ahente ay hindi maaaring ganap na ibukod, samakatuwid ito ay inirerekomenda pang-iwas na pagbabakuna laban sa hepatitis A at B.

Ang pangmatagalang paggamot sa mga pasyente na may sakit na von Willebrand na may gamot na naglalaman ng von Willebrand factor at coagulation factor VIII ay maaaring magdulot ng labis na pagtaas sa coagulation factor VIII:C, na nagpapataas ng panganib ng trombosis (kailangan ang pagsubaybay sa coagulation factor VIII:C na konsentrasyon. ).

Ang panganib na magkaroon ng mga inhibitory antibodies sa hemophilia A ay umaabot sa pinakamataas sa unang 20 araw pagkatapos ng reseta, mas madalas pagkatapos ng unang 100 araw ng paggamit ng gamot. Ang posibilidad ng paggamit ng gamot sa pagkakaroon ng mga inhibitory antibodies sa coagulation factor VIII ay hindi naitatag.

Upang maibigay ang gamot, dapat mong gamitin lamang ang kit para sa dissolution at intravenous administration na ibinigay sa kit. Maaaring i-adsorb ng ibang mga device ang mga kadahilanan ng pamumuo ng dugo sa kanilang panloob na ibabaw, na humahantong sa pagbaba sa bisa ng paggamot.

Impormasyon sa Pag-aaral

Mga espesyal na tagubilin: Huwag magsagawa ng pananaliksik habang talamak na mga panahon mga sakit at habang umiinom ng mga anticoagulant na gamot (hindi bababa sa 30 araw ay dapat lumipas pagkatapos ng paghinto). Ang biomaterial ay dapat isumite para sa pananaliksik sa isang walang laman na tiyan. Hindi bababa sa 8 oras ang dapat lumipas sa pagitan ng huling pagkain at pagkolekta ng dugo.

PANGKALAHATANG TUNTUNIN PARA SA PAGHAHANDA PARA SA PANANALIKSIK:

1. Para sa karamihan ng mga pag-aaral, inirerekumenda na mag-donate ng dugo sa umaga, sa pagitan ng 8 at 11 o'clock, nang walang laman ang tiyan (hindi bababa sa 8 oras ang dapat lumipas sa pagitan ng huling pagkain at koleksyon ng dugo, ang tubig ay maaaring inumin sa normal na mode), sa bisperas ng pag-aaral, magkaroon ng magaan na hapunan na may limitadong paggamit ng matatabang pagkain. Para sa mga pagsusuri para sa mga impeksyon at emerhensiyang pag-aaral, katanggap-tanggap na mag-donate ng dugo 4-6 na oras pagkatapos ng huling pagkain.

2. PANSIN! Mga panuntunan sa espesyal na paghahanda para sa isang bilang ng mga pagsusuri: mahigpit na walang laman ang tiyan, pagkatapos ng 12-14 na oras na pag-aayuno, dapat kang mag-donate ng dugo para sa gastrin-17, lipid profile (kabuuang kolesterol, HDL cholesterol, LDL cholesterol, VLDL cholesterol, triglycerides, lipoprotein (a), apolipo-protene A1, apolipoprotein B); Ang glucose tolerance test ay isinasagawa sa umaga sa isang walang laman na tiyan pagkatapos ng 12-16 na oras ng pag-aayuno.

3. Sa bisperas ng pag-aaral (sa loob ng 24 na oras), iwasan ang alak, matinding pisikal na aktibidad, at pag-inom ng mga gamot (sa konsultasyon sa iyong doktor).

4. 1-2 oras bago mag-donate ng dugo, iwasan ang paninigarilyo, huwag uminom ng juice, tsaa, kape, maaari kang uminom ng tubig. Ibukod pisikal na stress(tumatakbo, mabilis na umakyat sa hagdan), emosyonal na kaguluhan. Inirerekomenda na magpahinga at huminahon 15 minuto bago mag-donate ng dugo.

5. Hindi ka dapat mag-donate ng dugo para sa laboratory testing kaagad pagkatapos ng physiotherapeutic procedures, instrumental examination, X-ray at pananaliksik sa ultrasound, masahe at iba pang mga medikal na pamamaraan.

6. Kapag sinusubaybayan ang mga parameter ng laboratoryo sa paglipas ng panahon, inirerekomenda na magsagawa ng paulit-ulit na pagsusuri sa ilalim ng parehong mga kondisyon - sa parehong laboratoryo, mag-donate ng dugo sa parehong oras ng araw, atbp.

7. Ang dugo para sa pagsasaliksik ay dapat ibigay bago simulan ang pag-inom ng mga gamot o hindi mas maaga kaysa sa 10–14 na araw pagkatapos na ihinto ang mga ito. Upang masuri ang kontrol ng pagiging epektibo ng paggamot sa anumang mga gamot, ang isang pag-aaral ay dapat isagawa 7-14 araw pagkatapos ng huling dosis ng gamot.

Kung umiinom ka ng mga gamot, siguraduhing ipaalam sa iyong doktor.

PANGKALAHATANG ARTIKULO NG PHARMACOPOEIAN

Ipinakilala sa unang pagkakataon

totoo pharmacopoeial monograph nalalapat sa mga pamamaraan para sa pagtukoy ng aktibidad ng mga kadahilanan ng coagulation ng dugo ng tao I, II, VII, VIII, IX, X, XI, von Willebrand factor, antithrombin III sa plasma at mga produkto ng dugo.

PANGKALAHATANG PROBISYON

Ang pagpapasiya ng aktibidad ng mga kadahilanan ng coagulation ay batay sa 2 diskarte:

1. Isang hakbang na pamamaraan. Pagpapanumbalik ng proseso ng coagulation ng dugo sa factor-deficient plasma pagkatapos magdagdag ng paghahanda ng factor na ito (clotting method).
2. Dalawang yugto na pamamaraan. Sa unang yugto, gamit ang isang tiyak na cofactor, ang aktibidad ng proteolytic ng factor II o factor X ay isinaaktibo upang bumuo ng ayon sa pagkakabanggit activate factor IIa o Xa. Sa ikalawang yugto, ang dami ng nagresultang activated factor ay tinutukoy ng reaksyon ng cleavage nito ng isang tiyak na chromogenic peptide (chromogenic method).

Posibleng isagawa ang chromogenic method sa 2 paraan: ayon sa kinetics ng chromogen formation sa ilalim ng impluwensya ng isang activated factor o ayon sa end point ng chromogen accumulation sa isang tiyak na oras ng incubation.

Upang maisagawa ang parehong mga pamamaraan, posible na gumamit ng mga plastik na tubo, tablet, optical-mechanical, mekanikal na semi-awtomatikong at ganap na awtomatikong coagulometer.

Sa lahat ng pamamaraan, ang pagkalkula ng aktibidad ay ginagawa sa pamamagitan ng paghahambing ng aktibidad ng sample ng pagsubok sa aktibidad ng NIBSC International Standard o isang pangalawang clotting factor reference standard na na-calibrate laban sa international standard sa International Units of Activity (IU). Ang katumbas ng internasyonal na pamantayan sa IU ay itinatag ng WHO. Ang aktibidad ng coagulation factor sa 1.0 ml ng sariwang normal na pooled blood plasma mula sa 300 donor ay kinukuha bilang 1 IU (100%). Maaaring ipahayag ang aktibidad sa IU/ml, IU/vial, IU/mg na protina at bilang isang porsyento ng halagang idineklara ng tagagawa.

MGA SALIK

Salikako (fibrinogen)

Paraan ng clotting

Ang aktibidad ng fibrinogen ay tinutukoy ng paraan ng Clauss.

Prinsipyo ng pamamaraan

Kapag ang thrombin ay idinagdag sa isang sample na naglalaman ng fibrinogen, ang fibrin clot formation ay sinusunod. Kapag gumagamit ng thrombin na may mataas na aktibidad (~10 IU/ml) at mga sample na may mababang konsentrasyon ng fibrinogen (mas mababa sa 100 mg/dl), maaaring makuha ang isang linear na relasyon.

Upang matukoy ang fibrinogen, ginagamit ang mga komersyal na sistema ng pagsubok na naglalaman ng isang thrombin reagent na naglalaman ng isang heparin inhibitor at isang sample na dilution buffer o isang komersyal na thrombin reagent.

Ang konsentrasyon ng fibrinogen ay ipinahayag sa mg/dl. Para makagawa ng calibration graph, gumamit ng standard sample ng fibrinogen o plasma calibrator na sertipikado ayon sa international standard. Ang isang karaniwang sample o isang calibrator plasma sample ay natunaw sa distilled water ayon sa mga tagubilin. Maghanda ng 5 serial dilution ng karaniwang sample, simula sa isang konsentrasyon na ~ 100 mg/dL, gamit ang sample dilution buffer pH = 7.3 ± 0.1. Isinasagawa ang pagsusuri sa temperatura na 37°C ayon sa mga tagubilin para sa kit. Para sa bawat pagbabanto, ang oras ng pagbuo ng clot ay tinutukoy ng tatlong beses. Batay sa mga resultang nakuha, ang isang calibration graph ng dependence ng oras ng pagbuo ng clot sa konsentrasyon ng fibrinogen ay itinayo sa logarithmic coordinates.

Maghanda ng 2 dilution ng sample ng pagsubok na may konsentrasyon na mas mababa sa 100 mg/dl. Para sa bawat pagbabanto, ang oras ng pagbuo ng clot ay tinutukoy ng tatlong beses. Ang dami ng fibrinogen sa bawat dilution ay tinutukoy gamit ang isang calibration graph.

SalikII(thrombin)

1. Paraan ng clotting

Ang pagpapasiya ng aktibidad ng kadahilanan II ay isinasagawa gamit ang kakulangan ng plasma ng tao sa kadahilanan II bilang isang substrate. Ang proseso ng coagulation ay isinaaktibo sa pamamagitan ng pagdaragdag ng thromboplastin sa pinaghalong calcium.

Upang palabnawin ang pamantayan at mga gamot, gumamit ng NaCl-imidazole buffer pH 7.3 ± 0.1 kasama ang pagdaragdag ng 0.1% bovine o human albumin. Para makabuo ng calibration curve, maghanda ng serye ng mga serial dilution ng factor II standard sa hanay ng aktibidad mula 0.3 hanggang 1 IU/ml. Ang gamot ay natunaw sa isang konsentrasyon na mas mababa sa 1 IU/ml. Pag-aralan ang 3 dilution ng gamot. Para sa bawat sample, ang mga pagsukat ng oras ng clotting ay isinasagawa nang hindi bababa sa 2 beses. Ang pagsukat ay isinasagawa sa loob ng 1 oras pagkatapos ng pagbabanto ng gamot.

Isinasagawa ang pagsusuri sa temperatura na (37±0.5)°C. Magdagdag ng 50 μl ng factor II-deficient plasma at 50 μl ng dilution ng standard o gamot sa isang plastic tube. Ang pinaghalong ay incubated sa (37 ± 0.5) ° C para sa 120 – 240 s. Ang oras ng clotting ay tinutukoy mula sa sandali ng pagdaragdag ng 200 μl ng thromboplastin calcium, na pinainit sa temperatura na (37 ± 0.5) ° C, sa pinaghalong. Depende sa pamamaraan ng pagsusuri, ang mga volume ng reagents ay maaaring mag-iba sa naaangkop na proporsyon.

Ang calibration graph ay naka-plot sa semi-logarithmic coordinates. Ang mga halaga ng aktibidad ng factor II ay naka-plot kasama ang logarithmic abscissa axis, at ang clotting time ng kaukulang mga dilution ng standard ay naka-plot kasama ang ordinate axis. Ang aktibidad ng factor II para sa bawat pagbabanto ng sample ng pagsubok ay matatagpuan mula sa calibration graph. aktibidad ng FII ( A

k

1. Chromogenic na pamamaraan

Ang pamamaraan ay batay sa paghahambing ng aktibidad ng enzymatic ng factor IIa, na nabuo pagkatapos ng tiyak na pag-activate ng factor II, na may kaugnayan sa isang tiyak na chromogenic peptide substrate na may parehong aktibidad ng isang karaniwang sample (internasyonal o katulad).

Ang Factor II ay isinaaktibo ng activator ecarin, na nakahiwalay sa viper venom. Ang activated factor II (thrombin) ay piling pinuputol ang chromogenic substrate (H-D-phenylalanine-L-pipecolyl-L-arginine-4-nitroanilide dihydrochloride, 4-toluenesulfonylglycyl-prolyl-L-arginine-4-nitroanilide, H-D-cyclohexybutyl amin - L-arginine-4-nitroanilide, D-cyclohexylglycyl-L-alanyl-L-arginine-4-nitroanilide diacetate) upang mabuo P-nitroaniline. Ang mga kinetika ng reaksyon ay pinag-aralan nang photometrically sa 405 nm. Sa kasong ito, ang halaga ng optical density ay proporsyonal sa aktibidad ng kadahilanan II.

Ang pagpapasiya ng factor II sa pamamagitan ng chromogenic method ay isinasagawa gamit ang mga espesyal na test kit. Ang pagsusuri ay isinasagawa alinsunod sa mga tagubilin para sa kit. Ang karaniwang sample at ang paghahanda ay pre-diluted na may factor II-deficient plasma sa isang konsentrasyon ng ~ 1 IU/ml (basic dilution). Mula sa pangunahing pagbabanto, 3 dilution ng karaniwang sample at 3 dilution ng gamot na may Tris-saline buffer solution pH 8.4 ay inihanda. Ang bawat pagbabanto ng karaniwang sample ay tinutukoy ng dalawang beses, at ang mga resultang halaga ay ginagamit upang makabuo ng isang graph ng pagkakalibrate. Ang mga sample ng pagsubok ay tinutukoy ng tatlong beses.

Ang mga pagsusuri ay isinasagawa nang manu-mano gamit ang isang microplate at isang spectrophotometer na nagpapanatili ng temperatura sa hanay na (37±0.5)°C o sa awtomatikong mode gamit ang isang coagulometer.

Upang maisagawa ang manu-manong pagsusuri, 25 μl ng bawat pagbabanto ng pansubok na gamot o karaniwang sample ay idinagdag sa mga balon ng microplate. Magdagdag ng 125 µl ng dilution buffer at 25 µl ng ecarin sa bawat balon at i-incubate sa (37±0.5)°C sa loob ng 2 minuto. Matapos ang oras ng pagpapapisa ng itlog, 25 μl ng chromogenic factor IIa substrate ay idinagdag sa bawat balon.

A/min).

Kung hindi posible ang tuluy-tuloy na pagsukat ng absorbance, tukuyin ang absorbance sa 405 nm sa magkakasunod na agwat ng oras (hal., 40 s) at plot absorbance laban sa oras at kalkulahin ang ∆ AA

1. Pagsubok para sa kawalan ng thrombin

Para sa pagsusuri, maghanda ng solusyon ng gamot na muling nabuo alinsunod sa mga tagubilin. Kung ang heparin ay naroroon sa paghahanda, ito ay neutralisado sa pamamagitan ng pagdaragdag ng protamine sulfate sa rate na 10 μg ng protamine sulfate bawat 1 IU ng heparin.

Paghahanda ng fibrinogen solution

0.3 g ng fibrinogen ay natunaw sa 100 ML, halo-halong at pinananatiling 15-20 minuto sa temperatura ng kuwarto.

Ang solusyon ay may shelf life na 1 buwan sa temperatura na 2 hanggang 8°C.

Paghahanda ng solusyon ng thrombin

Ang lyophilisate ay natutunaw alinsunod sa mga tagubilin ng tagagawa, pinananatili sa loob ng 15-20 minuto sa temperatura ng silid at natunaw ng 0.9% na solusyon ng sodium chloride sa isang nilalaman ng thrombin na 1 IU / ml.

Ang solusyon ay may shelf life na 6 na buwan sa temperatura na minus 20°C. Ang solusyon ay hindi maaaring muling i-frozen pagkatapos lasaw.

Pag-unlad ng pagpapasiya

Ang pantay na dami ng na-reconstituted na gamot at fibrinogen solution ay idinaragdag sa 2 test tubes. Ang pantay na dami ng thrombin solution at fibrinogen solution ay idinagdag sa ikatlong test tube (control sample), at ang mga nilalaman ng tubes ay halo-halong may rotational movements. Ang isang tubo na may na-reconstituted na gamot ay inilublob sa isang paliguan ng tubig sa 37°C sa loob ng 6 na oras, ang isa pang tubo na may na-reconstituted na gamot ay inilubog sa temperatura ng silid sa loob ng 24 na oras. Ang pagkakaroon o kawalan ng coagulation (clot) ay nabanggit.

Ang control sample ay incubated sa isang water bath sa 37°C at ang oras ng pagbuo ng clot ay nabanggit.

Ang criterion para sa pagtanggap ng mga resulta ay ang coagulation sa control sample pagkatapos ng 30 s.

SalikVII

1. Paraan ng clotting

Ang pagtukoy sa aktibidad ng factor VII ay isinasagawa gamit ang kulang sa plasma ng tao salik VII. Ang proseso ng coagulation ay isinaaktibo sa pamamagitan ng pagdaragdag ng thromboplastin sa pinaghalong calcium.

Upang palabnawin ang pamantayan at mga gamot, gumamit ng NaCl-imidazole buffer pH 7.3 kasama ang pagdaragdag ng isang 0.1% na solusyon ng albumin ng tao o baka. Para makabuo ng calibration curve, maghanda ng serye ng mga serial dilution ng factor VII sample standard sa hanay na 0.3 hanggang 1 IU/ml. Ang gamot ay natunaw sa isang konsentrasyon na mas mababa sa 1 IU/ml. Pag-aralan ang 3 dilution ng gamot. Para sa bawat sample, ang mga pagsukat ng oras ng clotting ay isinasagawa nang hindi bababa sa 2 beses. Ang pagsukat ay isinasagawa kaagad pagkatapos ng pagbabanto ng gamot.

Isinasagawa ang pagsusuri sa temperatura na (37±0.5)°C. Magdagdag ng 50 μl ng plasma na kulang sa factor VII at 50 μl ng dilution ng standard o gamot sa isang plastic tube. Ang pinaghalong ay incubated sa (37±0.5)°C para sa 120-240 s. Ang oras ng clotting ay tinutukoy mula sa sandali ng pagdaragdag ng 200 μl ng thromboplastin calcium, na pinainit sa temperatura na (37±0.5)°C, sa pinaghalong. Depende sa pamamaraan ng pagsusuri, ang mga volume ng reagents ay maaaring mag-iba sa naaangkop na proporsyon.

Ang calibration graph ay naka-plot sa semi-logarithmic coordinates. Ang logarithmic abscissa axis ay nagpapakita ng mga halaga ng aktibidad ng factor VII, at ang ordinate axis ay nagpapakita ng clotting time ng kaukulang standard dilutions. Ang aktibidad ng factor VII para sa bawat pagbabanto ng sample ng pagsubok ay matatagpuan mula sa calibration graph. aktibidad ng FVII ( A) sa sample ng pagsubok ay kinakalkula gamit ang formula:

- aktibidad ng kaukulang pagbabanto ng sample ng pagsubok, na natagpuan mula sa graph ng pagkakalibrate;

k- pagbabanto ng sample ng pagsubok.

1. Chromogenic na pamamaraan

Sa pagkakaroon ng tissue factor (TF) at Ca 2+ ions, ang factor VII ay isinaaktibo (pagbuo ng FVIIa). Ang isang complex ng FVIIa, TF, Ca 2+ at phospholipid ay nagpapagana sa factor X. Ang activated factor X (FXa) ay piling pinuputol ang chromogenic substrate na FXa-1 methoxycarbonyl-D-cyclohexylalanyl-glycyl-L-arginine- n-nitroanilide acetate upang mabuo P-nitroaniline. Ang sample ay sinusuri gamit ang photometric na pamamaraan sa 405 nm. Ang halaga ng pagsipsip (o pagtaas ng pagsipsip) ay proporsyonal sa halaga ng kadahilanan VII.

Ang pagpapasiya ng factor VII sa pamamagitan ng chromogenic method ay isinasagawa gamit ang mga espesyal na test kit. Ang pagsusuri ay isinasagawa alinsunod sa mga tagubilin para sa kit. Ang karaniwang sample at ang paghahanda ay pre-diluted na may kulang sa plasma sa factor VII sa isang konsentrasyon ng ~ 1 IU/ml (basic dilution). Mula sa pangunahing pagbabanto, 3 dilution ng karaniwang sample at 3 dilution ng gamot na may Tris-saline buffer pH 7.3 - 8.0 ay inihanda gamit ang isang buffer solution na may pagdaragdag ng 0.1% human o bovine albumin. Ang bawat pagbabanto ng karaniwang sample ay tinutukoy ng dalawang beses, at ang mga resultang halaga ay ginagamit upang makabuo ng isang graph ng pagkakalibrate. Ang mga sample ng pagsubok ay tinutukoy ng tatlong beses.

Ang mga dilution ng pansubok na gamot o isang karaniwang sample ay idinagdag sa mga balon ng microplate, isang calcium-thromboplastin mixture at factor X solution ay idinagdag at incubated sa temperatura na (37 ± 0.5) °C sa loob ng 2 hanggang 5 minuto, pagkatapos nito isang solusyon ng chromogenic factor Xa substrate ay idinagdag.

Sukatin ang pagbabago sa optical density sa wavelength na 405 nm alinman sa kinetic mode, o matakpan ang hydrolysis reaction pagkatapos ng 3-15 minuto sa pamamagitan ng pagdaragdag ng 20% ​​(v/v) na solusyon ng glacial acetic acid at sukatin ang optical density.

SalikVIII

1. Paraan ng clotting

Ang pagpapasiya ng aktibidad ng kadahilanan VIII ay isinasagawa gamit ang kakulangan ng plasma ng tao sa kadahilanan VIII. Ang pinagmumulan ng mga phospholipid na kinakailangan para sa coagulation ay ang APTT reagent.

Upang palabnawin ang pamantayan at mga gamot, gumamit ng NaCl-imidazole buffer solution na pH (7.3 ± 0.1), kasama ang isang 0.1% na solusyon ng human o bovine albumin. Upang makabuo ng isang curve ng pagkakalibrate, maghanda ng isang serye ng mga serial dilution ng pamantayan, simula sa isang konsentrasyon na 2 IU/ml. Ang gamot ay natunaw sa isang konsentrasyon ng ~ 0.5 - 2 IU / ml. Pag-aralan ang 3 dilution ng gamot. Para sa bawat sample, ang mga pagsukat ng oras ng clotting ay isinasagawa nang hindi bababa sa 2 beses. Ang pagsukat ay isinasagawa sa loob ng 1 oras pagkatapos ng pagbabanto ng gamot.

Isinasagawa ang pagsusuri sa temperatura na (37±0.5)°C. Magdagdag ng 100 µl ng plasma na kulang sa factor VIII, 100 µl ng standard o drug dilution at 100 µl ng APTT reagent sa isang plastic tube at i-incubate sa temperatura na (37±0.5)°C sa loob ng 2 minuto. Ang oras ng coagulation ay naitala mula sa sandali ng pagdaragdag ng 100 μl ng 0.025 M calcium chloride solution na na-preheated sa temperatura na (37 ± 0.5) ° C sa pinaghalong. Depende sa pamamaraan ng pagsusuri, ang mga volume ng reagents ay maaaring mag-iba sa naaangkop na proporsyon.

Ang calibration graph ay naka-plot sa semi-logarithmic coordinates. Ang mga halaga ng aktibidad ng factor VIII ay naka-plot kasama ang logarithmic abscissa axis, at ang clotting time ng kaukulang mga dilution ng standard ay naka-plot kasama ang ordinate axis. Ang aktibidad ng factor VIII para sa bawat pagbabanto ng sample ng pagsubok ay matatagpuan mula sa calibration graph. aktibidad ng FVIII ( A) sa sample ng pagsubok ay kinakalkula gamit ang formula:

— aktibidad ng kaukulang pagbabanto ng pansubok na gamot, na natagpuan mula sa curve ng pagkakalibrate;

k- pagbabanto ng sample ng pagsubok.

1. Chromogenic na pamamaraan

Ang quantitative determination ng factor VIII ay isinasagawa gamit ang isang set ng reagents kung saan ang factor VIII ay isang cofactor para sa factor IXa sa panahon ng activation ng factor X sa form Xa, na nag-cleave sa chromogenic substrate.

Prinsipyo ng pamamaraan

Sa pagkakaroon ng Ca 2+ ions at phospholipids, ang factor X ay isinaaktibo sa Xa sa ilalim ng impluwensya ng factor IXa. Sa labis na factor X at pinakamainam na halaga ng Ca 2+, phospholipids at factor IXa, ang rate ng activation ng factor X ay linearly depende sa dami ng factor VIII. Ang Factor Xa ay nag-hydrolyze ng chromogenic substrate na S-2765 (N-a-Z-DArg-Gly-Arg-pNA) upang palabasin ang chromogenic pNA group, ang kulay nito ay naitala sa spectrophotometrically sa 405 nm. Ang dami ng Factor Xa na ginawa, at samakatuwid ang intensity ng paglamlam, ay proporsyonal sa aktibidad ng Factor VIII sa sample.

Ang hanay ng mga reagents para sa pagtukoy ng aktibidad ng factor VIII ay matatag para sa panahon na tinukoy ng tagagawa sa isang temperatura ng imbakan na 2 hanggang 8 o C.

Ang reagent kit ay naglalaman ng:

1. 7.7 mg ng chromogen S-2765 kasama ang pagdaragdag ng synthetic thrombin inhibitor I-2581. Ang reagent ay muling nabuo sa 6.0 ml ng sterile na tubig para sa iniksyon. Ang reconstituted na solusyon ay matatag sa loob ng 1 buwan sa temperatura mula 2 hanggang 8°C. Bago gamitin, magpainit hanggang 37°C.
2. Bovine factor reagent: 0.3 U ng factor IX, 2.7 IU ng factor X at 1 NIH U ng thrombin, lyophilized sa presensya ng 40 mmol CaCl 2 at 0.2 mmol phospholipids. Ang reagent ay muling nabuo sa 2.0 ml ng sterile na tubig para sa iniksyon. Ang reconstituted na solusyon ay matatag sa loob ng 12 oras sa temperatura mula 2 hanggang 8 o C, 2 linggo sa temperatura na minus 30 o C at 1 buwan sa temperatura na minus 80 o C. Hindi ito dapat na nakaimbak sa temperatura na minus 20 o C. Bago gamitin, painitin sa temperaturang 37 tungkol sa S.
3. Concentrate ×10 Tris buffer. Matatag sa loob ng 1 buwan sa temperatura mula 2 hanggang 8°C. Bago gamitin, palabnawin ng sterile na tubig para sa iniksyon sa isang ratio na 1:10.

Mga karagdagang reagents:

1. Ang pamantayang pang-internasyonal na sanggunian ay isang human factor VIII concentrate solution (NIBSC, Eur.Pharm.Ref.Std. BRP H 0920000) o plasma na naka-calibrate sa pamantayang internasyonal na kadahilanan VIII.
2. Kontrolin ang normal o pathological na plasma na naka-calibrate sa pamantayang pang-internasyonal na kadahilanan VIII.
3. 0.9% na solusyon ng sodium chloride.
4. 20% acetic acid o 2% citric acid (ginamit sa chromogen accumulation endpoint technique).
5. Na-deionize ang tubig sa laboratoryo

Kagamitan:

1. Mga plastik na tubo ng pagsubok;
2. Mga microplate;
3. Thermostat 37 o C;
4. Spectrophotometer 405 nm o microplate reader 405 nm;
5. Naka-calibrate na mga pipette;
6. Vortex;
7. Stopwatch.

Bago ang pagpapasiya, ang sample ng pagsubok ay natunaw sa inaasahang aktibidad na 1 IU/ml.

Ang pagpapasiya ay maaaring isagawa sa kinetic mode at sa pamamagitan ng end point, sa mga test tubes (macro method) at sa microplates (micro method).

Pagkakalibrate

Sa bawat pagpapasiya, isang curve ng pagkakalibrate ay itinayo. Ang pagbabanto ng karaniwang sample ay inihanda sa 2 yugto: paunang pagbabanto sa isang aktibidad na 1 - 2 IU/ml at panghuling pagbabanto upang makabuo ng pagdepende sa pagkakalibrate sa hanay na 0 - 2 IU/ml. Pagkatapos ng pagbabanto, ang pagpapasiya ay dapat isagawa sa loob ng 30 minuto.

Pag-unlad ng pagpapasiya

Pagpapasiya sa mga test tube

200 µl ng isang diluted standard, control o test sample ay idinagdag sa mga test tube, incubated para sa 3-4 minuto sa temperatura na 37 o C, 50 µl ng pre-heated factor reagent ay idinagdag, incubated para sa 2-4 minuto sa isang temperatura ng 37 o C at 50 µl ay idinagdag chromogen solution.

Pagpapasiya sa microplates

Magdagdag ng 50 μl ng diluted standard, control o test sample sa microplate wells, i-incubate ng 3-4 minuto sa 37°C, magdagdag ng 50 μl ng preheated factor reagent, incubate ng 2-4 minuto sa 37 o C at magdagdag ng 50 μl ng chromogen solution.

Kinetic na paraan ng pagpapasiya

Pagkatapos idagdag ang chromogen solution sa loob ng 2 - 10 minuto, sukatin ang pagbabago sa optical density ng solusyon sa 405 nm.

Kahulugan sa pamamagitan ng endpoint

Pagkatapos idagdag ang chromogen solution, ang pinaghalong ay patuloy na i-incubate sa temperatura na 37 o C sa loob ng 2 - 10 minuto, pagkatapos ay 50 μl ng 20% ​​acetic acid o 2% acetic acid ay idinagdag upang ihinto ang reaksyon. sitriko acid. Sukatin ang optical density ng solusyon laban sa buffer sa 405 nm.

Mga kalkulasyon

I-plot ang dependence ng pagbabago sa optical density kada minuto (para sa kinetic method) o optical density (para sa pagtukoy sa end point) ng mga dilution ng standard solution sa konsentrasyon ng factor VIII sa kanila. Ang aktibidad sa sample ng pagsubok ay tinutukoy gamit ang isang calibration curve, na isinasaalang-alang ang paunang pagbabanto ng sample.

SalikIX

1. Paraan ng clotting

Ang pagpapasiya ng aktibidad ng kadahilanan IX ay isinasagawa gamit ang kakulangan ng plasma ng tao sa kadahilanan IX. Ang pinagmumulan ng mga phospholipid na kinakailangan para sa coagulation ay ang APTT reagent.

Upang palabnawin ang pamantayan at mga gamot, gumamit ng NaCl-imidazole buffer pH 7.3 kasama ang pagdaragdag ng isang 0.1% na solusyon ng bovine o human albumin. Para makabuo ng calibration curve, maghanda ng serye ng mga serial dilution ng standard sa hanay mula 0.3 hanggang 1 IU/ml. Ang gamot ay natunaw sa isang konsentrasyon na mas mababa sa 1 IU/ml. Pag-aralan ang 3 dilution ng gamot. Para sa bawat sample, ang mga pagsukat ng oras ng clotting ay isinasagawa nang hindi bababa sa 2 beses. Ang pagsukat ay isinasagawa sa loob ng 1 oras pagkatapos ng pagbabanto ng gamot.

Isinasagawa ang pagsusuri sa temperatura na (37±0.5)°C. Magdagdag ng 100 µl ng plasma na kulang sa factor IX, 100 µl ng standard o drug dilution at 100 µl ng APTT reagent sa isang plastic tube at i-incubate sa temperatura na (37±0.5)°C sa loob ng 2 minuto. Ang oras ng coagulation ay naitala mula sa sandali ng pagdaragdag ng 100 μl ng 0.025 M na solusyon ng calcium chloride na pinainit sa temperatura na (37 ± 0.5) °C sa pinaghalong. Depende sa pamamaraan ng pagsusuri, ang mga volume ng reagents ay maaaring mag-iba sa naaangkop na proporsyon.

Ang calibration graph ay naka-plot sa semi-logarithmic coordinates. Ang logarithmic abscissa axis ay nagpapakita ng mga halaga ng aktibidad ng factor IX, at ang ordinate axis ay nagpapakita ng clotting time ng kaukulang standard dilutions. Ang aktibidad ng factor IX para sa bawat pagbabanto ng sample ng pagsubok ay matatagpuan mula sa calibration graph. Aktibidad FIX ( A) sa sample ng pagsubok ay kinakalkula gamit ang formula:

- aktibidad ng kaukulang pagbabanto ng sample ng pagsubok, na natagpuan mula sa graph ng pagkakalibrate;

k- pagbabanto ng sample ng pagsubok.

SalikX

1. Paraan ng clotting

Ang pagtukoy ng aktibidad ng factor X ay isinasagawa gamit ang plasma ng tao na kulang sa factor X. Ang proseso ng coagulation ay isinaaktibo sa pamamagitan ng pagdaragdag ng thromboplastin sa pinaghalong calcium.

Upang palabnawin ang pamantayan at mga gamot, gumamit ng NaCl-imidazole buffer solution na pH 7.3 kasama ang pagdaragdag ng 0.1% na solusyon ng albumin ng tao o baka. Para makabuo ng calibration curve, maghanda ng serye ng mga serial dilution ng factor X standard sa hanay mula 0.3 hanggang 1 IU/ml. Ang gamot ay natunaw sa isang konsentrasyon na mas mababa sa 1 IU/ml. Pag-aralan ang 3 dilution ng gamot. Para sa bawat sample, ang mga pagsukat ng oras ng clotting ay isinasagawa nang hindi bababa sa 2 beses. Ang pagsukat ay isinasagawa kaagad pagkatapos ng pagbabanto ng gamot.

Isinasagawa ang pagsusuri sa temperatura na (37±0.5)°C. Magdagdag ng 50 μl ng factor X-deficient plasma at 50 μl ng dilution ng standard o gamot sa isang plastic tube. Ang pinaghalong ay incubated sa (37±0.5)°C para sa 120-240 s. Ang oras ng clotting ay tinutukoy mula sa sandali ng pagdaragdag ng 200 μl ng thromboplastin calcium, na pinainit sa temperatura na (37±0.5)°C, sa pinaghalong. Depende sa pamamaraan ng pagsusuri, ang mga volume ng reagents ay maaaring mag-iba sa naaangkop na proporsyon.

Ang calibration graph ay naka-plot sa semi-logarithmic coordinates. Ang logarithmic abscissa axis ay nagpapakita ng mga halaga ng aktibidad ng factor X , kasama ang y-axis ay ang clotting time ng kaukulang dilutions ng standard. Ang aktibidad ng Factor X para sa bawat pagbabanto ng sample ng pagsubok ay matatagpuan mula sa graph ng pagkakalibrate. Factor X na aktibidad ( A) sa sample ng pagsubok ay kinakalkula gamit ang formula:

- aktibidad ng kaukulang pagbabanto ng sample ng pagsubok, na natagpuan mula sa graph ng pagkakalibrate;

k- pagbabanto ng sample ng pagsubok.

1. Chromogenic na pamamaraan

Ang Factor X ay isinaaktibo gamit ang nagmula sa kamandag ng ahas FX activator. Pinili ng activated factor X (FXa) ang chromogenic substrate na FXa-1 N-α-benzyloxycarbonyl-D-arginyl-L-glycyl-L-arginine-4-nitroanilide dihydrochloride, N-benzoyl-L-isoleucyl-L-glutamyl-glycyl - L-arginine-4-nitroanilide hydrochloride, methanesulfonyl-D-leucyl-glycyl-L-arginine-4-nitroanilide, methoxycarbonyl-D-cyclohexylalanyl-glycyl-L-arginine-4-nitroanilide acetate upang mabuo P-nitroaniline. Ang mga sample ay sinusuri ng photometrically sa 405 nm. Ang halaga ng factor X ay proporsyonal sa pagtaas ng optical density ng solusyon.

Ang pagpapasiya ng factor X sa pamamagitan ng chromogenic method ay isinasagawa gamit ang mga espesyal na test kit. Ang pagsusuri ay isinasagawa alinsunod sa mga tagubilin para sa kit. Ang karaniwang sample at ang paghahanda ay pre-diluted na may factor X-deficient plasma sa isang konsentrasyon na ~ 1 IU/ml (basic dilution). Mula sa pangunahing pagbabanto, 3 dilution ng karaniwang sample (ayon sa mga tagubilin) ​​at 3 dilution ng gamot ay inihanda gamit ang buffer solution. Ang bawat pagbabanto ng karaniwang sample ay tinutukoy ng dalawang beses, at ang mga resultang halaga ay ginagamit upang makabuo ng isang graph ng pagkakalibrate. Ang mga sample ng pagsubok ay tinutukoy ng tatlong beses.

Ang mga pagsusuri ay isinasagawa nang manu-mano gamit ang mga plastik na tubo o microplate sa temperatura na (37±0.5)°C o awtomatikong gamit ang isang coagulometer.

Upang maisagawa ang manu-manong pagsusuri, 12.5 μl ng bawat pagbabanto ng pansubok na gamot o karaniwang sample ay idinagdag sa mga balon ng microplate, 25 μl ng isang tiyak na factor X activator mula sa lason ng ulupong ni Russell ay idinagdag sa bawat balon at inilublob sa temperatura na (37). ± 0.5) ° C para sa 90 s, pagkatapos kung saan 150 μl ng isang gumaganang pagbabanto ng chromogenic factor X substrate ay idinagdag sa bawat balon.

Tukuyin ang rate ng pagbabago sa optical density sa wavelength na 405 nm na tuloy-tuloy sa loob ng 3 minuto at kalkulahin ang average na rate ng pagbabago sa optical density (∆ A/min) o sukatin ang absorbance sa wavelength na 405 nm sa magkakasunod na agwat ng oras (halimbawa, pagkatapos ng 30 s) at i-plot ang absorbance laban sa oras at kalkulahin ang ∆ A/min bilang anggulo ng pagkahilig ng isang tuwid na linya. Mula sa mga halaga ng ∆ A/min ng bawat indibidwal na pagbabanto ng karaniwang sample at ang pansubok na gamot, ang aktibidad ng pansubok na gamot ay kinakalkula.

von Willebrand na kadahilanan

Ang pagpapasiya ng aktibidad ng von Willebrand factor ay isinasagawa sa pamamagitan ng agglutination o enzyme immunoassay.

Ang aktibidad ng von Willebrand factor ay tinutukoy sa pamamagitan ng paghahambing ng aktibidad nito sa aktibidad ng isang karaniwang sample.

Paraan ng aglutinasyon

Ang pamamaraan ay batay sa pagtukoy ng aktibidad ng coenzyme ng von Willebrand factor sa panahon ng agglutination ng isang suspensyon ng platelet sa pagkakaroon ng ristocetin A.

Ang pagsusulit ay maaaring isagawa sa dami gamit ang automated na kagamitan o semi-quantitative sa pamamagitan ng biswal na pagtatasa ng agglutination sa isang serye ng mga dilution.

Semi-quantitative na pamamaraan

Mula sa karaniwang sample at ang reconstituted solution ng gamot, ang sunud-sunod na dilution ay inihanda sa 0.9% sodium chloride solution na may 1-5% human albumin solution sa inaasahang von Willebrand factor content na 0.5, 1.0 at 2.0 IU/ml. 0.05 ml ng bawat pagbabanto ng karaniwang sample at ang pansubok na gamot ay inilapat sa isang glass slide, 0.1 ml ng platelet suspension na may ristocetin ay idinagdag at halo-halong para sa 1 minuto. Ang solusyon sa pagbabanto ay ginagamit bilang isang negatibong kontrol. Pagkatapos ng 1 min ng pagpapapisa ng itlog sa temperatura ng silid, ang platelet agglutination ay biswal na tinasa. Ang pinakamataas na pagbabanto kung saan nangyayari ang platelet agglutination ay ang ristocetin coenzyme activity titer ng sample.

Paraan ng dami

Maghanda ng hindi bababa sa 2 serye ng mga serial dilution ng standard at test sample gamit ang dilution buffer sa inaasahang nilalaman ng VWF na 0.5, 1.0 at 2.0 IU/ml.

Ang pagpapasiya ay isinasagawa alinsunod sa mga tagubilin ng tagagawa ng mga awtomatikong kagamitan. Ang pag-asa ng pagbabago sa optical absorption (ang antas ng labo ng solusyon) sa aktibidad ng von Willebrand factor ay nakuha.

Ang pagpapasiya ng nilalaman ng von Willebrand factor sa paghahanda ng pagsubok ay isinasagawa gamit ang mga coefficient ng linear equation ng pag-asa ng optical density ng solusyon sa nilalaman ng von Willebrand factor sa standard sample.

Paraan ng immunoenzyme

Ang pamamaraan ay batay sa pagtukoy sa aktibidad ng collagen-binding ng von Willebrand factor. Kapag ang VWF ay partikular na nagbubuklod sa collagen fibrils at ang kasunod na pagbubuklod ng polyclonal antibodies sa VWF ay na-conjugated sa enzyme pagkatapos ng pagdaragdag ng isang chromogenic substrate, isang chromophore ang nabuo, na maaaring ma-quantified spectrophotometrically. Umiiral linear dependence sa pagitan ng collagen binding sa von Willebrand factor at optical density.

Ang pagpapasiya ay isinasagawa gamit ang mga sistema ng pagsubok na inaprubahan para gamitin sa pagsasanay sa pangangalagang pangkalusugan ng Russia alinsunod sa mga tagubilin para sa paggamit.

Para sa pagsubok, maghanda ng hindi bababa sa 3 serial dilution ng standard at test sample gamit ang dilution buffer sa inaasahang von Willebrand factor content na 1.0 IU/ml. Susunod, ang mga pagsubok ay isinasagawa alinsunod sa mga tagubilin ng tagagawa ng sistema ng pagsubok na ginamit.

Na-activate ang clotting factor dugo

Ang pagpapasiya ay isinasagawa gamit ang paraan ng coagulometer.

Para sa pagsusuri, isang reconstituted na solusyon ng gamot ay inihanda. Kung ang heparin ay naroroon sa paghahanda, ito ay neutralisado sa pamamagitan ng pagdaragdag ng protamine sulfate sa rate na 10 μg ng protamine sulfate bawat 1 IU ng heparin. Maghanda ng mga dilution ng gamot na 1:10 at 1:100 gamit ang Tris-buffered solution na pH 7.5.

Ang 0.1 ml ng karaniwang plasma ng tao at 0.1 ml ng phospholipid solution ay idinagdag sa 3 test tubes, na inilagay sa isang paliguan ng tubig sa temperatura na (37±0.5) °C sa loob ng 60 s, pagkatapos nito ay idinagdag ang 0.1 ml sa unang test tube Tris-buffer solution (control sample), sa pangalawa - 0.1 ML ng test drug sa isang dilution ng 1:10, sa ikatlong tube - 0.1 ml ng test drug sa isang dilution ng 1:100. Susunod, 0.1 ml ng isang 3.7 g/l calcium chloride solution na pinainit sa temperatura na 37 o C ay agad na idinagdag sa mga nilalaman ng bawat test tube. Ang oras ng pagbuo ng clot mula sa sandali ng pagdaragdag ng solusyon ng calcium chloride ay nabanggit.

Ang criterion para sa pagtanggap ng mga resulta ay ang oras ng coagulation sa control sample sa hanay mula 200 hanggang 350 s.

Tukoy na partikular na aktibidad

Ang tiyak na aktibidad ng mga kadahilanan ng coagulation ay kinakalkula gamit ang formula:

Pagpapasiya ng aktibidad ng antithrombinIII

Chromogenic na pamamaraan

Ang pamamaraan para sa pagtukoy ng aktibidad ng ATIII ay batay sa kakayahang neutralisahin ang thrombin sa pagkakaroon ng heparin. Ang sobrang dami ng heparin at thrombin ay idinaragdag sa sample na naglalaman ng ATIII. Ang nagreresultang ATIII-heparin complex ay neutralisahin ang dami ng thrombin na proporsyonal sa dami ng ATIII. Ang natitirang thrombin ay piling pinuputol ang chromogenic substrate upang mabuo P-nitroaniline, ang pagsipsip nito ay tinutukoy sa 405 nm. Kaya, ang halaga ng ATIII ay inversely proportional sa dami ng libreng pagsipsip P-nitroaniline sa sample.

Ang pagpapasiya ng aktibidad ng ATIII ay isinasagawa gamit ang mga komersyal na sistema ng pagsubok. Para makabuo ng calibration curve, gumamit ng ATIII standard sample o plasma calibrator na sertipikado ayon sa internasyonal na pamantayan. Ang karaniwang sample o plasma calibrator ay dissolved sa distilled water ayon sa mga tagubilin sa mga tagubilin. Ang pag-asa ng optical density sa aktibidad ng ATIII ay linear sa hanay ng aktibidad ng ATIII mula 0.1 hanggang 1.0 IU/ml. Gamit ang isang buffer ng heparin, maghanda ng 4 na dilution ng isang karaniwang sample o calibrator plasma na may aktibidad na ATIII na 0.1 hanggang 1.0 IU/ml. Ang pagsusuri ay isinasagawa sa temperatura na 37°C ayon sa pamamaraan na ibinigay sa mga tagubilin para sa kit. Para sa bawat pagbabanto, ang halaga ng optical density sa 405 nm ay natutukoy nang tatlong beses at ang isang graph ng pagkakalibrate ng dependence ng absorbance sa aktibidad ng ATIII ay itinayo sa mga linear na coordinate.

Maghanda ng 2 dilution ng test sample na may tinatayang aktibidad ng ATIII na mas mababa sa 1.0 IU/ml. Ang pagpapasiya ng aktibidad ng ATIII sa mga sample ng pagsubok ay isinasagawa sa temperatura na 37°C ayon sa mga tagubilin sa mga tagubilin para sa kit. Ang aktibidad ng ATIII sa mga dilution ng pagsubok ay tinutukoy mula sa curve ng pagkakalibrate. Ang aktibidad ng ATIII sa sample ng pagsubok ay tinutukoy bilang:

Isang x– aktibidad ng ATIII sa naaangkop na pagbabanto;

k– sample na pagbabanto.

Dami ng pagpapasiya ng heparin

1. Paraan ng clotting

Ang pamamaraan ay batay sa kakayahan ng heparin na pahabain ang oras ng clotting ng normal na plasma sa pamamagitan ng pagpigil sa isang bilang ng mga kadahilanan.

Upang maisagawa ang pagsusuri, ang normal na plasma ng tao, isang karaniwang sample ng heparin, isang PTT reagent at isang 0.025 M na solusyon ng calcium chloride ay ginagamit. Ang isang 0.9% sodium chloride solution ay ginagamit bilang isang diluent para sa standard at test sample. Ang isang karaniwang sample ng heparin ay natunaw sa distilled water ayon sa mga tagubilin sa mga tagubilin. Maghanda ng 3 dilution ng isang karaniwang sample na may aktibidad ng heparin na 0.3, 0.4 at 0.5 IU/ml. Ang mga karaniwang sample na may mga aktibidad na ito ay dapat pahabain ang oras ng clotting ng normal na plasma ng hindi bababa sa 1.5 beses, kung hindi man ay dapat gamitin ang mga dilution na may mas mataas na aktibidad ng heparin. Kaayon, ang 3 dilution ng sample ng pagsubok ay inihanda upang ang tinatayang aktibidad ng heparin sa mga dilution na ito ay nasa loob ng saklaw ng aktibidad ng heparin sa mga dilution ng karaniwang sample.

Ang pagsusuri ay isinasagawa gamit ang isang awtomatiko o semi-awtomatikong coagulometer sa mga plastik na tubo sa temperatura na 37°C. Magdagdag ng 100 μl ng normal na plasma ng tao, 100 μl ng dilution ng isang standard o test sample o 100 μl ng isang 0.9% sodium chloride solution (blangko na eksperimento) sa isang test tube, magdagdag ng 100 μl ng APTT reagent at i-incubate ang mixture para sa 120–240 s sa temperatura ( 37±0.1)°С. Pagkatapos ay 100 μl ng isang 0.025 M calcium chloride solution na pinainit sa temperatura na 37°C ay idinagdag sa test tube at ang oras ng clotting ng sample ay naitala. Depende sa pamamaraan ng pagsusuri, ang mga volume ng reagents ay maaaring mabago alinsunod sa mga proporsyon. Ang oras ng clotting ng normal na plasma (blangko na eksperimento) ay dapat na 25 - 40 s. Para sa bawat pagbabanto ng pamantayan at mga sample ng pagsubok, ang oras ng clotting ay tinutukoy ng tatlong beses.

1. Chromogenic na pamamaraan

Ang pamamaraan ay batay sa cleavage ng isang chromogenic substrate na tiyak para sa activated factor X (FXa). Kapag idinagdag sa isang sample na naglalaman ng heparin, labis na dami Pinipigilan ng ATIII at FXa ang dami ng FXa na proporsyonal sa dami ng heparin. Ang natitirang FXa ay na-cleaved mula sa isang tiyak na chromogenic substrate P-nitroaniline, ang pagsipsip nito ay tinutukoy sa 405 nm. Kaya, ang halaga ng pagsipsip ay inversely proporsyonal sa dami ng heparin. Tinutukoy ng paraang ito ang nilalaman ng parehong unfractionated at mababang molecular weight heparin sa mga anti-Xa unit.

Ang dami ng heparin ay tinutukoy ng chromogenic method gamit ang mga commercial test system. Para makagawa ng calibration graph, gumamit ng karaniwang sample ng heparin o plasma calibrator na sertipikado ayon sa internasyonal na pamantayan. Ang karaniwang sample o plasma calibrator ay diluted sa distilled water ayon sa mga tagubilin. Maghanda ng 4 na dilution ng isang karaniwang sample na may konsentrasyon ng heparin na mas mababa sa 1 anti-Xa unit/ml gamit ang dilution buffer pH 8.4. Ang pagsusuri ay isinasagawa sa temperatura na 37°C alinsunod sa mga tagubilin para sa kit. Para sa bawat pagbabanto, ang pagsipsip sa 405 nm ay tinutukoy ng tatlong beses, pagkatapos kung saan ang isang graph ng pagkakalibrate ng pag-asa ng halaga ng pagsipsip sa konsentrasyon ng heparin ay itinayo sa mga linear na coordinate. Ang dependence ay linear sa hanay ng konsentrasyon ng heparin 0 – 1.0 anti-Xa units/ml.

Para sa sample ng pagsubok, maghanda ng 2 dilution na may konsentrasyon ng heparin na mas mababa sa 1 anti-Xa unit/ml. Ang pagsusuri ay isinasagawa ayon sa mga tagubilin para sa kit sa temperatura na 37°C. Para sa bawat pagbabanto, ang halaga ng pagsipsip ay tinutukoy ng tatlong beses.

Ang pagpapasiya ay isinasagawa nang manu-mano gamit ang mga plastik na tubo, microplate o awtomatikong gamit ang isang coagulometer.

Upang maisagawa ang manu-manong pagsusuri, 20 μl ng karaniwang plasma ng tao at 20 μl ng antithrombin III na solusyon ay idinagdag sa mga balon ng microplate. Susunod, 20, 60, 100 at 140 μl ng pagsubok o karaniwang gamot ay idinagdag sa mga balon na ito, ayon sa pagkakabanggit, at ang dami ng solusyon sa bawat balon ay nababagay sa 200 μl na may buffer (ang aktibidad ng heparin sa huling pinaghalong reaksyon ay 0.02 - 0.08 IU/ml).

Ang 40 μl mula sa bawat balon ng plato ay inilipat sa pangalawang serye ng mga balon, kung saan ang 20 μl ng bovine factor Xa solution ay idinagdag at natupok sa temperatura na (37 ± 0.5) °C sa loob ng 30 s, pagkatapos nito 40 μl ng Ang solusyon ay idinagdag sa wells factor Xa chromogenic substrate at incubated muli sa temperatura na (37 ± 0.5) °C sa loob ng 3 – 15 min, sinusukat ang rate ng substrate cleavage sa pamamagitan ng patuloy na pagsukat ng optical density sa wavelength na 405 nm (kinetic). mode) o pagkatapos ihinto ang reaksyon sa pamamagitan ng pagdaragdag ng 20% ​​(v/v) glacial acetic acid solution (end point of determination).

Kapag nagsasagawa ng mga pag-aaral sa awtomatikong mode gamit ang isang coagulometer, ang pag-asa ng pagbabago sa optical density sa konsentrasyon ng heparin ay nakuha.