FS.3.2.0003.15 Ihmisen veren hyytymistekijä VIII. Hyytymistekijä VIII

Veren hyytymistekijä VIII:n taso 0 - 1 % aiheuttaa taudin erittäin vakavan muodon, 1 - 2 % - vaikea, 2 - 5 % - kohtalainen, yli 5 % - kevyt muoto, mutta vakavan ja jopa kuolemaan johtavan verenvuodon riski vammojen ja kirurgisten toimenpiteiden aikana.

Kaikkien mukana mahdollisia ilmenemismuotoja hemofilia ovat ensisijaisesti verenvuotoja raajojen suurissa nivelissä (lonkka, polvi, nilkka, olkapää ja kyynärpää), syvät ihonalaiset, lihaksensisäiset ja lihaksensisäiset verenvuodot, runsaat ja pitkittynyt verenvuoto vamman sattuessa virtsaan ilmestyy verta. Muita verenvuotoja havaitaan jonkin verran harvemmin, mukaan lukien sellaiset vakavat ja vaaralliset verenvuodot, kuten retroperitoneaaliset verenvuodot, vatsaelinten verenvuodot, maha-suolikanavan verenvuoto, kallonsisäiset verenvuodot (halvaus).

Hemofilian avulla voit selvästi jäljittää taudin kaikkien ilmenemismuotojen etenemisen lapsen ja myöhemmin aikuisen kasvaessa. Syntyessä enemmän tai vähemmän laajoja verenvuotoja kallon luuston periosteumin alla, ihonalaisia ​​ja intradermaalisia verenvuotoja, myöhäinen verenvuoto napanuorasta. Joskus tauti havaitaan ensimmäisellä lihaksensisäisellä injektiolla, mikä voi aiheuttaa suuren, hengenvaarallisen lihaksenvälisen hematooman. Hampaiden puhkeamiseen liittyy usein ei kovin voimakasta verenvuotoa. Ensimmäisinä elinvuosina suun limakalvosta vuotaa usein verenvuotoa, joka liittyy useiden terävien esineiden aiheuttamiin vammoihin. Kun lapsi oppii kävelemään, kaatumisiin ja mustelmiin liittyy usein runsasta nenäverenvuotoa ja mustelmia päässä. Verenvuoto kiertoradalla sekä postorbitaaliset hematoomat voivat johtaa näön menetykseen. Ryömimään alkaneella lapsella on tyypillistä verenvuotoa pakaran alueella. Sitten esiin tulevat verenvuodot raajojen suurissa nivelissä. Ne ilmaantuvat aikaisemmin, mitä vakavampi hemofilia on. Ensimmäiset verenvuodot altistavat toistuvalle verenvuodolle samoihin niveliin. Kaikilla on se yksittäinen henkilö Hemofiliasta kärsivien verenvuotojen pysyvyys ja tiheys on 1-3 niveltä. Yleisimmin kärsivät nivelet ovat polvet, joita seuraavat nilkat, kyynärpäät ja lonkat. Verenvuodot käsien ja jalkojen pienissä nivelissä (alle 1 % kaikista leesioista) ja nikamien välisissä nivelissä ovat suhteellisen harvinaisia. Jokaisella henkilöllä sairauden iästä ja vaikeusasteesta riippuen 1-2 - 8-12 niveltä.

On välttämätöntä erottaa akuutti hemartroosi (ensisijainen ja toistuva), krooninen verenvuoto-destruktiivinen osteoartroosi (artropatia) ja sekundaarinen immuunireumaoireyhtymä pääprosessin komplikaatioina.

Akuutti hemartroosi ilmenee mm äkillinen ilmestyminen(usein pienen vamman jälkeen) tai nivelkivun voimakas lisääntyminen. Nivel on usein laajentunut, iho sen päällä on punainen ja kuuma kosketettaessa. Ensimmäisen veren komponenttien siirron jälkeen kipu heikkenee nopeasti (useiden tuntien sisällä), ja samanaikaisesti veren poistuessa nivelestä se häviää lähes välittömästi.

Nivelvaurion IV vaiheet erotetaan. Vaiheessa I eli alkuvaiheessa nivelen tilavuus voi lisääntyä verenvuodon seurauksena. "Kylmänä" aikana nivelen toiminta ei heikkene, mutta röntgentutkimuksessa havaitaan vauriolle tyypillisiä merkkejä. Vaiheessa II tapahtuu prosessin etenemistä, joka paljastuu tiedoista röntgenkuvat. Vaiheessa III nivelen koko kasvaa jyrkästi, muuttuu epämuodostukseksi, on usein epätasainen ja kuoppainen kosketettaessa, ja vaurioituneen jalan lihasten voimakas tuhlautuminen todetaan. Vaurioituneiden nivelten liikkuvuus on enemmän tai vähemmän rajoitettua, mikä liittyy sekä itse nivelen vaurioitumiseen että muutoksiin lihaksissa ja jänteissä. Tässä vaiheessa kehittyy vaikea osteoporoosi ja murtumia syntyy helposti nivelten sisällä. Reisiluussa havaitaan hemofilialle tyypillistä kraatteri- tai tunnelimaista luuaineen tuhoutumista. Polvilumpio on osittain tuhoutunut. Nivelensisäiset rustot tuhoutuvat, ja näiden ruston liikkuvia fragmentteja löytyy nivelontelosta. Erilaiset subluksaatiot ja luun siirtymät ovat mahdollisia. Vaiheessa IV nivelen toiminta menetetään lähes kokonaan. Murtumat nivelten sisällä ovat mahdollisia. Iän myötä nivellaitteiston vaurioiden vakavuus ja yleisyys etenee ja pahenee, kun patologisesti muuttuneiden nivelten ympärillä esiintyy hematoomaa.

Toissijainen reumaoireyhtymä (Barkagan-Egorovan oireyhtymä) on yleinen nivelvaurion muoto hemofiliapotilailla. Tämä oireyhtymä kuvattiin ensimmäisen kerran vuonna 1969. Lääkärit jättävät sen monissa tapauksissa huomiotta, koska se esiintyy hemofilialle ominaisen olemassa olevan hemartroosin ja tuhoavien prosessien taustalla. Toissijaiseen reumaoireyhtymään liittyy krooninen tulehdusprosessi (usein symmetrinen) käsien ja jalkojen pienissä nivelissä, joihin verenvuoto ei ole aiemmin vaikuttanut. Myöhemmin prosessin edetessä nämä liitokset käyvät läpi tyypillisiä muodonmuutoksia. SISÄÄN suuret nivelet Voimakasta kipua esiintyy ajoittain, ja nivelissä voidaan havaita voimakasta aamujäykkyyttä. Huolimatta uusien verenvuotojen ilmaantumisesta nivelprosessi etenee tasaisesti. Tällä hetkellä verikoe paljastaa olemassa olevien laboratoriomerkkien esiintymisen tai voimakkaan lisääntymisen tulehdusprosessi mukaan lukien immunologiset.

Useimmilla hemofiliapotilailla oireyhtymä ilmenee yli 10-14-vuotiaina. 20-vuotiaana sen esiintymistiheys saavuttaa 5,9% ja 30-vuotiaana jopa 13% kaikista tautitapauksista. Iän myötä kaikkien nivelvaurioiden esiintyvyys ja vakavuus etenevät tasaisesti, mikä johtaa vammautumiseen ja pakottaa käyttämään kainalosauvoja, pyörätuolia ja muita laitteita. Nivelvaurion eteneminen riippuu akuuttien verenvuotojen tiheydestä, niiden hoidon oikea-aikaisuudesta ja täydellisyydestä (varhainen veren ja sen komponenttien siirto on erittäin tärkeää), ortopedisen hoidon laadusta, oikea sovellus fysioterapia, fysioterapeuttiset ja balneologiset vaikutukset, ammatinvalinta ja monet muut olosuhteet. Tällä hetkellä kaikki nämä kysymykset ovat erittäin tärkeitä, koska hemofilian elinajanodote on kasvanut jyrkästi korjaavan hoidon onnistumisen ansiosta.

Laajat ja voimakkaat ihonalaiset, intermuskulaariset, subfassiaaliset ja retroperitoneaaliset hematoomat ovat erittäin vakavia ja vaarallisia. Asteittain kasvavat ne voivat saavuttaa valtavia kokoja, sisältää 0,5–3 litraa verta tai enemmän, johtaa anemian kehittymiseen, aiheuttaa ympäröivien kudosten ja niitä ruokkivien suonien puristamista ja tuhoutumista, nekroosia. Esimerkiksi retroperitoneaaliset hematoomat tuhoavat usein kokonaan suuret alueet lantion luut(tuhovyöhykkeen halkaisija voi olla 15 cm tai enemmän), jalkojen ja käsivarsien hematoomat tuhoavat putkiluita ja kantapään luun. Luukudoksen kuolema johtaa verenvuotojen muodostumiseen periosteumin alle. Tällaisen luun tuhoutumisen prosessia röntgenkuvissa pidetään usein luultavasti kasvainprosessina. Usein hematoomeihin kertyy kalsiumsuoloja, mikä joskus johtaa uusien luiden muodostumiseen, jotka voivat sulkea nivelet ja pysäyttää ne kokonaan.

Monet hematoomat, jotka aiheuttavat painetta hermorungoille tai lihaksille, aiheuttavat halvaantumista, aistihäiriöitä ja nopeasti etenevää lihasten surkastumista. Erityisen vaarallisia ovat laajat verenvuodot submandibulaarisen alueen, kaulan, nielun ja nielun pehmytkudoksissa. Nämä verenvuodot aiheuttavat ylempien hengitysteiden ahtautumista ja tukehtumista.

Vakava ongelma hemofiliassa ne aiheuttavat raskasta ja jatkuvaa munuaisverenvuotoa, jota havaitaan 14-30 %:lla ihmisistä, joilla on tämä verisairauksia. Näitä verenvuotoja voi esiintyä sekä spontaanisti että lannerangan alueen vammojen, samanaikaisen pyelonefriitin yhteydessä. Lisäksi munuaisten verenvuotoa voi esiintyä lisääntyneestä kalsiumin erittymisestä virtsaan, joka johtuu luun tuhoutumisesta hemofiliassa. Tällaisen verenvuodon ilmaantumista tai voimistumista voidaan helpottaa käyttämällä kipulääkkeitä (asetyylisalisyylihappo jne.), massiivisia veren- ja plasmansiirtoja, mikä johtaa lisävaurioihin munuaisissa. Munuaisverenvuotoa edeltää usein verihiukkasten pitkittynyt erittyminen virtsaan, mikä voidaan havaita vain laboratoriotutkimuksilla.

Veren ilmaantumiseen virtsaan liittyy usein vakavia virtsaamishäiriöitä, samoin kuin erittyneen virtsan määrän muutos (sen päivittäinen määrä voi lisääntyä tai pienentyä), verenmuodostuksen aiheuttamia munuaiskoliikkikohtauksia. hyytymiä sisään virtsateiden. Nämä ilmiöt ovat erityisen voimakkaita ja voimakkaita hoidon aikana, jolloin veren normaali tila palautuu tilapäisesti. Veren erittymisen lopettamista virtsaan edeltää usein munuaiskoliikki, ja usein tilapäinen virtsan erittymisen puuttuminen, jolloin ilmenee merkkejä kehon myrkytyksestä myrkyllisillä aineenvaihduntatuotteilla.

Munuaisverenvuoto uusiutuu ajoittain, mikä voi vuosien mittaan johtaa vakaviin dystrofisiin ja tuhoaviin muutoksiin tässä elimessä, sekundaariseen infektioon ja kehityskuolemaan. munuaisten vajaatoiminta.

Ruoansulatuskanavan verenvuoto hemofiliassa ne voivat olla spontaaneja, mutta useammin ne johtuvat asetyylisalisyylihapon (aspiriinin), butadionin ja muiden lääkkeiden ottamisesta. Toinen verenvuodon lähde on vatsan tai pohjukaissuolen ilmeiset tai piilotetut haavaumat sekä erosiivinen gastriitti eri alkuperää. Joskus havaitaan kuitenkin diffuusia kapillaariverenvuotoa ilman limakalvon tuhoisia muutoksia. Näitä verenvuotoja kutsutaan diapedeettisiksi. Kun ne ilmaantuvat, suolen seinämä on kyllästetty verellä suurelta alueelta, mikä johtaa nopeasti koomaan vakavan anemian seurauksena, pyörtyminen yhteydessä jyrkkä lasku verenpaine ja kuolema. Tällaisen verenvuodon kehittymismekanismi on edelleen epäselvä.

Verenvuoto vatsan elimiin jäljittelee erilaisia ​​akuutteja kirurgiset sairaudet - akuutti umpilisäkkeen tulehdus, suolitukos jne.

Verenvuoto pään ja selkäydin ja niiden kalvot hemofiliassa liittyvät lähes aina joko vammaan tai veren hyytymiseen suoraan osallistuvien verihiutaleiden toimintaa heikentävien lääkkeiden käyttöön. Vamman hetken ja verenvuodon kehittymisen välillä voi olla kevyt tauko, joka kestää 1-2 tuntia vuorokauteen.

Ominaisuus hemofilia on pitkittynyt verenvuoto vammojen ja leikkausten aikana. Haavoja paljon vaarallisempia kuin lineaariset katkokset. Verenvuoto ei usein tapahdu heti vamman jälkeen, vaan 1-5 tunnin kuluttua.

Risojen poisto hemofilian vuoksi on paljon vaarallisempaa kuin vatsan leikkaus kirurgiset toimenpiteet.

Hampaiden, erityisesti poskihampaiden, poistoon liittyy usein useiden päivien verenvuotoa, ei vain hampaiden koloista, vaan myös novokaiinin kudosten infiltraatiokohtaan muodostuneista hematoomista, mikä johtaa anemian kehittymiseen. Nämä hematoomat aiheuttavat leuan tuhoutumista. Hemofiliassa hampaat poistetaan antihemofiilisten lääkkeiden vaikutuksesta nukutus. On parempi poistaa useita hampaita kerralla.

Jotkut hemofilian komplikaatiot johtuvat verenhukasta, kudoksen puristamisesta ja tuhoutumisesta hematoomien vaikutuksesta sekä hematoomien infektiosta. Siihen liittyy myös suuri joukko komplikaatioita immuunihäiriöt. Vaarallisin niistä on veren hyytymistekijä VIII:n (tai IX:n) suurten määrien immuuni-inhibiittoreiden ("salpaajien") esiintyminen veressä, mikä muuttaa hemofilian ns. estäväksi muotoksi, jossa pääasiallinen hoitomenetelmä on verensiirtohoito (veren tai sen komponenttien siirto) - menettää lähes kokonaan tehonsa. Lisäksi antihemofiilisten lääkkeiden toistuva antaminen aiheuttaa usein nopean inhibiittorin määrän nousun veressä, minkä seurauksena veren ja sen komponenttien alun perin vaikuttaneet siirrot käyvät pian hyödyttömiksi. Hemofilian estävän muodon esiintymistiheys tietojen mukaan eri kirjoittajia, vaihtelee 1-20 %, useammin 5-15 %. Estomuodoissa verihiutaleiden toiminta heikkenee huomattavasti, verenvuodot nivelissä ja veren erittyminen virtsaan yleistyvät ja nivelvauriot ovat merkittävästi suurempia.

Pääasiallinen hoito- ja ehkäisymenetelmä mistä tahansa sijainnista ja mistä tahansa hemofiliasta johtuvan verenvuodon ja verenvuodon ehkäisemiseksi on riittävien annosten suonensisäinen anto tekijä VIII sisältäviä verivalmisteita. Tekijä VIII on vaihteleva eikä käytännössä säilynyt veressä, luonnollisessa ja kuivatussa plasmassa. Korvaushoitoon soveltuvat vain luovuttajan suorat verensiirrot ja verituotteet, joissa on säilynyt hyytymistekijä VIII. Luovuttajan suoriin verensiirtoihin turvaudutaan vain silloin, kun lääkärillä ei ole muita antihemofiilisiä lääkkeitä. On vakava virhe siirtää verta äidiltä, ​​koska hän on taudin välittäjä, ja tekijä VIII:n taso veressä on laskenut jyrkästi. Silmällä pitäen lyhyt aika tekijä VIII:n elinaika vastaanottajan veressä (noin 6-8 tuntia), verensiirrot sekä antihemofiilisen plasman siirrot tulee toistaa vähintään 3 kertaa päivässä. Tällaiset veren- ja plasmasiirrot eivät sovellu massiivisen verenvuodon pysäyttämiseen ja erilaisten kirurgisten toimenpiteiden luotettavaan kattamiseen.

Sama määrä antihemofiilistä plasmaa on noin 3-4 kertaa tehokkaampi kuin tuore purkitettu veri. Päivittäinen annos 30-50 ml/kg antihemofiilistä plasmaa mahdollistaa 10-15 %:n tekijä VIII -tason ylläpitämisen jonkin aikaa. Suurin vaara tällainen hoito on verenkierron ylikuormitusta tilavuudella, mikä voi johtaa kehitykseen keuhkopöhö. Antihemofiilisen plasman käyttö tiivistetyssä muodossa ei muuta tilannetta, sillä injektoidun proteiinin korkea pitoisuus aiheuttaa intensiivistä nesteen liikkumista kudoksista vereen, minkä seurauksena kiertävän veren tilavuus kasvaa samalla tavalla kuin plasman infuusiona normaalilaimennuksessa. Väkevällä kuivalla antihemofiilisellä plasmalla on vain se etu, että se sisältää väkevämpää veren hyytymistekijä VIII:aa ja pienessä tilavuudessa se siirtyy nopeammin verenkiertoon. Kuiva antihemofiilinen plasma laimennetaan tislatulla vedellä ennen käyttöä. Hoito antihemofiilisellä plasmalla on aivan riittävä pysäyttämään useimmat akuutit verenvuodot nivelissä (paitsi vakavimmat) sekä lievän verenvuodon ehkäisyyn ja hoitoon.

Luotettavimmat ja tehokkaimmat hemofilian hoidossa ovat veren hyytymistekijä VIII -konsentraatit. Niistä helpoin on kryosakka. Se on plasmasta jäähdyttämällä (kryosaostuksella) eristetty proteiinikonsentraatti, joka sisältää riittävän määrän hyytymistekijöitä mutta vähän proteiinia. Vähäinen sisältö proteiinit mahdollistavat lääkkeen antamisen verenkiertoon hyvin suuria määriä ja lisäävät tekijä VIII:n pitoisuutta 100 %:iin tai enemmän ilman pelkoa verenkierron ylikuormituksesta ja keuhkopöhöstä. Kryosakka on säilytettävä -20 °C:ssa, mikä vaikeuttaa sen kuljetusta. Sulatettuna lääke menettää nopeasti aktiivisuutensa. Kuivalla kryopresipitaatilla ja nykyaikaisilla veren hyytymistekijä VIII:n konsentraateilla ei ole näitä haittoja. Ne voidaan säilyttää tavallisessa jääkaapissa. Kryopresipitaatin liiallinen antaminen ei ole toivottavaa, koska se luo korkean hyytymistekijöiden pitoisuuden vereen, minkä seurauksena mikroverenkierto elimissä häiriintyy ja on olemassa verihyytymien riski ja disseminoituneen intravaskulaarisen hyytymisoireyhtymän kehittyminen.

Kaikki antihemofiiliset lääkkeet annetaan suonensisäisesti vain virrassa, mahdollisimman tiivistetyssä muodossa ja mahdollisimman nopeasti sen jälkeen, kun ne on säilytetty uudelleen ilman sekoittamista muihin liuoksiin. suonensisäinen anto. Yksi epäonnistumisen tärkeimmistä syistä korvaushoitoa koostuu verivalmisteiden tiputtamisesta, mikä ei johda plasman hyytymistekijä VIII:n tason nousuun. Verenkorvikkeita ja verivalmisteita, jotka eivät sisällä antihemofiilisiä tekijöitä, ei tule käyttää ennen kuin verenvuoto on pysähtynyt pysyvästi, koska tämä johtaa tekijä VIII:n laimenemiseen ja sen pitoisuuden laskuun seerumissa.

Jos nivelissä on akuutteja verenvuotoja, vaurioituneen raajan tilapäinen (enintään 3-5 päivää) immobilisointi (immobilisointi) fysiologisessa asennossa, vaurioituneen nivelen lämmitys (kompressiot), mutta ei jäähdytys on tarpeen. Varhainen poisto niveleen virtaava veri ei ainoastaan ​​poista välittömästi kipua, estää veren hyytymistä nivelessä, vaan myös vähentää nivelrikon kehittymisen ja nopean etenemisen uhkaa. Verenpoiston jälkeisten sekundaaristen tulehdusmuutosten ehkäisemiseksi ja hoitamiseksi ruiskutetaan 40-60 mg hydrokortisonia nivelonteloon. Ylläpitosiirtohoito, joka suoritetaan ensimmäisten 3-6 päivän aikana, ehkäisee verenvuotoa lisää ja mahdollistaa fysioterapiaharjoitusten aloittamisen ajoissa, mikä edistää vaurioituneen raajan toiminnan nopeampaa ja täydellisempää palautumista ja ehkäisee lihasten surkastumista. On parempi kehittää liikkeitä vaurioituneessa nivelessä vaiheittain. Ensimmäisten 5-7 päivän aikana siteen poistamisen jälkeen suoritetaan aktiivisia liikkeitä sekä vaurioituneessa nivelessä että muissa raajan nivelissä, lisäämällä vähitellen harjoitusten tiheyttä ja kestoa. 6.-9. päivästä alkaen he siirtyvät "kuormitus" harjoituksiin, joissa käytetään polkupyöräergometrejä, käsivarsien poljinportteja ja elastista vetoa. 11. - 13. päivään jäännösjäykkyyden ja maksimaalisen taipumisen tai venytyksen rajoitusten poistamiseksi suoritetaan passiivisia kuormitusharjoituksia varoen. Samanaikaisesti 5-7 päivästä alkaen määrätään fysioterapeuttinen hoito - hydrokortisonielektroforeesi, anodinen galvanointi.

Pehmytkudosten verenvuodoissa hoito antihemofiilisillä lääkkeillä on tehokkaampaa kuin nivelten verenvuodoissa. Jos anemiaa kehittyy, määrätään lisäksi punasolujen suonensisäisiä infuusioita. Jos hematoomainfektion merkkejä ilmenee, laajakirjoisia antibiootteja määrätään välittömästi. Minkä tahansa lihaksensisäiset injektiot Hemofiliassa ne ovat vasta-aiheisia, koska ne voivat aiheuttaa laajoja hematoomeja ja pseudotooppeja. Penisilliini ja sen puolisynteettiset analogit ovat myös ei-toivottuja, koska suurilla annoksilla ne lisäävät verenvuotoa.

Varhainen ja intensiivinen hoito antihemofiilisillä lääkkeillä edistää hematoomien nopeaa käänteistä kehittymistä. Syntyneet hematoomat poistetaan, mikäli mahdollista, kirurgisesti kapselin mukana.

Ulkoista verenvuotoa vaurioituneesta ihosta, nenäverenvuotoa ja verenvuotoa suuontelon haavoista pysäytetään sekä verensiirtohoidolla että paikallisilla vaikutuksilla - hoitamalla verenvuotoaluetta veren hyytymistä edistävillä lääkkeillä. Lisäksi nämä lääkkeet voidaan ottaa myös suun kautta. Haavoihin laitetaan painesidoksia tai ompeleita. Verenvuoto hampaanpoiston jälkeen pysäytetään samalla tavalla. Kun poistetaan pureskella hampaita suoritetaan hieman intensiivisempi verensiirtohoito, ja useiden hampaiden (3-5 tai enemmän) samanaikainen poistaminen vaatii antihemofiilisten lääkkeiden antamista ensimmäisen 3 päivän aikana.

Nenäverenvuototapauksissa tiukkaa tamponadia tulee välttää, koska tamponien poistamisen jälkeen verenvuoto usein jatkuu vieläkin voimakkaammin. Nenäverenvuotojen nopea pysäyttäminen varmistetaan yleensä antihemofiilisillä plasma- ja antihemofiilisillä lääkkeillä sekä samanaikaisella nenän limakalvon huuhtelulla veren hyytymistä edistävillä liuoksilla.

Munuaisten verenvuoto muodostaa vakavan vaaran, jossa antihemofiilisen plasman ja kryopresipitaatin suonensisäiset infuusiot ovat tehottomia.

Ruoansulatuskanavan verenvuoto pysäytetään suurilla annoksilla hyytymistekijäkonsentraatteja. On syytä muistaa, että mahaverenvuotoa aiheuttaa usein aspiriinin, brufeenin tai indometasiinin ottaminen nivelkivun, hammassärkyn tai päänsäryn yhteydessä. Jopa hemofiliapotilailla kerta-annos aspiriini voi aiheuttaa mahaverenvuotoa.

Kroonisen nivelrikon ja muiden tuki- ja liikuntaelinten vaurioiden ehkäisyssä ja hoidossa on otettava huomioon eri tavoilla nivelten suojaaminen ja raajavammojen ehkäisy. Tätä varten vaahtosuojat ommellaan vaatteisiin polvien, nilkkojen ja nilkkojen ympärille kyynärpään nivelet, vältä urheilulajeja, joihin liittyy hyppäämistä, kaatumista ja mustelmia (mukaan lukien pyöräily ja moottoripyöräily). On tärkeää saada mahdollisimman aikaisin täysi hoito akuutit verenvuodot nivelissä ja lihaksissa, voimakkaita ympäri vuoden fysioterapia. Tätä tarkoitusta varten on olemassa erityisiä atraumaattisten harjoitusten komplekseja vedessä, pehmeillä matoilla ja lastauslaitteilla - polkupyöräergometrit, manuaaliset portit. Tuntien tulee alkaa esikoulussa tai yläasteella. kouluikä ts. ennen kuin vakavia tuki- ja liikuntaelimistön häiriöitä kehittyi. Monimutkainen terapia täydennettynä fysioterapialla (virrat korkeataajuus, glukokortikosteroidien elektroforeesi) ja balneologiset hoitomenetelmät, ensisijaisesti mutahoito, suolavesi- ja radonkylvyt. Toistuviin ja jatkuvasti toistuviin verenvuotoihin samoissa nivelissä suoritetaan sädehoitoa ja leikkaus.

Verenvuodon ehkäisyssä on tärkeää minimoida vammojen ja leikkausten riski varhaisesta lapsuudesta lähtien. Helposti rikkoutuvat lelut (mukaan lukien metalli ja muovi) sekä epävakaat ja raskaat esineet jätetään jokapäiväisen käytön ulkopuolelle. Huonekaluissa tulee olla pyöristetyt reunat, ulkonevat reunat käärittävä vanulla tai vaahtomuovilla ja lattia on peitetty kasamatolla. Potilaiden on parempi kommunikoida ja leikkiä tyttöjen kuin poikien kanssa. Tärkeää potilaalle oikea valinta ammatteja ja työpaikkoja.

Hemofilian ehkäisyä ei ole vielä kehitetty. Syntymättömän lapsen sukupuolen määrittäminen geneettinen tutkimus Lapsivedestä saadut solut mahdollistavat raskauden keskeyttämisen ajoissa, mutta eivät osoita, onko sikiö hemofiliageenin kantaja. Raskaus säilyy, jos sikiö on miespuolinen, koska kaikki potilaiden pojat syntyvät terveinä. Raskaus keskeytyy, jos sikiö on nainen, koska kaikki hemofiliapotilaiden tyttäret ovat taudin kantajia.

Naisilla, jotka ovat hemofilian kantajia, joilla on 50 %:n mahdollisuus synnyttää sairas lapsi (jos sikiö on miespuolinen) tai jotka ovat hemofilian levittäjiä (jos sikiö on nainen), vain tyttöjen syntymä siirtää riski saada hemofiliapotilaita perheessä ensimmäisestä sukupolvesta toiseen, mikä lisää samalla taudin välittäjien kokonaismäärää.

Matala hemoglobiini. Sappikivitauti. Ei hyökkäyksiä Ei asianmukaisesti määrättyä hoitoa Pyydän todella apua. Minulla on sappikivitauti. Pieniä kiviä eikä paljon. Pinnallinen gastriitti. Sydämen ja sappirefluksin sulkeutuminen. Aikaisemmin oli myös Helicobacter ++. Hoidin häntä. Pelkään poistaa sappia, koska refluksiongelmat jäävät ja ruokatorvi syöpyy. Viime aikoina minusta on tullut unelias. Hengenahdistus ja takykardia. Verenpaine on 100/60 ja pulssi 95. Hauraat hiukset ja kynnet. Otin verikokeita. Hemoglobiini ja seerumi rautaa ja jotkut muut rauta-indikaattorit ovat alle normin. Otan omezia. Emme ole vielä käyneet hematologin konsultaatiossa. Tallennus on valtava. Haluan todella ymmärtää, mitä tehdä ja miten käsitellä oikein. Auta minua. Minulla ei ole voimaa olla tässä tilassa. Nyt en tiedä mihin tutkimuksiin ja hoitoon menisin, yksi voi vahingoittaa toista. Vatsaontelon ultraäänen mukaan kaikki on normaalia paitsi sappitiehy. Asat- ja alat-indikaattorit näyttävät olevan normaaleja, vaikka ne voivat olla koholla. Miten voin aloittaa jostain?

venäläinen nimi

Aineiden latinankielinen nimi: Veren hyytymistekijä VIII + von Willebrand -tekijä

Farmakologinen aineryhmä Veren hyytymistekijä VIII + von Willebrand -tekijä

Tyypillinen kliininen ja farmakologinen artikkeli 1

Ominaista. Tekijän tehokkuus koagulaatio VIII määritetään kansainvälisen tiivistestandardin (FVIII:C) perusteella, von Willebrandin tekijän tehokkuus määritetään ristosetiinikofaktorin (VW:RK) tehokkuuden määrittämisen perusteella, perustuen kansainväliseen tiivistestandardiin. Euroopan farmakopean kanssa. Lääkkeen spesifinen aktiivisuus on vähintään 60 IU FVIII:C/mg ja vähintään 53 IU VWF:PK/mg kokonaisproteiinia. Hyytymistekijä VIII:n yksikkömäärä ilmaistaan ​​IU:na, mikä vastaa WHO:n näitä lääkkeitä koskevia standardeja. Aktiivisuus ilmaistaan ​​joko prosentteina (suhteessa normaaliin plasman tekijätasoon) tai kansainvälisinä yksikköinä (suhteessa kansainväliseen plasman hyytymistekijä VIII standardiin). 1 IU hyytymistekijä VIII:a vastaa hyytymistekijä VIII:n määrää 1 ml:ssa normaalia ihmisen plasmaa.

Farmaseuttinen toiminta. Veren hyytymistekijä VIII sitoutuu von Willebrandin tekijään; aktivoitu tekijä VIII on aktivoidun tekijä IX:n kofaktori, joka nopeuttaa hyytymistekijä X:n siirtymistä aktiivinen muoto; aktivoitu tekijä X aktivoi protrombiinin siirtymisen trombiiniksi, trombiini puolestaan ​​aktivoi fibrinogeenin siirtymisen fibriiniksi, jota seuraa veritulpan muodostuminen. Lääke sisältää von Willebrand-tekijää, joka on ihmisen plasman normaali komponentti ja toimii samalla tavalla kuin endogeeninen, ja korjaa hemostaattisia häiriöitä potilailla, joilla on von Willebrandin tauti: palauttaa verihiutaleiden adheesion verisuonen subendoteeliiniin verisuonen vauriokohdassa (kiinnittyy verisuonten subendoteeliin ja verihiutalekalvoon, tarjoaa primaarisen hemostaasin, lyhentää hyytymisaikaa, kun taas vaikutus ilmenee välittömästi ja riippuu proteiinin polymeroitumisasteesta); normalisoi samanaikaisen tekijä VIII:n puutteen (laskimoonsisäisesti annettuna se sitoo endogeenisen tekijä VIII:n ja stabiloi sen hidastaen sen nopeaa hajoamista), palauttaa tekijä VIII:C tason normaaliksi. Korvaushoito lääkkeellä hemofilia A:ta sairastavilla potilailla lisää veren hyytymistekijä VIII:n pitoisuutta, mikä korjaa väliaikaisesti tekijän puutteen ja vähentää verenvuotoriskiä. Lisäksi von Willebrand -tekijä edistää verihiutaleiden kiinnittymistä verisuonivaurioiden alueella ja sillä on rooli merkittävä rooli verihiutaleiden aggregaation aikana.

Farmakokinetiikka. Von Willebrandin tauti tyyppi 3: VWF:RK:n ja VWF:Ag:n keskimääräinen palautuminen on 68-99 %, mikä vastaa keskimääräistä 1,5 ja 2,1 %:n nousua plasman pitoisuuksissa korvattua IU/kg ruumiinpainoa kohti. T1/2 FV:RK - 17,5 tuntia, puhdistuma - 3,9 ml/h/kg. Hemofilia A: tekijä VIII:C -pitoisuus on 80-120 % odotetusta. T1/2 VIII:C - 14,8 tuntia, mikä vastaa biologista T1/2:ta, puhdistuma - 2,9 ml/h/kg.

Indikaatioita. Verenvuodon hoito ja ehkäisy potilailla, joilla on von Willebrandin tauti (jolla on von Willebrandin tekijän kvantitatiivinen ja/tai laadullinen puutos), synnynnäinen hemofilia A tai hankinnainen hyytymistekijä VIII:n puutos.

Vasta-aiheet. Yliherkkyys, ikä enintään 6 vuotta (tehoa ja turvallisuutta ei ole varmistettu).

Huolellisesti. Raskaus, imetysaika.

Annostelu. IV mukana toimitetulla liuottimella liukenemisen jälkeen; saatu liuos sisältää 90 IU veren hyytymistekijää VIII ja 80 IU von Willebrand -tekijää 1 ml:ssa.

Von Willebrandin tauti: annos ja korvaushoidon kesto riippuvat kliininen tila potilas, verenvuodon tyyppi ja vaikeusaste, FVIII:C- ja VWF:RK-tasot.

FVIII:S:n ja VWF:RK:n välinen suhde on 1:1, keskimäärin 1 IU/kg. FVIII:S ja VWF:RK lisäävät plasman pitoisuuksia 1,5-2 % vastaavan proteiinin normaalista aktiivisuudesta. Tavallinen annos lääkettä 20-50 IU/kg, mikä nostaa FVIII:C:n ja VWF:RK:n tason 30-100 %:iin. Aloitusannos voidaan nostaa tasolle 50-80 IU/kg, erityisesti potilailla, joilla on tyypin 3 von Willebrandin tauti, johon liittyy maha-suolikanavan verenvuotoa.

Verenvuodon estämiseksi lääkkeen antaminen on aloitettava 30 minuuttia ennen leikkauksen alkua. Suunnitellussa leikkauksessa lääkettä annetaan 12-24 tuntia ja 1 tunti ennen leikkauksen alkua odotetulla pitoisuudella VWF:RK 60 IU/dL tai enemmän (60 % tai enemmän) ja FVIII:C 50 IU/ dL tai enemmän (50 % tai enemmän). Annos annetaan 12-24 tunnin välein.Pitkäaikainen hoito voi aiheuttaa FVIII:C-tason liiallisen nousun. 24-48 tunnin hoidon jälkeen FVIII:C-tasojen liiallisen nousun välttämiseksi on tarpeen pienentää annosta tai pidentää annosväliä.

Hemofilia A: 1 IU hyytymistekijä VIII:C/kg lisää tekijää plasmassa 1,5-2 % normaalipitoisuudesta. Tarvittavan annoksen määrittäminen: ruumiinpaino (kg) × haluttu hyytymistekijä VIII:n tason nousu (%) × 0,5 IU/kg.

Alla kuvattujen verenvuototapahtumien osalta FVIII:C-aktiivisuuden tason ei tulisi laskea alle plasman lähtötason (% normaalitasoista) sopivan ajanjakson aikana.

Kohtalainen verenvuoto (varhainen hemartroosi, lihaksensisäinen verenvuoto, nenäverenvuoto, suun verenvuoto ja muut pienet vammat) - hyytymistekijä VIII:n vaadittu pitoisuus on 20-40 IU/dl (20-40%), anto toistetaan 12-24 tunnin välein, vähintään 1 päivän ajan, kunnes kipu häviää tai verenvuodon lähde paranee.

Laajempi verenvuoto (imm-verenvuoto tai hematooma) - hyytymistekijä VIII:n vaadittu pitoisuus on 30-60 IU/dl (30-60%) 12-24 tunnin välein 3-4 päivän ajan, kunnes kipu häviää ja työkyky on palautettu.

Henkeä uhkaava verenvuoto (kallonsisäinen, intraperitoneaalinen, niskassa, tylsä ​​trauma, ilman näkyvää verenvuotolähdettä) - hyytymistekijä VIII:n vaadittu pitoisuus on 60-100 IU/dl (60-100 %) 8-24 tunnin välein, kunnes uhka häviää kokonaan.

Pienet kirurgiset toimenpiteet (mukaan lukien hampaan poisto) - hyytymistekijä VIII:n vaadittu pitoisuus on 30-60 IU/dl (30-60 %) 24 tunnin välein, vähintään 1 vuorokauden ajan, paranemiseen asti.

Tärkeimmät kirurgiset toimenpiteet – vaadittu tekijä VIII:n taso (ennen ja leikkauksen jälkeen) on 80-100 IU/dl (80-100 %) 8-24 tunnin välein, kunnes haava on parantunut riittävästi, sitten vähintään 7 päivää tekijä VIII aktiivisuuden ylläpitämiseksi 30-60 prosentin tasolla.

Pitkäaikaiseen verenvuodon ehkäisyyn potilailla, joilla on vaikea hemofilia A, on tarpeen antaa 20-40 IU/kg 2-3 päivän välein. Joissakin tapauksissa, erityisesti nuorilla potilailla, saattaa olla tarpeen lyhentää annosten välistä aikaväliä tai suurentaa annosta.

Jos riittävällä annoksella ei ole vaikutusta tai jos on mahdotonta saavuttaa toivottua hyytymistekijä VIII:n pitoisuutta plasmassa riittävällä annostuksella, on tarpeen suorittaa Bethesda-testi hyytymistekijä VIII:n inhiboivien vasta-aineiden esiintymisen varalta. Potilailla, joilla on korkeatasoinen estäjiä, hoito hyytymistekijä VIII:lla voi olla tehotonta ja vaatia muita hoitotoimenpiteitä.

Sivuvaikutus. Allergiset reaktiot(urtikaria, ihottuma, vilunväristykset, supistumisen tunne rinnassa, hengenahdistus, alentunut verenpaine, harvoin - anafylaktinen sokki), polttaminen pistoskohdassa, hypertermia, "kuumat aallot" päänsärky, uneliaisuus, apatia, pahoinvointi, oksentelu, ahdistus. Von Willebrand -tekijää inhiboivien vasta-aineiden kehittyminen - von Willebrandin taudissa, hemofiliassa A - veren hyytymistekijä VIII:lle (yleensä IgG), mikä johtaa riittämättömään kliiniseen vasteeseen lääkkeelle; estävät vasta-aineet voivat aiheuttaa saostumista ja edistää anafylaktisten reaktioiden kehittymistä.

Potilailla, jotka saavat hyytymistekijä VIII:aa sisältäviä von Willebrand -tekijävalmisteita, plasman tekijä VIII:C -pitoisuuden pitkittynyt nousu lisää tromboosin riskiä (riskipotilaiden seuranta on tarpeen).

Hemofilia A:ta sairastavilla potilailla voi kehittyä estäviä vasta-aineita, ja lääkkeelle havaitaan riittämätön kliininen vaste.

Vuorovaikutus. Sitä ei saa sekoittaa muiden lääkkeiden kanssa tai antaa samanaikaisesti käyttämällä samaa infuusiosarjaa.

erityisohjeet. Lääkettä annettaessa potilaan tilaa on seurattava huolellisesti. Yliherkkyysreaktion varhaisia ​​merkkejä ovat urtikaria, yleinen ihottuma, puristava tunne rinnassa, hengenahdistus, verenpaineen lasku ja anafylaksia. Jos näitä oireita ilmenee, sinun tulee välittömästi lopettaa lääkkeen käyttö. Jos anafylaktisia reaktioita kehittyy, potilaat on tutkittava inhiboivien vasta-aineiden varalta.

Ihmisverestä tai plasmasta saatuja lääkkeitä käytettäessä tartuntatautien leviämisen mahdollisuutta ei voida täysin sulkea pois, joten on suositeltavaa ennaltaehkäisevä rokotus hepatiitti A ja B vastaan.

Von Willebrandin tautia sairastavien potilaiden pitkäaikainen hoito lääkkeellä, joka sisältää von Willebrandin tekijää ja hyytymistekijä VIII:a, voi aiheuttaa liiallisen hyytymistekijä VIII:C:n nousun, mikä lisää tromboosin riskiä (hyytymistekijä VIII:C-pitoisuuksien seuranta on tarpeen ).

Inhiboivien vasta-aineiden kehittymisen riski hemofilia A:ssa saavuttaa maksiminsa 20 ensimmäisen vuorokauden aikana lääkemääräyksen jälkeen, harvemmin 100 ensimmäisen lääkkeen käyttöpäivän jälkeen. Mahdollisuutta käyttää lääkettä hyytymistekijä VIII:n inhiboivien vasta-aineiden läsnä ollessa ei ole osoitettu.

Lääkkeen antamiseen tulee käyttää vain pakkauksessa olevaa liuotus- ja suonensisäistä antosarjaa. Muut laitteet voivat adsorboida veren hyytymistekijöitä sisäpinnalleen, mikä heikentää hoidon tehoa.

Tutkimustiedot

Erityisohjeet:Älä tee tutkimusta aikana akuutteja jaksoja sairauksien ja antikoagulanttilääkkeiden käytön aikana (vähintään 30 päivää hoidon lopettamisen jälkeen). Biomateriaali tulee toimittaa tutkimukseen tyhjään mahaan. Viimeisen aterian ja verenoton välillä on oltava vähintään 8 tuntia.

TUTKIMUKSEN VALMISTELUA KOSKEVAT YLEISET SÄÄNNÖT:

1. Useimmissa tutkimuksissa on suositeltavaa luovuttaa verta aamulla, klo 8-11 välillä, tyhjään vatsaan (viimeisen aterian ja verenoton välillä on oltava vähintään 8 tuntia, vettä voi juoda klo. normaalitila), syö tutkimuksen aattona kevyt illallinen, jossa on rajoitettu rasvaisten ruokien saanti. Infektiotutkimuksia ja hätätutkimuksia varten on hyväksyttävää luovuttaa verta 4-6 tuntia viimeisen aterian jälkeen.

2. HUOMIO! Erityiset valmistelusäännöt useille testeille: tiukasti tyhjään mahaan, 12-14 tunnin paaston jälkeen, sinun tulee luovuttaa verta gastriini-17:lle, lipidiprofiilille (kokonaiskolesteroli, HDL-kolesteroli, LDL-kolesteroli, VLDL-kolesteroli, triglyseridit, lipoproteiinit (a), apolipoproteiini A1, apolipoproteiini B); Glukoositoleranssitesti tehdään aamulla tyhjään mahaan 12-16 tunnin paaston jälkeen.

3. Vältä tutkimuksen aattona (24 tunnin sisällä) alkoholia, intensiivistä fyysistä aktiivisuutta ja lääkkeiden ottamista (yhdessä lääkärisi kanssa).

4. 1-2 tuntia ennen verenluovutusta pidättäydy tupakoimasta, älä juo mehua, teetä, kahvia, voit juoda hiilihappoa. Sulje pois fyysistä stressiä(juoksu, kiipeä nopeasti portaita), emotionaalinen jännitys. On suositeltavaa levätä ja rauhoittua 15 minuuttia ennen verenluovutusta.

5. Älä luovuta verta laboratoriotutkimuksiin välittömästi fysioterapeuttisten toimenpiteiden, instrumentaalitutkimuksen, röntgen- ja ultraäänitutkimus, hieronta ja muut lääketieteelliset toimenpiteet.

6. Kun seurataan laboratorioparametreja ajan mittaan, on suositeltavaa tehdä toistuvia tutkimuksia samoissa olosuhteissa - samassa laboratoriossa, luovuttaa verta samaan aikaan päivästä jne.

7. Veri tutkimukseen tulee luovuttaa ennen lääkkeiden käytön aloittamista tai aikaisintaan 10–14 päivää niiden lopettamisen jälkeen. Millä tahansa lääkkeellä hoidon tehokkuuden hallinnan arvioimiseksi tutkimus on suoritettava 7-14 päivää viimeisen lääkeannoksen jälkeen.

Jos käytät lääkkeitä, muista ilmoittaa asiasta lääkärillesi.

YLEINEN FARMAKOPEAN ARTIKKELI

Esitelty ensimmäistä kertaa

Todellinen farmakopean monografia koskee menetelmiä ihmisen veren hyytymistekijöiden I, II, VII, VIII, IX, X, XI, von Willebrandin tekijän, antitrombiini III:n aktiivisuuden määrittämiseksi plasmassa ja verivalmisteissa.

YLEISET MÄÄRÄYKSET

Hyytymistekijöiden aktiivisuuden määrittäminen perustuu kahteen lähestymistapaan:

1. Yksivaiheinen menetelmä. Veren hyytymisprosessin palauttaminen tekijäpuutteellisessa plasmassa tämän tekijän valmisteen lisäämisen jälkeen (hyytymismenetelmä).
2. Kaksivaiheinen menetelmä. Ensimmäisessä vaiheessa, käyttämällä spesifistä kofaktoria, tekijä II:n tai tekijän X:n proteolyyttinen aktiivisuus aktivoituu, jolloin muodostuu vastaavasti aktivoitu tekijä IIa tai Xa. Toisessa vaiheessa tuloksena olevan aktivoidun tekijän määrä määritetään sen spesifisen kromogeenisen peptidin pilkkoutumisreaktion perusteella (kromogeeninen menetelmä).

Kromogeeninen menetelmä on mahdollista toteuttaa kahdella tavalla: kromogeenin muodostumisen kineetiikan mukaan aktivoituneen tekijän vaikutuksesta tai kromogeenin kertymisen loppupisteen mukaan tietyn inkubaatioajan aikana.

Molempien menetelmien toteuttamiseen on mahdollista käyttää muoviputkia, tabletteja, optis-mekaanisia, mekaanisia puoliautomaattisia ja täysautomaattisia koagulometrejä.

Kaikissa menetelmissä aktiivisuus lasketaan vertaamalla testinäytteen aktiivisuutta kansainvälisen NIBSC-standardin tai sekundäärisen hyytymistekijän vertailustandardin aktiivisuuteen, joka on kalibroitu kansainvälisten aktiivisuusyksiköiden (IU) kansainvälistä standardia vastaan. Kansainvälisen standardin vastaavuuden IU:ssa määrittää WHO. Hyytymistekijän aktiivisuus 1,0 ml:ssa tuoretta normaalia yhdistettyä veriplasmaa 300 luovuttajalta otetaan 1 IU:na (100 %). Aktiivisuus voidaan ilmaista IU/ml, IU/pullo, IU/mg proteiinia ja prosentteina valmistajan ilmoittamasta määrästä.

TEKIJÄT

Tekijäminä (fibrinogeeni)

Hyytymismenetelmä

Fibrinogeeniaktiivisuus määritetään Claussin menetelmällä.

Menetelmän periaate

Kun trombiinia lisätään fibrinogeenia sisältävään näytteeseen, havaitaan fibriinihyytymän muodostumista. Kun käytetään trombiinia, jolla on korkea aktiivisuus (~10 IU/ml) ja näytteitä, joiden fibrinogeenipitoisuus on alhainen (alle 100 mg/dl), voidaan saada lineaarinen suhde.

Fibrinogeenin määrittämiseen käytetään kaupallisia testijärjestelmiä, jotka sisältävät trombiinireagenssia, joka sisältää hepariini-inhibiittoria ja näytteen laimennuspuskuria tai kaupallista trombiinireagenssia.

Fibrinogeenipitoisuus ilmaistaan ​​mg/dl. Käytä kalibrointikäyrän muodostamiseen standardinäytettä fibrinogeenista tai kansainvälisen standardin mukaisesti sertifioitua plasmakalibraattoria. Standardinäyte tai kalibraattoriplasmanäyte liuotetaan tislattuun veteen ohjeiden mukaisesti. Valmistele 5 sarjalaimennusta standardinäytteestä alkaen pitoisuudesta ~ 100 mg/dl käyttäen näytteen laimennuspuskuria pH = 7,3 ± 0,1. Analyysi suoritetaan 37 °C:n lämpötilassa sarjan ohjeiden mukaisesti. Jokaiselle laimennokselle hyytymän muodostumisaika määritetään kolme kertaa. Saatujen tulosten perusteella muodostetaan logaritmisina koordinaatteina kalibrointikäyrä hyytymän muodostumisajan riippuvuudesta fibrinogeenipitoisuudesta.

Valmistetaan 2 laimennosta testinäytteestä, joiden pitoisuus on alle 100 mg/dl. Jokaiselle laimennokselle hyytymän muodostumisaika määritetään kolme kertaa. Fibrinogeenin määrä kussakin laimennoksessa määritetään käyttämällä kalibrointikäyrää.

TekijäII(trombiini)

1. Hyytymismenetelmä

Tekijä II:n aktiivisuuden määritys suoritetaan käyttämällä substraattina ihmisen plasmaa, josta puuttuu tekijä II. Koagulaatioprosessi aktivoidaan lisäämällä tromboplastiinia kalsiumseokseen.

Käytä standardin ja lääkkeiden laimentamiseen NaCl-imidatsolipuskuria, pH 7,3 ± 0,1, johon on lisätty 0,1 % naudan tai ihmisen albumiinia. Kalibrointikäyrän muodostamiseksi valmista sarja tekijä II -standardin sarjalaimennoksia aktiivisuusalueella 0,3-1 IU/ml. Lääke laimennetaan pitoisuuteen alle 1 IU/ml. Analysoi 3 laimennosta lääkettä. Jokaiselle näytteelle suoritetaan hyytymisajan mittaukset vähintään 2 kertaa. Mittaus suoritetaan 1 tunnin sisällä lääkkeen laimentamisesta.

Analyysi suoritetaan lämpötilassa (37 ± 0,5) °C. Lisää 50 μl tekijä II -puutteellista plasmaa ja 50 μl standardin tai lääkkeen laimennusta muoviputkeen. Seosta inkuboidaan (37 ± 0,5) °C:ssa 120 - 240 s. Hyytymisaika määritetään siitä hetkestä, kun seokseen lisätään 200 μl tromboplastiinikalsiumia, joka on esilämmitetty (37 ± 0,5) °C:n lämpötilaan. Analyysitekniikasta riippuen reagenssien määrät voivat vaihdella sopivissa suhteissa.

Kalibrointikäyrä piirretään puolilogaritmisina koordinaatteina. Tekijän II aktiivisuusarvot piirretään logaritmiselle abskissa-akselilla ja standardin vastaavien laimennosten hyytymisaika on piirretty ordinaatta-akselille. Tekijän II aktiivisuus testinäytteen jokaiselle laimennokselle saadaan kalibrointikäyrästä. FII-toiminta ( A

k

1. Kromogeeninen menetelmä

Menetelmä perustuu tekijän IIa spesifisen aktivoinnin jälkeen muodostuneen tekijän IIa entsymaattisen aktiivisuuden vertailuun suhteessa tiettyyn kromogeeniseen peptidisubstraattiin, jolla on sama aktiivisuus kuin standardinäytteellä (kansainvälinen tai vastaava).

Tekijä II aktivoituu kyynmyrkystä eristetty aktivaattori ekariinilla. Aktivoitu tekijä II (trombiini) pilkkoo selektiivisesti kromogeenisen substraatin (H-D-fenyylialaniini-L-pipekolyyli-L-arginiini-4-nitroanilidihydrokloridi, 4-tolueenisulfonyyliglysyyliprolyyli-L-arginiini-4-nitroanilidi, H-D-fenyylialaniini-L-pipekolyyli-L-arginiini-4-nitroanilidi - L-arginiini-4-nitroanilidi, D-sykloheksyyliglysyyli-L-alanyyli-L-arginiini-4-nitroanilidi-diasetaatti) muodostamaan P-nitroaniliini. Reaktion kinetiikkaa tutkitaan fotometrisesti 405 nm:ssä. Tässä tapauksessa optisen tiheyden arvo on verrannollinen tekijän II aktiivisuuteen.

Tekijän II määritys kromogeenisellä menetelmällä suoritetaan erityisillä testisarjoilla. Analyysi suoritetaan sarjan ohjeiden mukaisesti. Standardinäyte ja valmiste esilaimennetaan tekijä II -puutteellisella plasmalla pitoisuuteen ~ 1 IU/ml (peruslaimennus). Päälaimennoksesta valmistetaan 3 laimennusta standardinäytteestä ja 3 laimennosta lääkkeestä Tris-suolaliuospuskuriliuoksella, pH 8,4. Jokainen standardinäytteen laimennos määritetään kahdesti, ja saatuja arvoja käytetään kalibrointikäyrän muodostamiseen. Testinäytteet määritetään kolme kertaa.

Testit suoritetaan manuaalisesti mikrolevyllä ja spektrofotometrillä, joka pitää lämpötilan alueella (37±0,5)°C, tai automaattisessa tilassa koagulometrin avulla.

Manuaalisen testauksen suorittamiseksi 25 μl kutakin testilääkkeen tai standardinäytteen laimennosta lisätään mikrolevyn kuoppiin. Lisää 125 µl laimennuspuskuria ja 25 µl ekariinia kuhunkin kuoppaan ja inkuboi (37±0,5) °C:ssa 2 minuuttia. Inkubointiajan jälkeen jokaiseen kuoppaan lisätään 25 μl kromogeenisen tekijän IIa substraattia.

A/min).

Jos jatkuva absorbanssin mittaus ei ole mahdollista, määritä absorbanssi 405 nm:ssä peräkkäisin aikavälein (esim. 40 s) ja piirrä absorbanssi ajan funktiona ja laske ∆ AA

1. Testaa trombiinin puuttuminen

Valmistele testausta varten liuos lääkkeestä, joka on valmistettu käyttövalmiiksi ohjeiden mukaisesti. Jos valmisteessa on hepariinia, se neutraloidaan lisäämällä protamiinisulfaattia 10 μg protamiinisulfaattia per 1 IU hepariinia.

Fibrinogeeniliuoksen valmistus

0,3 g fibrinogeenia liuotetaan 100 ml:aan, sekoitetaan ja pidetään 15-20 minuuttia huoneenlämmössä.

Liuoksen säilyvyysaika on 1 kuukausi 2–8 °C:n lämpötilassa.

Trombiiniliuoksen valmistus

Lyofilisaatti liuotetaan valmistajan ohjeiden mukaisesti, säilytetään 15-20 minuuttia huoneenlämmössä ja laimennetaan 0,9 % natriumkloridiliuoksella trombiinipitoisuuteen 1 IU/ml.

Liuoksen säilyvyysaika on 6 kuukautta miinus 20°C:n lämpötilassa. Liuosta ei voi pakastaa uudelleen sulatuksen jälkeen.

Päättäväisyyden edistyminen

Samat tilavuudet käyttövalmiiksi saatettua lääkettä ja fibrinogeeniliuosta lisätään 2 koeputkeen. Kolmanteen koeputkeen (kontrollinäyte) lisätään yhtä suuret määrät trombiiniliuosta ja fibrinogeeniliuosta ja putkien sisältö sekoitetaan pyörivin liikkein. Yhtä liuotettua lääkettä sisältävää putkea inkuboidaan vesihauteessa 37 °C:ssa 6 tuntia, toista putkea, jossa on liuotettu lääkeaine, inkuboidaan huoneenlämpötilassa 24 tuntia. Koagulaation (hyytymän) esiintyminen tai puuttuminen todetaan.

Kontrollinäytettä inkuboidaan vesihauteessa 37 °C:ssa ja hyytymän muodostumisaika merkitään muistiin.

Tulosten hyväksymiskriteeri on koagulaatio kontrollinäytteessä 30 sekunnin kuluttua.

TekijäVII

1. Hyytymismenetelmä

Tekijä VII:n aktiivisuus määritetään käyttämällä ihmisen plasmaa, josta on puutos tekijä VII. Koagulaatioprosessi aktivoidaan lisäämällä tromboplastiinia kalsiumseokseen.

Käytä standardin ja lääkkeiden laimentamiseen NaCl-imidatsolipuskuria pH 7,3 lisäämällä 0,1-prosenttista ihmisen tai naudan albumiiniliuosta. Kalibrointikäyrän muodostamiseksi valmistele sarja laimennoksia tekijä VII näytestandardista välillä 0,3-1 IU/ml. Lääke laimennetaan pitoisuuteen alle 1 IU/ml. Analysoi 3 laimennosta lääkettä. Jokaiselle näytteelle suoritetaan hyytymisajan mittaukset vähintään 2 kertaa. Mittaus suoritetaan välittömästi lääkkeen laimentamisen jälkeen.

Analyysi suoritetaan lämpötilassa (37 ± 0,5) °C. Lisää muoviputkeen 50 μl plasmaa, josta puuttuu tekijä VII, ja 50 μl standardin tai lääkkeen laimennusta. Seosta inkuboidaan (37±0,5)°C:ssa 120-240 s. Hyytymisaika määritetään siitä hetkestä, kun seokseen lisätään 200 μl tromboplastiinikalsiumia, joka on esilämmitetty (37±0,5)°C lämpötilaan. Analyysitekniikasta riippuen reagenssien määrät voivat vaihdella sopivissa suhteissa.

Kalibrointikäyrä piirretään puolilogaritmisina koordinaatteina. Logaritminen abskissa-akseli näyttää tekijän VII aktiivisuusarvot ja ordinaatta-akseli vastaavien standardilaimennosten hyytymisajan. Tekijän VII aktiivisuus testinäytteen jokaiselle laimennokselle saadaan kalibrointikäyrästä. FVII-toiminta ( A) testinäytteessä lasketaan kaavalla:

- testinäytteen vastaavan laimennoksen aktiivisuus, havaittu kalibrointikäyrästä;

k— testinäytteen laimennus.

1. Kromogeeninen menetelmä

Kudostekijän (TF) ja Ca 2+ -ionien läsnä ollessa tekijä VII aktivoituu (FVIIa:n muodostuminen). FVIIa:n, TF:n, Ca 2+:n ja fosfolipidin kompleksi aktivoi tekijä X:n. Aktivoitu tekijä X (FXa) pilkkoo selektiivisesti kromogeenisen substraatin FXa-1 metoksikarbonyyli-D-sykloheksyylialanyyliglysyyli-L-arginiini- n-nitroanilidiasetaatti muodostuu P-nitroaniliini. Näyte tutkitaan fotometrisellä menetelmällä 405 nm:ssä. Absorbanssiarvo (tai absorbanssin kasvu) on verrannollinen tekijän VII määrään.

Tekijän VII määritys kromogeenisellä menetelmällä suoritetaan erityisillä testisarjoilla. Analyysi suoritetaan sarjan ohjeiden mukaisesti. Standardinäyte ja valmiste esilaimennetaan plasmalla, josta puuttuu tekijä VII, pitoisuuteen ~ 1 IU/ml (peruslaimennus). Päälaimennoksesta valmistetaan puskuriliuosta käyttäen 3 laimennosta standardinäytteestä ja 3 laimennosta lääkettä Tris-suolaliuospuskurilla pH 7,3 - 8,0, joihin on lisätty 0,1 % ihmisen tai naudan albumiinia. Jokainen standardinäytteen laimennos määritetään kahdesti, ja saatuja arvoja käytetään kalibrointikäyrän muodostamiseen. Testinäytteet määritetään kolme kertaa.

Mikrolevyn kuoppiin lisätään koelääkkeen tai standardinäytteen laimennoksia, lisätään kalsium-tromboplastiini-seosta ja tekijä X -liuos ja inkuboidaan (37 ± 0,5) °C:n lämpötilassa 2-5 minuuttia, minkä jälkeen kromogeenisen tekijän Xa substraatin liuos lisätään.

Mittaa optisen tiheyden muutos aallonpituudella 405 nm joko kineettisessä tilassa tai keskeytä hydrolyysireaktio 3-15 minuutin kuluttua lisäämällä 20-prosenttista (v/v) jääetikkaa ja mittaa optinen tiheys.

TekijäVIII

1. Hyytymismenetelmä

Tekijä VIII:n aktiivisuus määritetään käyttämällä ihmisen plasmaa, josta puuttuu tekijä VIII. Koagulaatioon tarvittavien fosfolipidien lähde on APTT-reagenssi.

Käytä standardin ja lääkkeiden laimentamiseen NaCl-imidatsolipuskuriliuosta, pH (7,3 ± 0,1), johon on lisätty ihmisen tai naudan albumiinin 0,1-prosenttista liuosta. Kalibrointikäyrän muodostamiseksi valmistetaan sarja sarjalaimennoksia standardista alkaen pitoisuudesta 2 IU/ml. Lääke laimennetaan pitoisuuteen ~ 0,5 – 2 IU/ml. Analysoi 3 laimennosta lääkettä. Jokaiselle näytteelle suoritetaan hyytymisajan mittaukset vähintään 2 kertaa. Mittaus suoritetaan 1 tunnin sisällä lääkkeen laimentamisesta.

Analyysi suoritetaan lämpötilassa (37 ± 0,5) °C. Lisää 100 µl plasmaa, josta puuttuu tekijä VIII, 100 µl standardi- tai lääkelaimennusta ja 100 µl APTT-reagenssia muoviputkeen ja inkuboi (37±0,5) °C:n lämpötilassa 2 minuuttia. Hyytymisaika rekisteröidään siitä hetkestä, kun seokseen on lisätty 100 μl 0,025 M kalsiumkloridiliuosta, joka on esilämmitetty (37 ± 0,5) °C:n lämpötilaan. Analyysitekniikasta riippuen reagenssien määrät voivat vaihdella sopivissa suhteissa.

Kalibrointikäyrä piirretään puolilogaritmisina koordinaatteina. Tekijä VIII:n aktiivisuuden arvot piirretään pitkin logaritmista abskissa-akselia ja standardin vastaavien laimennosten hyytymisaika piirretään ordinaatta-akselia pitkin. Tekijä VIII:n aktiivisuus testinäytteen jokaiselle laimennokselle saadaan kalibrointikäyrästä. FVIII-aktiivisuus ( A) testinäytteessä lasketaan kaavalla:

— testilääkkeen vastaavan laimennoksen aktiivisuus, saatu kalibrointikäyrästä;

k— testinäytteen laimennus.

1. Kromogeeninen menetelmä

Tekijä VIII:n kvantitatiivinen määritys suoritetaan käyttämällä sarjaa reagensseja, joissa tekijä VIII on tekijä IXa:n kofaktori tekijän X aktivoitumisen aikana muotoon Xa, joka pilkkoo kromogeenisen substraatin.

Menetelmän periaate

Ca2+-ionien ja fosfolipidien läsnä ollessa tekijä X aktivoituu Xa:ssa tekijä IXa:n vaikutuksesta. Tekijä X:n ylimäärällä ja optimaalisilla määrillä Ca 2+:a, fosfolipidejä ja tekijä IXa:ta, tekijä X:n aktivaationopeus riippuu lineaarisesti tekijä VIII:n määrästä. Tekijä Xa hydrolysoi kromogeenisen substraatin S-2765 (N-a-Z-DArg-Gly-Arg-pNA) vapauttaen kromogeenisen pNA-ryhmän, jonka väri tallennetaan spektrofotometrisesti 405 nm:ssä. Tuotetun tekijän Xa määrä ja siten värjäytymisen intensiteetti on verrannollinen tekijä VIII -aktiivisuuteen näytteessä.

Tekijä VIII:n aktiivisuuden määrittämiseen käytettävät reagenssit ovat stabiileja valmistajan määrittelemän ajan varastointilämpötilassa 2–8 o C.

Reagenssipakkaus sisältää:

1. 7,7 mg kromogeeniä S-2765 lisäten synteettistä trombiini-inhibiittoria I-2581. Reagenssi liuotetaan 6,0 ml:aan steriiliä injektiovettä. Käyttövalmiiksi saatettu liuos säilyy 1 kuukauden 2-8 °C:n lämpötiloissa. Kuumenna ennen käyttöä 37°C:een.
2. Naudan tekijäreagenssi: 0,3 U tekijää IX, 2,7 IU tekijää X ja 1 NIH U trombiinia, lyofilisoitu 40 mmol CaCl2:n ja 0,2 mmol fosfolipidien läsnä ollessa. Reagenssi liuotetaan 2,0 ml:aan steriiliä injektiovettä. Käyttövalmiiksi valmistettu liuos on stabiili 12 tuntia 2-8 o C:n lämpötiloissa, 2 viikkoa miinus 30 o C:n lämpötilassa ja 1 kuukauden miinus 80 o C:n lämpötilassa. Sitä ei saa säilyttää miinus 20 o C:n lämpötilassa. o C. Ennen käyttöä lämmitä 37 asteen lämpötilaan noin S.
3. Konsentraatti × 10 Tris-puskuri. Stabiili 1 kuukauden lämpötilassa 2 - 8 °C. Ennen käyttöä laimenna steriilillä injektionesteisiin käytettävällä vedellä suhteessa 1:10.

Lisäreagenssit:

1. Kansainvälinen vertailustandardi on ihmisen tekijä VIII -konsentraattiliuos (NIBSC, Eur.Pharm.Ref.Std. BRP H 0920000) tai kansainvälisen tekijä VIII -standardin mukaan kalibroitu plasma.
2. Kontrolli normaali tai patologinen plasma, joka on kalibroitu kansainvälisen tekijä VIII -standardin mukaan.
3. 0,9 % natriumkloridiliuos.
4. 20 % etikkahappoa tai 2 % sitruunahappoa (käytetään kromogeenin kertymisen päätepistetekniikassa).
5. Laboratoriovesi deionisoitu

Laitteet:

1. Muoviset koeputket;
2. Mikrolevyt;
3. Termostaatti 37 o C;
4. Spektrofotometri 405 nm tai mikrolevylukija 405 nm;
5. Kalibroidut pipetit;
6. Vortex;
7. Sekuntikello.

Ennen määritystä testinäyte laimennetaan odotettuun aktiivisuuteen 1 IU/ml.

Määritys voidaan suorittaa kineettisessä tilassa ja päätepisteen mukaan, koeputkissa (makromenetelmä) ja mikrolevyillä (mikromenetelmä).

Kalibrointi

Jokaisen määrityksen aikana muodostetaan kalibrointikäyrä. Standardinäytteen laimennos valmistetaan kahdessa vaiheessa: alustava laimennus aktiivisuuteen 1 - 2 IU/ml ja lopulliset laimennukset kalibrointiriippuvuuden muodostamiseksi alueella 0 - 2 IU/ml. Laimentamisen jälkeen määritys on suoritettava 30 minuutin kuluessa.

Päättäväisyyden edistyminen

Määritys koeputkissa

200 µl laimennettua standardi-, kontrolli- tai testinäytettä lisätään koeputkiin, inkuboidaan 3-4 minuuttia 37 o C:n lämpötilassa, lisätään 50 µl esilämmitettyä tekijäreagenssia, inkuboidaan 2-4 minuuttia 37 o C:n lämpötilassa ja lisätään 50 µl kromogeeniliuosta.

Määritys mikrolevyillä

Lisää 50 μl laimennettua standardi-, kontrolli- tai testinäytettä mikrolevyn kuoppiin, inkuboi 3-4 minuuttia 37°C:ssa, lisää 50 μl esilämmitettyä tekijäreagenssia, inkuboi 2-4 minuuttia 37 o C:ssa ja lisää 50 µl kromogeeniliuosta.

Kineettinen määritysmenetelmä

Kun kromogeeniliuosta on lisätty 2 - 10 minuuttia, mitataan liuoksen optisen tiheyden muutos aallonpituudella 405 nm.

Määritelmä päätepisteen mukaan

Kromogeeniliuoksen lisäämisen jälkeen jatketaan inkubointia 37 o C:n lämpötilassa 2 - 10 minuuttia, minkä jälkeen lisätään 50 μl 20 % etikkahappoa tai 2 % etikkahappoa reaktion pysäyttämiseksi. sitruunahappo. Mittaa liuoksen optinen tiheys puskuria vastaan ​​405 nm:ssä.

Laskelmat

Piirrä standardiliuoksen laimennosten optisen tiheyden (kineettinen menetelmä) tai optisen tiheyden (päätepisteen määrittäminen) muutoksen riippuvuus tekijä VIII:n pitoisuudesta niissä. Testinäytteen aktiivisuus määritetään kalibrointikäyrällä, jossa otetaan huomioon näytteen alustava laimennus.

TekijäIX

1. Hyytymismenetelmä

Tekijä IX:n aktiivisuus määritetään käyttämällä ihmisen plasmaa, josta puuttuu tekijä IX. Koagulaatioon tarvittavien fosfolipidien lähde on APTT-reagenssi.

Käytä standardin ja lääkkeiden laimentamiseen NaCl-imidatsolipuskuria pH 7,3, johon on lisätty 0,1 % naudan tai ihmisen albumiiniliuosta. Kalibrointikäyrän muodostamiseksi valmistetaan sarja sarjalaimennoksia standardista välillä 0,3-1 IU/ml. Lääke laimennetaan pitoisuuteen alle 1 IU/ml. Analysoi 3 laimennosta lääkettä. Jokaiselle näytteelle suoritetaan hyytymisajan mittaukset vähintään 2 kertaa. Mittaus suoritetaan 1 tunnin sisällä lääkkeen laimentamisesta.

Analyysi suoritetaan lämpötilassa (37 ± 0,5) °C. Lisää 100 µl plasmaa, josta puuttuu tekijä IX, 100 µl standardi- tai lääkelaimennusta ja 100 µl APTT-reagenssia muoviputkeen ja inkuboi (37±0,5) °C:n lämpötilassa 2 minuuttia. Hyytymisaika rekisteröidään siitä hetkestä, kun seokseen on lisätty 100 μl 0,025 M kalsiumkloridiliuosta, joka on esilämmitetty (37 ± 0,5) °C:n lämpötilaan. Analyysitekniikasta riippuen reagenssien määrät voivat vaihdella sopivissa suhteissa.

Kalibrointikäyrä piirretään puolilogaritmisina koordinaatteina. Logaritminen abskissa-akseli näyttää tekijä IX:n aktiivisuusarvot ja ordinaatta-akselilla vastaavien standardilaimennosten hyytymisaika. Tekijän IX aktiivisuus testinäytteen jokaiselle laimennokselle saadaan kalibrointikäyrästä. Toiminnan KORJAUS ( A) testinäytteessä lasketaan kaavalla:

- testinäytteen vastaavan laimennoksen aktiivisuus, havaittu kalibrointikäyrästä;

k— testinäytteen laimennus.

TekijäX

1. Hyytymismenetelmä

Tekijä X:n aktiivisuuden määritys suoritetaan käyttämällä ihmisen plasmaa, josta puuttuu tekijä X. Koagulaatioprosessi aktivoidaan lisäämällä tromboplastiinia kalsiumseokseen.

Käytä standardin ja lääkkeiden laimentamiseen NaCl-imidatsolipuskuriliuosta, pH 7,3, johon on lisätty 0,1 % ihmisen tai naudan albumiiniliuosta. Kalibrointikäyrän muodostamiseksi valmista sarja tekijä X -standardin sarjalaimennoksia alueella 0,3 - 1 IU/ml. Lääke laimennetaan pitoisuuteen alle 1 IU/ml. Analysoi 3 laimennosta lääkettä. Jokaiselle näytteelle suoritetaan hyytymisajan mittaukset vähintään 2 kertaa. Mittaus suoritetaan välittömästi lääkkeen laimentamisen jälkeen.

Analyysi suoritetaan lämpötilassa (37 ± 0,5) °C. Lisää muoviputkeen 50 μl tekijä X -puutteellista plasmaa ja 50 μl standardin tai lääkkeen laimennusta. Seosta inkuboidaan (37±0,5)°C:ssa 120-240 s. Hyytymisaika määritetään siitä hetkestä, kun seokseen lisätään 200 μl tromboplastiinikalsiumia, joka on esilämmitetty (37±0,5)°C lämpötilaan. Analyysitekniikasta riippuen reagenssien määrät voivat vaihdella sopivissa suhteissa.

Kalibrointikäyrä piirretään puolilogaritmisina koordinaatteina. Logaritminen abskissa-akseli näyttää tekijän X aktiivisuusarvot , y-akselia pitkin on standardin vastaavien laimennosten hyytymisaika. Tekijän X aktiivisuus testinäytteen jokaiselle laimennokselle saadaan kalibrointikäyrästä. Tekijän X aktiivisuus ( A) testinäytteessä lasketaan kaavalla:

- testinäytteen vastaavan laimennoksen aktiivisuus, havaittu kalibrointikäyrästä;

k— testinäytteen laimennus.

1. Kromogeeninen menetelmä

Tekijä X aktivoidaan käyttämällä johdettua Käärmeen myrkky FX aktivaattori. Aktivoitu tekijä X (FXa) pilkkoo selektiivisesti kromogeenisen substraatin FXa-1 N-a-bentsyylioksikarbonyyli-D-arginyyli-L-glysyyli-L-arginiini-4-nitroanilididihydrokloridi, N-bentsoyyli-L-isoleusyyli-L-glutamyyliglysyyli - L-arginiini-4-nitroanilidihydrokloridi, metaanisulfonyyli-D-leusyyli-glysyyli-L-arginiini-4-nitroanilidi, metoksikarbonyyli-D-sykloheksyylialanyyli-glysyyli-L-arginiini-4-nitroanilidiasetaatti P-nitroaniliini. Näytteet tutkitaan fotometrisesti 405 nm:ssä. Tekijän X määrä on verrannollinen liuoksen optisen tiheyden kasvuun.

Tekijän X määritys kromogeenisellä menetelmällä suoritetaan erityisillä testisarjoilla. Analyysi suoritetaan sarjan ohjeiden mukaisesti. Standardinäyte ja valmiste esilaimennetaan tekijä X -puutteellisella plasmalla pitoisuuteen ~ 1 IU/ml (peruslaimennus). Päälaimennoksesta valmistetaan puskuriliuoksella 3 laimennusta standardinäytteestä (ohjeiden mukaan) ja 3 laimennosta lääkettä. Jokainen standardinäytteen laimennos määritetään kahdesti, ja saatuja arvoja käytetään kalibrointikäyrän muodostamiseen. Testinäytteet määritetään kolme kertaa.

Testit suoritetaan manuaalisesti muoviputkilla tai mikrolevyillä (37±0,5)°C lämpötilassa tai automaattisesti koagulometrillä.

Manuaalisen testauksen suorittamiseksi 12,5 μl kutakin testilääkkeen tai standardinäytteen laimennosta lisätään mikrolevyn kuoppiin, 25 μl spesifistä tekijä X -aktivaattoria Russellin kyymyrkystä lisätään kuhunkin kuoppaan ja inkuboidaan lämpötilassa (37) ± 0,5) °C 90 sekunnin ajan, minkä jälkeen kuhunkin kuoppaan lisätään 150 μl kromogeenisen tekijä X -substraatin käyttölaimennosta.

Määritä optisen tiheyden muutosnopeus aallonpituudella 405 nm jatkuvasti 3 minuutin ajan ja laske optisen tiheyden keskimääräinen muutosnopeus (∆ A/min) tai mittaa absorbanssi aallonpituudella 405 nm peräkkäisin aikavälein (esimerkiksi 30 sekunnin kuluttua) ja piirrä absorbanssi ajan funktiona ja laske ∆ A/min suoran viivan kaltevuuskulmana. ∆:n arvoista A/min jokaisesta standardinäytteen ja testilääkkeen yksittäisestä laimennoksesta lasketaan testilääkkeen aktiivisuus.

von Willebrandin tekijä

Von Willebrand -tekijän aktiivisuuden määritys suoritetaan agglutinaatiolla tai entsyymi-immunomäärityksellä.

Von Willebrand -tekijän aktiivisuus määritetään vertaamalla sen aktiivisuutta standardinäytteen aktiivisuuteen.

Agglutinaatiomenetelmä

Menetelmä perustuu von Willebrand -tekijän koentsyymiaktiivisuuden määrittämiseen verihiutalesuspension agglutinaation aikana ristosetiini A:n läsnä ollessa.

Testi voidaan suorittaa kvantitatiivisesti automatisoidulla laitteistolla tai puolikvantitatiivisesti arvioimalla visuaalisesti agglutinaatio laimennossarjassa.

Puolikvantitatiivinen menetelmä

Standardinäytteestä ja lääkkeen käyttövalmiiksi saatetusta liuoksesta valmistetaan peräkkäiset laimennokset 0,9 % natriumkloridiliuokseen, jossa on 1–5 % ihmisen albumiiniliuosta, odotettuun von Willebrand -tekijäpitoisuuteen 0,5, 1,0 ja 2,0 IU/ml. 0,05 ml kutakin standardinäytteen ja testilääkkeen laimennosta laitetaan lasilevylle, lisätään 0,1 ml verihiutalesuspensiota ristosetiinin kanssa ja sekoitetaan 1 minuutin ajan. Laimennusliuosta käytetään negatiivisena kontrollina. 1 minuutin huoneenlämpötilassa inkuboinnin jälkeen verihiutaleiden agglutinaatio arvioidaan visuaalisesti. Suurin laimennos, jolla verihiutaleiden agglutinaatio tapahtuu, on näytteenstiitteri.

Kvantitatiivinen menetelmä

Valmistetaan vähintään 2 sarjalaimennossarjaa standardi- ja testinäytteistä käyttämällä laimennuspuskuria odotettuun VWF-pitoisuuteen 0,5, 1,0 ja 2,0 IU/ml.

Määritys suoritetaan automaattisten laitteiden valmistajan ohjeiden mukaisesti. Saadaan optisen absorption muutoksen (liuoksen sameusaste) riippuvuus von Willebrandin tekijän aktiivisuudesta.

Von Willebrand -tekijän pitoisuus koevalmisteessa suoritetaan käyttämällä lineaarisen yhtälön kertoimia, jotka kuvaavat liuoksen optisen tiheyden riippuvuutta von Willebrand -tekijän pitoisuudesta standardinäytteessä.

Immunoentsyymimenetelmä

Menetelmä perustuu von Willebrand -tekijän kollageenia sitovan aktiivisuuden määrittämiseen. Kun VWF sitoutuu spesifisesti kollageenifibrilleihin ja sitä seuraava polyklonaalisten vasta-aineiden sitoutuminen entsyymiin konjugoituun VWF:ään kromogeenisen substraatin lisäämisen jälkeen, muodostuu kromofori, joka voidaan kvantifioida spektrofotometrisesti. Olemassa lineaarinen riippuvuus kollageenin sitoutumisen von Willebrand tekijään ja optisen tiheyden välillä.

Määritys tehdään venäläisessä terveydenhuollossa käytettäväksi hyväksytyillä testijärjestelmillä käyttöohjeiden mukaisesti.

Valmistele testausta varten vähintään 3 sarjalaimennusta standardi- ja testinäytteistä käyttämällä laimennuspuskuria odotettuun von Willebrand -tekijäpitoisuuteen 1,0 IU/ml. Seuraavaksi suoritetaan testit käytetyn testijärjestelmän valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Aktivoituneet hyytymistekijät verta

Määritys suoritetaan koagulometrimenetelmällä.

Testausta varten valmistetaan lääkkeen liuos. Jos valmisteessa on hepariinia, se neutraloidaan lisäämällä protamiinisulfaattia 10 μg protamiinisulfaattia per 1 IU hepariinia. Valmistele lääkkeen laimennukset 1:10 ja 1:100 käyttämällä Tris-puskuroitua liuosta pH 7,5.

0,1 ml ihmisen standardiplasmaa ja 0,1 ml fosfolipidiliuosta lisätään 3 koeputkeen, jotka asetetaan vesihauteeseen (37±0,5) °C lämpötilaan 60 sekunniksi, minkä jälkeen 0,1 ml lisätään ensimmäiseen koeputkeen. Tris-puskuriliuos (kontrollinäyte), toiseen - 0,1 ml testilääkettä laimennoksessa 1:10, kolmanteen putkeen - 0,1 ml testilääkettä laimennoksena 1:100. Seuraavaksi jokaisen koeputken sisältöön lisätään välittömästi 0,1 ml 3,7 g/l kalsiumkloridiliuosta, joka on kuumennettu 37 o C:een. Hyytymän muodostumisaika kalsiumkloridiliuoksen lisäämishetkestä lähtien merkitään muistiin.

Tulosten hyväksymiskriteeri on kontrollinäytteen hyytymisaika alueella 200 - 350 s.

Erityinen erityinen toiminta

Hyytymistekijöiden ominaisaktiivisuus lasketaan kaavalla:

Antitrombiiniaktiivisuuden määrittäminenIII

Kromogeeninen menetelmä

Menetelmä ATIII:n aktiivisuuden määrittämiseksi perustuu sen kykyyn neutraloida trombiinia hepariinin läsnä ollessa. Ylimääräiset määrät hepariinia ja trombiinia lisätään ATIII:ta sisältävään näytteeseen. Tuloksena oleva ATIII-hepariinikompleksi neutraloi trombiinin määrän suhteessa ATIII:n määrään. Jäljelle jäävä trombiini pilkkoo selektiivisesti kromogeenisen substraatin muodostaen P-nitroaniliini, jonka absorptio määritetään 405 nm:ssä. Siten ATIII:n määrä on kääntäen verrannollinen vapaan absorption määrään P-nitroaniliini näytteessä.

ATIII-aktiivisuuden määritys suoritetaan käyttämällä kaupallisia testijärjestelmiä. Käytä kalibrointikäyrän muodostamiseen ATIII-standardinäytettä tai kansainvälisen standardin mukaan sertifioitua plasmakalibraattoria. Standardinäyte tai plasmakalibraattori liuotetaan tislattuun veteen ohjeen ohjeiden mukaisesti. Optisen tiheyden riippuvuus ATIII-aktiivisuudesta on lineaarinen ATIII-aktiivisuusalueella 0,1-1,0 IU/ml. Valmista hepariinipuskuria käyttäen 4 laimennusta standardinäytteestä tai kalibraattoriplasmasta, joiden ATIII-aktiivisuus on 0,1-1,0 IU/ml. Analyysi suoritetaan 37 °C:n lämpötilassa pakkauksen ohjeissa esitetyn kaavion mukaisesti. Jokaiselle laimennokselle optisen tiheyden arvo 405 nm:ssä määritetään kolme kertaa ja kalibrointikäyrä absorbanssin riippuvuudesta ATIII-aktiivisuudesta muodostetaan lineaarisina koordinaatteina.

Valmistetaan 2 laimennosta testinäytteestä, joiden likimääräinen ATIII-aktiivisuus on alle 1,0 IU/ml. ATIII-aktiivisuuden määritys testinäytteistä suoritetaan 37°C:n lämpötilassa sarjan ohjeiden mukaisesti. ATIII-aktiivisuus testilaimennoksissa määritetään kalibrointikäyrästä. ATIII-aktiivisuus testinäytteessä määritetään seuraavasti:

A x– ATIII:n aktiivisuus sopivassa laimennuksessa;

k– näytteen laimennus.

Hepariinin kvantitatiivinen määritys

1. Hyytymismenetelmä

Menetelmä perustuu hepariinin kykyyn pidentää normaalin plasman hyytymisaikaa estämällä useita tekijöitä.

Analyysin suorittamiseen käytetään normaalia ihmisen plasmaa, standardinäytettä hepariinista, PTT-reagenssia ja 0,025 M kalsiumkloridiliuosta. 0,9-prosenttista natriumkloridiliuosta käytetään laimentimena standardi- ja testinäytteisiin. Hepariinin standardinäyte liuotetaan tislattuun veteen ohjeen ohjeiden mukaisesti. Valmista 3 laimennosta standardinäytteestä, jonka hepariiniaktiivisuus on 0,3, 0,4 ja 0,5 IU/ml. Näitä aktiivisuuksia sisältävien standardinäytteiden tulisi pidentää normaalin plasman hyytymisaikaa vähintään 1,5-kertaisesti, muuten tulee käyttää laimennoksia, joilla on korkeampi hepariiniaktiivisuus. Rinnakkain koenäytteestä valmistetaan 3 laimennosta siten, että hepariinin likimääräinen aktiivisuus näissä laimennoksissa osuu hepariinin aktiivisuusalueelle standardinäytteen laimennoksissa.

Analyysi suoritetaan automaattisella tai puoliautomaattisella koagulometrillä muoviputkissa 37°C:n lämpötilassa. Lisää koeputkeen 100 μl normaalia ihmisen plasmaa, 100 μl standardi- tai testinäytteen laimennusta tai 100 μl 0,9 % natriumkloridiliuosta (nollakoe), lisää 100 μl APTT-reagenssia ja inkuboi seosta 120–240 s lämpötilassa ( 37±0,1)°С. Sitten koeputkeen lisätään 100 μl 0,025 M kalsiumkloridiliuosta, joka on esilämmitetty 37 °C:n lämpötilaan, ja näytteen hyytymisaika kirjataan. Analyysitekniikasta riippuen reagenssien tilavuuksia voidaan muuttaa suhteiden mukaisesti. Normaalin plasman hyytymisajan (nollakoe) tulee olla 25–40 s. Jokaiselle standardi- ja testinäytteiden laimennokselle hyytymisaika määritetään kolme kertaa.

1. Kromogeeninen menetelmä

Menetelmä perustuu aktivoidulle tekijä X:lle (FXa) spesifisen kromogeenisen substraatin pilkkomiseen. Kun lisätään hepariinia sisältävään näytteeseen, ylimääräisiä määriä ATIII ja FXa estävät FXa:n määrää suhteessa hepariinin määrään. Jäljelle jäävä FXa pilkkoutuu spesifisestä kromogeenisesta substraatista P-nitroaniliini, jonka absorptio määritetään 405 nm:ssä. Siten imeytymisen määrä on kääntäen verrannollinen hepariinin määrään. Tämä menetelmä määrittää sekä fraktioimattoman että pienen molekyylipainon hepariinin pitoisuuden anti-Xa-yksiköissä.

Hepariinin määrä määritetään kromogeenisellä menetelmällä käyttäen kaupallisia testijärjestelmiä. Käytä kalibrointikäyrän muodostamiseen standardia hepariininäytettä tai kansainvälisen standardin mukaan sertifioitua plasmakalibraattoria. Standardinäyte tai plasmakalibraattori laimennetaan tislattuun veteen ohjeiden mukaisesti. Valmistetaan 4 laimennusta standardinäytteestä, jonka hepariinipitoisuus on alle 1 anti-Xa-yksikkö/ml, käyttämällä laimennuspuskuria pH 8,4. Analyysi suoritetaan 37°C:n lämpötilassa sarjan ohjeiden mukaisesti. Jokaiselle laimennokselle määritetään absorbanssi aallonpituudella 405 nm kolme kertaa, minkä jälkeen muodostetaan kalibrointikäyrä absorbanssiarvon riippuvuudesta hepariinipitoisuudesta lineaarisina koordinaatteina. Riippuvuus on lineaarinen hepariinin pitoisuusalueella 0 – 1,0 anti-Xa yksikköä/ml.

Valmista testinäytteelle 2 laimennusta, joiden hepariinipitoisuus on alle 1 anti-Xa-yksikkö/ml. Analyysi suoritetaan sarjan ohjeiden mukaisesti 37°C:n lämpötilassa. Jokaiselle laimennokselle absorptioarvo määritetään kolme kertaa.

Määritys suoritetaan manuaalisesti käyttämällä muoviputkia, mikrolevyjä tai automaattisesti käyttämällä koagulometriä.

Manuaalisen testauksen suorittamiseksi mikrolevyn kuoppiin lisätään 20 μl ihmisen standardiplasmaa ja 20 μl antitrombiini III -liuosta. Seuraavaksi näihin kuoppiin lisätään 20, 60, 100 ja 140 µl testi- tai standardilääkettä, ja kunkin kuopan liuoksen tilavuus säädetään puskurilla 200 µl:ksi (hepariiniaktiivisuus lopullisessa reaktioseoksessa on 0,02 - 0,08 IU/ml).

40 μl levyn kustakin kuopasta siirretään toiseen kuoppasarjaan, johon lisätään 20 μl naudan tekijä Xa -liuosta ja inkuboidaan (37 ± 0,5) °C:n lämpötilassa 30 s, jonka jälkeen 40 μl liuos lisätään kuoppien tekijä Xa kromogeeniseen substraattiin ja inkuboidaan uudelleen (37 ± 0,5) °C:n lämpötilassa 3–15 minuutin ajan mittaamalla substraatin hajoamisnopeus mittaamalla jatkuvasti optista tiheyttä aallonpituudella 405 nm (kineettinen). tilassa) tai reaktion pysäyttämisen jälkeen lisäämällä 20 % (v/v) jääetikkaa (määrityksen päätepiste).

Kun tutkimuksia suoritetaan automaattisessa tilassa koagulometrillä, saadaan optisen tiheyden muutoksen riippuvuus hepariinin pitoisuudesta.